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Los recuentos celulares son una serie de procedimientos que tienen por objeto determinar el
número de cada uno de los tipos celulares que están comprendidos en una unidad de volumen
de sangre (generalmente, en 1 mm3).

Todos los recuentos celulares constan de 3 fases descritas a continuación.

? Jilución de la sangre.

? aómputo del número de células.

? aálculo matemático del número de células presentes en 1 mm3 de sangre.

Los recuentos celulares pueden realizarse mediante métodos manuales (recuentos en cámara)
o automáticos (recuentos en contadores electrónicos), siendo éstos los dos bloques
diferenciados en el presente tema. La primera opción, tal y como podremos descubrir a lo
largo del tema, se encuentra actualmente en desuso debido al amplio margen de error de la
técnica. Otro de los motivos a destacar es la falta de operatividad en los laboratorios actuales
debido a la necesidad de tiempo invertido y elevado volumen de trabajo.



   

  



el recuento de los distintos elementos formes presentes en sangre, es una de las prácticas más
antiguas en hematología. Siendo además muy útiles los resultados obtenidos en estos puesto
que permiten la detección e alteraciones cuantitativas ( en la cantidad o número) de las
distintas células sanguíneas.

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     n determinadas situaciones patológicas ( alteraciones en el

tamaño de las plaquetas) el recuento automático no resulta efectivo, puesto que el
aumento de tamaño de dichas células no permite al aparato diferenciarlas de otras
células sanguíneas de un tamaño mayor.

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  isten otras muestras biológicas (
líquido cefalorraquídeo, peritoneal y otros muchos), en los que a menudo es necesario
llevar a cabo el recuento de hematíes o leucocitos que por situación patológica se
encuentra en ellos. No se realiza automáticamente, sino que se opta por la práctica de
un recuento en cámara.

Por ello, además de por la inclusión de este apartado dentro de la Legislación Vigente para el
presente aiclo Formativo, procederemos al estudio de dicha técnica.

 
 



cámara de neubauer.

También se llama cámara cuentaglóbulos o hemocitómetro. aonsiste en una placa gruesa de

cristal con forma de porta, cuya porción central está dividida en 3 ejes perpendiculares al eje
longitudinal de la cámara. Je ellas, las dos laterales se hallan sobreelevadas 0.1 mm con
respecto a la central, y en esta última hay grabado un retículo cuadrangular ( cámara simple).
La banda central puede estar, a su vez, subdividida en 2 semi bandas idénticas y separadas por
un surco paralelo al eje longitudinal de la cámara ( cámaras dobles). n cada una de estas dos
semibandas hay grabado un retículo idéntico que facilitará el recuento celular.

No todas las cámaras de recuento son iguales, la más utilizada en hematología es la cámara de
neubauer. Se trata de una cámara doble, cuyos retículos ( 2 al tratarse de una cámara doble)
se denominan retículos de neubauer. La siguiente figura muestra las dimensiones de dicho
retículo:

Tal y como puede apreciarse en la figura, cada retículo se divide en nueve cuadrados grandes
de 1mm de lado. Siendo los cuadrados de las esquinas los destinados al recuento de leucocitos
( al e istir éstos en menor número que hematíes, se precisa menor número de líneas de
referencia), a su vez dichos cuadrados se subdividen en 16 cuadrados denominados medianos
de 0.25 mm de lado.

l cuadrado central es el destinado al recuento de hematíes y plaquetas. Jicho cuadrado se

subdivide en 25 cuadrados medianos ( 0.2mm de lado), y a su vez éstos se subdivide en 16
cuadros denominados pequeños. Por tanto el número total de cuadraditos constituyentes del
cuadro central es de 400 cuadrados.

cubreobjetos.

Preferiblemente, debe ser algo más grueso que los normalmente utilizados. Se coloca de
forma que apoye sobre las dos bandas laterales de la porción central de la cámara. Je esta
manera, queda delimitado un espacio entre la banda central y el cubre en el que se deposita la
muestra y cuyo espesor es de 0,1 mm.
[lgunas cámaras también constan de dos pinzas especiales que parten, cada una, de una de las
porciones laterales de la cámara y que tienen por misión la de asegurar la fijación del cubre a
la misma.

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 D  DOR D
OM.

Son unas pipetas especiales de cristal que constan de un largo tubo capilar graduado y de una
dilatación ampular o bulbo.

l tubo capilar termina en punta, a nivel de uno de sus e tremos, y se continúa con el bulbo, a
nivel del otro de sus e tremos. [demás, está dividido en 10 partes iguales, y en su superficie
están especialmente bien marcadas la 5a división (con un 0,5) y la 10ª (con un 1).

l bulbo contiene una perla de vidrio para facilitar la mezcla de la sangre con el líquido de
dilución, y acaba en un tubo capilar corto. La perla de vidrio es roja en las pipetas empleadas
para el recuento de hematíes, y blanca en las usadas para el recuento de leucocitos. [demás,
en las pipetas para hematíes la capacidad del bulbo es 100 veces superior a la del tubo capilar
largo, por lo que en el tubo capilar corto hay una marca de 101, Y en las pipetas para
leucocitos la capacidad del bulbo es 10 veces mayor que la del tubo capilar largo, por lo que en
el tubo capilar corto hay una marca de 11.
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incorporan también anticoagulantes como el citrato de sodio, e incluso antisépticos como la
formalina.

Los que se emplean para el recuento de leucocitos contienen una sustancia, como el ácido
acético glacial que rompe los hematíes y un colorante, como el violeta de genciana, que tiñe el
núcleo de los leucocitos.

Los que se usan para el recuento de plaquetas pueden incorporar una sustancia hemolítica y
un antiagregante plaquetario.

Los líquidos diluyentes más utilizados son el de Hayem, para el recuento de hematíes, y el de
Turck, para el recuento de leucocitos.

 

  

Sangre capilar o venosa anticoagulada con JT[. sta sangre se utilizará convenientemente
diluida.

    
 

aon respecto a la limpieza de la cámara de neubauer, tras su uso, ha de ser aclarada con agua
tibia y posteriormente debe secarse con un paño suave y limpio dejándola al aire.

Tras el empleo de las pipetas de Thoma, éstas deben lavarse interiormente del siguiente
modo:

? Primero, haciendo pasar a través de ellas agua corriente, una vez.

? Luego, haciendo pasar a través de ellas agua destilada, 3 veces.

? Finalmente, haciendo pasar a través de ellas acetona o alcohol de 95°, otra vez.

Tras ello, ha de secarse su interior, preferentemente mediante un secador de aire.

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[tendiendo al elemento forma del cual queramos llevar a cabo el recuento, además de utilizar
un líquido de dilución diferente, la dilución a realizar también será distinta, lo cual se
encuentra directamente relacionado con el número de cada tipo celular presente en la
muestra sanguínea en condiciones normales.

Las diluciones a realizar en cada caso, así como las indicaciones para la correcta práctica de la
dilución y llenado de la cámara se e pondrán en las prácticas correspondientes en cada caso.

aomo generalidad importante, debemos citar que en todos los casos, una vez llevemos a cabo
el recuento de las células correspondientes en las regiones apropiadas de la cámara (
dependiendo del tipo celular objeto de estudio), los resultados deben ser referidos a un
volumen ( lo conseguimos al conocer las dimensiones del retículo y cómo no la altura de la
cámara) y al tiempo ser corregidos por el factor de dilución utilizado. Sólo de este modo
e presaremos los resultados tal y como es debido: número de células ( leucocitos, hematíes o
plaquetas) / mm3.
Por otro lado, es necesario remarcar el amplio margen de error presentado por el método que
nos ocupa en estos momentos. La técnica de recuento manual se caracteriza presentar un alto
margen de error motivado por:

? rrores en la práctica de la dilución.

? aontaminación del líquido de dilución.

? rror en el montaje y / o llenado de la cámara.

? rror en los cálculos a realizar.

? rror en el recuento propiamente dicha.

l margen de error puede disminuirse con una buen práctica y destreza del operador, pero
e iste una sistemática a seguir para evitar o disminuir el error en el recuento propiamente
dicho, puesto que de no ser así, sería sencillo que una célula fuese contada por partida doble o
a la inversa.

La sistemática a seguir es la siguiente:

l recuento presupone un conocimiento e acto de las líneas límite de las cámaras de conteo
utilizadas. Éstas se pueden ver en la ilustración.

Para que las células, que están en o cerca de las líneas de limitación, no se cuenten dos veces o
se sobrepasen en el conteo, hay que atenerse a determinadas reglas. Se cuentan todas las
células dentro de una zona de medición definida. También se cuentan las células (marcadas en
negro), que se apoyan o tocan en las 2 caras: la línea de medida izquierda y superior.

sto también es válido para el tipo de la operación de conteo propiamente dicha, que debe
efectuarse en forma de meandro.
l recuento se efectúa en el ángulo superior izquierdo en dirección de la flecha.

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Los autoanalizadores hematológicos o contadores electrónicos, son actualmente la opción en

los laboratorios modernos. l margen de error obtenido mediante los métodos manuales, el
cual oscila en torno al 20%, se ve disminuido enormemente con el desarrollo de estos
aparatos, siendo el margen de error en torno o incluso inferior al 1%.

Tal y como se podrá observar a lo largo de este apartado, como norma general los contadores
electrónicos no se limitan a llevar a cabo el recuento celular de los distintos elementos formes.
Por lo general proporcionan los resultados de todos y cada uno de los parámetros
constituyentes del hemograma.

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 !"cc

D  DOR.

Jisminuye la concentración de la sangre hasta el nivel adecuado para el funcionamiento del

contador.

Generalmente diluye poco para el recuento de leucocitos (por ejemplo, a 1/300 en el contador
[ MIa
OSOT) y mucho para el recuento de hematíes (por ejemplo, a 1/20.000 en el
contador [ MIa
OSOT). La dilución realizada por dicho elemento variará dependiendo del
contador electrónico en cuestión, aunque todo ello no es necesario que sea tenido en cuenta
en el trabajo del técnico.

aomo líquido diluyente utiliza una solución isotónica con capacidad conductora.

COM^R
OR- ^ RDOR.

[porta la presión y el vacío necesarios para transportar la sangre, convenientemente diluida, al
dispositivo de medida.

D ^O  O D
M
D D.

s la cámara donde se cuentan realmente las células sanguíneas (cámara de medida o de

lectura). Su diseño depende del método de recuento utilizado por cada modelo de contador.

Puede basarse en un sistema de detección celular por medida de la impedancia o en sistemas

ópticos de detección celular.

n los contadores electrónicos más avanzados, una válvula de cerámica reparte la muestra
hacia distintas cámaras de medida. aada cámara de medida está especialmente diseñada para
el recuento de un tipo celular (glóbulos rojos, leucocito s o plaquetas) o para ]a determinación
de hemoglobina.

RDCOR.

Transforma las señales, procedentes del dispositivo de medida, en impulsos eléctricos. Suele
ser un fotomultiplicador.

D CR M DOR.

Jiferencia los impulsos eléctricos generados por cada uno de los tipos de células sanguíneas.

^ROC
DOR.

ecoge los datos obtenidos, los procesa y los proyecta en una pantalla.

R
] RDOR.

Imprime en papel los resultados conseguidos.

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aada contador electrónico, se basa en su propio fundamento para obtener los resultados. n
este apartado trataremos de adentrar al alumno en el interior del autoanalizador, para que
trate de entender cómo se hace posible el recuento.

Lógicamente, no se recogen todos y cada uno de los fundamentos e istentes, pero si los más
habituales e importantes.

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s el utilizado por los primeros contadores, ya que fue descubierto por aoulter en 1956. Se
basa en lo siguiente:

? Mientras que las células sanguíneas conducen mal la electricidad, el líquido diluyente
es un buen conductor de la electricidad (posee una gran conductividad eléctrica).

? l dispositivo de medida consiste en un pequeño orificio, a través del cual se hace

pasar la sangre diluida. Tiene colocados un electrodo a su entrada y otro a su salida.
 ? También se hace pasar una corriente eléctrica constante a través de ese mismo
orificio.

? Si el orificio es atravesado solamente por líquido diluyente, la resistencia eléctrica

medida por los electrodos es mínima y constante, pero cuando el orificio es
atravesado por una célula sanguínea, se produce un aumento de la resistencia
eléctrica y un cambio de potencial entre los electrodos.

? l número de señales eléctricas generadas indica el número de células presentes en la

sangre y la amplitud de estas señales es directamente proporcional al volumen celular.
Je este modo es posible la identificación de las células y por tanto el recuento.

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MÉODO D
 CM^O OCRO.

l dispositivo de medida consiste en un capilar por el que circula la sangre diluida y que es
atravesado por un haz de luz halógena.

auando no pasan células a lo largo del capilar, el haz de luz incide sobre una zona no sensible
(disco campo oscuro); pero si una célula pasa a través del capilar, dispersa los rayos del haz
luminoso hacia afuera del disco, donde son captados por un fotodetector.

l número de señales luminosas detectado indica el número de células presentes en la sangre,

y la intensidad de la dispersión luminosa producida por cada una de ellas es directamente
proporcional al tamaño y contenido de las células, siendo de este modo posible la
identificación y por tanto el recuento.

MÉODO D
 R O 
R.

l dispositivo de medida consta de un detector situado detrás de un capilar por el que circula
un flujo continuo de sangre diluida; es pues un citómetro de flujo. Un rayo láser atraviesa el
capilar y se dirige hacia el detector.

auando no pasan células a lo largo del capilar, el rayo láser incide sobre el detector, pero si una
célula pasa a través del capilar, el rayo láser es interceptado por ella y deja de incidir sobre el
detector.

l número de interferencias indica el número de células presentes en la sangre, y el grado de

interferencia que produce cada célula a su paso es directamente proporcional a su tamaño.

n estos contadores, la luz láser puede ser, por ejemplo, un láser de helio-neón polarizado
verticalmente a una longitud de onda de 632,8 nm (el empleado en los contadores aLL-JYN
3000 y 3500 de los Laboratorios [bbott).

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Los modernos contadores electrónicos pueden llegar a determinar hasta más de 50

parámetros. ntre éstos cabe destacar los siguientes:
 ? Número de hematíes por mm3 de sangre.

? Porcentaje de reticulocitos.

? Número de leucocitos por mm3 de sangre.

? Fórmula leucocitaria.

? Número de plaquetas por mm3 de sangre.

? ondices hematimétricos (eritrocitarios, reticulocitarios, leucocitarios y plaquetarios).

? Valor hematocrito.

? aoncentración de hemoblobina en la sangre.

? Velocidad de sedimentación globular.

Todos estos parámetros constituyen las determinaciones analíticas incluidas en el hemograma

o también denominado perfil hematológico básico, del cual trataremos en temas sucesivos.