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Resumen: E-069

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E


Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2004

Validación de una metodología para la extracción y determinación de cobre


en aguas naturales subterráneas por espectrometría de absorción atómica.

Blanes, Patricia S. - Benítez, Mónica E. - Giménez, María C.

Cátedra Química Analítica General. Facultad de Agroindustrias. Universidad Nacional del Nordeste.
Comandante Fernández Nº 755 - (3700) - Pcia. Roque Sáenz Peña - Chaco - Argentina.
Tel./Fax: 03732 – 420137. E-mail: patriciablanes@hotmail.com

Antecedentes

En nuestro país poco a poco se está creando conciencia de la necesidad de vigilar y controlar la calidad del agua,
especialmente aquella destinada al consumo humano, asimismo existe un creciente interés en el conocimiento de los
niveles de contaminación y su impacto sobre el medioambiente. Sin embargo, los estudios para adquirir tales
conocimientos, solo podrán llevarse a cabo si se dispone de metodologías analíticas que posean ciertos atributos como
exactitud, precisión, sensibilidad y selectividad, entre otros. El proceso por el cual se evalúan estos atributos se conoce
con el nombre de validación y es un aspecto clave en el aseguramiento de la calidad de los resultados.
De las metodologías existentes para la determinación de metales en muestras de agua, la espectrometría de absorción
atómica por aspiración directa en llama es una técnica que presenta una fácil operación y alta selectividad. La cantidad
de energía absorbida en la llama a una determinada longitud de onda será proporcional a la concentración del analito en
la muestra.
Cuando el elemento a determinar se encuentra en muy bajas concentraciones como generalmente ocurre con el cobre en
aguas naturales subterráneas, el primer paso que se aborda es la extracción del analito de la matriz en que se encuentra,
esta tarea debe efectuarse con la mayor eficacia, evitando pérdidas y asegurando que el método no provoque
alteraciones a las especies existentes.
El cobre es un elemento indispensable en la nutrición humana, su deficiencia suele producir anemia, neutropenia y
desmineralización ósea; y a la vez, integra el grupo de los metales pesados, elementos químicos generalmente tóxicos
no por sus características esenciales, sino por las concentraciones en las que puedan encontrarse.
El Código Alimentario Argentino establece para aguas de bebida una concentración máxima de cobre de 1 mg.L-1
(CAA, 1994) y aunque no son frecuentes las intoxicaciones agudas por este metal, beber agua con niveles de cobre
superiores al establecido pude provocar nauseas, dolores de cabeza, taquicardia, ictericia y uremia. No existen
evidencias de envenenamiento como resultado del consumo de agua con alto contenido de cobre, pero valores
superiores al límite, ocasionan un sabor amargo en el agua, efectos corrosivos, el manchado de ropa y artefactos
sanitarios (DAS, 1994).
El propósito de este trabajo es validar una metodología analítica para la extracción de cobre y su determinación en
aguas naturales subterráneas aplicando espectrometría de absorción atómica en llama de aire-acetileno.

Materiales y Métodos

Reactivos y patrones

Solución Stock de cobre como CuCl2 .2H2O de 1000 mg.L-1 (Fixanal Riedel-de Haën, Germany).
Las soluciones estándares de trabajo se prepararon por dilución apropiada de la anterior con agua bidestilada.
Pirrolidin ditiocarbamato de amonio al 4% (p/v) (APDC, ANALEN).
Isobutilmetilcetona (MIBK, MERCK).
Agua saturada con MIBK, obtenida por mezcla de una parte de MIBK con una parte de agua en un embudo de
separación. Se agita durante 30 seg. y se descarta la fase acuosa.
Sulfato de sodio anhidro (Na2SO4, MERCK).
Ácido nítrico (HNO3, MERCK).
Aire comprimido seco, libre de agua y aceite.
Acetileno al 99,5% (PRAXAIR).
En todos los casos se usaron reactivos grado analítico y agua bidestilada para la preparación de patrones y soluciones.

Instrumental

Las determinaciones se efectuaron con un Espectrofotómetro de Absorción Atómica METROLAB Modelo 4200 con
microcomputador, corrector de fondo incorporado y quemador de una ranura de 10 cm recomendado para llama de aire
- acetileno. Se usó una lámpara de cátodo hueco operando a 326 nm, corriente de 4mA y ancho de banda de 1,5 nm.
El material volumétrico utilizado en la investigación fue calibrado y de uso exclusivo para este procedimiento. El
mismo fue sumergido durante 24 horas en HNO3 al 30% (v/v) y enjuagado varias veces con agua destilada.
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Muestreo y acondicionamiento de las muestras

Se seleccionaron al azar muestras de aguas naturales subterráneas de la diferentes zonas de la provincia, empleadas para
consumo humano y del ganado. En el laboratorio se filtraron, y se preservaron añadiendo HNO3 concentrado hasta
obtener un pH< 2, se almacenaron en envases plásticos previamente lavados con una solución nítrica al 30% (v/v)
durante 24 horas y enjuagados varias veces con agua destilada. Se conservaron refrigeradas a 4 ºC hasta su análisis.

Procedimiento

Para la determinación de cobre en muestras de aguas naturales se seleccionó el método espectrométrico de absorción
atómica descrito como método 3111 en APHA, AWWA, WFF, (1992).
La separación del metal de la matriz en estudio se fundamenta en la quelación con APDC y su posterior extracción con
MIBK, seguida por aspiración directa en llama de aire-acetileno.
La técnica consiste en transferir 100 ml de cada solución y el blanco a ampollas de decantación, adicionar 1 ml de
solución de APDC y agitar la mezcla. Se añaden 10 ml de MIBK y se agita vigorosamente durante 30 segundos. Se deja
que el contenido de cada ampolla se separe y se transfiere la fase orgánica a un tubo de centrífuga. Para quitar el
excedente de fase acuosa que pudiera acompañar al extracto, se agrega una punta de espátula de sulfato de sodio
anhidro y se centrífuga durante 5 minutos a 3000 rpp. El extracto orgánico se aspira directamente a la llama, registrando
el cero de absorbancia con un blanco de agua saturada con MIBK.
Para minimizar los efectos de matriz la curva de calibración se realizó mediante un proceso de adiciones estándares,
añadiendo cantidades conocidas de un patrón de cobre de 100 mg.L-1 sobre una muestra real. La curva de adiciones
estándares se construye en siete niveles de concentración: 0,05. 0,1 . 0,25 . 0,5 . 0,75 . 1 y 2 mg.L-1. Cada punto se
procesó por triplicado.
Los resultados obtenidos se evaluaron mediante la aplicación de regresión lineal simple. Los parámetros estimados para
la validación fueron, linealidad, límite de detección y cuantificación, precisión y exactitud.

Discusión de Resultados

El análisis de la curva de adiciones estándares (Fig. 1), mostró que existe una relación lineal entre la respuesta analítica
y la concentración del metal dentro del rango estudiado para un nivel de confianza del 95%. Para evaluar la linealidad
se aplicó la t de Student práctica (tp) y la F de Fisher práctica (Fp) en función de la pendiente, para p = 0,05, en ambos
casos los datos experimentales son mayores a los tabulados. Tabla 1.

Tabla 1: Parámetros de validación para extracción de Cu Fig. 1: Curva de adiciones estándares

Coeficiente de Correlación (r) 0,998 A 2


Coeficiente de determinación (R2) 0,997
Intersección 0,062 1.5
Pendiente (mg.L-1) 0,845
Error típico 0,027 1
Rango Lineal (mg.L-1) 0,05-2
Límite de detección(mg.L-1)a 0,008 0.5
Límite de cuantificación(mg.L-1)b 0,022
T Student 6,60 > t(19,0.05)
F Fisher 6038> F(1,19,0.05)
0
a
Definido como 3σ/pendiente (n = 10). 0 0.5 1 1.5 2
b
Definido como 10σ/ pendiente (n = 10). [Cu] mg/L

La precisión expresada como repetitibidad se fijó a partir de la desviación estándar de seis réplicas de 0,25 mg.L-1 de
concentración, arrojando un valor de RSD de 3,2 %.
En todas las lecturas los coeficientes de variación fueron menores al 5% como lo establece APHA, AWWA, WFF
(1992).
Ante la imposibilidad de trabajar con un material de referencia certificado que permita evaluar la exactitud del método,
se realizaron ensayos de recuperación adicionando un patrón de cobre a la matriz de la muestra en tres niveles de
concentración diferentes, comprendidos en un intervalo de 33 a 133 % donde 0,75 mg.L-1 de Cu representa el 100%.
Para cada nivel del ensayo de recupero se efectuaron duplicados y en todos los casos los valores obtenidos se
encuentran dentro del rango de 85 a 115 % como se establece en APHA, AWWA, WFF, (1992). Tabla 2.
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Tabla 2: Exactitud del método espectrométrico


[Cu]mg.L-1 añadida [Cu]mg.L-1 recobrada % Recupero
± SD

0,25 0,29 ± 0,002 96,8


0,50 0,57 ± 0,000 99,0
0,75 0,75 ± 0,002 97,6
1,00 1,00 ± 0,002 95,1
2,00 1,97 ± 0,012 96,0

Validado el método, se determinaron los niveles de cobre en treinta muestras de aguas naturales subterráneas utilizadas
para consumo humano y del ganado que fueron recolectadas de diferentes sitios de la provincia del Chaco. Los
resultados obtenidos se recogen en la Tabla 3.

Tabla 3: Niveles de cobre en muestras de agua del Chaco


Referencia [Cu] mg.L-1 Origen
Avia Terai 0,054 Pozo
Campo Largo 0,020 Perforación
Castelli 0,053 Perforación
Cnia. Bajo Hondo 0,041 Pozo
Cnia. La Mascota 0,047 Pozo
Cnia. La Mascota 0,074 Pozo
Cnia. La Mascota 0,024 Pozo
Cnia. La Mascota < LD* Pozo
Cnia. La Mascota 0,050 Pozo
Cnia. La Matanza 0,035 Pozo
Cnia. La Matanza 0,014 Pozo
Napenay 0,050 Pozo
P. La Pirámide 0,027 Perforación
P. La Pirámide 0,027 Perforación
Pampa del Infierno 0,050 Perforación
Pampa del Infierno 0,031 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,040 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,041 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,047 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,060 Pozo
Pcia. R. Sáenz Peña 0,025 Pozo
Pcia. R. Sáenz Peña 0,074 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,050 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,038 Pozo
Pcia. R. Sáenz Peña 0,024 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,040 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,060 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,050 Perforación
Pcia. R. Sáenz Peña 0,060 Pozo
Quitilipi. Lote 7 0,050 Pozo

< LD* : menores al límite de detección de 0,008 mg.L-1

La concentración media de cobre hallada en las muestras fue de 0,042 mg.L-1, el valor máximo encontrado fue de 0,074
mg.L-1 de cobre. El 100% (30/30) de los puntos de muestreos exhiben niveles de cobre muy por debajo de 1,00 mg.L-1,
máximo valor permitido en agua de bebida según el Código Alimentario Argentino.

Conclusiones

La mayor dificultad para la determinación y cuantificación de cobre, es la baja concentración del metal en aguas
naturales subterráneas. El método propuesto en este trabajo, demostró que se puede alcanzar una adecuada sensibilidad
y exactitud aplicando extracción con MIBK del quelato formado por Cu-APDC y su posterior determinación por
espectrometría de absorción atómica y aspiración directa a la llama de aire-acetileno.
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La metodología propuesta resultó ser lineal y precisa dentro del rango en estudio, siendo muy adecuada para un
laboratorio de mediana complejidad.
Por otra parte, se puso de manifiesto que las concentraciones de cobre en las muestras de aguas subterráneas analizadas
se encuentran muy por debajo del límite establecido por el Código Alimentario Argentino de 1 mg.L-1 .

Bibliografía

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• Subsecretaría de Industria, Comercio, Minería y Actividades Portuarias, Dirección Provincial de Desarrollo y
Promoción Industrial, Dirección de Alimentación. Código Alimentario Argentino. Ley 18.284/69. Art 982 - (Res
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