Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
SUPERVISADO POR:
LICDA. LAURA ARACELI JIMÉNEZ COBIÁN
LICDA. SILVIA LUZ LÓPEZ ALCARAZ
1
INDICE
Práctica 6 Antiestreptolisinas…………………………………………………………………………………….…..22
2
REGLAMENTO GENERAL DE LABORATORIO
DURANTE EL TRABAJO:
I. No debe probarse ninguna sustancia y debe evitarse el contacto con la piel. En caso de que
algún producto corrosivo caiga en la piel, se eliminará con abundante agua fría.
II. Extremar los cuidados al trabajar con sustancias inflamables, tóxicas o corrosivas.
III. Comunicar cualquier accidente, quemadura o corte, a tu profesor de laboratorio.
IV. La manipulación de productos sólidos se hará con ayuda de una espátula o cucharilla y para
transvasar líquidos se utilizara una varilla de vidrio en los casos que sean necesarios.
V. Nunca viertas el ácido sulfúrico concentrado al agua, debes hacerlo de manera inversa pero
con cuidado.
VI. Tener cuidado al manejar ácidos y bases principalmente concentrados.
VII. Para oler algún producto no debe acercarse la cara al recipiente, si no que se arrastrará el
vaso hacia la nariz pasando la mano por encima de él.
VIII. Con el fin de evitar contaminaciones, nunca se devolverá al frasco los restos de productos
no utilizados.
IX. El material de vidrio es muy frágil, por lo que se evitara los golpes y cambios bruscos de
temperatura. Se deberá anotar en una hoja o cuaderno el material que se rompa y
comunicarlo al profesor de laboratorio.
3
X. Cualquier experimento en el que se desprenda gas tóxico o inflamables en el que se utilicen
reactivos potencialmente nocivos deberá llevarse a cabo en las campanas extractoras del
laboratorio.
XI. Los restos sólidos no metálicos deben tirarse en cestos de basura, nunca en las fregaderas.
Los residuos metálicos se almacenarán en un recipiente especial. Los residuos acuosos se
verterán en los fregaderos grandes, con abundante agua antes, durante y después del
vertido. En cuanto a los líquidos y disolventes orgánicos, se echaran en un recipiente de
plástico, para su posterior eliminación.
AL TERMINAR:
I. El lugar y el material de trabajo debe quedar limpio y ordenado, también se deben apagar y
desenchufar los aparatos.
II. Lavarse las manos perfectamente para evitar intoxicaciones con algunos reactivos.
III. Entregar para su revisión el reporte de la práctica elaborada.
IV. Hasta que el profesor no de su autorización no se considerara finalizada la práctica y por lo
tanto, no podrás salir de laboratorio. Recomendaciones generales.
4
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis clínicos III
Práctica no.1
MATERIAL:
Diversos medios de cultivo. Matraces erlenmeyer de 500 ml.
Espátulas Balanza granataria o analítica
Vidrio de reloj Algodón
Cinta testigo Papel aluminio o de estraza
Agua destilada Olla de presión para esterilizar
Mechero fisher Tripie o soporte universal
Aro metálico Tela de alambre con asbesto
Guantes con asbesto
INTRODUCCIÓN
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones nutritivas necesarias para el desarrollo de
los microorganismos. La diversidad metabólica de los microorganismos es
enorme; por ello, la variedad de medios de cultivo es también grande, no
existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. En la
actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados,
normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso rehidratar. En general, la
preparación de un medio de cultivo se reduce simplemente a pesar la cantidad
deseada del mismo y redisolverla en agua destilada siguiendo las instrucciones
del fabricante para posteriormente esterilizarlos. Antes de su esterilización, los
medios de cultivo ya hidratados se distribuyen en los recipientes adecuados (tubos
o matraces; según se trate de caldos o agares).
5
De acuerdo a su utilidad tenemos:
1.- Medios generales: permiten el desarrollo de una gran variedad de
microorganismos.
2.- Medios de enriquecimiento: favorecen el crecimiento de un determinado tipo
de microorganismo, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto.
3.- Medios selectivos: permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos
determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
4.- Medios diferenciales: son aquellos en los que se ponen de relieve
propiedades que un determinado tipo de microorganismos posee.
DESARROLLO
1.- Proporcionarle a los alumnos diversos medios de cultivo para que primero
anoten los siguientes datos:
Nombre del medio de cultivo, tipo de medio de cultivo de acuerdo a su
consistencia y utilidad, para qué tipo de microorganismos se utiliza o qué pruebas
se pueden realizar en el etc.
2.- Posteriormente que procedan a preparar algunos de los medios de cultivo que
necesitaran para las siguientes prácticas de laboratorio:
6
NOTAS:
+ No olvides rotular los medios de cultivo con su nombre o siglas para poder
identificarlos y de preferencia también la fecha de elaboración.
+ Colocar un tira pequeña de cinta testigo a los tubos y matraces de los medios,
antes de meter a esterilizar.
CUESTIONARIO
1.- ¿Por qué se deben almacenar los medios de cultivo en posición invertida?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- ¿Para qué sirve la cinta testigo?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- ¿Por qué se tapan los tubos y matraces que contienen los medios para
esterilizar?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
4.- ¿Cómo creas área estéril para vaciar los medios de cultivo ya esterilizados a
las cajas de petri? ¿Y por qué es necesario?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
_________________________________
Vo.Bo. del maestro
7
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no.2
MATERIAL:
Cultivos bacterianos en agares y caldos (pueden ser cultivos mixtos o de alguna
especie bacteriana en particular, que hayan aislado previamente).
Medios de cultivo estériles (en placa, tubo inclinado, caldo y tubo vertical).
Asa bacteriana y aguja de inoculación.
Mechero Fisher.
INTRODUCCIÓN
La utilización de cultivos es fundamental para determinar las características
físicas, químicas y bioquímicas de los microorganismos; en este caso,
principalmente de las bacterias. Para ellos contamos con un gran número y tipo de
ellos, así como diversas técnicas de cultivo que nos facilitan el trabajo. El médico,
con base en un examen cuidadoso del paciente, puede sospechar que hay una
enfermedad infecciosa. Entonces se recolectan muestras de los tejidos o de los
líquidos infectados para análisis microbiológico entre otros estudios.
Hay un gran interés en la importancia de identificar con precisión el patógeno, para
el tratamiento apropiado de la enfermedad infecciosa. Generalmente los
laboratorios clínicos son capaces de aislar, identificar y determinar la sensibilidad
a antibióticos de la mayor parte de las bacterias patógenas encontradas
rutinariamente dentro de las 48 horas de haber tomado la muestra.
DESARROLLO
1.- Prende el mechero fisher para crear un área estéril y así evitar que te
contamines o se contaminen los medios de cultivo. Coloca las placas en posición
invertida sobre la mesa de trabajo para que se facilite manipularlas mejor.
2.- Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri que
contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero espera que se enfríe el
asa y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera.
3.- Ahora, toma una placa con agar estéril (donde vayas a sembrar) y con cuidado
de no romper el agar, inocula la muestra en un extremo de la placa y con el asa en
posición ligeramente horizontal realiza las estrías (muy juntas), oscilando el asa de
siembra sobre la superficie de una porción pequeña del agar; mediante un
balanceo sucesivo y rápido de la muñeca.
8
4.- Esteriliza el asa de nuevo y déjala enfriar. Rozar una vez con el asa de siembra
las estrías sembradas la primera vez y realiza sobre una porción virgen del agar
una segunda tanda de estrías que no toque la primera.
5.- Repetir exactamente la operación descrita en el punto anterior, pero rozando al
empezar la segunda tanda de estrías, hasta completar 3 o 4.
No hagas más presión sobre el agar que la debida al propio peso del asa y su
mango. Es importante emplear un asa de siembra en buen estado, pues una rota
o deteriorada rasgará el agar.
6.- Lleva a la incubadora y deja en posición invertida 24 horas al término de las
cuales se puede observar ya el desarrollo de colonias aisladas.
1.- Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri
que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero espera que se
enfríe el asa y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera.
2.- Ahora toma el tubo de agar en pico de flauta (agar inclinado) y cerca del
mechero retira el tapón de algodón ayudándote con los dedos meñique y anular y
flamea la boca del tubo.
3.- Introduce el asa con la muestra (cuidando de no tocar las paredes del tubo) y
empezando en el área del fondo del agar realiza una estría hacia fuera hasta
terminar en la punta del agar. Retira el asa.
4.- Flamea la boca del tubo de nuevo y coloca el tapón de algodón bien firme.
Esteriliza el asa y déjala enfriar.
5.- Lleva a incubar y observa el desarrollo a las 24 o 48 horas después de la
siembra.
1.- Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri
que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero espera que se
enfríe el asa y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera.
2.- Ahora toma el tubo con el caldo estéril y cerca del mechero retira el tapón de
algodón ayudándote con los dedos meñique y anular, flamea la boca del tubo.
3.- Introduce el asa con la muestra (cuidando de no tocar las paredes del tubo) y
por agitación dentro del caldo, siembra el inóculo. Retira el asa y flamea de nuevo
la boca del tubo y coloca el tapón de algodón firmemente. Esteriliza el asa y déjala
enfriar.
4.- Lleva a incubar y observa el desarrollo a las 24 o 48 horas después de la
siembra.
9
2.- Ahora toma el tubo con el medio de cultivo y cerca del mechero retira el tapón
de algodón ayudándote con los dedos meñique y anular, flamea la boca del tubo.
3.- Introduce la aguja con el inóculo y sin tocar las paredes del tubo, inocula en el
centro del medio de cultivo sin llegar hasta el fondo del tubo. Retira la aguja de
inoculación en la misma dirección de la siembra. Retira el asa y flamea de nuevo
la boca del tubo y coloca el tapón de algodón firmemente. Esteriliza el asa y déjala
enfriar.
4.- Lleva a incubar y observa las características del desarrollo a las 24 o 48 horas
después de la siembra.
CUESTIONARIO
1.- Menciona en qué casos se utilizan cada una de las técnicas que desarrollaste e
indica las ventajas y desventajas de cada uno de los cultivos.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- ¿Cuáles son las medidas de seguridad que debes manejar durante el proceso
de éste tipo de técnicas?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
10
Nombre del alumno:___________________________________6to sem.gpo.____
Fecha de realización:__________________________________
_____________________________
Vo.Bo. del maestro
11
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no.3
MATERIAL:
INTRODUCCIÓN
DESARROLLO
1.- Prende el mechero fisher para crear un área estéril y así evitar que se
contaminen los medios de cultivo. Coloca las placas de agares estériles en
posición invertida sobre la mesa de trabajo para que se te facilite manipularlas.
3.- Con una luz brillante desde por encima del hombro de la persona que obtiene
la muestra debe enfocarse en la cavidad oral abierta para guiar el hisopo hacia la
parte posterior de la faringe. Se instruye al paciente para que respire
profundamente y se deprime la lengua con suavidad con un abate lenguas.
4.- Luego se extiende el hisopo entre los pilares amigdalinos y detrás de la úvula.
Debe tenerse la precaución de no tocar las paredes laterales de la cavidad oral.
12
5.- Hacer que el paciente diga “ah” sirve para levantar la úvula y ayudar a reducir
el reflejo de arcadas (asco). El hisopo debe moverse hacia atrás y hacia delante a
través de la parte posterior de la faringe para obtener una muestra adecuada.
6.- Tomar un segundo hisopo siguiendo las mismas instrucciones y toma la parte
de la caja de petri que contiene el medio de cultivo.
7.- Inocula en un extremo de cada uno de los medios de cultivo (AS, EMB y ASM)
con los hisopos impregnados con la muestra faríngea (recuerda hacer todo el
proceso cercas de la llama del mechero) y coloca los hisopos en un medio de
transporte como caldo estreptocel o Stuart, y resérvalo.
8.- Esteriliza el filamento del asa de siembra en la llama del mechero y déjala
enfriar. Con el asa en posición ligeramente horizontal realiza las estrías (muy
juntas), oscilando el asa de siembra sobre la superficie de una porción pequeña
del agar; mediante un balanceo sucesivo y rápido de la muñeca.
9.- Esteriliza el asa de nuevo y déjala enfriar. Rozar una vez con el asa de siembra
las estrías sembradas la primera vez y realiza sobre una porción virgen del agar
una segunda tanda de estrías que no toque la primera.
CUESTIONARIO
2.- Escribe los nombres de las bacterias de la flora normal de la garganta, así
como de la flora patógena, indicando en este último caso el tipo de enfermedad o
complicación para el paciente infectado.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
13
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
_________________________________
Vo.Bo. del maestro
14
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no.4
MATERIAL:
Cultivo bacteriano de 24 horas
Asa bacteriana
Colorante cristal violeta o violeta de genciana
Solución de yodo-lugol o yodo gram
Alcohol-acetona (1:1)
Colorante de safranina
INTRODUCCIÓN
Esta coloración, ideada por Hans Chistian Gram a fines del siglo XIX, permite
dividir a las especies bacterianas en dos grandes grupos: aquellas que toman el
colorante básico, cristal violeta (gram positivas) y aquellas que son decoloradas
por el alcohol-acetona (gramnegativas). El procedimiento clásico de la coloración
de Gram incluye la fijación del material, ya sea por calor en la llama del mechero
o por acción del alcohol. Luego de la fijación, el primer paso de la coloración de
Gram es la aplicación del cristal violeta; a continuación se agrega como mordiente
la solución de yodo de Gram que fija químicamente el colorante alcalino a la pared
bacteriana. La etapa de decoloración permite distinguir los gérmenes Gram
positivos de los Gram negativos.
Es probable que por el mayor contenido en lípidos de las paredes celulares de las
bacterias gram negativas, el alcohol o la acetona aumenten la permeabilidad de la
pared y el colorante sea eliminado. Además, la presencia de un mayor número de
residuos de ácido teicoíco con uniones cruzadas en las bacterias Gram positivas
es posible que aumente la fijación del cristal violeta. Los microorganismos gram
positivos que han perdido la integridad de su pared celular debido a un tratamiento
con antibióticos, envejecimiento o acción de enzimas auto líticas también permiten
el escape del cristal violeta en la etapa de la decoloración. A esta altura de la
coloración, los organismos gram positivos retienen el cristal violeta mientras que
las gram negativas permanecen sin teñir. El agregado de un colorante de
contraste como safranina teñirá a estos microorganismos y células (leucocitos y
eritrocitos) de un color rosado o rojo. Las levaduras también son gram positivas,
aunque el micelio de los hongos toma la coloración de Gram en forma variable.
DESARROLLO
1.- Sobre un portaobjetos limpio y seco, se coloca una gota de solución salina
fisiológica o una gota de agua.
15
2.- Se esteriliza el filamento del asa de siembra a la llama del mechero y se deja
enfriar. Se toma una pequeña cantidad de un cultivo bacteriano y se resuspende
en la gota de agua o solución salina del portaobjetos. También puede ser utilizada
una aguja de inoculación estéril para tomar la muestra bacteriana.
3.- Se deja secar al aire y luego se fija a la llama del mechero, pasándolo de 4 a 5
veces sobre esta; teniendo cuidado de no calentar demasiado pues el portaobjetos
puede romperse (no es vidrio pyrex).
Tener cuidado al fijar el frotis para evitar quemaduras.
4.- También se pueden realizar frotis del material directo de las muestras clínicas
(exudados faríngeos, heridas). Se hace rodar el hisopo con que se tomó la
muestra sobre el portaobjetos limpio y se fija con calor para proceder a la tinción.
a.- Cubrir el frotis bacteriano con cristal violeta durante 1 minuto. Enjuagar con
agua.
b.- Aplicar el yodo gram y dejarlo reaccionar durante 1 minuto. Escurrir.
c.- Ahora, decolorar con la solución de alcohol-acetona, agregando gota a gota en
el portaobjetos inclinado sobre el fregador (o tarja), hasta que deje de salir
colorante. Enjuague.
d.- Finalmente cubrir el frotis con la solución de safranina y dejarla actuar durante
1 minuto. Lavar el exceso de colorante y dejar secar al aire.
e.- Coloca aceite de inmersión al frotis seco y teñido para observarlo al
microscopio, con el objetivo de 100X.
f.- Realiza esquemas de lo observado e indica la forma, agrupación y
característica tintorial de los microorganismos observados.
CUESTIONARIO
2.- ¿Puede una bacteria Gram positiva teñirse de Gram negativa? ¿Por qué?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
16
Conclusiones.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Fecha de realización:__________________________________
_________________________________
Vo.Bo. del maestro
17
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no. 5
MATERIAL: SUSTANCIAS:
Portaobjetos peróxido de hidrógeno al 30%
Aplicadores de madera Agua destilada
Tubos de ensaye de 13x100 Solución salina estéril
Pipetas graduadas plasma de conejo o humano
Pipetas pasteur Asa bacteriológica
Baño maría a 37°C
Mechero Fisher o Bunsen
Cultivo de S. aureus en placa o en tubo reciente.
INTRODUCCIÓN
18
la coagulasa se utiliza más comúnmente para diferenciar al S. aureus (coagulasa
positivo) de otros estafilococos y micrococos.
La coagulasa se halla en 2 formas, “libre” y “fija”, cada una de las cuales posee
diferentes propiedades que requieren el uso de técnicas separadas:
DESARROLLO
a).- CATALASA:
Prueba en portaobjetos:
1.- Con una aguja de punción o un aplicador de madera con la punta aguzada
transferir células del centro de una colonia bien aislada a la superficie de un
portaobjetos.
2.- Añadir 1 o 2 gotas de peróxido de hidrógeno al 3% (diluir la solución al 30%
con agua destilada). Se recomienda no añadir el organismo al reactivo (invirtiendo
el orden), especialmente si se utilizan agujas o asas que contienen hiero, ya que
se pueden producir resultados falsos positivos.
19
Nota: es recomendable que el peróxido de hidrógeno se pruebe con organismos
de control positivo y negativo, para garantizar su eficacia.
b).-COAGULASA:
20
Nota: la coagubilidad del plasma utilizado puede comprobarse añadiendo 1 gota
de cloruro de calcio al 5% a 0.5 ml de plasma de conejo reconstituido. Se debe
formar un coagulo en 10 o 15 seg.
Cada ampolleta de plasma reconstituida debe ensayarse con organismos de
control positivo (S. aureus coagulasa positiva) y una cepa coagulasa negativo (S.
epidermidis).
CUESTIONARIO
Conclusiones:______________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
___________________________
Vo.Bo. del maestro
21
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no. 6
MATERIAL:
Equipo de estreptolisina “O” de Beli Baño maría a 37°C
Termómetro Sol. Amortiguadora de pH (6.5-6.7)
Centrífuga Pipetas pasteur
Pipetas graduadas de 2, 5 y 10 ml. Solución salina fisiológica
Tubos de ensaye de 12x75 Gradilla
Suspensión de glóbulos rojos lavados al 5%
Sangre sin anticoagulante del paciente
INTRODUCCIÓN
Es importante que el estreptococo β- hemolítico del grupo A sea identificado
correctamente en el laboratorio porque es necesario implementar un rápido
tratamiento del paciente infectado, no sólo para controlar la infección primaria
(faringitis aguda, Hypoderma, escarlatina, erisipela o celulitis), sino también para
prevenir las complicaciones potenciales serias, como fiebre reumática,
endocarditis y valvulitas reumática y glomerulonefritis aguda o crónica.
Entre las pruebas para su detección tenemos el cultivo en agar sangre con la
manifestación de la β-hemólisis, sensibilidad a la bacitracina, determinación
serológica de Antiestreptolisinas, entre otras muchas.
El estreptococo pyogenes (grupo A) produce diversas sustancias y toxinas
extracelulares. Las dos hemolisinas, estreptolisina O y estreptolisina S, lábil y
estable frente al oxígeno respectivamente, pueden lisar eritrocitos humanos y de
otras especies así como las membranas celulares de los PMNS, plaquetas y otras
células. La estreptolisina O es antigénica; es decir, estimula al paciente infectado
la producción de anticuerpos, las Antiestreptolisinas, que determinadas en el
laboratorio pueden ser de utilidad para diagnosticar infecciones por este
microorganismo.
DESARROLLO
1.- Extraer una muestra de sangre del paciente, recolectándola en un tubo seco
(sin anticoagulante) y una vez bien coagulada la sangre, centrifugar para separar
el suero. Es importante que evites que se hemolice la muestra.
2.- Obtener una muestra de sangre con anticoagulante (EDTA) y preparar la
suspensión de glóbulos rojos lavados al 5% en sol. Amortiguadora.
La sangre humana y la del conejo son igualmente satisfactorias. Una cantidad
apropiada de sangre (desfibrinada o con anticoagulante) se centrifuga a 2000 rpm
durante 5 min., el sobrenadante es descartado y el paquete de glóbulos se lava
agregando solución salina al 0.85 %, centrifugándose nuevamente.
22
Este procedimiento es repetido 3 veces, debiendo ser claro el sobrenadante en el
último lavado. Lo contrario indicaría que los glóbulos rojos están frágiles y no
deben ser usados. Los glóbulos rojos se suspenden en solución amortiguadora a
una concentración final de 5 %.
3.- La estreptolisina “O” BELI se presenta en forma oxidada que es estable, pero
no es activa
MODO DE ACTIVARLA:
a) Se reconstituye con agua destilada con el volumen indicado en la etiqueta
del frasco.
b) Para cada 5 ml. De estreptolisina se adiciona el hidrosulfito de sodio
contenido en uno de los tubos capilares que se adjuntan.
c) Se agita por inversión hasta que se disuelva, encontrándose ahora en su
forma activa. Una vez añadida el hidrosulfito de sodio la estreptolisina debe ser
empleada se inmediato, ya que al reoxidarse esta se inactiva. La estreptolisina
reconstituida mientras no sea reducida puede conservarse en congelación sin que
su potencia se altere por periodos hasta de un mes.
4.- Las diluciones del suero problema y la suspensión de glóbulos rojos deben ser
preparadas con solución amortiguadora de pH 6.5-6.7.
La solución amortiguadora puede prepararse disolviendo 7.4 grs. de NaCl, 3.7 grs.
De KH2PO4 y 1.81 grs. De Na2HPO4 en 1000 ml de agua destilada ajustándose el
pH a 6.5-6.7 con solución de NaOH 0.1 N.
23
Volumen de 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.0 0.5
estreptolisina en ml
AGITAR E INCUBAR A 37º C DURANTE 15 MINUTOS
Volumen de la 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
suspensión de
glóbulos rojos en ml.
AGITAR E INCUBAR A37º C DURANTE 45 MIN TENIENDO
CUIDADO DE AGITAR LOS TUBOS DURANTE ESTE TIEMPO CADA 15
MINUTOS. CENTRIFUGAR LOS TUBOS DURANTE 1 MINUTO A 1500 RPM
Titulo en unidades 12 50 100 125 166 250 333 500 625 833 1250 2500
Todd
CUESTIONARIO
2.- Explica ¿por qué cuando se requiere aislar estreptococo pyogenes β-hemolítico
en agar sangre, es necesario ranurar el medio?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
24
3.- Explica ¿en qué consiste la enfermedad de la fiebre reumática y cuáles pueden
ser sus complicaciones si no se controla?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones:______________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
____________________________
Vo.Bo. del maestro
25
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos
Práctica no. 7
MATERIAL:
Un equipo de Reumaclin de sanofi o similar que contiene los siguientes reactivos:
REACTIVOS:
1 Reactivo de látex sensibilizado (almacenar a Temp. De +2 a +8º
C)
2 Frascos con 60 ml de solución amortiguadora
1 Frasco con suero control positivo
1 Frasco con reactivo control negativo
Laminillas con 3 áreas marcadas, con fondo negro para realizar la prueba.
Aplicadores de madera
Jeringa, torundas con alcohol y torniquete
Tubo rojo o con gel para la toma de sangre.
Rotor
Reloj o cronómetro
INTRODUCCIÓN
FACTOR REUMATOIDE
26
hematíes, látex, bentonita, etc. A las que se ha fijado una capa de globulina
gamma
No es un análisis específico de esta enfermedad, aparece positivo en el 80% de
los pacientes con artritis reumatoide, pero puede aparecer negativo. Inclusive
puede aparecer positivo en otras enfermedades no relacionadas (Lupus
Eritematoso Sistémico, Leucemia, Síndrome Nefrótico etc.) En personas de la
tercera edad pueden aparecer niveles elevados sin repercusión clínica.
DESARROLLO
INTERPRETACION
CUESTIONARIO
27
2. ¿Por qué no es aconsejable trabajar con sueros con alto contenido de lípidos, o
que el plasma tenga fibrina?
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
CONCLUSIONES:___________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Fecha de realización:_______________________________
____________________________
Vo.Bo. del maestro
28
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos
Práctica no. 8
MATERIAL:
Laminillas con 3 áreas marcadas, con fondo negro para realizar la prueba.
Aplicadores de madera
Jeringa, torundas con alcohol y torniquete
Tubo rojo o con gel para la toma de sangre.
Rotor
Reloj o cronómetro
Centrífuga
Pipeta pasteur
Pipetas graduadas de 5 ml
Pipetas pistón de 100 y 500 micro litros
Perilla de tres vías
INTRODUCCIÓN
29
Si se trata la enfermedad con aspirina o antiinflamatorios desaparece su
elevación.
PROCEDIMIENTO
PRUEBA CUALITATIVA
1. Extraiga sangre sin anticoagulante, Centrifuga durante 5 minutos a 2000
rpm y separe el suero.
2. Diluya el suero a probar (1:40) con solución salina amortiguadora: 2 gotas
(0.1 ml) del suero en 3.9 ml de solución salina amortiguadora.
3. Coloque una gota de la solución anterior en una de las divisiones de la
placa de vidrio, en las otras áreas coloca una gota de suero control negativo
y suero control positivo.
4. Añada una gota de látex anti proteína C reactiva a cada una de las
muestras.
5. Oscile suavemente la placa durante 2 minutos y observe si se presenta
aglutinación macroscópica.
INTERPRETACION
PRUEBA CUANTITATIVA:
1. Prepare diluciones del suero problema en solución salina de la siguiente
manera:
Coloque 5 tubos de ensayo en una gradilla, deposite 0.5 ml de solución
salina en cada uno de los tubos.
Añada0.5 ml del suero diluido1:40 (ver prueba cualitativo) al primer tubo.
mezcle bien y transfiera 0.5 ml de la dilución anterior al segundo tubo.
Continúe efectuando la misma operación hasta terminar con el tubo No.5.
TUBO 1 1/80
2 1/160
30
3 1/320
4 1/640
5 1/1280
INTERPRETACION
La dilución más elevada del suero que muestre aglutinación visible, se considera
como el titulo de proteína C reactiva en el suero plasma.
CUESTIONARIO
1.- ¿Para qué se realiza la determinación de la proteína C reactiva?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
CONCLUSIONES:___________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
____________________________
Vo.Bo. del maestro
31
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos
Práctica no. 9
MATERIAL:
INTRODUCCIÓN
La técnica comprende:
32
1. - Reacción de Widal para diagnóstico de la fiebre tifoidea, entérica y ondulante.
La reacción mide el título de anticuerpos (aglutininas) en el suero contra una
suspensión de antígenos conocidos de Salmonella typi, S.paratyphi A y
S.paratyphi B.
3.- Reacción de Weil-Felix para el tifo. Las especies de Rickettsias que causan tifo,
tienen componentes antigénicos idénticos a Proteus (cepas OX-19, OX-2 y OX-
K). En esta prueba se utilizan antígenos de Proteus para diagnóstico de tifo.
PROCEDIMIENTO
1. Extraiga sangre sin anticoagulante y una vez que se coagule bien,
centrifugar 5 minutos a 3000 rev/ minuto.
2. Con ayuda de una pipeta pasteur transfiera el suero a un tubo limpio y
procede de la siguiente manera:
33
el resultado final de cada prueba. Recuerda verificar la aglutinación al
microscopio con objetivo seco débil.
CUESTIONARIO
34
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
CONCLUSIONES:___________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Fecha de realización:_______________________________
____________________________
Vo.Bo. del maestro
35
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos
Práctica no. 10
MATERIAL:
Asa bacteriológica Mechero Fisher
Estufa de incubación a 37ºC
Agares estériles de SS, EMB, Mc Conkey,
Caldo tetrationato, agar sulfito bismuto
Agar verde brillante.
Una muestra de heces recolectada en frasco estéril
Hisopos estériles
INTRODUCCIÓN
Las Enterobacterias representan la mayor parte de la flora microbiana del tracto
intestinal del hombre. En ella se incluyen gérmenes comensales (Proteus y bacilos
coliformes), así como patógenos del género Salmonella y Shigella. El vibrión
colérico puede ser aislado de casos de cólera.
Durante las infecciones entéricas, cuando se presentan patógenos tales como
Salmonella y Shigella, el bacteriólogo debe distinguir entre los habitantes normales
del intestino y los agentes etiológicos de enfermedad.
Es importante destacar que las bacterias intestinales toman parte en los procesos
digestivos tanto del hombre como de los animales. Ellos ayudan a la síntesis de
vitaminas del complejo B y de la vitamina K.
La materia fecal evacuada debe ser reciente y deben cultivarse lo más pronto
posible después de haber sido recolectada. Las muestras deberán obtenerse al
inicio del cuadro clínico, antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano.
Las muestras de heces se pueden tomar directamente en un frasco limpio de boca
ancha y con tapa hermética, de preferencia estéril. Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a realizar el aislamiento, no es necesario usar
medio de transporte y hay que sembrar de inmediato.
En estudios de campo o cuando el laboratorio no esté cercano, la muestra se toma
con un hisopo, el cual debe quedar bien impregnado de materia fecal. El hisopo se
coloca en un medio de transporte como el Cary-blair.
PROCEDIMIENTO
1. Introducir un hisopo estéril en varios puntos de la muestra.
2. Descargar la muestra en un área pequeña de los medios de cultivo: SS, Mc
Conkey y EMB y realizar el estriado.
3. Incubar las cajas a 37ºC durante 24 o 48 horas
4. Observar las características morfológicas de las colonias desarrolladas
indicando si existen cambios en el medio, pigmentos en la colonia etc.
36
5. Tratar de identificar si existe crecimiento de Salmonella o Shigella que se
manifiestan como colonias de color blanco en Mc Conkey e incoloras en
EMB.
6. Al mismo tiempo que las placas, con la muestra fecal se inocula un medio
de enriquecimiento como el caldo tetrationato, colocando el hisopo
impregnado con la muestra en el caldo al cual se le agregó previamente
0.2 ml de yodo por gramo de materia fecal.
7. Incubar este medio de enriquecimiento por 12 o 18 horas a 37ºC
8. A partir del caldo tetrationato se siembran placas con medios inhibitorios
como el agar verde brillante y el agar sulfito de bismuto, este último si se
está buscando S. typhi. Después de incubar a 37ºC durante 24 horas la
placa de verde brillante y 48 horas la de sulfito bismuto, se revisan
cuidadosamente en busca de colonias sospechosas. En el verde brillante
Salmonella crece como colonias rojas y en sulfito de bismuto como colonias
negras.
9. Para mayor seguridad en la identificación de Enterobacterias es necesario
realizar pruebas bioquímicas a las cepas aisladas en los medios de cultivo.
Las más comunes son IMVIC
Agar SS
Agar sulfito
bismuto
Agar verde
brillante
37
CUESTIONARIO
1.- ¿Cuáles son las principales bacterias patógenas que pueden ser aisladas por
medio del coprocultivo? ¿Qué enfermedades producen cada una de éstas?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
CONCLUSIONES:___________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Fecha de realización:_______________________________
____________________________
Vo. Bo. del maestro
38
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no. 11
MATERIAL:
Caldo triptófano (MIO o SIM)
Reactivo de Kovac Reactivo de Ehrlich
Cepa reciente del organismo en estudio.
Caldo RM/VP Indicador de pH de rojo de metilo
Medio de Citrato Simmons Cloroformo
Reactivo de alfa-naftol al 5% KOH al 40%
Tubos de ensaye de 13x100 Pipetas graduadas de 5 ml
Pipetas pasteur Incubadora
INTRODUCCIÓN
El indol, es un bencilpirrol, es uno de los productos de degradación metabólica del
aminoácido triptófano. Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son
capaces de hidrolizar y desaminar el triptófano con producción de indol, ácido
pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para
la identificación de muchas especies de microorganismos, siendo especialmente
útil para diferenciar Escherichia coli (positiva) de miembros del grupo Klebsiella-
Enterobacter (la mayoría negativos).
La prueba de indol está basada en la formación de un complejo de color rojo
cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído.
Este es el principio activo de los reactivos de Kovac y ehrlich. Se debe utilizar un
medio rico en triptófano. En la práctica se emplean medios combinados tales como
sulfuro-indol-movilidad (SIM), movilidad-indol-ornitina (MIO) o indol-nitrato.
39
La reacción de Voges-proskauer: el ácido pirúvico, componente fundamental
formado en la degradación fermentativa de la glucosa, es metabolizado luego a
través de varias vías, de acuerdo con los sistemas enzimáticos que poseen las
diferentes bacterias.
Una de dichas vías lleva a la producción de acetoína (acetilmetilcarbinol), un
subproducto de reacción neutra. Los organismos tales como los miembros del
grupo Klebsiella-Enterobacter producen acetoína como principal subproducto del
metabolismo de la glucosa y forman cantidades menores de “ácidos mixtos”.
En presencia de oxígeno atmosférico y de hidróxido de potasio al 40%, la acetoína
se convierte en diacetil y el alfa-naftol actúa como catalizador para revelar un
complejo color rojo.
Citrato: la utilización de citrato por una bacteria se detecta en un medio con citrato
mediante la formación de subproductos alcalinos. El medio incluye citrato de
sodio, un anión como única fuente de carbono y fosfato de amonio como única
fuente de nitrógeno.
Las bacterias que pueden utilizar citrato también pueden extraer nitrógeno de la
+
sal de amonio, con producción de amoníaco (NH3 ) alcalinizando el medio por
conversión del amoniaco en hidróxido de amonio (NH4OH). El azul de bromotimol,
amarillo a pH menor a 6 y azul a pH mayor de 7.6 es el indicador.
DESARROLLO
INTERPRETACIÓN
El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo (o en
la capa de cloroformo) segundos después de añadir el reactivo indica la presencia
de indol y una prueba positiva.
40
INTERPRETACIÓN: El desarrollo de un color rojo estable en la superficie del
medio indica que la producción de ácido es suficiente como para bajar el pH a 4.4
y es una prueba positiva. Dado que otros organismos pueden producir cantidades
menores de ácido a partir del sustrato, es posible el desarrollo de un color naranja
intermedio entre el amarillo y el rojo. Esto no indica una prueba positiva.
CUESTIONARIO
1. ¿Por qué es importante que las cepas de los organismos en estudio sean
recientes para estas pruebas?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
41
2.- ¿En la prueba de Indol, por qué utilizas cloroformo cuando usas el reactivo de
Ehrlich?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- ¿Por qué se recomienda la utilización de controles para cada una de las
pruebas?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones:______________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Fecha de realización:______________________________________
____________________________
Vo.Bo. del maestro
42
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no.12
MATERIAL: SUSTANCIAS:
Muestra de orina tomada en frasco estéril
Asa bacteriológica Agar EMB
Porta objetos Agar sangre
Cubre objetos Agar Mc Conkey
Centrífuga Agar Salado manitol
Microscopio Agar nutritivo
Incubadora
Mechero Fisher
Cajas de Petri estériles
Pipetas de 1ml estériles
Tubos de ensayo conteniendo 9 ml de agua peptonada, estériles
INTRODUCCIÓN
Las infecciones urinarias pertenecen al grupo de los procesos infecciosos más
frecuentes de la patología médica. Su importancia radica en el daño que pueden
ocasionar sobre la función renal.
Las vías urinarias normalmente son estériles por encima del nivel de la uretra
distal. Los microorganismos que infectan las vías urinarias altas son comensales
localizados en áreas vecinas. En esta colonización intervienen varios factores
predisponentes que pueden ser de origen local o general. Los primeros incluyen la
contaminación fecal del meato urinario, el cateterismo, la patología urinaria
congénita o adquirida y el reflujo vesical. Entre los factores generales están la
diabetes mellitus, el embarazo y la terapia con fármacos de amplio espectro.
Las bacterias que con mayor frecuencia se aíslan de la orina de pacientes
ambulatorios con infección urinaria son: Escherichia coli, Staphylococcus
saprophyticcus, Proteus sp, Klebsiella sp, Enterococcus faecalis etc.
Para lograr que el cultivo de orina realmente sea veraz, requiere que las muestras
sean obtenidas en condiciones óptimas.
PROCEDIMIENTO
El Urocultivo incluye:
1) Aislamiento e identificación de microorganismos
2) Cuenta viable
3) Antibiograma para los gérmenes patógenos aislados e identificados
43
1) Aislamiento e identificación de los microorganismos
2) Cuenta viable
a) Realizar diluciones de la orina de la siguiente manera:
Colocar 5 tubos estériles conteniendo 9 ml. de agua
peptonada. La cantidad de tubos utilizada dependerá
de la carga bacteriana observada en el examen
microscópico del sedimento urinario
Tomar 1ml. de la orina problema con una pipeta estéril,
y agregarlo al tubo No.1. (dil. 1:10), agitar el tubo y
tomar de este 1ml. para pasarlo al tubo No.2, (dil 1:100)
realizar el mismo paso las veces que sea necesario
rotulando el tubo con la dilución correspondiente.
Recuerda que el número de diluciones dependerá de la
carga bacteriana.
44
f) Reportar la cuenta bacteriana de la siguiente manera:
CUESTIONARIO
1.- Realiza un diagrama de flujo que indique los pasos a seguir para el Urocultivo:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- ¿Cuáles son las principales bacterias que pueden presentarse infectando las
vías urinarias? ¿Por qué?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- Explica detalladamente las técnicas de recolección de muestras de orinas para
Urocultivo, tanto en adultos como en lactantes.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
CONCLUSIONES:___________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Fecha de realización:_______________________________
___________________________
Vo.Bo. del maestro
45
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no.13
MATERIAL:
Aplicadores de madera Colorante de carbolfucsina o
Mechero Fisher Fucsina fenicada
Papel de estraza Alcohol ácido
Portaobjetos nuevos Colorante de azul de metileno
Muestra de expectoración Fenol
INTRODUCCIÓN
La propiedad tintorial que presentan numerosas bacterias de resistir la
decoloración con ácidos fuertes, después de teñirlas con soluciones de fucsina
caliente, permite reunirlas bajo la denominación general de bacterias
acidorresistentes o alcohol acidorresistentes. Es característica del género
Mycobacterium, junto con su tamaño y forma característica, constituyen una ayuda
valiosa para la detección temprana de infecciones y para el control del tratamiento
de enfermedades micobacterianas. La presencia de bacilos ácido-alcohol
resistentes en el esputo, en combinación con antecedentes de tos, pérdida de
peso y una radiografía de tórax que muestra un infiltrado pulmonar, todavía es
evidencia presuntiva de tuberculosis.
Los extendidos con esta coloración también son útiles para seguir la respuesta del
paciente al tratamiento. Después de comenzar con las drogas
antimicobacterianas, los cultivos se tornan negativos antes que los extendidos, lo
que sugiere que los microorganismos no son capaces de replicarse pero pueden
unirse al colorante. Con tratamiento continuado, más microorganismos son
destruidos y muy pocos permanecen de modo que evaluando el número de
microorganismos en el esputo durante el tratamiento se puede tener una medida
objetiva de la respuesta. Si después de iniciado el tratamiento el número de
microorganismos no disminuyera, deberá considerarse la posibilidad de
resistencia a la droga, caso en el cual habrá que realizar cultivos adicionales y
estudios de susceptibilidad.
46
PROCEDIMIENTO
1.- Colocar papel de estraza sobre la mesa para trabajar. Colocar un frasco con
fenol al 5% para desechar aplicadores usados.
2.- Usar guantes y cubre bocas
3.- Prender el mechero Fisher y tomar el frasco que contiene la muestra. Abrir el
frasco y pasar la boca por la llama del mechero. Es importante trabajar siempre
atrás de la llama del mechero.
4.- Romper la punta de un aplicador de madera y con la punta aguzada tomar
muestra del esputo.
5.- Descargar la muestra sobre un portaobjetos nuevo, realizando un frotis cuyas
dimensiones sean de 20 mm de largo por 10 mm de ancho. Preferentemente en el
centro del portaobjetos.
6.- Desechar el aplicador contaminado en el frasco con fenol al 5%.
Recuerda la importancia de trabajar por atrás del mechero.
7.- Dejar secar el frotis al aire y fijar con la llama del mechero.
Proceder a teñir con la técnica de Ziehl-Neelsen de acuerdo al siguiente protocolo:
a. Cubrir el frotis con fucsina fenicada y calentar 5 minutos a emisión de
vapores con ayuda de hisopos de algodón y gasa con alcohol.
b. Agregar más colorante si este empieza a secarse. Es importante evitar la
ebullición
c. En forma inclinada lavar con agua destilada el frotis y decolorar agregando
alcohol ácido de 1 a 2 minutos, dependiendo del grueso del frotis.
d. Lavar nuevamente, y quitar el exceso de agua
e. Colorear con azul de metileno por 1 minuto.
f. Volver a lavar y dejar secar a temperatura ambiente.
g. Leer con objetivo de inmersión, en el sentido de las manecillas del reloj 100
campos y contar los BAAR por campo.
h. Los bacilos aparecen como bastoncillos delgados, ligeramente curvos,
teñidos de rojo, generalmente con gránulos más coloreados en su interior,
aislados, en parejas o en grupos, sobre el azul claro de la tinción de
contraste.
REPORTE DE RESULTADOS
NEGATIVO No se encontraron bacilos ácido-alcohol
resistentes en 100 campos observados
1-9 BAAR Informar el número de bacilos observados
en 100 campos
POSITIVO (+) Menos de 1 bacilo por campo en promedio,
en 100 campos observados
POSITIVO (++) MÀS DE 100 De 1 a 10 bacilos por campo en promedio,
en 50 campos observados
POSITIVO (+++) Más de 10 bacilos por campo en 20 campos
observados
47
CUESTIONARIO
Conclusiones.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Fecha de realización:__________________________________
___________________
Vo.Bo. del maestro
48
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no.14
MATERIAL:
INTRODUCCIÓN
El paludismo, también conocido como malaria, es la principal enfermedad
parasitaria causante de anemia en el hombre, la más frecuente dentro de las
enfermedades transmitidas por artrópodos y un constante flagelo del hombre en su
historia. En México, principalmente el agente etiológico del paludismo es P. vivax y
alrededor del 1% es causada por P. falciparum.
El diagnóstico por el laboratorio no es una tarea fácil, ya que las parasitemias que
se alcanzan son pobres, lo que dificulta su hallazgo. Sin embargo, existen
metodologías como la gota gruesa que favorecen su hallazgo. La diferenciación de
las dos especies más frecuentes en México se basa en la presencia de
granulaciones, alteraciones al eritrocito parasitado y características morfológicas.
ANTECEDENTES HISTÓRICOS
49
enfermos de malaria.
El parásito productor del paludismo fue descubierto con la ayuda del microscopio
por el médico francés Charles Louis Alphonse Laverán en el hospital militar de
Constantine (Argelia) el día 6 de noviembre de 1880. Al principio creyó que se
trataba de un alga a la que llamó Oscillaria malariae, sin embargo rectificó luego
denominando al parásito hematozoario.
Anopheles
PROCEDIMIENTO
50
2.- Para la gota gruesa se recogen 3 o 4 gotas sobre un portaobjetos y con la
esquina de otro de unen en movimientos rápidos, extendiéndose en una capa
gruesa y uniforme; hasta formar una gota gruesa de 1 cm de lado o de diámetro.
La sangre no debe ser excesivamente revuelta, es suficiente con 3 a 6
movimientos. De preferencia, realizar el homogeneizado de la muestra en una sola
dirección, en forma concéntrica (de adentro hacia fuera o viceversa).
3.- Secar la lámina con la gota gruesa en una superficie plana y protegida de polvo,
calor e insectos.
PROCEDIMIENTO
a. Coloque las varillas de vidrio sobre un lavatorio o recipiente de tal forma que
facilite la eliminación de los líquidos que se usarán en la coloración y coloque las
láminas que debe colorear sobre las varillas, espaciándola de tal forma que pueda
manipularlas con seguridad.
51
d. Acomode las láminas en una gradilla, de modo que queden inclinadas y con la
gota gruesa hacia abajo. Deje secar las láminas en esta posición.
52
RECORRIDO DEL FROTIS DURANTE SU OBSERVACIÓN AL
MICROSCOPIO
53
CUESTIONARIO
1.- ¿Además de el diagnostico del Plasmodium, qué otros parásitos pueden ser
diagnosticados con estas técnicas? Indica además del parásito, la enfermedad
que producen.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- ¿Qué ventajas y desventajas tienen las técnicas de gota gruesa y frotis
delgado para el diagnostico de parásitos hemáticos? Explica.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- ¿Por qué se sugiere utilizar agua tamponada con pH 7.2 en vez de agua de la
llave al preparar la dilución del colorante de Giemsa y lavar las preparaciones al
teñirlas?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
4.- ¿Qué otras tinciones pueden ser utilizadas con el mismo fin?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
54
Nombre del alumno:___________________________________6to sem.gpo.____
Fecha de realización:__________________________________
_________________________________
Vo.Bo. del maestro
55
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no.15
MATERIAL:
Aplicadores de madera Papel de estraza
Portaobjetos cubreobjetos
Solución de lugol tubos de ensaye de 13x100
Microscopio sol. Salina fisiológica
INTRODUCCIÓN
Un examen Coproparasitoscópico es el estudio de la materia fecal para la
búsqueda e identificación de formas parasitarias. Los métodos
Coproparasitoscópico, se pueden dividir en: cualitativos y cuantitativos; los
primeros se usan para saber que formas parasitarias existen y los segundos en
qué numero se encuentran; estos últimos se utilizan sobre todo en las helmintiasis
Los métodos cualitativos pueden ser de dos tipos: los métodos de concentración y
el examen directo. El examen directo es el más antiguo que se conoce por los
datos históricos que se tienen en relación a los primeros microscopios,
probablemente Antonio Van Leewenhoek en el siglo XVIII, fue de los primeros en
utilizarlo, al encontrar y observar en sus propias heces fecales trofozoítos de
Giardia lamblia.
PROCEDIMIENTO
1. En un portaobjetos se colocan, separadamente (en cada extremo), una gota
de solución salina fisiológica y otra de lugol.
56
3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos.
4. Se coloca el cubreobjetos.
57
58
59
60
CUESTIONARIO
1. Explica que son los protozoarios, estadios que presentan y cuáles son las
especies patógenas más comunes para el hombre
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
3. ¿Por qué se dice que la preparación con solución salina fisiológica sirve
para identificar trofozoítos de los parásitos?
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
4. ¿Además del intestino, donde más pueden los parásitos infectar al hombre?
Da algunos ejemplos
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
61
Conclusiones.
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
Fecha de realización:__________________________________
___________________
Vo.Bo. del maestro
62
Universidad de Colima
Laboratorio de Análisis Clínicos III
Práctica no.16
MATERIAL:
Aplicadores de madera Papel de estraza
Portaobjetos cubreobjetos
Solución de lugol tubos de ensaye de 13x100
Microscopio agua de la llave
Asa bacteriológica vaso de precipitados de 100 ml
Gasas gradilla
Centrifuga mechero bunsen o Fisher
Embudo densímetro de 1.100 a 1.200
Sulfato de zinc con densidad 1.18 (aprox. 33%)
INTRODUCCIÓN
Desde 1938 cuando fue descrito este método, fue bien recibido, es uno de
los más utilizados en todo el mundo. Es parecido al que describió Lane en 1924,
aunque él utilizó solución saturada de cloruro de sodio, como este método es poco
eficaz para quistes; se utiliza más el de Faust que es muy eficaz para estas formas
parasitarias. La técnica de Faust, hace una buena concentración de quistes,
huevos y larvas; es la técnica preferida por la generalidad de los laboratorios. Las
formas parasitarias son encontradas con facilidad pues las preparaciones quedan
con pocos artefactos.
63
La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una
solución acuosa de sulfato Zinc al 33% con una densidad al 1.180 g/ml. El agua
utilizada diluye y lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los
detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada
película la superficie del líquido centrifugado con los huevos livianos de algunos
helmintos.
PROCEDIMIENTO
1) Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una suspensión
homogénea con 1 a 2 g de materia fecal en 10 ml de agua destilada.
10) Para ayudarte a identificar a los parásitos que puedas encontrar; recurre a
los dibujos de los diversos parásitos mostrados en las gráficas de la
practica anterior.
64
CUESTIONARIO
1.- ¿Por qué es importante cuidar la preparación del sulfato de zinc y checar su
densidad cada vez que se utilice?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.- ¿Esta técnica de flotación me permite ver a todos los huevos de helmintos? Y
a los trofozoítos de amibas? ¿Por qué?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3.- ¿En todo examen de heces es importante realizar una evaluación física de la
muestra. ¿Qué fin tiene este?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Conclusiones:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
___________________
Vo.Bo. del maestro
65
Manual de Prácticas de laboratorio de Análisis Clínicos III, fue aprobado por la
Academia Estatal de Análisis Clínicos III, con la participación de los profesores
titulares de la materia: QFB. Isabel Ruiz Sánchez, QFB. Emilia Elizabeth Bolio
Salazar, QFB. Myrna Fátima Ramírez García y QFB. Alberto Rodríguez Moya.
Supervisado por la Licda. Silvia Luz López Alcaraz y Licda. Laura Araceli Jiménez
Cobián. Vigente a partir de febrero de 2009.
66