Práctica N°1

Tinción y Observación de Células Sanguíneas

OBJETIVOS

 Introducir a los alumnos a las técnicas básicas en inmunología

 Utilizar diferentes métodos de tinción para hacer un frotis sanguíneo.
 Identificar las diferentes células sanguíneas que circulan en el plasma.

RESULTADOS

Hacer un esquema de los pasos seguidos para desarrollar la práctica y sacar sus
conclusiones de los resultados obtenidos
Se observó gráficamente las estructuras de las células que se iban a observar en el
microscopio al momento de realizar el recuento:

En la práctica se realizó tres tipos de tinciones y se llevaron al microscopio y se

observó:

Tabla 1: Recuento de células sanguíneas

Eosina Wright Giemsa
Linfocitos 10 9 15
Monocitos 8 8 5
Eosinófilos
Basófilos 1 2
Neutrófilos 17 12 12

Las células sanguíneas de mayor proporción son los neutrófilos, luego los linfocitos, los
monocitos y por último los basófilos. No se encontró ningún eosinófilo en las tres
tinciones realizadas, esto puede ser debido a la menor proporción de estos en la sangre,
a una mala tinción, a una búsqueda muy rápida en el microscopio y al uso incorrecto de
este último.

Estos resultados confirman lo que se indica teóricamente, las células sanguíneas se

encuentran en las siguientes proporciones:

Neutrófilos 70%
Linfocitos 15% – 40%
Monocitos 4% - 8%
Eosinófilos Menos 4%
Basófilos Menos 1%
También en la práctica se realizó las partes del microscopio:

Cuestionario

1. ¿Qué tipos de células sanguíneas ha observado bajo el microscopio? Haga un

recuento.

Las células que se observó fue: Linfocitos, monocitos, eosinófilos, basófilos,

neutrófilos.
En la siguiente tabla se muestra el recuento.

Eosina Wright Giemsa

Linfocitos 10 9 15
Monocitos 8 8 5
Eosinófilos
Basófilos 1 2
Neutrófilos 17 12 12

2. ¿Como se clasifican los leucocitos?

Según su origen:

Mieloides.
Linfocitos.

Según la presencia de granulaciones:

Granulocitos.
Agranulocitos.
 Según la forma de su núcleo:

Polimorfonucleares.
Mononucleares.

Según su función:

Fagocitos.
Inmunocitos.

3. ¿Cuáles son los valores normales de leucocitos en sangre? Cuales son más
abundantes? ¿Por qué?

Recién nacido 10 a 26 mil/mm3

A los 3 meses 6 a 18 mil/mm3
Al año de edad 8 a 16 mil/mm3
Entre los 3 y 5 años 10 a 14 mil/mm3
De los 5 a los 15 años 5,5 a 12 mil/mm3
Hombre adulto 4,5 a 10 mil/mm3
Mujer adulta 4,5 a 10 mil/mm3

Se observa una mayor cantidad de leucocitos en el recién nacido, quizás por la

inmunidad transferida en la leche materna.

4. Que tinciones se pueden utilizar para analizar células sanguíneas? Describa

brevemente sus diferencias en composición y cómo actúan sobre las células.

TINCIÓN GIEMSA.

Las tinciones hematológicas tipo Romanowsky utilizan azul de metileno y sus

productos de oxidación (azur A, azur B y azur C) como colorantes básicos,
combinándolos con la eosina como colorante ácido.
De este modo, obtenemos una tinción diferencial, es decir, una tinción que es capaz de
discriminar entre las distintas estructuras celulares según se tiñan éstas con el colorante
ácido, con el básico o con la mezcla de ambos.
Según la proporción de azul de metileno y de eosina que compongan el colorante
tendremos distintos méto dos de tinción. Entre ellos, los más conocidos son el método
de Giemsa,el de Wright,el de Leishmany el pan óptico de Pappenheim.

TINCIÓN DE WRIGHT.

El colorante utilizado es una solución de eosina y una mezcla de azul de metileno (del
50 al 75%) y azur B (del 10 al 25%) junto con otros derivados del alcohol metílico.
Dada la presencia de metanol en la composición del colorante, no es necesario un paso
previo de fijación antes de la coloración.
Sólo si se van a guardar las extensiones sin teñir de un día para otro precederemos a su
fijación para evitar el deterioro del frotis.
Tinción hematoxilina-eosina

El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que tiñe estructuras

acidas (basofilas) en tonos azul y púrpura, y el uso de eosina que tiñe componentes
basicos (acidofilos) en tonos de colorrosa.

5. ¿Cuáles son las posibles causas de haber obtenido una mala tinción celular?

• Un pH bajo del colorante.

• Un tiempo de coloración insuficiente.
• Un lavado excesivamente prolongado.
• Si la tinción es demasiado azul, posiblemente, esto esté causado por: un grosor
excesivo de la extensión, o un pH alto del colorante.
• Una coloración excesivamente prolongada.
• Un lavado insuficiente.
• Si tras la tinción aparecen artefactos o/y precipitados en la extensión,
probablemente esto se deba a:
• Un empleo de portaobjetos sucios.
• Una falta de filtración del colorante.
• Una coloración excesivamente prolongada.
• Un secado del colorante durante la tinción.
• Un lavado insuficiente.