Elemente Mit Tiefgang

Wissenschaftszentrum Weihenstephan für Ernährung, Landnutzung und Umwelt
Untersuchungen zum anaeroben Abbauprozess

ausgewählter Abfallsubstrate mit Hilfe spezieller
Mikroorganismen und Enzyme
Nelson Caballero-Arzápalo
Vollständiger Abdruck der von der Fakultät Wissenschaftszentrum Weihenstephan

für Ernährung, Landnutzung und Umwelt der Technischen Universität München zur
Erlangung des akademischen Grades eines
Doktor-Ingenieurs
genehmigten Dissertation.
Vorsitzender: Univ.-Prof. Dr. H. Briesen

Prüfer der Dissertation: 1. Univ.-Prof. Dr. R. Meyer-Pittroff (i. R.)
2. Univ.-Prof. Dr. M. Faulstich
(Technische Hochschule Clausthal)
Die Dissertation wurde am 10.09.2014 bei der Technischen Universität München

eingereicht und durch die Fakultät Wissenschaftszentrum Weihenstephan für
Ernährung, Landnutzung und Umwelt am 04.02.2015 angenommen.
Dem Herrn Jesus und meinen Eltern Alejandro Caballero González und
Nelly Arzápalo Coronado gewidmet
Inhaltsverzeichnis
1 Einführung und Problemstellung .......................................8
2 Stand von Wissenschaft und Technik .............................11
2.1 Grundlagen des anaeroben Abbauprozesses .............................................. 11
2.1.1 Einfluss von Prozessparametern ................................................................. 16
2.1.1.1 Einfluss der Temperatur ............................................................................... 17
2.1.1.2 Einfluss der Substratzusammensetzung ...................................................... 21
2.1.1.3 Einfluss der Verweilzeit und der Raumbelastung ......................................... 26
2.1.1.4 Einfluss des pH-Werts ................................................................................. 28
2.1.1.5 Einfluss der Durchmischung ........................................................................ 29
2.1.1.6 Einfluss hemmender und toxischer Substanzen .......................................... 30
2.1.2 Beteiligte obligat und fakultativ anaerobe Mikroorganismen ........................ 45
2.2 Anaerob-biologische Abbaubarkeit der organischen Substanz zur
Bestimmung des Biogaspotentials ............................................................... 47
2.3 Einfluss von Enzymen .................................................................................. 48
2.3.1 Grundlagen von enzymatischen Reaktionen ............................................... 48
2.3.2 Einfluss auf Kohlenhydrate .......................................................................... 58
2.3.3 Einfluss auf Proteine .................................................................................... 61
2.3.4 Einfluss auf Fette ......................................................................................... 62
2.3.5 Die Protease Papain .................................................................................... 65
2.3.6 Inhibitoren für Enzyme ................................................................................. 69
2.4 Bacillus Spezies ........................................................................................... 71
2.5 Mikroorganismen im Pansensaft .................................................................. 75
2.6 Ballaststoffgehalte in Fruchten ..................................................................... 79
2.7 Stand der Forschung im Bereich der Fermentation der verwendeten
Substrate ..................................................................................................... 83
3 Anlass der Forschung .......................................................90

4 Aufgabenstellung und Zielsetzung ..................................95
4.1 Allgemeine Zielsetzung ................................................................................ 95
4.2 Spezifische Zielsetzung ............................................................................... 95
5 Hypothesen ........................................................................96
5.1 Reaktoren im Kleinmaßstab ......................................................................... 96
5.2 Reaktoren im Großmaßstab ........................................................................ 97
6 Anwendungsbereich der Ergebnisse ..............................98

7 Verwendete Materialien und Methoden ...........................99
7.1 Allgemeines ................................................................................................. 99
7.2 Verwendete Materialien ............................................................................. 101
7.2.1 Eingesetzte Substrate ................................................................................ 101
7.2.2 Charakterisierung und Nährstoffzusammensetzung der Substrate ............ 103
7.2.3 Verwendete Bioadditive ............................................................................. 107
7.2.4 Verwendete Reaktoren .............................................................................. 110
7.2.4.1 Reaktoren im Kleinmaßstab (Durchstechflaschen) .................................... 110
7.2.4.2 Reaktoren im Großmaßstab ...................................................................... 110
7.3 Verwendete Methoden ............................................................................... 113
7.3.1 Verwendete Methoden bei den Reaktoren im Kleinmaßstab ..................... 113
7.3.1.1 Versuchsanordnung ................................................................................... 113
7.3.1.2 Erstellung der Mischproben in den Durchstechflaschen ............................ 114
7.3.2 Verwendete Methoden bei den Reaktoren im Großmaßstab ..................... 116
7.3.2.1 Versuchsanordnung ................................................................................... 116
7.3.2.2 Beschickungsweise und -grade ................................................................. 117
7.3.2.3 Probenahme .............................................................................................. 117
7.3.2.4 Feldparameter............................................................................................ 118
7.3.3 Verwendete analytische Methoden ............................................................ 118
7.3.4 Verwendete statistische Methoden ............................................................ 120
7.3.4.1 Parametrische Methoden ........................................................................... 121
7.3.4.2 Nichtparametrische Methoden ................................................................... 124
7.3.4.3 Allgemeines zu den Versuchen im Kleinmaßstab ...................................... 126
7.3.4.4 Allgemeines zu den Versuchen im Großmaßstab ...................................... 127
8 Ergebnisse und Diskussion ...........................................129

8.1 Ergebnisse der Versuche im Kleinmaßstab ............................................... 129
8.1.1 Ergebnisse der Versuche mit Papayaabfällen als Substrat ....................... 129
8.1.1.1 Anorganische und organische Prozess- und Bewertungsparameter ......... 129
8.1.1.2 Abbauraten der oTS sowie Biogasmengen und -ausbeuten ...................... 133
8.1.1.3 Ergebnisse der statistischen Analysen der Biogasproduktion der
Vergärungsversuche von Papayaabfällen ohne und mit
Bioadditiveinfluss ....................................................................................... 144
8.1.1.4 Ergebnisse der mikrobiologischen Analysen ............................................. 148
8.1.2 Ergebnisse der Versuche mit Bananenabfällen als Substrat ..................... 151
8.1.2.2 Abbauraten der oTS sowie Biogasmengen und -ausbeuten ...................... 154
Vergärungsversuche von Bananenabfällen ohne und mit
Bioadditiveinfluss ....................................................................................... 163
8.1.2.4 Ergebnisse der mikrobiologischen Analysen ............................................. 168
8.2 Ergebnisse der Versuche im Großmaßstab ............................................... 170
8.2.1 Ergebnisse der Versuche mit Papayaabfällen als Substrat ....................... 171
8.2.1.2 Biogasmengen und –ausbeuten ................................................................ 177
Vergärungsversuche von Papayaabfällen mit Rumensaft ......................... 180
8.2.2 Ergebnisse der Versuche mit Bananenabfällen als Substrat ..................... 182
8.2.2.2 Biogasmengen und –ausbeuten ................................................................ 187
Vergärungsversuche von Bananenabfällen mit Rumensaft ....................... 190
9 Schlussfolgerungen und Empfehlungen ......................192

9.1 Schlussfolgerungen und Empfehlungen in Bezug auf die Prozess-,
Bewertungs- und Hygieneparameter ......................................................... 192
9.1.1 Schlussfolgerungen und Empfehlungen aus den Versuchen im
Kleinmaßstab ............................................................................................. 192
9.1.1.1 Allgemeine Schlussfolgerungen und Empfehlungen bezogen auf die
Prozess- und Bewertungsparameter.......................................................... 192
Hygieneparameter ..................................................................................... 193
Hypothesen ................................................................................................ 193
9.1.1.4 Spezifische Schlussfolgerungen und Empfehlungen aus den
Gärungsversuchen mit Papayaabfällen ..................................................... 193
Gärungsversuchen mit Bananenabfällen ................................................... 194
9.1.2 Schlussfolgerungen und Empfehlungen aus den Versuchen im
Großmaßstab ............................................................................................. 195
Prozess- und Bewertungsparameter.......................................................... 195
statistischen Hypothesen ........................................................................... 196
Gärungsversuchen mit Papayaabfällen und Rumensaft ............................ 196
Gärungsversuchen mit Bananenabfällen und Rumensaft .......................... 197
9.2 Wirtschaftliche Aspekte in Bezug auf eine großtechnische Umsetzung
der Ergebnisse ........................................................................................... 198
10 Zusammenfassung ..........................................................200
11 Summary ..........................................................................205
12 Anhänge ...........................................................................209
12.1 Anhang A: Stand der Produktion von Zitrusfrüchten, Banane und
Papaya in Mexiko....................................................................................... 209
12.2 Anhang B: Ergebnisse der Versuche im Mittelmaßstab ............................. 210
12.3 Anhang C: Weitere Ergebnisse der Versuche im Kleinmaßstab ................ 212
12.3.1 Allgemeine Ergebnisse .............................................................................. 212
12.3.2 Weitere Ergebnisse der Versuche mit Papayaabfällen als Substrat .......... 215
12.3.3 Weitere Ergebnisse der Versuche mit Bananenabfällen als Substrat ........ 216
12.3.4 Ergebnisse der Versuche mit Zitrusmischungsabfällen (Grapefruit,
Orangen, Mandarinen, Limonen) als Substrat ........................................... 217
12.3.5 Ergebnisse der Versuche mit Geflügelbrutabfällen als Substrat ................ 224
12.3.6 Ergebnisse der Versuche mit Hühnermist als Substrat .............................. 231
12.3.7 Ergebnisse der Versuche mit Geflügelschlachtabwasser als Substrat ...... 238
12.3.8 Ergebnisse der Versuche mit Abwasser aus der Geflügelverpackungs-
anlage als Substrat .................................................................................... 242
12.4 Anhang D: Weitere Ergebnisse der Versuche im Großmaßstab ................ 247
12.4.1 Weitere Ergebnisse der Versuche mit Papayas als Substrat ..................... 247
12.4.2 Weitere Ergebnisse der Versuche mit Bananen als Substrat .................... 248
12.4.3 Ergebnisse der Versuche mit Zitrusmischungsabfällen als Substrat.......... 250
12.4.4 Ergebnisse der Versuche mit Abwasser aus der Geflügelverpackungs-
anlage als Substrat .................................................................................... 253
13 Literaturverzeichnis ........................................................256
14 Abbildungsverzeichnis ...................................................273
15 Tabellenverzeichnis ........................................................277
16 Veröffentlichungen und Kongressbeiträge ...................283
17 Danksagung .....................................................................285
Einführung und Problemstellung 8
1 Einführung und Problemstellung
Organische Abfälle aus den anthropogenen Aktivitäten von Landwirtschaft,

Viehhaltung, Industrie, Gewerbe und Haushalten stellen Kontaminationsquellen für
die Umwelt dar, wenn sie unbehandelt und falsch entsorgt werden. Wegen ihres
hohen Gehalts an organischen Stoffen sind sie eine Belastung in kommunalen
Deponien. In Entwicklungs- und Schwellenländern werden diese Abfälle oft an den
Stadträndern oder in der Nähe von Wasserressourcen unsachgemäß entsorgt.
Die o. g. Aktivitäten und die unsachgemäße Entsorgung der organischen Abfälle

verursachen sowohl Emissionen und damit Geruchsbelästigungen als auch
Sickerwässer, die eine potentielle Gefahr für das natürlichen Gleichgewicht
(chemische Elemente, Flora, Fauna etc.) von Boden und Grundwasser darstellen.
Die Viehhaltung ist z. B. die größte anthropogene Methanquelle mit Emissionen von
über 75 Millionen Tonnen pro Jahr. Sie verursacht direkt oder indirekt etwa 37 % des
weltweit von Menschen emittierten Methans (CH4). In Deutschland ist die
Landwirtschaft der zweitgrößte Methanemittent nach der Mineralölindustrie (1).
Vor allem die Emissionen von Methan und Kohlendioxid (CO2) werden für den
Treibhauseffekt und damit für die globale Klimaerwärmung verantwortlich gemacht
(2). CO2 trägt zu ca. 9–26 % (3) zum natürlichen und zu etwa 60 % (4) zum
anthropogenen Treibhauseffekt bei, während CH4 für ca. 4-9 % bzw. rund 20 %
verantwortlich gemacht wird. Für das Klima ist freies, unverbranntes CH4 im
Vergleich zu CO2 in der Atmosphäre sogar ca. 23-mal schädlicher für das Klima (5).
Auf der anderen Seite stellen organische Abfälle eine Energiequelle dar, da sie die
Energie der Sonneneinstrahlung direkt (bei pflanzlichem Material) oder indirekt (bei
tierischem Material) umgewandelt und in Form von Kohlenstoffverbindungen
gespeichert haben.
Außerdem ist der Weltenergiebedarf im Laufe der Jahre gestiegen. Dieser Bedarf
wird derzeit vor allem durch fossile Brennstoffe gedeckt. Dabei werden die bereits
bekannten Umweltverschmutzungen (in Luft, Wasser und Boden), welche ebenso
einen wichtigen Einfluss auf die Klimaveränderung haben, verstärkt.
Gemessen am weltweiten Energiebedarf liegt die statistische Reichweite der fossilen

Brennstoffe bei 42 Jahren für Erdöl, bei 63 Jahren für Erdgas und bei 169 Jahren für
Steinkohle (6). Aufgrund geringer eigener Reserven befinden sich die meisten
Länder in einer energetischen Abhängigkeit von einigen wenigen ressourcenreichen
Ländern.
Eine effiziente und umweltschonende Behandlung und Verwertung organischer

Abfälle sollte daher für den aktiven Umweltschutz eine unabdingbare Aufgabe für alle
Länder sein. Zur Vermeidung einer weiteren Klimaerwärmung bedarf es ausgefeilter,
kostengünstiger und praxistauglicher Methoden zur Reduzierung von Klimagasen.
Andererseits sollten aufgrund der gegenwärtigen und zukünftigen energetischen
Situationen alternative Energiequellen weiter entwickelt und gefördert werden.
Auch im Hinblick auf die Wahrung des natürlichen Gleichgewichtes des Bodens und
des Grundwassers müssen potentielle Gefährdungen schon von Anfang an
vermieden werden.
Die Verwendung und Verwertung von organischen Abfällen als Energieträger würde
einen doppelten Beitrag dazu leisten. Sowohl zur Reduzierung der Kontaminationen
und ihrer Folgen als auch zur Sicherung der zukünftigen Energieversorgung.
Die anaerobe Fermentation wird als eine vielversprechende Alternative zur Nutzung
organischer Stoffe gesehen, bevor sie verbrannt oder kompostiert werden (7), (8).
Der wesentliche Vorteil dieses Prozesses besteht in der Herstellung von Biogas, das
durch Verbrennung zur Wärmeerzeugung und vor allem zur effektiven
Stromerzeugung genutzt werden kann (9), (10), (11). Die anaerobe Fermentation
kann bei unterschiedlichen Temperaturen gefahren werden. Ein Vorteil des Betriebes
bei thermophilen Temperaturen ist die verstärkte Zerstörung von pathogenen
Organismen (12).
Der anaerobe Abbauprozess erfordert aber noch weitere interdisziplinäre
Grundlagenforschung sowie substratspezifische und anwendungsorientierte
Forschung. Denn verschiedene Prozessabläufe sind noch nicht exakt untersucht
worden und beinhalten daher mögliche Verbesserungspotentiale.
Die anaerobe Fermentation von Obst- und Gemüseabfällen und die Vorteile der
thermophilen Temperaturen zur Zerstörung von Krankheitserregern sind bislang
hauptsächlich getrennt untersucht worden. Beide Aspekte wurden bisher noch nicht
in Kombination untersucht, auch kam selten ein anderers Inokulumsmedium als
Faulschlamm zum Einsatz. Zudem beziehen sich viele Fermentationsstudien nur auf
das Verhältnis Biogas- oder Methanausbeute zu der im anaeroben Reaktor
zugegebenen Menge an Trockensubstanz (TS) oder organischer Trockensubstanz
(oTS). Sehr wenige Arbeiten berücksichtigen, in wie weit eine bestimmte
Raumbelastung (kg oTS/(m3 • d)) noch Biogas produzieren kann. Außerdem werden
meist nur Raumbelastungen zwischen 1 bis 5 kg oTS/(m3 • d) betrachtet. Die
Raumbelastung variiert jedoch auch in Abhängigkeit des zu vergärenden Substrats.
Darum ist es wichtig, je nach Substratart die maximal zu verwendende oder
zulässige organische Raumbelastung zu kennen, um Reaktorüberlastungen zu
vermeiden sowie Fütterungsfrequenzen zu definieren, um die erzeugte Biogasmenge
und -qualität zu optimieren.
In der vorliegenden Dissertation wurden mit der genannten Zielsetzung
wissenschaftliche Untersuchungen zum thermophilen anaeroben Abbauprozess
ausgewählter organischer Abfälle aus der Obst-, und Geflügelindustrie in zwei
verschiedenen Maßstäben und unter Verwendung von verschiedenen
Raumbelastungen mit Hilfe spezieller Mikroorganismen und Enzyme als Bioadditive
durchgeführt und analysiert.
Stand von Wissenschaft und Technik 11
2 Stand von Wissenschaft und Technik

2.1 Grundlagen des anaeroben Abbauprozesses
Beim anaeroben Abbauprozess werden unter Ausschluss von Sauerstoff organische

Stoffe durch mikrobiologische Aktivität abgebaut (13). Im Gegensatz zum aeroben
Abbau gewinnen die am anaeroben Abbau beteiligten Organismen nur wenig
Energie. Eine Selbsterwärmung ist wegen des geringen Energieumsatzes kaum
möglich (14).
Organische Stoffe wie Kohlenhydrate, Eiweiße oder Fette werden dadurch erst bis zu
organischen noch energiereichen Zwischenprodukten wie Säuren und Alkohole
abgebaut. Um einen vollständigen Abbau dieser Stoffe zu erreichen, muss man ihre
möglichst vollständige Umsetzung zu Biogas anstreben (15). Im Kapitel 2.3 werden
die Eigenschaften von Kohlenhydraten, Eiweißen und Fetten ausführlicher
behandelt.
Biogas besteht im Wesentlichen aus Methan CH4 und Kohlendioxid CO2. Der
Energiegehalt des Gases wird hauptsächlich durch den Methananteil bestimmt. Das
Gas wird in der Regel zur Wärme- und/oder Stromerzeugung genutzt. Die Gärreste
des anaeroben Abbaus sind noch nährstoffreich und können anderen Organismen
als Nahrungsquelle dienen (z. B. als Pflanzendünger in der Landwirtschaft) (2).
Wie Abb. 2.1 zeigt, läuft der Prozess nach heutigen wissenschaftlichen
Erkenntnissen in vier aufeinanderfolgenden Abbauphasen ab (14), bei denen das
abbaubare Ausgangsmaterial (Polymere: Kohlenhydrate, Eiweiße und Fette)
fortlaufend zu kleineren Einheiten von jeweils verschiedenen Gruppen von
Mikroorganismen umgewandelt wird. Diese Organismen verwerten jeweils die
Produkte der vorangegangenen Schritte (13). Daher sind prinzipiell die Organismen,
die weiter hinten in der Abbaukette der anaeroben Biozönose liegen, von dem
Eingangssubstrat unabhängig (15).
Die Anwesenheit der verschiedenen Mikroorganismen ist zum Teil vom

abzubauenden Substrat abhängig. Handelt es sich um Rohschlamm oder Abwasser,
werden mit dem Substrat bei der Inbetriebnahme und jeder Substrateinbringung die
Bakterien der ersten und zweiten Phase in großer Zahl mit eingebracht. Die
Organismen der dritten und vierten Phase (wie bei der anaeroben Behandlung
organischer Abfälle) fehlen dagegen und müssen bei der Inbetriebnahme durch
„Animpfen“ mit anaerob behandeltem Substrat eingemischt werden (15).
Organische Polymere (Kohlendydrate, Eiweiß, Fette)
Hydrolyse
Hydrolytische
Bakterien Enzyme
Monomere
Acidogenese (Versäuerung)
Acidogene Bakterien
Flüchtige Fettsäure,
H2, C1
Alkohole
Acetogenese
Acetogene und
Syntrophe Bakterien
Homoacetogene
Essigsäure (Acetat) H2, C1
Methanogenese
Methanogene Archaea
Acetotrophe Hydrogenotrophe
CH4, CO2 Zweiphasiges Verfahren:

Einphasiges Verfahren:
Gesamte Prozesskette in Räumliche Trennung von
einem Behälter Vorversäuerung und
Methanbildung
Abb. 2.1: Phasen der Biogasentstehung (13), (14)

1. Phase: Hydrolyse
In dieser Phase werden durch Enzyme die hochmolekularen, zumeist ungelösten

Polymere biochemisch unter Anlagerung von Wasser in niedermolekulare
Verbindungen gespalten. Die Enzyme können entweder von Mikroorganismen
abgesondert oder gezielt dem Prozess zugefügt werden. Diejenigen der
Mikroorgnismen werden ebenso als Exoenzyme bezeichnet, weil sie ihre Aktivität
außerhalb der Bakterien durchführen. Sie werden entweder völlig ins Medium
ausgeschieden oder haften an den Zelloberflächen der hydrolytischen Bakterien
dieser Phase (16). Tab. 2.1 zeigt die wesentlichen Stoffwechselprozesse der
Hydrolyse.
Ob ein bestimmtes Substrat einer anaeroben Behandlung zugänglich ist,

entscheiden in erster Linie die hydrolysierenden Bakterien (15).
Bei pflanzlichem vergärenden Material, in dem viele Gerüstsubstanzen wie Cellulose,
Hemicellulose und Lignin vorhanden sind, ist die Hydrolyse der
geschwindigkeitsbestimmende Schritt (17). Handelt es sich um z. B. ein fetthaltiges
Substrat, dann sind die geschwindigkeitslimitierenden Schritte die Hydrolyse und
Versäuerung. Denn erst dann, wenn die fermentativen Bakterien die Polymere in für
die nachfolgenden Bakteriengattungen angreifbare Substanzen zersetzt haben, kann
ein vollständiger Abbau bis zu CO2 und CH4 stattfinden (15).
Das Abwasser einer Zucker- oder einer Stärkefabrik ist hingegen leicht zu
hydrolysieren und zu versäuren. In diesen Fällen wird i. d. R. nicht die Hydrolyse der
geschwindigkeitslimitierende Schritt sein, sondern die Methanbildung (15).
Tab. 2.1: Stoffumsetzungen in der Hydrolyse und Beispiele beteiligter Mikroorganismen (18), (14)
Beispiele
Substrate Produkte
Mikroorganismen
Kohlenhydrate Clostridium sp. Monosacharide
Proteine Bacillus sp. Aminosäuren
Fette Pseudomonas sp. Kurzkettige Peptide
Langkettige Fettsäuren
Glyzerin
Allerdings verläuft der Prozess nur dann optimal, wenn die Abbaugeschwindigkeiten
in allen Stufen gleich groß sind. Würde sich die Hydrolyse verlangsamen, so würde
das Nährstoffangebot für die weiteren Phasen durch das Angebot der
Zwischenprodukte limitiert werden, d. h. die Methanproduktion würde sich ohne

Veränderung des Prozessablaufes verringern. Wenn sich dagegen die zweite und
dritte Phase verlangsamen, reichern sich die Zwischenprodukte aus der Hydrolyse
an, d. h. im Biogas nimmt der CO2-Anteil zu (> 30 Vol.-%), im Substrat steigt die
Säurekonzentration, der pH-Wert sinkt unter 7,0 ab, und der Fermenter schlägt in die
säure Gärung um (15).
2. Phase: Acidogenese (Versäuerungsphase)
In dieser Phase werden von verschiedenen fakultativ und obligat anaeroben

Bakterien die in Tab. 2.2 gezeigten Produkte aus den Zwischenprodukten der
Hydrolyse gebildet. Hiervon sind für die Methanogenen jedoch nur Essigsäure,
Wasserstoff H2, und CO2 direkt nutzbar.
Tab. 2.2: Stoffumsetzungen in der Acidogenese und Beispiele beteiligter Bakterien (18), (19), (20)
Beispiele
Substrate Produkte
Mikroorganismen
Monosaccharide Clostridium sp. Niedermolekulare flüchtige,
Aminosäuren Bacteroides sp. Fettsäuren (Acetat, Propionat,
Kurzkettige Peptide Butyrivibrio sp. Butyrat),
Langkettige Fettsäuren Aldehyde, Alkohole,
Glyzerin Ketone, Ammoniak,
Kohlendioxid, Wasserstoff
Die Versäuerung (wie die Hydrolyse) wird von einer großen Gruppe verschiedener
fakultativer Anaerobier durchgeführt. Diese Phasen weisen daher große Toleranz
gegenüber Milieuschwankungen (Temperatur, pH, toxische Stoffe) auf (15).
3. Phase: Acetogenese
Um möglichst viel Methan zu gewinnen, müssen die in der zweiten Phase gebildeten
niedermolekularen organischen Säuren und Alkohole vor allem in Essigsäure bzw. in
deren gelöstes Salz (Acetat) sowie in Wasserstoff und Kohlendioxid umgewandelt
werden (siehe Tab. 2.3).
Es handelt sich bei dieser Stufe, welche von den acetogenen Bakterien (obligat
Protonen reduzierende Bakterien) ausgeführt wird, um den thermodynamisch
aufwändigsten Schritt des Gesamtabbaus.
Tab. 2.3: Stoffumsetzungen der Acetogenese und Beispiele beteiligter Mikroorganismen (18), (21), (22)
Beispiele
Substrate Produkte
Mikroorganismen
flüchtige Fettsäuren (Propionat, Butyrat) Clostridium sp. Essigsäure, Acetat,
Aldehyde Eubacterium sp. Kohlendioxid,
Alkohole Wasserstoff
Ketone
Unter Normalbedingungen (20 ⁰C, pH = 7, alle Substratkonzentrationen = 1 Mol/l)

verbrauchen diese Reaktionen Energie, d. h. sie können von den Bakterien gar nicht
durchgeführt werden, da diese ja selbst Energie zum Wachstum brauchen (16).
Die acetogenen (wie die methanogenen) Bakterien sind empfindliche Spezialisten,
auf deren Ansprüche die Verhältnisse im Reaktor abgestimmt werden müssen. Beide
Gruppen haben eine sehr geringe Wachstumsgeschwindigkeit (15).
Der in dieser Phase produzierte Wasserstoff lässt den Wasserstoffpartialdruck
ansteigen. Dieser hemmt als „Abfallprodukt“ der Acetogenese den Stoffwechsel der
acetogenen Bakterien. Während der Methanogenese wird Wasserstoff zur
Methanbildung verbraucht, so dass diese beiden Prozesse voneinander abhängig
sind und nebeneinander in einer Art Symbiose der beteiligten Organismengruppen
ablaufen (19).
4. Phase: Methanogenese
In der letzten Phase des anaeroben Abbaus werden durch die methanogenen
Bakterien Essigsäure und Acetat zu CH4 und CO2 umgewandelt (ca. 70 Vol.-% der
Methanogenese). Es ist bisher nur eine geringe Anzahl acetatverwertender
Methanbakterien bekannt (z. B. Methanosarcina barkeri, Methanobakterium
söhngenii, Methanobakterium thermoautotrophicum). Sie wachsen auf Acetat mit
einer Generationszeit von mindestens 100 Stunden sehr langsam, wobei sich CO 2
als essentiell für das Wachstum erwiesen hat. Wenn ein energiereicheres Substrat
von Methanosarcina barkeri verwertet werden kann, wie z. B. Methanol oder
Methylamine, liegt die Generationszeit niedriger (40 h) (15).
Zusätzlich (ca. 27-30 Mass.-% der Methanogenese) werden das CO2 und H2, die in
der Acidogenese gebildet worden sind, zu Methan und Wasser (CO2 + 4H2 -> CH4 +
2H2O) durch hydrogenotrophe Mikroorganismen - wie z. B. Methanobacterium
bryantii, (19) - umgewandelt (siehe Tab. 2.4). Diese Umwandlung wird als reduktive
energetisch efektivere Methanbildung bezeichnet (15).
Tab. 2.4: Stoffumsetzungen in der Methanogenese und Beispiele beteiligter Mikroorganismen (17), (22)
Beispiele
Substrate Produkte
Mikroorganismen
Acetat Methanosarcina sp. Methan
Wasserstoff Methanosaeta sp. Kohlendioxid
Kohlendioxid Methanobacterium sp.
Die methanogenen Bakterien sind Substratspezialisten, die nur sehr wenige

Verbindungen umzusetzen vermögen. Molekularer Wasserstoff kann jedoch als
universelles Substrat Methanogener angesehen werden, und CO2 kann als C-Quelle
und terminaler Elektronenakzeptor dienen. Die Methanogenen benötigen H2 als
Elektronendonator und sind auch gegenüber höheren H2-Konzentrationen nicht
empfindlich.
Die Methanbakterien haben unterschiedliche Ansprüche (23), wie z. B.:
- mindestens 50 Mass.-% Wassergehalt

- streng anaerobe Bedingungen
- Lichtabschluss. Licht ist für sie zwar nicht tödlich, hemmt aber den Prozess.
2.1.1 Einfluss von Prozessparametern
Der größte Teil der im Anwendungsbereich verwendeten Biogasfermenter besteht

aus einem einstufigen, semikontinuierlich betriebenen System. Dabei wird dem
Fermenter in bestimmten Zeitabständen (z. B. einmal täglich) Frischsubstrat
zugeführt und gleichzeitig eine identische Menge vergorenen Substrats abgezogen
bzw. aus dem Fermenter verdrängt. Mit diesem Substrat werden aber auch im selben
Maße Bakterien aus dem Fermenter entfernt. Damit das System im Gleichgewicht
verbleibt, muss dafür gesorgt sein, dass die Zunahme der Bakterien durch das
Wachstum (Wachstumrate = µ) die Verluste duch den Abzug (Verdünnungsrate = D)
kompensiert, d. h. beide Größen müssen einander gleich sein (D = µ). Die
Wachstumrate ist bei einem kontinuierlichen System keine Konstante, sondern hängt
von der Substratkonzentration ab (16).
In einem solchen System können verschiedene Prozessgrößen beschrieben werden,

die den Abbauprozess und damit auch die Biogasproduktion beeinflussen. Im
Folgenden werden die wesentlichen Prozessparameter behandelt.
2.1.1.1 Einfluss der Temperatur
Grundsätzlich laufen chemische Reaktionen umso schneller ab, je höher die

Reaktionstemperatur ist. Die Reaktionsgeschwindigkeit chemischer Umsetzprozesse
steigt mit zunehmender Temperatur stark an. Diese Abhängigkeit gilt jedoch nur
bedingt für die biologischen Abbau- und Umsetzungsvorgänge, da ihre
Geschwindigkeit in hohem Maße ebenso durch Enzyme beinflusst wird (16), welche
abgesondert oder zugegeben werden können. Der Unterschied gegenüber
anorganischen chemischen Reaktionen besteht darin, dass der
Reaktionsgeschwindigkeit Grenzen durch die Temperaturempfindlichkeit dieser
Enzyme sowie der Bakterien gesetzt werden. Manche Enzyme werden bereits bei
Temperaturen von 40 bis 50 ⁰C irreversibel geschädigt. Nur wenige Enzyme sind bei
Temperaturen oberhalb von 60 ⁰C beständig (wie z. B. Papain). Die Zunahme der
Temperatur bewirkt also zunächst eine Steigerung der Umsatzrate, die jedoch nach
dem Überschreiten eines Maximums infolge der beginnenden temperaturbedingten
Inaktivierung der Enzyme wieder abnimmt (siehe Abb. 2.2 a) (16).
Bei den Bakterien ist die Lage des optimalen Temperaturbereiches
organismenspezifisch und kann je nach Organismenart unter 20 ⁰C bis über 80 ⁰C
betragen.
In der Literatur werden die Bakterien nach ihren unterschiedlichen
temperaturabhängigen Aktivitätsoptima in drei Gruppen eingeteilt. Diese drei
Gruppen entsprechen den nachfolgenden Temperaturbereichen (16), (24), (23), (21):
- psychrophiler Temperaturbereich (< 20 ⁰C)

- mesophiler Temperaturbereich (20-45 ⁰C)
- thermophiler Temperaturbereich (> 45 ⁰C)
Abb. 2.2: Abhängigkeit der relativen Methanproduktion von der Temperatur,

a) bei Faulschlamm (16),
b) bei verschiedenen Reinkulturen methanogener Bakterien (25)
Der größte Teil der Boden- und Wasserbakterien ist mesophil. Thermophile Bakterien
finden erst oberhalb von 45 ⁰C ihre optimale Temperatur vor, während die
psychrophilen Bakterien Temperaturen von unterhalb 20 ⁰C bevorzugen.
Die Methangärung findet in allen drei o. g. Temperaturbereichen statt, wobei
wiederum der Großteil aller bekannten Methanbakterien ihr Temperaturoptimum im
mesophilen Bereicht hat (16).
Der Einfluss der Temperatur auf die Aktivität der versäuernden Bakterien wurde
bisher wenig untersucht. Praktische Erfahrungen haben jedoch gezeigt, dass diese
Bakterien unempfindlich und flexibel auf die Umgebungstemperatur reagieren. Bei
einem zweistufigen Versuch zeigten sie in der Versäuerungsstufe zwei ausgeprägte
Temperaturoptima, zum einen im mesophilen Bereich bei 35 ⁰C und zum anderen im
thermophilen Bereich bei 48-55 ⁰C (26). Für den Betrieb zweistufiger Anlagen mit der
Hydrolyse und Versäuerung vorwiegend in der ersten Stufe sind jedoch weitere
Untersuchungen bezüglich der Temperaturoptima der versäuernden Bakterien
notwendig (24).
Im Vergleich zu versäuernden Bakterien sind Methanbakterien bedeutend

temperaturempfindlicher. Der Großteil aller bekannten Methanbakterien hat ihr
Temperaturoptimum im mesophilen Bereicht (16). Sie erreichen ihre maximale
Stoffwechselaktivität bei Temperaturen von 30 bis 40 ⁰C. Es wurden jedoch schon
thermophile und hochthermophile Methanbildner (z. B. Methanobakterium

thermoautotrophicum) mit Optimaltemperaturen jeweils zwischen 50-55 ⁰C und 65-
75 ⁰C isoliert (siehe Abb. 2.2 b), (27), (16).
Bei steigender Temperatur nimmt die Temperaturempfindlichkeit (besonders der

Methanbakterien) gegenüber Temperaturschwankungen zu, vor allem, wenn diese
kurzfristig auftreten und die Temperatur sinkt. Während im mesophilen Bereich
tägliche Schwankungen von 2-3 K um den Mittelwert noch verkraftet werden, sollten
sie im thermophilen Bereich nicht größer als 1 K sein (23).
Nach van Velsen (1981) ist der Cellulose- und Hemicelluloseabbau bei thermophilen
Temperaturen höher als bei mesophilen und psychrophilen Temperaturen. Nach
Schluz (1996) sind bei höheren Temperaturen die Abbaugeschwindigkeit und die
Gasproduktion höher, und die erforderliche Abbauzeit im Reaktor ist kürzer, wodurch
sich kleinere Reaktoren realisieren lassen. Allerdings ist der Methangehalt im Biogas
etwas niedriger. Nach Baserga (1984) sinkt der Methangehalt des Biogases mit
zunehmender Gärtemperatur aufgrund der sich verändernden CO 2-Löslichkeit im
Substrat. In seinen Versuchen wurde z. B. bei 24 ⁰C ein um 5-8 Vol.-% höherer
Methangehalt gemessen als bei 36 ⁰C.
Obwohl im thermophilen Temperaturbereich ein schnellerer und zum Teil vermehrter

Stoffabbau stattfindet, werden die meisten Biogasanlagen bis auf wenige
Ausnahmen im mesophilen Temperaturbereich betrieben. Der Grund hierfür liegt
u. a. im erhöhten Prozessenergiebedarf thermophiler Anlagen (16), dessen Einfluss
auf die Nettoenergieausbeute und die Gesamtwirtschaftlichkeit der Anlagen negativ
sein könnte. Tab. 2.5 zeigt die Unterschiede zwischen mesophilem und
thermophilem Temperaturbereich.
Zusammenfassend kann gefolgert werden, dass für Praxisanlagen Gärtemperaturen

von 30 bis 32 ⁰C ausreichend sind, um in den Bereich maximaler Gasausbeuten zu
kommen, sofern die Verweilzeit mindestens 20 Tage beträgt. In welchem Bereich
hingegen die Optimaltemperatur bezüglich einer maximalen Nettoenergieausbeute
oder der Gesamtwirtschaftlichkeit einer Anlage liegt, hängt noch von einer Anzahl
weiterer Parameter wie z. B. den Gasverwertungsmöglichkeiten, den

Substrateigenschaften oder den baulichen Gegebenheiten ab und muss für jede
Einzelanlage an Ort und Stelle eruiert werden (16).
Tab. 2.5: Vergleich zwischen dem anaeroben Abbau im mesophilen und thermophilen
Temperaturbereich (2), (16), (21), (23), (28)
Mesophiler Temperaturbereich Thermophiler Temperaturbereich

Vorteile:
- höhere Prozessstabilität auch bei - höherer Stoffumsatz (auch höherer Cellulose- und
Temperaturschwankungen Hemicelluloseabbau)
- geringerer Prozessenergiebedarf zur - geringere Verweilzeit des Substrats im Fermenter:
Substraterwärmung 3-10 Tage. Nach Aschman et al. (2007): 15-20 Tage
- große Vielfalt an methanbildenden Bakterienarten, - kleinere Reaktorvolumina

dadurch Mischpopulation mit stabilerem Abbau (auch
- höhere Gasproduktion
im Falle eines Absterbens einzelner
Bakterienstämme) - Entseuchung, d. h. zuverlässige Abtötung von
Krankheitserregern bei entsprechender
Prozessführung (wichtig für die spätere Nutzung des
ausgefaulten Substrats als Dünger für die
Landwirtschaft). Die bei der mesophilen Fahrweise
notwendige kostenintensive und aufwändige
Pasteurisierung entfällt.
- bessere Stabilisierung des Substrats (Substrat wird
als stabil bezeichnet, wenn es nicht mehr durch
weiteren mikrobiellen Abbau zersetzt werden kann.
Für die Praxis ist eine relative Stabilisierung
ausreichend, d. h. dass keine üblen Gerüche mehr
freigesetzt werden)
- Sterilisation von Pflanzensamen (außer Tomate).

(wichtig für die spätere Nutzung des ausgefaulten
Substrats als Dünger)
Nachteile:
- geringerer Stoffumsatz - verminderte Prozessstabilität (höhere
Empfindlichkeit gegenüber Temperatur- und
- höhere Verweilzeit des Substrats im Fermenter (20-
Belastungsschwankungen, erhöhte Gefahr einer
25 Tage)
Ammoniakhemmung)
- größere Reaktorvolumina
- vermehrter Aufwand zur Anlagenüberwachung
- geringere Gasproduktion
- höherer Prozessenergiebedarf zur
- Bedenklichkeit der Hygiene des vergorenen Substrats Substraterwärmung (Nettoenergieproduktion kann
trotz des Vorteils der Volumenreduktion des
- kostenintensive und aufwändige Pasteurisierung des
Reaktors ungenügend sein und somit keine
vergorenen Substrats bei geplanter
wirtschaftlichen Vorteile bringen)
landwirtschaftlicher Nutzung
- kleinere Vielfalt an methanbildenden Bakterienarten
- geringere Stabilisierung des Substrats
- geringerer Methangehalt im Biogas
- geringere Sterilisation von Pflanzensamen
2.1.1.2 Einfluss der Substratzusammensetzung
Für die Biogasproduktion ist die Zusammensetzung des Substrats die maßgebende
Ausgangsgröße, da diese einerseits die Aufrechterhaltung der Lebensfunktionen und
andererseits den Aufbau neuer Zellsubstanz der Organismen (Entwicklung der
Biozönose) beeinflusst.
Die wesentlichen organischen Substratinhaltstoffe, die die Organismen brauchen,
lassen sich in Kohlenhydrate, Fette und Proteine unterteilen. Sie sind in erster Linie
als Ausgangsstoffe für die Gasproduktion anzusehen (24).
Neben den organischen Stoffen ist auch eine Vielzahl anorganischer Substanzen
(Stickstoff, Phosphor, Calcium, Natrium, Kalium) für die Lebewesen erforderlich.
Darüberhinaus ist noch ein ausgewogenes Angebot an Spurenelementen von
Bedeutung (24), (siehe Seite 21).
Der Bedarf an Nährstoffen für die anaeroben Mikroorganismen ist deutlich geringer
als bei den aeroben Bakterien, da sehr viel weniger Biomasse (bezogen auf die
abgebaute organische Substanz) beim anaeroben Prozess gebildet wird. Die
Wachstumsgeschwindigkeit der anaeroben Bakterien ist ebenso gering (14), (15).
Die anaeroben Bakterien benötigen z. B. wesentlich weniger Kohlenstoff als die
aeroben Bakterien. Beim anaeroben Abbau werden nur 1-5 Mass.-% des
Kohlenstoffes für den Aufbau von Biomasse, aber 90-95 Mass.-% zu Biogas
umgesetzt. Etwa 5 Mass.-%. verbleiben im ausgefaulten Substrat (29).
Die Substratzusammensetzung ist unmittelbar mit der Zusammensetzung der
entstehenden Stoffwechselprodukte verknüpft (24). So werden z. B. die
Mengenanteile der Hauptstoffwechselprodukte des vollständigen anaeroben
Umsatzes (CH4, CO2) vom Ausgangssubstrat maßgeblich beeinflusst. Die Bildung
von Biogas lässt sich rein theoretisch mit folgender Formel für beliebige organische
Stoffe berechnen (30):
CaHbOcNdSe + (4a – b - 2c + 3d + 2e) H2O = 1/8 (4a + b - 2c - 3d - 2e) CH4 +

1/8 (4a – b + 2c + 3d + 2e) CO2 +
dNH3 + eH2S
Für die wesentlichen organischen Stoffgruppen ergeben sich demnach die in Tab.
2.6 dargestellten Biogaszusammensetzungen.
Fette weisen den höchsten und Eiweiße den niedrigsten Methananteil auf. Eiweiße
bilden zudem die Quelle für die Produktion der Biogasbestandteile Stickstoff und
Schwefelwasserstoff, der dem Biogas den fauligen Geruch und die korrosive
Wirkung gibt.
Bezogen auf die Masse der Ausgangssubstanz und unter Standardbedingungen von
Druck und Temperatur liefern Fette das höchste spezifische Biogasvolumen (1200-
1250 l/kg), während Kohlenhydrate 790-800 l/kg und Eiweiße etwa 700 l/kg
spezifisches Gasvolumen produzieren (24), (21).
Tab. 2.6: Theoretische Biogaszusammensetzung beim Abbau der wesentlichen organischen

Stoffe (16)
CH4 (Vol.-%) CO2 ( Vol.-%) NH3 (Vol.-%) H2S (Vol.-%)

Kohlenhydrate (Glucose) 50 50
Eiweiße (Durchschnitt) 38 38 18 6
Fette (Tripalmitin) 71 29
Stickstoffgehalt
Stickstoff stellt einen essentiellen lebensnotwendigen Stoff (unter anderen wie

Kohlenstoff, Phosphor, Spurenelemente etc.) bei der Abwasserreinigung und
Schlammbehandlung dar. Die abbauende Bakterienpopulation wird unter
entsprechend optimierten Randbedingungen (z. B. Temperatur, pH-Wert etc.) einen
maximalen Stoffumsatz anstreben, bis zu einem Defizit der lebensnotwendigen
Nährstoffe. Der Bedarf an Stickstoff für die anaeroben Mikroorganismen ist geringer
als bei den aeroben Bakterien (siehe Seite 20). Daher werden geringere Mengen
Stickstoff beim anaeroben Prozess eliminiert. Allerdings führt eine derartige
Limitierung lebensnotwendiger Stoffe im abbauenden Substrat zum Abbruch der
Stoffwechselaktivität. Bei stickstoffreichen Schlämmen sind dementsprechend hoch
die Abflußwerte für Stickstoff bei Anaerobanlagen (24). Andererseits könnte ein
Überschuss an Stickstoff zur höheren Ammonifikation (organisch N, NH2+ → NH4+)
führen, was hemmend auf den anaeroben Prozess wirken kann (siehe Seite 33).
Phosphorgehalt
Phosphor ist ein Schlüsselelement für lebende Organismen. In der Natur kommt
Phosphor ausschließlich in gebundener Form als Phosphat (PO43−) vor. Die
Bakterien im Reaktor benötigen Phosphat für den Stoffwechsel des anaeroben
Abbaus. In der Praxis muss bei zu geringem Phosphorgehalt eine Zudosierung von
Phosphor in Form von z. B. verdünnter Phosphorsäure erfolgen, um optimale
Milieubedingungen für die anaeroben Mikroorganismen einzustellen (24).
Verhältnis von Kohlenstoff, Stickstoff und Phosphor
Das Mindestnährstoffverhältnis für die anaerob belebte Biomasse berücksichtigt den

Summenparameter des chemischen Sauerstoffbedarfs (CSB) als Maß für den
Kohlenstoffanteil (bzw. den organischen Anteil der Substratinhaltsstoffe) sowie den
Gehalt an gesamtem Stickstoff und Phosphor (als anorganische Anteile der
Substratinhaltsstoffe). Nach Mudrack und Kunst (1991) beträgt dieses Verhältnis für
den Abbau von Kohlenhydraten:
CSB:N:P ca. 300:5:1
für den Abbau von Lipiden und Proteinen:
CSB:N:P etwa 800:5:1
Nach Weiland (2001) zit. nach Aschmann (2007) sollte das C:N:P:S-Verhältnis bei
600:15:5:1 (d. h. 120:3:1:0,2) liegen, um die Bakterien ausreichend mit Nährstoffen
zu versorgen.
Die o. g. Verhältnisse verdeutlichen, dass beim anaeroben Kohlenstoffabbau nur

geringe Mengen Stickstoff und Phosphor eliminiert werden (24). Der Nährstoffgehalt
und damit die Düngewirkung des ausgefaulten Biosubstrats ist somit sehr hoch (2).
Schwefel ist für den Aufbau der Bakterienzellen ebenfalls ein essentieller
Mineralstoff. Nach Mudrack und Kunst (1991) sollte der Schwefelbedarf dem des
Phosphors entsprechen. Schwefelquellen können proteinhaltige Substrate,
Schwefelsäure aus der Reinigung von Edelstahlbehältern und Sulfate, z. B. aus der
Schwefelung von Kartoffeln vor der Verarbeitung, sein.
Da der Schwefel von den Methanbakterien nur in reduzierter Form aufgenommen

werden kann, ergibt sich eine optimale Schwefelkonzentration von ca. 10 mg/l
gelöstem Schwefelwasserstoff (H2S) (15).
Substrate wie kommunale Schlämme und Abwässer verfügen meist über eine sehr
ausgewogene, für die Bakterien günstige Nährstoffzusammensetzung. Fehlen
hingegen (wie häufig bei Industrieabwässern) einige dieser Nährstoffe im Prozess
oder kommt es während des zunehmenden Abbaus zu einem Mangel, ist eine
Zugabe (z. B. über häusliches Abwasser, spezielle Nährstoffe wie Methanol als C-
Quelle oder Stickstoff- oder Phosphorsalze) von Mangelsubstanzen nötig, sonst kann
es zu einer Verlangsamung oder sogar der vollständigen Hemmung der Biosynthese
kommen (24).
Spurenelemente
Spurenelemente sind Nährstoffe, die in Spuren wirken und für den normalen Ablauf
von Lebensvorgängen unentbehrlich sind. Zu den wichstigsten Spurenelementen
zählen Chrom, Mangan, Eisen, Kobalt, Kupfer, Zink, Selen, Molybdän, Jod, Nickel,
Arsen und Fluor (24).
Nach Mudrack und Kunst (1991) sind als essentielle Elemente sowohl für
methanbildende Mischbiozönosen als auch für hydrolytische, acidogene und
acetogene Bakterien Nickel, Kobalt, Molybdän, Eisen, Selen und Wolfram
nachgewiesen worden. Bei einzelnen Gattungen der acetogenen Bakterien sind
darüberhinaus Zink, Kupfer und Mangan notwendig. Während Nickel für das
Wachstum anderer Bakterien allgemein nicht erforderlich ist, ist es ein essentieller
Bestandteil aller Methanbakterien, da es für die Synthese der Zellkomponenten Co-
Faktor F430 und der Enzyme Hydrogenase und Kohlenmonoxid-Hydrogenase einen
notwendigen Baustein darstellt (1 g Zellsubstanz enthält durchschnittlich 10 μg
Nickel) (15). In der Praxis ist es häufig ein Mangelfaktor, so dass die Dosierung von
Nickel zu einer Verbesseung der Methanogenese führt. Das Wachstum von
Methanbakterien ist weiterhin von Kobalt, Molybdän und Wolfram abhängig. Für
Methanosarcina barkeri wurde z. B. ein optimales Wachstum bei 0,06 mg/l Kobalt
und 0,05 mg/l Molybdän ermittelt (15). Wolfram sowie Selen sind jedoch nur für
wenige Methanbakteriengattungen als essentiell nachgewiesen worden. Für Eisen
wurde eine stimulierende Wirkung bei den Methanbakterien beobachtet (15).
In der Regel begrenzt ein Mangel an Spurenelementen bei den methanogenen

Bakterien die Abbaugeschwindigkeit des Gesamtprozesses (15). Am ehesten wird es
zum Mangel insbesondere von Kobalt und Nickel kommen (24). Die optimalen
Konzentrationen der wichtigsten Spurenelemente sind in Tab. 2.7 aufgeführt.
Tab. 2.7: Optimale Konzentrationen gelöster Spurenelemente im Anaerobreaktor (31), (32)
Eisen Nickel Kobalt Molybdän Selen Chrom Mangan Blei

Element
(Fe) (Ni) (Co) (Mo) (Se) (Cr) (Mn) (Pb)
Konzentration
1-10 0,005-0,5 0,003-0,06 0,005-0,05 0,008 0,005-50 0,005-50 0,02-200
(mg/l)
Feststoffgehalt
Der Feststoffgehalt (auch als Trockensubstanzgehalt, Trockenmassenkonzentration,

Substratkonzentration, Trockensubstanzkonzentration, Schlammgehalt und
Schlammtrockensubstanz bezeichnet) ist die in einem bestimmten Volumen
enthaltene Trockenmasse. Der Trockensubstanzgehalt (TS) wird z. B. in g/l
gemessen.
Nach Inden (1977) und Kapp (1984) zit. nach Dauber (1993) ist bis zu einem
Feststoffgehalt von 10 Mass.-% kein signifikanter Einfluss des Feststoffgehalts auf
den Verlauf des anaeroben Prozesses zu verzeichnen.
Nach Kleemann und Meliß (1993) liegt der optimale Trockensubstanzgehalt des
Substrats im Bereich von 3 bis 10 Mass.-%. Dieser Wert kann durch Zugabe von
Wasser (z. B. bei Fruchtabfällen) oder durch Eindickung (z. B. bei Klärschlamm)
eingestellt werden.
Nach Van Velsen (1981), Baserga (1983) und Wellinger et al. (1991) ist die
Grenzbelastbarkeit bei der Substratkonzentration unterschiedlich. Während in
einigen Versuchen schon bei TS-Gehalten von 10 Mass.-% eine totale Hemmung,
d. h. ein Umkippen des Prozesses beobachtet wurde, zeigen die Ergebnisse anderer
Untersuchungen sowie Erfahrungswerte aus Praxisanlagen, dass durchaus mit
höheren Feststoffgehalten gefahren werden kann, ohne Probleme mit dem
Gärprozess zu bekommen. Die Gründe hierfür sind in der Substratzusammensetzung
zu suchen. So sollte z. B. die obere Grenze der TS-Belastung herabgesetzt werden,
wenn das Substrat einen hohen Eiweißgehalt hat und daraus eine erhöhte
Ammoniakkonzentration resultiert (16).
Andererseits nehmen mit steigendem Feststoffgehalt Probleme beim hydraulischen

Transport des Substrats in Leitungen und bei der Durchmischung des Reaktors zu
(schlechtere Pumpfähigkeit des Substrats, ungenügende Versorgung der Bakterien
mit abbaufähigem Substrat aufgrund nicht ausreichender Durchmischung etc.) (24).
Der Feststoffgehalt setzt sich aus anorganischen und organischen Bestandteilen
zusammen. Der anorganisch-mineralische Anteil muß zunächst als nicht nutzbare
Masse angesehen werden, kann jedoch je nach Größe und Form von den Bakterien
als Siedlungsfläche angenommen werden, was u. a. zur Bildung von Pellets und
Granulat führt (24).
Der organische Anteil (auch als organische Trockensubstanz, organischer
Trockensubstanzgehalt, organische Substratkonzentration, organische Substanz
bezeichnet) wird üblicherweise als oTS bezeichnet und als Bemessungsgröße für
Anaerobreaktoren in Form der organischen Raumbelastung verwendet. Nachteil
dieser Bemessungsgröße ist, dass mit diesem Parameter keine Aussage zur
Abbaubarkeit der organischen Stoffe und der wirklichen Substratversorgung der
Bakterien gemacht wird. Die oTS wird ebenso als Bezugsgröße für die produzierte
Gasmenge verwendet (24). Üblicherweise wird die Gasproduktion als spezifische
Gasmenge oder Gasausbeute mit Bezug auf die zugeführte oTS angegeben [m3
Biogas/kg oTSzu].
Über die oTS wird in der Biogastechnik die potentiell nutzbare Energie eines
Substrats definiert. Die Menge des zugeführten Substrats basiert üblicherweise auf
dessen spezifischer oTS. Ist die im Substrat enthaltene Konzentration an organischer
Substanz zu gering, dann wird der Reaktorbehälter zu groß, was hohe spezifische
Anlagenkosten zur Folge hat. Bei höherer Konzentration ist die gesamte
Gasausbeute größer, aber es besteht die Gefahr, dass infolge einer Überlastung mit
vergärbaren Stoffen eine Hemmung durch eine zu große Menge bestimmter
Zwischenprodukte eintritt (21).
2.1.1.3 Einfluss der Verweilzeit und der Raumbelastung
Die hydraulische Verweilzeit ist als die mittlere Aufenthaltszeit des Substrats im
Fermenter definiert. Sie ergibt sich aus dem Fermentervolumen V (m3) und der
Substratzulaufrate Vs (m3/d) durch die Beziehung (16):
Verweilzeit Z = V/Vs, (d)

Die optimale Verweilzeit hängt stark von der Temperatur ab. Für mesophile Bakterien
(30 ⁰C) beträgt die optimale Verweilzeit 20 bis 25 Tage, während thermophile
Bakterien eine geringere Verweilzeit von nur 3 bis 10 Tagen benötigen (21).
Die Substratkonzentration (TS oder oTS) und die Verweilzeit des Substrats im
Fermenter sind neben der Substratzusammensetzung und der Temperatur die
beiden weiteren wesentlichen Prozessgrößen, welche die Gasproduktion und damit
die Wirtschaftlichkeit einer Anlage beeinflussen: Hohe Substratkonzentrationen
erhöhen die Ausbeute an nutzbarem Gas. Zudem reduziert sich das erforderliche
Reaktorvolumen (16).
Als Raumbelastung bezeichnet man die pro Volumeneinheit des Fermenters täglich
zugeführte Substratmenge. Sie berechnet sich nach folgender Formel (16):
Vs  S S 3
Raumbelastung =  (kg/m  d) S = TS oder oTS in kg/m3
V Z
Wie aus dieser Formel ersichtlich ist, wird die Raumbelastung einerseits durch die TS
oder oTS und andererseits durch die Verweilzeit bestimmt. Eine Belastungserhöhung
findet also nicht nur statt, wenn das Substrat konzentrierter anfällt (höherer TS-
Gehalt), sondern auch dann, wenn die Verweilzeit verkürzt wird. In beiden Fällen
wird dem Fermenter bzw. den Bakterien mehr Substrat pro Zeiteinheit zugeführt.
Allerdings kann die Raumbelastung nicht beliebig erhöht werden, da mit
zunehmender Konzentration des Substrats die Toxizitätsgrenze verschiedener
Hemmstoffe erreicht und dadurch das Wachstum der Bakterien erheblich gestört
werden kann.
Die kinetischen Prozessgrößen eines Biogasfermenters wie spezifische Gasmenge,
Raumbelastung und Verweilzeit sind gekoppelt. Mit zunehmender TS oder oTS
nimmt die Raumbelastung zu, wobei bei der spezifischen Gasmenge eine
Ertragseinbuße festzustellen ist (16).
Um eine Optimierung des Faulprozesses im Hinblick auf eine möglichst hohe Netto-
energieausbeute durchführen zu können, ist es demzufolge notwendig zu wissen,
wie sich die Substratkonzentration und die Verweilzeit auf den Prozess auswirken
und wo ihre unteren und oberen Grenzen liegen (16).
Bei mesophilen Temperaturen fällt bei Unterschreitung der Mindestverweilzeiten die

Gasproduktion schnell und kann die kritische Grenze (ca. 10 Tage) bezüglich der
Prozessstabilität erreichen. Nach Roediger et al. (1990) sinkt der Abbaugrad bei
Verweilzeiten unter 10 Tagen stark ab. Die Gaszusammensetzung bleibt jedoch über
einen weiten Verweilzeitbereich (z. B. 10 bis 30 Tage bei Vergärung von
Rindermastgülle) konstant (16).
Wie bei der Verweilzeit sind auch der Substratkonzentration untere (Energiebilanz)
und obere Grenzen (Überlastung/Hemmung des Prozesses) gesetzt. Nach Wellinger
et al. (1991) nimmt die spezifische Gasmenge mit zunehmendem
Trockensubstanzgehalt ab, und zwar umso stärker, je kürzer die Verweilzeit gewählt
wird. Eine Verweilzeitreduktion wirkt sich umso gravierender auf die Raumbelastung
aus, je höher die Substratkonzentration (TS oder oTS) ist. Ganz allgemein wird mit
zunehmender Raumbelastung eine Abnahme der spezifischen Gasausbeute
beobachtet, was entweder auf die Verweilzeitverkürzung (Erhöhung der
Raumbelastung durch Verweilzeitreduktion) oder auf gewisse Hemmprozesse wie
z. B. Amoniakhemmung (Erhöhung der Raumbelastung durch Substratkonzentration)
zurückgeführt werden kann (16).
2.1.1.4 Einfluss des pH-Werts
Für das optimale Wachstum von Mikroorganismen ist ein für sie spezifischer pH-Wert
notwendig.
Während für die meisten säurebildenden Bakterien (hydrolytische, fermentative und
acetogene Bakterien) das Optimum im schwach sauren Bereich liegt, zeigt der
größte Teil der methanogenen Bakterien ein Aktivitätsoptimum bei pH-Werten
zwischen 6,5 und 8,0 (16). Der Acetatabbau wird bei pH-Werten unter 6,5 deutlich
gehemmt. Bei pH-Werten über 8,0 werden die Methanbakterien geschädigt (33).
Laut Stadlbauer (1982) sind pH-Werte unter 6,2 toxisch für Methanbakterien.
Nach Mudrack & Kunst (1991) sollte für die Methanbakterien ein engerer Bereich von
pH-Werten zwischen 6,8 und 7,2 eingehalten werden, wenn eine ungehemmte
Methanbildung erfolgen soll. Für die versäuernden Bakterien ist hingegen eher ein
saurer pH-Wert günstig. Bei bestimmten Substraten (z. B. Gelatine) ist sogar ein pH-
Wert von 5,3 bis 6,3 nötig, da ab einem pH-Wert von 7,0 die Versäuerung gehemmt
wird.
Nach Schulz (1996) und Aschmann et al. (2007) sollte der pH-Wert des
Gärprozesses im schwach alkalischen Bereich um 7,5 liegen, während nach
Kleemann & Meliß (1993) eine optimale Gasausbeute in einem pH-Bereich von 6,5
bis 7,2 erreicht wird.
Bedingt durch die hohe Pufferkapazität des Substrats kann der pH-Wert allerdings
erst spät auf Störungen reagieren. Die Pufferkapazität ist ein Mass für die Menge
Saüre oder Base, die ein Puffer abfangen kann, so dass der pH-Wert auch bei
Zugabe oder durch die Produktion saurer oder basich reagierender Stoffe über einen
weiten Bereich stabil bleibt. In einem gepufferten System werden die bei der Zugabe
von Säuren oder Basen entstehenden Hydronium(H3O+)- oder Hydroxid(OH-)-Ionen
abgefangen und neutralisiert, so dass keine wesentlichen pH-Verschiebungen
entstehen. Daher ist der pH-Wert ein ungeeigneter Parameter für die Kontrolle bzw.
für das frühzeitige Erkennen von Störungen des anaeroben Prozesses (16).
Die bei einer Überlastung oder sonstigen Störung des Prozesses auftretende
Zunahme der flüchtigen Fettsäuren wirkt sich erst bei sehr hohen Konzentrationen
auf den pH-Wert aus, da das Puffersystem die sauer reagierenden Fettsäuren (bzw.
H3O+-Ionen) abfängt. Die Pufferkapazität (auch Säurekapazität) wird beim
Faulwasser hauptsächlich durch den Gehalt an Ammoniumionen und die mol-gleiche
Menge Hydrogencarbonationen bestimmt (33).
Nach Aschmann et al. (2007) soll die Alkalinität als Maß für die Pufferkapazität
zwischen 1500 und 5000 mg CaCO3 liegen.
Nach Roediger et al. (1990) ist der pH-Wert als Beurteilungskriterium für den Prozess
ungeeignet, sofern er zwischen 6,9 bis 7,5 liegt. Dann ist er im Wesentlichen nur ein
Maß für die Ammoniumkonzentration.
2.1.1.5 Einfluss der Durchmischung
Um die aktive Biomasse kontinuierlich mit ausreichend abbaufähigem Material zu

versorgen und um die Stoffwechselprodukte der Organismen abzutransportieren,
bedarf es einer guten Durchmischung des Reaktors. Tab. 2.8 zeigt die
Gegensätzlichkeiten bezüglich der Anforderungen an die Durchmischung.
Bei zu geringer Durchmischung kann das produzierte Faulgas eine Gashülle um die
Zelle bilden und damit deren weitere Substrataufnahme verhindern. Man spricht
dann von der sog. Diffusionslimitierung (24). Doch auch eine zu starke
Durchmischung wirkt negativ auf den Abbauprozess. Die Symbiose der
wasserstoffbildenden acetogenen Bakterien und der wasserstoffverbrauchenden
methanogenen Organismen sollte nicht gestört werden. Eine zu intensive
Durchmischung stört die Bakteriensymbiose (die Organismen werden getrennt), was
zu einer Abnahme der Methanbildung führt (15). Daher muss zwischen dem Maß der
notwendigen Durchmischungsenergie und dem Durchmischungssystem ein
Kompromiss gefunden werden, der den Anforderungen der anaeroben Biozönose
weitestgehend gerecht wird (14).
Tab. 2.8: Gegensätzlichkeiten bezüglich der Durchmischung von Anaerobreaktoren (34), (23)
schwach bzw. diskontinuierlich

voll durchmischter Reaktor
durchmischter Reaktor
(starke Durchmischung)
(schwache, schonende Durchmischung)
Vorteile:
- Stofftransport ist optimal (Vermischen des frischen - Reduzierung der Scherkraftbelastung auf die
Substrats mit dem bereits faulenden, um eine Bakterien
Impfung des frischen Substrats mit aktiven Bakterien
- geringer Energieaufwand
zu gewährleisten, Abtransport des Faulgases)
- Reduzierung der Trockenmassekonzentration im
- homogene Situation im Reaktor (Temperatur,
Reaktorabfluss
Trockenmassekonzentration, Substratverteilung, pH-
Wert)
- Vermeiden oder Zerstören von Schwimmdecken und
Sinkschichten
- Verbesserung des Stoffwechsels der Bakterien durch
das Austreiben von Gasblasen und Heranführen
frischer Nährstoffe
Nachteile:
- hohe Scherkraftbelastung der Methanbakterien - Gefahr der Bildung von Schwimm- und Sinkschichten
- hoher Energiebedarf (insbesondere bei Abwässern aus
Massentierhaltungen)
- hohe Trockenmassekonzentration im Reaktorablauf,
Belastung der externen Trenneinrichtung - Gefahr von Kurzschlussströmungen und Totzonen
- Stofftransport ist nicht optimal
2.1.1.6 Einfluss hemmender und toxischer Substanzen
Einige Substanzen im Substrat können negative Auswirkungen auf den anaeroben

Abbauprozess haben. Die hemmende oder gar toxische Wirkung auf die
Mikroorganismen hängt dabei im Wesentlichen von deren Konzentration ab. Aber
auch der pH-Wert und die Temperatur im Prozess beeinflussen die negativen
Auswirkungen (24).
Hierfür empfindlich sind vor allem methanogene Bakterien, die jedoch die
wichtigsten Organismen im anaeroben Prozess sind. Ihr geringes Wachstum, die
hohe Substratspezifität und die relativ hohe Anfälligkeit gegen Umweltstress machen
häufig die Methanogenese zur prozesskritischen Phase. Daher sind Kenntnisse über
die Wirkung von hemmenden Substanzen, besonders bei Methanbakterien, von
entscheidender Bedeutung für einen optimalen Verlauf der anaeroben Gärung (35).
Eine Festlegung strikter Grenzwerte ist schwierig, da sowohl chemische Prozesse
toxische Stoffe binden können als auch eine gewisse Adaptation der
Mikroorganismen an die Milieubedingungen möglich ist (28).
Sauerstoff
Fakultativ anaerobe Mikroorganismen wachsen sowohl in Gegenwart als auch in

Abwesenheit von Sauerstoff. Zu dieser Bakteriengruppe zählt z. B. ein Großteil der
versäuernden Bakterien. Für obligat anaerobe Bakterien, wie z. B. die
Methanbakterien, ist die Anwesenheit von Sauerstoff toxisch. Anstelle des
Sauerstoffs dienen den Anaerobiern z. B. Nitrat, Sulfat oder Carbonat als
Wasserstoffakzeptoren. Der Kontakt mit Sauerstoff kann durch entsprechende
konstruktive und betriebstechnische Maßnahmen ausgeschlossen werden (24).
Allerdings weist der anaerobe Prozess eine gewisse Toleranz gegenüber kleinen
Mengen an Sauerstoff auf. Bis zu 50 Mass.-% der am Gesamtprozess beteiligten
Bakterien sind aerob bzw. fakultativ anaerob und verbrauchen somit den mit dem
Substrat eingebrachten Sauerstoff innerhalb kürzester Zeit, ohne dass für das
Gesamtsystem ein Schaden entstehen würde (16). Die Abwesenheit von Sauerstoff
ist nicht unbedingt entscheidend für das Wachstum von Anaerobiern. Viel wichtiger
ist das sogenannte Redoxpotential, das ein Maß für die Tendenz ist, von chemischen
Verbindungen oder Elementen Elektronen abzugeben oder aufzunehmen. Anaerobe
Bakterien können aber nur bei einem tiefen Redoxpotential wachsen. So braucht es
für den Abbau von flüchtigen Fettsäuren weniger als -100 mV (36), für die Produktion
von CH4 weniger als -330 mV (37). Über Redoxmessungen im Methanreaktor kann
man Störungen frühzeitig erkennen (38). Durch ein Ansteigen des Säuregehaltes fällt
der pH-Wert bzw. steigt der Wasserstoffpartialdruck, und das Redoxpotential

verändert sich (15).
Schwefel
Wie oben beschrieben ist Schwefel für den Aufbau der Bakterienbiomasse
lebensnotwendig, kann aber zur Hemmung der Fermentation bei höheren
Konzentrationen führen. Der Schwefelgehalt im anaeroben Prozess sollte ungefähr
dem des Phosphors entsprechen. Da die Methanbakterien den Schwefel nur in
reduzierter Form aufnehmen, ergibt sich eine optimale Konzentration von ca. 10 mg/l
gelöster Schwefelwasserstoff (H2S) im Substrat (15). Höhere Konzentrationen
können im Prozess hemmend oder toxisch wirken.
Schwefelwasserstoff entsteht bei der Vergärung auf zwei verschiedene Arten.
Erstens durch den Abbau eiweißhaltiger Stoffe, d. h. der schwefelhaltigen
Aminosäuren Cystein und Methionin, und zweitens durch Reduktion anorganischer
Schwefelverbindungen (16).
Bei der Reduktion konkurrieren infolge erhöhter Sulfatkonzentrationen
sulfatreduzierende Bakterien (Desulfurikanten) mit Methanbakterien. Tritt anstelle
eines Methanbakteriums ein anderer H2-verbrauchender Partnerorganismus in die
Symbiose aus acetogenen und methanogenen Bakterien ein, stehen den
Methanbakterien weniger Nahrungsstoffe zur Verfügung, was mit einem Rückgang
der Methanbildung verbunden ist. Desulfurikanten sind zudem gegenüber den
Methanbakterien energetisch begünstigt, so dass die Desulfurikation bevorzugt vor
der Methanisierung erfolgt (24). Die Reduktion hat einen Doppeleffekt: Einerseits
bewirkt der Nährstoffentzug durch Desulfurikanten eine Verminderung der
Methanbildung. Andererseits wirkt gleichzeitig eine erhöhte Konzentration an
entstandenem H2S toxisch auf die Methanbakterien.
Das entstehende H2S wird zum Teil mit dem entstehenden Biogas frei. Es kann auch
wasserlöslich (undissoziiert und toxisch) in der Flüssigkeit verbleiben oder dissoziiert
als schwache Säure zerfallen, wobei Hydrogensulfid und Sulfidionen entstehen (2).
Die Toxizität wird auch durch die undissoziierte Form des H2S bestimmt, da mit
ansteigendem undissoziierten Anteil die Giftigkeit zunimmt (24). Das chemische
Gleichgewicht zwischen der undissoziierten und der dissoziierten Form
H2S ← → HS- + H+
ist vom pH-Wert abhängig. Bei einem pH-Wert von 6,0 liegen über 90 Mass.-% des
Gesamtsulfides als H2S vor (weniger als 10 Mass.-% als HS-), bei pH 7,0 ca. 50
Mass.-% (ca. 50 Mass.-% als HS-) und bei pH 8,0 weniger als 10 Mass.-% als H2S
(über 90 Mass.-% als HS-) (24).
Nach Wellinger et al. (1991) sind H2S-Gehalte über 3 mMol/l bzw.

Sulfidkonzentrationen über 100 mg/l kritisch, was etwa einem H 2S-Anteil im Biogas
von 1 Vol.-% entspricht.
Nach Scholwin et al. (2009) wirken Schwefelverbindungen wie H2S ab 50 mg/l, S2- ab
100 mg/l und Na2S ab 160 mg/l hemmend. Adaptierte Populationen von
Mikroorganismen können jedoch bis zu 600 mg/l Na 2S und 1000 mg/l H2S ertragen.
Die Konzentrationsgrenze der Sulfid-Anion S2- enthaltenden Verbindungen stimmt
mit derjenigen von Wellinger et al. (1991) überein. Ebenfalls hemmend können
Thiol-Brücken wirken, wobei die Hemmschwellen je nach Substanz unteschiedlich
sein können. Darüber hinaus kann eine (Sulfid)Fällung in Anwesenheit von gewissen
Metallionen erfolgen.
Zusätzlich besteht die Gefahr, dass wichtige Spurenelemente (Ni, Co, Mo, Fe) als
schwerlösliche Metallsulfide gefällt werden und damit den Mikroorganismen fehlen.
Probleme mit zu hohen H2S–Konzentrationen können bei der Vergärung von
Schweine- und Hühnerexkremente auftreten (16).
Wie der Hemmechanismus wirkt, ist nicht genau bekannt, doch können die oben
beschriebenen Wirkungen, wie folgt zusammengefasst werden (16):
- Höhere H2S -Konzentrationen wirken toxisch für Methanbakterien.
- Die Fällung wichtiger Spurenelemente (Ni, Co, Mo, Fe) als schwerlösliche
Metallsufide führen zu einem Mangel an diesen Elementen.
- Die Sulfatreduktion (Desulfurikation) bildet eine Konzurrenzreaktion zur
Methanbildung
Der beste Betriebsparamenter zur Überwachung der H2S-Toxizität ist der H2S-Gehalt
des Biogases. Treten erhöhte Werte auf, können folgende geeignete Maßnahmen
getroffen werden:
- Erhöhung des pH-Werts im Reaktor
- Zugabe von Eisensalzen zur H2S-Fällung als Eisensulfid
- Verringerung der Raumbelastung zur Steigerung der CSB-Abbauleistung
- Verdünnung mit sulfatfreiem bzw. sulfatarmem Wasser oder Abwasser (39).
Oganische Säuren
Organische Säuren gelangen entweder mit dem Substrat in den Anaerobreaktor oder
werden durch die Abbauprozesse im Reaktor gebildet. Im Stoffwechsel der
Methangärung treten die kurzkettigen Fettsäuren (C1 bis C6: Ameisen-, Essig-
Propion-, Butter, Valerian- und Capronsäure) als wichtige Stoffwechselprodukte auf
(16). Die Konzentrationen und Arten der Fettsäuren wurden als Indikatoren von
Stabilität und Aktivität bereits weitgehend untersucht (40).
Man spricht von einem stabil verlaufenden Prozess, wenn sich Säureangebot und
-abbau im Gleichgewicht befinden. Die Stabilität wird durch die Aktivität der
Methanbakterien eingestellt (24). Bei einem Überangebot an Säuren geht daher
automatisch die Methanbildung zurück, da die Abbaukapazität der Methanbakterien
überschritten wird. Dadurch steigt die Konzentration der flüchtigen organischen
Säuren, was wiederum hemmend auf den Stoffwechsel der Essigsäure abbauenden
Methanbakterien wirkt (39).
Der undissoziierte Anteil der Säuren (d. h. ihre Carboxygruppe –COOH) wirkt
vornehmlich hemmend oder toxisch. Der prozentuelle Anteil der undissoziierten
Säuren an den Gesamtsäuren ist vom pH-Wert abhängig. Je niedriger der pH-Wert
ist, desto höher ist der prozentuelle Anteil der undissoziierten Säuren (39). Nach
Roediger et al. (1990) ist aber nicht zu unterscheiden, ob bei niedrigem pH-Wert die
Protonenkonzentration oder die Konzentration der undissoziierten organischen
Säuren die Methanbakterien beeinträchtigt. Nach Kroiss (1986) liegen bei
mesophilen Temperaturen und pH-Werten von über 7,0 im Substrat über 99 Vol.-%
der organischen Säuren dissoziiert und unter 1 Vol.-% undissoziiert vor.
Ein niedriger Gehalt der Säuren bedeutet, dass der Abbau der Säuren durch die
Methanbakterien gut Schritt mit deren Erzeugung hält (33).
Nach Roediger et al. (1990) kann man als Schwellenwert eine Konzentration der
Säuren im Gärrest von kleiner 500 mg HAcäq/l (gemessen als Essigsäureäquivalent)
ansehen, der bei einem gut intensivierten Prozess üblicherweise bereits bei
Verweilzeiten von 10 Tagen und mesophilen Temperaturen unterschritten wird. Man
muss aber berücksichtigen, dass bei höheren Feststoffgehalten im Substrat auch
etwas höhere Säuregehalte vorkommen können, ohne dass dies eine schlechtere
Vergärung bedeutet.
Nach Aschmann et al. (2007) soll die Konzentration einzelner flüchtiger Fettsäuren
im Bereich von 600-1500 mg/l liegen. Welliger et al. (1991) berichteten, dass im
oberen Bereich der Belastbarkeit sich die Säurewerte im Fermenter denen der
Frischgülle angleichen, wobei die Konzentration der flüchtigen Säuren rund 3000 bis
10000 mg/l beträgt. Sie berichteten ebenso, dass bei einem stabilen anaeroben
Prozess die Säuren praktisch vollständig umgesetzt werden, so dass ihre Summe im
ausgegorenen Material weniger als 1000 mg/l beträgt. Nach Scholwin et al. (2009)
können verzweigte Fettsäuren schon ab 50 mg/l (Iso-Buttersäure) hemmend wirken.
Bei längerkettigen Fettsäuren (C12 bzw. C18) wurde eine hemmende Wirkung bereits
ab 1,2 mM beobachtet.
Das plötzliche Absinken der Gasproduktion und der Anstieg der Säurekonzentration
(vor allem Propionat bzw. Propionsäure) sind früh ansprechende Indikatoren, welche
den Beginn eines instabilen Gärverlaufes anzeigen. Kritisch wird die Gärung, sobald
sich Propionsäure anhäuft. Parallel dazu ist in den meisten Fällen bereits ein
Rückgang der Gasproduktion zu beobachten. Zudem kann infolge der vermehrten
Produktion oberflächenaktiver Fettsäuren eine zum Teil intensive
Schaumentwicklung auftreten (16). Wellinger et al. (1991) haben ebenso berichtet,
dass der Zusammenbruch des Prozesses durch einen hohen Säuregehalt (ab etwa
15.000 mg/l) gekennzeichnet und mit einem steigenden CO 2-Anteil im Biogas bei
sinkender Gasproduktion und fallendem pH-Wert verbunden ist.
Obwohl weitere Studien (40), (41) zeigen, dass Essigsaüre mit mehr als 73 Vol.-%
des produzierten Methans die Hauptquelle der Methanproduktion ist und damit sie
eine wesentliche Leistung hat, kann sie nach Zhou et al. (2011) bei hohen
Konzentrationen einen Inhibitor der Methanproduktion darstellen. Sie fanden ebenso,
dass der Hemmefekt bei sinkendem Inokulum/Substrat-Verhältnis zunimmt und die
Erhöhung der Essigsäurekonzentration dabei auf den Kohlenhydratgehalt des
Substrates zurückgeführt werden kann. Zusätzlich behaupteten Mizuno et al. (1981)
zit. nach Zhou et al. (2011), dass eine steigende Kohlenhydratkonzentration deutlich
die produzierte Menge an Wasserstoff und Acetat erhöht.
Mawson et al. (1991) zit. nach Zhou et al. (2011) stellten fest, dass höhere Mengen
von 17 mM (1020,88 mg/l) Essigsäure die Methanproduktion inhibieren.
Folgende Maßnahmen wurden von Kroiss (1986) vorgeschlagen, um einer bereits

vorhandenen oder sich ankündigenden Hemmung der Methanbildung durch eine
erhöhte Saurekonzentration entgegenzuwirken:
- Rücknahme der CSB-Belastung (Säurebelastung) des Reaktors

- Erhöhung des pH-Wertes durch Zugabe von Neutralisationsmittel (Ca(OH)2,
Na2CO3, NaOH)
- Zugabe von Verdünnungswasser zur Verringerung der Säurekonzentration.
Nitrat- und Ammoniumstickstoff und Ammoniak
Nitratreiche Substrate können wegen des gebundenen Sauerstoffs zur Hemmung

der Methanbildung führen. Aus diesem Grund ist zunächst die Abspaltung des im
Nitrat gebundenen Sauerstoffs erforderlich (z. B. durch Denitrifikation) oder eine
zweistufige Betriebsführung einzusetzen, da damit die Mengen des gebundenen
Sauerstoffs direkt in der ersten Stufe verbraucht werden und somit die Methanstufe
nicht negativ beeinflusst wird. Eine Hemmung der hydrolysierenden bzw.
versäuernden Bakterien der ersten Stufe ist nicht anzunehmen (24).
Ammoniumion (NH4+) (auch als Ammonium bezeichnet) und freies Ammoniak (NH3)
sind die zwei Hauptformen von anorganischen Ammoniak-Stickstoff in wässriger
Lösung (42). Der Ammonium-Stickstoff (NH4+-N) ist ein sehr häufiges metabolisches
Endprodukt der anaeroben Vergärung von proteinhaltigen Substraten (wie z. B.
Gülle, angesiedelter Klärschlamm, Abwasser aus der Kartoffelstärkeindustrie, usw.)
und besitzt eine relativ hohe potentielle Toxizität für methanogene Bakterien (35). Er
wird entweder in g NH4+-N/l oder in mM (1 g NH4+-N/l = 71,4 mM NH4+-N) gemessen.
Das freie Ammoniak wird durch den Abbau stickstoffhaltiger Verbindungen, vor allem
von Proteinen und Harnstoff, freigesetzt und dient den Bakterien als Stickstoffquelle
(16). Bei der Analyse wird üblicherweise die Summe, NH4+ plus NH3, als
Gesamtammonium oder Gesamtammonium-Sticktoff (auch als Gesamtammoniak
oder Gesamtammoniak-Stickstoff bezeichnet) in g N/l or mmol N/l (auch in mM N)
bestimmt (43), (44), (45).
Hohe Ammoniumkonzentrationen im Substrat können erhebliche Toxizitätsprobleme

beim anaeroben Abbauprozess verursachen (24). Von den vier
Mikroorganismenarten der vier Phasen des anaeroben Prozesses sind die

Methanbakterien diejenigen, die am wenigsten tolerant gegenüber dem
Gesamtammonium-Stickstoff sind (46). Bezüglich der Methanbakterienarten liegen
widersprüchliche Informationen über die Empfindlicheit der acetotrophenen (Acetat
und Essigsäure verbrauchende Bakterien) und der hydrogenotrophenen (Wasserstoff
verbrauchende Bakterien) Methanogenen vor. Während einige Autoren (35), (47),
(48), (49) auf Basis des Vergleiches von Methanproduktion und Wachstumrate
darauf hingewiesen haben, dass die hemmende Wirkung im Allgemeinen stärker für
die Acetotrophen als für die Hydrogenotrophen ist, haben andere Autoren (50), (51)
einen relativ höheren Widerstand zum Gesamtammoniak-Stickstoff von den Acetat
verbrauchenden als von den Wasserstoff verbrauchenden Methanogenen
beobachtet.
In Abhängigkeit von pH-Wert und Temperatur kann Ammonium und das damit in
Gleichgewicht stehende Ammoniak zu einem wesentlichen Hemmfaktor für die
methanogenen Mikroorganismen werden (2). Die versäuernden Mikroorganismen
werden in ihren Abbaureaktionen hingegen (wie beim Sauerstoff und Nitrat) kaum
beeinträchtigt (52).
Mit Wasser bildet Ammoniak das von Temperatur und pH-Wert o. g. abhängige
Gleichgewicht (16). Für die Hemmwirkung ist vornehmlich der undissoziierte (un-
ionisierte) Anteil, also das nicht in Ionen zerfallene freie Ammoniak, verantwortlich.
Das chemische Gleichgewicht
NH4+ ← → NH3 + H+
ist (wie beim H2S und bei den organischen Säuren) stark vom pH-Wert abhängig
(24). Eine Erhöhung von pH-Wert und/oder Temperatur verschiebt das Gleichgewicht
zugunsten des freien Ammoniaks (16).
Da mit zunehmender Ammoniumkonzentration der pH-Wert steigt, wirkt sich dies
zunächst stabilisierend auf den Anaerobprozess aus. Bei einem weiteren Anstieg der
Ammoniumkonzentration nimmt, in Verbindung mit der daran gekoppelten pH-Wert-
Anhebung, die Toxizitätsgefahr von Ammoniak durch den absoluten und den
prozentualen NH3-Anstieg verstärkt zu. Die Folge ist eine Hemmung der Essigsäure
abbauenden Methanbakterien und eine Zunahme der Säurekonzentration. Nach
einer ersten Erhöhung aufgrund der Ammoniumzunahme sinkt dann der pH-Wert
wieder. Das NH4+/NH3-Verhältnis verändert sich zugunsten des dissoziierten NH4+-N
Anteils. Das bedeutet, dass eine kurzfristige Toxizität des Ammoniaks durch
selbständige Regulation wieder normalisiert wird (24).
Nach Koster (1986) kann ein hoher pH-Wert, der toxische Konzentrationen des un-
ionisierten freien Ammoniaks während des Anpassungszeitraums der Bakterien
verursacht, zu einer verringerten maximalen spezifischen methanogenen Aktivität der
adaptierten Biomasse führen, was eine Anhäufung von Fettsäuren und eine
Absenkung des pH-Wertes verursachen kann (pH-Wert < 6 ist fatal für die
Methanbakterien). Ein niedriger pH-Wert während des Anpassungszeitraums führt
auch zu einem verzögerten Abbau von Propionsäure, wahrscheinlich aufgrund der
Hemmung der Wasserstoff verbrauchenden methanogenen Bakterien durch
undissoziierte flüchtige Fettsäuren, aber dieser führt nicht zu einer verminderten
maximalen spezifischen methanogenen Aktivität in adaptierter Biomasse.
Die Wechselwirkung zwischen freiem NH3, Fettsäuren und pH-Wert kann zu einem
"inhibited steady state" führen, einem Zustand, in dem der Prozess stabil ist, aber mit
einer geringeren Methanausbeute (47), (53).
Die verschiedenen Parameter, die zu einer Hemmung durch Gesamtammoniak-

Stickstoff im anaeroben Prozess führen können, können dann wie folgt
zusammengefasst werden: Gesamtammoniak-Sticksoffkonzentration, pH-Wert,
Temperatur, Adaptation der Bakterien, Anwesenheit von anderen Ionen und nach
Zhou et al. (2011) kann das Inokulum/Substrat-Verhältnis auch ein Einflussfaktor
sein.
Ein breites und teilweise widersprüchliches Intervall von hemmenden

Gesamtammoniak-Konzentrationen ist in der Literatur berichtet worden (54), (55),
(45), (50), (56), (57), (43), (47), (58), (46), (49), (59), (60), (61). Allerdings wird die
inhibitorische Gesamtammoniakkonzentration, die 50 % Reduktion der
Methanproduktion verursacht, im Intervall von 1,7 bis 14,0 g N/l zusammengefasst.
Der signifikante Unterschied ist auf die Unterschiede in den verwendeten Substraten
und Inokula, Umgebungsbedingungen (Temperatur und pH-Wert) und Adaptation der
Methanogenen zurückzuführen (54), (56), (58).
McCarty (1964) zit. nach Hashimoto (1983) berichtete, dass die Hemmung bei einer
Gesamtammoniak-Stickstoffkonzentration (NH4+ plus NH3) zwischen 1,5 und
3,0 g N/l beim pH-Wert über 7,4 bis 7,6 und die Toxizität bei Konzentrationen über
3,0 g N/l eintreten. Nach Hashimoto (1986) begann eine Hemmung bei einer
Gesamtammoniak-Stickstoffkonzentration von etwa 2,5 g N/l für thermophile und
mesophile Fermentationen, die nicht an hohen Gesamtammoniakkonzentrationen
zuvor adaptiert worden waren und bei etwa 4 g N/l für thermophile Fermentationen,
die an Gesamtammoniakkonzentrationen zwischen 1,4 und 3,3 g N/l zuvor
angepasst worden waren. Beginnend bei einer Gesamtammoniakonzentration von
ungefähr 700 mg N/l verringerte sich nach Koster und Lettinga (1984) die maximale
spezifische Aktivität von Methanbakterien bei zunehmender
Ammoniakkonzentrationen. Nach diesen Autoren und nach Van Velsen (1981) hört
die Methanogenese bei nicht adaptiertem methanogenen Bakterienschlamm auf,
wenn die Gesamtammoniak-Konzentration auf etwa 1,7-2,0 mg N/l angehoben
wurde. In weiteren Vergärungsversuchen mit Kartoffelsaft mit granulärem Schlamm
beobachteten Koster und Lettinga (1988), dass die adaptierte Methanogenese noch
bei 11,8-16 g Gesamtammoniak-Stickstoff pro Liter laufen konnte. Ab 16 g/l wurde
dann die Methanogenese Null. Beim Rückgang der Konzentration des
Gesamtammoniaks konnten diese Autoren aufgrund eines guten Verhältnisses
zwischen der Gesamtammoniakkonzentration und der methanogenen Aktivität noch
bestätigen, dass die Toxizität des Gesamtammoniaks reversibel ist.
Bei abnehmendem Inokulum/Substrat-Verhältnis wurden von Zhou et al. (2011)
höhere Gesamtammoniakkonzentrationen festgestellt. Diese Tatsache war
vorhersehbar, da es allgemein bekannt ist, dass einige organische
Stickstoffverbindungen (hauptsächlich Eiweiß und Harnstoff) zu Gesamtammoniak
bei der anaeroben Vergärung umgewandelt werden.
Nach Kroiss (1986) sowie Koster und Lettinga (1983), beide Referenze zit. nach
Dauber (1993), wurden zulässige NH4+-N-Konzentrationen in Abhängigkeit von pH-
Wert und Temperatur festgestellt. Bei konstanter Temperatur und abnehmendem pH-
Wert sowie bei konstantem pH-Wert und abnehmender Temperatur nehmen die
Grenzen der kritischen NH4+-N-Konzentrationen im anaeroben Prozess zu. Bei einer
Temperatur von 38 ⁰C liegt z. B. die untere Konzentrationsgrenze ohne Hemmung
bei ca. 0,5 g NH4+-N /l, wenn der pH-Wert 8,0 beträgt, und die obere Grenze bei ca. 4
g NH4+-N/l, wenn der pH-Wert 7,0 beträgt. Bei einer niedrigen Temperatur (30 ⁰C)
liegt aber die untere Grenze ohne Hemmung bei ca. 1 g NH4+-N/l, wenn der pH-Wert
8,0 beträgt, und die obere Grenze bei ca. 6 g NH4+-N/l, wenn der pH-Wert 7,0
beträgt.
Durch einen Versuch bei 30±1 ⁰C mit methanogenem Schlamm hat Koster (1986)
beobachtet, dass bei zunehmendem Ammonium-Stickstoff die Methanogenese bei
1,9-2 g NH4+-N/l fast auf Nulll abgefallen war und nach der Adaptation der
Methanbakterien die Methanstufe erneut und sogar bei noch höheren NH 4+-N-
Konzentrationen aktiv war. Eine kinetische Analyse der Methanproduktion während
des Anpassungsprozesses der Methanbakterien zeigte, dass die Anpassung das
Ergebnis einer metabolischen Veränderung der bereits vorhandenen methanogenen
Bakterien anstatt des Wachstums neuer Bakterien war.
Nach Scholwin et al. (2009) sind NH4+-N-Konzentrationen zwischen 2,7 und 10,0 g/l
hemmend. Adaptierte Methanogene können aber bei relativ niedrigem pH-Wert bis
zu 30 g/l ertragen.
Nach den Versuchen von Hendriksen und Ahring (1991) begann eine Hemmung von
verschiedenen thermophilen H2-verbrauchenden Methanbakterien ab 3,0-4,0 g
NH4+-N/l (214-286 mM), und die Methanogenese sank bei 6,0 g NH4+-N/l (428 mM)
auf 50 %. Des Weiteren waren bei fast 9,0 g NH4+-N/l (643 mM) alle verwendeten H2-
verbrauchenden Methanbakterien sehr instabil oder ganz gehemmt.
Kroeker et al. (1979) und De Baere et al. (1984) beobachteten, dass freies
Ammoniak (anstatt des Ammoniumions) die Hauptursache für die Hemmung der
Methanogenese zu sein scheint, da es frei membran-permeabel ist. Das hydrophobe
Ammoniakmolekül kann passiv in die Zelle diffundieren und dadurch Protonen-
Unausgeglichenheit und/oder Kaliummangel verursachen. Van Velsen (1981) sowie
Stevens und Schulte (1979) zit. nach Hashimoto (1983) haben ebenso die niedrigere
Gasproduktion auf die Hemmung durch freien Ammoniak zurückgeführt. Koster und
Koomen (1988) haben danach bestätigt, dass NH3 ein stärkerer Inhibitor als NH4+ ist.
Da die freie Ammoniakkonzentration zunimmt, wenn Temperatur und pH-Wert
zunehmen, wird dann erwartet, dass mehr freies Ammoniak bei höheren
Temperaturen vorliegen würde. Van Velsen (1981) hat bei einer
Gesamtammoniakkonzentration von 3,5 g N/l und einem pH-Wert von 8 eine freie
Ammoniakkonzentration von 0,97 g N/l (28 Mass.-%) bei 55 ⁰C im Vergleich zu
0,26 g N/l (7,43 Mass.-%) bei 35 ⁰C beobachtet. Daher ist er zu der Aussage
gekommen, dass die Hemmwirkung von Gesamtammoniak-Stickstoff erheblich
größer unter thermophilen als unter mesophilen Temperaturen ist.
Nach Angelidaki und Ahring (1994) führt eine erhöhte Prozesstemperatur im
Allgemeinen zu einem positiven Effekt auf die Stoffwechselrate der Bakterien, aber
andererseits zu einer höheren Konzentration an freiem Ammoniak, was bei hohen
Gesamtammoniakkonzentrationen einen negativen Effekt auf den Prozess haben
kann. Aus der Erhöhung der Ammoniak-Hemmung mit der Temperatur würden in der
Regel höhere Fettsäurenkonzentrationen bei thermophilen als bei mesophilen
Vergärungstemperaturen folgen. Zeeman et al. (1985) hatten ebenso höhere
Fettsäurenkonzentrationen bei thermophilen Vergärungstemperaturen im Vergleich
zu den mesophilen beobachtet. Bei ihren Versuchen beobachteten sie, dass höhere
Gesamtammoniakkonzentrationen eine Reduktion der maximalen tolerierbaren
Temperatur zur Folge hatten. Niedrige Prozessleistung wurde beobachtet, wenn aus
der Kombination Temperatur-Gesamtammoniak eine berechnete Konzentration von
ionisiertem freien Ammoniak höher als ca. 0,7 g N/l bei einer Verweilzeit von 15
Tagen erfolgte. Wenn die Gesamtammoniakbelastung noch hoch war, führte eine
Absenkung der Temperatur unter 55 ⁰C zu einer Zunahme der Biogasausbeute und
einer besseren Prozessstabilität, welche durch eine Absenkung der Konzentration
von flüchtigen Fettsäuren im Abfluss gekennzeichnet wurde.
McCarty und McKinney (1961) berichteten, dass eine Gesamtammoniaktoxizität bei
freiem Ammoniakkonzentration von 150 mg/l auftritt. Nach Van Velsen (1981) muss
ab einer NH3/NH4+ Gesamtkonzentration von ca. 3000 mg/l mit einer beginnenden
Hemmung gerechnet werden. Durch gute Adaptation ist es jedoch möglich, eine
Bakterienflora zu erhalten, die selbst bei Ammoniakkonzentrationen von 5000 mg/l
zufriedenstellend arbeitet. Allerdings wird es nach Liu und Sung (2002) zit. nach
Chen (2008) allgemein angenommen, dass Ammoniak-Konzentrationen unter 200
mg/l positiv für den anaeroben Prozess sind, da Stickstoff ein wichtiger Nährstoff für
die anaeroben Mikroorganismen ist. Nach Scholwin et al. (2009) ist auch Ammoniak
ab150 mg/l hemmend.
Nach Wellinger et al. (1991) kommen als Gegenmaßnahmen bei einer Hemmung
eine Verdünnung des Substrats sowie eine Senkung von Temperatur und pH-Wert in
Frage.
McCarty und McKinney (1961) sowie weitere Autoren (55), (43) haben bestätigt,
dass bestimmte Ionen wie Ca2+, Na+ und Mg2+ sich antagonistisch zur
Gesamtammoniakhemmung erwiesen haben. Das ist ein Phänomen, bei dem die
Toxizität eines Ions durch die Gegenwart von anderem(n) Ion(en) verringert wird.
Nach Krylova et al. (1997) kann das Kaliumion K+ auch antagonistisch zur
Gesammoniakhemmung wirken. Bei ihren Versuchen haben sie auch beobachtet,
dass die Hemmung mit mehr als 50 g/l NH4+Cl (13 g NH4+-N) irreversibel war, da
diese mit weiterer Zugabe von Phosphorit (darin K+, Ca2+ und Mg2+) nicht eliminiert
werden konnte (59). Andere Autoren (62) haben Zeolith (darin verschiedene
Mineralien) gegen die Ammoniakhemmung verwendet. Der Zeolith wirkte in
gewissem Maße der hemmenden Wirkung von Ammoniak entgegen. Nach Scholwin
et al. (2009) kann Ammonium je nach Organismen eine Wechselwirkung mit Ca 2+
oder Na+ haben.
Schwermetalle
Schwermetalle wirken nicht grundsätzlich toxisch, sondern können in geringen

Konzentrationen auch als wichtige Nährstoffe stimulierend auf die
Mikroorganismenaktivität einwirken. Die Grenzen zwischen Stimulation, Hemmung
und Toxizität sind je nach Metallart und –konzentration sowie den chemischen und
physikalischen Milieubedingungen (pH-Wert und Redoxpotential) stark differierend.
Je nach Herkunft schwanken die Konzentrationen in den Ausgangssubstraten. Auch
Schlämme aus der Behandlung von industriellen und gewerblichen Abwässern
können mit verschiedenen Schwermetallen belastet sein (24).
Bei organischen Abfällen kommen diese aufgrund externer Einflüsse wie
Medikamente, Antibiotika, Nahrungsmittel usw. vor. In Tab. 2.9 sind, soweit Daten
vorliegen, die Gehalte an Schwermetallen in verschiedenen Ausgangssubstraten
zusammengefasst (13).
Sterritt und Lester (1990) zeigten, dass sich Schwermetalle in toxischen
Konzentrationen anreichern können, da sie im Gegensatz zu vielen anderen
toxischen Substanzen biologisch nicht abbaubar sind.
Nach Valle und Ulner (1972) ist die toxische Wirkung durch eine Störung der
Enzymfunktion und –struktur gekennzeichnet. Diese entstehen durch die Bindung
der Metalle mit Thiolen und anderen Gruppen von Proteinmolekülen oder durch
Ersetzen der natürlich vorkommenden Metalle in den prothetischen Gruppen des

Enzyms. Nach Zayed und Winter (2000) wird allgemein angenommen, dass
Acidogene widerstandsfähiger gegen Schwermetalltoxizität sind als Methanogene.
Tab. 2.9: Schwermetallgehalte in Ausgangssubstraten (mg/kg TM) (13)
Ausgangssubstrat Cadmium (Cd) Chrom (Cr) Kupfer (Cu) Quecksilber (Hg) Nickel (Ni) Blei (Pb) Zink (Zn)
Landwirtschaftliche
Einsatzsubstrate
Rindergülle 0,3-0,5 8 38 6 7 230
1)
Rindergülle (n = 35) 0,1-0,4 3-8 25-80 0,005-0,005 3-8 8-16 139-608
1)
Schweinegülle (n = 25) 0,1-0,5 5-18 136-766 0,005-0,01 6-17 13-22 497-1.802
2)
Schweinegülle Mast (n = 132) 0,4 (0,2- 0,6) 12 (4-27) 337 (156- 709) 0,03 (0,01-0,05) 13 (7-22) 3,3 (2-6) 1124 (486-2000)
2)
Schweinegülle Zucht (n = 115) 0,4 (0,2-0,7) 12 (4-23) 517 (84-1178) 0,03 (0.01-0,06) 12 (5-24) 4,7 (2-9) 1390 (313-2543)
Hühnergülle 0,2-0,3 <1-7,7 48-78 7-9 6-8,4 330-450
Rindermist 0,4 20 39 10 7 213
Schweinemist 0,4 11 740 13 - 1,2
Hühnermist +) 1,6 26,9 992,0 0,2 38,1 11,1 1.756,3
Kartoffelkraut - - 11,5 - - 78
Rübenblatt 0,2 <1 10 5 0,5 28
Getreidestroh 0,2 - 4-8 - 18 20-80
Maisstroh 0,1-0,4 - 7-22 - 6-33 30-70
Reststoffe aus der Industrie
Apfeltrester 0,3 1,6 7,8 - - 3,4 6,7
Obsttrester 0,11 0,06,12 7,8-30 0,06 3-21 0,7-3 25-30
Rebentrester 0,03-0,5 5 150 0,01 2,5 - 58-75
Biertreber 0,2 0,5 34,2 0,04 2,5 0,4 88
Traubenkernmehl 0,03 6,3 52,2 - 3,4 1,8 16,9
Filtrationskieselgur (Bier) 0,3-0,5 7,4-16 2,8-4,9 0,02 5-16,4 0,1-3,4 27-28
Gemüseabfälle 0,3-0,8 1-18,5 4,4-15 0,007 2,2-7,8 1,0-4,3 17-41
Ölsaatenschrot 0,1-0,3 0,5-2 5,-44 0,005 0,8-6 0,3-1 42-99
Rapsschrot 0,09 0,6 5,3 - 5,0 0,9 65,7
Rizinusschrot 0,05-0,2 1,1-2,5 15-26 0,02 1,3-5,5 1-1,5 48-116
Vinasse 0,3 1,22 2,4 0,02 5,5 2,2 22
Einsatzstoffe nach der
Nebenprodukte-VO
Blutmehl 0,1 4 28,3 - 0,2 2,5 36
Panseninhalt (unbehandelt) 2 33 5-99 - 20 20 71-321
Panseninhalt (n = 2) <0,2 2,0-3,2 14 0,02-0,03 1,5-1,6 <1-1,2 83
Speisereste, Großküchen (n = 10) 0,04-0,1 0,5-19 3,7-23 0,03 0,4-7,8 1,2-2,6 27-120
Speiseabfälle (n = 2) <0,2 1,7-2,5 8,7-9,8 0,02-0,09 <1-1,2 <1,3-2,6 47-48
Kommunale und gewerbliche
Reststoffe
Bioabfall 0,3-0,6 7-25 14-21 - 5,5-10 - 88-105
Bioabfall (n = 10) <1-0,4 10-36 16-92 0,7-0,12 6-17 13-91 81-269
Grünschnitt 0,7-2,1 4-9 10-20 - 1-9 70 8
Grünguthäcksel 0,2 (0,1-0,3) 8 (3-18) 10 (16-18) 0,03 (0,01-0,07) 4 (1-10) 9,6 (3,5-27) 54 (36-92)
Flotatschlamm - 39-80 - - - - 281-380
Fettabscheiderinhalt 0,03-0,5 2,3-30 4,8-70 0,02-0,6 0,7-40,5 1,5-27,8 26-155
1
) Untersuchungen BDF-Programm, 1999 Bayer. Landesanstalt für Landwirtschaft (5 %, 95 % Fraktilen) (Müller, 2005)
2
) Untersuchungen Güllemonitoring Forschungsprojekt LfL – TUM LS Tierhygiene „Überprüfung und Neubewertung von Wirtschaftsdüngern“
(Daten in „( )“ 5 %, 95 % Fraktilen) (Müller, 2006)
+
) Ergebnisse bezogen auf 30 % oTS
Die wesentlichen Faktoren, die die Schwermetallhemmung kontrollieren, sind nach

Chen et al. (2008) die chemische Form der Schwermetalle, ihre Konzentration und
die antagonistischen oder synergistischen Effekte zwischen diesen.
Bezogen auf die chemische Form können die Schwermetalle aufgrund der
Komplexität der anaeroben Vergärung in viele chemisch-physikalische Prozesse
einbezogen werden, wie z. B. die Fällung als Sulfid (außer Cr), als Carbonat oder als
Hydroxide (63); Sorption an festen Fraktionen (entweder an der Biomasse oder an
einem inerten Partikelmaterial) (64) und Bildung von Komplexen in einer Lösung mit
Zwischenprodukten oder mit aus der Fermentation anderen produzierten
Verbindungen (65), (66), (67), (68).
In der Fachliteratur sind sehr unterschiedliche Angaben über die schädlichen
Konzentrationen von Schwermetallen auf den anaeroben Abbauprozess zu finden. In
Tab. 2.10 sind Angaben verschiedener Autoren zusammengefasst.
Tab. 2.10: Schädliche Konzentrationen von Schwermetallen
Konzentrationen in mg/l
1 1
Schwermetall Hemmung Toxizität Hemmung2 Toxizität2 Hemmung3 Toxizität3
Kupfer (Cu) 150-250 300 40-250 170-300 40-250 170-300
Cadmium (Cd) - - 150-600 - - 20-600
Zink (Zn) ca. 150 250 250-400 250-600 150-400 250-600
Nickel (Ni) 100-300 500 10-300 130-500 10-300 30-1000
Blei (Pb) - - 340 340 300-340 340
Chrom III (Cr) 100-300 500 120-300 260-500 120-300 200-500
Chrom VI (Cr) ca. 100 200 100-110 200-220 100-110 200-420
1 2 3
Nach Köhler (1966), Nach Scherber und Steiner (1982), Nach Konzeli-Katsiri (1986); alle Referenzen zit. nach Dauber (1993)
Die große Variationsbreite der berichteten Konzentrationen (von bis zu mehreren

hundert mg/l) sowohl zur Hemmung als auch zur relativen Toxizität der
Schwermetalle werden nicht nur durch die Milieubedingungen, sondern auch durch
die Unterschiede in den Substraten und Bakteriengattungen erklärt (63), (65), (69),
(70), (71), (72).
Die relative Empfindlichkeit der Acidogenese und der Methanogenese gegenüber
Schwermetallen hängt von der betreffenden Säure (Produktion bzw. Abbau) ab. Bei
der Essigsäuresynthese gilt z. B. Cu > Zn > Cr > Cd > Pb > Ni mit Cu als das am
toxischsten und Ni als das am wenigsten toxische Schwermetall für Essigsäure
produzierende Organismen. Hingegen gilt bei der Produktion von n-Buttersäure Cu >
Zn > Cr > Cd > Ni > Pb mit Cu als das am toxischsten und Pb als das am wenigsten
toxische Schwermetall für n-Buttersäure produzierenden Organismen (73). Beim
Abbau von Fettsäuren in der Methanogenese gilt beim Essigsäure- und n-
Buttersäureabbau z. B. Cd > Cu > Cr > Zn > Pb > Ni und beim Propionsäureabbau
Cd > Cu > = Zn = Cr > Pb > Ni (74).
Die Störung des anaeroben Abbauprozesses durch überhöhte Metallkonzentrationen

äußert sich durch einen Rückgang der Gasproduktion. Mit der Inaktivierung bzw.
Vergiftung der Methanbakterien geht ein Anstieg der Konzentration an flüchtigen
organischen Säuren einher, was wiederum zu einer pH-Wert-Absenkung führt (24).
Die Schwermetalle können eine synergistische bzw. antagonistische Wirkung auf die
anaerobe Gärung haben. Nach Lin (1992, 1993) bilden viele Schwermetalle
synergistiche Mischungen wie Cr-Cd, Cr-Pb, Cr-Cd-Pb und Zn-Cu-Ni, während nur
wenige eine antagonistische Wirkung haben. Nach Babich und Stotzky (1983) wirkt
Ni synergistisch in den Mischungen Ni-Cu, Ni-Mo-Co und Ni-Hg und antagonistisch in
Ni-Cd, Ni-Zn. Ahring und Westermann (1985) bestätigten, dass Ni die Toxizität von
Cd und Cu verringert.
Weitere wesentliche Methoden zur Minderung der Schwermetalltoxizität sind Fällung,

Sorption und Chelatisierung durch organische und anorganische Liganden (75).
Sulfid ist in letzten Jahren der wichtigste Stoff zur Fällung von Schwermetallen
geworden (42). Nach Anderson et al. (1983) zit. nach Chen et al. (2008) sollten
allerdings Sulfide mit Vorsicht verwendet werden, da überschüssige Mengen
wiederum ein wichtiger Hemmstoff für Methanogene sein können. Ähnlich kann die
Sorption von Schwermetallen an Aktivkohle, Kaolin, Bentonit, Kieselgur und
Abfallstoffen wie Kompost und Abfall aus Cellulosefleisch ebenfalls die Hemmung
vermindern (76).
2.1.2 Beteiligte obligat und fakultativ anaerobe Mikroorganismen
Am anaeroben Abbauprozess sind drei unterschiedliche Bakteriengruppen beteiliegt.

In Tab. 2.11 sind diese nach den verschiedenen Abbaustufen zusammengefasst.
Der erste Abbauschritt wird von hydrolytischen Bakterien durchgeführt. Sie bilden
eine Mischkultur aus vorwiegend obligat, aber auch fakultativ anaeroben Bakterien.
Es können Konzentrationen von bis zu 10 8-109 Bakterien/ml (bei kommunalem
Faulschlamm) vorliegen (77). Zu diesen gehören Kohlenhydrat abbauende Bakterien
(cellulolytische, hemicellulolytische, pectinolytische und aminolytische), Eiweiß
abbauende Bakterien (proteolytische), Fett abbauende Bakterien (lipolytische) sowie
Bakterien, die in der Lage sind, Enzyme zum Aufschluss schwer abbaubarer Stoffe
zu synthetisieren und damit den Abbau dieser Stoffe zu ermöglichen.
Tab. 2.11: Unterteilung der Bakteriengruppen (14), (78), (79)
Hydrolytische Bakterien Fermentative und acetogene Bakterien Methanbakterien

GENUS SPEZIES GENUS SPEZIES GENUS SPEZIES
Cellulolytische (Cellulose- u. Stärkeabbau) Acetobacterium A. woodii Ordnung: Methanobacteriales
Cillobacterium C. cellulosolvens Acetohalobium A. arabaticum Familie: Methanobacteriaceae
Clostridium C. thermocellum Bacillus Bacillus sp. Methanobacterium M. fomicicum*
C. loch headii Bacteroides B. ruminocola M. bryantii
Butyrivibrio B. fibrisolvens* Clostridium C. acetium Methanothermobacter M. thermoautotrophicus (M. thermoformicicum)
Bacteroides (Fibrobacter) B. succinogenes* Desulfotomaculum Desulfotomaculum sp. Methanobrevibacter M. ruminantium*
Eubacterium E. cellulosolvens* Desulfhovibrio Desulfhovibrio sp. M. arboriphilus
Ruminococcus R. albus* Lactobacillus L. vitulinus (Zuckerfermentierer)* M. smithii
R. flavefaciens (auch Glucoseabbau)* L. ruminus (Zuckerfermentierer)* Methanosphaera M. stadtmanae
Hemicellulolytische (Hemicelluloseabbau) Haloincula H. saccharolytica Ordnung: Methanococcales
Butyrivibrio B. fibrisolvens* Megasphaera M. elsdenii (Amoniakhersteller)* Familie: Methanococcaceae
Bacteroides B. ruminicola* Moorella M. glycinii Methanococcus M. vannielii
Lachnospira L. multiparus Propionibacterium Propionibacterium sp. M. voltae
Ruminococcus Ruminococcus sp.* Selenomonas S. ruminantium* M. maripaludis
Pectinolytische (Pectinabbau) S. lactilytica Ordnung: Methanomicrobiales
Butyrivibrio B. fibrisolvens* Synthrophobacter S. wolonii (Propionsäureabbau) Familie: Methanomicrobiaceae
Bacteroides B. ruminicola* Treponema T. briyantii (Zuckerfermentierer)* Methanoculleus M. thermophilus
Lachnospira L. multiparus* Veillonella V. gazogenes M. marisnigri
Streptococcus S. bovis* V. alacalescens Methanomicrobium M. mobile*
Succinivibrio S. dextrinosolvens* Methanogenium M. cariaci
Treponema Treponema sp.* Familie: Methanospirillaceae
Amylolytische (Stärkeabbau) Methanospirillum M. hungatei
Clostridium C. butyricum Ordnung: Methanosarcinales
C. aminophilum Familie: Methanosarcinaceae
Bacillus Bacillus sp. Methanosarcina M. barkeri*
Bacteriodes B. ruminicola (Amoniakhersteller)* M. thermophila
B. amylophilus* Familie: Methanosaetaceae
Butyrivibrio B. fibrisolvens Methanosaeta M. concilii (Methanothrix soehngenii)
Lachnospira L. multiparus M. harundinacea
Mikrococcus Mikrococcus sp. M. thermophila
Pseudomonas Pseudomonas sp.
Prevotella P. ruminicola
Ruminobacter R. amylophilus*
Streptococcus S. bovis*
Succinivibrio S. dextrinosolvens*
Succinomonas S. amylolytica
Proteolytische
Clostridium C. sporogenes
C. sticklandii*
Bacillus B. licheniformis
Bacteroides B. amylophilus*
B. ruminicola (Amoniakhersteller)*
Butyvibrio B. fibrisolvens*
Bifidobacterium Bifidobacterium sp.
Eubacterium rumiantium E. ruminantium*
Peptococcus P. anaerobus,
Prevotell P. ruminicola*
Ruminobacter R. amylophilus*
Staphylococcus Staphylococcus sp.
Streptococcus S. bovis*
Wolinella W. succinogenes*
Lipolytische
Anaerovibrio A. lypolitica*
Alcaligenes Alcaligenes sp.
Bacillus Bacillus sp.
Butiryvibrio Butiryvibrio sp.*
Micrococcus Micrococcus sp.
Pseudomonas Pseudomonas
Selemonas S. ruminantium (Vitamin- u. Amoniakhersteller)*
von schwer abbaubaren Stoffen
Clostridium C. butyricum
C. pasteurianum
Citrobacter C. freundii
Micrococcus
Aerobacter
Alcaligenes
Flavobacterium
Pseudomonas
* Bakterien in Pansensaft
Zu den acetogenen Bakterien gehören sowohl obligat (wie Synthrophobacter wolii)

als auch fakultativ anaerobe (wie Desulfovibrio) acetogene Organismen. Diese sind
H2-Produzenten und können nur in Symbiose mit Methanbakterien (H 2-Verbraucher)
leben. Alle bisher bekannten acetogenen Spezies haben eine sehr lange
Generationszeit (z. B. bei Buttersäure-Verwerter 84 h) (14).
Die methanogenen Bakterien vollziehen den letzten Stoffwechselschritt von Acetat,

H2 und CO2 zu CH4. Sie wurden in drei Ordnungsgruppen und vier Familien
gegliedert. Sie sind morphologisch sehr unterschiedlich (Stäbchen, Kokken, Spirillen

und Sarcinen) und zählen (in Reinkultur) zu den sauerstoffempfindlichsten Keimen,
die bisher bekannt sind. Zum Wachstum wird ein sehr niedriges Redoxpotential von
mindestens -330 mV benötigt. Sie können in Gemeinschaften (Biozönosen) in Form
von Pellets oder Flocken (stäbchen- oder kokkenförmige Methanbakterien) in
anaeroben Schlämmen leben. Verschiedene Monokulturen (wie Methanosarcinen)
sowie stäbchen- und fadenförmig freischwebende Methanbakterien variieren ebenso
je nach Schlammart (14).
2.2 Anaerob-biologische Abbaubarkeit der organischen Substanz

zur Bestimmung des Biogaspotentials
Die biologische Abbaubarkeit bezeichnet die Eigenschaft eines Stoffes, in eine

einfachere chemische Struktur durch mikrobiellen Abbau umgesetzt zu werden (80).
Die anaerobe Behandlung organischer Abfälle wird häufig in Frage gestellt, da viele
Inhaltsstoffe nicht oder nur schwer biologisch abbaubar sind. Einige Abfälle können
Stoffe enthalten, die toxisch für Methanbakterien und weitere Mikroorganismen
wirken.
In der Vergangenheit war es schwierig, die Ursachen von Prozesstörungen aufgrund
der Komplexität der anaerob zu behandelnden Stoffe zu identifizieren. Andere
Schwierigkeiten verursachen auch die Bestimmung einer Vielzahl potentieller
Inhibitoren sowie die bislang unbekannten Wechselwirkungen zwischen den
Inhibitoren, anderen Substratbestandteilen und den Methanbakterien. Darüber
hinaus war es schwer zu unterscheinden, welche Betriebsstörungen durch toxische
Stoffe oder durch technische Bemessungs- oder Betriebsfehler verursacht wurden.
Die anaerobe Abbaubarkeit eines Stoffes zur Überprüfung seiner
Umweltverträglichkeit ist ebenfalls wichtig, weil die meisten hergestellten
Chemikalien zu anoxischen Lebensräumen gelangen. In einigen Fällen verbleiben
sie dort für einen längeren Zeitraum. Dabei kann es sich um Sedimente, anaerobe
Abfallbehandlungssysteme, Gastrointestinaltrakte, schlecht entwässerte oder
überflutete Böden oder Deponien oder Grundwasserquellen handeln (81).
Es gibt verschiede Methoden zur Evaluierung der biologischen Abbaubarkeit. Dazu

hat die Organisation für wirtschaftliche Zusammenarbeit und Entwicklung (OECD)
unterschiedliche Methoden standardisiert. Nach ihrem Evaluierungsprinzip sollte die
biologische Abbaubarkeit eines Stoffes durch drei aufeinander folgende Prüftests

ermittelt werden, d. h. ein Test zur Bestimmung der leichten Abbaubarkeit und je
nach Ergebnis, ein weiterer Test zu Bestimmung der inhärenten Abbaubarkeit und
abschließend ein Test zur Simulation der Abbaubarkeit (82).
Gemäß OECD ist der Test zur Evaluierung der anaeroben Bioabbaubarkeit ein
Simulationstest, bei dem das Ausmaß und die Geschwindigkeit des biologischen
Stoffabbaus durch die Quantifizierung des Drucks des produzierten Biogases (im
Wesentlichem CO2 und CH4) berechnet werden. Als Kontrolle sollten biologisch leicht
abbaubare Referenzsubstanzen verwendet werden.
Owen et al. (1979) erstellten die erste Beschreibung einer solchen Prüfmethode auf
Basis früherer Methoden zur Gasmessung in Inkubationsflaschen.
Die Messung der Überschussgasmenge (CH4 + CO2) nach der Zugabe einer
Prüfsubstanz zum anaeroben Inokulum, das in gasdichten Flaschen inkubiert wurde,
lag der Methode zugrunde.
Das Gasvolumen wird durch die Verschiebung des Kolbens einer Glasspritze, deren
Nadel in die Flasche eingelegt wurde, gemessen. Anschließend wurde diese
Methode verbessert mit dem Ziel, ein einfaches Protokoll zu erstellen, so dass sie
von der „American Society for Testing Materials (ASTM)“ als Standardmethode
etabliert werden konnte. Die Verwendung eines Druckwandlers, um den Gasdruck zu
messen, wurde später eingeführt. 50 mg Kohlenstoff pro Liter als chemische
Testkonzentration und 10 Vol.-% Faulschlamm als Inokulum wurden ebenso
empfohlen (81).
In der zweiten Phase der vorliegenden Forschungsarbeit wurde die von Owen et al.
(1979) eingeführte Standardmethode zur Evaluierung des anaeroben Abbaus und
des Biogaspotentials der verwendeten organischen Stoffe eingesetzt (mit
Durchstechflaschen von 125 ml).
2.3 Einfluss von Enzymen
2.3.1 Grundlagen von enzymatischen Reaktionen
Enzyme sind Proteine, die eine chemische Reaktion katalysieren. D. h. sie

ermöglichen, dass die Reaktion schneller und unter günstigeren Bedingungen abläuft
(83), (84). Die Geschwindigkeit einer entsprechenden enzymkatalysierten Reaktion

kann etwa um 10 Größenordnungen (1010) größer sein als die einer nicht
enzymkatalysierten Reaktion. Die Steigerung der Geschwindigkeit um den Faktor
1010 verkürzt die Halbwertzeit einer Reaktion von 300 Jahren auf eine Sekunde (14).
Die Reaktionsgeschwindigkeit kann sogar um einen Faktor von 1017 erhöht werden.
Die unkatalysierte Decarboxylierung von Orotidin 5'-Monophosphat hat z. B. eine
Halbwertszeit von 78 Mio. Jahren. Allerdings, wenn das Enzym Orotidin 5'-Phosphat-
Decarboxylase (ein äußerst leistungsfähiges Enzym) hinzugefügt wird, dauert der
gleiche Prozess nur ca. 25 Millisekunden (85).
Aus lebenden Zellen hat man bisher über 2.000 Enzyme isolieren können. Für den
Abbau eines Stoffes ist das Zusammenwirken vieler Enzyme notwendig.
Bisher isolierte und identifizierte Enzyme enthalten meistens Protein (84). Enzyme
sind ihrem chemischen Aufbau nach Proteine und ihrer Funktion nach spezifische
biochemische Katalysatoren. Sie haben eine dreidimensionale Struktur, welche mit
ihrer katalytischen Wirkung unmittelbar verknüpft ist (14).
Einflussfaktoren auf die enzymatische Reaktionsgeschwindigkeit
Die Substanz, an der ein Enzym arbeitet, ist ein Substrat, und das Ergebnis dieser
Reaktion ist das Produkt. Die Enzymgeschwindigkeit ist von den
Lösungseigenschaften und der Substratkonzentration abhängig. Versuche haben
gezeigt, dass die Geschwindigkeit einer enzymatischen Reaktion direkt proportional
zu der Konzentration der Enzyme ist. Mit anderen Worten, je höher das
Enzymmolekül/Substratsmolekül-Verhältnis ist, umso höher ist die
Wahrscheinlichkeit eines Kontaktes zwischen den beiden Molekülen (84).
Bei konstanter Enzymmenge steigt die Reaktionsgeschwindigkeit direkt proportional
zur Substratkonzentration, bis sie sich bei einer Maximalgeschwindigkeit stabilisiert.
Bei diesem Wert verläuft die Kombination zwischen den Enzym- und
Substratmolekülen in kürzest möglicher Zeit (84).
Auch nimmt die Geschwindigkeit einer Reaktion mit steigender Temperatur zu.
Allerdings führt bei enzymatischen Reaktionen eine Temperaturerhöhung über ein
spezifisches Maximum hinaus zu einer Abnahme der Reaktionsgeschwindigkeit
wegen thermischer Denaturierung der Enzyme. Jedes Enzym hat einen spezifischen
optimalen Temperaturbereich (84).
Wie bei der Temperatur hat die Reaktionsgeschwindigkeit ein Maximum bei einem
optimalen pH-Wert. Nimmt der pH-Wert im Vergleich zum Optimum zu oder ab, sinkt
die Geschwindigkeit (84).
Mechanismus der Enzyme
Die katalytische Wirkung von Enzymen besteht aus zwei Vorgängen, zum einen die
Fixierung am Substrat und zum anderen die Aktivierung des Substratabbaus (84).
Obwohl die Stoffwechselprozesse energielieferende, exergone (Freisetzung von
Energie nicht in Form von Wärme oder Licht, sondern in Form von Arbeit) Prozesse
sind, laufen sie bei Zimmertemperatur nicht spontan ab. Bevor die Reaktion startet,
muss den Reaktionspartnern eine bestimmte Energie als Impuls zugeführt werden
(14). Diese so genannte Aktivierungsenergie kann durch einen katalytischen Agent
oder ein Enzym zugeführt werden (84). Diese Energie wird durch Enzyme
herabgesetzt (siehe Abb. 2.3), so dass die Reaktionen dann schon bei Temperaturen
um 20 ⁰C ablaufen können, obwohl, von den chemischen Gegebenheiten her
betrachtet, die Reaktionstemperaturen erheblich höher liegen müssten.
Abb. 2.3: Wirkungsweise eines Enzyms (86)
Dadurch treten in der lebenden Zelle keine unverträglichen Temperaturen auf (14).
Die Enzyme verbinden sich mit den Substraten und bilden einen Komplex. Damit
werden die Substrate schneller aufgespalten als ohne Enzym (84).
Die Abb. 2.4 zeigt die schematische Darstellung einer enzymatischen Reaktion. Das
Substrat S wird am aktiven Zentrum des Enzyms gebunden und geht eine lockere
Verbindung mit dem Enzym ein, den sogenannten Enzym-Substrat-Komplex. Dieser
Komplex zerfällt während der weiteren Reaktion in die Produkte und das Enzym.
Abb. 2.4: Schematischer Aufbau und Funktion eines substratspezifischen Enzyms (E = Enzym,
S = Substrat ) (14).
Der Enzym-Substrat-Komplex kann schematisch durch ein Positionierungsmodell

dargestellt werden (siehe Abb. 2.5).
Abb. 2.5: Schematische Darstellung eines Enzym-Substrat-Komplexes Komplexes (245)
Nach diesem Modell sind die Aminosäurereste eines zu spaltenden Substrats als P1,
P2, P3, P4... Pn in der Richtung des N-Terminals von der Spaltstelle und als P1', P2',
P3', P4'... Pm in der Richtung des C-Terminals bezeichnet.
Eigenschaften der Enzyme
Die Enzyme haben wie alle Katalysatoren folgende Eigenschaften:

- Sie wirken in geringen Konzentrationen.
- Sie gehen aus der Reaktion unverändert und unverbraucht hervor.
- Sie haben keinen Einfluss auf die Lage des Reaktionsgleichgewichtes, sondern
beschleunigen lediglich dessen Einstellung (14).
- Ihre Molekülstruktur ist komplex. Das Molekül liegt dreidimensional gefaltet vor,
so dass eine taschenartige Vertiefung entsteht, in der sich das aktive Zentrum
des Moleküls befindet.
- Sie sind reaktions- und substratspezifisch. Die Reaktion zwischen Enzym und
Substrat ist mit dem Schlüssel-Schloss-Prinzip vergleichbar. Nur ein ganz
bestimmtes Substrat passt in das aktive Zentrum des Enzyms. Für die Spezifität
ist ihre Strukturgeometrie verantwortlich (siehe Abb. 2.4).
- Sie können nach Induktion synthetisiert werden (Substrat- bzw. Enzym-
Induktion). Verschiedene Enzyme werden von der Zelle erst synthetisiert, wenn
das abzubauende Substrat angeboten wird.
Typen, Formen und Zustände der Enzyme
Anabolische Enzyme: Enzyme, die an aufbauenden Stoffwechselprozesse

arbeiten. Dabei wird Energieeinsatz notwendig.
Katabolische Enzyme: Enzyme, die an abbauenden Stoffwechselprozesse
arbeiten. Dabei wird Energie freigesetzt.
Proenzyme (auch Zyimogen): Inaktive Enzymvorstufen, d. h. Enzyme, die bei ihrer
Synthese inaktiv sind. Durch den Verlust des Molekülteils, der ihre katalytische
Tätigkeit blockiert, werden sie aktiviert (84).
Isoenzyme (auch Isozym): Formen eines Enzyms, die aus verschiedenen Genen
enstehen und sich in der Aminosäuresequenz unterscheiden, aber die gleiche
chemische Reaktion katalysieren.
Allozyme: Enzyme aus verschiedenen Allelen des gleichen Gens.
Apoenzyme: Proteinbestandteil eines Enzyms, das sich mit einem Coenzym
verbindet, um ein aktives Enzym zu bilden.
Coenzyme: Coenzyme sind im Gegensatz zu Enzymen keine Proteine, sondern
niedermolekulare organische Moleküle, deren katalytische Eigenschaften die
Reaktion zwischen Enzym und Substrat ermöglichen (87). Sie sind mit den Enzymen
mehr oder weniger fest verbunden und dienen zur Aufnahme und Weitergabe von
Bruchstücken der Substrate, z. B. von Wasserstoff, Carboxyl- und Aminogruppen
(14). Coenzyme sind stabil gegenüber höherer Temperatur. Sie können aber vom
Apoenzym durch thermische Trennung abgespaltet werden (84). Coenzyme können
von vielen Organismen nicht synthetisiert werden, sie müssen mit der Nahrung in
Form von Vitaminen aufgenommen werden (14).
Induzierbare Enzyme: Enzyme, deren Synthese durch die Anwesenheit einer
Substanz (Induktor) gestartet wird.
Multifunktionelle Enzyme: Enzyme, die verschiedene Reaktionen katalysieren
können.
Holoenzyme: Enzyme, die alle ihre Bestandteile, einschließlich der Coenzyme und
alle seine Untereinheiten besitzen.
Allosterische Enzyme: Enzyme, die zwei Bindungsstellen besitzen, eine (aktives
Zentrum) für das Substrat, die andere (allosterisches Zentrum) für Moleküle
(Effektoren: Aktivatoren und Inhibitoren). Sie ändern ihre Struktur bei der Bindung
eines allosterischen Effektors (siehe Abb. 2.6).
Allosteric
inhibitor
Allosteric
binding site
Abb. 2.6: Allosterische Reaktionen eines Enzyms (88)
Aktivatoren
Substanzen, z. B. anorganische Salze oder Ionen, die die Enzymaktivitäten einiger

Enzyme erhöhen. Die bekanntesten Aktivatoren sind: Eisen-, Kupfer-, Mangan-,
Magnesium-, Kobalt- und Zinkionen.
Im Prinzip kann ein Enzym mit spezifischen Ionen arbeiten, in Sonderfällen können
jedoch einige Ionen, ohne Störung der enzymatischen Tätigkeit, durch andere ersetzt
werden (84).
Amylasen benötigen z. B. Chloridionen und einige Dehydrogenasen Magnesium-,

Zink- oder Manganionen als Aktivatoren. Die Aktivität dieser Enzyme und damit die
Geschwindigkeit der Enzymreaktion nehmen mit steigender Konzentration der
Aktivatoren solange zu, bis die optimale Konzentration enzymaktivierender Ionen
erreicht ist. Eine weitere Erhöhung der Konzentration führt zu keiner weiteren
Erhöhung der Aktivität (14).
Verlauf und Geschwindigkeit einer enzymkatalysierten Reaktion
Die Grundlage für die Beschreibung des Verlaufes einer enzymkatalysierten

Reaktion ist die Theorie von Michaelis und Menten. Danach reagiert zuerst das
Substrat (S) mit dem Enzym (E) zum Enzym-Substrat-Komplex (ES), wobei sich
zwischen den Reaktionspartnern ein Gleichgewicht einstellt. Im nächsten Schritt
zerfällt der ES-Komplex in das Enzym und das Produkt (P).
k1 k3
E+S ← → ES → E + P
k2
Die Geschwindigkeit der Gesamtreaktion (k3) wird demnach durch die Konzentration
des ES-Komplexes bestimmt. Da der erste Schritt dem Massenwirkungsgesetz folgt,
(E)•(S)/(ES) = Km
ist die Konzentration des (ES)-Komplexes bei konstanter Enzymkonzentration (E)
von der Substratkonzentration (S) direkt abhängig. Daraus leitet sich die Michaelis-
Menten-Beziehung
v = vmax (S/(Km + S))
direkt ab, wobei die Konstante Km die drei Reaktionsgeschwindigkeiten k1, k2 und k3
zusammenfasst. Km ist keine absolute Konstante, sondern von pH, Temperatur u. ä.
abhängig. Misst man die Geschwindigkeit einer enzymatischen Reaktion und trägt
diese gegen die Substratkonzentration auf, so ergibt sich die in Abb. 2.7 dargestellte
Abhängigkeit der Reaktionsgeschwindigkeit von der Substratkonzentration.
Abb. 2.7: Graphische Darstellung der Michaelis-Menten-Beziehung (14).
Man erhält eine Kurve, die sich asymptotisch einer Parallelen zur x-Achse, nämlich
der maximalen Reaktionsgeschwindigkeit (vmax) nähert. Die Substratkonzentration
bei halbmaximaler Reaktionsgeschwindigkeit (1/2 vmax) wurde als Maß für die
Enzymaktivität definiert. Der Km-Wert (Michaelis-Menten-Konstante) gibt jene
Substratkonzentration S (in mol/l) an, bei der die Reaktionsgeschwindigkeit 1/2 vmax
ist oder bei der 50 % der aktiven Zentren des Enzyms vom Substrat belegt sind (89).
Ein kleiner Wert der Michaelis-Menten-Konstante bedeutet, dass bereits bei geringer
Substratkonzentration eine hohe Aktivität erreicht wird. Hohe Km-Werte weisen auf
geringe Enzymaktivitäten hin.
Gliederung der Enzyme
Enzyme werden häufig nach dem von ihnen katalysierten Stoffwechselschritt

benannt. Die Bezeichnungen tragen die Endung „-ase", z. B. spaltet „Amylase"
Stärke in Zucker (z. B. in einer Mälzerei) oder die „Urease" Harnstoff in CO2 und
Ammoniak. Das Nomenklaturkomitee der „International Union of Biochemistry and
Molecular Biology“ hat das „Enzym Commission Number“ (die EC-Nummern) als
Klassifikationssystem für Enzyme empfohlen. Damit werden die Enzyme nach ihren
chemischen Reaktionen, die sie katalysieren, aufgegliedert (90). Jedes Enzym wird
durch die Buchstaben „EC“ und eine Folge von vier Zahlen beschrieben. Die erste
Ziffer klassifiziert den Mechanismus:
- EC 1 Oxidoreduktasen
- EC 2 Transferasen
- EC 3 Hydrolasen
- EC 4 Lyasen
- EC 5 Isomerasen
- EC 6 Ligasen.
Oxidoreduktasen (EC 1) katalysieren Redoxvorgänge, wie sie z. B. in der

Atmungskette zur Energiegewinnung ablaufen. Die meisten Enzyme sind als
Dehydrogenasen bezeichnet (14), (91).
Transferasen (EC 2) katalysieren die Übertragung ganzer funktionalen Gruppen

(z. B. Amino-, Carboxyl-, Phosphatgruppen) von einem Substrat auf ein anderes
(14), (92) (z. B. Transesterasen, Transamidasen etc.). Viele Transferasen brauchen
für diese Reaktion ein Coenzym. Diese Enzyme oder ihre Coenzyme werden
kovalentweise von einem Teil der Substratmoleküle ersetzt (91).
Hydrolasen (EC 3) katalysieren die Hydrolyse von mehreren chemischen Bindungen,

d. h. die hydrolytische Trennung der Bindungen C-O, C-N, C-C, P-O und anderen
einfachen Bindungen (durch Wasserzugabe) (92). Hydrolasen katalysieren
Reaktionen folgender Art:
A–B + H2O A–OH + B–H
Die Hydrolasen greifen Glykosid-, Peptid- und Esterbindungen an. Bekannte

Hydrolasen sind: Esterasen (Fettspaltung), Proteasen (Eiweißspaltung) und
Amylasen (Verzuckern von Stärke) (14). Sie sind eine Sonderform der Transferasen,
der das Wasser als Rezeptor der transferienten Gruppe dient (91).
Da diese Enzyme die wichtigsten bei der Hydrolyse eines anaeroben Prozesses
sind, werden diese im Folgenden eingehender betrachtet:
Nach dem „Enzym Commission Number“ (1992) können Hydrolasen, basierend auf
den chemischen Bindungen, an denen sie angreifen, weiter in verschiedenen
Unterklassen unterteilt werden:
- EC 3.1: Esterases - Acting on ester bonds

- 3.1.1 Carboxylic-ester hydrolases – Acting on ester bonds at a
carboxilic group
- 3.1.2 Thioesterases – Acting on ester bonds at thiol group
- 3.1.3-8, 11, 13-16, 21-27, 30-31 (Nucleases, Phosphodiesterases,
Lipase, Phosphatase)
- EC 3.2: Glycosylases - Acting on sugars (DNA glycosylases, glycoside

hydrolase)
- EC 3.2.1: Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl
compounds
- EC 3.2.1.1-4, 10, 20, 21, 23, 33, 43: Glucosidases
- EC 3.2.2: Hydrolysing N-Glycosyl Compounds
- EC 3.3: Etherases – Acting on ether bonds
- EC 3.4: Peptidases – Acting on peptide bonds (proteases/peptidases)
- 3.4.1-4 (deleted sub-classes), 11-19 (aminopeptidases, dipeptidases,
omega peptidases etc.)
- 3.4.21 Serine endopeptidases
- 3.4.22 Cysteine endopeptidases (3.4.22.2 Papain)
- 3.4.23-25, 99 (Aspartic endopeptidases, Threonine endopeptidases
etc.)
- EC 3.5: Acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds
- EC 3.6: Acting on acid anhydrides (acid anhydride hydrolases, including
helicases and GTPase)
- EC 3.7: Acting on carbon-carbon bonds
- EC 3.8: Acting on halide bonds
- EC 3.9: Acting on phosphorus-nitrogen bonds
- EC 3.10: Acting on sulfur-nitrogen bonds
- EC 3.11: Acting on carbon-phosphorus bonds
- EC 3.12: Acting on sulfur-sulfur bonds
- EC 3.13: Acting on carbon-sulfur bonds
Lyasen (EC 4) spalten verschiedene Bindungen durch andere Prozesse als

Hydrolyse und Oxidation zur Bildung von „Ringen“ oder Doppelbindungen (91), (92).
In umgekehrter Richtung katalysiert eine Lyase die Anlagerung eines Substrats zu
einer Doppelbindung eines zweiten Substrats (91). Beispiele für Lyasen sind
Carboxylasen, Aldehydlyasen und Hydrolyasen.
Isomerasen (EC 5) katalysieren isomerische Umlagerungen von Gruppen innerhalb

von Molekülen. Sie verändern ihre atomare Struktur, aber nicht ihre atomare
Zusammensetzung. Beispiele davon sind Cis-Trans-Isomerasen (Umlagerung von
cis- in trans-Stellung), Epymerasen, Racemasen, intramolekulare Oxidoreduktasen,

Intramolekulare Transferasen etc. (91), (14), (92).
Ligasen (EC 6) bewirken eine kovalente Verbindung zweier Moleküle mit Hilfe der in
Form von Triphosphatnukleosiden gespeicherten Energie, z. B. von ATP (14), (91).
Beim anaeroben Abbau werden die wesentlichen organischen Stoffe durch

verschiedene Enzyme gespalten und unter Mitwirkung weiterer Enzyme der
Bakterienzelle verfügbar gemacht. Kohlenhydrate (Polysaccharide) werden z. B.
durch Amylasen oder Cellulasen in niedermolekulare Verbindungen wie Disaccharide
(Cellobiose, Maltose) und Monosaccharide (Glucose, Fructose) gespalten und unter
Mitwirkung weiterer Enzyme (die sogenannten Permeasen) durch die Zellmembran in
die Bakterienzelle aufgenommen. Der Abbau der Proteine verläuft ähnlich wie die
Hydrolyse der Kohlenhydrate. Die hydrolytische Spaltung der Proteine durch
Proteasen ist nur wenigen Bakterien möglich. Fette sind dem anaeroben Abbau am
schwersten zugänglich. Durch Lipasen werden die Fette zunächst in Glyzerin und
Fettsäuren gespalten. Fettsäuren, insbesondere längerkettige Fettsäuren müssen
Zug um Zug weiter gespalten werden, bis sie zu CH4, CO2 und anorganischen
Endprodukten abgebaut sind (24). Im Folgenden werden etwas näher die Einflüsse
der Enzyme auf die drei wesentlichen organischen Stoffe beschrieben.
2.3.2 Einfluss auf Kohlenhydrate
Kohlenhydrate sind organische Moleküle, die meist aus Kohlenstoff, Wasserstoff und
weniger aus Sauerstoff über kovalente Bindungen verknüpft sind. Der Name stammt
aus der chemischen Nomenklatur des neunzehnten Jahrhunderts, als die ersten
isolierten Substanzen der empirischen Formel Cn(H2O)n, (n ≥ 3) entsprachen. Das
H:O Atomverhältnis ist 2:1 wie bei Wasser. Obwohl später bemerkt wurde, dass
andere Substanzen mit gleichen chemischen Eigenschaften (Polysaccharide ohne
Wasser) nicht mit dieser Formel übereinstimmten, wurde dieser Name beibehalten.
Man unterscheidet drei Gruppen von Kohlenhydraten: Monosaccaride (1 Molekül)

Oligosaccharide (2-20 Moleküle) und Polysaccharide (> 20 Moleküle) (91). Allerdings
variiert bei den verschiedenen Autoren die Länge eines Kohlenhydrats zur
Eingliederug zu den Oligo- oder Polysacchariden. Die mehrmolekularen Saccharide
sind über sogenannte Glykosidbindung verknüpft, die ebenso kovalent sind. Die
Bindung erfolgt zwischen den Hydroxylgruppen (OH) zweier Moleküle unter
Wasserabspaltung (Dehydratation). Dabei handelt es sich um den Verlust von einem
Wasserstoffatom des einen und einer Hydroxylgruppe des anderen Moleküls mit der
daraus folgenden Bildung von einem Molekül H2O (siehe Abb. 2.8). Diese Bindungen
können sich zwischen allen Hydroxylgruppen zweier Monosacchride ausbilden.
Abb. 2.8: O-Glykosidbindung der Kohlenhydrate (Maltose: Glucose-O-Glucose) (93)
Dissaccharide (2 Moleküle) sind die häufigsten Oligosaccharide (91). Die

bekanntesten Polysaccharide sind Cellulose (1-4 ß-glykosidisch verknüpft) und
Stärke (hauptsächlich 1-4 α-glykosidisch verknüpft). Sie finden als Gerüstbausteine
bzw. Speicherform für Glucose Anwendung. „1-4 α-glycosidisch“ weist auf eine
Bindung zwischen zwei α-D-Glucosen hin, die zwischen dem C1 des einen und dem
C4 des anderen Moleküls ausgebildet wurde. Hierbei bildet sich eine Etherbindung
unter Wasserabspaltung aus.
Die Glykosidbindungen von Kohlenhydraten können ebenso wie Peptid- oder

Esterbindungen von Proteinen und Fetten unter anderem durch enzymatische
Katalyse hydrolysiert werden. Enzyme helfen dabei, die Polymere in die
Monosaccharide (Glucose, Fructose und Galactose) zu spalten. Glucose ist die
Hauptenergiequelle für viele Tiere mit Ausnahme der Wiederkäuer. Komplex gebaute
Kohlenhydrate wie z. B. Stärke und Cellulose werden jedoch in mehreren
Spaltvorgängen meist in Glucose umgesetzt.
Die hier katalytisch aktiven Enzyme sind die Glykosidasen (auch als Glykosiden oder
Glykosidhydrolasen bezeichnet). Sie sind eine Untergruppe der
Hydrolasen/Glykosylasen. In der Regel spalten sie glykosidische O- und S-
Bindungen, entweder an den α- oder β-glykosidischen Bindungen (nicht aber an

beiden) zur Aufteilung in kleinere Zucker. Zusammen mit Glykosyltransferasen bilden
Glykosidasen die größte katalytische Enzymgruppe für Synthese und Spaltung der
glykosidischen Bindungen (siehe Abb. 2.9):
Abb. 2.9: Mechanismus einer Hydrolase (94)
Glykosidasen sind sehr häufige Enzyme mit Funktionen in verschiedenen Bereichen:

- in der Natur (einschließlich Abbau von Biomasse wie Cellulose und Hemicellulose)
- in antibakteriellen Abwehrstrategien (z. B. Lysozyme)
- in Pathogenese-Mechanismen (z. B. virale Neuraminidase)
- in normal zellulärer Funktion (z. B. „Trimming“ von Mannosidasen beteiligt in N-
linked-Glycoprotein-Biosynthese).
Eine weitere Untergruppe der Glykosidasen sind die Glucosidasen, die die
Abspaltung von einzelnen Glucosylresten aus verschiedenen Glycokonjugaten
einschließlich α- oder ß-vernetzter Polymere von Glucose katalysieren. α-
Glucosidasen sind Enzyme für den Abbau von komplexen Kohlenhydraten wie
Stärke und Glycogen (95). Diese Enzyme sind unter der EC Nummer 3.2.1
gegliedert. Verschiedene Quellen schließen unterschiedliche Mitglieder in diese
Klasse ein (siehe Tab. 2.12).
Tab. 2.12: Glucosidasen (96)
Name EC Description
α-Amylase EC 3.2.1.1 is a digestive enzyme in mammals
ß-Amylase EC 3.2.1.2 is a plant enzyme to break down starch
γ-Amylase EC 3.2.1.3 is a digestive enzyme
Cellulase # EC 3.2.1.4 breaks down cellulose from plant material
Sucrase-isomaltase EC 3.2.1.10 -
Acid α-glucosidase # EC 3.2.1.20 is associated with Glycogen storage disease type II
Beta-glucosidase # EC 3.2.1.21 - is associated with gaucher's disease
Lactase EC 3.2.1.23 one member of the ß-galactosidase family, breaks down milk sugars,
and its absence in Adulthood causes lactose intolerance
Debranching enzyme # EC 3.2.1.33 -
Pullulanase EC 3.2.1.41 has been used as a detergent
Members marked with a "#" are considered by MeSH to be glucosidases
Cellulasen sind Enzyme (Hydrolasen/Glykosidasen/Glucosidasen), die in der Lage

sind, Cellulose in ihren Grundbaustein ß-Glucose aufzuspalten. Sie werden nur von
einem kleinen Teil der Pflanzen abbauenden Organismen, u. a. bestimmten

Einzellern (speziellen Bakterien und Flagellaten) sowie von Holz abbauenden
Organismen (vor allem von Pilzen) gebildet. Bakterien, z. B. aus dem Magen von
Wiederkäuern und Termiten, können Cellulase produzieren. Darüber hinaus können
weder die meisten Tiere noch der Mensch Cellulase in ihrem Körper bilden. Daher
sind sie nicht in der Lage, einen Großteil der in den Pflanzen enthalten Energie
auszunutzen. Bisher konnten nur bei steril gehaltenen Silberfischchen
Celluloseabbau (97) und bei einer in Käfern lebenden Fadenwurmart sogar
entsprechende Gene (98) nachgewiesen werden.
2.3.3 Einfluss auf Proteine
Proteine sind Peptide aus 100 bis 1000 Aminosäuren, die miteinander über die
sogenannten Peptidbindungen verknüpft sind. Die Ausbildung einer Peptidbindung
erfolgt enzymkatalytisch zwischen einer Carboxylgruppe und einer Aminogruppe aus
zwei Aminosäuren unter Wasserabspaltung (siehe Abb. 2.10).
Abb. 2.10: Peptidbindung der Proteine (99)
Die Spaltung der Peptidbindung und damit der Abbau des Proteins erfolgt durch
Hydrolyse unter Wassereinlagerung. Die diese Reaktion katalysierenden Enzyme
werden als Proteasen oder Peptidasen bezeichnet. Man unterscheidet zwischen
Exopeptidasen, die endständige Aminosäuren von der Polypeptidkette entfernen,
und Endopeptidasen, die in der Lage sind, Peptidbindungen auch inmitten der
Polypeptidkette zu hydrolysieren.
Die hydrolytische Spaltung der Proteine durch Proteasen können nur wenige
Bakterien. Die so gebildeten kurzkettigen Peptide und Aminosäuren werden durch
Permeasen der Zelle verfügbar gemacht (24).
Jede Art von Protein wird um seine konstituierenden Aminosäuren in verschiedenen
Geschwindigkeiten abgebaut. Niedrige Temperaturen senken die
Reaktionsgeschwindigkeit auf ein Minimum ab, da sie die Aktivität der Proteasen
vermindern (91).
Enzyme mit ähnlichen Funktionen haben oft sehr unterschiedliche Strukturen. Eine
wichtige Ähnlichkeit liegt in ihren aktiven Zentren. Proteasen benutzen
unterschiedliche Aminosäurereste (Serin, Cystein, Aspartyl usw.) als Nucleophil in
ihrem aktiven Zentrum, so entstehen die Serin-Proteasen (z. B. Chymotrypsyn,
Trypsin oder Subtilisin), Cystein-Proteasen (z. B. Papain) und Aspartyl-Proteasen
(z. B. Pepsin) (89).
Enzyme können die Proteine selektiv an spezifischen Kettenstellen der

Peptidbindungen in ihre Aminosäuren aufspalten. Trypsin katalysiert z. B. die
Hydrolyse der Peptidbindungen am sogeannten „C-Terminal“ (Carbonylgruppe) von
Aminosäuren, die eine positiv geladene R-Gruppe (Lysin- und Argynin-Reste) haben.
Eine Protease aus Staphylococcus aureus-V8 katalysiert die Hydrolyse der
Peptidbindungen ebenfalls am „C-Terminal“ von Aminosäuren, die aber eine negativ
geladene R-Gruppe (Glutamat- und Aspartat-Reste) haben (91). Das Enzym
Chymotrypsin ist weniger spezifisch als die anderen und katalysiert die Auftrennung
der Peptidbindungen am „C-Terminal“ mit aromatischen seitlichen Aminosäuren wie
Tyrosin, Tryptophan, Phenylalanin (89).
2.3.4 Einfluss auf Fette
Lipide (Fette) bestehen haupsächlich aus Kohlenstoff, Wasserstoff und wenig

Sauerstoff. Einige Arten enthalten auch Stickstoff und Phosphor. Bei ihrer
vollständigen Oxidation wird doppelt so viel Energie freigesetzt wie bei der von
Kohlenhydraten und Proteinen (84). Allerdings sind Lipide im Gegensatz zu
Proteinen und Kohlenhydraten hoch polymorph und schwer strukturell zu definieren.
Eher operativ werden sie als organische Verbindungen, die in biologischen
Systemen zu finden und in Wasser gar nicht oder nur wenig löslich sind, definiert.
Lipide können hydrophoben (unpolaren) oder amphipathischen (mit unpolaren und
polaren Substituenten) Charakter haben (91). Lipide werden unter Veresterung
(Esterbildung) aufgebaut. Diese ist eine Gleichgewichts- und Kondensationsreaktion,
bei der ein Alkohol oder Phenol mit einer Säure zu einem Ester reagiert. Die Säure
kann eine organische Carbonsäure (z. B. Essigsäure, Benzoesäure, Zitronensäure)
oder eine anorganische Säure (z. B. Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure)
sein. Die Reaktion kann in Gegenwart einer starken Säure als Katalysator (meist
konzentrierte Schwefelsäure) stattfinden. Dabei kommt es zu einer Additionsreaktion
mit anschließender Eliminierungsreaktion (100). Die Reaktionsgleichung der
Veresterung einer Carbonsäure kann so wie in Abb. 2.11 dargestellt werden.
Abb. 2.11: Veresterung einer Carbonsäure (101)
Ein Lipidmolekül besteht aus einem Glyzerin-Alkohol mit drei organischen

Fettsäuren, die eine Kette von 4 bis 24 Kohlenstoffatomen haben (84), (102).
Kurzkettige Fettsäuren sind wasserlöslich (hydrophil), langkettige hingegen nicht
(hydrophob) (84). Abb. 2.12 zeigt die Veresterung eines Alkohols mit Fettsäuren
unter Wasserabspaltung bei der Fettsynthese. Ein wesentlicher Unterschied
zwischen Eiweißen und Lipiden besteht darin, dass jedes Lipid nur aus der
Verbindung von Glycerin mit drei Fettsäuren besteht, aber diese nicht zu Ketten
verbunden sind. Daher wird jedes Lipid bei entsprechend hoher Temperatur flüssig,
während dies bei Eiweißen oder Kohlenhydraten nicht möglich ist (102).
Abb. 2.12: Fettsynthese durch Veresterung (103)
Je nach Aggregatzustand des Fettes bei Raumtemperatur unterscheidet man feste

Fette, halbfeste Fette und fette Öle. Der unterschiedliche Aggregatzustand ist in
erster Linie durch die Länge der C-Ketten der organischen Säuren bedingt. Je länger
der aliphatische Rest ist, desto fester wird das Fett. Zudem nehmen Einfluss auf die
Konsistenz des Fettes auch Doppelbindungen zwischen C-Atomen (siehe Abb. 2.13)
in der Kette (ungesättigte Fettsäuren). Je mehr ungesättigte Fettsäuren vorhanden

sind, desto weicher ist das Fett, da sich zunehmend schwache nicht-kovalente
Wechselwirkungen zwischen den Säureresten ausbilden können und der mögliche
kristalline Charakter verloren geht.
Abb. 2.13: Beispiel eines ungesättigten Fettes (103)
Lipide können allgemein in die folgenden Stoffklassen unterteilt werden:
1.) Nicht hydrolysierbare Lipide

- Kohlenwasserstoffe (Alkane, Carotinoide)
- Alkohole (langkettige Alkanole C10 und höher, Sterole)
- Carbonsäuren (C10 und höher)
2.) Einfache Ester
- Fette (Fettsäuren + Glycerol)
- Wachse (Fettsäure + Alkanol)
- Sterolester (Fettsäure + Cholesterol)
3.) Phospholipide
- Phosphatidsäuren (Fettsäure + Glycerol + Phosphat)
- Phosphatide (Fettsäure + Glycerol+ Phosphat+ Aminoalkohol)
4.) Glycolipide
- Cerebroside (Fettsäure +Sphingosin + Zucker)
- Ganglioside (Fettsäure + Sphingosin + Zucker + Neuraminsäure)
Die Esterbindungen der Lipide lassen sich durch Säuren, alkalische Reagenzien
oder Enzyme hydrolysieren. Diese Rückreaktion wird als Esterhydrolyse bezeichnet.
Dadurch werden das Glyzerin und die Fettsäuren freigesetzt (84).
Die alkalische Esterhydrolyse hat einen anderen Reaktionsmechanismus. Aus
historischen Gründen wird sie als Verseifung bezeichnet, da sie zu Seifebildung
führt. Seifen besitzen einen hydrophilen (lipophoben) und einen hydrophoben

(lipophilen) Teil und können somit als Emulgatoren wirken.
Die enzymatische Hydrolyse wird durch Lipasen, eine Untergruppe der
Hydrolasen/Esterasen, durchgeführt. Esterasen sind Enzyme, die in der Lage sind,
Ester hydrolytisch in einen Alkohol und eine Säure aufzuspalten. Lipasen sind
Enzyme, die die Hydrolyse oder den Aufbau von Lipiden katalysieren (104). Sie
kommen in den meisten Tieren, Pflanzen und Mikroorganismen als zelluläre oder
extrazelluläre Proteine vor und gehören zur Familie der Serin-Hydrolasen (105). Sie
haben für ihre spezifischen Reaktionen ein Reaktionsgleichgewicht, das vom
Wassergehalt des Gesamtsystems abhängig ist (106). Lipasen bevorzugen
wasserunlösliche Substrate, sind aber durchaus in der Lage, Triglyceride aus
kurzkettigen Fettsäuren umzusetzen (107).
Um den Lipasen optimale Bedingungen zu bieten, sollten die Lipide wie bei der
menschlichen Verdauung zerlegt, falls große Teile vorhanden sind, und emulgiert
werden (z. B. mit Wasser oder Säure). Dadurch bilden sich kleine Fetttröpchen, an
denen die Lipasen angreifen können. Einige Lipasen arbeiten mit anderen
Substanzen zusammen. Die Pankreaslipase arbeitet z. B. in Anwesenheit von
Colipase (aus Pro-Colipase durch Einwirkung von Trypsinen entstanden) und
Calciumionen. Dabei werden vom Triacylglycerid ein bis zwei Fettsäuremoleküle
schrittweise getrennt, so dass schließlich zwei Fettsäuren und ein 2-
Monoacylglycerid entstehen. Die zweite wichtige, im Dünndarm arbeitende Lipase ist
die Gallensalz-aktivierte Lipase, die auch Triglyceride, vor allem aber
Cholesterinester spaltet.
2.3.5 Die Protease Papain
Papain ist ein Enzym, das natürlich in relativ hoher Konzentration im Milchsaft der
noch grünlichen Schalen und den Kernen der Papaya (Carica papaya) vorkommt und
daraus gewonnen wird. Es ist unentbehrlich für die Pflanze bei der Abwehr von
Schädlingen (108). Das Enzym wird auch als Papaya Proteinase-I bezeichnet und
kann auch in der „Mountain Papaya“ (Vasconcellea cundinamarcensis, Synomyme:
Carica candamarcensis, Carica cestriflora, pubescens) gefunden werden (109). Der
Milchsaft einer grünen Papaya-Frucht beinhaltet eine Mischung aus Cystein-
Endopeptidasen (wie das Papain), Chymopapain A und B, Papaya-Endopeptidase III

und IV sowie Omega-Endopeptidase (110).
Papain hat eine breite eiweißspaltende Wirkung (109) und wird daher als Protease
bezeichnet. Es katalysiert die Hydrolyse von Proteinen mit breiter Spezifität für die
Peptidbindungen. Diese können sich auch inmitten einer Polypeptidkette befinden.
Darum wird dieses Enzym als Endopeptidase bezeichnet. Das hat aber Präferenz für
Aminosäuren mit einer großen hydrophoben Seitenkette an der Position P2 und für
Arginin sowie Lysin an der Position P1 des Positionierungsmodells eines Substrats
(siehe Tab. 2.13). Es akzeptiert nicht Valin an der Position P1´ (111) und bevorzugt
Bindungen mit dem Carbonyl-Ende von α-NH2-substituiertem Arginin und Lysin, und
in geringerem Maße, Histidin, Glycin, Glutamin und Tyrosin (112).
Papain wirkt auch als Esterase, Thioesterase, Transesterase und Transamidase.
Raffiniertes Papain ist fast vollständig in Wasser löslich, aber unlöslich in den
meisten organischen Lösemitteln. Je nach Beschaffenheit des Substrats zeigt
raffiniertes Papain eine maximale Aktivität bei pH-Werten von 4,0 bis 7,0. Papain ist
unter sauren Bedingungen instabil. Bei pH-Werten unter 2,8 erfolgt eine rasche und
irreversible Inaktivierung auch bei Raumtemperatur (112). Papain ist ein relativ
hitzebeständiges Enzym mit einem optimalen Temperaturbereich zwischen 60 und
70 °C (109).
Tab. 2.13: Bevorzugte Spaltung des Papains (113)
P6 P5 P4 P3 P2 P1 ↓ P1′ P2′ P3′ P4′

Xaa Xaa Xaa Xaa hydrophobic Arg ↓ not Val Xaa Xaa Xaa
Xaa Xaa Xaa Xaa hydrophobic Lys ↓ not Val Xaa Xaa Xaa
Xaa = any amino acid residue
hydrophobic = Alanine (Ala), Valine (Val) Leucine (Leu), Isoleucine (Ile), Phenylalanine (Phe), Tryptophan (Trp), Tyrosine (Tyr)
↓ = cleavage site
Papain findet häufig Verwendung in (114):

- Diätindustrie (wegen seiner verdauungsfördernden Wirkung)
--Lebensmittelindustrie (als Zartmacher für Fleisch, zur Verhinderung oder Klärung
der Trübung von Getränken)
- Kosmetikindustrie (als Reinigungsmittel)
--Medizin (zur Heilung wegen entzündungshemmender Fähigkeit, zur Spaltung von
Antikörpern in Fab-Fragmente.
--Textilindustrie (als Hilfsmittel bei der Herstellung von Wolle und Seide zur
Verhinderung des Verfilzens und Schrumpfens)
--Biotechnologie (häufig verwendet in Zellisolationsverfahren und in der
Zellserologie).
In seinem aktiven Zentrum hat Papain unter anderem Aminosäurereste von Cystein
als Nucleophil und wird daher in die Gruppe der Cystein-Proteasen (EC 3.4.22)
eingegliedert. Papain wurde in großem Umfang seit mehr als 130 Jahren von
verschiedenen Autoren untersucht (115), (116), (110), (117).
Es ist die bekannteste Cystein-Protease, die 1879 aus der Papaya-Frucht isoliert
wurde. Es war auch die erste Protease, für die eine kristallographische Struktur
nachgewissen wurde (117).
Die Moleküle des Papains bestehen aus einer Polypeptidkette aus 212 Aminosäuren
mit drei internen Disulfidbrücken und einer Sulfhydryl(Thiol-)gruppe im aktiven
Zentrum. Darum wird es auch als Sulfhydryl- oder Thiolprotease bezeichnet (118).
Papain hat eine Molekularmasse von 23,4 kDa und ist ein relativ basisches Protein
mit einem isoelektrischen Punkt (IEP oder pI) von 8,75 (117). Darunter versteht man
den pH-Wert, bei dem das Protein gleich negativ wie positiv geladen ist.
Papain hat eine dreidimensionale Struktur (siehe Abb. 2.14), welche durch die o. g.
Disulfidbrücken gefaltet ist. Dadurch werden zwei Domänen gleicher Größe mit dem
aktiven Zentrum in dem Spalt zwischen den Domänen gebildet (118), (119).
Abb. 2.14: Papain 3D-Struktur (120)
Die enzymatische Aktivität von Papain wird durch die sich im aktiven Zentrum
befindende katalytische Dyade durchgeführt, die aus Amisäurenresten aus Cystein
an der Position 25 (Cys25) und Histidin an der Position 159 (His159) gebildet wird
(117). Obwohl diese Aminosäurenreste in der Kette weit auseinander liegen,
kommen sie durch die Faltstruktur und die Brücken in gegenseitige Nähe. Die
gemeinsame Arbeit der Aminosäuren im aktiven Zentrum ermöglicht die einzigartigen
Funktionen des Papains (119).
Abb. 2.15 zeigt den Mechanismus, durch den Papain Peptidbindungen aufbricht.
Dieser kann in vier Schritte unterteilt werden: Substratbindung, S-Acylation,
Hydrolyse und Deacylation. Eine Deprotonierung von Cys25 durch His159 findet dabei
statt (109). Diese Aminosäurenreste bilden im pH-Bereich von 3,5 bis 8,0 ein
Ionenpaar (117), (119). Asparaginreste an der Position 175 (Asn175) helfen der
Orientierung des Imidazoliumrings (Salz des Imidazols) der His159 im katalytischen
Spalt (117), dass damit die o. g. Deprotonierung erfolgt.
R´NH2
Abb. 2.15: Enzymatischer Mechanismus der Protein-Hydrolyse durch eine Cystein-Protease (117)
Die aktive Thiolgruppe (-SH) des Papains muss in reduzierter Form zur katalischen
Wirkung vorliegen. Die Bildung eines kovalenten Zwischenfragments (die Hälfte
eines Enzyms S-Acyl) stellt einen grundlegenden Schritt bei der Hydrolyse der
Peptidspaltung dar. Dieses Zwischenfragment wird über einen nucleophilen Angriff
der Thiolgruppe der Cys25 auf die Carbonylgruppe (-CO) der hydrolysierten Amid-
(Ester-)bindung gebildet. Dadurch wird das Fragment C-Terminal der Peptide frei und
das Zwischenfragment gebildet. Im nächsten Schritt reagiert dann ein
Wassermolekül mit dem Zwischenfragment. Dadurch wird das Fragment N-Terminal
der Peptide frei. Das regenerierte, freie Cysteinprotease-Molekül kann dann einen
neuen Katalysezyklus beginnen (121).
2.3.6 Inhibitoren für Enzyme
Als Inhibitoren werden Substanzen bezeichnet, die die Enzymtätigkeit hemmen

können. Abb. 2.16 zeigt die schematische Darstellung einer enzymatischen Reaktion
mit inhibiertem aktiven Zentrum. Das aktive Zentrum ist durch einen Inhibitor (I)
verändert, so dass das Substrat (S) nicht gebunden werden kann.
Abb. 2.16: Hemmung eines substratspezifischen Enzyms durch einen Inhibitor (E = Enzym,
S = Substrat, I = Inhibitor) (14).
Es gibt folgende Arten der Hemmung von Enzymaktivitäten:
- Metabolischer Antagonismus: Hemmung aufgrund der Ähnlichkeit in der Inhibitor-

und Substratstruktur. Das Enzym bindet sich mit einem anderen Substrat, dessen
Struktur, Größe und Funktionsgruppenbeziehungen identisch mit denen des
originalen Substrats sind (84). Hier können zwei Hemmungsarten unterschieden
werden:
- Kompetitive Hemmung: Substrat und Inhibitor konkurrieren um den Platz am
aktiven Zentrum (14). Die Hemmung kann beherrscht werden, wenn das
Verhältnis Substrat zu Inhibitor (S/I-Verhältnis) zunimmt (84). D. h. durch die
Erhöhung der Substratkonzentration kann sie wieder rückgängig gemacht
werden (14). Dabei handelt es sich in der Regel um reversible Hemmungen. Je
höher dabei die Konzentration des Inhibitors ist, desto mehr Enzymmoleküle
werden blockiert.
- Nicht kompetitive Hemmung: Hemmung, die unempfindlich gegenüber der
Zunahme des S/I-Verhältnisses bzw. der Substratkonzentration ist.
- Endprodukthemmung: Das Endprodukt wirkt ab bestimmten Konzentrationen als

Inhibitor auf einen der Anfangsschritte der Reaktionskette (84).
- Katabolit-Repression (Diauxie): Die Bildung eines Enzyms zum Abbau eines
Substrats wird durch das Angebot eines anderen Substrats gehemmt. Das Substrat
unterdrückt die Enzymbildung.
Neben diesen Arten der Hemmung durch einen Inhibitor kann das Enzym an sich
funktionsunfähig werden:
- Denaturierung: Zerstörung der gesamten Enzymstruktur mit einem völlig
irreversiblen Verlust der Enzymaktivität, z. B. durch hohe Temperaturen (Kochen)
oder starke pH-Wert-Schwankungen.
- Ausflockung: Hemmung eines Enzyms, wenn es nur teilweise z. B. durch
geringere pH-Wert-Änderungen ausgeflockt wird.
Papain kann durch verschiedene Inhibitoren in seiner Aktivität eingeschränkt werden.

Diese können unterschiedlicher Herkunft sein. Einige stammen aus mikrobiellen
Quellen oder aus Protisten. Inhibitoren für Papain können ebenso in menschlichem
Serum (116) und Plasma vorkommen oder werden in der Papayapflanze selbst
durch mechanische Beschädigungen, Insekten oder Mikroorganismen induziert
(110).
So kann Papain z. B. durch die folgenden Verbindungen gehemmt werden (114),
(122):
- Antipain dihydrochlorid aus mikrobieller Quelle
- Cystamindihydrochlorid (Konzentration 98 %)
- Chymostatin mikrobiell
- Cystatin aus lyophilisiertem Pulver Hühnereiweiß
- 3,4-Dichloroisocoumarin
- E-64
- Ebselen
- Gly-Gly-Tyr-Arg ≥ 97 % (HPLC)
- Leupeptin Trifluoracetatsalz ≥ 90 % (HPLC), mikrobiell
- α2-Makroglobulin aus lyophilisiertem Pulver menschliches Plasmas ≥ 98 % (SDS-PAGE)
- Hg2+ und andere Schwermetalle
- Sulfhydryl Bindemittel
- Carbonylreagentien
- Alkylierungsmittel.
Antipain wurde in mehreren Actinomycetenstämmen entdeckt und isoliert (123). Viele
Arten der Actinomyceten kommen im Boden vor und sind unschädlich für Tiere und
Pflanzen, während einige wichtige Pathogene und viele andere Quellen von
Antibiotika sind (124). Actinomyceten sind Gram-positive Bakterien. Die meisten
wachsen aerob, jedoch sind einige in der Lage, auch anaerob und unter
thermophilen Bedingungen zu wachsen. Außerdem gehen Actinomyceten teilweise
symbiotische Lebensgemeinschaften mit Pflanzen ein und sind ein Teil der
Bodenmikroflora. Einige von ihnen verursachen den typisch "muffigen" Erdgeruch.
Sie gehören zu den „Zersetzern“ vieler organischer Verbindungen, z. B. Cellulose,
Lignin und Chitin (125).
Auch die Mikroorganismen aus der Familie der Trypanosomen (T. cruzi) haben
Cysteinproteaseinhibitoren (126). Hierbei handelt es sich um parasitäre Organismen,
die über Insekten als Zwischenwirte auch Wirbeltiere befallen können (127) und
somit eventuell in Hühnerabfall und Hühnermist vorhanden sein könnten.
2.4 Bacillus Spezies
Da der Einfluss spezieller Bacillus Spezies auf den anaeroben Abbauprozess einer
der Hauptgegenstände der vorliegenden Doktorarbeit ist, wird im Folgenden dieses
Thema ausführlicher behandelt:
Das Genus Bacillus besteht aus Gram-positiv obligat aeroben oder fakultativ
anaeroben Bakterien. Sie sind in der Natur allgegenwärtig, meist vorkommend in
Böden, Seen und Flüssen. Sie reagieren positiv auf den Enzym-Katalase-Test (128)
und können frei lebende oder pathogene Spezies sein. Unter stressigen
Milieubedingungen gehen sie in eine Überdauerungsform (sogenannte Endosporen)
über und können so ruhend einen längeren Zeitraum überleben. Diese
Eigenschaften definierten ursprünglich diese Gattung. Allerdings sind viele davon in
andere Gattungen untergegliedert worden (129).
Bacillus Spezies können in acidophilen, alkaliphilen, halophilen, psychrophilen,
mesophilen und thermophilen Milieubedingungen leben. Das bedeutet, dass ihr
Wachstum und ihr Stoffwechsel in einem breiten Spektrum von pH-Werten und
Temperaturen stattfinden können. Einige Arten sind in der Lage, eine Vielzahl von
Kohlenstoffquellen wie Methanol, Cellulose und Chitin abzubauen (130). Sie sind
Chemoorganotrophe mit einem respiratorischen oder fermentativen Stoffwechsel
(131). Viele Bacillus Spezies sind in der Lage, große Mengen an Enzymen zu
sekretieren.
Bacillus subtilis (auch „Gras bacillus oder Heubazillus“) ist ein Gram-positives und
Katalase-positives stabförmiges, begeißeltes Bakterium und eines der am besten
verstandenen Prokaryonten in der Molekular- und Zellbiologie. Es hat die Fähigkeit,
eine robuste schützende Endospore zu bilden, so dass der Organismus extreme
Umgebungsbedingungen toleriert. Abb. 2.17 zeigt B. subtilis in der Gramfärbung. Die
ovalen nicht gefärbten Strukturen sind die Sporen. Es ist aufgrund seiner
hervorragenden genetischen Struktur und Größe in allen möglichen Aspekten
untersucht worden und ist ein Modell zur Differenzierung der Gen/Protein-Regulation
und des Zellzyklus in Bakterien (132).
Abb. 2.17: Bacillus subtilis in der Gramfärbung (133)
B. subtilis ist ubiquitär verbreitet und kann aus Böden (insbesondere Komposterde),
Wasser und Luft isoliert werden. Seine natürlichen Standorte sind aber die oberen
Schichten des Bodens. Dort ist es aufgrund häufig wechselnder
Umgebungsbedingungen fast ständig Stress- und Hungersituationen ausgesetzt, an
die es sich entsprechend anpassen muss. Die Generationszeit beträgt bei optimalem
Nährstoffangebot, optimaler Sauerstoffversorgung und einer optimalen
Wachstumstemperatur von 40 ⁰C ca. 26 Minuten. B. subtilis war historisch als obligat
aerob klassifiziert worden. Weitere Forschung hat gezeigt, dass es unter anaeroben
Bedingungen wachsen kann (134).
B. subtilis ernährt sich chemoorganoheterotroph, d. h. es nutzt von anderen
Lebewesen erzeugte Nährstoffe, um Energie und körpereigene Substanz zu
generieren. Es besitzt ein großes Arsenal an Glukan- (polymer verkettete Zucker)
und Protein-abbauenden Enzymen, die bei Bedarf aus der Zelle exportiert werden.
Forschungsergebnisse zeigten, dass das Bakterium Polysaccharide (z. B. komplexe
Kohlenhydrate wie Arabinogalactan aus Pflanzen) und unverdauliche
Oligosaccharide (z. B. Stachyose und Raffinose aus Gemüse und Getreide) abbauen
kann (135). Es kann auch durch extrazelluläre Amylasen Stärke hydrolysieren (136).
Als Kohlenstoff- und Energiequelle wird bevorzugt Traubenzucker (Glucose) genutzt.

Bei ausreichender Konzentration verhindert Glucose die Aktivierung von Genen. Bei
Glucoseabwesenheit können auch andere Zucker oder kohlenstoffhaltige Substrate
genutzt werden (Katabolitrepression).
Zur Energiegewinnung dient Sauerstoff als bevorzugter terminaler
Elektronenakzeptor (Zellatmung). Auch hierbei wird die Nutzung alternativer
kommender Substrate (z. B. Stickstoff) bei Sauerstoffzutritt unterdrückt. Unter
anaeroben Bedingungen können die Zellen bei Glucose- und Nitratanwesenheit noch
genug Energie für langsames Wachstum erzeugen. Sind keine als
Elektronenakzeptor nutzbaren Substrate verfügbar, dann ist B. subtilis in der Lage,
auch ausschließlich durch Gärungsstoffwechsel unter Erzeugung von Milchsäure,
Ethanol, Acetoin und 2,3-Butandiol zu überleben.
Widrigen Umweltbedingungen versucht sich B. subtilis durch aktive Fortbewegung

mit Hilfe seiner Geißel zu entziehen. Ferner kann sich B. subtilis über die sogenannte
generelle Stressantwort als vegetativ aktive Zelle mit Schwankungen von
Umweltfaktoren auseinandersetzen. In letzter Konsequenz kann B. subtilis durch ein
atypisches Zellteilungsprogramm Sporen bilden, die lange Perioden überdauern
sowie hohe Temperaturen überleben können. Eine weitere Eigenschaft ist die
Ausbildung der Fähigkeit, extrazelluläre (Fremd-)DNA aufzunehmen und diese zur
Erweiterung des eigenen Genoms zu integrieren oder sie zur Ernährung zu nutzen.
B. subtilis wird nicht als humanpathogen betrachtet, kann aber Lebensmittel
kontaminieren. Lebensmittelvergiftungen werden selten durch B. subtilis verursacht.
Aufgrund der hohen Hitzeresistenz der B. subtilis-Sporen werden diese auch als
Indikator bei thermischen Sterilisationsprozessen in Pharmazie, Medizin und
Lebensmittelindustrie eingesetzt.
In der Landwirtschaft dient der B. subtilis Stamm QST713 als biologisches Fungizid
für Samen von z. B. Baumwolle, Gemüse, Erdnüssen und Sojabohnen. Es besiedelt
während der Keimung das Wurzelsystem und beugt so Verpilzungen durch
Konkurrenz vor. Des Weiteren produzieren die Bakterien einige flüchtige organische
Verbindungen (VOC), welche fungizid wirken. Besonders unter Glucoseanwesenheit
ist die Produktion der fungiziden VOC sehr hoch. Aufgrund seiner Fähigkeit zur
Sekretion extrazellulärer Enzyme wird B. subtilis insbesondere für die Herstellung
von Waschmittelenzymen (z. B. Subtilisin), außerdem auch für die Synthese von
Riboflavin (Vitamin B2) und des Antibiotikums Bacitracin biotechnologisch genutzt.
Bacillus licheniformis (siehe Abb. 2.18 a) ist ein Bakterium, das im Allgemeinen im
Boden und auf den Vogelfedern zu finden ist. Es ist ein Gram-positives, thermophiles
Bakterium. Sein optimales Wachstum (max. 109 Zellen/ml) liegt bei etwa 50 ⁰C und
geschieht innerhalb von 5 Tagen (137). Allerdings kann es bei viel höheren
Temperaturen überleben. Die optimale Temperatur für die Enzym-Sekretion beträgt
37 ⁰C. Es kann entweder in Form von Sporen vorliegen, um rauen Milieubedingungen
zu widerstehen, oder in einem vegetativen Zustand, wenn die Bedingungen gut sind.
a) b)
Abb. 2.18: Bacillus Spezies, a) B. licheniformis (138), b) B. Polymyxa (139)
B. licheniformis wird in Fermentationen verwendet, um große Mengen von

Exoenzymen wie Proteasen oder Amylasen wie auch das Antibiotikum Bacitracin zu
erzeugen (138). Es synthetisiert eine Protease, die bei hohen pH-Werten (9-10)
bestehen kann. Diese ist ein gewünschter Bestandteil in Waschmittel, da sie
proteinhaltigen Schmutz in der Kleidung entfernen kann, und ebenso aufgrund ihrer
Fähigkeit, Schrumpfung und Entfärbung bei niedrigen Temperaturen zu vermeiden.

Sehr große Mengen von Proteasen werden als Additive zu Waschmitteln benötigt
(138). Es wurde auch die Fähigkeit von B. licheniformis, Federn für
landwirtschaftliche Zwecke abzubauen, untersucht. Federn enthalten hohe Mengen
an unverdaulichen Proteinen (Federkeratin). Es wird vermutet, dass das Federkeratin
durch Fermentation mit B. licheniformis abgebaut werden kann (137) und
Federabfälle so zur Produktion von Federmehl als Viehfutter genutzt werden können.
B. licheniformis wird üblicherweise mit Lebensmittelverderb und -vergiftung in
Verbindung gebracht. Durch Kontamination mit diesem Bakterium wird Brot klebrig
und faserig (140). Es kann ebenso Gastroenteritis (über Lebensmittel) sowie
Ophthalmitis (Entzündung des Auges) verursachen (141).
Bacillus polymyxa (siehe Abb. 2.18 b) ist als Gram-positives fakultativ anaerobes
chemoorganotrophes Bakterium weitgehend im Boden vorhanden (142). Es eine der
ältesten Spezies der Gattung Bacillus und ein landwirtschaftlich, industriell und
medizinisch wichtiger Organismus (143). Z. B. Bredermann (1909), Grau und Wilson,
(1962) und Kalisninskaya, (1968) (zitiert nach Nakamura, 1987) haben
nachgewissen, dass B. polymyxa ein Stickstoff fixierendes Bakterium ist. B.
polymyxa fixiert Stickstoff langsam und assimiliert Ammonium in Glutaminsäure
hauptsächlich durch den Glutamat-Dehydrogenase-Weg ohne Energieaufwand
(144). Es ist in Böden, Wasser, Milch, Kot und verwesendem Gemüse zu finden
(145). Es kann durch die Fermentation von Glucose, Lactose und Glycerin Gas
erzeugen (136), (143). Nach Nakamura (1987) synthetisieren Stämme von B.
pollymyxa Polymyxin-Antibiotikum, β-Amylase und 2,3-Butandiol und sind als Gas
bildende Organismen wichtig für den Rotteprozess von Jute.
2.5 Mikroorganismen im Pansensaft
Pansensaft ist die im Pansen vorhandene Flüssigphase mit ihren festen

Schwebeteilchen und Mikroorganismen. Die Gesamtheit der im Pansen
vorkommenden Mikroorganismen wird als Pansenflora und -fauna bezeichnet. Es
handelt sich um Bakterien, Protozoen, Pilze, Archaen und Viren. Sie machen etwa 4
Vol.-% des Pansensafts aus. Bakterien und Protozoen sind die Mehrheit der
Mikroorganismen, sie machen 40-60 Mass.-% der gesamten mikrobiellen Substanz
aus. Die Temperatur im (lebendem) Pansen liegt im Bereich von 39-41 ⁰C und der
pH-Wert zwischen 5,5 und 7,0, was sehr nah am Optimum vieler Enzymsysteme
ist (78).
Die im Pansen vorkommenden Mikroorganismen hydrolysieren durch mikrobielle

Enzyme nicht-strukturelle Kohlenhydrate (Stärke, Zucker und Pektin), strukturelle
Kohlenhydrate (Hemicellulose und Cellulose) und stickstoffhaltige Verbindungen
(Proteine, Peptide und Aminosäuren).
Die o. g. Kohlenhydrate werden zu Monosacchariden oder Disacchariden durch
mikrobielle Enzyme abgebaut und so in die Mikroben transportiert werden. Dort
können sie zu mikrobieller Biomasse umgebaut, zu den flüchtigen Fettsäuren (FFS)
Acetat, Propionat, Butyrat, Lactat oder Valerat fermentiert oder durch Glycolyse oder
andere biochemische Wege zu anderen verzweigten FFS zur Energiegewinnung
umgesetzt werden.
Proteine werden zu Peptiden und Aminosäuren durch mikrobielle Enzyme

hydrolysiert und in erster Linie zum Aufbau von Zellbiomasse verwendet. Peptide,
Aminosäuren, Ammonium und andere Stickstoffquellen, ursprünglich vorhanden im
Tierfutter, können mit wenig bis gar keiner Hydrolyse direkt durch Mikroben
verwendet werden. Nicht-Aminosäure-Stickstoff wird für die Synthese von
mikrobiellen Aminosäuren verwendet. Bei Stickstoffüberschuss für das mikrobielle
Wachstum können auch Proteine und seine Derivate zur Energieerzeugung
fermentiert werden. Dadurch wird Ammonium freigesetzt.
Lipide, Lignin, Mineralstoffe und Vitamine spielen beim Stoffwechselprozess der

Mikroorganismen im Pansen eine weniger wichtige Rolle als Kohlenhydrate und
Eiweiß. Lipide werden teilweise hydrolysiert und hydriert, während Glycerin, falls in
den Lipiden vorhanden, fermentiert wird. Ansonsten sind Lipide im Pansen inert.
Hohe Konzentrationen an Lipiden, insbesondere ungesättigten Lipiden, können für
Mikroorganismen giftig sein oder die Gäraktivität unterdrücken. Lignin, eine
phenolische Verbindung aus verschiedenen Monomerbausteinen, ist resistent
gegenüber Verdauung und kann durch Pilze löslich gemacht werden.
Mineralien werden von den Mikroben aufgenommen und sind für das
Mikrobenwachstum notwendig. Mikroben synthetisieren viele Vitamine (wie
Cyanocobalamin) oft in großen Mengen, so dass sie evtl. Vitaminmangel in der
Nahrung des Wiederkäuers ausgleichen können.
Im Pansen sind etwa 1010 bis 1011 Bakterien/ml vorhanden, die überwiegend an den
Oberflächen der Nahrungspartikel und des Pansenepithels anhaften. Sie bestehen
aus ca. 250 verschiedenen Arten (78), unter anderem Ruminococcus ssp.,
Lactobacillus ssp., Clostridium ssp. und Bacteroides ssp. In Tab. 2.14 sind die im
Rumensaft vorkommenden Bakterien, gegliedert nach abzubauender Substratart,
gesondert gekennzeichnet. Eine Auflistung der beteiligten Ruminococcus Spezies
zeigt die Tab. 2.14. Ruminococcus flavefaciens und Ruminococcus albus, sowie das
(gattungsfremde) Gram-negative Bakterium Fibrobacter (Bacteroides) succinogenes
sind die wichtigsten Bakterien für die Auflösung von Cellulose. Dazu wird das von
Mikroorganismen produzierte Enzym Cellulase verwendet. Die Cellulase des
Fibrobacters ist ein periplasmatisches Enzym, das heißt, es sitzt im Periplasma
zwischen den beiden äußeren Zellmembranen. Das Fibrobacter ist somit
gezwungen, sich an die Celullosefibrillen zu heften.
Tab. 2.14: Ruminoccus sp. (78)
R. albus R. hydrogenotrophicus
R. bromii R. lactaris
R. callidus R. luti
R. flavefaciens R. obeum
R. gauvreauii R. productus
R. gnavus R. schinkii
R. hansenii R. torques
Die Ruminococcus Spezies hingegen setzen die Cellulase als Exoenzym im

Pansensaft frei. Das Polysaccharid Cellulose wird dadurch in einzelne Glucose-
Moleküle aufgespalten. Die Glucose wird durch die Bakterien wieder aufgenommen
und durch Fermentation (Gärung) als Energiequelle nutzbar gemacht. Die
ausgeschiedenen Gärungsnebenprodukte wiederum werden vom Tier als
Energiequelle genutzt. Dabei handelt es sich hauptsächlich um Carbonsäuren wie
Essigsäure (Acetat) und Ameisensäure (Formiat). Weitere Endprodukte der
Fermentation sind Kohlendioxid, Wasserstoff und Wasser. Fibrobacter erzeugt bei

der Fermentation zusätzlich Bernsteinsäure (Succinat).
Hemicellulosen unterscheiden sich von Cellulose dadurch, dass Hemicellulosen
Pentosen, Hexosen und meist Uronsäure enthalten. Hemicellulosen sind
Hauptbestandteile der Zellwand von Pflanzen. Organismen, die in der Lage sind,
Cellulose zu hydrolysieren, können auch Hemicellulosen verwenden. Allerdings
können einige Hemicellulose abbauenden Organismen keine Cellulose
hydrolysieren. Dazu gehören unter anderen Butyrivibrio fibrisolvens, Lachnospira
multiparus und Bacteroides ruminícola (siehe Tab. 2.11) (78).
Alle cellulolytischen Bakterien sind auch in der Lage, Stärke zu verstoffwechseln,
wohingegen einige amylolytischen Mikroorganismen Cellulose nicht verwenden
können. Wichtige amylolytische Spezies sind Bacteroides amylophilus, Succinomona
amylolítica, Butyrividrio fibrisolvens, Bacteroides Lachnospira multíparus und
ruminícola (siehe Tab. 2.11) (78).
Neben den beschriebenen Abbauprozessen sind Bakterien auch an der

Aufrechterhaltung des Pansenmilieus beteiligt. Die am Epithel haftenden Sauerstoff
verzehrenden Bakterien halten das anaerobe Milieu aufrecht. Das negative
Redoxpotential von −250 bis −300 mV sorgt dafür, dass der Abbau der
Kohlenhydrate nur bis zu den kurzkettigen Fettsäuren und nicht vollständig zu
Kohlendioxid und Wasser erfolgt. Die im Pansensaft befindlichen Archaee bilden aus
Kohlendioxid und Wasserstoff Methan und senken somit den Wasserstoffpartialdruck
im Pansen, was eine übermäßige Bildung von Ethanol und Milchsäure verhindert.
Die Protozoen bilden etwa die Hälfte der Biomasse der Pansenflora und setzen sich
vor allem aus Wimpertierchen (105 bis 108 Organismen/ml, vor allem Vertreter der
Isotrichidae und Ophryoscolecidae) und in geringerem Maß aus Geißeltierchen (103
bis 104 Organismen/ml) zusammen. Einige davon sind Bakteriophagen
(Bakterienfresser). Obwohl Protozoen für die Pansenfunktion nicht unerlässlich sind,
hat ihre Präsenz Einfluss auf die stattfindenden Prozesse. Sie sind in geringem
Umfang (ca. 10 Mass.-%) am Kohlenhydratabbau (besonders Stärke und Zucker)
und Eiweißabbau beteiligt. Sie können die leicht abbaubaren Kohlenhydrate
aufnehmen und verhindern so deren zu schnellen Abbau und damit eine
Pansenazidose infolge zu hoher Konzentrationen an organischen Säuren. Außerdem
können die Protozoen schädliche Futterbestandteile (toxische Pflanzeninhaltsstoffe

und Schwermetalle) abbauen oder binden. Darüber hinaus nehmen die Protozoen
Bakterien auf und regulieren damit deren Population. Sie können aber auch für eine
ineffiziente Stickstoffnutzung verantwortlich sein. Die Effizienz der Stickstoffnutzung
kann durch ein Entfernen der Protozoen aus dem Pansen, der sogenannten
Defaunierung, gesteigert werden. Weiterhin begünstigen die Protozoen die
Methanbildung, indem sie als Wirt für Methanbildner dienen, die auf der Oberfläche
von Protozoen siedeln (146).
Pilze machen nur 5-10 Mass.-% der Mikroben im Pansen aus und fehlen bei
Fütterungen, die arm an Fasern sind. Ihr Vorkommen gilt ebenfalls als nicht
zwingend erforderlich. Trotz ihrer geringen Zahl besetzen die Pilze eine wichtige
Nische, weil sie einige Esterbindungen zwischen Lignin und Hemicellulosen oder
Cellulose hydrolysieren und somit helfen, Nahrungsbestandteile aufzubrechen. Sie
verwerten in geringem Ausmaß lösliche Kohlenhydrate und Proteine und sind auch
zur Bildung langkettiger Fettsäuren fähig.
Archaea, ca. 3 Mass.-% aller Mikroben im Pansen, sind meist autotrophe

Methanogene, die Methan durch anaerobe Atmung produzieren. Der Großteil des
Wasserstoffs, der von Bakterien, Protozoen und Pilzen produziert wird, wird von
diesen Methanogenen verwendet, um Kohlendioxid zu Methan zu reduzieren. Die
Aufrechterhaltung des niedrigen Wasserstoffpartialdrucks durch Methanogene ist
unerlässlich für die ordnungsgemäße Funktion des Pansens.
Viren sind in unbekannter Anzahl vorhanden und tragen zu keiner Gärung- oder
Atmungsaktivität bei. Allerdings lysieren sie Mikroben, und die so freigesetzen
Inhaltsstoffe werden wiederum von anderen Mikroben (sog. mikrobielles Recycling)
assimiliert oder vergoren. Jedoch ist das Recycling durch die Bakterien räuberischen
Aktivitäten der Protozoen quantitativ wichtiger.
2.6 Ballaststoffgehalte in Fruchten
Ballaststoffe sind weitgehend unverdauliche Nahrungsbestandteile, meist

Polysaccharide, also Kohlenhydrate, die vorwiegend in pflanzlichen Lebensmitteln
vorkommen. Sie bestehen aus organischen Verbindungen (Polysaccharide,
Oligosaccharide, Lignin und ähnliche Substanzen), welche im Wasser entweder

löslich (wie Pektin, Inulin, Gummi und Fructoligosaccharide) (147) oder unlöslich (wie
Cellulose, Hemicellulose, Lignin und resistente Stärke) sind. Nach Marlett (1992)
beträgt die lösliche Faserfraktion von Früchten im Durchschnitt 13 bis 20 Mass.-%
der Ballaststoffe. Der Cellulosegehalt liegt in etwa bei ≤ 33 Mass.-% der Ballaststoffe,
während der von Hemicellulosen bei 25 bis 35 Mass.-% und der von Pektin zwischen
15 und 30 Mass.-% des Ballaststoffgehalts liegt.
Da die faserhaltigen Ballaststoffe üblicherweise biologisch schwer abbaubar und

damit schwer zu vergären sind, werden im Folgenden die wesentlichen Ballaststoffe
näher beschrieben.
Cellulose
Cellulose (C6H10O5)n≥200 ist ein komplexes nicht verzweigtes Polymer

(Polysaccharid). Sie ist der grundlegende strukturelle Bestandteil von pflanzlichen
Zellwänden (siehe Abb. 2.19). Bei Einjahrespflanzen macht sie etwa 25 bis 35
Mass.-% und bei Bäumen etwa 40 bis 50 Mass.-% der Zellwand aus. Insgesamt liegt
ihr Anteil bei etwa 33 Mass.-% aller pflanzlichen Stoffe (bei Baumwolle und Holz
jedoch jeweils 90 und 50 Mass.-%) (148).
Abb. 2.19: Aufbau der Zellwand einer Pflanzenzelle (149)
Cellulosen sind die häufigsten aller natürlich vorkommenden organischen

Verbindungen und auch die häufigsten Polysacchride. Marlett (1992) hat ebenso
einen maximalen Cellulosegehalt von etwa 33 Mass.-% der Ballaststoffe in
ausgewählten Früchten festgestellt. Wie in Kapitel 2.3.2 beschrieben, können
Cellulosen durch Cellulase, die nicht in allen Organismen (auch nicht beim
Menschen) gebildet werden kann, abgebaut werden. Daher sind sie für den
Menschen unverdaulich, aber ein Futtermittel für pflanzenfressende Wiederkäuer
(z. B. Kühe, Pferde etc.), da diese das Futter lange genug für die Verdauung durch
cellulasebildende Mikroorganismen im Verdauungstrakt behalten (148). Nach Slavin
et al. (1981) und Joshi und Agte (1995) können Celullosen hingegen bis zu einem
gewissenen Grad vom Menschen verdaut werden.
Cellulosen bestehen aus einer linearen Kette von mehreren hundert bis mehr als
10000 β-D-Glucose-Molekülen (β-1,4-O-glykosidische Bindung) bzw. Cellobiose-
Einheiten (zwei Glucosen). Die Cellulosemoleküle lagern sich zu höheren Strukturen
zusammen, die als reißfeste Fasern in Pflanzen häufig eine Festigkeitsfunktion
haben. Cellulosen sind in üblichen Lösungsmitteln unlöslich und zeigen deutliche
Eigenschaften der Absorption. Mit konzentrierten Säuren (z. B. Phosphorsäure,
Schwefelsäure oder anderen Mineralsäuren) können die Cellulosen bei erhöhter
Temperatur (100-120 ⁰C (150) bzw. 170-240 ⁰C (151)) zu Glucose abgebaut werden,
indem die glykosidischen Bindungen aufgespaltet werden. Da Cellulosen eine große
Anzahl von Hydroxylgruppen enthalten, reagieren sie mit Säuren zu Estern und mit
Alkoholen zu Ethern (152).
Hemicellulose
Hemicellulose ist ein komplexes, verzweigtes Polymer (Polysaccharide), das aus

verschiedenen Monosacchariden besteht. Häufig vertreten sind Pentosen (Zucker
mit 5 Kohlenstoffatomen), Xylosen und Arabinosen. Es finden sich auch Hexosen
(Zucker mit 6 Kohlenstoffatomen) wie Glucose, Mannose und Galactose (153).
Ebenso findet sich sehr häufig D-Mannose in den Hemicellulosen (154). Zusammen
mit Cellulosen und Lignin sind Hemicellulosen Hauptbestandteile der pflanzlichen
Zellwände, deren Matrix aus fibrillären, teilweise kristallinen Cellulosen besteht
(siehe Abb. 2.19). Bei Verholzung ist diese Matrix zusätzlich von dem Makromolekül
Lignin durchdrungen und bildet so Lignocellulose. Die Hemicellulosen bilden somit
einen Teil der Stütz- und Gerüstsubstanz von Zellwänden und machen 1/4 bis 1/3
der Pflanzenmasse aus (153). Die Monosaccharide der Hemicellulosen sind über β-
1,4-glykosidische Bindungen verknüpft (155).
Im Gegensatz zu Cellulosen bestehen Hemicellulosen aus kürzeren Ketten mit 500
bis 3000 Zuckereinheiten. Hemicellulosen lassen sich durch Alkalibehandlung oder
kurzzeitige Extraktion mit verdünnter, heißer Mineralsäure lösen. Dadurch werden

einfache Zucker gebildet (154).
Lignin
Lignin ist ein komplexes, phenolisches Makromolekül und ein festes, hoch
verzweigtes, zur Gruppe der Phenylpropanoide gehörendes Polymer (kein
Polysaccharid), das durch eine irreversible Entfernung von Wasser aus Zuckern
gebildet wird. Es wird in die pflanzliche Zellwand eingelagert, bewirkt dort eine
Verholzung der Zelle und steigert so die Festigkeit der Zellwand, was einen
verbesserten Schutz gegen Angriffe von Mikroorganismen bietet. Nach den
Cellulosen ist es die häufigste in Pflanzen vorkommende organische Verbindung
(156).
Etwa 20 bis 30 Mass.-% der Trockenmasse verholzter Pflanzen bestehen aus Lignin.
In Früchten findet es sich meist in den Kernen und Samen. Lignin hat als
Stützmaterial und verhärtetes Polymer eine Reihe von wichtigen Aufgaben für die
Pflanze. Es ist wesentlich für die Festigkeit von pflanzlichem Gewebe, wobei es vor
allem für die Druckfestigkeit von zentraler Bedeutung ist, während die eingelagerten
Cellulosefasern die Zugfestigkeit gewährleisten. Es handelt sich also um eine
Durchdringung von reißfesten, biegsamen Fasern (Cellulosen) mit einem dichten und
starren Polymer als Füllmaterial (Lignin) (157).
Aufgrund seiner wenigen polaren Gruppen ist Lignin hydrophob und somit unlöslich
in Säuren, aber löslich in starken Alkalien wie Natriumhydroxid. Abgesehen von
wenigen Tieren, wie Wiederkäuern, kann Lignin weder verdaut, noch im
Verdaungssystem absorbiert bzw. durch die Darmflora angegriffen werden (156).
Die exakte Struktur von Lignin ist nicht bekannt, da es schwer aus den Pflanzen zu
extrahieren ist und an Cellulosen und anderen Polysacchariden der Zellwand
kovalent gebunden ist. Im Gegensatz zu Cellulosen, Stärke oder Gummi, scheinen
jedoch die Lignineinheiten nicht in Serien verknüpft zu sein (156).
Pektin
Pektin ist eine komplexe Mischung aus sauren und neutralen, hoch verzweigten
Polymeren (ein Polysaccharid). Nach Sriamornsak (2003) ist die Zusammensetzung
und Struktur von Pektin noch nicht vollständig verstanden. Es ist im Wesentlichen ein
lineares Polysaccharid und enthält zwischen einigen hundert bis etwa 1000
Saccharideinheiten in einer kettenartigen Konfiguration.
Es wird angenommen, dass es hauptsächlich aus D-Galacturonsäure-Einheiten ( ≥
65 Mass.-%) besteht (158), (159) und die Ketten mittels α-1,4 glykosidischer
Bindungen verknüpft sind. In Gegenwart von Wasser und in Abhängigkeit von
Molekulargröße und Veresterungsgrad bildet Pektin Gele.
Pektin kommt in allen höheren Landpflanzen vor. Es findet sich in allen festeren
Bestandteilen, z. B. in den Stängeln, Blüten, Blättern etc. (160). Es ist in den
Zellmittelllamellen (siehe Abb. 2.19) und den primären Zellwänden enthalten. Dort
bestimmt es die Porosität der Zellwände und übernimmt eine festigende und Wasser
regulierende Funktion.
Pektin ist im Pflanzenreich als Begleitstoff der Cellulosen weit verbreitet (161). Die
Pektinzusammensetzung ist nicht nur von Pflanze zu Pflanze unterschiedlich,
sondern hängt ebenso von Typ und Alter des Pflanzengewebes ab. Besonders
pektinreich sind Pflanzenteile mit relativ zähen/harten Bestandteilen, wie z. B.
Zitrusfrüchte oder Fruchtstände von Sonnenblumen. Pektinarm hingegen sind
weiche Früchte, z. B. Erdbeeren.
2.7 Stand der Forschung im Bereich der Fermentation der

verwendeten Substrate
Für die anaerobe Vergärung lassen sich verschiedene organische Substrate,

darunter auch Reststoffe, Rückstände bzw. organische Abfälle aus antropogenen
Aktivitäten verwenden.
Handelt es sich um die sogenannte Trockenvergärung (TS 15-35 Mass.-%) oder
Nassvergärung (TS < 15 Mass.-%), konzentrieren sich die Forschungstätigkeiten
zum einen auf das Monitoring der laufenden Anlagen und damit auf die Optimierung
der Prozessführung, zum anderen werden Möglichkeiten gesucht, welche weiteren
organischen Substrate verwendet werden können und wie aus den zugegebenen
Substraten die Biogasproduktion gesteigert werden kann. Dies kann z. B. durch die
Zugabe von Enzymen sowie durch verschiedene Möglichkeiten der
Substratvorbereitung oder deren Zusammensetzung geschehen.
Die Herstellung von effizienten Enzymmischungen mit Hilfe von Pilzen wurde von
Hölker (2007) untersucht. Pilze passen ihre extrazellularen Enzyme an das zur
Verfügung stehende Substrat an und produzieren so genau die Enzyme, die sie z. B.
zum Abbau von langen Zuckerketten benötigen. Geeignete Pilze werden mit dem zu
vergärenden Substrat in Kontakt gebracht und nach ausreichender Anpassungszeit
(etwa 24 h) mit dem Substrat in den Fermenter gegeben. Dort spalten die Enzyme
die organische Masse und machen diese für die Methanbakterien leichter verfügbar.
Im Labor konnte damit die Biogasausbeute um 30-50 % gesteigert werden.
Feste Abfälle aus Obst- und Gemüse sind organische Stoffe und daher stellen eine
potenzielle Energiequelle dar, wenn sie in Methan umgewandelt werden. Sie sind
eine erneuerbare Energiequelle mit einer ausgeglichenen CO2-Bilanz (162). Sie
bestehen üblicherweise aus 8-18 Mass.-% Gesamtfeststoffgehalt, wovon 86-92
Mass.-% organische Trockensubstanz sind, d. h. 6,9-16,6 Mass.-% organische
Trockensubstanz des Gesamtgewichtes. Die organische Fraktion enthält 75 Mass.-%
biologisch leicht abbaubarer Stoffe (Zucker und Hemicellulosen), 9 Mass.-%
Cellulose und 5 Mass.-% Lignin (163). Die Obst- und Gemüsseabfälle werden seit
mehreren Jahren in der anaeroben Fermentation als Substrat oder Co-Substrat unter
verschiedenen Betriebsbedingungen mit verschiedenen Bioreaktortypen untersucht
(77), (10), (7), (162).
Die Umwandlungsrate der organischen Substanzen in Biogas liegt derzeit bei etwa
70-95 Mass.-%. Mit einem zweistufigen System, das aus einem
Verflüssigungsreaktor bei thermophilen Temperaturen und einem anaeroben Filter
bei mesophilen Temperaturen bestand, wurden z. B. über 95 Mass.-% der
organischen Trockensubstanz in Biogas bei einer volumetrischen Rate von 5,65 g
oTS/(l • d) umgewandelt. Dabei wurde eine durchschnittliche Methanausbeute von
etwa 420 l/kg oTS erreicht (163).
Die anaerobe Fermentation von Bananenabfällen ist vielfach unter verschiedenen
Bedingungen untersucht worden (164), (162), (165), (166), (167), (168). So wurde in
Batchfermenentationsversuchen mit Bananenabfällen und Kokosfasermark eine
Reduktion sowohl der TS als auch der oTS bei Bananenabfällen um 25,3 Mass.-%
bzw. 39,6 Mass.-% und bei Kokosfasermark um 13,6 Mass.-% bzw. 21,6 Mass.-%
erreicht. Die erzeugte Biogasmenge war sehr gering und lag bei 9,22 bzw.
1,69 ml/g TS und der durchschnittliche Methangehalt bei 72 Vol.-% bzw. 80 Vol.-%
(166). Eine andere Fermentation von Bananenschalen aus verschiedenen
Bananensorten unter anaeroben mesophilen Bedingungen erbrachte einen

Methanertrag von 0,243 bis 0,322 l/g oTS und eine Kinetik (Konstante der
Methanproduktionsrate) von 0,071 bis 0,122 /d (162). In anderen Versuchen mit
Papayaabfällen wurde eine Reduktion der oTS um ca. 20 Mass.-% erreicht (169).
Die Rückstände der Nahrungsmittelindustrie eignen sich zum Teil sehr gut für eine
Biogaserzeugung. Dazu gehören unter anderem auch Schlachthofabfälle (21).
Allerdings muss bei einem Umgang mit organischen Abfällen sehr auf die Hygiene
geachtet werden. Popova und Bolotina (1962) zit. nach Buhr und Andrews (1977)
behaupteten, dass die Hygienequalität des Faulschlamms der wesentlichste Vorteil
des thermophilen Verfahrens ist. Buhr und Andrews (1977) ihrerseits berichteten,
dass die erhöhte Abtötungsrate von pathogenen Organismen ein Vorteil der
anaeroben Vergärung bei thermophilen Temperaturen ist und was von besonderer
Bedeutung im Hinblick auf die Landentsorgung des Faulschlamms ist.
Die bei der anaeroben Fermentation verwendeten Bakterien sind empfindlich

hinsichtlich der Substratart und -zusammensetzung. Wie in Kap. 2.1 beschrieben und
wie Maya-Altamira et al. (2008) postulierten, existieren spezifische Bakterienarten,
die sich gegenseitig in ihren Aktivitäten beeinflussen. Nach Hashimoto (1989) sollte
bei der Biokonversion von komplexen organischen Substraten, wie Biomassen in
Methan, ausreichendes Inokulum vorhanden sein, damit sichergestellt ist, dass der
anaerobe Prozess abgeschlossen werden kann.
Nach Liu et al. (2009) ist die Inokulumsgröße in der Fermentationsmischung ein
wichtiger Faktor, der direkt die Menge an produziertem Methan beeinflusst. Sind die
im Inokulum vorhandenen Mikroorganismen höher oder geringer als die benötigten
Mengen, kann die Methanproduktion verringert oder sogar gestoppt werden. In der
Literatur sind Inokulumsgrößen von 2% (170) bis 67 % (171) des
Fermenterfüllvolumens eingesetzt worden.
Nach Raposo et al. (2006) sind unter den Faktoren, die ebenfalls die
Reproduzierbarkeit eines zur Bestimmung der anaeroben Biodegradabilität
durchzuführenden Tests verletzen können, die Berechnung des Inokulums als
Prozentsatz des Fermenterfüllvolumens (ohne Betrachtung der methanogenen
Aktivität) und die geringen Substratkonzentrationen. Bei Versuchen im Kleinmaßstab

kann dies insgesamt eine Substratmasse von 0,2 bis 0,4 g trockenes Material
bedeuten. Bei heterogenem Material sind solche Teilprobemengen kaum
reproduzierbar. Allerdings kann dieses Problem mit einer erhöhten Replikatanzahl
(>2) reduziert werden.
Nach letzten Erkenntnissen (172), (173), (174), (175) ist es jedoch exakter, die
Inokulumsgröße durch das Inokulum/Substrat-Verhältnis (auch als
Substrat/Inokulum-Verhältnis gekennzeichnet) bezogen auf die jeweilige Masse des
oTS-Gehalts zu ermitteln. Allerdings, wie Raposo et al. (2006) zeigten, ist die
Bestimmung der spezifischen methanogenen Aktivität des Inokulums ein zusätzlicher
aussagekräftiger Faktor.
Zusammenfassend ist der Einfluss des Inokulum/Substrat-Verhältnisses auf die

Biogas- und Methanausbeuten im Wesentlichen von der Substrat- bzw. der
Inokulumsart und -aktivität abhängig. Das kann ein Grund für die unterschiedlichen,
optimalen, oTS-bezogenen Inokulum/Substrat-Verhältnisse sein, die in der Literatur
(172), (173), (174), (175) zu finden sind. Das Verhältnis, das Owen et al. (1979) als
Standard vorschlugen, betrug etwa 1,0 wohingegen Chynoweth et al. (1993)
feststellten, dass eine Erhöhung des Verhältnisses für einige Arten von Substraten
nötig ist.
Hashimoto (1989) studierte den Effekt des oTS-bezogenen Inokulum/Substrat-

Verhältnisses auf die Batch-Fermentation von gemahlenem Weizenstroh bei
mesophilen Temperaturen (35 ± 1 ⁰C) mit vergorener Rindergülle verschieder oTS-
Konzentrationen als Inokulum. Bei allen oTS-Konzentrationen der Rindergülle wurde
beobachtet, dass ab einem Inokulum/Substrat-Verhältnis über 0,25 sich die
Methanausbeute erhöhte. Außerdem konnte gezeigt werden, dass die gasbezogene
Leistungsfähigkeit bei ähnlichen Inokulum/Substrat-Verhältnissen bei Rindergülle mit
höheren oTS-Konzentrationen noch anstieg. Die Methanausbeuten lagen zwischen
300 und 330 ml CH4/g oTSzu. Ausbeuten von 313 ml CH4/g oTSzu wurden z. B. bei
den oTS-Konzentrationen der Rindergülle von 9,3, 10,2 und 10,3 g/l mit den
Inokulum/Substrat-Verhältnissen von jeweils 3,27, 1,38 und 1,21 gewonnen.
Tong et al. (1990) untersuchten neben anderen Stoffen das Gärverhalten von sieben
lignocellulosehaltigen Materialien (Maisstroh, Napier Gras, holziges Gras, Altzeitung,
Weißtannenholz und Weizenstroh) bei mesophilen Temperaturen (35 ⁰C) mit

vergorenem Faulschlamm (Primär- und Belebtschlamm einer kommunalen
Kläranlage) als Inokulum. Die tägliche Methanausbeute der sieben Substrate
erreichte die höchsten Werte zwischen dem 2. und dem 8. Tag und sank danach
deutlich. Abgesehen von Altzeitung und Weißtannenholz, bei denen eine maximale
Methanausbeute von jeweils 92 bzw. 42 ml CH4/g oTSzu erreicht wurde, bewegte
sich die maximale Methanausbeute zwischen 288 und 360 ml CH4/g oTSzu. Das oTS-
bezogene Inokulum/Substrat-Verhältnis von allen Versuchen war ca. 0,67.
Chynoweth et al. (1993) zeigten, dass die maximale oTS-Abbaurate verschiedener

Substrate wie z. B. mariner, krautiger, holziger Substrate und kommunaler Abfälle mit
Rumensaft oder vergorenem Faulschlamm (Primärschlamm einer Kläranlage) als
Inokulum bei einem Inokulum/Substrat-Verhältnis von 2 erzielt wurde.
Gunaseelan (1995) untersuchte die Vergärung von Parthenium bei Raumtemperatur

(26 ± 2 ⁰C), d. h. im untereren Bereich der mesophilen Temperaturen. Als Inokulum
wurde ausgefaulte Rindergülle aus einem laufenden Fermenter verwendet. Zwei
Experimente wurden mit zwei verschiedenen oTS-Konzentrationen der gleichen
Inokulumsart durchgeführt. Bei jeder oTS-Konzentration wurden unterschiedliche
Mengen an Substrat eingesetzt, so dass in jedem Experiment verschiedene
Inokulum/Substrat-Verhältnisse untersucht wurden. In beiden Experimenten wurde
beobachtet, dass mit zunehmendem oTS-bezogenem Inokulum/Substrat-Verhältnis
die Biogasproduktionsrate sich beschleunigte und die Methanausbeute anstieg. Die
maximalen Methanausbeuten schwankten zwischen 100 und 150 ml CH4/g oTS. Bei
der kleinen oTS-Konzentration des Inokulums waren Verhältnisse < 1,7 hemmend,
während bei den höhen oTS-Konzentrationen des Inokulums die Hemmwirkung bei
Verhältnissen < 2,4 stattfand. Bei beiden oTS-Konzentrationen wurde jedoch die
gleiche maximale Methanausbeute erreicht. Bei den Versuchen mit der niedrigen
oTS-Konzentration wurde die maximale Methanausbeute bei einem
Inokulum/Substrat-Verhältnis von 6,87 und bei den Versuchen mit der höheren oTS-
Konzentration bei einem höheren Verhältnis von 7,88 erreicht. Dies kann auf eine
geringere methanogene Aktivität des im zweiten Experiment verwendeten Inokulums
zurückgeführt werden.
Silva Lopes et al. (2004) verwendeten Rumensaft als Inokulum mit massen-
bezogenen Inokulum/Substrat-Verhältnissen von 0,17, 0,11 und 0,05, um die
Fermentation der organischen Fraktion des Hausmülls bei mesophilen Temperaturen
(30 ⁰C) zu studieren. Die gewonnenen Ergebnisse zeigen, dass die verwendete
Menge an Inokulum die Leistung des Prozesses wesentlich beeinflußte, d. h. die
Biogasausbeute erhöhte sich mit ansteigendem Inokulum/Substrat-Verhältnis. Die
maximalen Methanausbeuten lagen bei jeweils 550, 510 und 230 ml/g oTS.
Raposo et al. (2006) untersuchten das biochemische Methanpotential von grob

geschnittenem Futtermais bei mesophilen Temperaturen (35 ⁰C). Als Inokulum
wurde anaerober Faulschlamm einer kommunalen Kläranlage mit oTS-bezogenen
Inokulum/Substrat-Verhältnissen von 1,0, 1,5, 2,0, und 3,0 verwendet. Die
maximalen Biogas- und Methanausbeuten von jeweils ca. 398 ml/g oTS und ca.
233 ml/g oTS wurden mit dem Verhältnis 1 erreicht.
Liu et al. (2009) studierten den Effekt des oTS-bezogenen Inokulum/Substrat-

Verhältnisses auf die Biogasausbeute von Speise- und Grünabfällen und einer 50-
50% oTS-bezogenen Mischung von beiden Abfällen sowohl bei mesophilen (35 ±
2 ⁰C) als auch bei thermophilen (50 ± 2 ⁰C) Temperaturen mit jeweils mesophilen
und thermophilem Faulschlamm einer kommunalen Kläranlage. Die
Inokulum/Substrat-Verhältnisse 0,63, 0,32, 0,25 und 0,20 wurden bei thermophilen
Temperaturen untersucht, während nur das Verhältnis 0,32 bei mesophilen
Temperaturen untersucht wurde. Bei den thermophilen Temperaturbereichen mit den
drei Substratarten erhöhten sich die Biogas- und Methanausbeuten mit
zunehmendem Inokulum/Substrat-Verhältnis mit den jeweiligen maximalen Biogas-
und Methanausbeuten und oTS-Abbauraten beim maximalen verwendeten
Inokulum/Substrat-Verhältnis von 0,63. Bei den Speiseäbfallen betrugen die
maximalen Biogas- und Methanausbeuten jeweils 778 ml/g oTS und 550 ml CH4/g
oTS, bei den Grünabfällen jeweils 631 ml/g oTS und 357 ml CH4/g oTS und bei der
50-50% oTS-bezogenen Mischung von beiden Abfällen jeweils 716 ml/g oTS und
430 ml CH4/g oTS. Bei mesophilen Temperaturen waren die Biogas- und
Methanausbeuten der drei Substratarten mit dem eingesetzten Inokulum/Substrat-
Verhältnis von 0,32 in ca. 30-50 Vol.-% niedriger als die von ihren homologen bei
thermophilen Temperaturen.
Zhou et al. (2011) beobachteten bei der Vergärung von Abfällen aus der
Soyabohnenverarbeitung bei mesophilen Temperaturen (36 ⁰C) mit anaerobem
Faulschlamm einer kommulalen Kläranlage, dass die Biogas- und Methanausbeute
mit zunehmendem oTS-bezogenem Inokulum/Substrat-Verhältnis bis auf ein
Maximum am sechsten Tag bei einem Verhältnis von 1,67 anstiegen und danach bei
den Verhältnissen 2,0, 2,5, 3,3, 5,0 und 10,0 ein abnehmendes Verhalten aufwiesen.
Die maximalen Methanausbeuten bewegten sich zwischen 478 bis 495 ml/g oTS.
Außerdem stellte er fest, dass Verhältnisse kleiner als 1,0 eine starke Reduktion der
Biogas- und Methanausbeuten und der Produktionsraten sowie der oTS-Abbaugrade
(< 28 %) verursachen.
Anlass der Forschung 90
3 Anlass der Forschung

Zweckmäßigkeit
In Mexiko, wie in anderen tropischen und subtropischen Ländern Lateinamerikas,

fallen im Bereich der Landwirtschaft vor und nach der Ernte wegen verschiedener
Faktoren große Mengen an Obst- und Gemüseabfällen an. Viel davon stammt von
Früchten wie Papayas, Bananen, Zitrusfrüchten, Zuckerrohr, Kokos etc., die auf
großen Landflächen angebaut werden. Aufgrund der großen Mengen bietet sich die
Nutzung dieser Abfälle durch anaerobe Fermentation an.
Bei Bananen, Papayas und Zitrusfrüchten kommt es jedes Jahr zu Beschädigungen
während der verschiedenen Anbau- bzw. Vermarktungs- und Verarbeitungsschritte.
Die wesentlichen Einflussfaktoren sind extreme klimatische Bedingungen,
Pflanzenkrankheiten, Plagen (z. B. Heuschrecken) bzw. Schädlinge,
Kontaminationen durch Schädlingsbekämpfungsmittel und patogene
Mikroorganismen wie Salmonella. Entsprechend gehen zum Teil große
Produktmengen verloren, und es entstehen Millionen Tonnen pro Jahr an
kommerziell nicht nutzbaren Produkten, von denen derzeit noch ein Großteil
ungenutzt entsorgt wird.
Nach Orozco-Santos (1991) gehen in Mexiko allein etwa. 1-1,5 Mio. Tonnen/Jahr an
Bananen nur durch Plagen verloren. Ählich ist die Situation bei Papayas. So wurden
2009 in Yucatán/Mexiko 800 ha Papayaplantagen durch Dürre, extrem hohe
Temperaturen und Plagen zerstört (176).
Nach dem mexikanischen Bundesministerium für Landwirtschaft, Viehzucht,
ländliche Entwicklung, Fischerei und Ernährung (SAGARPA), (2012) und dem
mexikanischen Nationalen Institut für Forstwirtschaft, Landwirtschaft und Viehzucht
(INIFAP), (2014) gehen in Mexiko und speziell im Bundesland Yucatan jährlich vor
der Ernte unterschiedliche Produktmengen und nach der Ernte ca. 30 Mass.-% der
Produktion verloren (siehe Tab. 12.1 und Tab. 12.2 des Anhangs A). Bei Papayas,
Bananen und Zitrusfrüchten betrugen die landesweiten Verluste im Jahr 2012 jeweils
ca. 0,3, 0,7 und 2 Mio. Tonnen (im Wert von ca. 57, 103 und 227 Mio. Euro) und im
Bundesland Yucatán jeweils ca. 10000, 300 und 100000 Tonnen (im Wert von ca.
1,2, 0,1 und 7 Mio. Euro).
Neben dem wirtschaftlichen Verlust geht mit der Entsorgung des organischen
Materials eine potentielle Energiequelle verloren.
Außerdem treten durch die Zersetzung der beschädigten Früchte Sickerwässer,
Gerüche und Insekten auf, welche die Umwelt (Boden, Grundwasser und Luft)
belasten und auf die Gesundheit des Menschen negative Auswirkungen haben
können.
Die direkte Verwendung dieser Abfälle als Dünger in der Landwirtschaft bzw. zur
Fütterung von Tieren (z. B. Schweinen) kann zu verschiedenen Problemen, wie z. B.
Überdüngung der Landflächen, Ausbreitung von Pflanzenkrankheiten bzw.
Übertragung von patogenen Mikroorganismen (wie Salmonella bei Papayas) führen.
Ähnlich sieht es bei Abfällen aus den verschiedenen Phasen der Geflügelproduktion
aus. Diese fallen über das Jahr hinweg relativ konstant an und nehmen jährlich durch
den steigenden Geflügelkonsum noch zu. Allein werden in der Verpackungsanlage
einer Geflügelverarbeitungsfirma (Bachoco, S. A., 2014) z. B. derzeit ca. 500 m 3/Jahr
fettiges und zum Teil dickeres Abwasser aus der Schwimmschicht der Kläranlage
entfernt und zum großen Teil ohne weitere Behandlung entsorgt.
Alle diese organischen Abfälle verursachen, wie bereits erwähnt, Kontaminationen.
Ein zusätzliches Problem bei der energetischen Verwertung von organischen

Abfällen stellt die teils geringe Verfügbarkeit von Inokulum aus Faulschlamm, das
hauptsächlich zum Anfahren eines anaeroben Fermentationsprozesses verwendet
wird, in vielen Ländern dar. Die Verdauung von Wiederkäuern wurde als ein sehr
hoch entwickeltes, natürliches, Cellulose abbauendes System mit einer Vielzahl von
anaeroben und fakultativ anaeroben Mikroorganismen in einem mesophilen Milieu
erkannt (177). Da ein gezielter Anwendungsbereich des anaeroben Prozesses der
ländliche Raum ist, wo üblicherweise Viehhaltung in großem Umfang betrieben wird,
könnte der Panseninhalt bzw. Pansensaft bei einem Mangel an Faulschlamm eine
gute Möglichkeit zur Gewinnung von Inokulumsmaterial oder Grundsubstrat
darstellen.
Um neben dem Problem der Entsorgung organischer Abfälle auch das der in Kap. 1
erwähnten Energieversorgung aktiv angehen zu können, muss nach kombinierten
Verfahren gesucht werden, die sowohl den Umweltschutz berücksichtigen als auch
wirtschaftlichen wie energetischen Nutzen bieten. Denn fehlende finanzielle
Ressourcen verhindern zumeist den Umweltschutz. Wenn dieser jedoch mit

Energiegewinnung einhergeht, kann ein längerfristiges Umdenken erfolgen. Die
Kombination von anaerobem Abbau organischer Substanzen und der damit
verbundenen Biogasgewinnung z. B. zur Stromerzeugung ist ein möglicher
Lösungsansatz.
Die vorliegende Dissertation zielt darauf ab, einen Beitrag bei der Suche nach einer
nachhaltigen Lösung für das mit mehrfachen Auswirkungen gebundene Problem der
o. g. Abfälle durch ihre Verwertung als Rohstoff zur Biogaserzeugung sowie dadurch
für das Problem der Energieversorgung mittels einer erneubaren Energiequelle zu
leisten. Darüber hinaus soll damit die Arbeit dazu beitragen, natürliche Kreisläufe
wieder zu schließen.
Soziale Relevanz
Die betrachteten organischen Abfälle werden durch einzelne Produzenten erzeugt,

während ihre Auswirkungen die Umwelt und damit die gesamte Gesellschaft
betreffen. Eine mögliche Verwertung dieser Abfälle zur Energiegewinnung würde
nicht nur der Gesellschaft durch die damit erwartete Verringerung der
Verschmutzungsproblematik und ihrer Folgen zugute kommen, sondern würde
ebenso die Produzenten durch den Einsatz des Biogases zur eigenen Strom- und
Wärmeerzeugung unterstützen.
Die Ergebnisse dieser Forschungsarbeit liefern keine absolute Lösung für dieses
Problem. Wie oben erwähnt, wird es angsetrebt, einen Beitrag in dieser Hinsicht zu
leisten. Ähnliche Verhältnisse, insbesondere bezüglich der Wetter-, Substrat- und
Konsumbedingungen, können auch in andereren Regionen der Welt gefunden
werden. Daher könnte die soziale Projektierung der in Mexiko aktuell und zukünftig
gewonnenen Ergebnisse im diesen Bereich auch in die anderen Regionen verbreitet
werden.
Praktische Bedeutung und Implikationen
Vor allem in Entwicklungsländern besteht sowohl großer Bedarf an

Umweltschutzmaßnahmen als auch im Bereich der regenerativen
Energiegewinnung. Der Standort im Süden Mexikos ist für diese Forschungsarbeit

insofern interessant, als hier über das Jahr hinweg annähernd konstant hohe
Temperaturen vorherrschen. Da die Biogasproduktion konstante Temperaturen in
den Reaktoren erfordert, herrschen daher ideale Bedingungen, um große Mengen an
Prozessenergie besonders bei thermophilen Temperaturen (zur Erwärmung der
Biogasreaktoren) einzusparen.
Die gewonnenen Erkenntnisse dieser Forschungsarbeit könnten auch wichtige
Anwendungen bei anderen praktischen Problemen wie bei der Verwertung
organischer Abfälle aus der Produktion von Avocados, Ananas etc. finden.
Theoretischer Wert
Mehrere Studien wurden bereits über die anaerobe Vergärung von organischen
Abfällen aus der Landwirtschaft und Geflügelproduktion durchgeführt (178), (164),
(162), (165).
Dabei sind überwiegend mesophile Temperaturbedingungen zugrunde gelegt.
Ebenso sind einige Hefen und Pilze im anaeroben Prozess zur Beschleunigung der
Hydrolyse eingesetzt worden.
Allerdings ist noch nicht bekannt, in wie weit sich weitere organische Stoffe, die noch
nicht zur Biogaserzeugung eingesetzt wurden (wie z. B. die Abfälle aus
Papayafrüchten und einer Mischung von Zitrusfrüchten), vergären lassen. Auch im
Hinblick auf die Optimierung sind bis heute die mikrobiologischen Prozesse des
anaeroben Abbaus in Biogasreaktoren und vor allem der Einfluss von katalytischen
Substanzen noch nicht ausreichend erforscht und dokumentiert worden.
Bei der Ausnutzung der Vorteile der thermophilen Temperatur (Keimelimination) im
anaeroben Prozess gibt es noch offene Fragen, z. B. wie die evtl. mit Keimen
kontaminierten organischen Abfälle aus Papaya, Bananen, Zitrusfrüchten und aus
der Gefügelproduktion abgebaut und in Biogas umgewandelt werden und wie gut die
Protease Papain und eine Mischung von Mikroorganismen aus drei Bacillus Spezien
im Prozess reagieren. Im Rahmen der vorliegenden Forschungsarbeit wurden daher
diese Einflüsse auf den Abbauprozess und die Biogasausbeute untersucht.
Eine der Variablen in der anaeroben Fermentation ist die organische Raumbelastung
gemessen als kg oTS/(m3 • d) oder kg CSB/(m3 • d). Die Verwendung einer höheren
Raumbelastung bedeutet nicht unbedingt eine höhere Biogasqualität und –quantität.
Die optimale organische Raumbelastung hängt hauptsächlich von den
Substrateigenschaften ab und entspricht nicht zwangsläufig der maximalen bzw.
minimalen Raumbelastung, die eingesetzt werden kann.
Bei einer Vielzahl von Substraten, die in der Praxis oder in anderen
Forschungsarbeiten eingesetzt wurden, sollte man das Verhalten der abhängigen
Variable Biogasproduktion unter verschiedenen Betriebsbedingungen kennen.
Ebenso bei einer bestimmten Betriebsbedingung sollte man wissen, welche
Eigenschaften der unabhängigen Variablen (z. B. die organische Raumbelastung)
die Ergebnisse der abhängigen Variable maximieren (Biogasproduktion). Diese
Erkenntnisse bilden die Basis für die in den entsprechenden Kapiteln dargestellten
Empfehlungen zu weiteren Studien in dem Bereich.
Methodologische Verwendbarkeit
In dieser Studie wurden bei der Phase des Kleinmaßstabes etablierte

Standardmethoden mit einigen Modifikationen verwendet. So wurde z. B. ein
Vakuum im Kopfraum erzeugt und anschließend eine Mischung aus CO2 und N2,
zugegeben, um den Unterdruck auf das Medium durch das erstellte Vakuum zu
brechen und anaerobe Bedingungen einzustellen.
Die Ergebnisse helfen, die Beziehungen zwischen den abhängigen und

unabhängigen Variablen (z. B. organische Raumbelastung) zu verstehen.
Im Rahmen dieser Arbeit wurden die in den zwei Maßstäben eingesetzten Reaktoren
entworfen und gebaut. Obwohl sich die Reaktoren in manchen Aspekten nicht als
optimal erwiesen haben, können sie als Basis für Empfehlungen zukünftiger
Instrumente für weitere Studien zu diesem Thema dienen.
Ebenso soll diese Forschung einen Beitrag leisten zu einer Idee oder einer Option
zur Fermentation neuer Substrate bzw. zur Optimierung des Prozesses.
Aufgabenstellung und Zielsetzung 95
4 Aufgabenstellung und Zielsetzung

4.1 Allgemeine Zielsetzung
Ziel dieser Arbeit ist es, den anaeroben Abbauprozess ausgewählter Abfallsubstrate
aus der Landwirtschaft und der Geflügelindustrie mit Hilfe spezieller
Mikroorganismen und Enzyme bei thermophilen Temperaturen zu evaluieren.
4.2 Spezifische Zielsetzung
Die Evaluierung des o. g. Abbauprozesses wurde in zwei verschiedenen

Versuchsmaßstäben durchgeführt. Dafür wurden Reaktoren im Kleinmaßstab zur
Evaluierung der anaeroben Bioabbaubarkeit und im Großmaßstab zur Evaluierung
des allgemeinen anaeroben Prozesses ausgewählter Abfallsubstrate verwendet. Im
Folgenden werden die entsprechenden spezifischen Zielsetzungen dieser
Versuchsmaßstäbe behandelt.
4.2.1 Reaktoren im Kleinmaßstab (Durchstechflaschen)
1. Entwurf und Aufbau der Reaktoren

2. Evaluierung des potentiellen anaeroben Abbauprozesses ausgewählter
Abfallsubstrate (aus Papayas, Bananen und Zitrusfrüchten) und aus den
verschiedenen Bereichen der Geflügelfleischproduktion (Brutanlage, Geflügelfarm,
Schlachthof und Verpackungsbetrieb)
2.1 Untersuchung des Einflusses verschiedener Bioadditive (Rumensaft, drei
Bacillus-Spezies, Papain) und verschiedener Kombinationen zwischen ihnen
auf den Anaerobprozess bei jedem Abfallsubstrat
2.2 Bestimmung der maximalen Biogasmenge, des oTS-Abbaugrades und der
Biogasausbeuten bei jeder Mischprobe
4.2.2 Reaktoren im Großmaßstab
1. Entwurf, Konstruktion und Aufbau der Reaktoren

2. Evaluierung des anaeroben Abbauprozesses ausgewählter Abfallsubstrate (aus
Papayas, Bananen und Zitrusfrüchten) und aus dem Verpackungsbereich der
Geflügelindustrie mit Hilfe von Rumensaft
3. Bestimmung der maximalen Biogasmenge, des oTS-Abbaugrades und der
Biogasausbeuten bei jedem Abfallsubstrat
Hypothesen 96
5 Hypothesen
5.1 Reaktoren im Kleinmaßstab
Zur Aufstellung der Hypothesen dieses Versuchsmaßstabs wurden folgende

Variablen bei jedem Abfallsubstrat verwendet:
Raumbelastung
Bioadditiv
Biogasmenge
Die Variable Raumbelastung bezieht sich auf die drei verwendeten organischen
Raumbelastung (3, 6 und 9 g oTS/l).
Zur Vereinfachung der statistischen Auswertung werden unter der Variable Bioadditiv
sowohl die Mischproben mit Einzelverwendung (P, B, R) und mit
Kombiniertverwendung (PB, PR und PBR) der Bioadditive als auch die Mischprobe
ohne Bioadditiv (KTL) verstanden.
Die Variable Biogasmenge bezieht sich auf die mittlere erzeugte Biogasmenge der
drei Ansätze jeder ergebende Mischprobe.
Den Hypothesen liegen zwei statistische Modelle zugrunde. Ein erstes Modell zum
Vergleich der mittleren erzeugten Biogasmengen aller Mischproben (bei jedem
Abfallsubstrat) und ein zweites Modell zum Vergleich der mittleren erzeugten
Biogasmengen aller Mischproben (bei jeder Raumbelastung). Daraus und nach der
statistischen Theorie sind die folgenden Hypothesen entstanden, wobei jeweils H 0
die Hypothese „null“ und H1 die Hyphothese „alternativ“ ist und die Indizes a, b, c, d
die Hypothesen unterscheiden:
Bei jedem Abfallsubstrat
H0-a : Die Biogasmenge ist bei allen Bioadditiven gleich

H1-a : Die Biogasmenge ist bei mindestens einem Bioadditiv verschieden
H0-b : Die Biogasmenge ist bei allen Raumbelastungen gleich

H1-b : Die Biogasmenge ist bei mindestens einer Raumbelastung verschieden
Hypothesen 97
H0-c : Die Biogasmenge ist bei allen Interaktionen (die wechselseitige Beeinflussung
von jedem Bioadditiv mit jeder Raumbelastung) gleich
H1-c : Die Biogasmenge ist bei mindestens einer Interaktion verschieden
Bei jeder Raumbelastung:
H0-d : Die Biogasmenge ist bei allen Abfallsubstraten gleich

H1-d : Die Biogasmenge ist bei mindestens einem Abfallsubstrat verschieden
5.2 Reaktoren im Großmaßstab
Die einbezoge Variable zur Aufstellung der Hypothesen dieses Versuchsmaßstabs

war bei jedem Substrat die Biogasmenge, die bei den eingesetzten
Raumbelastungen erzeugt wurde.
Den Hypothesen liegt dadurch nur ein statistisches Modell zum Vergleich der
erzeugten Biogasmengen bei den verschiedenen verwendeten Raumbelastungen
jedes Abfallsubstrats zugrunde. Daraus sind die folgenden Hypothesen entstanden:
H0-e : Die Biogasmenge ist bei allen Raumbelastungen gleich

H1-e : Die Biogasmenge ist bei mindestens einer Raumbelastung verschieden
Anwendungsbereich der Ergebnisse 98
6 Anwendungsbereich der Ergebnisse
Wie bereits erwähnt, zielt diese Forschungsarbeit darauf ab, einen Beitrag bei der
Suche nach einer Lösung für die Probleme der Entsorgung organischer Abfälle und
dessen Folgen sowie damit für die Probleme der jetzigen und zukünftigen
Energieversorgung zu leisten.
Die Arbeit soll das mögliche Potential bisher wenig beachteter Abfallsubstrate zur
Biogasherstellung verdeutlichen. Dabei sind insbesonderere Fruchtabfälle aus
Pflanzen, die in tropischen, subtropischen oder trockenheißen Gebieten gedeihen
und angebaut werden, von Interesse.
Die Biogasgewinnung unter Verwendung regional häufig vorkommender und bislang

weitgehend ungenutzter Biosubstrate soll mit Hilfe kostengünstiger und
praxistauglicher Verfahren leicht anwendbar und umsetzbar sein. Dadurch soll
zudem die Umwelt geschont und gleichzeitig die Lebensqualität durch bessere oder
günstigere Energieversorgung verbessert werden. Denn Motor für die Entwicklung
eines Landes sind Energie und gesunde Umwelt- und Lebensbedingungen.
Die erhaltenen Ergebnisse beider Versuchsmaßstäbe liefern Erkenntnisse, die

behilflich und anwendbar sein können für die Region sowie für Regionen mit
ähnlichen Verhältnissen (besonders bezüglich der Wetter-, Abfallsubstrat- und
Konsumbedingungen). Sie sind Grunderkenntnisse, die auf andere Maßstäbe
übertragen werden oder als Basis für weitere zukünftige Studien zur anaeroben
Fermentation anderer organischer Abfallsubstrate aus der Landwirtschaft dienen
können. Fachlich bezogen können sie in den Bereichen der Abfallbeseitigung,
Energieversorgung, Düngerherstellung sowie der Biogastechnik, Biotechnologie,
Biochemie eine Anwendung finden.
Verwendete Materialien und Methoden 99
7 Verwendete Materialien und Methoden

7.1 Allgemeines
Abb. 7.1 zeigt die Versuchsplanung. Diese bezieht sich auf drei Versuchsphasen in
drei verschiedenen Maßstäben: Klein-, Mittel- und Großmaßstab im Verhältnis
1:100:200. In der ersten Phase wurden zu Test- und Abschätzungszwecken die
Gärversuche im Mittelmaßstab in Plexiglasreaktoren durchgeführt. In der zweiten
Phase wurden die Versuche im Kleinmaßstab in Durchstechflaschen zur Evaluierung
der anaeroben Abbaubarkeit der organischen Abfälle angesetzt. In der dritten Phase
wurden Edelstahlreaktoren im Großmaßstab zur Untersuchung der anaeroben
Fermentation ausgewählter Abfälle verwendet.
Die erste Versuchsphase fand im Umweltlabor des Lehrstuhls für Energie- und
Umwelttechnik der Lebensmittelindustrie der TU München statt, während die zweite
und dritte Phase an der Facultad de Ingeniería (FI) der Autonomen Universität
Yucatán (UADY) in Mérida, Mexiko, durchgeführt wurden.
Während jeder Versuchsphase wurden Mischproben, die aus zwei oder mehr
Materialien erstellt wurden, vergoren. Als Hauptmaterialien wurden verschiedene
Substrate unterschiedlicher Herkunft verwendet. Die Substrate wurden entweder
durch Stichproben an den jeweiligen Entstehungsorten beschafft oder als Mischung
aus den bei einer Anlage gleichzeitig entstehenden Abfällen in einem definierten
Mischungsverhältnis erstellt. Die jeweiligen Trockensubstanzgehalte der zu
vergärenden Mischproben wurden mit destilliertem Wasser eingestellt.
Abb. 7.1 stellt ebenso die verschiedenen Analysen und Messungen dar, die vor,
während und nach den Versuchen durchgeführt wurden.
Da die erste Phase nur zu Test- und Abschätzungszwecken diente, werden die
Daten im Anhang behandelt. Im Folgenden werden nur die Materialien und
Methoden der zweiten und dritten Versuchsphase beschrieben.
1. Phase: Versuche zu Test- und Substrate:

Reaktorentwurf und -herstellung 1) Papayaabfälle
Abschätzungszwecken
2) Bananenabfälle
3) Zitrusmischung (Grapefruit, Orangen, Mandarinen, Limonen)
Monitoring von Temperatur und Biogasmenge
1 2 3 n einige physikalisch-chemische und chromatographische Analysen
Substrate:
1) Papayaabfälle
Charakterisierung von Einzelsubstraten 2) Bananenabfälle
durch physikalisch-chemische Analysen 3) Zitrusmischung (Grapefruit, Orangen, Mandarinen, Limonen)
(TS, oTS, CSB, N, P) und einige
bromatologische Analysen
4) Geflügelbrutabfälle
5) Hühnermist
6) Geflügelschlachtabwasser
7) Abwasser aus Geflügelverpackungen
2. Phase: Batchversuche im
Kleinmaßstab in Durchstechflaschen Reaktorentwurf und -herstellung
von 125 ml
Physikalisch-chemische Analyse (TS, oTS, CSB, N, P)
und mikrobiologische Analyse von gemischten Proben
Monitoring von Temperatur

1 2 3 n und Biogasmenge
Physikalisch-chemische Analyse (TS, oTS, CSB, N, P)

und mikrobiologische Analyse von gemischten Proben
Substrate:
1) Papayaabfälle
2) Bananenabfälle
4) Abwasser aus Geflügelverpackungen
3. Phase: Versuche im Großmaßstab in Monitoring von

Temperatur, Legende:
Reaktoren von 25 Litern Reaktorentwurf und -herstellung Biogasmenge, pH und
Redox TS: Trockensubstanzgehalt
oTS: organischer
Physikalisch- Trockensubstanzgehalt
chemische CSB: chemischer
Analysen (TS, oTS, Sauerstoffbedarf
CSB, N, P) von
1 2 3 n=12 entnommenen
N: Gesamtstickstoff
Proben P: Gesamtphosphor
Abb. 7.1: Versuchsplanung

7.2 Verwendete Materialien

7.2.1 Eingesetzte Substrate
Als Substrate für die jeweiligen Fermentationen der o. g. Versuchsphasen wurden

Stichproben von folgenden Früchten und Abfällen der Geflügelproduktion verwendet:
1) Papayas
3) Bananen
4) Geflügelbrutabfälle
5) Hühnermist
6) Geflügelschlachtabwasser (mit geringen Anteilen von Federn und Hühnermist)
7) Abwasser aus einer Geflügelverpackungsanlage
Mit Ausnahme der Substrate 4 bis 6, die nur in den Versuchen im Kleinmaßstab
(zweite Phase) verwendet wurden, wurden alle weiteren Substrate sowohl in den
Versuchen im Kleinmaßstab (zweite Phase) als auch in den im Großmaßstab (dritte
Phase) eingesetzt. Die Stichproben der verwendeten Früchtsorten (Substrate 1 bis 3)
wurden nach Bedarf in einem Großmarkt für Obst und Gemüse (Central de abastos
de Mérida) besorgt. Der Zustand schwankte von reif bis überreif. Die Früchte wurden
mit den Schalen in Stücke von 2 bis 5 mm zerkleinert und bei 4 oC für wenige Tage
bis zu ihrer Verwendung gelagert. Bei Zitrusfrüchten (Substrat 2) wurde eine
Mischung aus Grapefruit, Orangen, Mandarinen, Limonen zubereitet. Die Menge
jeder Frucht wurde nach gleichem oTS-Gehalt berechnet.
Die Stichproben der Substrate 4 bis 7 wurden der Produktionskette einer

Geflügelverarbeitungsfirma (Bachoco S. A. de C. V.) entnommen.
Bei Geflügelbrutabfällen wurden sowohl Stichproben von den Brutrückständen als
auch vom Abwasser, das zur Reinigung der Inkubationskörbe dient, aus der
Brutanlage der Firma genommen. In den Brutrückständen waren hauptsächlich nicht
ausgebrütete Eir sowie Eierschalen vorhanden. Zur Erstellung des zu
untersuchenden Substrats wurden hier die Rückstände maschinell mit einem
Haushaltsgerät (Hackmaschine) in Stücke mit einem Durchmesser < 5 mm
zerkleinert. Nach der Charakterisierung (Bestimmung wesentlicher Parameter wie
TS- und oTS-Gehalt) des Abwassers und der Rückstände wurden die zu
untersuchenden oTS-Konzentrationen der Geflügelbrutabfälle mit bestimmten
Abwassermengen eingestellt.
Die Stichprobe des Hühnermists wurde in einer repräsentativen Geflügelfarm des

o. g. Unternehmens gewonnen. Der Gehalt an geringen Mengen an Federn und
Holzwolle in der Stichprobe war ersichtlich.
Beim Geflügelschlachtabwasser wurden Stichproben aus verschiedenen Bereichen

der Schlachtanlage desselben Unternehmens genommen. Beim Schlachtprozess
entstehen üblicherweise Abwasser, Federn und Hühnermist. Ins Abwasser gelangen
organische Rückstände (Hühnerkörperteile und Blut). Federn werden zur Verwertung
getrennt erfasst, während der Hauptteil des Hühnermists als Sonderabfall entsorgt
wird. Allerdings entstehen Rückstände davon, die in den Abfall gelangen.
Als Abwasserstichproben wurden Proben von der schwimmenden, fetthaltigen
halbfesten Schaumschicht, die sich an der Oberfläche des Fettabscheiders der
Kläranlage bildet, gewonnen. Stichproben der Rückstände von Federn und
Hühnermist wurden aus den Abfallcontainern genommen.
Zur Erstellung des zu untersuchenden Substrats wurde dann die halbfeste
Abwasserstichprobe mit einer entsprechenden Menge an Federn und Hühnermist
gemischt. Die zu untersuchenden oTS-Gehalte des gemischten Substrats wurden
dann mit destilliertem Wasser eingestellt.
Beim Abwasser aus einer Geflügelverpackungsanlage wurden Stichproben aus der

Kläranlage der Verpackungsanlage gleicher Firma genommen. Die Proben wurden
ebenso von der schwimmenden, fetthaltigen halbfesten Schaumschicht, die sich an
der Oberfläche des Abwassers der Kläranlage bildet, gewonnen. Die zu
untersuchenden oTS-Gehalte dieses Substrats wurden mit destilliertem Wasser
eingestellt.
Während die Stichprobe des Hühnermists im ürsprunglichen Zustand bei

Raumtemperatur bis zu ihrer Verwendung aufbewahrt wurde, wurden die Proben der
anderen Substrate der Geflügelproduktion bei 4 oC für wenige Tage bis zu ihrem
Einsatz gelagert.
7.2.2 Charakterisierung und Nährstoffzusammensetzung der Substrate
Die verwendeten Substrate wurden in frischen Zuständen zur Bestimmung ihrer

Haupteigenschaften charakterisiert. Bei der Charakterisieung wurden insbesondere
pH-Wert, TS, oTS, CSB, N und NH3-N ermittelt. Der Tab. 7.1 sind die Ergebnisse
davon zu entnehmen.
Tab. 7.1: Eigensachften der frischen Substrate
TS oTS CSB N NH3-N

Substrat
pH g/kg % g/kg % mg/kg % mg/kg % mg/kg
Papayas 3,97 88,28 8,83 80,80 8,08 96.456,21 9,65 1.458,67 0,15 N. D.
Bananen 4,59 209,45 20,94 189,00 18,90 314.239,41 31,42 1.918,08 0,19 N. D.
Grapefruit 3,24 162,08 16,21 154,75 15,47 330.337,89 33,03 1.761,48 0,18 N. D.
Orangen 3,43 150,33 15,03 143,77 14,38 263.408,05 26,34 1.737,21 0,17 N. D.
Mandarinen 3,64 145,05 14,50 138,52 13,85 243.130,19 24,31 2.345,99 0,23 86,91
Limonen 2,75 136,44 13,64 130,36 13,04 155.009,58 15,50 1.482,53 0,15 110,33
Zitrusmischung 3,20 148,47 14,85 116,70 14,18 247.971,43 24,80 1.831,80 0,18 98,62
Geflügelbrutabfälle (gemahlt) 7,00 720,45 72,05 170,19 17,02
Geflügelbrutabwasser 7,78 0,99 0,10 0,32 0,03 28,56 0,00
Hühnermist 7,26 720,75 72,08 594,61 59,46 395.003,63 39,50 27.618,51 2,76 6.256,20
Geflügelschlachtschaum 5,00 524,92 52,49 510,71 51,07 1.785.381,79 178,54 2.209,28 0,22 N. D.
Federn (gemahlt) 5,75 556,04 55,60 541,99 54,20 547.535,82 54,75 75.323,88 7,53 2.488,61
Geflügelmist (beim Schlachten) 4,99 159,84 15,98 144,36 14,44 237.362,19 23,74 6.607,72 0,66 2.149,23
Abwasser aus Geflügelverpackungen 4,54 291,33 29,13 574,12 28,41 1.871.185,10 187,12 2.371,93 0,24 N. D.
Rumensaft (pur) 50,98 5,10 41,38 4,14 43.685,78 4,37 1.196,71 0,12 588,00
Rumensaft (gesiebt) 26,90 2,69 12,94 1,77 32.616,67 3,26 745,54 0,07 359,33
Rumensaft (gedruckt aus Panseninhalt) 7,09 36,86 3,69 25,94 2,59
N. D.: Nicht detektiert
Abgesehen von Geflügelbrutabfällen, Geflügelbrutabwasser, Hünermist und

Rumensaft weisen alle Frischsubstrate pH-Werte im sauren Bereich auf.
Bei den Fruchtsubstraten zeigt Papaya die niedrigsten Werte von TS, oTS und CSB,
während Bananen und Grapefruit bei allen Parametern und Mandarinen nur beim
Gesamtstickstoff die höchsten Werte aufweisen.
Außer Geflügelbrutabwasser haben alle anderen Substrate der Geflügelproduktion

höhere Werte in allen ermittelten Parametern als die andereren verwendeten
Substrate (Papayas, Bananen, Grapefruit etc.). So sind z. B. die oTS-Gehalte der
Geflügelbrutabfälle und des Hühnermists im Vergleich mit denen der Fruchtsubstrate
und des Rumensaftes deutlich höher. Zugleich weisen Geflügelbrutabfälle und
Hühnermist höhere TS-Gehalte als die anderen Substrate der Geflügelproduktion
auf. Der niedrigere organische Anteil der Geflügelbrutabfälle im Vergleich zu denen
der anderen Substrate der Geflügelproduktion (außer Geflügelmist) kann auf den
Gehalt an Eierschalen zurückgeführt werden. Federn weisen den höchsten Gehalt an
CSB und Gesamtstickstoff auf. Wie in Kap. 2.4 beschrieben, enthalten Feder hohe
Mengen an Proteinen (137), welche aus Aminosäuren (dabei Stickstoff haltige
Aminogruppen) aufgebaut sind. Das kann der Grund für den hohen Stickstoffgehalt
sein. Bei der Charakterisierung konnten dazu auch einige Eigenschaften des Bio-
Additivs Rumensaft mit ermittelt werden. Der TS- und oTS-Gehalt des puren
Rumensaftes liegt jeweils bei 5,10 und 4,14 Mass.-%. Nach der Siebung verringerte
der TS-Gehalt um 47,25 % auf 2,7 Mass.-% und oTS-Gehalt um 57,25 % auf 1,77
Mass.-%.
Bezüglich der Nährstoffgehalte ist nach dem „National Nutrient Database for
Standard Reference of the United States Department of Agriculture (USDA)“, (2011)
die Nährstoffzusammensetzung der verwendeten Früchte in Tab. 7.2
zusammengestellt.
Tab. 7.2: Nährstoffzusammensetzung der Substrate nach USDA (179)
Substrate*
Papaya Bananen Grapefruit Orangen Mandarinen Limonen Zitrusmischung
Carica Musa Citrus Citrus Citrus
Citrus paradisi
Papaya acuminata sinensis reticulata limon
Nährstoff (in 100 g) Einheit Refuse 38 Refuse 50 %
Refuse 26 %
% (Schale Refuse 36 % (Schale, Hülse, Refuse 1 % Refuse 2 %
(Schale und (Durchschnitt)
und (Schale) Samen und (Samen) (Samen)
Samen)
Samen) Membran)
Hauptbestandteile
Wasser g 88,06 74,91 90,89 82,30 85,17 85,59 85,99
Energie kcal 43,00 89,00 32,00 63,00 53,00 37,28 46,32
Energie kJ 179,00 371,00 134,00 262,00 223,00 155,96 193,74
Proteine g 0,47 1,09 0,63 1,30 0,81 1,28 1,01
Fette g 0,26 0,33 0,10 0,30 0,31 0,30 0,25
Kohlenhydrate g 10,82 22,84 8,08 15,50 13,34 12,39 12,33
Ballaststoffe g 1,70 2,60 1,10 4,50 1,80 6,39 3,45
Gesamtsucker g 7,82 12,23 6,98 10,58 3,27 5,21
Saccharose g 0,00 2,39 6,05
Glucose (Dextrose) g 4,09 4,98 2,13
Fruktose g 3,73 4,85 2,40
Laktose g 0,00 0,00 0,00
Maltose g 0,00 0,01 0,00
Galaktose g 0,00 0,00 0,00
Stärke g 0,00 5,38 0,00
Asche g 0,39 0,82 0,31 0,60 0,38 0,44 0,43
Mineralien
Kalzium, Ca mg 20,00 5,00 12,00 70,00 37,00 74,08 48,27
Eisen, Fe mg 0,25 0,26 0,09 0,80 0,15 0,68 0,43
Magnesium, Mg mg 21,00 27,00 8,00 14,00 12,00 10,99 11,25
Phosphor, P mg 10,00 22,00 8,00 22,00 20,00 13,88 15,97
Kalium, K mg 182,00 358,00 139,00 196,00 166,00 145,14 161,54
Natrium, Na mg 8,00 1,00 0,00 2,00 2,00 3,76 1,94
Zink, Zn mg 0,08 0,15 0,07 0,11 0,07 0,14 0,10
Kupfer, Cu mg 0,05 0,08 0,05 0,06 0,04 0,06 0,05
Mangan, Mn mg 0,04 0,27 0,01 0,04 0,02 0,02
Selen, Se µg 0,60 1,00 0,30 0,70 0,10 0,53 0,41
Fluorid, F µg 2,20 1,00
*Nährwerte und Gewichte sind von essbaren Anteilen
Bei allen Früchten liegt der Proteingehalt im Bereich von 0,47 bis 1,30 Mass.-%.
Fette machen mit Werten zwischen 0,1 und 0,33 Mass.-% den geringsten Anteil aus,
während der Kohlenhydratgehalt im Bereich von ca. 8 bis 23 Mass.-% liegt. Wie
Marlett (1992) nachgewiesen hat, liegt der Ballaststoffgehalt der essbaren Fraktion
frischer Früchte zwischen 1 und 3 Mass.-%.
Die genannten Standardwerte der Nährstoffzusammensetzung sollen hier aber der
Orientierung dienen, da sie sich meistens auf Früchte ohne Schale bzw. Samen
beziehen und bei den in dieser Arbeit durchgeführten Gärversuchen alle Fruchtteile
vergärt wurden.
Wie in Tab. 7.2 bei Orangen und Limonen gezeigt wird, erhöhen Schalen und Samen
hauptsächlich den Gehalt an Ballaststoffen. Sie bestehen aus organischen
Verbindungen (Polysaccharide, Oligosaccharide, Lignin und ähnliche Substanzen),
welche im Wasser entweder löslich (wie Pektin, Inulin, Gummi und
Fructoligosaccharide) (147) oder unlöslich (wie Cellulose, Hemicellulose, Lignin und
resistente Stärke) sind. Nach Marlett (1992) beträgt die lösliche Faserfraktion von
Früchten im Durchschnitt 13 bis 20 Mass.-% der Ballaststoffe. Der Cellulosegehalt
liegt in etwa bei ≤ 33 Mass.-% der Ballaststoffe, während der von Hemicellulosen bei
25 bis 35 Mass.-% und der von Pektin zwischen 15 und 30 Mass.-% des
Ballaststoffgehalts liegt.
Gemäß USDA (2011) beträgt der Gehalt an Ballaststoffen in frischen Orangen mit
Schale ca. 4,5 Mass.-% (siehe Tab. 7.2) und ohne Schale 2,4 Mass.-%. In Orangen-
und Limonenschalen aber beträgt der Ballaststoffgehalt etwa 10,6 Mass.-%.
Nach Ross et al. (1985) ist der Pektingehalt in Orangen höher als in anderen
Früchten (Apfel, Pfirsich und Erdbeere). Nach Eisenbrand und Schreier (2006)
beträgt der Pektingehalt in frischen Orangen zwischen 0,5 und 3,5 Mass.-% und in
Zitrusschalen (aus Orangen und Zitronen) 30 Mass.-%. Nach May (1990) liegt der
Pektingehalt in Zitrusschalen etwa 20-30 Mass.- %.
In der industriellen Produktion wird Pektin hauptsächlich aus Zitrusfrüchten, in erster
Linie aus Zitronenschalen unter sauren Bedingungen bei pH-Werten zwischen 1,3
bis 3,0 und einer erhöhten Temperatur von 60-100 ⁰C extrahiert (160), (180).
Im Hinblick auf den Gehalt an Proteinen, Fetten und Kohlenhydraten wurden einige
spezifische verwendete Substrate mittels der in Tab. 7.7 aufgeführten Laboranalyse
charakterisiert. Die Ergebnisse sind in Tab. 7.3 dargestellt. Bei Zitrusmischung
ähneln Proteine und Fette die jeweiligen durchschnittlichen theoretischen Werte von
USDA (2011), während der Kohlenhydratgehalt sich vom jeweiligen
durchschnittlichen theoretischen USDA-Wert unterscheidet (siehe Tab. 7.2). Dies
kann auf die gegenseitigen Einflüsse der verschiedenen Inhaltsstoffen der
gemischten Zitrusfrüchte zurückgeführt werden.
Tab. 7.3: Gehalt an Proteine, Fette und Kohlenhydrate spezifischer Substrate
Rumensaft
Abwasser aus der
Nährstoff (%) Zitrusmischung (gedruckt aus
Geflügelverpackungsanlage
Panseninhalt)
Proteine 1,02 3,67 0,38
Fette 0,68 27,15 0,09
Kohlenhydrate 3,86 Nicht gefunden Nicht gefunden
Wie im Kap. 7.2.1 erwähnt, handelte es sich bei dem Abwasser aus der
Geflügelverpackungsanlage um ein fetthaltiges Material aus der schwimmenden
Schaumschicht der Kläranlage der Geflügelverarbeitungsfirma. Durch die
Laboranalyse konnte der hohe Gehalt an Fett in diesem Substrat bestätigt werden,
während Kohlenhydrate wie beim Rumensaft, nicht gefunden wurden. Dieser
Rumensaft war das Bioadditiv, das in den Reaktoren im Großmaßstab verwendet
wurde. Wie in Kap. 7.2.3 beschrieben wird, wurde der Rumensaft aufgrund des
größeren benötigten Volumens aus den Panseninhalten mehrerer, frisch
geschlachteter Rinder durch manuelles Auspressen und Sieben gewonnen, was die
faserigen Anteile zurückhielte. Die Abwesenheit von Kohlenhydraten in diesem
Substrat kann in der Zurückhaltung dieser Anteile liegen.
Bei Hühnermist liegen in der Literatur einige durchschnittliche

Nährstoffzusammensetzungen vor, die, obwohl sie nicht vollständig den gleichen
Verhältnissen (Nahrung, Zuchtart etc.) entsprechen, als Orientierungswerte
betrachtet werden können. Nach Damarys (2010) sind im Hühnermist 17,4 Mass.-%
an Proteinen, 1,3 Mass.-% an Fetten und 15,2 Mass.-% an Kohlenhydraten
vorhanden.
Bei den anderen verwendeten Abfallsubstrate aus der Hühnerproduktion wie
Geflügelbrutabfällen und Geflügelschlachtabwasser kann man sich ein Bild von den
vorhandenen Nährstoffe und deren Konzentrationen machen, wenn man sich die
Nährstoffe von rohem Hühnerfleisch betrachtet, weil diese durch den
Produktionsprozess in die Abfälle bzw. Abwässer gelangen. Nach Honikel (1994)

beträgt z. B. der Eiweißgehalt im Hähnchenfleisch etwa 20,6 Mass.-% und der
Fettgehalt ca. 3,1 Mass.-%. Nach Seuß-Baum (1998) ist der Gehalt an
Kohlenhydraten im Fleisch sehr gering (0,2 Mass.-%). Man kann demzufolge
erwarten, dass höhere Mengen an Eiweiß in den Geflügelbrutabfällen sowie im
Geflügelschlachtabwasser und Abwasser aus der Geflügelverpackungsanlage zu
finden sind. Allerdings kann der Gehalt an Fett bei den letzten zwei Substraten noch
höher liegen, da die Stichproben, wie oben beschrieben, jeweils im Fettabscheider
und in der schwimmenden, fetthaltigen Schaumschicht der Kläranlage genommen
wurden.
Zudem hat das Fleisch auch als Lieferant von Spurenelementen insbesondere von
Zink und Eisen eine große Bedeutung. Im Geflügelfleisch sind beispielweise ca. 2 mg
Eisen bzw. Zink/100 g Muskelfleisch enthalten (181), (182).
7.2.3 Verwendete Bioadditive
Gemäß der Zusammensetzungen augewählter Substrate, der wesentlichen

Prozessbedingungen (Anaerobmilieu und thermophiler Temperaturbereich) sowie
der wesentlichen Abbauprozesse jeder Anaerobphase wurden die verwendeten
Bioadditive zweckorientiert ausgewählt. Bei der Auswahl wurde angestrebt, dass
jedes Bioadditiv möglichst viele Wechselwirkungen mit mehreren Bestandteilen
(Proteine, Kohlenhydrate, Fette, Ballaststoffe etc.) der verwendeten Substrate in den
spezifischen Phasen des Anaerobprozesses aufweist. Allerdings sollte es sich nicht
um universelle Bioadditive handeln. Es sollte aber untersucht werden, ob sich die
kombinierte Wirkung der Bioadditive vorteilhaft (verstärkend) oder schädlich für den
Anaerobprozess herausstellt.
Entsprechend wurden die drei Hauptbioadditive Papain (P), Bacillus (B), Rumensaft
(R) sowie ihre Kombinationen PB, PR, BR und PBR als Bioadditive verwendet. Sie
wurden mit Ausnahme des Rumensafts für die Versuche der zweiten Phase im
Kleinmaßstab in den Durchstechflaschen ausgewählt. Rumensaft wurde ebenso in
den Versuchen im Großmaßstab der dritten Phase in den Reaktoren eingesetzt, da
er eine entscheidende Rolle bei der Biogaserzeugung in der zweiten Phase spielte,
wie im Kapitel 8 (Ergebnisse und Diskussion) behandelt wird. Die in den Kapiteln
2.3.5, 2.4 und 2.5 beschriebenen Eigenschaften der Hauptbioadditive sind in Tab.
7.4 zusammengefasst.
Tab. 7.4: Zusammenfassung der allgemeinen Eigenschaften der verwendeten Bioadditive
Bioadditiv Eigenschaften Arbeitsbedingungen

Temperatur pH-Wert
- 4,0-7,0
- hauptsächlich als Cystein-Endopeptidase (EC 3.4.22): katalysiert die (maximale
Hydrolyse der Peptidbindungen (109) Wirkung)
Wirkung auch als (112): - relativ (112)
- Esterase: katalysiert die Hydrolyse der Esterbindungen hitzebeständig - < 2,8 (instabil
- Thioesterase (EC 3.1.2): katalysiert die Hydrolyse der Esterbindungen und
Papain an der Thiolgruppe - optimaler
Temperaturbereich: irreversible
- Transesterase: katalysiert den Transfer einer Estergruppe von einem 60-70 ⁰C (112) Inaktivierung)
Molekül zu einem anderen (112)
- Transamidase (EC 2.6.1): katalysiert den Transfer einer Amidgruppe - 2,8 (kritisch)
von einem Molekül zu einem anderen (112)
- aerobes und fakultativ anaerobes Bakterium (134)
- besitzt großes Arsenal an Glukan- und Proteinabbauenden Enzymen - 40 ⁰C (optimales
zum Abbau komplexer Polysaccharide und unverdaulicher Wachstum) (134)
Oligosaccharide von pflanzlichem Material (135) - saure und
Bacillus - hitzeresistent (> 45 alkalische
subtilis - kann weder Glucose noch Lactose fermentieren (136). Es kann ⁰C) Bedingungen
Glucose nur unter Anwesenheit von Nitrat als Elektronenakzeptor
fermentieren (183)
- kann durch extrazelluläre Amylasen Stärke hydrolysieren (136)
- Aerobes und fakultativ anaerobes Bakterium (183)
- kann Exoenzymen wie Proteasen oder Amylasen erzeugen (138) - > 45 ⁰C
- Abbau von unverdaulichen Federproteinen (Keratin) (137) - 50 ⁰C (optimales
- saure und
Bacillus - kann Zucker in Abwesenheit von exogenen Elektronenakzeptor Wachstum) (137)
alkalische
licheniformis fermentieren (183)
- überlebt bei noch Bedingungen
- einige Stämme (NCIB 6346) können eine saure Fermentation von höheren
Glucose mit oder ohne Nitratanwesenheit zur Acetatproduktion Temperaturen
durchführen. Dabei wird Ammonium und molekularer Stickstoff (durch
sein Nitritreduktase-Enzym) produziert (183)
- aerobes und fakultativ anaerobes Bakterium (183)
- synthetisiert das Enzym β-Amylase (143)
- fixiert Stickstoff (184), (185), (186): Reduziert Nitrat zu Nitrit (143)
Bacillus - assimiliert Ammonium (144) - saure
- 25-35 ⁰C
polymyxa Bedingungen
- kann Casein, Pektin, Stärke (durch extrazelluläre Amylasen (136))
und Xylan (Bestanteil der Hemicellulose) hydrolysieren (143)
- produziert Gas (143). kann Glucose, Lactose, Glycerin fermentieren
(136), (143)
- anaerobe Bakterien (ca. 50 Mass.-% der Biomasse der Pansenflora)
aller Phasen des Anaerobprozesses (1010 bis 1011 Bakterien/ml);
wichtigste celluloseauflösende Bakterien: Ruminococcus
flavefaciens, Ruminococcus albus und Fibrobacter succinogenes
wichtige hemicelluloseabbauende Bakterien: Butyrivibrio fibrisolvens,
Lachnospira multiparus und Bacteroides ruminícola
wichtige amylolytische Bakterien: Bacteroides amylophilus,
Succinomona amylolítica, Butyrividrio fibrisolvens, Bacteroides
Lachnospira multíparus und ruminícola
- Protozoen (ca. 40-50 Mass.-% der Biomasse)
Wimperntierchen (105-108/ml) und Geißeltierchen (103-104/ml) bauen
Rumensaft Eiweiße und leicht abbaubare Kohlenhydrate ab und verhindern so - 39-41 ⁰C - 5,5-7,0
Azidoze wegen zu hoher Menge an organischen Säuren; können
toxische Pflanzeninhaltsstoffe und Schwermetalle abbauen oder
binden; regulieren die Bakterienpopulation
- Pilze (ca. 5-10 Mass.-% der Biomasse) verwerten in geringem Ausmaß
lösliche Kohlenhydrate und Proteine und bilden langkettige
Fettsäuren; hydrolysieren Esterbindungen zwischen Lignin und
Hemicellulosen oder Cellulosen; lösen Lignin auf
- Archaea (3 % Mass.-% der Biomasse) bilden CH4 aus CO2 und H2 und
verhindern eine übermäßige Bildung von Ethanol und Milchsäure
- Viren (Anzahl unbekannt) regulieren auch die Bakterienpopulation
(mikrobielles Recycling)
Die Erstellung bzw. Gewinnung der Bioadditive wird im Folgenden beschrieben:

Bei dem verwendeten Papain handelte es sich um eine im Labor hergestellte
Grundlösung von kommerziellem Papain und destilliertem Wasser mit einer
Konzentration von 200 mg/l, bei Bacillus um eine Grundlösung vom Bacillus-Pulver
WA3 der Firma „AliBio S.A. de C.V.“ und destilliertem Wasser mit einer Konzentration
von 10 mg/l. Im Bacillus-Pulver waren Bacillus licheniformis, Bacillus polimyxa und
Bacillus subtilis enthalten.
Der Rumensaft für die Versuche im Kleinmaßstab wurde direkt von einer Kuh des
Viehhofs der Fakultät für Veterinärmedizin der UADY durch eine auf ihren Bauch
mehrere Jahre zuvor angepasste Fistel übernommen (siehe Abb. 7.2).
Die Kuh wurde nur mit frischem Gras und Wasser und nicht später als acht Stunden
vor den Probenahmen gefüttert.
Abb. 7.2: Gewinnung der Rumensaftproben
Die Probe des Rumensafts wurde in einem sterilisierten Kunstoffcontainer

gesammelt und ins Labor der FI-UADY transportiert. Anschließend wurde der Saft
durch ein Haussieb abgetropft, um Fasern und Feststoffe zu entfernen, und in einem
Inkubatorschrank bei ca. 35-37 ⁰C bis zu seinem Einsatz aufbewahrt.
Der Rumensaft für die Versuche im Großmaßstab in den Reaktoren wurde aufgrund
des größeren benötigten Volumens aus den Panseninhalten mehrerer, im
Schlachthof der o. g. Fakultät frisch geschlachteter gesunder Rinder durch manuelles
Auspressen und Sieben gewonnen. Für seinen Transport ins Labor der FI-UADY
wurden sterilisierte Kunstoffcontainer verwendet. Anschließend wurde er in
spezifisch berechneten Mengen frisch und direkt in die Reaktoren als Impfmaterial
beim Anfahrprozess eingebracht.
7.2.4 Verwendete Reaktoren

7.2.4.1 Reaktoren im Kleinmaßstab (Durchstechflaschen)
Als Fermenter im Kleinmaßstab kamen Durchstechflaschen mit einem Volumen von

125 ml zum Einsatz. Zu ihrer Abdichtung wurden ein Septum und ein Aluminiumring
eingesetzt. Zur Biogasentnahme und -Messung wurden sterilisierte Glasspritzen mit
5 ml (BD Yale, Dickinson Ind. Quirúrgicas, Brasil) mit Hilfe eines „in stopper“ am
Septum (siehe Abb. 7.3) verwendet. Dieses Hilfsmittel sollte die Anzahl der
Injektionen zur Biogasentnahme optimieren. Zur Abdichtung wurde Epoxidharz mit
Zugabe eines Härters eingesetzt. Um die Temperaturbedingungen und die
Durchmischung einzustellen, wurde ein Schüttelinkubator (Hersteller New Brunswick
Scientific Co. Inc., Edison, N.J. USA) verwendet, wo die Flaschen plaziert wurden.
Abb. 7.3: Inkubation der Reaktoren im Schüttelinkubator
7.2.4.2 Reaktoren im Großmaßstab
Für die Versuchsphase im Großmaßstab wurden Stahlblechreaktoren mit einem

Volumen von 25 l bei thermophiler Temperatur (55 ⁰C) und einer mechanischen
kontinuierlichen Durchmischung von 30 1/min verwendet.
Bei den Stahlblechreaktoren handelte es sich um 15 Reaktoren, die im Rahmen
dieser Forschungsarbeit entworfen, konstruiert und gebaut wurden. Jeder Reaktor
wurde mit einem Durchmesser von 30 cm und einer Höhe von 70 cm mit drei Füßen
konzipiert (siehe Abb. 7.4 a und b). Die oberen 30 cm wurden zylinderförmig und die
unteren 20 cm konisch ausgebildet und mit einem Absperrhahn versehen, um die
spätere Schlammentnahme zu erleichtern. Auf dem Deckelblech wurden jeweils vier
Kupferrohrbügel als Heizelemente (Innendurchmesser 10 mm) angeordnet, die bis in

den konischen Bereich des Reaktors reichten. Im Rahmen dieser Studie wurde
jedoch nur einer der vier Bügel als Heizelement genutzt. Dieser beinhaltete ein
elektrisches Heizelement. Die anderen drei wurden für den späteren Anschluss von
Heißwasserleitungen geplant, so dass jeder Reaktor auch z. B. mit über
Solarkollektoren erwärmtem Wasser im weiteren Verlauf der Forschungstätigkeiten
beheizt werden könnte.
Des Weiteren befinden sich auf dem Deckelblech jeweils ein verschließbarer
Einfüllstutzen (Durchmesser 5 cm) zur Substratbeschickung, ein Gasauslassstutzen
und ein Rührwerksmotor mit Propellergestänge und zwei Flügeln im Innenraum des
Reaktors (siehe Abb. 7.4 a).
Kuferrohr für
Heißwasserleitung
Schlammauslasshahn
a)
a) b)b)
Abb. 7.4: a) Schematischer Aufbau des Reaktors, b) Foto des gebauten Reaktors
Die Temperatur der Reaktoren wurde über einen Temperatursensor im zentralen

Reaktor gemessen. Temperatur und Rührwerksgeschwindigkeit wurden von zwei
zentralen Kontrollschränken, bestückt mit Thermostaten und Stromtransformatoren,
gesteuert. Die Messung und Sammlung des Biogases in jedem Reaktor erfolgte
jeweils über einen Gaszähler und einen mit Aluminium beschichteten Gasbeutel
(siehe Abb. 7.5 a). Die Gasentnahme erfolgte über einen Auslassstutzen, an dem der
Gaszähler angebracht wurde. Dabei strömte das erzeugte Biogas in ein

Plexiglasgefäß, das mit einer Flüssigkeit (Silikonöl) gefüllt war, und hob dort einen
Schwimmer an. Der Schwimmer löste nach einer definierten Hubstrecke (das hier auf
ein Gasvolumen von 50 ml kalibriert wurde) einen Kontakt aus und drehte so das
Zählwerk um eins weiter. Die Anzahl der Kontakte, die auf der Anzeige
wiedergegeben wurde, multipliziert mit 50 ml, ergab das erzeugte Biogasvolumen.
Zum Schutz des Gaszählers und seiner Elektrik vor der Witterung wurde er in einer
wasserdichten Kunststoffbox direkt neben dem Reaktor untergebracht (siehe Abb.
7.5 b und c). Die Gaszähler stammten von der TU München.
Um die elektrischen Installationen auf dem Deckelblech jedes Reaktors gegen die
Witterung, d. h. Regenfälle und Morgentau, zu schützen, wurden Zinkblechwannen
als leicht abnehmbare „Deckel“ auf die Reaktoren aufgesetzt (siehe Abb. 7.9).
b)
a) c)
Abb. 7.5: a) Gaszähler und -beutel, b) Reaktor mit Gaszählerbox, c) Gaszähler im Gaszählerbox
7.3 Verwendete Methoden

7.3.1 Verwendete Methoden bei den Reaktoren im Kleinmaßstab
Wie in Kapitel 7.2.3 beschrieben, bestand das Untersuchungsziel dieses

Versuchsaufbaues darin, einen einstufigen Vergärungsprozeß durch verschiedene
Sonderfaktoren (Bioadditive) phasenspezifisch zu beeinflussen. So sollten das
Enzym Papain und die drei Bacillus Spezies hauptsächlich die Hydrolyse
beeinflussen. Die Mikroorganismen des Rumensaftes sollten aufgrund ihrer
vielfältigen Fähigkeiten alle vier Phasen des Prozesses beeinflussen (siehe Abb.
7.6).
Kohlenhydrate Zucker
Kohlensäure
und Alkohole
Wasserstoff Methan
Proteine Aminosäuren Essigsäure und Kohlendioxid
Wasserstoff Kohlendioxid
Kohlendioxid
und Ammonium
Fette Fettsäuren
Hydrolyse Acidogenese Acetogenese Methanogenese
Enzym (Papain)
Mikroorganismen (Bacillus Spezies)
Mikroorganismen vom Rumensaft
Abb. 7.6: Einflussbereiche der geplanten Maßnahmen
7.3.1.1 Versuchsanordnung
Eine Übersicht der Anordnung der Gärversuche der zweiten Phase stellt Abb. 7.7
dar. Es handelte sich um Batchversuche in o. g. Durchstechflaschen von 125 ml bei
thermophilen Temperaturen (55 ⁰C). Es wurden drei Ansätze pro Mischprobe
gefahren, um den experimentellen Fehler zu reduzieren, die Zuverlässigkeit zu
erhöhen und repräsentative Ergebnisse zu erhalten.
In jeder Flasche wurden 100 ml für das zu vergärende Substrat und 25 ml als
„Headspace“ für das Biogas vorgesehen. Es wurden drei verschiedene
Raumbelastungen (3, 6 und 9 g oTS/l) in den Flaschen untersucht.
2. Phase: 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
Batchversuche im
3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3
3 g oTS/l
Kleinmaßstab in
4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
Durchstechflaschen von
125 ml bei thermophilen 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
Temperaturen (55 ⁰ C) 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6
in Dreifachbestimmung 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7
8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3
Legende 6 g oTS/l 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
1= Blindprobe (Kontrolle) = KTL 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6
2= S + Papain = P
7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7
3= S + Bacillus Spezies = B 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8
4= S + Rumensaft = R
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
5= S + P + B = PB
2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
6= S + P + R = PR 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3
9 g oTS/l
7= S + B + R = BR 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
8= S + P + B + R = PBR
6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6
7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7
8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8 8
Substrate (S): Papaya- Bananen- Zitrusmischung Geflügel- Hühnermist Geflügel- Abwasser aus
abfälle abfälle brutabfälle schlacht- Geflügel-
abwasser verpackungen
Abb. 7.7: Zweite Phase: Batchversuche im Kleinmaßstab in Durchstechflaschen von 125 ml
7.3.1.2 Erstellung der Mischproben in den Durchstechflaschen
Bei der in Kap. 7.2.2 erwähnten Charakterisierung wurde der oTS-Gehalt jedes
Substrats ermittelt. Die eingesetzten Frischsubstratmengen, die zur Einstellung der in
100 ml Füllvolumen untersuchten Raumbelastungen verwendet wurden, wurden
anhand der oTS-Gehalte der Substrate errechnet und werden in Tab. 7.5 dargestellt.
Die Erstellung der Mischproben erfolgte, wie Tab. 7.6 zeigt. Die
Frischsubstratmengen wurden in die Flaschen gefüllt und mit destilliertem Wasser
zuerst auf 80 ml verdünnt. Die übrigen 20 ml wurden für die e

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Wissenschaftszentrum Weihenstephan für Ernährung, Landnutzung und Umwelt

Untersuchungen zum anaeroben Abbauprozess

Vollständiger Abdruck der von der Fakultät Wissenschaftszentrum Weihenstephan

Vorsitzender: Univ.-Prof. Dr. H. Briesen

Die Dissertation wurde am 10.09.2014 bei der Technischen Universität München

3 Anlass der Forschung .......................................................90

6 Anwendungsbereich der Ergebnisse ..............................98

8 Ergebnisse und Diskussion ...........................................129

9 Schlussfolgerungen und Empfehlungen ......................192

1 Einführung und Problemstellung

Organische Abfälle aus den anthropogenen Aktivitäten von Landwirtschaft,

Die o. g. Aktivitäten und die unsachgemäße Entsorgung der organischen Abfälle

Gemessen am weltweiten Energiebedarf liegt die statistische Reichweite der fossilen

Eine effiziente und umweltschonende Behandlung und Verwertung organischer

2 Stand von Wissenschaft und Technik

Beim anaeroben Abbauprozess werden unter Ausschluss von Sauerstoff organische

Die Anwesenheit der verschiedenen Mikroorganismen ist zum Teil vom

Organische Polymere (Kohlendydrate, Eiweiß, Fette)

Essigsäure (Acetat) H2, C1

CH4, CO2 Zweiphasiges Verfahren:

Abb. 2.1: Phasen der Biogasentstehung (13), (14)

In dieser Phase werden durch Enzyme die hochmolekularen, zumeist ungelösten

Ob ein bestimmtes Substrat einer anaeroben Behandlung zugänglich ist,

Zwischenprodukte limitiert werden, d. h. die Methanproduktion würde sich ohne

2. Phase: Acidogenese (Versäuerungsphase)

In dieser Phase werden von verschiedenen fakultativ und obligat anaeroben

Unter Normalbedingungen (20 ⁰C, pH = 7, alle Substratkonzentrationen = 1 Mol/l)

Die methanogenen Bakterien sind Substratspezialisten, die nur sehr wenige

Die Methanbakterien haben unterschiedliche Ansprüche (23), wie z. B.:

- mindestens 50 Mass.-% Wassergehalt

2.1.1 Einfluss von Prozessparametern

Der größte Teil der im Anwendungsbereich verwendeten Biogasfermenter besteht

In einem solchen System können verschiedene Prozessgrößen beschrieben werden,

2.1.1.1 Einfluss der Temperatur

Grundsätzlich laufen chemische Reaktionen umso schneller ab, je höher die

- psychrophiler Temperaturbereich (< 20 ⁰C)

Abb. 2.2: Abhängigkeit der relativen Methanproduktion von der Temperatur,

Im Vergleich zu versäuernden Bakterien sind Methanbakterien bedeutend

thermophile und hochthermophile Methanbildner (z. B. Methanobakterium

Bei steigender Temperatur nimmt die Temperaturempfindlichkeit (besonders der

Obwohl im thermophilen Temperaturbereich ein schnellerer und zum Teil vermehrter

Zusammenfassend kann gefolgert werden, dass für Praxisanlagen Gärtemperaturen

weiterer Parameter wie z. B. den Gasverwertungsmöglichkeiten, den

Mesophiler Temperaturbereich Thermophiler Temperaturbereich

- große Vielfalt an methanbildenden Bakterienarten, - kleinere Reaktorvolumina

- Sterilisation von Pflanzensamen (außer Tomate).

2.1.1.2 Einfluss der Substratzusammensetzung

CaHbOcNdSe + (4a – b - 2c + 3d + 2e) H2O = 1/8 (4a + b - 2c - 3d - 2e) CH4 +

Tab. 2.6: Theoretische Biogaszusammensetzung beim Abbau der wesentlichen organischen

CH4 (Vol.-%) CO2 ( Vol.-%) NH3 (Vol.-%) H2S (Vol.-%)

Stickstoff stellt einen essentiellen lebensnotwendigen Stoff (unter anderen wie

Verhältnis von Kohlenstoff, Stickstoff und Phosphor

Das Mindestnährstoffverhältnis für die anaerob belebte Biomasse berücksichtigt den

CSB:N:P ca. 300:5:1

für den Abbau von Lipiden und Proteinen:

CSB:N:P etwa 800:5:1

Die o. g. Verhältnisse verdeutlichen, dass beim anaeroben Kohlenstoffabbau nur

Da der Schwefel von den Methanbakterien nur in reduzierter Form aufgenommen

In der Regel begrenzt ein Mangel an Spurenelementen bei den methanogenen

Tab. 2.7: Optimale Konzentrationen gelöster Spurenelemente im Anaerobreaktor (31), (32)

Eisen Nickel Kobalt Molybdän Selen Chrom Mangan Blei

Der Feststoffgehalt (auch als Trockensubstanzgehalt, Trockenmassenkonzentration,

Andererseits nehmen mit steigendem Feststoffgehalt Probleme beim hydraulischen

2.1.1.3 Einfluss der Verweilzeit und der Raumbelastung

Verweilzeit Z = V/Vs, (d)