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Integrantes del grupo:

Llorente, Lucía
Parsons, Ágata
Suarez, Tamara

Informe de laboratorio Nº1


INMUNODIFUSIÓN
Objetivo:
Detectar la formación de complejos inmunes constituidos cuando el antígeno y el
anticuerpo difunden y se unen en un punto medio (punto de equivalencia) donde se observa
una banda de precipitado.

Fundamento: Cuando un anitcuerpo bivalente se pone en contacto con un antígeno


polivalente soluble contra el cual es específico, se forman complejos Antígeno-Anticuerpo
que precipitan dando lugar a una reacción visible.

INMUNODIFUSIÓN EN GEL DE AGAROSA EN PLACAS DE PETRI

Materiales
.Placa de Petri limpia y desengrasada
.Pipetas de plástico de 5 ml
.Propipetas
.Pipetas Pasteur
.Tips
.Frasco Elenmeyer
.Cámara húmeda
.Agar al 2%
.Buffer Fosfato Salino (PBS 1 %)
.Reactivos (sueros y antígenos)
Muestras: Se utilizó suero puro bovino, y diluciones de 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 de este
mismo y un antisuero bovino.

Metodología:

1) Preparación del Agar al 3 %: la solución de Agar se preparó sobre la base de 3 gramos


de Agar en polvo cada 100 ml de PBS ( Buffer Fosfato Salino).Una vez preparado se lleva
a horno microondas hasta que se licue completamente.

2) Preparación del gel la placa de Petri: se coloca sobre la placa5 ml de agar utilizando una
pipeta, distribuyendo el mismo homogéneamente el volumen en la placa, dejando reposar
hasta su completa solidificación.

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3) Perforación del Gel: se realiza según el modelo siguiente

A: Patrón
B: Dilución 1:2
C: Dilución 1:4
D: Dilución 1:8
E: Dilución 1:16
F: Dilución 1:32
G: Antisuero Bovino

El modelo es utilizado a modo de plantilla para realizar la perforación del Gel,que se


perfora usando a modo de sacabocados una pipeta Pasteur, extrayendo Agar por aspiración.

4) Preparación de los Reactivos: se realiza una dilución seriada en base 2 del suero,
partiendo de la muestra de suero puro, usando como diluyente el PBS ( Buffer Fosfato
Salino), las cantidad de diluciones a realizar son acordes al número de perforaciones que
posea el modelo seleccionado, para el presente trabajo se utilizan diluciones 1:2 ; 1:4 ; 1:8 ;
1:16 ; 1:32 .

5) Siembra de las muestras: antes de comenzar la siembra es conveniente realizar una


marca en la placa a modo de referencia para poder identificar luego el número de dilución
(ó muestra) que se encuentra en cada hoyo.Se siembra con micropipeta 5 µl de cada
dilución, y el suero patrón, por orificio, partiendo desde el punto de referencia marcado en
la placa y en sentido horario, sembrando por último en el orificio central 5 µl del antígeno.

6) Incubación en Cámara Húmeda: la placa sembrada se lleva a incubación en cámara


húmeda por un lapso de 48 horas.

7) Lectura de los resultados:

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DILUCIONES

Objetivo:
Disminuir la concentración de un soluto en una solución, con el fin de ser utilizado en
distintas pruebas semi cuantitativas.

Procedimiento
Muestras: Colorante en representación del suero.

Materiales necesarios:
Colorante (en representación del suero)
 Agua destilada (en representación de solución salina o medio de cultivo)
 Pipetas
 Propipetas de tres vías con válvulas
 Tubos
 Gradillas
 Vaso descartador

Metodología:
a) Realizar una dilución 1:10 a partir del suero puro. A partir de esta primera dilución,
efectuar cinco diluciones en base 2 (Volumen necesario: 3 ml).
b) Realizar una dilución 1:2 a partir de un suero puro. A partir de esta dilución (1:2),
efectuar cinco diluciones en base 10 (Volumen necesario: 9 ml).

a)

b)

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Cuestionario:

1. Tengo 2 ml de suero de un bovino sospechoso de estar infectado con Leptospira.


Para realizar la técnica de diagnóstico de aglutinación debo realizar cinco diluciones
seriadas en base 2. El volumen final de cada dilución es de 200 microlitos por
dilución. Esquematice como se realizará la dilución.

2. Defina el concepto de título. ¿Cómo procedería para obtener el título de anticuerpos


anti-toxoplasma en un suero felino, por inmunofluorescencia? Sabiendo que un
felino infectado presenta un título mayor de 1:256.

Titulo: es la inversa de la máxima dilución en que la muestra da positivo.


Se preparan improntas de Ag en este caso de Toxoplasma gondii sobre un porta.
Sobre la impronta se coloca el suero de felino del cual se sospecha la presencia de
anticuerpos específicos.
Si la reacción es positiva habrá formación de complejos inmunes.
Estos complejos se evidenciaran por medio de una Ig anti-felino marcada, que reaccionara
con el anticuerpo del paciente

3. Para la técnica de ELISA necesito realizar la dilución del anticuerpo conjugado con
peroxidasa. La dilución de trabajo es 1:1500. Quiero preparar 3 ml ¿Cómo podría
realizar esa dilución utilizando la menor cantidad de conjugado posible?

Se debe utilizar 0,002 ml de conjugado y 2,998 ml de diluyente.

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Cuestionario