PROYECTO DE INVESTIGACIÓN CIENTIFICA

I. Generalidades:
1. Título: (Efecto de reguladores de crecimiento sobreo en )
Embriogénesis somática en Carica papaya L. “Papaya” Var….??

2. Personal Investigador:

2.1. Autor:

Juan Javier Pedro Huaman, Estudiante de la Facultad de Ciencias

Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.

E-mail: juph_1789@hotmail.com

2.2. Asesor:

Dr. Julio Chico Ruiz

Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo

E-mail:

3. Tipo de Investigación:

3.1. De acuerdo al objetivo: Básica

3.2. De acuerdo a la técnica de Contrastación: Explicativa

4. Régimen de Investigación: Libre

5. Departamento y Secciones a las que pertenece el Proyecto:

Departamento de Ciencias Biológicas, Sección de Botánica, Cátedra de Fisiología
vegetal.
 6. Localidad e Institución donde se desarrollará el Proyecto: La recolección
de muestras se llevará a cabo en los alrededores de la Universidad Nacional de
Trujillo, Provincia de Trujillo, Región La Libertad. El trabajo experimental se
realizará en la Escuela de Ciencias Biológicas, en la sección de Botánica de la
Universidad Nacional de Trujillo.

7. Tiempo que durará la ejecución del proyecto: 6 meses

8. Fecha Probable de Inicio y Término: 23 de mayo al 23 de Noviembre del

2011.

9. Cronograma de Trabajo:

Fecha de Fecha de Tiempo

Actividades Inicio Término
Toma de Datos:
20 Semanas
Datos Primarios 23/05/2011 10/10/2011
1 Semana
Datos Secundarios (Revisión 11/08/2011 17/10/2011
Bibliográfica)
Análisis de Resultados 18/10/2011 07/11/2011 3 Semanas
Redacción del Informe 08/11/2011 15/11/2011 1 Semana
Imprevistos 16/11/2011 23/11/2011 1 Semanas
Total 26 Semanas

10. Horas semanales dedicadas al Proyecto: 30 horas.

MODELO OGPRODEIN:

Las modificaciones o cambios con respecto al anterior son los siguientes

puntos:

4. Área de Investigación/ Disciplina Científica: Ciencias naturales

5. Línea y Sub Línea de Investigación: Línea de investigación: Genotoxicidad y

Sub Línea de Investigación: Genotoxicidad en Vertebrados
 6. Ciencia y tecnología

8. Presupuesto: El costo total ascendió a S/.861.80

9. Tareas del Investigador 1:

• Elaborar el Proyecto de Investigación

• Ejecutar el Proyecto de Investigación

• Análisis de resultados

• Elaboración de Informes

Tareas del investigador 2:

 Asesoramiento en la Metodología y
procedimientos.

 Asesoramiento en el análisis de resultados

II. Recursos Disponibles:

1. Personal:

 Juan Javier Pedro Huaman

 Dr. Julio Chico Ruiz

2. Bienes:

 Agitador de vidrio

 Autoclave(alguna especificación del nombre real del artefacto y su

marca??)

 Balanza Analítica

 Cámara digital Lumix F2 PANASONIC 10 MP y 4x Optical zoom

 Cronometro

 Estereoscopio(alguna especificación del nombre real del artefacto y su

marca??)

 Mechero de alcohol

 Microscopio compuesto(alguna especificación del nombre real del

artefacto y su marca??)

 Olla a presión de vapor

 pHmetro Digital

 Pipetas de 1, 2 y 10 ml.

 Placas Petri

 Probetas (50 ml. Y 100 ml.)

 Refrigeradora

 Termómetro ambiental

 Termoagitador (alguna especificación del nombre real del artefacto y su

marca??)

 Vasos de Precipitación (250 ml. Y 500 ml.)

III. Recursos No Disponibles:

Clasificador de Gastos para Investigación en Ciencias Biológicas:

2. Gastos presupuestarios
2.3. Bienes y Servicios
2.3.1. Compra de Bienes
2.3.11.1. Alimentos y bebidas
2.3.12. Vestuarios y Textiles
2.3.12.1.1. Vestuarios y Accesorios y prendas
Cantidad Precio Unitario Precio Total
Guardapolvos?? 1 25.00 25.00
2.3.15. Materiales y Útiles
2.3.15.1. De Oficina
2.3.15.12. Papelería en General, Útiles y Materiales de Oficina
Cantidad Precio Unitario Precio Total
Papel Bond 6 12.00 72.00
“Report” T-A4-75
gr. (1/2 millar)
Lapicero Faber 6 0.50 3.00
Castell 033 (azules
y negros)
Portaminas Faber 1 2.50 2.50
Castell 0.5

Caja de 2 2.50 5.00

minas 05 (2B)
Plumón indeleble 2 1.50 3.00
Libreta de Apuntes 1 6.00 6.00
Borrador Faber 1 1.00 1.00
Castell
Lápiz corrector 1 2.50 2.50
Faber Castell
Marcador 1 2.00 2.00
Fluorescente 1546
Faber Castell
2.3.15.3. Aseo, Limpieza y Cocina
2.3.15.3.1. Aseo, Limpieza y Tocador:
Cantidad Precio Unitario Precio Total
 Jabón en Gel 1 5.00 5.00
Papel Toalla (rollo) 3 3.00 9.00
Jabón Carbólico 1 2.00 2.00
Alcohol Yodado 1 2.00 2.00
( 250 ml.)
2.3.18. Suministros Médicos
2.3. 18.2. Material, insumos, instrumental y accesorios médicos,
quirúrgico, odontológicos y de laboratorio
2.3.18.2.1. Material, insumos, instrumental y accesorios médicos,
quirúrgicos, odontológicos y de laboratorio
Cantidad Precio Unitario Precio Total
Hojas de Bisturí Nº 20 0.50 10.00
22
Estiletes 4 4.00 16.00
Pliego de papel 12 4.00 48.00
filtro
Pinzas 2 6.00 12.00
Laminas Porta
3 8.00 24.00
Objetos (Caja)
Laminas Cubre
3 6.00 18.00
Objetos (Caja)
Gotero de Plástico 4 1.00 4.00
2.3.199. Compra de Otros Bienes
2.3.199.1.2. Productos Químicos
2,4- 100 Xxxx Xxxx
diclorofenoxiacetico
1000 ppm.(ml.)
Ácido
Naftalenoacético, 100 Xxxxx Xxxxxx
ANA (ml.)
Agar Phytagel (g.) 100 Xxxxx Xxxxx
Agua destilada (L) 20 1.00 20.00
Alcohol 90º (L.) 3 5.00 15.00
Azúcar blanca (Kg) 0.50 3.80 1.90
Benzil amino
100 Xxxxx Xxxx
Purina BAP (ml.)
Hipoclorito de
Sodio al 5% (lejía
5 1.00 5.00
comercial por 572
g.)
Soluciones Patron
1000 Xxxx Xxxx
de MS (ml.)
2.3.199.199. Otros bienes
Papel Alumino x
3 8.00 24.00
8m.
Regla de Plástico
2 1.00 2.00
Artesco x 30 cm.
2.3.21.2.99. Otros gastos de Viajes domésticos
Cantidad Precio por Precio Total
unidad
Pasajes Ida y 100 1.40 140.00
Vuelta del
Investigador
2.3.22.23. Servicio de Internet
 Cantidad Precio por Precio Total
unidad
Servicio de 50 1.00 50.00
Internet (Hora)
2.3.27.11. Otros servicios
2.3.27.11.99. Servicios diversos
Cantidad Precio por Precio Total
unidad
Servicio de Copias 400 0.05 20.00
Servicio de 5 2.00 10.00
Anillado
2.6.32.3. Adquisición de Equipos Informáticos y de Comunicaciones
2.6.32.31. Equipos Computacionales y Periféricos
Cantidad Precio por Precio Total
unidad
CD Rom’s (Unidad) 4 0.80 3.20
Dispositivo de 1 20.00 20.00
Almacenamiento
Masivo USB 2.0
Data Traveler
Kingstom 2 GB.
TOTAL 418.10

IV. Financiamiento: Autofinanciamiento

V. Resumen:

El árbol de la papaya es originario de las regiones tropicales del continente

americano. Los ejemplares naturales no llegan a 2 metros de altura, pero los
cultivados alcanzan casi 8 metros. También el fruto alcanza un tamaño a veces
enorme, y llega a pesar 9 kilogramos. Sin embargo, es susceptible a las
principales enfermedades virales que atacan al cultivo. Por esta razón se
requiere establecer un método de regeneración de plantas vía embriogénesis
somática que sirva de base al desarrollo de un protocolo de transformación
genética para obtener plantas resistentes. El objetivo de este trabajo fue
obtener embriones somáticos de papaya a partir de hojas jóvenes de este
cultivo obtenidas de campo. Para ello, se evaluó el efecto de diferentes factores
en la embriogénesis somática. Los segmentos foliares se expondrán a tres
fases (Inducción de callos, multiplicación celular e inducción de embriones), la
primera fase presentará dos tratamientos consistentes en MS + 1ppm y 2ppm
de 2,4 D respectivamente en condiciones de oscuridad; la fase de multiplicación
celular constará de cuatro tratamientos consistentes en MS+ (ANA al 0,1 y 0,2
ppm. Con BAP al 0,2 y 0,4 ppm.) y MS+2,4D al (2 y 5 ppm.); y en la fase final
de inducción de embriones se usará un único tratamiento consistente en MS+
ANA 0,5 ppm con un fotoperiodo de 16 horas luz y a temperatura promedio de
27+1º C. Finalmente en la evaluación se realizaran cortes histológicos y se
emplearan análisis estadísticos para la determinación del protocolo más
adecuado para la obtención de embriones somáticos.

Palabras clave: explante, callo, embrión somático, desarrollo embrionario,

plántula, papaya, multiplicación celular, cotiledón.

PLAN DE INVESTIGACIÓN

I. Introducción:

La contaminación y polución del agua se ha ido incrementando con el

tiempo, debido a que los ríos y mares son los receptores finales de las
evacuaciones de las aguas residuales domésticas, industriales y aquellas
provenientes de la agricultura metales pesados representa un serio problema a
escala mundial. Existen diversas factores que originan la contaminación de las
aguas, entre los cuales podemos mencionar a las industrias ubicadas a lo largo
de los ríos y zonas litorales, la expansión de las áreas urbanas, actividades
mineras entre otros, este último factor es de vital importancia debido a que las
actividades mineras se desarrollan en la Cordillera de los Andes muy cerca de la
zona de nacimiento de muchos ríos que desembocan en la cuenca del océano
Pacífico o Atlántico, estos cursos llevan en su recorrido residuos sólidos y
líquidos provenientes de estas actividades contaminando o polucionando a las
aguas afectando la flora y fauna que en ella se desarrolla1.

La actividad minera es considerada una de las mayores fuentes de

contaminación para las aguas de los ríos y lagos aledaños a los centros de
producción mineros, los relaves liberados en estos procesos se constituyen de
muchos contaminantes. Los residuos que alteran las condiciones físicas y
biológicas de los cuerpos de agua, son los metales pesados como el Plomo (Pb),
Vanadio (V), Arsénico (As), Cromo y otros, los cuales son considerados altamente
tóxicos para la mayor parte de organismos vivos pasando a ser una de las
formas más peligrosas de contaminación del medio acuático, debido a que no
son biodegradables como la mayoría de contaminantes de tipo orgánico., debido
a que dichos metales se pueden bioacumular y su acción puede ser muy
prolongada en los organismos que se ven afectados por ellos . Otra de las
razones por las cuales se estudia exhaustivamente la contaminación por metales
pesados se debe a que presentan efectos genotóxicos y citogenéticas
comprobados por diversos experimentos realizados en plantas, animales, etc. En
las aguas del Río Moche del Valle de Santa Catalina en la Provincia de Trujillo se
detectó como contaminantes los siguientes metales pesados como Cobre (Cu),
Zinc (Zn), Plomo (Pb) y Fierro (Fe), los cuales habrían llegado como resultado de
los arrojos de relaves mineros a las aguas de este río2.

La genética toxicología surgió en respuesta a la preocupación del hombre

respecto a problemáticas como la anteriormente mencionada que pone en tela
de juicio la calidad del ambiente y sus componentes, esta ciencia tiene como
objetivo identificar y analizar la acción de aquellos agentes que son capaces de
interactuar de manera negativa sobre los componentes de la célula y/o de
manera especial sobre el material genético. A estos agentes, que pueden ser
físicos, químicos y biológicos, se les denomina citotóxicos o genotóxicos
dependiendo si su acción es sobre la célula como unidad funcional y estructural
de los seres vivos o solamente sobre el genoma. El blanco de acción de todos los
agentes citotóxicos y genotóxicos es la célula, por lo cual, tanto los organismos
unicelulares como los pluricelulares ya sea a nivel somático o germinal pueden
servir para la evaluación de cualquier agente que pueda actuar como factor
tóxico 3. Los posibles efectos que se pueden detectar en un sistema experimental
para evaluar compuesto citotóxicos y genotóxicos puede ser muerte celular en
el caso que la acción sea citotóxica y efecto mutagénico, carcinogénico y
clastogénico en el caso que el efecto sea genotóxico 4.

Cuando se propone evaluar el riesgo de un determinado agente cito o

genotóxico como es el caso de los metales pesados como el Cobre (Cu), Zinc
(Zn), Plomo (Pb) y Fierro (Fe) se debe tener en cuenta las propiedades físico-
químicas del compuesto, su potencia y la persistencia en un determinado
sistema. En este momento es donde se presenta la necesidad de saber elegir un
determinado sistema de prueba que permita detectar con la mayor confianza y
precisión, si el agente es cito y/o genotóxico. Para esto hay que tener en cuenta
que en la actualidad no existe una única prueba que permita detectar
mutágenos y carcinógenos ambientales con toda certeza, a la vez que cualquier
paquete o batería de pruebas podrían resultar insuficiente para demostrar la
ausencia de efecto o actividad muta-carcinogénica en un determinado organismo
5
. Las líneas de evidencias que se deben para evaluar una sustancia con posible
efecto mutagénicos son las siguientes: registros de casos en las poblaciones,
exposición crónica en animales, actividad genotóxica en animales mediante
prueba de aberraciones cromosómicas (AC) o micro núcleo (MC), actividad
genotóxica en líneas celulares establecidas usando pruebas de (AC), Intercambio
entre Cromátidas Hermanas (ICH), actividad epigenética en animales y la prueba
de verosimilitud bioquímica y biofísica. Los sistemas o pruebas para evaluar un
agente toxico se puede dividir en tres grandes grupos: In Vitro, in vivo, in vivo-in
vitro y directamente en los ecosistemas o in situ. Los estudios in vivo se lleva a
cabo en animales como ratón, donde se pueden realizar evaluaciones como
inducción de cáncer, (AC), formación de micronúcleos (MN), Letales Dominantes.
ICH, prueba cometa (TC); En insecto como Drosophila melanogaster, donde se
pueden inducir mutaciones puntuales, rearreglos estructurales, letales recesivos;
En plantas donde se evalúan mutaciones puntuales, AC y MN 6.

Según los expertos en bioensayos de toxicidad, la utilización de anfibios en

embriología es frecuente. La reproducción de estos animales en cautiverio es
sencilla, de bajo costo y cuenta con la ventaja de poder manipular un embrión
libre, en el que se puede estudiar con experimentos apropiados, con
modificación la cual puede ser natural y/o inducida de la biología del desarrollo
de diversos órganos y analizar los resultados finales luego de la metamorfosis,
en el animal adulto. Se recomiendo el uso de embriones de anfibio debido a que
son muy sensibles a la contaminación ambiental y se ha propuesto que esta es
 una de las posibles causas de la disminución en la abundancia de estas especies
7
.

II. Justificación:

Actualmente, la actividad minera presenta un crecimiento cada vez más y

más acelerado; inclusive la actividad minera informal es la mayor fuente de
ingresos en algunos de los poblados más pobres de la región La Libertad. Por
ende, la contaminación de las aguas de las cuencas hidrográficas del país esta
en aumento, debido a los relaves cargados de metales pesados y otros
compuestos tóxicos que son arrojados sin ninguna consideración a los ríos y
lagos; poniendo en grave peligro a los seres vivos que habitan en ellos y en las
riberas aledañas. En nuestra localidad, no se hacen evaluaciones periódicas de
los posibles efectos genotóxicos debidos a la acumulación de metales pesados
en las aguas del Río Moche, a pesar de que la presencia de estos elementos
contaminantes ya ha sido corroborada en múltiples investigaciones anteriores
como la de Padilla, 1993, esto se debe en parte a que es imposible la realización
de pruebas de alta complejidad que usen parámetros como la prueba cometa
para detectar alteraciones del material genético debido a su elevado costo y la
falta de las tecnologías necesarias . Es por ello que el presente proyecto de
investigación propone un método de evaluación que utiliza metodologías más
accesibles y factibles, que podrían solucionar los problemas que imposibilitaban
el monitoreo de la genotoxicidad de las Aguas del Río Moche; usando como un
bioindicador al sapo Chunus sp., un organismo que se encuentra comúnmente
en los cuerpos de agua y que presentan grandes potencialidades de uso para
bioensayos, debido a su elevada reproducción en cautiverio y su elevada
susceptibilidad a la contaminación ambiental. La determinación de los efectos
genotóxicos de las aguas del Río Moche usando como individuo de prueba a un
habitante común de ríos como es el sapo Chaunus sp., es de vital importancia
para la sociedad en general pues refleja el alcance de la contaminación de esta
fuente de agua y sus posibles riesgos para todos los seres vivos que se
relacionan con ella. Se espera que con los resultados obtenidos de esta
investigación se logre concientizar a las autoridades y población en general
respecto al gran peligro al que actualmente están expuestos por los relaves de
las actividades mineras, motivar investigaciones más profundas al respecto y
que se propongan medidas mitigadoras y correctivas para prevenir mayores
daños en el ecosistema.
Referencias Bibliográficas

1. Ramirez, O., Pietro García, F. y Galadán Vidal ,C., 2004, Bioacumulación y

daños genotóxicos en Pez Cebra (Danio rerio) por arsénico en aguas de
Zimapán, Hidalgo (México). Ensayos en cortos plazos de Revista
AquaTIC, nº 21 - 2004, México. Págs. 62-70
2. Padilla Sagástegui, S.E., 1993, Bioensayos de toxicidad letal de Cobre,
Zinc, Plomo y Fierro a diferentes concentraciones y tiempos de
exposición, Trabajo de habilitación para ascenso de categoría de la
Universidad nacional de Trujillo, Facultad de C.C.BB., Escuela de CC.BB.,
Perú,1993, p. 52.
3. Hartwig, Andrea, 2008, Role of DNA Repair Inhibition in Lead- and
Cadmium-induced Genotoxicity: A Review de University of Bremen’s
Journal Nº 180, Alemania 2008, Págs. 25-30.
4. Hick A.S., Paczkowski M.G., Gadano A.B. y Carballo M.A., 2007,
Biomarcadores de Genotoxicidad en Individuos Expuestos al Arsénico de
Latin American Journal of Pharmacy (formerly Acta Farmacéutica
Bonaerense) Lat. Am. J. Pharm. 26 (5): 691-9 (2007) Págs 691-699.
5. Trenado Uribe M.B., Rico Rodrigues M.A., Balzacar R.,2007, Evaluación
del efecto genotóxico y teratogénico del Plomo en renacuajos, en
condiciones de laboratorio. de BIOTECNOS Nº 584 de la UAQ de
Querétaro, México 2007, Págs. 42-48.
6. Kašuba V., Rozgaj R., Fuèi´c A., Varnai V.M., y Piasek M., 2004, Lead
acetate genotoxicity in suckling rats de Revista de Biologia, Bratislava,
vol. 10, 59/6: 779—785, 2004.
7. Hernández Salazar T., Arencibia Arrebola D.F. y Rosario Fernández L. A.,
2003, Evaluación de la genotoxicidad mediante el ensayo de dominantes
letales, un artículo técnico, Latin American Journal of Pharmacy (formerly
Acta Farmacéutica Bonaerense) Lat. Am. J. Pharm. 30 (7): 687-5 (2003).