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Por regla general, las especies individuales de los estreptococos se clasifican basados en sus
propiedades hemolíticas.
-Asas bacteriológicas
- mechero
- regla
PROCEDIMIENTO
Agar sangre:
Observar el aspecto puntiforme y traslucido de las colonias y la acción sobre el medio
que puede variar desde hemólisis completa (beta) y meta hemólisis (alfa) hasta ausencia
de acción (gamma). (Comparar estas características con las del Sthaphylococcus, que
tiene colonias opacas y grandes).
Caldo Thioglicolato:
Casitone ......................... 15 grs
Exracto de levadura ..............5 grs
Dextrosa ......................... 5.5 grs
Cloruro de sodio.................. 2.5 grs
l-Cystina ........................ 0.5 grs
Thioglicolato de sodio ..........0.5 grs
Agar ............................. 0.75 grs
Rezazurin......................... 0.001 grs
Agua destilada ................... 1,000 ml
Este medio se reparte en tubos a razón de 10 ml por cada uno. Con frecuencia el
Streptococcus es anaerobio o microaerofilo y desarrolla bien en este medio aunque el
cultivo sea negativo, sea aerobiosis (agar sangre). El germen desarrolla en grumos
pequeños sin producir turbidez.
Cuando se trata de muestras muy contaminadas de las cuales se desea aislar
preferencialmente el Streptococcus, adicionar el agar sangre de sodio a la concentración de
0.2 grs. Por mililitro. Esta adición da al medio una propiedad selectiva.
CONCLUSIONES
Los Streptococcus en la observación microscópica son cocos Gram (+), proliferan en
pares o cadenas, son esféricos u ovales de 2 um de diámetro aproximadamente.
BIBLIOGRAFÍA
Microbiologia Medica de MURRAY, ROSENTHAL y PFALLER ,
Streptococcus, 6ta Edicion, GEA CONSULTORIA EDITORIAL,
S.L.L.,Madrid, España.
http://es.scribd.com/doc/18666906/10-Streptococcus
http://qfbmicro.blogspot.com/2008/05/practica-3-streptococcus.html
FUNDAMENTO CIENTIFICO
Género Streptococcus. Procedimientos de laboratorio
Como ya mencionamos para el género Staphylococcus la identificación comienza
con el estudio de la morfología macroscópica y microscópica a partir de un cultivo
puro. En cuanto a los requerimientos nutricionales el género Streptococcus es
exigente y por lo tanto debe ser cultivado en medios ricos que le aporten los
nutrientes necesarios, por ejemplo agar sangre ovina al 5%.
Dentro de las pruebas bioquímicas para la identificación, la primera, luego de
determinar que se trata de cocos Gram positivos, es la prueba de la catalasa. Ver
capítulo 16, Género Staphylococcus.
Luego de determinar que se trata de cocos Gram positivos, catalasa negativos,
debemos observar el efecto que producen las colonias de la cepa en estudio sobre
placas de agar sangre ovina al 5% (tipo de hemólisis). Así podemos clasificar este
grupo de gérmenes en:
• beta-hemolíticos: son aquellos que producen una hemólisis total de los glóbulos
rojos, observándose como un halo transparente alrededor de las colonias.
• alfa-hemolíticos: son aquellos que producen hemólisis parcial, la cual se observa
comoun halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias.
• gamma-hemolíticos: son aquellos que no producen hemólisis sobre el agar
sangre.
Sensibilidad a la bacitracina
Prueba de CAMP
Sensibilidad a la optoquina
Objetivo: diferenciar S. pneumoniae de otros estreptococos β-hemolíticos.
Fundamento: se basa en la sensibilidad de S. pneumoniae a una concentración
menor o igual a 5 μg/ml de hidroxicuprina (optoquina).
ESPECIES DE STREPTOCOCCUS
Streptococcus pyogenes.
La especie más importante de los estreptococos del grupo A es S. pyogenes
originan diversas enfermedades supurativas y no supurativas. Aunque este
microorganismo constituye la causa más frecuente de faringitis bacteriana, la fama
de estos microorganismos se debe a las llamativas enfermedades potencialmente
mortales provocadas por bacterias necrosantes, como evidencia las publicaciones
que han inundado tanto la literatura científica como la prensa sensacionalista.
Fisiología y Estructura.- Las cepas de S. pyogenes son cocos esféricos de
diámetro comprendido entre 1 y 2 μm que forman cadenas cortas en las muestras
clínicas y cadenas de mayor longitud cuando crecen en medios de cultivos. Su
crecimiento es óptimo en el medio agar sangre enriquecido, pero se inhibe cuando
contiene una concentración elevada de glucosa. Después de 24 horas de
incubación se observan colonias blancas de 1 a 2 mm con grandes zonas de β-
hemólisis.
Se ha estudiado detalladamente la estructura antígenica de S. pyogenes. El marco
estructural básico de la pared celular, es la capa de peptidoglucano, la cual tiene
una composición parecida a la de otras bacterias grampositivas. En el interior de la
pared celular se encuentran los antígenos específicos de grupo y de tipo.
Hidratos de carbono específicos de grupo.- El hidrato de carbono específico de
grupo, el cual constituye aproximadamente el 10% del peso seco de la célula
(antígeno del grupo A), es un dímero de N-acetilglucosamina y de ramosa. Este
antígeno se usa para clasificar a los streptococcos del grupo A y distinguirlos de
otros grupos de estreptococos.
Proteínas específicas de tipo.- La proteína M es la principal específica de tipo que
se asocia a los streptococos virulentos. Se compone de dos cadenas polipetídicas
que forman una hélice alfa. La proteína se ancla a la membrana citoplásmica, se
extiende a través de la pared celular y sobresale por encima de la superficie
celular. El extremo carboxilo está anclado en la membrana citoplásmica y la
porción de la molécula incluida en la pared celular, origina la variedad antigénica
observada entre los más de cien serotipos de proteína M. Las proteínas M se
subdividen en moléculas de clase I y de clase II. Las proteínas de clase I
comparten los antígenos expuestos, mientras que las proteínas M de clase II
carecen de antígenos expuestos comunes. A pesar de que las cepas portadoras
de ambas clases de antígenos pueden provocar infecciones supurativas y
glomerulonefritis, tan sólo las bacterias que contienen proteínas M de clase I
producen fiebre reumática.
Una proteína secundaria específica de tipo que constituye un marcador
epidemiológico útil en las cepas bacterianas que no expresan la proteína M es la
proteína T (resistente a la tripsina). Se ignora cuál es la función estructural de esta
proteína. Aunque la clasificación epidemiológica de S. pyogenes se ha basado
tradicionalmente en la identificación de los tipos específicos M o T mediante la
aglutinación con anticuerpos específicos frente M o T, es posible que este
procedimiento se sustituya por la secuenciación del gen emm que codifica la
proteína M.
Otros componentes de la superficie celular.- Otros componentes importantes de la
pared deS.pyogenes son las proteínas tipo M, el ácido teicoico y la proteína F. Las
proteínas de tipo M están codificadas por un complejo de más de 20 genes que
componen la superfamilia de genes emm. Estos genes codifican las proteínas M,
las proteínas de tipo M y otras proteínas que se unen a las inmunoglobulinas (Ig).
El ácido teicoico y la proteína F facilitan la unión a las células del organismo
anfitrión, al formar un complejo con la fibronectina que se encuentra presente en la
superficie de las células del organismo anfitrión.
Cápsula.- Algunas cepas de S. pyogenes forman una cápsula externa de ácido
hialurónico que contiene moléculas repetidas de ácido glucurónico y N-
acetilglucosamina. La cápsula no se diferencia a nivel antigénico del ácido
hialurónico presente en los tejidos conjuntivos de mamífero, de modo que permite
evitar la fagocitosis bacteriana. Es probable que las cepas encapsuladas de esta
especie originen infecciones sistemáticas graves.
Patogenia e inmunidad.- La virulencia de los estreptococos del grupo A está
determinada por la capacidad de las bacterias de adherirse a la superficie de las
células del organismo anfitrión, invadir las células epiteliales, evitar la
opsonización y la fagocitosis y producir una variedad de toxinas y de enzimas. Se
ha demostrado que en la adherencia a las células del organismo anfitrión, median
más de 10 antígenos bacterianos distintos, siendo los más importantes el ácido
teicoico, las proteínas M y la proteína F. La adherencia inicial es una interacción
débil entre el ácido teicoico y los sitios de unión de los ácidos grasos en la
fibronectina y las células epiteliales. La adherencia posterior implica a la proteína
M, la proteína F y otras adhesinas que interaccionan con los receptores
específicos de las células del organismo anfitrión.
S. pyogenes puede invadir las células epiteliales, un proceso mediado por la
proteína M y la proteína F, así como por
otros antígenos bacterianos. Se considera que esta internalización es importante
tanto para el mantenimiento de las infecciones persistentes (por ejemplo: la
faringitis estreptococica recurrente) como para la invasión de los tejidos profundos.
S. pyogenes dispone además, de otros mecanismos para evitar la opsonización y
la fagocitosis. La región
conservada de la proteína M se puede unir a una betaglobulina sérica, el factor H,
la cual constituye una proteína reguladora de la ruta alternativa del complemento.
El componente C3b del complemento, un importante mediador de la fagocitosis,
se ve desestabilizado por el factor H. Por ello, cuando C3b se une a la superficie
celular en la región de la proteína M es degradado por el factor H, con lo que se
evita la fagocitosis. El efecto sólo se ve superado cuando el paciente produce
anticuerpos opsónicos específicos de tipo frente a la proteína M específica. La
unión de fibrinógeno a la superficie de la proteína M inhibe también la activación
del complemento por la ruta alternativa y reduce la cantidad de C3b unido. Las
proteínas M interfieren en el proceso de fagocitosis. Por último, todas las cepas
deS.
pyogenes son capaces de producir una peptidasa de C5a, una serina proteasa
que inactiva este componente. C5a es
una molécula quimioatrayente de neutrófilos y fagocitos mononucleares; de este
modo se inhibe la formación de
abscesos hasta que el paciente logra neutralizar la peptidasa por medio de
anticuerpos específicos.
Además, diversas enzimas y toxinas pueden intervenir en la patología observada
por S. pyogenes.
TIPOS DE HALOS DE INHIBICIÓN (EN DISCOS CON ANTIBIÓTICO)
Cuando el disco impregnado con el antibiotico toma contacto con la superficie
humeda del agar, el agua se absorbe en el papel filtro y el antibiotico se difunde en
el medio que lo rodea .La velocidad de extracción del antibiotico fuera del disco es
mayor que su difusión modo que la concentración inmediatamente adyacente al
disco puede exceder a la del disco mismo. No obstante a medida que aumenta la
distancia , hay una reduccion logaritmica de la concentración del antibiotico
.Cuando se alcanza una masa celular critica de bacterias, se sobrepása la
actividad inhibitoria y aparece el crecimiento bacteriano .La concentración del
antibiotico que se difundio en esta interfase de crecimiento y las bacterias
inhibidas se conoce como concentración critica y se aproxima a la CIM obtenida
en las pruebas .Esto coincide con el desarrollo de una prueba practicable de
difucion de discos ,se ha intentado simplificar la prueba . En la placa se presenta
el disco de antibiotico en un antibiograma en el que no se produce crecimiento
bacteriano en una placa de agar inoculada con el gérmen. Es una medida de la
potencia del antibiotico frente al gérmen. Los diferentes tipos de inhibición son los
siguientes:
1 . Pruebas de sensibilidad antimicrobiana por difusión en disco.
2. Pruebas de concentración mínima inhibitoria (MIC) en caldo. Esta prueba
cuantitativa es muy útil para microorganismos anaerobios, para determinar la
actividad bactericida o evidenciar el sinergismo o antagonismo entre agentes
antimicrobianos.
3. Pruebas para producción de beta-lactamasa. Los procedimientos comúnmente
utilizados para determinar la
producción de beta-lactamasas en laboratorios clínicos incluyen el método
cromogénico de
cefalosporina, el acidimétrico y el iodométrico. Todas estas pruebas están
basadas en la detección de
los productos finales de la hidrólisis de beta-lactamasas por colorimetría.
4. Pruebas para la detectar la resistencia a oxacilina (metacilina)
enStaphylococcus. Esta prueba es importante considerando que algunas cepas
deStaphylococcus pueden dar falsos negativos para metacilina en pruebas de
difusión debido a la rápida inactivación de este medicamento en refrigeración.
Se utiliza una oxacilina más estable que permite detectar además de las oxacilina
resistentes, la mayoría de las
cepas metacilina resistentes.
5. Pruebas de sensibilidad por microdilución en caldo para bacterias anaerobias.
Para anaerobios se recomienda utilizar dilución en agar, microdilución en caldo y
macrodilución en caldo. Se deben utilizar medios suplementados que favorezcan
el crecimiento de anaerobios, en particular la microdilución en caldo es útil para
microorganismos comoClostridium.
CUESTIONARIO