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DETERMINAÇÃO DE SULFITO POR ESPECTROFOTOMETRIA EM AÇÚCAR

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1 Escopo e Aplicação

Determinar sulfito, em amostras de açúcar por espectrofotometria.

Este método é aplicável à amostras de açúcar cristal, açúcar refinado amorfo, açúcar refinado granulado, açúcar VHP, Açúcar VVHP e açúcar orgânico.

2 Resumo do Método

A amostra é dissolvida em água e adicionado solução de fucsina e aldeído fórmico que formam um complexo com o sulfito presente, desenvolvendo uma coloração que é medida através de espectrofotometria a 560 nm.

3 Documentos Normativos

ICUMSA - Methods Book – Supplement 2000. Method GS2/1/7 – 33 (2000). The Determination of Sulfite by the Rosaniline Colorimetric Method in White Sugar, in VVHP Raw Sugar and Cane Sugar Juices and Syrups. Published by ICUMSA. Publications Operations Service, Science c/o British Sugar plc, Peterborough, England, 2000.

4 Documentos Complementares

Consultar a Norma de Instrução Preparo de Amostras de Açúcar e Álcool - CTC-LA-NI-002;

Consultar a Norma de Operação/Calibração do Espectrofotômetro - CTC-LA-OC-015;

Consultar a Norma de Especificação de Água para Fins Reagentes - CTC-LA-NI-006;

Planilha de cálculo da reprodutibilidade interna – Doc. n°: 1009 - R – 1104;

Planilha de cálculo da incerteza de medição – Doc. N°: 1009 – I – 1104;

Relatório de cálculo de incerteza de medição – Doc. N°: 1009 – 1104;

Relatório de cálculo de incerteza da solução de hidróxido de sódio 0,1 mol/L, C.I. n° 11 – 04/05;

Relatório de cálculo de incerteza da solução de tiossulfato de sódio 0,1 mol/L, C.I. n° 18 – 04/05;

Relatório de cálculo de incerteza da solução de iodo 0,05 mol/L, C.I. n° 15 – 04/05;

Relatório de cálculo de incerteza da solução de referência de sulfito de sódio 0,02 mol/L, C.I. n° 16

– 04/05;

Relatório de cálculo de incerteza da solução de diluída de sulfito de sódio 0,001 mol/L, C.I. n° 17 –

04/05;

Relatório de cálculo de incerteza da solução de diluída de sulfito de sódio 0,0002 mol/L, C.I. n° 34

– 04/05.

5 Segurança

Observar as regras gerais de segurança indicadas em:

Trabalhos em laboratório - Instruções de segurança;

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Normas de Procedimentos para trabalhos em laboratório;

Instruções gerais de segurança.

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Equipamentos e materiais

Espectrofotômetro, Visível ou UV/Visível, com leitura digital em absorbância, banda de passagem máxima de 10 nm e capacidade para uso de célula de 10 mm de percurso ótico;

Célula de vidro, 10 mm de percurso ótico;

Balança semi-analítica, resolução 0,1 g;

Balança analítica, resolução 0,1 mg;

Vidrarias e utensílios comuns de laboratório.

7

Reagentes e Soluções

7.1

Água deionizada (Tipo III)

7.2

Sacarose p.a ou equivalente

7.3

Solução Saturada de Fucsina Básica (Cloridrato de Rosanilina)

Pesar 1,0 g ± 0,1 g de fucsina, transferir para deionizada;

béquer de 250 mL e acrescentar 100 mL de água

Aquecer até 50 o C ± 5 o C e resfriar com agitação;

Deixar a solução em repouso por 48 horas e filtrar;

Armazenar esta solução em frasco âmbar;

Validade: três meses.

Nota 1: A Fucsina Básica (cloridrato de rosanilina) deve ser pró-análise (p.a.), não serve a utilizada só para microscopia por apresentar baixa pureza.

7.4

Solução de Fucsina Básica Descorada

Pipetar 4 mL da solução saturada de fucsina e transferir para balão volumétrico de 100 mL;

Adicionar 6 mL de ácido clorídrico conc.;

Completar o volume com água deionizada;

A descoloração ocorre em curto espaço de tempo, mas a solução somente poderá ser utilizada após 1 hora;

Validade: consumir no mesmo dia do preparo.

7.5

Solução de Formaldeído 0,2 % (p/v)

Pipetar 5 mL de uma solução de formaldeído 37 % a 40 % e colocar em balão volumétrico de 1000 mL;

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Completar o volume com água deionizada;

Armazenar esta solução em frasco âmbar;

Validade: três meses.

7.6 Solução de Hidróxido de Sódio 0,1 mol/L

Pesar 4,0 g ± 0,1 g de hidróxido de sódio p.a. e transferir para balão volumétrico de 1000 mL com água deionizada;

Dissolver e completar o volume;

Armazenar esta solução em frasco de polietileno;

Validade: três meses.

7.7 Solução de Ácido Clorídrico 1 mol/L

Transferir 8,5 mL de ácido clorídrico concentrado p.a. para balão volumétrico de 100 mL;

Completar o volume com água deionizada;

Armazenar esta solução em frasco âmbar;

Validade: três meses.

7.8 Solução Indicadora de Amido 1% (p/v)

Pesar 1,0 g ± 0,1 g de amido e acrescentar pequena quantidade de água;

Agitar com auxílio de bastão até a formação de uma pasta;

Transferir para béquer de 250 mL com auxílio de 100 mL de água aquecida (70 ºC – 90 o C) e deixar por 3 minutos.

Esfriar e filtrar sobre algodão;

Armazenar esta solução em frasco âmbar;

Validade: três meses.

7.9 Solução de Tiossulfato de Sódio 0,1 mol/L

Pesar 24,8170 g ± 0,0005 g de tiossulfato de sódio pentahidratado e transferir para balão volumétrico de 1000 mL;

Dissolver e completar o volume com água deionizada;

Armazenar esta solução em frasco âmbar;

Validade: três meses.

7.10 Solução de Iodo 0,05 mol/L

Pesar 20,0 g ± 0,1 g de iodeto de potássio e transferir para balão volumétrico de 1000 mL com 40 mL de água deionizada;

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Acrescentar 12,690 g ± 0,005 g de iodo p.a.;

Dissolver e completar o volume com água deionizada;

Armazenar esta solução em frasco âmbar;

Validade: seis meses.

7.11 Solução Referência de Sulfito de Sódio 0,02 mol/L

Pesar 1,260 g ± 0,005 g de sulfito de sódio anidro e transferir para balão volumétrico de 500 mL, com auxilio da água deionizada;

Acrescentar 50,0 g ± 0,1 g de sacarose p.a.;

Dissolver e completar o volume com água deionizada;

Homogeneizar;

Pipetar 25 mL da solução de iodo 0,05 mol/L e transferir para erlenmeyer de 250 mL;

Acrescentar 10 mL da solução de ácido clorídrico 1 mol/L e 100 mL de água deionizada;

Titular o excesso de iodo com a solução de tiossulfato de sódio 0,1 mol/L até a coloração palha;

Acrescentar 3 mL da solução indicadora de amido 1 %, sob agitação, continuar a titulação até desaparecer a cor azul, anotar o volume gasto (v1);

Pipetar 25 mL da solução de iodo 0,05 mol/L e transferir para erlenmeyer de 250 mL;

Acrescentar 10 mL da solução de ácido clorídrico 1 mol/L e 100 mL de água deionizada;

Pipetar 25 mL da solução de sulfito de sódio e adicionar ao erlenmeyer sob agitação;

Titular o excesso de iodo com a solução de tiossulfato de sódio 0,1 mol/L até a coloração palha;

Acrescentar 3 mL da solução indicadora de amido 1 %, sob agitação, continuar a titulação até desaparecer a cor azul, anotar o volume gasto (v2);

Validade: consumir no mesmo dia do preparo.

7.12 Solução Diluída de Sulfito de Sódio 0,0002 mol/L

Pipetar 2 mL da solução referência de sulfito de sódio (item 7.11) para balão volumétrico de 200 mL e completar o volume com água deionizada;

Validade: consumir no mesmo dia do preparo.

A concentração desta solução será:

C (µg SO 2 /mL) = (v 1 - v 2 ) x 3,203 x 0,4

onde:

v 1 = Volume gasto na titulação da solução de iodo (mL); v 2 = Volume gasto na titulação da solução referência de sulfito (mL).

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Curva de Calibração

8.1

Técnica

Operar/ Calibrar o equipamento conforme norma indicada em documentos complementares;

Separar oito balões volumétricos de 100 mL numerados de 1 a 8;

Pesar e transferir para cada balão 10,0 g ± 0,1 g de sacarose p.a. com aproximadamente 60 mL de água deionizada;

Agitar até completa dissolução;

Adicionar os volumes em mL, das soluções indicadas a seguir:

Balão

Solução diluída de Sulfito de Sódio 0,0002 mol/L

Solução de Hidróxido de Sódio 0,1 mol/L

Água

Deionizada

(mL)

(mL)

1

0

4

Avolumar

2

1

4

Avolumar

3

3

4

Avolumar

4

5

4

Avolumar

5

7

4

Avolumar

6

10

4

Avolumar

7

12

4

Avolumar

8

15

4

Avolumar

Homogeneizar;

Transferir 10 mL de cada solução para tubos de ensaio numerados de 1 a 8;

Adicionar 2 mL da solução de fucsina descorada e 2 mL da solução de formaldeído 0,2 % em cada tubo;

Homogeneizar e deixar os tubos em repouso por 30 minutos ± 5 minutos;

Proceder a medida da absorbância das soluções a 560 nm, em célula de 10 mm utilizando como branco água deionizada;

Anotar as leituras no registro CTC-LA-RQ-095;

Construir a curva de calibração a partir das leituras absorbância x concentração de sulfito em µg SO 2 /mL.

8.1.1 Periodicidade

A curva de calibração deve ser realizada trimestralmente.

8.1.2 Critério de Aceitação

A curva é considerada aceita se a porcentagem residual não apresentar resultados maiores que ± 10 %,

exceto para o ponto referente a 0 µg SO 2 /mL.

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% Residual =

Concentração Calculada - Concentração Teórica

Concentração Teórica

x 100

Se não atender ao critério de aceitação deve-se repetir o ensaio da curva de calibração.

8.2 Exemplo

Sejam os valores obtidos na padronização da solução de referência de sulfito de sódio 0,0002 mol/L:

v

1 = 25,0 mL

v

2 = 15,5 mL

C

(µg SO 2 /mL) = (t 1 - t 2 ) x 3,203 x 0,4

C

(µg SO 2 /mL)= (25,0 - 15,5) x 3,203 x 0,4

C

(µg SO 2 /mL) = 12,1714

Logo, tem-se:

 

Volume

Concentração Teórica (µµg SO 2 /mL)

 

Concentração Calculada (µµg SO 2 /mL)

 

Balão n o

Solução

Padrão (mL)

Abs.

%

Residual

1

0

0

0,048

-0,2186

0,0

2

1

1,2171

0,093

1,0972

-9,9

3

3

3,6514

0,177

3,5533

-2,7

4

5

6,0857

0,276

6,4481

6,0

5

7

8,5200

0,360

8,9042

4,5

6

10

12,1714

0,472

12,1790

0,1

7

12

14,6057

0,552

14,5182

-0,6

8

15

18,2571

0,672

18,0270

-1,3

Calculando-se a equação de regressão linear a partir das leituras absorbância x concentração de sulfito, tem-se:

a = 29,2397

b = - 1,6221

r =

0,9993

Nota 1: r indica a correlação existente entre os dados e é aceitável um fator de no mínimo 0,9950.

9

Procedimento

9.1 Aplicável ao açúcar cristal, açúcar refinado amorfo e açúcar refinado granulado.

- Operar/ Calibrar o equipamento conforme norma indicada em documentos complementares;

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- Pesar 20,0 g ± 0,1 g de amostra e transferir para balão volumétrico de 100 mL;

- Dissolver com água deionizada;

- Adicionar 4 mL da solução de hidróxido de sódio 0,1 mol/L;

- Completar o volume com água deionizada e homogeneizar;

- Transferir 10 mL da solução para tubo de ensaio;

- Adicionar 2 mL da solução de fucsina descorada e 2 mL da solução de formaldeído 0,2 %;

- Homogeneizar e deixar o tubo em repouso por 30 minutos ± 5 minutos em temperatura ambiente;

- Proceder a medida da absorbância da solução a 560 nm em célula de 10 mm e utilizar água deionizada como branco;

- Anotar a leitura no registro CTC-LA-RQ-025.

9.2

Aplicável ao açúcar VHP, açúcar VVHP e açúcar orgânico

- Pesar 40,0 g ± 0,1 g de amostra e transferir para balão volumétrico de 100 mL;

- Dissolver com água deionizada;

- Adicionar 4 mL da solução de hidróxido de sódio 0,1 mol/L;

- Completar o volume com água deionizada e homogeneizar;

- Transferir 10 mL da solução para dois tubos de ensaio;

- Identificar um tubo como amostra e outro como prova em branco;

- No tubo identificado como amostra adicionar 2 mL da solução de fucsina descorada e 2 mL da solução de formaldeído 0,2 %;

- No tubo identificado como prova em branco adicionar 2 mL da solução de formaldeído 0,2 % e 2 mL de água deionizada;

- Homogeneizar cada tubo e deixar em repouso por 30 minutos ± 5 minutos em temperatura ambiente;

- Proceder a medida da absorbância da solução a 560 nm em célula de 10 mm, utilizando a solução do tubo identificado como prova em branco para zerar o equipamento;

- Anotar a leitura no registro CTC-LA-RQ-025.

Nota 2: Para cada amostra deve ser preparada uma prova em branco utilizando a própria amostra.

Nota 3: Quando a leitura em absorbância ultrapassar o último valor obtido na curva de calibração, refazer a análise utilizando a metade da massa de amostra utilizada inicialmente, seja utilizando o procedimento do item 9.1 ou do item 9.2.

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Cálculos

A concentração de Sulfito é obtida a partir da equação de regressão linear e pela fórmula abaixo:

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SO (mg/kg) =

2

Onde:

(L x a

+

b) x 10

m

L = Leitura da amostra em absorbância;

a = Coeficiente linear, obtido na equação de regressão linear

b = Intersecção linear, obtido na equação de regressão linear m = Massa utilizada da amostra, em gramas.

11

Exemplo

11.1 Exemplo para açúcar cristal, açúcar refinado amorfo e açúcar refinado granulado

Sejam os valores abaixo obtidos para uma amostra de açúcar cristal:

Massa da amostra de açúcar inicial (g)

Leitura de absorbância

0,500

Logo:

SO

2

(mg/kg) =

(L x a

+

b) x 10

m

20,0 g

SO

2

(mg/kg) =

(0,500 x 29,2397

1,6221) x 10

20

SO (mg/kg)

2

=

6

11.2 Exemplo para açúcar VHP, açúcar VVHP e açúcar orgânico

Sejam os valores abaixo obtidos para uma amostra de açúcar VHP:

Massa da amostra de açúcar inicial (g)

Leitura de absorbância

Logo:

SO (mg/kg) =

2

(L x a

+

b) x 10

m

40,0 g

0,060

SO (mg/kg) =

2

SO (mg/kg)

2

=

(0,060 x 29,2397

1,6221) x 10

0,03

40,0

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12 Resultados

Expressar os resultados em mg/kg de SO 2 e com número inteiro. Resultados abaixo do limite de detecção expressar como < 1 mg/kg.

13 Confiabilidade Metrológica

A incerteza expandida de medição (Ue) é ± 1 mg/kg (NC = 95,45 % e K = 2,07) para a

trabalho

de

1 mg/kg a 18 mg/kg.

faixa de

O limite de detecção é de 1 mg/kg e a reprodutibilidade interna é de 1 mg/kg (NC = 95,45 %).

14 Referência Bibliográfica

Copersucar - Trabalhos em laboratório - Instruções de Segurança. Cadernos Copersucar, série Segurança Agroindustrial nº 0019 - Centro de Tecnologia Copersucar, 2ª edição, março 1985, 11p;

Copersucar - Normas de Procedimento para trabalhos em laboratório - Divisão de Segurança Agroindustrial e Laboratório Central de Análise do Centro de Tecnologia Copersucar - DEAC-SP, maio 1985, 36p;

Copersucar - Instruções Gerais de Segurança. Normas da Diretoria da Copersucar, 2ª edição, 1982,

54p.

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15 Apêndice I - Fluxograma de Procedimento

Curva de Calibração

Curva de Calibração

Consultar Consultar Numerar 08 balões Numerar 08 balões Pesar 10,0 g ± 0,1 g Pesar
Consultar
Consultar
Numerar 08 balões
Numerar 08 balões
Pesar 10,0 g ± 0,1 g
Pesar 10,0 g ± 0,1 g
procedimento de
procedimento de
volumétricos
volumétricos
de sacarose, diluir
de sacarose, diluir
Oper./ Calib dos
Oper./ Calib dos
(100 mL)
(100 mL)
com água deionizada
com água deionizada
equipamentos
equipamentos
Adicionar
Adicionar
0
0
mL; 1 mL; 3 mL;
mL; 1 mL; 3 mL;
5
5
mL; 7 mL; 10 mL; 12 mL e 15 mL
mL; 7 mL; 10 mL; 12 mL e 15 mL
de solução de sulfito 0,0002 mol/L
de solução de sulfito 0,0002 mol/L
Transferir 10 mL
Transferir 10 mL
Adicionar 4 mL da
Adicionar 4 mL da
Completar o volume
Completar o volume
de cada solução
de cada solução
solução de
solução de
com água deionizada
com água deionizada
p/ tubos de ensaio
p/ tubos de ensaio
hidróxido de sódio 0,1 mol/L
hidróxido de sódio 0,1 mol/L
e
e
homogeneizar
homogeneizar
numerados
numerados
em cada balão
em cada balão
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
Homogeneizar e
Homogeneizar e
solução de
solução de
solução de
solução de
deixar em repouso
deixar em repouso
fucsina descorada
fucsina descorada
formaldeído 0,2 %
formaldeído 0,2 %
por 30 minutos ± 5 minutos
por 30 minutos ± 5 minutos
Medir absorbância das
Medir absorbância das
Determinar equação
Determinar equação
Anotar as
Anotar as
soluções a 560 nm, em
soluções a 560 nm, em
de regressão linear
de regressão linear
leituras
leituras
célula de 10 mm, utilizar como
célula de 10 mm, utilizar como
branco água deionizada
branco água deionizada
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Análise - Açúcar Cristal, Aç. Ref. Amorfo e Aç. Ref. Granulado

Análise - Açúcar Cristal, Aç. Ref. Amorfo e Aç. Ref. Granulado

Consultar Consultar Transferir para balão Transferir para balão procedimento de procedimento de Pesar 20,0 g
Consultar
Consultar
Transferir para balão
Transferir para balão
procedimento de
procedimento de
Pesar 20,0 g ± 0,1 g
Pesar 20,0 g ± 0,1 g
volumétrico (100 mL),
volumétrico (100 mL),
Oper./ Calib dos
Oper./ Calib dos
de amostra
de amostra
diluir com água deionizada
diluir com água deionizada
equipamentos
equipamentos
Adicionar 4 mL da
Adicionar 4 mL da
Completar o volume
Completar o volume
Homogeneizar
Homogeneizar
solução de
solução de
com água deionizada
com água deionizada
Hidróxido de sódio 0,1 mol/L
Hidróxido de sódio 0,1 mol/L
Transferir 10 mL
Transferir 10 mL
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
da solução para
da solução para
solução de
solução de
solução de
solução de
tubo de ensaio
tubo de ensaio
fucsina descorada
fucsina descorada
formaldeído 0,2%
formaldeído 0,2%
Medir absorbância
Medir absorbância
Homogeneizar e
Homogeneizar e
a 560 nm, em célula
a 560 nm, em célula
deixar em repouso
deixar em repouso
de 10 mm, utilizar
de 10 mm, utilizar
por 30 minutos ± 5 minutos
por 30 minutos ± 5 minutos
água deionizada como
água deionizada como
branco
branco
Calcular conc. sulfito pela
Calcular conc. sulfito pela
Anotar as leituras
Anotar as leituras
curva de calibração
curva de calibração
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Análise - Açúcar VHP, açúcar VVHP e açúcar orgânico

Análise - Açúcar VHP, açúcar VVHP e açúcar orgânico

Consultar Consultar Transferir para balão Transferir para balão procedimento de procedimento de Pesar 40,0 g
Consultar
Consultar
Transferir para balão
Transferir para balão
procedimento de
procedimento de
Pesar 40,0 g ± 0,1 g
Pesar 40,0 g ± 0,1 g
volumétrico (100 mL),
volumétrico (100 mL),
oper./ Calib dos
oper./ Calib dos
de amostra
de amostra
diluir com água deionizada
diluir com água deionizada
equipamentos
equipamentos
Transferir 10 mL da
Transferir 10 mL da
Completar o volume
Completar o volume
Adicionar 4 mL da
Adicionar 4 mL da
solução para dois tubos
solução para dois tubos
com água deionizada e
com água deionizada e
solução de Hidróxido
solução de Hidróxido
de ensaio
de ensaio
homogeneizar
homogeneizar
de sódio 0,1 mol/L
de sódio 0,1 mol/L
Tubo com amostra
Tubo com amostra
Tubo com prova em branco
Tubo com prova em branco
Identificar um tubo como
Identificar um tubo como
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
amostra e outro como
amostra e outro como
solução de
solução de
solução de
solução de
prova em branco
prova em branco
fucsina descorada
fucsina descorada
formaldeído 0,2%
formaldeído 0,2%
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL de água
Adicionar 2 mL de água
solução de
solução de
deionizada
deionizada
formaldeído 0,2%
formaldeído 0,2%
Medir absorbância das
Medir absorbância das
Anotar as leituras e
Anotar as leituras e
Homogeneizar os tubos e
Homogeneizar os tubos e
soluções a 560 nm, em célula
soluções a 560 nm, em célula
calcular através da curva
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deixar em repouso
deixar em repouso
de 10 mm, zerar com a
de 10 mm, zerar com a
de calibração
de calibração
por 30 minutos ± 5 minutos
por 30 minutos ± 5 minutos
prova em branco
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