Brucelosis 1

INTRODUCCIN
Aunque ya hace ms de cien aos que se realiz el aislamiento de la primera especie del genero Brucella, todava hoy, la brucelosis bovina es un tema muy estudiado. Los pases que durante dcadas estimularon programas de control y erradicacin de esta enfermedad, ahora vuelven a tener desafos, como la erradicacin de la brucelosis en animales silvestres y la manutencin de sus hatos libres en esta era de globalizacin. Entre las enfermedades de la reproduccin de bovinos, la brucelosis es una de las ms importantes. En el plano econmico, los prejuicios son muy expresivos, con la ocurrencia de abortos, natimuertos, nacimiento de conceptos dbiles, mamitis, orquitis, los cuales disminuyen la produccin de carne y de leche. Adems de esto, la enfermedad determina la devaluacin econmica de los animales y los hatos infectados, y an se puede usar como medida restringiendo las exportaciones de carne para pases que la han erradicado. Del punto de vista de salud pblica, se constituye una de las ms importantes zoonosis, que acomete individuos generalmente en el punto mximo de su capacidad productiva, creando, adems de los gastos teraputicos, una disminucin considerable de su productividad. Una vez que se trata de un tema de gran importancia para la bovino cultura mundial y para la salud pblica, este modulo propone un estudio enfocando la epidemiologa, manifestaciones clnicas y mtodos de diagnostico para la brucelosis bovina, lo que ofrece los elementos para entender mejor la enfermedad y las estrategias que sern implantadas para su control y erradicacin.

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SINNIMOS

La brucelosis es conocida por muchos nombres dependiendo de la especie acometida: Aborto epidmico, enfermedad de Bang y aborto contagioso en bovinos; Mal de nuca y mal de la cruz en equinos; Epididimitis ovina en los ovinos; Fiebre de Malta, fiebre del mediterrneo y fiebre ondulante en los seres humanos.

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DEFINICIN
La brucelosis bovina es una enfermedad infectocontagiosa, de carcter generalmente crnico, que tiene como agente etiolgico principal la brucella abortus, la que determina, en los animales acometidos, manifestaciones de carcter predominantemente reproductivo, y que tambin puede infectar el hombre y otras especies domesticas silvestres.

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HISTRICO
A seguir son relacionados los principales relatos histricos relevantes para el conocimiento actual sobre la brucelosis. El primer relato cientfico sobre la enfermedad fue de Nocard, en 1885, cuando hizo descripcin de innumerables micrococos en frotis de tero y de fetos de animales abortados. David Bruce, en 1886, demostr microscpicamente el agente en soldados ingleses vctimas de la Fiebre de Malta, en la isla de Malta.

David Bruce, en 1887, aisl el agente etiolgico de la Fiebre de Malta, al cual llam de Micrococcus melitensis.

 Wright & Semple, en 1897, hicieron la descripcin de ocurrencia de anticuerpos especficos en seres humanos acometidos por el agente y desarrollaron el teste de Sero-aglutinacin Lenta para el diagnstico de la enfermedad. Bang & Stribolt, en 1897, aislaron el agente responsable por el aborto en bovinos, al cual han llamado de Bacterium abortus bovis. Zammit, en 1905, hizo la primera llamada zoontica de la enfermedad, asociando el consumo de leche sin hervir de cabras contaminadas con las manifestaciones de la enfermedad en el hombre.

Garca Izcara, en 1906, hizo la primera referencia a la brucelosis ovina. Von Hutyra, en 1909, aisl el agente del aborto epidmico porcino, siendo este el primer aislamiento de la Brucella suis. Alice Evans, en 1910, demostr las relaciones entre los agentes aislados a partir de casos de la enfermedad en seres humanos y a partir de casos en bovinos, ovinos y caprinos. En 1913, fue realizado, en la Facultad de Medicina de Porto Alegre-RS, el primer diagnstico serolgico de la enfermedad en Brasil. Mayer & Shaw, en 1920, agruparon los agentes responsables por la enfermedad en el hombre y en los animales domsticos en el genero Brucella, en honor a David Bruce. Huddleson, en 1923, propuso la creacin de tres especies: Brucella abortus, responsable por el aborto en los bovinos; Brucella suis, responsable por el aborto en porcinos y la Brucella melitensis, asociada a la enfermedad de las cabras y del hombre. Buck, en el ao de 1923, realiz el aislamiento de una muestra de Brucella abortus naturalmente atenuada a partir de una vaca Jersey. Esta muestra recibi el nombre de B19.

Carini & Vespuci, en 1932, hicieron el primer relato debidamente comprobado de un caso de brucelosis humana en Brasil, cuando aislaron una muestra de Brucella en un funcionario de matadero, el cual presentaba manifestaciones clnicas atpicas.

 En 1934, fue producida la primera vacuna a ser utilizada en la profilaxis de la Brucelosis Bovina. Esta fue elaborada a partir de la muestra B19, aislada por Buck en 1923, siendo utilizada hasta los das actuales. En 1962, la FAO y la OMS propusieron la creacin de otra especie responsable por la enfermedad en los ovinos, que recibi la denominacin de Brucella ovis. En 1970, la FAO y la OMS propusieron la creacin de otras dos especies: Brucella canis, aislada por Carmichael y Brunner en el ao de 1960, asociada a la enfermedad en los perros, y la Brucella neotomae, aislada por Soemer & Lackman del roedor Neotoma lepida, en el desierto de Utah, en el ao de 1957 y sin importancia para animales domsticos.

Godoy, en 1977, comprob serologicamente la ocurrencia de Brucella canis en el estado en Minas Gerais, en Brasil. En 1994, se aisl la Brucella maris a partir de mamferos acuticos.

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IMPORTANCIA
5.1. ECONMICA La brucelosis se encuentra ampliamente difundida en la Amrica del Sur, ocurriendo de forma endmica en Brasil, en hatos lecheros y de carne, independientemente de las formas de crianza as como de explotacin a las cuales estn sometidos. Los prejuicios econmicos ocasionados por las fallas reproductivas, traducidos por la reduccin en la produccin lechera y de carne, son agravados por la devaluacin comercial de los animales y de los hatos acometidos, aliada a la perspectiva de imposicin de barreras sanitarias en el mbito del comercio nacional e internacional. En Argentina, que posee un rebao mucho menor que el brasileo y donde la Brucelosis bovina tiene una prevalencia de 10%, hay una perdida anual estimada en 125 millones de dlares en la bovinocultura.

5.2. EN LA SALUD PBLICA Adems del gran impacto econmico que la brucelosis bovina determina en los rebaos acometidos, se debe enfatizar que su gran importancia en la salud pblica, una vez que se trata de una importante zoonosis. A pesar de que no hay un buen acompaamiento de esta enfermedad en los seres humanos, en Brasil se sabe que esta tiene carcter de enfermedad ocupacional. Mdicos Veterinarios, personas que trabajan en mataderos, tratadores y estudiantes de medicina veterinaria son los grupos ms expuestos. El Cuadro 1 relaciona algunos levantamientos sobre la ocurrencia de la brucelosis en algunos de estos grupos de riesgo, en el Brasil. Se sabe que las diferentes especies del gnero Brucella difieren considerablemente con relacin a la patognesis para los seres humanos. Brucella melitensis es considerada la ms patognica, seguida por la B. suis, B. abortus y B. canis. En los pases del Mediterrneo, la mayora de los casos humanos, est relacionado con la infeccin por la B. melitensis. Existe gran dificultad para el diagnstico de esta enfermedad en los seres humanos representada por los sntomas no especficos y por el desconocimiento de la misma por parte de los mdicos. Como consecuencia de ello, raramente el diagnstico es realizado y los datos sobre su ocurrencia quedan abajo de la realidad. De acuerdo con los datos de la OIE (2000) en Amrica la enfermedad ha sido relatada en Argentina, Chile, Canad, Cuba, EUA, Mxico, Per y Paraguay. En Europa la mayora de los casos relatados en 2000 ocurri en Turqua, Espaa, Francia, Portugal, Grecia, Macedonia e Italia. CUADRO 1: Datos sobre la ocurrencia de la Brucelosis en seres humanos en investigacin serolgica realizados en Brasil.
GRUPO Empleados de Mataderos Empleado de Haciendas Donantes de sangre Estudiantes Empleados del matadero BH/MGBrasil AUTOR Restrepo et al. (1971) Costa et al. (1972) Barg et al. (1977) Barg et al. (1978) Figueiredo et al. (1984) PREVALENCIA 5.30% 7.7% 0.81% 0.16% 4.20%

Empleados del matadero/PiauBrasil Empleados del matadero/BelmBrasil Veterinarios/Belm-Brasil

Lins et al. (1985) Fonseca et al. (1998) Fonseca et al. (1998)

7.81% 28.7% 13.0%

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EPIDEMIOLOGIA
6.1. DISTRIBUCIN De manera genrica, se puede decir que los pases desarrollados, como por ejemplo los Estados Unidos, Holanda, Inglaterra, Dinamarca, Nueva Zelandia, Australia y otros, obtuvieron xito en los programas de control y erradicacin de la Brucelosis Bovina, pero en los pases subdesarrollados y del Tercer Mundo, la enfermedad ocurre de forma endmica. En la Amrica Latina, la enfermedad ocurre en todos los pases, observndose gran variacin en la prevalencia entre los pases. Las prevalencias ms altas son observadas en Brasil, Argentina, Paraguay, Colombia y Chile. Los datos del cuadro 1, aunque revelen una falta de continuidad de las investigaciones, demuestran la ocurrencia de la brucelosis humana en Brasil, resaltando su caracterstica de enfermedad ocupacional. 6.2. PREVALENCIA EN BRASIL El ltimo levantamiento nacional realizado para la brucelosis de los bovinos fue hecho en 1976, registrando una prevalencia de 7,58%. Prevalencia considerada media, de acuerdo con los padrones del Centro Panamericano de Zoonosis (1972). En el estado de Paran, sur del Brasil, fue encontrada una prevalencia de 4,6% de los animales reactivos en levantamiento serolgico realizado en el ao de 1989.

En el estado de Minas Gerais, Brasil, el ltimo levantamiento fue realizado en el ao de 1980, cuando fue encontrada una prevalencia media de 6,57% de animales reactivos y 20,46% de los rebaos infectados. En el estado de Mato Grosso do Sul, Brasil, se estim una prevalencia en 6,3% en el ao de 1998. En la Tabla 1, se encuentran relacionadas las prevalencias obtenidas a partir de los casos comunicados al Ministerio de Agricultura en el periodo de 1989 a 1993. De acuerdo con los datos de esa tabla, la prevalencia vari entre 3,55% en el ao de 1992 y 4,29% en el ao de 1989, con un porcentual medio de animales reactivos de 3,9%. Este porcentual, entretanto, no expresa la prevalencia real de la enfermedad en Brasil, una vez que los animales testados no constituyen una muestra significante del rebao brasileo (ver nmeros de animales testados en la Tabla 3). Una gran dificultad del conocimiento de la brucelosis en Brasil es la falta de notificacin de algunos casos, conforme puede ser observado en las tablas 2 y 3, donde se nota el bajo numero de focos y de animales testados comunicados al Ministerio de Agricultura y Abastecimiento de (MAA), lo que, ciertamente impide el conocimiento de la prevalencia real de la enfermedad en el rebao brasileo. TABLA 1: Animales reactivos (positivos ms sospechosos) testados para la Brucelosis Bovina en Brasil en el periodo de 1989-1993 (casos comunicados).
REGIN DE BRASIL Norte Noreste Centro-Oeste Sureste Sur % MEDIO FUENTE: MAA/1993. 1989 14,36 10,35 4,13 2,75 2,39 4,24 % DE ANIMALES REACTIVOS 1990 1991 1992 13,49 14,85 12,29 6,10 8,94 5,81 5,04 4,60 4,25 2,81 2,40 2,71 1,59 1,94 1,93 4,22 4,08 3,55 1993 11,40 7,10 3,76 2,79 1,97 3,65

TABLA 2: Brucelosis bovina en Brasil en el periodo de 1989-1993 (focos comunicados).

REGIN 1989 NMERO DE FOCOS 1990 1991 1992 1993

Norte Centro-Oeste Sur TOTAL FUENTE: MAA/1993.

250 475 580 878 585 2.768

356 568 730 879 369 2.902

345 649 696 912 445 3.047

357 187 690 1.354 411 2.999

260 233 631 1.396 488 2.998

TABLA 3: Animales testados para la Brucelosis Bovina en Brasil en el periodo de 1989-1993 (casos comunicados).
REGIN Norte Noreste Centro-Oeste SuReste SuR TOTAL FUENTE: MAA/1993. 1989 33.873 61.917 253.536 293.733 136.978 780.037 NMERO DE ANIMALES TESTADOS 1990 1991 1992 40.016 34.802 42.718 86.057 75.915 22.910 190.727 226.595 227.432 285.252 331.753 358.627 114.415 139.941 161.604 716.467 809.006 840.291 1993 53.418 30.979 252.055 339.188 155.456 831.096

Los datos compilados en las Tablas 1, 2 e 3, aunque no representativos debido al problema de la falta de notificacin y del reducido numero de animales testados, demostr la ocurrencia de la enfermedad en el territorio brasileo, con una prevalencia mayor en las regiones Norte y Nordeste, seguidas por la regin Centro-Oeste. Las regiones Sudeste y Sur presentan las menores prevalencias. La prevalencia actual de la brucelosis bovina en Brasil es estimada en 4 a 5% de animales infectados. 6.3. ETIOLOGIA Y HOSPEDEROS El genero Brucella posee actualmente siete especies: Brucella melitensis, Brucella suis, Brucela abortus, Brucella neotomae, Brucella canis, Brucella ovis e Brucella maris las cuales presentan casi 98% de homologa gentica. Cada una de las especies de Brucella posee un hospedero preferencial, entretanto, varias especies de animales pueden ser infectadas por una misma especie del genero, como puede ser observado en el Cuadro 2.

La brucelosis bovina tiene como principal agente etiolgico la Brucella abortus, pero la Brucella melitensis tambin puede infectar los bovinos. Aislamientos bacterianos realizados en Espaa entre 1975 y 1990, de bovinos infectados, demuestran que 4,59% de las brucelas aisladas pertenecan a la especie Brucella melitensis. La Brucella melitensis todava no fue relatada en Brasil, pero, como ya existen relatos de esta en pases vecinos y el comercio internacional de caprinos, principal reservorio, es muy intenso, es posible que exista en el territorio brasileo. CUADRO 2: Especies de Brucella y hospederos susceptibles.
B. Hospedero Hombre Bovino Porcino Cabra Carnero Caballo Bfalo Camello Bisonte Venado Reno Raposa Roedores Mamferos Acuticos B. B. B. B. ovis B. B.

Abortus melitensi suis canis s + + + + + Rara + Rara + Rara + Rara + + autoautoauto+ limitante limitante limitante + + + + Rara + + + + +

neotoma maris e ?

+ +

FUENTE: Elberg (1981).

6.4 CARACTERISTICAS GENERALES DEL AGENTE 6.4.1. Morfologa/coloracin La Brucella abortus es una bacteria gran-negativa, que tiene la forma de bastones cortos o de cocobacilos que miden 0,5-0,7 X 0,6-1,5 m (Figura 1).

Son inmviles, no esporulados y presentan resultados positivos en los testes de catalase y oxidase.

FIGURA 1: Morfologa microscpica del frotis de cultura de Brucella abortus coloreado por la tcnica de Gran.

6.4.2. Metabolismo Son microorganismos aerbicos estrictos, pero, ciertos biotipos necesitan de atmsfera con CO2 para el aislamiento, como los biotipos 1, 2, 3, 4 y 8 de Brucella abortus, por ejemplo. 6.4.3. Habitat La Brucella abortus es una bacteria parsita intracelular facultativa que se multiplica en los macrfagos y neutrfilos de sus hospederos. 6.4.4. Estructura antignica Las brucelas, de acuerdo con la estructura y pared celular, pueden ser clasificadas en rugosas o lisas. Las muestras naturalmente rugosas son representadas por las especies Brucella canis y Brucella ovis y la Brucella abortus, Brucella melitensis, Brucella suis y Brucella neotomae son lisas. Cuando las condiciones de cultivo no son adecuadas, puede ocurrir la transformacin de la forma lisa para la rugosa.

Entre los antgenos de la pared de importancia en las muestras lisas, destacamos el lipopolisacride (LPS), el antgeno inmunodominante en las muestras lisas. El LPS (Figura 2) es compuesto por el lpido A, Ncleo y la cadena O. Los dos primeros componentes son bastante conservados en el gnero Brucella, siendo la cadena O, en funcin del tipo de unin de los monmeros de N-formil-perosamina (Figura 3), pueden ser observados dos tipos de antgenos: el antgeno A, el cual tiene uniones alfa (1,2) y es predominante en las muestras de Brucella abortus y el antgeno M, con uniones alfa (1, 3), que predomina en las muestras de Brucella melitensis. Existen muestras de B. abortus en las cuales ocurren los dos tipos de determinantes antignicos (biotipo 7); muestras en las cuales el determinante antignico presente es del tipo M (biotipos 4, 5, 8 y 9) y aquellas cuyo determinante antignico es del tipo A (biotipos 1, 2, 3 y 6). Algunos investigadores relatan la presencia de un determinante antignico, o determinante C, que seria comn a las brucelas lisas y estara participando de la ocurrencia de reacciones cruzadas en los testes serolgicos de las muestras lisas. Las protenas del citosol son bastante conservadas en todo el gnero Brucella. La brucella abortus presenta nueve biotipos (biovariedades) conocidos. La diferencia entre los biotipos es realizada de acuerdo con la exigencia de CO2, la produccin de H2S y la sensibilidad a la tionina y fucsina bsica y el tipo de determinante antignico presente. El Cuadro 3 relaciona los biotipos conocidos y los parmetros utilizados para la determinacin de los mismos de acuerdo con Correa & Correa (1992). En Amrica Latina, fueron relatados los biotipos 1, 2, 3 y 4 de B. abortus, siendo que el biotipo 1 es el ms frecuentemente aislado, totalizando 80% de los casos. Este biotipo es tambin el que predomina en todo el mundo. Las muestras rugosas no tienen LPS y solamente presentan el lpido A, el Ncleo y una pequea secuencia de monosacridos cuya composicin difiere de los monmeros de N-formil perosamina de la cadena O de las muestras lisas (Figura 4). En las muestras rugosas, el antgeno inmunodominante es representado por protenas del citosol.

FIGURA 2: Estructura de la membrana externa de una brucela lisa, de acuerdo con Moriyon (1994).

El antgeno inmunodominante es el LPS, compuesto por el lpido A, Ncleo (oligosacarido) y la cadena O.

FIGURA 3: Frmula estructural del N-Formil-perosamina, de acuerdo con Moriyon (1994).

La Figura ilustra la frmula estructural del monmero (N-formilperosamina), que compone la cadena O presente en las muestras lisas.

FIGURA 4: Estructura de membrana externa de una brucela rugosa, de acuerdo con Moriyon (1994).

La diferencia bsica con relacin a las brucelas lisas se refiere al LPS. Se puede notar que el lpido A y el Ncleo son comunes a las brucelas lisas y rugosas, pero la Cadena O es bastante corta y los monmeros que la componen son diferentes con relacin a aquellos que estn presentes en las muestras lisas CUADRO 3: Determinacin de los biotipos de Brucella abortus
Tionina x 10-3 Fucsina x 10-3 1/25 1/50 1/100 1/50 1/100 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Antgenos A M + + + + + + + + + +

Biotipos CO2 1 +/2 + 3 +/4 +/5 6 7 8 + 9 +/-

H2S + + + + +/+/+

A = antgeno A de Brucella abortus

FUENTE: Corra & Corra (1992)

M = antgeno de Brucella melitensis

6.4.5. Resistencia del agente Aunque no sean microorganismos esporulados, las brucelas presentan una considerable resistencia en el medio ambiente, principalmente cuando protegidas de la luz solar y de la diseccin. Pueden sobrevivir por hasta 100 das en suelo hmedo, 75 das en heces hmedas, 120 das en la mantequilla y membranas fetales secas y hasta 60 das en el queso de salmuera. Las brucelas son inactivadas por la pasteurizacin rpida o lenta o simplemente al hervir la leche. Pero debemos enfatizar que cuando las concentraciones del agente son elevadas en la leche, la efectividad de la pasteurizacin puede estar comprometida. Con relacin a la presencia en la carne y sus derivados, el tratamiento trmico se constituye una medida eficiente para la eliminacin de esos microorganismos. La acidificacin de la leche en consecuencia de la contaminacin bacteriana o procesos fermentativos destinados a la produccin de derivados lcteos interfiere en la viabilidad de las brucelas. En pH 4, el nmero de clulas viables se reduce considerablemente en pocas horas. 6.5. VIAS Y FUENTES DE INFECCIN. 6.5.1. Via digestiva Se trata de una va de gran importancia epidemiolgica. Los alimentos contaminados por las secreciones fetales y restos de placenta de abortos o del parto normal de animales infectados constituyen vehculos de infeccin. La contaminacin ambiental determinada por los restos de placenta en el caso de aborto es muy intensa (cerca de 1013 brucelas por gramo de placenta), pudiendo el agente permanecer viable por varias semanas en los pastos siempre que protegido de la luz solar. Tambin puede ocurrir la contaminacin de aguas, local este donde las brucelas tienen una considerable sobrevivencia. La bacteria tambin es eliminada por la leche y el calostro que constituyen importantes fuentes de infeccin para los becerros que no se contaminaron por la va transplacentaria, y tambin para los seres humanos. La pasteurizacin de la leche y del calostro elimina de forma eficiente las brucelas. La pasteurizacin del calostro no interfiere sensiblemente en la inmunidad pasiva de los becerros. La Figura 5 ilustra un becerro mamando en una vaca infectada (notar el P en el lado derecho de la cara), una de las principales formas de infeccin de los

becerros. Los becerros que se infectan por esta va eliminan la infeccin bruclica en la mayora de los casos, antes de llegar a la maturidad sexual. Pero una pequea parte de los animales, cerca de 5 a 10% de los animales, no logran la cura espontanea, y se tornan cargadores latentes.

FIGURA 5: Leche como vehculo de infeccin para becerros.

6.5.2. Va transplacentaria Constituye al lado de la va digestiva, la ms importante va de transmisin de la brucelosis entre los bovinos. La presencia del eritritol en la placenta seria un factor de quimiotaxia para la Brucella abortus. La infeccin uterina generalmente ocurre en el tercio final de la gestacin, determinando lesiones de la placenta y del feto las cuales pueden ocasionar la muerte fetal seguida del aborto, natimuertos o, an, el nacimiento de becerros dbiles. 6.5.3. Va sexual Esta va tiene poca importancia en la diseminacin de la brucelosis en el rebao, por el hecho de la deposicin del semen en la especie bovina ser vaginal. Se cree que la microbiota vaginal tenga una accin inhibitoria sobre la Brucella abortus. Adems de esto, fue encontrada una protena catinica en el moco cervico-vaginal que se cree que proteja el tero de la invasin por las

brucelas. En la especie porcina, donde la deposicin del semen es directamente en le tero, esta va tiene mayor importancia. Aunque sea una va de importancia secundaria para la especie bovina, no significa que reproductores infectados puedan ser utilizados sin riesgos. Cuando se utiliza un reproductor infectado de mayor valor zootecnico, se recomienda hacer el teste de aglutinacin del plasma seminal para verificar se existe la presencia de anticuerpos en el semen, lo que constituye un indicativo de comprometimiento de los rganos reproductores por la Brucella. En esos casos, no se recomendara la utilizacin del reproductor. En las centrales de inseminacin artificial se hace un control riguroso de los reproductores, para que se evite la diseminacin por esta va. En un experimento fue verificada la infeccin de ocho entre 12 vacas que fueron sometidas a inseminacin artificial con semen de toros bruclicos eliminando las brucelas en las secreciones espermticas. La transferencia de embriones no presenta riesgo para la receptora, pero, si el embrin es implantado en una vaca infectada, podr ser infectado por la va transplacentria. 6.5.4. Contaminacin por el material obsttrico Todo el material utilizado para exmenes ginecolgicos debe ser esterilizado antes de ser utilizado en otro animal, de lo contrario, existe el riesgo de transmisin de enfermedades venreas (Tricomonosis Bovina y Campilobacteriosis Genital Bovina), de otras bacterias implicadas en las endometritis (Actinomyces pyogenes, por ejemplo) y, tambin, de brucelosis. Despus del parto o aborto, la Brucella abortus continua siendo eliminada en las secreciones uterinas hasta 30 das, lo que torna las intervenciones ginecolgicas en este periodo una actividad de riesgo para los veterinarios y tambin para los animales cuando los equipamientos no son debidamente esterilizados. 6.5.5. Va mucosa respiratoria y ocular La transmisin por estas vas tiene una importancia secundaria en la brucelosis bovina, aunque ya est debidamente comprobada. Los toros pueden infectarse al oler la vulva de una vaca infectada y recin parida. La va ocular ha sido utilizada para la estrategia de vacunacin con dosis reducida, lo que demuestra la posibilidad de infeccin por ella.

6.5.6. Va transfusin sangunea Varios agentes infecciosos pueden ser transmitidos por medio de la sangre como las babesias, anaplasmas, brucelas, retrovirus, por ejemplo. El riesgo es mayor por ocasin de premuniciones que tienen como objetivo el desarrollo de la inmunidad contra las babesiosis y anaplasmosis en bovinos provenientes de reas libres de garrapatas. Hay que tener mucho cuidado con el estado sanitario de los animales que sern utilizados como donadores de sangre en estas ocasiones. Existen relatos en la literatura de infeccin de varios bovinos que recibieron sangre de donadores brucelicos. 6.6. VAS Y FUENTES DE INFECCIN PARA LOS SERES HUMANOS 6.6.1. Va digestiva La leche y los productos derivados que no pasaron por tratamiento trmico adecuado se constituyen los vehculos de infeccin ms importantes para la especie humana en el caso de la brucelosis bovina. En Brasil, se estima que cerca de 40% de la leche sea comercializada de forma clandestina, como es ilustrado en la Figura 6, lo que constituye un factor de riesgo para la salud de la poblacin.

FIGURA 6: Comercio clandestino de la leche.

El comercio clandestino de la leche, prctica muy comn en Brasil, es un factor de riesgo para una serie de infecciones e intoxicaciones alimentares para

los consumidores, tales salmonelosis, por ejemplo.

como

la

brucelosis,

tuberculosis,

listeriosis,

Los casos de brucelosis en seres humanos asociados al consumo de carne y derivados son muy difciles de ser evidenciados. Normalmente, el nmero de brucelas en la musculatura es pequea, observndose mayor concentracin del agente en rganos linfides. A pesar de esto, el riesgo, aunque menor, no puede ser negligenciado, considerndose que la Brucella abortus puede permanecer viable durante varios meses en msculos refrigerados o congelados. 6.6.2. Va cutnea Es una va muy importante, especialmente para los funcionarios de mataderos, ordeadores, tratadores, veterinarios y todos aquellos que tienen contacto directo con los animales infectados o los que manipulan la carne en carniceras y frigorficos, siendo de esta forma considerada una zoonosis ocupacional. De acuerdo con el Cuadro 1, diversos levantamientos serolgicos realizados en individuos que trabajan en establecimientos de mataderos en Brasil han demostrados el riesgo al que se encuentran sometidos estos individuos. 6.6.3. Va transfusin sangunea Levantamientos realizados en bancos de sangre han demostrado la posibilidad de transmisin de la brucelosis por esta va. En un levantamiento realizado en 1952, fueron encontrados 5.23% de donadores positivos en la ciudad de Rio de Janeiro-Brasil, entretanto en otro levantamiento semejante realizado en 1976, fueron encontrados 0.81% de muestras positivas entre donadores en la ciudad de Belo Horizonte, en el estado de Minas Gerais-Brasil. Los datos muestran que existe el riesgo de infeccin por la transfusin de sangre, lo que justifica la necesidad de testarse previamente las muestras que sern utilizadas en transfusiones. En muchos pases se utiliza el teste de suero-aglutinacin rpida en la sangre que ser utilizada en transfusin. Este no es el teste ms indicado debido a su baja sensibilidad. En Argentina, el teste del Antgeno Acidificado Tamponado (Rosa de Bengala), ha sido utilizado en las rutinas para este propsito, con resultados satisfactorios.

6.6.4. Accidentes de laboratorios/con vacunas Accidentes de laboratorios son comunes, principalmente en los laboratorios productores de vacunas y de antgenos. En estos casos, normalmente , la contaminacin ocurre por la vas respiratorias y ocular o por el contacto directo con el material contaminado. Son muy comunes los accidentes con vacunas entre veterinarios y los que aplican las vacunas. La contaminacin normalmente ocurre por la inoculacin accidental de la muestra de la vacuna B-19. Recientemente, han sido publicado relatos de infeccin humana tambin por la muestra de la vacuna RB-51. 6.7. PERIODO DE INCUBACIN (PI) El periodo de incubacin de la brucelosis bovina es extremamente variable, siendo influenciado por el tiempo de gestacin, carga infectante, virulencia de la muestra, vacunacin previa, edad y otros. En general vara entre 14 a 180 das. Animales infectados experimentalmente presentan seroconversin a partir de 5 a 7 das (anticuerpos IgM), entretanto, en condiciones de campo es muy difcil precisar el PI. Existe una relacin inversamente proporcional entre el tiempo de gestacin en la poca de infeccin y el periodo de incubacin. Han sido relatados periodos variando de 193 a 251 das entre la infeccin y la ocurrencia del aborto. Esa gran oscilacin en el periodo de incubacin de la enfermedad constituye uno de los principales bloqueos para el control de la brucelosis bovina. Becerras nacidas de vacas brucelicas podrn presentar la infeccin, pero la seroconversin generalmente solo ocurrir en el final de la primera gestacin, poca en que podr ocurrir el aborto o el parto normal, con eliminacin de brucelas en el ambiente. 6.8. MORBIDAD/MORTALIDAD/LETALIDAD La morbidad vara de acuerdo con las caractersticas del sistema de produccin. En los sistemas de produccin donde la densidad animal es muy elevada, el transito de animales es intenso y el control sanitario es insuficiente, la enfermedad encuentra condiciones propicias para la diseminacin, siendo las prevalencias generalmente elevadas.

La brucelosis bovina es una enfermedad de carcter crnico, en la cual la mortalidad y la letalidad de animales en edad de reproduccin son prcticamente nulas. Por otra parte, la mortalidad fetal, principalmente en la primera gestacin subsecuente a la infeccin, es generalmente elevada, siendo comn la ocurrencia de brotes de abortos. Adems, becerros que nacieron dbiles por la infeccin bruclica normalmente mueren en las primeras semana de vida. 6.9. FACTORES DE SUSCEPTIBILIDAD 6.9.1. Raza No existe diferencia de susceptibilidad en funcin de las razas. Bovinos de corte y de leche son igualmente susceptibles. Generalmente, se observa mayor prevalencia de la enfermedad en rebaos lecheros. Esto es debido a las mayores densidades y al trnsito intenso de animales que normalmente se verifican en este tipo de rebao. 6.9.2. Resistencia individual Algunos animales no vacunados, dentro de rebaos infectados, son naturalmente resistentes a la infeccin. Aunque no est perfectamente explicado, este hecho caracteriza una diferencia de susceptibilidad entre los animales. Otro aspecto que marca esta diferencia de resistencia individual es que cerca de 10 a 15% de los animales infectados se curan espontneamente 6.9.3. Densidad animal La alta densidad favorece la diseminacin de la enfermedad, una vez que facilita el contacto entre animales infectados e animales susceptibles, adems de determinar mayor contaminacin ambiental. La mayor densidad que normalmente se verifica entre los bovinos lecheros es un factor determinante para la difusin rpida de la enfermedad. La Figura 7 ilustra un lote de animales infectados provenientes de un rebao lechero en el cual fueron encontrados cerca de 50% de reactivos.

FIGURA 7: Alta prevalencia de la brucelosis en un rebao lechero.

En rebaos donde el control sanitario no es eficientemente realizado, es muy comn observar prevalencias que pueden exceder 50%, como es el caso del rebao aqu citado. 6.9.4. Sexo No existe diferencia de susceptibilidad entre machos y hembras. Entretanto, algunos investigadores creen que los reproductores, por presentar generalmente menor titulacin serolgica y pocas evidencias en los sntomas de la enfermedad, sean menos susceptibles con relacin a las hembras. 6.9.5. Edad Es sin lugar a dudas, un factor de gran importancia en la susceptibilidad a la brucelosis bovina. Como ha sido visto anteriormente, becerras infectadas por la va transplacentria o por la ingestin de leche y calostro contaminados pueden curarse de forma espontnea en cerca de 90 a 95% de los casos. Por otra parte, la infeccin de animales pberes tiende a evolucionar para la cronicidad. 6.9.6. Periodo de gestacin

Existe una gran diferencia de susceptibilidad a la brucelosis bovina en funcin del periodo de gestacin. Cuanto ms adelantada la gestacin por ocasin de la infeccin, mayor la probabilidad de ocurrencia de aborto. Si la matriz se infecta en el momento de la cobertura, el tiempo de incubacin puede llegar hasta 200 das. Por otra parte, si la infeccin ocurre seis meses despus de la concepcin, el periodo de incubacin puede durar de un a dos meses. De acuerdo con la mayora de los autores, el periodo de mayor susceptibilidad ocurre entre 150 a 180 das de gestacin. 6.10. FACTORES DE RIESGO Los factores de riesgo ms importantes en el caso de la brucelosis bovina son el trnsito intenso de animales en la propiedad, el uso de aguas en comn y la presencia de cercas rotas o mal cuidadas. Generalmente, la Brucella entra en el rebao por los portones, por medio de los animales que se incorporan al rebao. Contribuye para esto la falta de conocimiento o negligencia de los propietarios que no solicitan la realizacin de exmenes del suero previamente a la introduccin de nuevos animales en el rebao y el periodo de incubacin altamente variable de la enfermedad, en el cual el resultado de los testes del suero es generalmente negativo. 6.11. IMPORTANCIA DE LOS RESERVORIOS SILVESTRES En el Brasil, todava no est bien determinada la participacin de los animales silvestres en la diseminacin de la brucelosis. All, como la prevalencia es relativamente alta, el principal reservorio del agente continua siendo el bovino infectado. En los Estados Unidos, donde la enfermedad est bien controlada en la mayora de los estados, reservorios silvestres desempean un papel importante en la cadena de transmisin de la enfermedad, introduciendo nuevamente la enfermedad en los rebaos libres. En el futuro, cuando la enfermedad est en vas de erradicacin en el territorio brasileo, el papel de los reservorios silvestres en la epidemiologa de la enfermedad tendr que ser mejor estudiado. 6.12. IMPORTANCIA DE LOS CARGADORES LATENTES Novillas nacidas de vacas bruclicas generalmente presentan cura espontnea de la brucelosis en cerca de 90 a 95% de los casos. Los 5 a 10% restantes tienden a presentar la brucelosis latente, en la cual la Brucella queda en latencia, probablemente en los rganos linfides, solamente presentando la

seroconversin en el final de la primera gestacin, ocasin en que puede ocurrir el aborto. El cargador latente tiene gran importancia en la epidemiologa de la enfermedad, una vez que los mtodos empleados en el diagnstico de rutina no permiten su identificacin. Consecuentemente, el animal permanece en el rebao donde la enfermedad est siendo controlada, infectndolo nuevamente al entrar en actividad reproductora. La importancia de esos animales en la epidemiologa de la brucelosis bovina puede ser inferida por medio de los resultados del experimento realizado por Plommet y colaboradores en 1973, en el cual 22 novillas hijas de vacas brucelicas fueron separadas y aisladas antes de mamar el calostro y criadas en ambiente separado hasta llegar a la maturidad sexual, ocasin esta en que fueron inseminadas y acompaadas hasta el parto o aborto. Despus de estos eventos, fetos o becerros y material de necrpsias de las genitoras que abortaron (18.18%), fueron sometidos a cultura para aislamiento de Brucella, con resultados positivos. Se verific, an, que ninguno de los animales present reaccin serolgica hasta la octava semana antes del parto o aborto, lo que no posibilita la identificacin de estos animales por medio de los mtodos serolgicos.

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PATOGNESIS
Los factores que posibilitan a las brucelas entrar en las mucosas, resistir a la lisis en el interior de los fagocitos, colonizar y replicar en clulas de la placenta an no son bien conocidos. El parasitismo intracelular facultativo, que posibilita a la Brucella abortus alojarse y multiplicarse en las clulas fagocitrias, y, sin duda, uno de los aspectos ms importantes en su patognesis. En el interior de las clulas, las brucelas se encuentran protegidas de los anticuerpos y antibiticos circulantes y de la accin del complemento. Por medio de la microscopa electrnica, fue demostrada la presencia de un envoltorio en la Brucella abortus, B. suis y B. melitensis. El papel de ese

envoltorio para la fijacin de esas especies en las mucosas de los hospederos no fue establecido. Los mecanismos por los cuales la bacteria resiste a la fagocitosis y a la lisis oxidativa en los fagocitos an no estn bien definidos. Existen evidencias de que la brucelas lisas no estimulan de forma eficiente los macrfagos de bovinos en la produccin de oxidantes y an inhiben la formacin del fagolisosomo en los neutrfilos. La Brucella abortus presenta an la enzima Superxido Desmutase (SOD) la cual inactiva el anin O2- , importante en la lisis oxidativa. Fue observado que muestras lisas virulentas de Brucella abortus presentan mayor resistencia al sistema de la mieloperoxidase con relacin a las muestras rugosas. Recientemente, fue demostrada la produccin por la Brucella abortus de protenas en respuesta al estrs cuyos papeles an no fueron aclarados. Se sabe que las muestras lisas son, en general, ms patognicas que las muestras rugosas, lo que evidencia el papel del LPS en la patognesis. Las muestras lisas tienen mayor capacidad de sobrevivir y multiplicarse en el interior de macrfagos y neutrfilos, estando esta habilidad relacionada con la capacidad de evitar la formacin de los fagolisosomos y escapar de la accin de las enzimas lilsosomicas despus de la fusin de los fagosomos con los lisosomos. La presencia de fagos especficos ha sido demostrada en diversas especies de brucelas. Fue demostrado experimentalmente que muestras de Brucella abortus infectadas por fagos especficos se tornaron ms potegnicas con relacin a aquellas destituidas de estos fagos. La Brucella abortus presenta tropismo por el tero en gestacin y por los testculos. Se cree que este comportamiento est relacionado con la presencia en estos rganos del eritritol, cuyos niveles se elevan de forma considerable durante la fase final de la gestacin. Existen muchos genes en la Brucella abortus cuyos papeles en la patognesis no son conocidos, sospechndose que solamente sean activados cuando la bacteria se encuentra en el interior de las clulas del hospedero. El papel de ellos ha sido estudiado mediante la evaluacin del reflejo de esta prctica en la patognesis de la muestra genticamente alterada.

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PATOLOGA
La infeccin por la Brucella abortus en bovinos eventualmente determina lesiones en las matrizes e en los reproductores que pueden ser detectadas por ocasin de la inspeccin sanitaria de las canales. Las lesiones macroscpicas de la placenta se caracterizan por: inflamacin con necrosis cotiledonria y proliferacin del tejido conectivo de granulacin (Figura 8); fibrosis y adherencias del cotiledn a la caruncula; edema inter-cotiledonario y exudacin de lquido viscoso. Microscpicamente, se encuentran, en el tero, focos inflamatorios granulomatosos con clulas epitelides y un halo linfoplasmocitario al rededor.

FIGURA 8: Lesiones en la placenta provocadas por la Brucella abortus, donde se nota la ocurrencia de necrosis y disminucin del nmero de carunculas.

En el feto, lo ms caracterstico de Pueden ser observados: edema del subcutneo con edema y presencia de cavidades abdominal y torcica. Pueden

la brucelosis es la bronconeumona. cordn umbilical; tejido conjuntivo secrecin sero-sanguinolenta en las ser verificadas tambin hemorragias

subserosas y en las membranas mucosas, con rganos parenquimatosos aumentados de volumen y focos necrticos en el hgado. En los machos adultos, la Brucella abortus puede causar inflamacin de la vescula seminal, con presencia de hemorragias y focos de necrosis y orquitis con necrosis, siendo el aumento testicular generalmente unilateral con tendencia a la calcificacin. En los casos crnicos, hay una presentacin de hidrocele y necrosis con atrofia testicular. Se puede verificar epididimitis (Figura 9) con focos de necrosis y abscesos, adems de ampolitis. Aunque la Brucella pueda ser aislada de la prstata y de las glndulas bulbouretrales, no se han encontrado lesiones en estos lugares.

FIGURA 9: Lesin gonadal provocada por la Brucella abortus, con la presencia de adherencias.

Dependiendo de la severidad de las lesiones gonadales en el reproductor, la calidad del semen puede ser afectada, ocurriendo disminucin en la concentracin y en la motilidad, con la presencia de neutrfilos y tasas elevadas de catalase seminal, conduciendo, en algunos casos, a la azospermia. Lesiones articulares, abscesos y bursitis pueden ocurrir en machos y hembras, pero son difciles de ser encontrados. Reproductores con lesiones articulares pueden presentar incapacidad para la monta.

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INMUNIDAD
Las principales inmunoglobulinas asociadas a la respuesta de las vacunas y a la infeccin natural por la Brucella abortus son IgM, IgG1, IgG2 y IgA. La infeccin natural determina la produccin de inmunoglobulinas IgM e IgG, siendo la IgM detectada entre el 5o y el 7o da despus de la infeccin y la IgG1 entre el 14o y el 21o da. Entre el 2o y el 3o mes despus de la infeccin la IgM llega a la concentracin en el suero mxima y despus empieza a disminuir, permaneciendo la IgG1 como la inmunoglobulina predominante. La IgG2 y la IgA aparecen ms tarde, alcanzando niveles menores que IgG1 y IgM, presentando ttulos variables de un animal para el otro. En la fase crnica, IgG se torna predominante, aunque ocurre una cada muy acentuada y se verifica una oscilacin peridica en los niveles de esa inmunoglobulina. En algunos casos, este fenmeno puede hasta llegar a imposibilitar de forma pasajera la deteccin de anticuerpos en el suero. Esos ttulos bajos que normalmente se verifican en la fase inicial y final (crnica) de la enfermedad a veces han sido interpretados como reacciones de las vacunas residuales o reacciones no especficas y, dependiendo de la sensibilidad del teste utilizado, los animales pueden hasta ser clasificados como no reactivos. Para minimizar tales errores se hace necesario el uso de tcnicas complementares para el diagnstico y el uso de serologa pareada. Las novillas vacunadas con edad entre 3 y 8 meses con la muestra B-19 presentan IgM a partir del 5o da de la vacunacin, alcanzando el pico alrededor del 20o da. La IgG aparece luego despus, llegando a la concentracin mxima entre el 28o y el 42o da despus de la vacunacin. Ambas inmunoglobulinas caen rpidamente, alcanzando niveles no expresivos en aproximadamente 12 meses despus de la vacunacin. Animales vacunados con la muestra B-19 despus de 8 meses de edad generalmente presentan niveles sricos ms elevados y persistentes de IgG, los cuales se pueden extender por un periodo superior a un ao, lo que impide la ejecucin e interpretacin de los resultados de los testes serolgicos.

Aunque los animales infectados y animales vacunados respondan generalmente, ttulos serolgicos muy expresivos, principalmente en las fases iniciales de la enfermedad o en los primeros meses subsecuentes a la vacunacin, el nivel de anticuerpo no se correlaciona con el grado de inmunidad, una vez que la inmunidad en esta enfermedad es predominantemente celular. La Brucella abortus tiene la habilidad de colonizar y de multiplicarse en los macrfagos. Estas clulas tiene un papel llave en la inmunidad, procesando y presentando antgenos a los linfocitos T auxiliares (LTa) y linfocitos B. Dependiendo del tipo de antgeno presentado, o quizs de la forma como es presentado, podr ocurrir la activacin de clones LTa-1 o LTa-2. En el primer caso, los linfocitos expresarn IL-2, Interfern y el Factor de Necrosis Tumoral, lo que caracteriza una respuesta del tipo celular. En el segundo caso, ocurrir la expresin de IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 y IL-13, determinado una respuesta tpicamente humoral. El Interfern y la IL-2 promueven la activacin de los macrofagos, lo que los torna apto para la destruccin de las Brucellas. La IL-12 producida por macrfagos, acta an estimulando las clulas exterminadoras naturales (Natural Killer) y clulas T a producir Interfern . La IL-2 inhibe el crecimiento del agente en los macrofagos, adems de inhibir los clones LTa-2 que determina la respuesta humoral. El FNT- , producido por las clulas LTa-1 y por las clulas T citotxicas activadas (TCD8+), puede ser secretado en la forma soluble o estar asociado a una protena (Linfotoxina ) en la membrana de linfocitos T. La accin del FNT- envuelve la apoptosis de clulas tumorales y la activacin de macrofagos, linfocitos y clulas endoteliales. Aunque ya ha sido demostrada la induccin de la inmunidad pasiva contra la brucelosis en ratones por la aplicacin de suero hiperinmune, la inmunidad protectora contra la brucelosis bovina es esencialmente del tipo celular. De esa forma, los inmungenos visando el control y profilxis de la brucelosis deben inducir una respuesta del tipo LTa-1. Entre los antgenos de Brucella abortus, esta propiedad ha sido descrita para la protena L7/L12 y el polisacrido O (cadena O).

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MANIFESTACIONES CLNICAS

10.1. EN LOS BOVINOS 10.1.1. En las hembras Las manifestaciones reproductoras observadas en las vacas brucelicas no son exclusivas de la brucelosis. Enfermedades como la leptospirosis, listeriosis, IBR, BVD y otras pueden determinar alteraciones clnicas semejantes, necesitndose de exmenes laboratoriales para la confirmacin de la sospecha clnica. Aborto: es la alteracin que en la mayora de las veces alerta el propietario para la ocurrencia de la enfermedad en el rebao, verificndose generalmente en el tercio final de gestacin (Figura 10). En los rebaos donde la enfermedad fue introducida y los animales no presentan inmunidad, es comn la ocurrencia de brotes de abortos que pueden acometer la mayora de las vacas en gestacin. Todava, cundo la enfermedad se disemina en el rebao, los abortos pasan a ser espordicos, manifestndose generalmente en los animales que estn entrando en reproduccin. Su ocurrencia verificase normalmente en la primera gestacin subsecuente a la infeccin, entretanto, el riesgo disminuye en las gestaciones siguientes.

FIGURA 10: Feto del aborto en el tercio final de la gestacin, una manifestacin comn en la brucelosis bovina.

Natimuertos y nascimiento de cras dbiles: son dos manifestaciones muy frecuentes en la brucelosis bovina, indicando la contaminacin fetal y el comprometimiento de los cambios materno-fetales. Los becerros se presentan dbiles y con peso abajo de lo normal. En la Figura 11, observase dos becerros, siendo que el de color paja, con edad en torno de cuatro semanas e hijo de una vaca bruclica, presenta grande diferencia en el desarrollo corporal en relacin con el becerro negro y blanco que tiene en torno de una semana de edad, hijo de una vaca no bruclica.

FIGURA 11. Nacimiento de un becerro dbil debido a la transmisin transplacentria de la brucelosis.

Los dos becerros tienen aproximadamente la misma edad, pero el menor es hijo de una vaca bruclica y naci muy debilitado debido a la infeccin intrauterina. Este animal present luego al nacer una serie de problemas respiratorios y lleg a bito con cerca de dos meses de edad. Retencin de placenta: es una de las manifestaciones ms comunes en la brucelosis bovina (Figura 12). Su ocurrencia se debe a la adherencia que se verifica debido a las lesiones cotiledonarias. Se caracteriza la retencin placentria cuando los anexos quedan retenidos por ms de 12 horas despus del parto o aborto.

La retencin placentria puede ocasionar una endometritis y esta puede llevar al aparecimiento de secrecin vaginal (Figura 13). Adems de la endometritis, pueden ocurrir metritis y salpingitis, las cuales pueden ocasionar subfertilidad o hasta esterilidad permanente del animal. Eventualmente, podr ocurrir una bacteremia y/o toxemia debido a la retencin de anexos, culminando con el bito del animal. Es comn observarse en los rebaos bruclicos el aparecimiento de vacas que aunque ciclando normalmente no son fertilizadas por el uso de la inseminacin o monta natural, permaneciendo vacas durante varios meses consecutivos o hasta aos. Se trata de animales subfrtiles o infrtiles debido a las lesiones uterinas y/o tubricas provocadas por la Brucella abortus.

FIGURA 12: Retencin de placenta debido a la brucelosis.

FIGURA 13: Secrecin vaginal, indicativa de comprometimiento del tracto genital.

Mamitis: la instalacin del agente en la glndula mamaria induce una mamitis generalmente subclnica refractaria al tratamiento con antibiticos, verificndose la eliminacin de las brucelas en la leche. Se estima que los animales acometidos puedan presentar una reduccin de hasta 20% en la produccin de leche debido a la mamitis y a las alteraciones reproductoras determinadas por la enfermedad. 10.1.2. En los reproductores Orquitis: ocurren con frecuencia de 1 a 2%, siendo generalmente unilaterales (Figura 14) y, ocasionalmente, bilaterales (Figura 15) que se caracterizan clnicamente por un aumento de volumen de los testculos acometidos. En los procesos ms crnicos es comn verificarse la ocurrencia de calcificaciones y atrofias testiculares. La orquitis generalmente no interfiere en la libido, pero puede provocar subfertilidad o esterilidad, en algunos casos con azoopermia, dependiendo de la gravedad de las lesiones.

FIGURA 14: Orquitis bruclica unilateral.

FIGURA 15: Orquitis bruclica bilateral.

Vesiculitis/ampolitis/epididimitis: el comprometimiento de las glndulas anexas por las brucelas puede determinar subfertilidad o tambin esterilidad del reproductor, lo que puede determinar, an, la contaminacin del semen, con riesgos de diseminacin de la enfermedad para las hembras. La prstata y glndulas bulbouretrales generalmente no presentan alteraciones. Algunos

animales, aunque presentando el comprometimiento testicular y de glndulas anexas, pueden presentar la libido y fertilidad normal. Poliartritis, espondilitis, tenosivitis, bursitis y abscesos: son encontrados ms raros en la brucelosis bovina en ambos sexos. Puede estar acometida cualquier articulacin, pero las ms frecuentemente acometidas son las del carpo y del tarso. La instalacin del cuadro de artritis en un reproductor puede incapacitarlo para la monta. 10.2. EN LOS SERES HUMANOS Los sntomas clnicos asociados a la brucelosis en los seres humanos son poco especficos. En la mayora de las veces la enfermedad es confundida con otras alteraciones, siendo la Influenza la ms comn. La intensidad de los sntomas y el grado de comprometimiento varan de individuo para individuo, siendo estos dependientes del sitio de instalacin del agente infeccioso, as como de la especie de Brucella infectante. En lo que se refiere al sitio de instalacin de las brucelas en los seres humanos, no existe tropismo por ningn rgano en particular y, de esa forma, las brucelas pueden alojarse en cualquier sitio, determinando cuadros muy variables. Sobre las especies infectantes, los seres humanos son susceptibles, en orden de patognesis, a la Brucella melitensis, Brucella suis, Brucella abortus y Brucella canis. Infecciones por las otras especies de brucelas an no fueron descritas en la especie humana. La Brucella melitensis es considerada extica en Brasil, una vez que todava no ha sido hecho ningn aislamiento de ese pas. La Brucella suis, presenta poca expresin, teniendo en vista la baja prevalencia de la brucelosis en los rebaos porcinos tecnificados y la Brucella canis an tiene su real importancia desconocida. Los sntomas clnicos y patolgicos de la brucelosis en la especie humana son: Fiebre continua, intermitente o irregular (designacin de fiebre ondulante); Calofros, sudoresis e hiperterma;

 Cefaleas/artralgias/mialgias; Astenia/insonnia; Impotencia sexual; Anorexia/adelgazamiento; Disturbios visuales y neurosquicos; Osteoartitis localizadas; Epididimitis, orquitis y endocarditis; Lesiones granulomatosas en diversos rganos y tejidos; Linfodenopatias/esplenomegalia/ hepatomegalia; Encefalitis/meningitis/neuritis Aunque la Brucella abortus ocupe el tercer lugar en orden de patognesis para la especie humana, no significa que las lesiones que determina sean insignificantes. La adopcin de medidas preventivas para la enfermedad, sobre todo para los individuos que ejercen actividades de riesgo, funcionarios de mataderos, mdicos veterinarios, zootecnistas y tratadores, debe siempre ser observada una vez que la enfermedad puede dejar secuelas graves.

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DIAGNSTICO
Diversas son las alternativas de diagnstico para la brucelosis bovina, pasando por los mtodos clnicos, histopatolgicos, bacteriolgicos y serolgicos. 11.1. CLNICO La brucelosis es una enfermedad esencialmente de animales sexualmente maduros, que tiene preferencia por el tracto reproductor de machos y hembras. En los machos, el sntoma ms caracterstico es la orquitis, generalmente

unilateral. En las hembras, los sntomas ms caractersticos son la ocurrencia de abortos, generalmente en el tercio final de la gestacin, natimuertos y nacimientos de cras dbiles y retencin de la placenta. El diagnstico clnico de la brucelosis, aunque pueda ser establecido en funcin de las manifestaciones clnicas y por el anlisis de los datos reproductores del rebao, necesita siempre de la confirmacin, una vez que las alteraciones que se verifican no son exclusivas de la brucelosis. Otro aspecto importante es que cuando la enfermedad se disemina en el rebao, las manifestaciones reproductoras, abortos, natimuertos, cras dbiles etc, tienden a ser ms discretas. Como consecuencia de esto, la ocurrencia de la enfermedad puede pasar sin llamar la atencin caso no exista una buena vigilancia reproductora del rebao. 11.2. LABORATORIAL 11.2.1. Mtodos directos Los mtodos directos son aquellos basados en la investigacin del agente infeccioso. 11.2.1.1 Microscopa directa La microscopa directa puede ayudar en el diagnstico d la brucelosis, aunque no sea una tcnica especfica. El frotis de cotiledones y la descarga vaginal de la hembra, adems del pulmn, hgado y contenido abomasal fetales son fijos por calor o por etanol y coloreados por la tcnica modificada de Ziehl-Nielsen o Macchiavello. En los casos positivo, las brucelas se presentan en la forma de cocobacilos coloreados de rojo, pudiendo ser vistos tambin en el interior de clulas fagocitrias (Figura 16)

FIGURA 16: Brucella en frotis de placenta.

11.2.1.2. Inmunofluorecencia Directa (IFD) La IFD posibilita la demostracin rpida del agente, aunque este se encuentre inviable o que el material est contaminado por otros microorganismos. Entretanto, es una tcnica muy trabajosa y por eso poco utilizada en la rutina. La posibilidad de reaccin cruzada con otras bactrias, con Yersinia enterocolitica 0:9 y Salmonella spp, por ejemplos, exige que la interpretacin de los resultados sea criteriosa. 11.2.1.3. Inmunoperoxidasa (IPD) Se trata de una tcnica muy semejante a la IFD, basndose en la utilizacin de inmunoglobulinas conjugadas con enzimas para la deteccin de antgenos en cortes de tejidos. La tcnica ms usada es la que emplea el complejo inmunoenzimtico avidina-biotina-peroxidasa. La IPD constituye una alternativa para el diagnstico de la brucelosis bovina, principalmente en los casos en que las muestras no presenten bacterias viables. Tejidos de placenta infectada son los ms indicados para este mtodo, pues presentan generalmente alta concentracin del agente. Se trata de una tcnica de elevada especificidad, aunque sea muy trabajosa.

11.2.1.4. Reaccin en Cadena de la Polimerasa (RCP) La tcnica de RCP es basada en la amplificacin de secuencias genticas especficas de la Brucella abortus, siendo usada para la investigacin del agente en muestras de leche, descargas uterinas y de diversos tejidos de fetos abortados o de animales sacrificados. Se constituye en una buena alternativa para los testes de cultura por el hecho de presentar alta sensibilidad y especificidad, siendo los resultados prontamente obtenidos. Trabajos han sido desarrollados utilizndose esta tcnica para la diferenciacin entre muestras de campo de Brucella abortus y la muestra de vacuna B-19, con resultados satisfactorios. El teste generalmente presenta menor sensibilidad en comparacin con la tcnica de ELISA, entretanto, como la especificidad es mayor, se constituye en importante herramienta de diagnstico, principalmente en los pases donde la enfermedad est en la fase final de control o ya ha sido erradicada. 11.2.1.5. Aislamiento e Identificacin El aislamiento del agente etiolgico se constituye el mtodo ms exacto de diagnstico. Para el aislamiento bacteriano, se recomienda enviar el feto abortado sin abrirlo o el contenido estomacal del mismo, adems de fragmentos de las membranas fetales. Material lquido, como leche y calostro, tambin pueden ser utilizados, teniendo que ser centrifugados a 2.000 G/20 minutos y el sedimiento y la crema usados para el plaqueamiento. Las brucelas exigen medios ricos y una atmsfera con cerca de 10% de CO2 para su aislamiento. Medios como el gar-hgado, gar-triptose y garsangre pueden ser utilizados. Estos deben contener antibiticos como la Polimixina B, Bacitracina, Cicloheximida, Vancomicina, cido Nalidxico y Nistatina, para restringir el crecimiento de contaminantes. Uno de los recursos para aumentar la sensibilidad del aislamiento consiste en la inoculacin del material sospechoso en cobayos. Se inoculan 0.5 a 1.0 mL de macerado del tejido sospechoso va intramuscular. Despus de tres a seis semanas, los cobayos son sacrificados, el suero sanguneo colectado para la serologa y el bazo y otros rganos anormales destinados al examen bacteriolgico.

La seleccin de colonias sospechosas puede ser realizada al someter las colonias sugestivas de brucela a testes de aglutinacin utilizndose suero positivo para antgenos monoespecficos (A, M, R). La identificacin de rutina se basa en la observacin de las caractersticas macroscpicas y microscpicas de las colonias y en la realizacin de pruebas bioqumicas. Las colonias de Brucella abortus toman de tres a cinco das para crecer, son translcidas y no hemolticas, tienen coloracin blanco-grisceo o amarillenta y entre uno y dos mm de dimetro (Figura 17). Observando el crecimiento de colonias caractersticas, se procede al examen microscpico (Gran o Ziehl Nielsen) de las colonias y, finalmente a los testes bioqumicos. Sumariamente, las brucelas son inmviles, ureasa, catalasa y oxidasa-positivas, reducen nitrato y son indol-negativas. La Brucella abortus posee nueve biotpos cuyas caractersticas pueden ser vistas en Cuadro 3. El aislamiento exige el empleo de medios, equipos y condiciones especiales de cultivo, presenta baja sensibilidad, adems de tratarse de una tcnica trabajosa y onerosa, principalmente cuando un nmero elevado de muestras tiene que ser examinado. Por esos motivos, la mayora de los testes utilizados en el diagnstico de la brucelosis bovina se fundamenta en la deteccin de anticuerpos.

FIGURA 17: Colonias lisas de Brucella en Agar Triptose.

11.2.2. Mtodos indirectos

Los mtodos indirectos se fundamentan en la deteccin de anticuerpos especficos en el suero sanguneo, secrecin vaginal, leche o semen de animales sospechosos. Este material contiene IgM, IgG1, IgG2 e IgA, que pueden ser inducidas por la infeccin, vacunacin o reacciones no especificas. Los testes serolgicos que son disponibles para el diagnstico de la brucelosis bovina se diferencian bsicamente en la habilidad de detectar diferentes clases y subclases de anticuerpos contra el LPS, el antgeno inmunodominante en las muestras lisas de Brucella. El Cuadro 4 relaciona los mtodos serolgicos ms usados en el diagnstico de la brucelosis bovina y las inmunoglobulinas que reaccionan en cada uno de ellos. CUADRO 4: Principales mtodos serolgicos empleados en el diagnstico de la brucelosis bovina e inmunoglobulinas reactivas.
TCNICA Seroaglutinacin Rpida Seroaglutinacin Lenta Teste del Ant. Tamp. Acid. Teste del Anillo de la leche Fijacin de Complemento Teste del 2 Mercaptoetanol ELISA* Inmunoglobulinas Reactivas IgM IgG1 IgG2 IgA + + + + ? + + + + + + + + +

*El teste puede ser estandarizado para detectar solamente una o todas las clases de inmunoglobulinas. FUENTE: Modificado de Agottani (1996).
11.2.2.1. Pruebas de seleccin

El objetivo bsico de un teste de seleccin es identificar, en una referida poblacin con alta probabilidad de acierto, los animales infectados, de manera que puedan ser sometidos a testes de confirmacin y, una vez confirmados como infectados, tengan el destino ms adecuado de acuerdo con la fase del programa de control de la enfermedad.

Los testes de seleccin deben ser fciles, rpidos, no muy caros y presentar una alta sensibilidad, para que animales infectados no permanezcan en el rebao. 11.2.2.1.1. Prueba del Anillo de la Leche (Ring Test) El teste es utilizado para la investigacin de anticuerpos anti-Brucella en la leche, detectando IgA e IgM. Tiene en su facilidad de ejecucin, la rapidez y el bajo precio como grandes ventajas. El Ring Test se basa en la formacin de complejos coloreados por la interaccin entre el antgeno y el anticuerpo que subirn a la superficie del tubo donde se procesa la reaccin, debido a la adherencia de esos complejos a los glbulos de grasa. Como el antgeno es coloreado, se verifica en las muestras positivas la formacin de un anillo de coloracin azulada en la camada superficial del tubo (Figura 18). Se trata de un teste de alta sensibilidad, que permite detectar anticuerpos en la leche de una vaca infectada mezclada a la leche de otras 100 vacas no infectadas. Entretanto, como su especificidad es baja, no es indicado para exmenes individuales. Resultados falsos-positivos pueden ocurrir en vacas con mastitis y en la fase de calostro. Individualmente se puede realizar el teste cuantitativo en animales considerados bruclicos cuando se desea hacer el aislamiento de las brucelas a partir de la leche. En esos casos, se diluye la leche del animal bruclico por la adicin de leche de vacas no infectadas sometiendo las disoluciones al teste. De manera experimental se ha demostrado que muestras cuyos ttulos son mayores o iguales a 1:8 presentan mayor probabilidad de aislamiento de las brucelas. Se preconiza su utilizacin para seleccin de rebaos infectados en regiones lecheras, en la vigilancia de la brucelosis en regiones lecheras y en la vigilancia epidemiolgica en reas libres. El resultado positivo indica la presencia de brucelosis en la propiedad, donde se deben realizar exmenes serolgicos individuales para la identificacin de los animales infectados.

FIGURA 18: Prueba del anillo de la leche, apareciendo resultados positivos (anillo azul en la superficie) y resultados negativos (columna azul y anillo incoloro en la superficie).

11.2.2.1.2. Teste del Antgeno Acidificado Tamponado (Card Test) El Card Test es aplicado como mtodo de vigilancia en reas libres y para la identificacin de rebaos infectados en mataderos y frigorficos. Permite la identificacin de animales infectados que presentan bajos ttulos que no reaccionan en los otros testes de aglutinacin o lo hacen de forma errnea. Detecta de forma selectiva la presencia de IgG1 en el suero, una vez que la IgM es inactiva debido al pH cido (3.65), aunque algunos autores defienden que la IgM est expresa. El teste presenta alta sensibilidad (97%), adems de ser rpido y barato, lo que lo habilita como un buen teste de seleccin. Puede ser utilizado como teste definitivo en rebaos no vacunados, presentando resultados equivalentes a los de la reaccin de fijacin de complemento. Por otra parte, en animales recin vacunados con la muestra B-19, tiende a presentar baja especificidad y por esto se recomienda que los resultados positivos sean confirmados por medio de testes complementares. Actualmente, es el teste utilizado para el diagnstico de campo de la brucelosis bovina en sustitucin al teste de Seroaglutinacin Rpida. La Figura 19 ilustra la prueba del Card Test. La presencia de aglutinacin de cualquier intensidad es interpretada como resultado positivo.

FIGURA 19: Card Test positivo (muestra de la derecha) y negativo (muestra de la izquierda).

11.2.2.2. Pruebas de titulacin 11.2.2.2.1. Seroaglutinacin Lenta (SAL) La SAL fue el primer teste serolgico desarrollado para el diagnstico de la brucelosis. Aunque ha sido el teste bsico utilizado para la erradicacin de la brucelosis en varios pases europeos, actualmente, su utilizacin est siendo abolida en varios pases debido a la baja sensibilidad, especialmente en los casos crnicos, y a la baja especificidad ocasionada por las reacciones no especfica. Esta prueba esta menos sujeta a errores de tcnica que ocurren en la Seroaglutinacin Rpida, pero la presencia de hemlisis en el suero puede llevar a errores de lectura, con ocurrencia de reacciones falsos-positivas. Este teste tuvo su uso muy restringido en Brasil a partir del implante de la Instruccin Normativa No 02 del 10 de enero de 2001. Por la nueva legislacin, se pas a adoptar el Teste del Antgeno Acidificado Tamponado para la seleccin y el teste del 2-Mercaptoetanol en paralelo con la SAL para la confirmacin o para aclarar los resultados en duda. La Figura 20 ilustra la realizacin de la SAL. La presencia de sedimento y ausencia o disminucin de la turbidez son indicativas de la presencia de anticuerpos en la disolucin. La interpretacin del teste se encuentra resumida en el Cuadro 5.

FIGURA 20: Ilustracin de la SAL para el diagnstico de la brucelosis bovina. Notar la presencia de grumos (complejos formados por el antgeno y anticuerpos) en todas las disoluciones despus de agitar los tubos.

CUADRO 5: Interpretacin de la SAL e de la SAR en rebaos vacunados y no vacunados de acuerdo con Olascoaga (1976).
Ttulos Animales vacunados (3- 8 meses) testados despus de 30 meses de edad Negativo Negativo Negativo Negativo Sospechoso Sospechoso Sospechoso Positivo Animal no vacunado o vacunado con edad >8 meses Negativo Negativo Sospechoso Sospechoso Sospechoso Positivo Positivo Positivo

1:25 I 1:25 1:50 I 1:50 1:100 I 1:100 1:200 I 1:200

FUENTE: Olascoaga (1976).

11.2.2.2.2. Seroaglutinacin Rpida (SAR)

Este es el mtodo ms utilizado en Brasil, entretanto, de acuerdo con la nueva legislacin, solamente podr ser usado hasta julio de 2002. La SAR est siendo abolida en varios pases, principalmente en Europa y Estados Unidos, debido a su baja sensibilidad y especificidad, a ejemplo de lo ya ocurre con la SAL. Reacciones cruzadas provocadas por Escherichia coli; Yersinia y Salmonella, la realizacin del teste (problemas al usar inadecuada, gotero sin calibrar, etc), adems los principales problemas de su utilizacin. bacterias gran-negativas como la posibilidad de errores durante la la pipeta, temperatura ambiente de la baja sensibilidad, constituyen

Los criterios de interpretacin son los iguales a los de la SAL, considerando el histrico de las vacunas del animal y el ttulo presentado, de acuerdo con el Cuadro 5. La Figura 21 ilustra dos muestras de suero reactivos en la SAR (las dos de la izquierda, con ttulo de 1:200) y la otra negativa (la muestra de la derecha).

FIGURA 21: Prueba de SAR, indicando resultados positivos (las dos muestras de la izquierda) y negativo (muestra de la derecha).

La reaccin positiva se caracteriza por la presencia de grumos, como puede ser observado en las dos muestras de la izquierda, pero en la ausencia de reaccin no se observa la formacin de esos grumos. 11.2.2.3. Pruebas complementarias Los testes complementares tienen por objetivo subsanar las dudas surgidas por ocasin de la realizacin de los testes de seleccin o de las pruebas de SAL y SAR. Un buen teste de confirmacin debe presentar alta especificidad junto a una buena sensibilidad, para que los animales con reacciones falsos-positivas no sean indebidamente descartados. La sensibilidad tambin debe ser buena, de lo contrario, animales infectados detectados en la clasificacin podrn permanecer en el rebao, atrasando o no permitiendo el programa de control y erradicacin de la enfermedad. 11.2.2.3.1. Teste del 2-Mercaptoetanol (2-ME) Esta prueba presenta alta especificidad pues detecta selectivamente IgG2. Este comportamiento se justifica por la propiedad que compuestos qumicos con grupos sulfidricos, como el 2-mercaptoetanol y el rivanol tienen al inactivar las inmunoglobulinas de la clase M, sin alterar la reactividad de la IgG. La presencia de IgG constituye un fuerte indicio de infeccin, ya que la brucelosis es de carcter crnico. El teste del 2-ME es ejecutado de la misma manera que la SAL, adicionndose al antgeno no fenicado la solucin 0.1M de 2-mercaptoetanol. Como norma general, se interpreta la presencia de ttulos mayor o igual a 1:25 ante el teste del 2-mercaptoetanol como indicativa de la infeccin bruclica. 11.2.2.3.2. Prueba de aglutinacin del plasma seminal Algunos toros infectados pueden presentar ttulos de anticuerpos en el plasma seminal mayores que aquellos encontrados en el suero sanguneo. Esos ttulos pueden variar desde 1:10 a 1:10000 o ms. La presencia de anticuerpos en el plasma seminal, en cualquier ttulo, constituye un fuerte indicio de infeccin del tracto genital del reproductor, lo que restringe su utilizacin para la reproduccin.

11.2.2.3.3. Reaccin de Fijacin de Complemento (RFC) Evaluaciones bacteriolgicas indican que la RFC (Figura 22) es superior a todos los testes con relacin a la sensibilidad y especificidad, constituyendo una herramienta importante para la identificacin de rebaos bruclicos. La tcnica posibilita aclarar las dudas con relacin a los resultados sospechosos, revelando las reacciones falsos-positivas y falsos-negativas. Las inmunoglobulinas fijadoras persisten por menor tiempo en el suero de los animales vacunados antes de la pubertad, lo que permite, en algunas situaciones, el diagnstico deferencial entre infeccin y vacunacin, desde que hayan transcurrido seis meses o ms despus de la vacunacin. Debido a su alta especificidad y sensibilidad, la RFC, aunque presente un elevado costo y exija mano de obra calificada, todava hoy es el teste confirmativo ms acepto en todo el mundo. Actualmente, es uno de los testes estndar para el MERCOSUL.

FIGURA 22: Ilustracin de la RFC. La presencia de glbulos rojos ntegros (formacin del botn) en cada una de las columnas a partir de la disolucin de 1:8 (lnea C) indica resultado positivo. Las muestras positivas son 1-3,6,8-11 y las otras son negativas.

11.2.2.3.4. Inmunodifusin en Gel de Agar (IDGA)

La prueba de IDGA (Figura 23) fue propuesta al final de la dcada de 1970 con el objetivo de hacer diferencia entre los animales infectados y los vacunados. Emplea como antgeno el polisacride O. La respuesta a ese antgeno depende de un estmulo antigenico fuerte, normalmente asociado a la infeccin activa. En animales vacunados con la muestra B-19, el estmulo antignico no sera suficiente para desencadenar la produccin de anticuerpos especficos. Aunque el teste presente alta especificidad, no ha sido utilizado de forma intensa en la rutina de diagnsticos debido al tiempo necesario de su ejecucin (48 a 72 horas) y a su baja sensibilidad, especialmente cuando se consideran los animales que presentan bajos ttulos serolgicos en los testes cuantitativos.

FIGURA 23: Prueba de IDGA

Todas las muestras de la Figura 23 presentan resultado positivo en el teste de inmunodifusin, que se configura por la formacin de una lnea precipitacin entre el hoyo central que contiene el antgeno y los perifricos que contienen las muestras de suero que sern testadas. 11.2.2.2.3.5. Teste Inmunoenzimtico (ELISA) Existen varios tipos de testes de ELISA, siendo que aquellos que se destinan a la deteccin de anticuerpos en el suero sanguneo o en la leche son llamados ELISA indirectos. Actualmente ya existen diversos Kits siendo comercializados. Una de las caractersticas bsicas del ELISA es su alta sensibilidad, lo que permite la deteccin de animales en la etapa inicial de la enfermedad, y puede ser estandarizado de forma que presente una elevada especificidad. Estas

caractersticas abren la perspectiva de su utilizacin como teste de seleccin o confirmativo en los programas de control de la brucelosis bovina. El ELISA que emplea el polisacaride O ha demostrado ser una herramienta til en la diferenciacin de anticuerpos de vacunas de anticuerpos inducidos por la infeccin natural, presentando alta sensibilidad y especificidad, incluso en los animales recin vacunados con la muestra B-19. Entre las ventajas del ELISA, pueden relacionarse la posibilidad de ajustar la sensibilidad y especificidad y la automatizacin del proceso y, como desventajas, el elevado costo, principalmente cuando son pocas las muestras que sern analizadas. 11.2.2.3.6. Teste de Hipersensibilidad El teste de hipersensibilidad emplea antgenos proteicos de Brucella, siendo ejecutado de manera similar al teste intra-drmico para el diagnstico de la tuberculosis bovina. Presenta varios problemas como baja sensibilidad, induccin de inmunoglobulinas que pueden interferir posteriormente en el diagnstico serolgico, adems de que existe grande variacin con relacin a la composicin y pureza de los antgenos usados. Experimentalmente, fue demostrada su aplicacin para la deteccin de brucelosis en novillas nacidas de vacas contaminadas, incluso cuando estas no presentaban respuesta serolgica ante testes considerados de alta sensibilidad como la RFC, por ejemplo. Otro aspecto positivo es que el teste presenta alta especificidad (100%), incluso en animales vacunados. 11.3. DIAGNSTICO DE LA BRUCELOSIS EN SERES HUMANOS Normalmente, el diagnstico de la brucelosis en seres humanos ha sido hecho emplendose las mismas herramientas usadas para el diagnstico de la enfermedad en los animales. Entre las tcnicas ms usadas estn la hemocultura en medio bifsico (Medio Castaeda), o usndose material obtenido de puncin de la mdula sea o biopsia del hgado. Con relacin a los testes serolgicos, el teste del Antgeno Acidificado Tamponado es el ms utilizado en las serologas de rutina, aunque resultados ms confiables sean obtenidos en los testes de ELISA o por la utilizacin del teste de Coombs que permite la deteccin de anticuerpos no aglutinognicos.

Trabajos ms recientes han demostrado la aplicacin de la tcnica de PCR y de los testes alrgicos para el diagnstico de la enfermedad en los seres humanos. 11.4. CONSIDERACIONES FINALES SOBRE EL DIAGNSTICO DE LA BRUCELOSIS Aunque existan diversos medios alternativos para el diagnstico de la brucelosis bovina, no hay ninguna tcnica que cuando aplicada aisladamente permita determinar con absoluta seguridad la presencia o ausencia de la infeccin. Factores como la falta de especificidad de los sntomas clnicos, el periodo de incubacin variable, la vacunacin con la muestra B-19, la respuesta individual variable a la infeccin, las reacciones no especficas y la oscilacin de ttulos en la fase crnica de la enfermedad dificultan el diagnstico, principalmente el serolgico. De esta manera, el diagnstico final deber establecerse considerando, adems de los resultados serolgicos, el histrico del rebao y, caso sea necesario, por la utilizacin combinada de ms de una tcnica de diagnstico y por el uso de sorologa a cada 30 das. Aspectos como el costo, facilidad de ejecucin y las caractersticas de sensibilidad y especificidad debern ser evaluados obligatoriamente por ocasin de la seleccin de los mtodos que sern usados en el diagnstico de la enfermedad.

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DIAGNSTICO DIFERENCIAL
Las manifestaciones clnicas descritas anteriormente, aunque bastante sugestivas de la brucelosis, ocurren tambin en otros procesos infecciosos y no infecciosos que pueden tambin estar relacionados con las alteraciones observadas, necesitndose que se haga el diagnstico diferencial. Otro aspecto importante es que la presencia de una enfermedad reproductora en el rebao no excluye la posibilidad de ocurrencia de otras, siendo esta situacin la ms comn debido al carcter multifactorial de las enfermedades de la reproduccin. El Cuadro 6 relaciona las diferencias ms importantes que deben ser consideradas en el caso de la brucelosis bovina.

CUADRO 6: Enfermedades abortivas en bovinos

Enfermedad Brucelosis Tricomonosis Campilobacteriosis Genital Bovina Leptospirosis IBR Listeriosis FUENTE: Corra y Corra (1992). Tasa de aborto Variable (hasta 90%) 5-30% 5-20% 25-30% 25-50% Baja poca del aborto 6 meses 2-4 meses 5-6 meses 6 meses 6 meses 7 meses

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TRATAMIENTO
13.1. TRATAMIENTO DE BOVINOS Las brucelas presentan sensibilidad a antibiticos comunes como las tetraciclinas, rifampicina, cloranfenicol y estreptomicina. Los mejores resultados han sido obtenidos por la asociacin de bases, siendo que el esquema teraputico ms citado en la literatura es: Estreptomicina 10 mg/Kg 2 veces al da por 15 das + Tetraciclina 10 mg/Kg 2 veces al da por 30 das De acuerdo con la literatura, la efectividad del tratamiento est condicionada a la precocidad con la cual es iniciado. En los casos crnicos, la perspectiva de suceso del tratamiento es muy pequea. Algunas muestras de Brucella producen bacteriocinas que han demostrado ser efectivas contra otras especies de brucelas, criando otra alternativa de tratamiento, principalmente para las muestras resistentes a los antibiticos ms usuales. Otra perspectiva con relacin al tratamiento de la brucelosis es la utilizacin de antibiticos protegidos por liposomos. El antibitico es libertado directamente

en el interior de los fagocitos despus de la degradacin de los liposomos. Los tratamientos que se basan en la utilizacin de liposomos que contienen estreptomicina asociada a tetraciclinas de larga duracin demuestran gran efectividad en bovinos infectados. La mayor limitacin para este tipo de tratamiento es el costo bastante elevado. Aunque existan trabajos que tratan de la efectividad del tratamiento para bovinos infectados, esto no es recomendado debido al elevado costo y por la dificultad de establecerse un criterio adecuado para la evaluacin de la cura. Normalmente, cuando un animal es sometido al tratamiento con antibiticos contra la brucelosis, se observa una cada de los ttulos de anticuerpos serolgicos, pero esto no significa que haya sido curado. Para tener seguridad de que un animal est realmente curado no es suficiente hacer la vigilancia serolgica. La Brucella, debido al parasitismo intracelular facultativo, logra escapar de la accin de anticuerpos y antibiticos circulantes, y puede quedar alojada en diversos rganos linfides. De esa forma, sera necesario investigar la bacteria en diferentes sitios linfides para evaluarse la eficiencia del tratamiento, lo que es inviable de forma tcnica y econmica, especialmente con el animal vivo. El tratamiento de bovinos bruclicos no es permitido en Brasil. 13.2 TRATAMIENTO DE LA BRUCELOSIS HUMANA Los dos esquemas teraputicos ms usados para el tratamiento de los casos de brucelosis humana son: Doxiciclina: 100mg 12/12 horas por 45 das + Estreptomicina: 1 g/da durante los primeros 15 das O Doxiciclina + Rifampicina (OMS, 1986)

El primer esquema que consta de la asociacin entre doxiciclina y estreptomicina ha sido el ms usado para el tratamiento de los casos de brucelosis humana. El esquema basado en la utilizacin de doxiciclina e Rifampicina es muy averiguado debido a la falta de evaluacin de su eficacia. La rifampicina ha sido utilizada para el tratamiento de la brucelosis en nios. Es muy importante decir que el tratamiento no elimina las lesiones de los tejidos provocadas por las brucelas y que el tratamiento debe ser iniciado lo ms temprano posible para minimizar las secuelas. Otro aspecto importante es que pueden ocurrir recadas en cerca de 5% de los individuos tratados.

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CONTROL Y PROFILAXIS
Las medidas destinadas al control y a la profilaxis de la brucelosis bovina varan de acuerdo a las caractersticas del rebao como el valor zootecnico de los animales, la densidad, el tipo de sistema de produccin y la prevalencia de la enfermedad en el rebao. En las reas endmicas, la vacunacin de novillas con edad entre tres y ocho meses con Brucella abortus muestra B-19, el aislamiento y sacrificio de los animales infectados han sido las principales medidas de control adoptadas. Un factor que hace difcil el control de la enfermedad es la inexistencia de normas con relacin a las tcnicas de diagnstico que sern usadas y los parmetros para sus interpretaciones, principalmente para el comercio internacional. Tcnicas como la SAR y la SAL, que se sabe presentan baja sensibilidad y especificidad y que an continan siendo la base del diagnstico en muchos pases, deberan ser abolidas, como ocurri ya en los Estados Unidos y Europa y, ms recientemente en Brasil. 14.1. MANUTENCIN DE REAS LIBRES La vigilancia epidemiolgica es la principal herramienta profilctica en reas libres. Esta se hace mediante la supervisin de los animales en los establecimientos de abate y la clasificacin de la leche al nivel de cooperativas e

industrias de procesamiento lcteo por medio del Ring Test. El teste del Antgeno Tamponado Acidificado y el ELISA son importantes herramientas para la vigilancia serolgica de los animales. En el caso de Brasil, existe un grande obstculo al hacer la vigilancia en los establecimientos de abate que es el comercio clandestino de carne y de leche que es de aproximadamente 50% en el caso de la carne y de 40% en el caso de la leche. Otro aspecto importante es que difcilmente se observan lesiones en la inspeccin sanitaria de los animales bruclicos. Adems de las medidas ya citadas, la vigilancia en portones y aeropuertos y la implantacin de barreras sanitarias son de gran importancia, restringiendo el trnsito de animales provenientes de reas infectadas o potencialmente infectadas. La implantacin de cuarentena es una medida muy importante para varias enfermedades, pero en el caso de la brucelosis bovina, es poco efectiva debido a la gran variacin del periodo de incubacin. En reas libres, no se justifica la vacunacin ya que la muestra B-19 interfiere en el diagnstico como fue visto anteriormente. En esas reas, se hace necesario la vigilancia de la enfermedad entre los animales silvestres que pueden funcionar como potenciales reservorios del agente. A medida que se controla y disminuye la prevalencia entre los bovinos, se tiende a observar la reduccin de la prevalencia tambin entre los reservorios silvestres. 14.2. EN REBAOS LIBRES EN REAS ENDMICAS Una de las medidas bsicas de control y profilaxis en reas endmicas es la vacunacin de las novillas con edad entre tres y ocho meses (ideal entre 3 e 6 meses). La vacuna confeccionada con la muestra B-19 confiere un nivel de proteccin alrededor de 65-85%, pero constituye solamente uno de los elementos del programa de control y profilaxis de la enfermedad. De acuerdo con la legislacin en vigencia, los animales vacunados deben ser marcados con un "V" del lado izquierdo de la cara, seguido del ltimo nmero del ao corriente (Figura 24). No comprar animales bruclicos constituye otra recomendacin. Aunque existan diversos mtodos de diagnstico para la brucelosis, no existe ninguno que sea 100% sensible. Adems de esto, existe el problema del periodo de incubacin variable y de los cargadores latentes. Conociendo estos aspectos, la mejor conducta es solicitar siempre que se realicen exmenes de los animales que sern introducidos en el rebao, mantenerlos aislados hasta la repeticin del

examen despus de 30 o 45 das y, muy importante, solamente adquirir animales de rebaos sabidamente libres de brucelosis. La vigilancia regular del rebao es muy importante. Puede ser realizado mensualmente por el Ring Test en rebaos lecheros o hasta por la utilizacin del Teste del Antgeno Tamponado Acidificado a cada seis o 12 meses. La legislacin brasilea ha previsto que rebaos lecheros A y B deben ser testados para brucelosis y tuberculosis a cada seis meses. En reas endmicas tambin es muy importante cuidar de la manutencin de las cercas y tener cuidados con el uso de aguas comunes.

FIGURA 24: Novilla vacunada contra la brucelosis y marcada de acuerdo con la legislacin.

14.3. EN REBAOS INFECTADOS Una vez detectada la enfermedad en el rebao, las medidas genricas de control son: 14.3.1. Realizacin de examen serolgico de los animales en edad de reproduccin Animales vacunados con la muestra B-19 deben ser testados solamente despus de los 24 meses de edad, por otro lado machos y hembras no vacunados pueden ser testados a partir de ocho meses de edad.

La prueba serolgica ms indicada para la seleccin es el Teste del Antgeno Tamponado Acidificado, que puede incluso ser empleado como teste definitivo si el rebao no ha sido vacunado. Por otra parte, los resultados positivos obtenidos en rebaos vacunados, especialmente en las vacas de primera cra, debern ser confirmados por medio del 2-ME o a RFC. Otra alternativa para estos casos es la de repetir el teste despus de 30-45 das, para confirmarse el resultado dudoso. Algunos testes, como la SAL y la SAR, clasifican los animales como negativos, sospechosos o positivos. En rebaos infectados, lo ideal es volver a testar los animales sospechosos despus de 30 das o solicitar inmediatamente la realizacin de testes confirmativos. La probabilidad mayor es que los animales clasificados como sospechosos sean infectados, una vez que ttulos bajos en las pruebas cuantitativas normalmente son observados al inicio y en la fase crnica de la enfermedad. 14.3.2. Aislamiento y descarte racional de los animales infectados Una vez realizados los testes serolgicos, los animales sern clasificados en negativos o positivos. El destino de los animales infectados depender bsicamente de la prevalencia de la enfermedad en el rebao y del valor zootecnico de los animales. Si los animales son mantenidos en la propiedad es importante que sean aislados del resto del rebao para evitar la diseminacin de la enfermedad. En el caso brasileo, la legislacin vigente determina que los animales infectados sean marcados con un "P" en el lado derecho de la cara (Figura 25) y sacrificados, ya que no existe la alternativa de tratamiento. Se pueden obtener becerros sanos a partir de vacas infectadas. Lo que se aconseja es que tan pronto el becerro haya nacido, sea separado de la madre y reciba calostro y leche de una vaca sabidamente no infectada. Se puede implementar para eso un banco de calostro y cuando surge duda hacer la pasteurizacin de este y de la leche que ser ofrecida a los animales. El animal que nace infectado o que se infecta cuando becerro presenta grande probabilidad de eliminar el proceso infeccioso, pero, no se puede olvidar que algunos de esos animales pueden tornarse cargadores latentes y de esa manera dificultar el control de la enfermedad en el rebao.

FIGURA 25: Animal bruclico marcado de acuerdo con la legislacin brasilea vigente.

14.3.3. Vigilancia constante en el grupo negativo Animales que presenten resultado negativo en los testes de clasificacin debern ser testados nuevamente en intervalos de 30 a 60 das, visando remover rpidamente del rebao negativo aquellos que vengan a presentar seroconversin. Los testes nuevos deben ser mantenidos hasta que no ocurran reacciones positivas despus de tres testes consecutivos. Atencin especial debe darse a las novillas hijas de madres bruclicas que, como fue visto anteriormente, solamente van a presentar seroconversin pocas semanas antes o despus de la ocurrencia del parto o del aborto. 14.3.4. Separacin de piquetes para animales prximos al parto Las hembras en gestacin deben ser encaminadas para un piquete maternidad en la fase final de la gestacin. Este piquete debe poseer gramnea de porte bajo para facilitar la accin de la luz solar y estar situado en local donde no haya facilidad de carga de las brucelas para los otros pastos o instalaciones. 14.3.5. Destino adecuado de fetos abortados y restos de placenta

Estos especmenes constituyen los principales vehculos de infeccin para bovinos susceptibles. Fetos abortados y restos placentrios deben ser removidos lo ms rpido posible de los pastos e incinerados o enterrados. 14.3.6. Limpieza y desinfeccin peridica de las instalaciones Las instalaciones deben ser desinfectadas peridicamente. La periodicidad depender del tipo de sistema. Cresoles, fenoles y formol en la concentracin de 3-5%, soda custica 1-2% y el iodofor (50-70 ppm) son bastante efectivos contra las brucelas. 14.3.7. Vacunacin de becerras La vacunacin de becerras que se encuentran con edad entre tres e ocho meses con la muestra B-19 es una medida bastante efectiva para la prevencin de la brucelosis, disminuyendo las nuevas infecciones dentro del rebao. Hoy, en funcin de la necesidad de testarse ms tempranamente los animales, se recomienda que las becerras sean vacunadas entre tres y seis meses, visando disminuir la interferencia de los anticuerpos de las vacunas en el diagnstico serolgico. La muestra de vacuna ms utilizada en todo el mundo es la B-19, una muestra naturalmente atenuada de Brucella abortus. El grande inconveniente de esta muestra es la induccin de anticuerpos no diferenciables de los inducidos por la infeccin natural, una vez que en ambos casos estn presentes los mismos tipos de anticuerpos. El problema ha sido agravado por la necesidad de testar ms tempranamente los animales vacunados debido a las imposiciones comerciales o en consecuencia de una mayor precocidad reproductora. Tentando solucionar esos problemas relativos al uso de la muestra B-19, diversos trabajos han sido conducidos en el sentido de producir nuevas muestras de vacunas que tengan las siguientes caractersticas: garantir la inmunidad igual o superior a la conferida por la muestra B-19; no presentar riesgos para los seres humanos; no ser eliminada por los animales vacunados; no ser patognica para os animales vacunados; no interferir con el diagnstico de la brucelosis en los animales vacunados.

Como resultados de esos trabajos, fue elaborada la muestra RB-51 por medio de paso sucesivo de la Brucella abortus en medio con el antibitico rifampicina. Se trata de una muestra mutante rugosa, que no tiene el LPS, principal antgeno presente en las muestras de campo de Brucella abortus, y por lo tanto, no interfiere en el diagnstico serolgico de la brucelosis por las pruebas usuales. De acuerdo con los trabajos realizados, la RB-51 induce inmunidad semejante a la determinada por la muestra B-19 y los animales pueden ser vacunados en cualquier edad, incluso con la posibilidad de refuerzos de vacunas en rebaos bruclicos. Tambin no presenta riesgo para los animales, pudiendo ser realizada la vacunacin incluso de vacas en gestacin sin el riesgo de grandes complicaciones. Algunos trabajos han relatado el papel de esta bacteria en procesos patolgicos del hombre en los pases donde ha siso utilizada. La RB-51 ha sido utilizada en los EUA desde 1996, estando tambin en uso en Mxico y en Chile y en testes para liberacin en diversos pases, incluso en Brasil, donde la tendencia es que pase a ser comercializada brevemente. En Brasil, est siendo conducido un trabajo en el Instituto de Ciencias Biolgicas de la Universidad Federal de Minas Gerais (UFMG) que tiene como objetivo el desarrollo de una muestra atenuada por medio de manipulacin gnica para fines de vacunas. Los trabajos se encuentran en fase adelantada, siendo la perspectiva de que la vacuna est en el mercado en pocos aos. Adems de la vacunacin de becerras, existen diversas otras alternativas de inmunizacin que pueden ser preconizadas dependiendo del tipo de rebao, de la prevalencia de la enfermedad y del tipo de manejo del sistema. Entre ellas, se relaciona la vacunacin de adultos con dosis estndar y la vacunacin de novillas y animales adultos con dosis reducida va conjuntiva. 14.3.8. Vacunacin de adultos con dosis estndar La vacunacin de adultos, utilizndose la muestra B-19 en la dosis estndar (60-120 billones/SC), induce ttulos de anticuerpos residuales que pueden alargarse por varios aos, imposibilitando la realizacin de exmenes serolgicos, una vez que los animales presentan resultados positivos en la mayora de las pruebas utilizadas en el diagnstico de rutina para la brucelosis, incluso en aquellas ms especficas como el teste del 2-Mercaptoetanol y Reaccin de Fijacin de Complemento. De esta forma, es una alternativa de

control preconizada solamente para rebaos de corte en los cuales estn ocurriendo brotes de abortos e que objetiva disminuir el nmero de abortos y nuevas infecciones. La vacunacin debe ser realizada una nica vez en el rebao en todas las hembras sexualmente maduras. Estos animales deben recibir marcacin especial para facilitar la identificacin y gradualmente ser descartados del rebao. En los pases donde la RB-51 est liberada para uso, esta estrategia de control no se justifica. 14.3.9. Vacunacin de adultos con dosis reducida La estrategia de vacunacin de bovinos adultos con dosis reducida por va conjuntiva es preconizada para rebaos en los cuales la prevalencia es elevada y no existen condiciones de descarte o aislamiento de los animales infectados, siendo grande el nmero de animales susceptibles (no vacunados o vacunados hace mucho tiempo). Consiste en la vacunacin de las hembras sexualmente maduras no infectadas, utilizndose dos dosis de la muestra B-19 con 3,0 x109 UFC, intercaladas de cuatro meses va conjuntiva. Este esquema de vacunacin determina respuesta serolgica de baja intensidad y de corta duracin con relacin a la vacunacin con dosis estndar, lo que confiere inmunidad semejante a la obtenida cuando se utiliza la dosis estndar (6,0 x 10 10 UFC). Esa fue una prctica muy utilizada durante el programa de control de la brucelosis bovina en rebaos crnicamente infectados, en Califrnia-EUA. Su eficiencia es bastante discutida en Brasil. Cerca de dos meses despus de la aplicacin de la dosis de refuerzo los animales generalmente presentan resultados negativos ante el Teste del Antgeno Acidificado Tamponado, con pequea proporcin presentando ttulos bajos ( 1:50) a la SAR. Animales pberes tambin pueden ser vacunados con dosis reducida por la va subcutnea, entretanto, la utilizacin de esta va, aunque utilizndose dosis reducida, induce respuesta serolgica semejante a la determinada pop la vacunacin con dosis estndar. Con la llegada de la RB-51, estos esquemas de inmunizacin ya no se justifican.

14.3.10. Tratamiento trmico de la leche y calostro dados a los becerros Fue visto que la leche y el calostro constituyen fuente de infeccin importante para los becerros. En caso de una vaca bruclica parir un becerro de valor zootecnico alto, se recomienda que este sea alimentado con el calostro y leche de una vaca sabidamente negativa. Para ello, se puede usar un banco de calostro. En la imposibilidad de adoptarse esas medidas, se puede pasteurizar el calostro y la leche los cuales sern dados al neonato. 14.4. ERRADICACIN La brucelosis bovina es una enfermedad que puede ser erradicada, como fue demostrado en diversos pases, entretanto, el establecimiento de un programa de erradicacin no puede ser visto como un procedimiento estndar que se adapta a todas las situaciones. Variables como la prevalencia de la enfermedad, caractersticas socioeconmicas y culturales son de suma importancia para el delineamiento del proyecto, determinando el suceso o el fracaso de este. Los programas clsicos de erradicacin se basan en el diagnstico y sacrificio de reactivos, vacunacin en masa del rebao, en el control del transito y vigilancia epidemiolgica, contando adems con la asistencia veterinaria oficial, laboratorios de referencia para el control de vacunas y antgenos y con el apoyo de los agropecuarios, de la industria y de los consumidores. Un programa de erradicacin requiere necesariamente el sacrificio de animales infectados, siendo necesarios testes sensibles y especficos, con objetivo de que los animales bruclicos sean acertadamente diagnosticados. El sacrificio obligatorio de reactivos implica en el establecimiento de indemnizaciones a los propietarios que al menos cubran parte de los custos do descarte. Una alternativa para este problema seria el establecimiento de un fondo creado por los propios productores. Para iniciarse el programa de erradicacin, la prevalencia de la brucelosis no puede ser alta. En regiones donde las prevalencias son elevadas, la medida ms efectiva para diminuirla consiste en la vacunacin en masa de becerras con edad entre tres y seis meses, cuando se utiliza la B-19. Cuando se utiliza la muestra RB-51, los animales pueden ser vacunados ms tarde, una vez que esta ltima no interfiere con el diagnstico serolgico.

El establecimiento de un programa obligatorio de vacunacin en masa, se ejecutado durante un perodo de por lo menos 10 aos, posibilita que una grande parcela del rebao sea inmunizada (Grfico 1) y, consecuentemente, induce un buen nivel de inmunidad en el rebao. Si hay un buen nivel de inmunidad en el rebao, el nmero de nuevas infecciones disminuye y en consecuencia la prevalencia de la enfermedad tambin se reduce, permitiendo que se pase para la fase de diagnstico y sacrificio de reactivos.

GRFICO 1: Proporcin de vacas no vacunadas a partir del momento que se implementa un programa de vacunacin en masa obligatorio de los rebaos, considerndose que inicialmente los animales no eran vacunados y que las reposiciones no llevan en cuenta el histrico de vacunacin del animal.

La primera fase del programa de erradicacin consiste en el diagnstico y sacrificio de reactivos, vacunacin en masa y vigilancia epidemiolgica intensiva, centrada en el control del transito de animales e en la vigilancia serolgica peridica de los rebaos, por medio del Ring Test, Card Test y testes complementares cuando necesarios. Esta primera fase es conducida hasta que la prevalencia llegue a niveles bajos. De acuerdo con el ya extinto Centro Panamericano de Zoonosisi, en regiones donde el porcentaje de rebaos acometidos es menor que 5% y la prevalencia inferior a 1%, se justifica la implementacin del programa de erradicacin de la brucelosis basado en el diagnstico y sacrificio. Cuando la prevalencia cae a niveles inferiores a 0,2%, los riesgos de diseminacin se reducen, pudindose entonces abolir el uso de la vacunacin o restringirla a rebaos-problema. En la fase final del programa,

atencin especial ser dada al control de transito de animales y a la vigilancia epidemiolgica, rastrendose los focos restantes de la enfermedad. Otro aspecto muy importante en esa fase del programa es determinar cuales son los animales silvestres presentes en la regin que pueden tener envolvimiento en la cadena de transmisin y mensurar el nivel de importancia de estos como potenciales reservorios de brucelas para los rebaos bovinos de la regin. Trabajos recientes han sido desarrollados con el objetivo de desenvolver muestras de vacunas que puedan ser utilizadas en animales silvestres. Ya existen datos que muestran la efectividad de la inmunizacin de bisontes en condiciones de cautiverio emplendose la RB-51 y vacunas empleando organismos genticamente modificados (Lactococcus lactis expresando antgenos de Brucella abortus) que pueden ser utilizadas por va oral, abriendo una buena perspectiva para la inmunizacin de animales silvestres en condicin natural. 14.5. PROGRAMA BRASILEO DE CONTROL DE LA BRUCELOSIS BOVINA El programa de control implementado en Brasil por medio de la Instruccin Normativa 02 de 10 de enero de 2001 fundamntase en las siguientes medidas: 1. Vacunacin de becerras con edad entre 3-8 meses. Todos los estados deben instituir a partir de enero de 2004 la vacunacin de los animales que debern ser marcados com la "V" seguida del ltimo nmero del ao en que fueron vacunados en el lado izquierdo de la cara. La vacunacin deber ser realizada por mdicos veterinarios o vacunadores debidamente entrenados y certificados. Cada propietario debe comprobar la vacunacin de sus animales por medio de los certificados de vacunacin dados por el mdico veterinario responsable por la vacunacin. Se espera que, al final de esta primera etapa de control de la enfermedad, cuya duracin est prevista para 8 a 10 anos, la prevalencia de animales reactivos sea reducida para aproximadamente 1% para que se pueda implementar la segunda fase del programa, centrada en el diagnstico y sacrificio de animales reactivos.

2. Certificacin de propiedades. Se trata de un programa de adhesin voluntaria, cuyo objetivo es estandarizar el control de la enfermedad dentro de las normas sugeridas por el Cdigo Zoosanitario Internacional y aceptos internacionalmente. Propiedades lecheras podrn habilitarse para adquirir la certificacin de propiedades libres y los rebaos de corte podrn pleitear el grado de rebaos controlados. La erradicacin de la brucelosis de estas propiedades se dar por medio del diagnstico y sacrificio de animales reactivos, hasta que se obtengan tres testes consecutivos negativos del rebao. Anualmente, estos establecimientos credenciados debern someter los animales al nuevo teste, para revalidar la certificacin. En estas propiedades tambin deber ser implantado riguroso control con relacin a los animales que sern introducidos. 3. Control del transito y vigilancia epidemiolgica Los animales destinados a la reproduccin debern presentar atestados comprobando resultado negativo para el teste de brucelosis cuando en transito inter-estadual. Estn abolidos del atestado de sanidad los animales castrados, aquellos destinados al abate o procedentes de rebaos libres. Para la participacin en ferias, exposiciones y eventos semejantes los animales tambin debern presentar atestado de sanidad, excepto cuando procedentes de rebaos libres. En cuanto al transito internacional de animales, semen y embriones sern regidos de acuerdo con las normas del Cdigo Zoosanitario Internacional o de la Organizacin Internacional de Epizootias (OIE), en concordancia con los acuerdos internacionales establecidos. Mayores detalles sobre el programa brasileo de control de la brucelosis y tuberculosis bovinas pueden ser obtenidos en la pgina de la Web www.agricultura.gov.br. 14.6. PROFILAXIS DE LA BRUCELOSIS EN LOS SERES HUMANOS La prevencin de la brucelosis en la especie humana pasa obligatoriamente por el control de la enfermedad en las especies animales que funcionan como reservorios del agente para el hombre. Ciertamente, la reduccin de la prevalencia de la enfermedad entre los bovinos, porcinos y caprinos, que son los principales reservorios de brucelas para el hombre, resultar en la disminucin de los caso de brucelosis en los seres humanos. Mientras no se consigue un control efectivo de la enfermedad entre estos reservorios, algunas medidas bsicas pueden ser adoptadas:

1. Implementacin de tratamiento trmico adecuado para la leche y derivados: la pasteurizacin rpida o lenta constituye una medida bastante eficiente para la inactivacin de brucelas en la leche. El grande problema es que en Brasil cerca de 40% de la leche consumida no pasa por cualquier control sanitario, a ejemplo de lo que ocurre con la carne. 2. Adoptar medidas de prevencin de la infeccin en grupos ocupacionales (funcionarios de mataderos, trabajadores rurales, veterinarios, etc): no es una medida fcil de ser alcanzada, debindose hacer una mayor divulgacin de la enfermedad entre estas categoras, en el uso de vestimenta adecuada (guantes, botas, delantales) y en la vigilancia mdica peridica de los individuos que pertenecen a estos grupos de riesgo. En lo que se refiere a la prevencin de la enfermedad entre funcionarios de mataderos, recomindase: separar la sala de matanza de las dems instalaciones del matadero, una vez que ya se confirm la transmisin aerogena en este tipo de establecimiento; introducir soluciones (soda custica, fenoles, cloramina) para limpieza de las manos, utensilios usados en el abate, ropas e instalaciones; credenciar mataderos destinados al abate de animales infectados, disminuyendo los riesgos para el consumidor e para los funcionarios del establecimiento, mediante al adopcin de un esquema de seguridad ms rgido.

3. Mejorar el nivel de seguridad en los laboratorios productores de vacunas y antgenos, visando evitar accidentes laboratoriales. 4. Entrenar y orientar mejor el personal que trabaja en el programa de vacunacin obligatoria de becerras. En general, los vacunadores son muy mal informados sobre los riesgos de contaminacin, no utilizando material de seguridad (guates y lentes de proteccin); 5. Inmunizar individuos bajo riesgo: la vacunacin emplendose muestras derivadas de la B-19 ha sido utilizada para la prevencin de la enfermedad en ciertos grupos ocupacionales en Rusia y China, con resultados satisfactorios. En China, tambin ha sido utilizada una muestra atenuada da Brucella abortus (104 M) va cutnea. Estas vacunas no han sido empleadas en otros pases debido a las reacciones colaterales. Investigaciones estn siendo desarrolladas visando la creacin de vacunas de sub-unidades, vacunas de DNA y, vacunas

utilizando organismos genticamente modificados, visando mejorar el nivel de proteccin y reducir los efectos colaterales.

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