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Magaldi - Reviso/Atualizao em Fisiologia e Fisiopatologia Renal

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Reviso/Atualizao em Fisiologia e Fisiopatologia Renal: Regulao hormonal da reabsoro de gua no ducto colector
Antonio Jos Bar ros Magaldi

Disciplina de Nefrologia - Laboratrio de Pesquisa Bsica da Unidade de Doenas Renais - LIM/12, Hospital da Clnicas - FMUSP Endereo para correspondncia: Antonio Jos Barros Magaldi Av. Dr. Arnaldo, 455 - 2 andar sala 2207 CEP: 01246-903 - So Paulo - SP Fone: (011) 3061-4011 Ramais 2292/2281 Fax: (011) 280-2267

Introduo
A regulao da osmolaridade dos fluidos corporais controlada por um mecanismo homeosttico complexo que atua harmoniosamente ajustando a ingesto e a excreo de gua livre pelo rim. A ingesto de gua regulada pelo centro da sede que estimulado pelos osmo e quimio receptores localizados nas regies supratica e paraventriculares do hipotlamo. Quando h um aumento da osmolaridade plasmtica este centro estimulado promovendo a ingesta hdrica e restabelecendo a osmolaridade do plasma. A reabsoro pelo rim da quantidade filtrada de gua comea j no tbulo proximal aonde cerca de 2/ 3 so reabsor vidos juntamente com solutos, de tal forma que o fluido filtrado permanece isotnico com o plasma. Neste segmento e na ala descendente de Henle a permeabilidade gua alta, ao contrrio do que ocorre na ala ascendente fina, espessa e parte inicial do tbulo distal que so impermeveis gua. Nos segmentos seguintes a permeabilidade gua ser regulada pela presena do hormnio antidiurtico (HAD). A eliminao de uma urina concentrada resulta da reabsoro de gua ao nvel do ducto coletor e est diretamente relacionada com os seguintes fatos: 1) for mao de uma medula hipertnica em relao ao fluido tubular e 2) ao do hor mnio antidiurtico aumentando a per meabilidade gua e uria. A for mao da medula hipertnica est diretamente ligada ao mecanismo de contracorrente multiplicador que ocorre nos ramos descendente fino e ascendente fino e poro espessa da ala de Henle. Pela diferena de per meabilidade gua e solutos destes segmentos e pela ao unitria da poro

espessa, que adiciona ativamente NaCl (Cotransporte/Na:K:2Cl) ao interstcio, a medula renal tornase prog ressivamente hipertnica da regio juxtamedular em direo papila. Este aumento da osmolaridade favorece a reabsoro de gua nos ductos coletores medulares. O ducto coletor medular externo e interno so os segmentos aonde a ao do HAD mais evidente. A secreo do HAD, que no homem a Arginina Vasopressina, tambm depende da ao de osmorreceptores e barorreceptores, localizados nos ncleos suprapticos e paraventriculares da adenohipfise. Quando h um aumento da osmolaridade plasmtica ou uma queda da volemia, h um aumento da sntese seguida pela secreo do HAD no plasma que promovendo um aumento da reabsoro de gua, tenta restituir a osmolaridade plasmtica. A ao do HAD sobre as clulas principais dos ductos coletores se d pela sua ligao a receptores especficos (Figura I). Sabe-se hoje que existem trs tipos de receptores para o HAD1: V1a, V1b e V2. No rim existe predominantemente o tipo V 2 , porm recentemente foram descritos receptores V 1 sem caracterizao do seu subtipo. 2,3 Estes receptores esto localizados na membrana basal. O HAD o primeiro mensageiro sendo o seu efeito intracelular mediado por um segundo mensageiro, que depende do tipo de receptor estimulado. O receptor V 2 foi clonado e seqenciado recentemente, mostrando que ele possui 370 aminocidos 4 e sua expresso, medida pela presena do RNAm respectivo, ocorre exclusivamente no rim. 5 Quando o HAD se liga a este receptor ativada uma enzima chamada Adenilciclase atravs da estimulao de uma protena G heterotrimrica (GTP-GDP) composta por duas unidades: a unidade Gs (estimuladora) e a unidade Gi (inibidora). A proteina Gs estimulada principalmente pelo HAD e por agonistas -adrenrgicos, 6 que vo ativar a adenilciclase. A proteina Gi inibe o efeito estimulador da proteina Gs, por um mecanismo ainda controverso, mas parece ser uma

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Figura 1 - Modelo hipottico dos eventos celulares envolvidos na resposta ao HAD. Abreviaes: AA, cido aracdnico; AC, adenil ciclase; 5AMP, adenosina 5 monofosfato; ATP, adenosina trifosfato, MBL, membrana basolateral; ca, canal de gua; cAMP, 35 monofosfato de adenosina cclica; Ca++, clcio livre; CaM, calmodulina; DAG, diacilglicerol; RE, retculo endoplasmtico; ITP, trifosfato de inositol; ML, membrana luminal; MF, microfilamentos; MT, microtbulos; Gi, protena reguladora inibidora do nucleotdeo guanina; Gs, protena reguladora estimuladora do nucleotdeo guanina, PDIE, fosfodiesterase; PG, prostaglandinas; PIP2, fosfatidilinositol-4,5-bifosfato; PKA, proteinoquinase A (AMPc dependente), PKC, proteinoquinase C; PLA, fosfolipase A; PLC, fosfolipase C; Ri, receptores para agentes inibidores agindo sobre adenil ciclase; TJ, tight junction; VP, vasopressina; V1, receptor do tipo 1 para vasopressina; V2, receptor do tipo 2 para vasopressina. Modificado de Abramow e cols.: Cellular events in vasopressin action; Kidney Int. 1987; 32 (suppl. 21): pS-58

estrutura importante para uma srie de hormnios e autacides que inibem a ao do HAD, tais como: epinefrina, acetilcolina, endotelina, prostaglandina, toxina pertussi, sendo estes dois ltimos de grande importncia, porque, toxina pertussi produz uma inibio irreversvel e a prostaglandina E 2 participa de um mecanismo de regulao tipo feed-back negativo (ver adiante). 7 A enzima adenilciclase catalisa a transformao do ATP em 35 AMPcclico regulando o seu nvel intracelular. Sabe-se hoje que esta enzima compreende uma famlia de oito protenas, cada uma caracterizada por 12 stios inseridos na membrana basal. Das oito isoformas da adenilciclase, sete j foram detectadas no rim. 8 Algumas destas isoformas, alm de serem moduladas pela proteina G, so tambm reguladas por subunidades da protena Gs (y) e tambm pelo clcio livre ou pelo complexo Ca 2+ /calmodulina. A presena destas isoformas sensveis ao clcio neste segmento do nfron pode representar um local importante para haver um cruzamento de efeitos entre o AMPc ligado ao receptor V 2 e o Clcio ligado ao receptor V 1 . O nvel de AMPc nestas clulas, que o segundo mensageiro para o receptor V 2, regulado tambm

pela enzima fosfodiesterase, que hidroliza o 35 AMPc em 5AMP. Esta enzima tambm faz parte de uma famlia de enzimas, isozimas e suas isofor mas foram classificadas em cinco tipos de acordo com o local de ao, dependncia da calmodulina e sensibilidade a inibidores especficos como o rolipran e o cilostamide. 9 No se conhece ainda a sua exata distribuio intra celular, mas sabe-se que um aumento de sua atividade pode levar ao aparecimento de diabetes insipidus nefrognico no camundongo. 10 O AMPc gerado do ATP, pela ao da adenilciclase, e regulado pela fosfodiesterase o principal ativador da proteinoquinase A (PKA). A PKA um composto heterotetrmero que compreende duas subunidades catalticas (C) e duas subunidades reguladoras (R). Embora esteja bem definido que a PKA seja essencial para a induo do aumento de per meabilidade gua, uma relao direta entre a ativao da PKA e a insero de canais de gua na membrana apical foi s parcialmente demonstrada. 11 A ao da PKA seria a de fosforilar proteinas do citosol que estariam envolvidas com a insero de canais de gua na membrana apical. No intracelular, partculas agregadas contendo os canais de gua encontram-se agrupadas linear mente na membrana de organelas chamadas de agreforos. Estes agreforos esto localizados em vesculas que sob o estmulo do HAD migram para a membrana apical aonde se fundem por um processo de exocitose, formando agrupamentos (clusters) de canais de gua. 12 Elementos do citoesqueleto celular, tais como microtbulos e microfilamentos, tambm fazem parte deste processo de insero de canais de gua. Isto foi demonstrado pelo uso de inibidores especficos como a citocalasina B e a colchicina que impedem a ao do HAD. 13 O advento da tcnica da biologia molecular permitiu que os canais de gua fossem identificados, clonados, sequenciados e classificados nos vrios tecidos do organismo. 14 Estes canais so proteinas de baixo peso molecular e so chamados de MIP 26 (Membrana Integral Protein com PM - 26.000 Daltons). Os canais de gua que respondem ao HAD localizados nas clulas principais dos tbulos distais e ductos coletores tem o nome de WCH-CD (Water Channel Collecting Duct). Esta proteina est inserida na membrana contendo 4 unidades iguais que compem um tetrmero formando o canal de gua entre eles. 15 O conjunto dos diferentes tipos de canais de gua do organismo foram renomeados com o termo genrico

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de Aquaporin, seguido da sigla que o identifica quanto ao seu tipo (AQP-CD para o WCH-CD, etc). O estudo destes canais tem demonstrado que defeitos na sequncia dos aminocidos que compem as proteinas do canal, so responsveis pelo aparecimento do diabetes insipidus nefrognico. 16, 17 O outro tipo de receptor estimulado pelo HAD o do tipo V 1 . Este receptor tambm j foi clonado e sequenciado, possuindo cerca de 394 aminocidos,18 tambm constituido por unidades G estimuladoras (G) que vo promover a liberao a partir da membrana apical da fosfolipase C (PLC) especfica para fosfoinositois. Esta subunidade uma proteina heterotrimrica chamada Gq. 7 A PLC hidrolisa o fosfatidil inositol bifosfato (PIP2) a dois compostos de importncia capital: o diacilglicerol (DAG) e o inositol -1,4,5, trifosfato (ITP). O ITP liga-se a receptores especficos, localizados no retculo-endoplasmtico, que compreendem canais de clcio que aps a sua ligao com o ITP se abrem e liberam Ca ++ para o citosol. 19,7 Esta liberao de clcio para o citoplasma importante para uma srie de funes celulares: a) participao na estimulao do DAG sobre a proteinoquinase C (PKC); b) modulao do trocador Na + /Ca 2+ na membrana basolateral; c) participao na sntese de prostaglandina; d) participao no estmulo de outras proteinoquinases clcio dependentes; e) ligao com a Calmodulina formando o complexo Ca 2+ -Calmodulina, que importante para a for mao dos microtbulos e microfilamentos, 7 estruturas do citoesqueleto celular ligadas for mao dos canais de gua. A gerao de DAG, a partir de ITP, sob a ao da PLC um fato confirmado, porm acredita-se que outras fosfolipases tambm possan ser responsveis pela for mao contnua de DAG. 20 No ducto coletor medular interno (DCMI) o HAD tambm ativa uma fosfolipase D (PLD), que acredita-se seja a maior responsvel pela formao do DAG pela hidrlise da fosfatidil colina. 21 O PKC uma enzima ativada pelo DAG mais o CA2+. Existem pelo menos dez diferentes isoformas da PKC, 20 sendo que no rim trs isoformas, as , , , j foram identificadas. 22 O papel do PKC no transporte de gua induzido pelo HAD ainda controverso, mas sabe-se que ele capaz de inibir este transporte em pele de sapo e em ducto coletor cortical de coelhos. 22 Outro papel importante do HAD e tambm de outros compostos como a endotelina, bradicinina, e o fator de crescimento epidermal o de estimular a

sntese de prostaglandina. Estes hormnios estimulam a fosfolipase A2 (PLA2) do citosol 23 que agindo sobre fosfolpides de membrana liberam o cido aracdnico (aa) que atravs da cadeia da ciclooxigenase sintetizam prostaglandinas. No DCMI a prostaglandina sintetizada a A2 (PGE 2). A PGE 2 tem a capacidade de agir nos componentes Gs e Gi do receptor V 2 de HAD diminuindo a produo de adenilciclase e inibindo a ao do prprio HAD. Este efeito chamado de sistema regulador de feed-back negativo HAD-PGE 2. O sistema do receptor V 1 tambm capaz de estimular a produo de PGE 2 pela ativao da PLA2 24 atravs do seu componente Gq. A ativao do receptor V 1 pelo HAD, com a consequente formao de PKC e liberao de Ca 2+ para o citosol capaz de inibir o transporte de gua dependente do HAD 24 , evidenciando que este hormnio capaz de inibir, via V 1, o seu prprio efeito hidrosmtico via V 2. No entanto, este efeito s foi demonstrado com concentraes de HAD da ordem de nanomoles, isto em doses mais altas do que a necessria para estimular o receptor V 2 (da ordem de picomoles). A quantidade de HAD circulante em indivduos hidratados cerca de 1 pM. 25 Como sabemos, o HAD estimula o transporte de gua agindo na clula pelo seu lado basolateral, mas recentemente foi demonstrado que este hormnio tambm age no lado luminal da clula atravs de um receptor tipo V 1, 26 diminuindo a ao hidrosmtica do receptor V 2 basolateral. conhecido que a quantidade de HAD intacto na urina maior do que sua concentrao plasmtica. No entanto, o verdadeiro significado desta ao luminal do HAD no est ainda bem estabelecido, mas acredita-se que possa estar envolvida em um mecanismo de preveno da excressiva antidiurese que ocorre na sndrome de secreo inapropriada do HAD ou no stress fsico. 7 Atualmente sabemos que outros hormnios, que no tm o rim como rgo alvo, so tambm capazes de participar do mecanismo de conservao da gua. Assim, foi demonstrado que o fator atrial natriurtico (FAN) tem a capacidade de inibir parcialmente a ao do HAD em animais em expanso, tendo a sua ao mediada pelo sistema GMPc. 27 O Fator de crescimento epidermal (FCE) tambm tem a capacidade de inibir a ao do HAD atravs do estmulo de uma tirosinoquinase. 28 Os esterides adrenais como a adrenalina e a noradrenalina tambm so capazes de modular a reabsoro de gua. 29 Recentemente, foi demonstrado que a insulina estimula o transporte de

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gua 30 bem como o glucagon 31 sendo estes efeitos coadjuvantes do HAD. A angiotensina 1-7, que um derivado da angiotensina I sem a ao da enzima conversora, tambm tem um efeito de aumentar a reabsoro de gua produzindo uma antidiurese. 32 Como foi descrito acima, pudemos ver que o controle da reabsoro e excreo da gua pelo rim feito principalmente pelo HAD mas pode ser ajudado ou atrapalhado por uma srie grande de outros hormnios, mostrando que na realidade este controle multi-hormonal.

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