1- Introduo a Microbiologia.

Microbiologia: Mikros (= pequeno) + Bio (= vida) + logos (= cincia) A Microbiologia classicamente definida como a rea da cincia que dedica-se ao estudo de organismos que somente podem ser visualizados ao microscpio. Com base neste conceito, a microbiologia aborda um vasto e diverso grupo de organismos unicelulares de dimenses reduzidas, que podem ser encontrados como clulas isoladas ou agrup ados em diferentes arranjos. Assim, a microbiologia envolve o estudo de organismos procariticos (bactrias, archaeas), eucariticos (algas, protozorios, fungos) e tambm seres acelulares (vrus). (http://vsites.unb.br/ib/cel/microbio logia/intromicro) Esta rea do conhecimento teve seu incio com os relatos de Robert Hooke e Antony van Leeuwenhoek, que desenvolveram microscpios que possibilitaram as primeiras observaes de bactrias e outros microrganismos a partir da anlise de diversos espcimes bio lgicos. Embora van Leeuwenhoek seja considerado o "pai" da microbiologia, os relatos de Hooke, descrevendo a estrutura de um bolor, foram publicados anteriormente aos de Leeuwenhoek. Assim, embora Leeuwnhoek tenha fornecido importantes informaes sobre a morfologia bacteriana, estes dois pesquisadores devem ser considerados como pioneiros nesta cincia. (http://vsites.unb.br/ib/cel/microbio logia/intromicro) Muitos pensam que os microorganismos so, como um todo, prejudiciais aos seres humanos, sendo associados comumente a doenas como AIDS, infeces e inconvenincias mais comuns, como comida estragada. Porm, os microorganismos patognicos representam apenas uma nfima parte, sendo que existem diversas aplicaes prticas, artificiais ou naturais, teis a o homem, como os micrbios, que no solo, auxiliam na decomposio de matria orgnica, na indstria sintetizam acetona, cidos orgnicos, vinagre, queijos, iogurtes e outras dezenas de produtos alimentcios. (TORTORA, FUNKE & CASE p. 1-6) importante, antes que se inicie o cultivo de qualquer microrganismo, que seja feita a esterilizao do ambiente em que ocorrer o cultivo, e inclusive saber como controlar sua propagao indesejada. Um mtodo eficiente de esterilizao a fervura de gua (calor mido) alta presso, mais conhecida como autoclave , em que a gua atinge temperaturas superiores a 100 C, eliminando possveis microorganismos indesejados. (TORTORA, FUNKE & CASE p. 186,187). No caso de necessidade de controle de microrganism os patognicos, como o caso de algumas bactrias, so usados antibiticos, como penicilina e ampicilina. A penicilina altamente eficiente, apresentando nvel de toxidade extremamente baixo.

Seu composto bsico um cido orgnico com um anel_ -lactnico, obtido nacultura do bolor Pennicillium Chrysogenum, que interferem na sntese da parede celular bacteriana. A ampicilina uma penicilina de amplo espectro, que tem atividades contra Cocos Gram-positivos bactrias que possuem uma camada espessa de peptidoglicano que contm os cidos teicico e lipoteicico equivalentes das penicilinas naturais; ativa tambm contra alguns bastonetes (MURRAY; ROSETHAL & PFALLER p. 197-199).

2-Objetivos
Verificar a presena de microrganismos em diversos objetos/ambientes em meios de cultura com ou sem antibitico. Temos por objetivos tambm aprender manobras asspticas evitando contaminaes nos meios cultivados.

3-Parte Experimental 3-1. Materiais

Na prtica experimental utilizamos os seguintes materiais/equipamentos: Autoclave,garrafa de vidro com tampa, gua destilada, bquer de 50 mL, ampilicina; tubo falcon, caneta de retroprojetor, cotonetes, filme de PVC , placas de Petri, papel alumnio, basto de vidro, balana analtica, proveta de 50 mL, preparo para meio de cultura LB + Agar, glicose.

3-2. Metodologia
Inicialmente foi preparada uma soluo de 40 ml, contendo como solutos LB, agar e glicose e como solvente gua. Para isso calculamos a quantidade desses solutos para uma soluo de 40 ml atravs da tabela a seguir:

Os valores obtidos foram 1,6 g de LB+agar e 0,8 g de glicose. Aps o clculo, recolhemos a quantidade necessria de L B + agar em um bquer e a de glicose em um outro bquer, atravs da balana semi analtica Marte UX4200H. Com o material devidamente pesado passamos para a preparao da soluo. Dilumos primeiramente a glicose em 20 ml de gua e passamos essa primeira soluo para o bquer contendo LB + agar com o auxlio de uma bagueta. Agitamos a segunda soluo formada at que dissolvesse totalmente, tambm com o auxlio da bagueta. Aps o dissoluo essa foi passada para a uma garrafa de vidro com tampa autoclavvel. O restante da gua (20 ml) foi passado para o bquer (para que no ficassem resduos dos reagentes) e do bquer para uma garrafa de vidro, formando-se assim a soluo de 40 ml. Identificamos a garrafa com o nome do grupo para que ela fosse levada a autoclave Prismatec modelo CS-75 por 15 minutos. Antes de ser levada para a autoclave tomamos o cuidado de no fechar completamente a tampa da mesma, pois a presso de vapor dentro da garrafa poderia precionar a tampa e acabar estourando o vidro. Alm disso, e nvolvemos a parte de cima da garrafa no papel alumnio para que o vapor externo no entrasse no recipiente e acabasse diluindo o material a ser analisado. Enquanto espervamos pela autoclavao identificamos as duas placas de Petri e dividimos cada uma delas em quatro partes. Uma delas, contendo Teste 1 e Teste 2 (T1 e T2) e Controle 1 e Controle 2 (C1 e C2), em que no seria colocado o antibitico, foi identificada como SA ( sem antibitico). A outra foi identificada como CA ( com antibitico) e nas divis es escrevemos Teste 3 e Teste 4 (T3 e T4) e Controle 3 e Controle 4 (C3 e C4). Decorridos 15 minutos a garrafa foi retirada da autoclave e esperamos at o meio esfriar para que consegussemos transferir o contedo dela para as placas de Petri j identificadas. Toda a manipulao das placas foi feita perto do Bico de Bnsen, na zona de segurana do mesmo para que no houvesse contaminao do meio. Metade do contedo da garrafa foi derramado na placa de Petri onde no seria colocado o antibitico. Em seguida a placa foi deixada semi-aberta. O restante do contedo foi colocado em um Tubo Falcon, onde tambm foi adicionado o antibitico ampicilina. Em seguida esse contedo foi passado do tubo Falcon para a segunda placa de Petri, que tambm foi deixada semi aberta. Enquanto espervamos que o contedo despejado nas placas de Petri se solidificasse, pegamos 2 cotonetes e esfregamos um deles na sola de um sapato e o outro na maaneta da porta.

Tomando o cuidado de manipularmos as placas sempre perto da chama do Bico de Bnsen, realizamos o seguinte procedimento: No quadrante Controle 1 (C1) e quadrante Controle 3 (C3) no passamos nada; y No quadrante Controle 2 (C2) e quadrante Controle 3 (C3) foi adicionada a bactria Escherichia coli; y No quadrante Teste 1 e quadrant e Teste 3 foi usado o cotonete passado na sola do sapato; y No quadrante Teste 2 e quadrante Teste 4 foi usado o cotonete passado na maaneta. Aps o preparado das placas, essas foram fechadas, vedadas e colocadas na estufa a 37C para que aps algum tempo fossem observados os resultados da experincia.
y 4 Resultados e Discusso.

Aps alguns dias fechado e fora da possibilidade de qualquer contaminao, as placas foram abertas e agora poderemos ver o resultado da experincia com os microorganismos coletados e cultivados. A figura 1 mostra o meio de cultura sem antibitico (ampicilina) e se nota a proliferao da bactria que aparece enraizada no ambiente dentro da placa.

Figura 1 O meio de cultura sem antibitico aps alguns dias isolada A parte onde percebe -se maior proliferao de microorganismos (as manchas brancas) onde foi coletada a amostra da maameta da porta do laboratrio ( T-2), enquanto pode-se ver tambm que h uma gotcula amarela e algumas manchas na parte dos campos C-1 (bactria Escherichia Coli) e C-2 (sola de sapato), respectivamente. Nas placas onde continham a ampicilina (antibitico), no foram detectadas qualquer tipo de proliferao de microorganismos, como ilustra a figura 2.

Figura 2 As placas com a ao do antibtico ampicilina Isso mostra claramente que o antibitico neutralizou totalmente a ao das bactrias e no permitiu que se formassem as colnias bacterianas.

5- Concluso

Atravs dessa experincia com base na Microbiologia observamos os resultados da interao entre as bactrias e o antibitico, no caso a ampicilina. Fazendo uso de materiais esterilizados e limpos, preparamos meios de cultura bacteriana com e sem a presena da ampicilina. Aps alguns dias pudemos notar que no meio de cultura onde o antibitico no foi inoculado houve a proliferao dos microorganismos, que apareceram na placa de Petri de maneira desigual em cada um dos quadrantes (no quadrante T2 ocorreu a maior proliferao). J na placa onde o antibitico estava presente no houve crescimento bacteriano. Os resultados dessa experincia permitem concluir que os antibiticos so eficientes no combate s bactrias. Alm disso, notamos atravs do resultado da placa onde foi coletada a amostra da maaneta, que os microorganismos esto presentes em toda a parte e em grande nmero. Para garantirmos nossa sade so necessrios mtodos anticpticos e de higiene pessoal, prevenindo assim doenas causadas por bactrias como a tuberculose e o ttano.

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Site : (http://vsites.unb.br/ib/cel/microbio logia/intromicro) Livro: MURRAY, Patrick R.; ROSENTHAL, Ken S.; PFALLER, Michael A. Microbiologia Mdica. 5. ed. Rio de Janeiro, Elsevier, 2006. p. 197-200. Livro: TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L. Microbiologia. 8. ed. Porto Alegre, Artmed, 2006. p. 1-6; 163,186,187

7-Anexos Questes de verificao

1. Qual seria(m) seu(s) controle(s) positivo(s) e negativo(s)? Por qu? Resposta: Os controles positivos so os quadrantes Controle 1 e 3, pois foram as placas de Petri onde no houveram inoculaes de microorganismos. Os controles negativos so os quadrantes Controle 2 e Controle 3 onde foram inoculados a bactria Escherichia coli e os quadrantes Teste 1, 2, 3 e 4. 2- Explique a primeira dicotomia da chave de identificao do Anexo. Ou seja, por que quando um microorganismo no cresce na presena de antibitico, este microorganismo provavelmente uma bactria? Resposta: Provavelmente esse microorganismo uma bactria, pois o antibitico age inibindo processos vitais para uma bactria como a sntese da parede celular, a sntese protica e a replicao bacteriana. Portanto sobre os efeitos do antibitico o crescimento desse tipo de microorganismo cessa.

3- Diga pelo menos trs formas diferentes de identificar os microorganismos. Explique em linhas gerais como voc conseguiria identific-los. Resposta: possvel identificar diferentes microorganismos atravs da morfologia ( bactrias so formadas por clulas procariticas e fungos por clulas eucariticas), das conseqncias do uso de antibiticos (os antibiticos agem exclusivamente sobre as bactrias) e pela composio do material gentico ( cada espcie possui um material gentic o nico).

4-Mostre as diferenas entre um material limpo e um material estril. Resposta: Um material estril aquele livre de qualquer tipo de vida microbiana. O processo de esterilizao pode ser realizado atravs de processos fsicos ou qumicos, como por exemplo, a filtrao e a utilizao de iodo respectivamente. J um material limpo aquele livre de objetos estranhos ao mesmo. O processo de limpeza feito normalmente com gua e algum tipo de detergente.

Sumrio
1. INTRODUO........................................................................................ 2 2. OBJETIVOS ........................................................................................... 3 3. PARTE EXPERIMENTAL.......................................................................3 3.1. Materiais ................................................................ ..............................3 3.2. Metodologia ........................................................... ..............................3 4. RESULTADOS E DISCUSSO...............................................................5 5. CONCLUSO .......................................................... ...............................6 6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS........................................................7 7. ANEXOS .................................................................. ...............................7