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UFSM

Tese de Doutorado

AVALIAO CLNICA DE Rattus norvegicus APS TERAPIA ANTIINFLAMATRIA COM INIBIDOR SELETIVO OU NO PARA COX-2 POR EXTRAPOLAO ALOMTRICA

Aline Alves da Silva

PPGMV

Santa Maria, RS, Brasil

2004

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Universidade Federal de Santa Maria Centro de Cincias Rurais Programa de Ps-Graduao em Medicina Veterinria A Comisso Examinadora, abaixo assinada, aprova a Tese de Doutorado

AVALIAO CLNICA DE Rattus norvegicus APS TERAPIA ANTIINFLAMATRIA COM INIBIDOR SELETIVO OU NO PARA COX-2 POR EXTRAPOLAO ALOMTRICA elaborada por Aline Alves da Silva Como requisito parcial para a obteno do grau de Doutor em Medicina Veterinria COMISSO EXAMINADORA:
____________________________________ Joo Eduardo Wallau Schossler (Presidente/Orientador) ____________________________________ Flvio Dessards de La Corte ____________________________________ Aron Ferreira da Silveira ____________________________________ Claudete Schmidt ____________________________________ Deila Rosly Schossler

Santa Maria, 02 de agosto de 2004

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Dedico este trabalho ao meu amor, Mauro Silva.

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AGRADECIMENTOS

Ao meu Orientador, Prof. Dr. Joo Eduardo Wallau Schossler, pelos ensinamentos, ateno e ajuda. Por se dispor a orientar-me, sempre acreditando em meu potencial. A ele meu agradecimento eterno e sincero. Ao meu esposo Mauro Silva, pela incansvel pacincia, por entender meus momentos de ausncia, sempre estando ao meu lado. Por encorajar-me a vencer os momentos difceis que passei durante a realizao do Doutorado. Muitas vezes ele foi a principal razo para que eu no esmorecesse. A minha me Noeci Alves, um exemplo de mulher. Por ter me encaminhado, e tambm pela valiosa ajuda na correo desse trabalho. Ao meu irmo Adil Alves, por viabilizar as medicaes a serem utilizadas, bem como pela fora e incentivo, a mim, destinados. Ao Coordenador do Curso de Medicina Veterinria da Universidade de Cruz Alta (UNICRUZ), professor Slvio Teixeira da Costa e ao Diretor do Hospital Veterinrio, da mesma, Antnio Valente pela confiana, estmulo e ajuda. Por atenderem e compreenderem, sempre, as minhas solicitaes. Aos queridos colegas da UNICRUZ: Cristiane Beck, Cristina Krauspenhar, Miryne Franco, Rodrigo Bastos e Vitor Sperotto, por torcerem sinceramente pela minha vitria. Aos bolsistas Clber Todero, Emerson Canali e Vivian Luft por contriburem de forma efetiva e responsvel na realizao do experimento. Aos funcionrios do Biotrio da UNICRUZ pela ajuda na manipulao dos animais. A Prof. Dr. Snia dos Anjos Lopes por me encaminhar, no momento que mais

precisei, Cirurgia Experimental. Ao PPGMV e, em especial, ao Sr Vanderlan de Almeida. Aos livros que muitas vezes so a nossa melhor companhia, e que nos permitem desenvolver a pesquisa. Ao meu pai, Adil Fernandes Alves (in memoriam), por tornar minha caminhada to iluminada. Aos animais, minha grande paixo, sem eles nada disto teria propsito, e pensando neles que cheguei at aqui. A Deus, porque sem ELE, nada possvel.

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SUMRIO
RESUMO............................................................................................................................. ix ABSTRACT......................................................................................................................... x LISTA DE TABELAS......................................................................................................... xi LISTA DE QUADROS........................................................................................................ xiii LISTA DE FIGURAS.......................................................................................................... xiv 1 INTRODUO................................................................................................................ 01 2 REVISO DE LITERATURA......................................................................................... 05 2.1 Fisiologia da dor............................................................................................................. 05 2.2 Conseqncia da dor em pequenos animais................................................................... 06 2.3 Dinmica do processo inflamatrio............................................................................... 08 2.4 Utilizao de antiinflamatrios no-esteroidais (AINEs).............................................. 11 2.5 Bioqumica dos AINEs.................................................................................................. 14 2.6 Farmacodinmica dos AINEs........................................................................................ 14 2.6.1 Ao analgsica........................................................................................................ 17 2.6.2 Ao antiinflamatria............................................................................................... 18 2.6.3 Ao antipirtica e inibio da agregao plaquetria............................................. 18 2.7 Exemplo de AINEs inibidor no seletivo para COX-1/COX-2 e seletivo para COX-2 18 2.7.1 Cetoprofeno.............................................................................................................. 20 2.7.2 Parecoxib/Valdecoxib.............................................................................................. 21 2.8 Efeitos sobre os aspectos fisiolgicos produzidos pela inibio seletiva da COX-2..... 24 2.9 Efeitos indesejveis dos AINEs..................................................................................... 25 2.10 Avaliao da funo heptica....................................................................................... 28 2.11 Testes de funo heptica............................................................................................ 30

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2.11.1 As aminotransferases............................................................................................. 31 2.11.2 Fosfatase alcalina (FA).......................................................................................... 32 2.12 Escala alomtrica para clculo de protocolos posolgicos em espcies exticas................................................................................................................................. 33 2.12.1 Taxa metablica basal............................................................................................ 36 2.12.2 Extrapolao alomtrica......................................................................................... 36 2.12.3 Consideraes fisiolgicas sobre a biodisponibilidade das drogas........................ 37 3 MATERIAL E METODOLOGIA.................................................................................... 38 3.1 Processamento do material para confeco das lminas do fgado e rim...................... 45 3.2 Testes de enzimas hepticas........................................................................................... 46 4 RESULTADOS................................................................................................................. 46 4.1 Avaliao bioqumica do fgado.................................................................................... 46 4.2 Avaliao macroscpica................................................................................................ 52 4.3 Avaliao microscpica................................................................................................. 57 5 DISCUSSO.................................................................................................................... 62 6 CONCLUSES................................................................................................................ 74 7 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.............................................................................. 75

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RESUMO
Tese de Doutorado Programa de Ps-Graduao em Medicina Veterinria Universidade Federal de Santa Maria, RS, Brasil

AVALIAO CLNICA DE Rattus norvegicus APS TERAPIA ANTIINFLAMATRIA COM INIBIDOR SELETIVO OU NO PARA COX-2 POR EXTRAPOLAO ALOMTRICA
AUTOR: ALINE ALVES DA SILVA

ORIENTADOR: JOO EDUARDO WALLAU SCHOSSLER Data e Local da defesa: Santa Maria, Agosto de 2004.

Os antiinflamatrios no esteroidais (AINEs) so as drogas de maior prescrio em todo o mundo, tanto para humanos como para animais. Combatem a inflamao, a dor, a hipertermia, podendo tambm inibir a agregao plaquetria. Atuam inibindo a produo do cido araquidnico e ciclooxigenases (COXs) diminuindo assim, a produo de prostaglandinas. Dividem-se em inibidores no seletivos para COX-1 e 2, sendo esses os mais tradicionais; e em inibidores seletivos para COX-2, considerados drogas mais modernas. AINEs no seletivos diminuem a produo de todas as PGs, constitutivas ou no. J os seletivos inibem apenas as PGs deletrias, que atuam na reao inflamatria, preservando PGs que mantm, por exemplo, a proteo ao estmago e a perfuso renal. Nesse estudo avaliou-se a funo heptica de Rattus norvegicus aps a utilizao do AINE no seletivo, cetoprofeno e do AINE seletivo, valdecoxib. As doses administradas aos animais foram calculadas segundo a escala alomtrica. A alometria um mtodo que permite extrapolar indicaes posolgicas de espcies mais comuns e conhecidas para espcies onde no foram realizados estudos farmacocinticos da droga em questo, levando em conta, entre outros, o tamanho

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corporal, o metabolismo e a taxa basal. Aps a utilizao dos AINEs, os animais foram avaliados por mtodos bioqumicos de alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) e fosfatase alcalina (FA), e tambm, por avaliao macroscpica e microscpica do fgado e rim direito, em diferentes tempos, aps as ultimas administraes das drogas, conforme o grupo a qual o animal pertencia. Entre outras observaes pode-se relatar, que o cetoprofeno, pode causar a morte de ratos, segundo a alometria j no segundo dia de administrao da droga; e que o AINE valdecoxib, no produz alteraes macroscpicas e microscpicas dignas de nota, em rgos como o fgado e rim de Rattus norvegicus.

Palavras chave: cicloxigenase, fgado, clnica veterinria, inibidor seletivo, alometria.

ABSTRACT
Theory of Doctorate Program of Masters degree in Veterinary Medicine Federal University of Santa Maria, RS, Brazil

CLINICAL EVALUATION OF Rattus norvegicus AFTER ANTIINFLAMMATORY THERAPY WITH SELECTIVE INHIBITOR OR NOT FOR COX-2 FOR ALLOMETRIC SCALING
AUTHOR: ALINE ALVES DA SILVA ADVISER: JOO EDUARDO WALLAU SCHOSSLER

Dates and place of the defense: Santa Maria, August of 2004.

The anti-inflammatories no esteroidais (AINEs) they are the drugs of larger prescription all over the world, for humans and for animals. They combat the inflammation, the pain, the temperature increase, could also inhibit the aggregation plaques. They act inhibiting the production of the acid araquidnico and ciclooxigenases (COXs) decreasing like this, the prostaglandins production. They become separated in inhibitors no selective for COX-1 and 2, being those the most traditional; and in selective inhibitors for COX-2, considered more modern drugs. AINEs no selective they reduce the production of all of PGs, constituent or not. Already the selective ones just inhibit harmful PGs, that you/they act in the inflammatory reaction, preserving PGs that maintains, for instance, the protection to the stomach and the renal perfuso. In that study the hepatic function of Rattus norvegicus was evaluated after the use of AINE no selective, cetoprofeno and of selective AINE, valdecoxib. The doses administered to the animals were calculated according to the scaling allometric. The allometric is a method that allows to extrapolate

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dosage indications of more common species and known for species where studies farmacokinects of the drug was not accomplished in subject, taking into account, among other, the corporal size, the metabolism and the basal tax. After the use of AINEs, the animals were appraised for biochemical methods of alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) and alkaline fosfatase (FA), and also, for macroscopic and microscopic evaluation of the liver and right kidney, in different times, after you finish them administrations of the drugs, according to the group which the animal belonged. Among other observations it can be told, that the cetoprofeno, can cause the death of mice, according to the allometric already in the second day of administration of the drug; and that the AINE valdecoxib, doesn't produce macroscopic and microscopic alterations worthy of note, in organs as the liver and kidney of Rattus norvegicus.

Key words: ciclooxigenase, liver, veterinary clinic, selective inhibitor, alometric.

1 INTRODUO

O contato com animais pode melhorar a qualidade de vida dos seres humanos. O bem-estar pode ser, consideravelmente melhorado, quando as pessoas possuem animais, pois estes influenciam no bem-estar psicolgico, comportamental, fsico e social (Redrobe, 2002). Mas, qual o bem estar do animal? Segundo a literatura, cientistas garantem que o bem estar de um animal est seriamente afetado quando ele encontra-se ferido (Endenburg, 2002). A dor uma sensao desagradvel, quando no tratada, pode acarretar sofrimento e danos fsicos, interferindo na fisiologia do animal (Redrobe, 2002). Pode ser extremamente difcil avaliar dor em animais, principalmente, em algumas espcies animais como as exticas (Paddleford, 2001; Redrobe, 2002). Dessa forma, a analgesia freqentemente no considerada no tratamento desses animais pela falta de familiaridade com os sinais clnicos, pela ausncia de esquemas analgsicos eficazes publicados ou devido ao conceito errneo de que a analgesia pode prejudicar o paciente (Redrobe, 2002). A dor crnica pode ocorrer em animais exticos, e ao mesmo tempo em que se deve resolver a patologia base, deve-se considerar a analgesia empregada para o manejo da dor a fim de melhorar a qualidade de vida do animal (Flecknell, 1996). Se no for possvel fornecer analgesia adequada, deve-se aplicar a eutansia por razes humanitrias, interrompendo o sofrimento em decorrncia dos processos dolorosos ou incurveis (Redrobe, 1997). A dor compreendida com a mesma extenso em coelhos, roedores e homens. A manuteno ou administrao de analgesia ps-operatria essencial em muitos casos (Harkness & Wagner, 1993). Para o alvio da dor e diminuio do processo inflamatrio, segundo DuBois

et al. (1998), Carrol (1999), Duncan (2002), Papich (2003) e Oliveira (2004), podem ser indicados os antiinflamatrios no-esteroidais (AINEs). Os AINEs so medicamentos efetivos, baratos, podendo ser prescritos por vrios dias (Papich, 2003) em diferentes espcies (Bogan, 1983; Clark, 1999; Boothe, 2003). Essa classe de drogas tem sido tradicionalmente utilizada no tratamento da dor crnica, principalmente a dor de origem ortopdica (Alves et al., 2001; Oliva, 2004; Olivera, 2004), inibindo a formao de prostaglandinas (Prescott, 1986; Boothe, 1989; Wallace, 1996; Guyton & Hall, 1997; Fantoni & Mastrocinque, 2002; Tasaka, 2002; Oliva, 2004). O acesso do cido araquidnico ao local lesado, onde se liga com a enzima ciclooxigenase, origina o desencadeamento de todos os processos dolorosos e inflamatrios (Boothe, 1989; Fantoni & Mastrocinque, 2002). Atravs de estudos, recentemente descobriu-se que a ciclooxigenase tem duas formas distintas: a cicloxigenase-1 (COX-1) e a cicloxigenase-2 (COX-2) (Mathews, 1996; Ct, 1998; Salido et al., 2001; Tasaka, 2002; Olivera, 2004). Segundo Pollock (2002), a administrao ps-operatria de analgsicos em espcies exticas deve ser cuidadosa e torna-se crucial para o sucesso de qualquer recuperao, principalmente de pacientes ortopdicos. Devem ser satisfeitas as necessidades especiais desses animais, como ambiente calmo e manuteno de parmetros como temperatura corporal. Redrobe, no ano de 1997, publicou um estudo referindo-se utilizao de drogas no-esteroidais. Nesse estudo, h informaes de que os AINEs so utilizados em animais com peso at 400 gramas com bastante freqncia, porm, no se pode afirmar que possam ser utilizados com total segurana; uma terapia que requer estudos sobre seus benefcios ou malefcios em espcies no domsticas. Infelizmente, as informaes sobre o uso de AINEs tanto em ces e gatos como em espcies exticas e pequenos roedores so escassas, no h descrio

sobre a farmacocintica e farmacodinmica dessas drogas e a escolha da dosagem geralmente emprica (Baert & Backer, 2003). Wallace & Soldato (2003) publicaram um estudo, alertando para o potencial teraputico dos AINEs e seus efeitos colaterais significantes, como os danos produzidos no sistema gastrintestinal e cardiorenal que podem limitar de forma significativa seu uso; e que mesmo AINEs modernos como os chamados inibidores de COX-2 podem possuir atividades de toxicidade. Em ces, por exemplo, sabe-se que os AINEs podem resultar em lceras no estmago e intestino delgado, degenerao tubular renal e necrose de hepatcitos (Shimpo et al., 1990), sendo que as alteraes patolgicas hepticas, produzidas pelos antiinflamatrios, so bastante variveis e no especficas (Prescott, 1986; Shimpo et al., 1990). Os distrbios gastrointestinais como anorexia, vmito e diarria, so os mais comuns dentre os relatados e a maioria dos animais melhora com a suspenso da droga (Fox & Campbell, 2000); porm, os AINEs podem produzir, conforme McPhail & Lappin (1998), disfuno heptica caracterizada por necrose celular e colestase, sendo que os veterinrios devem estar sempre atentos para o potencial de efeitos colaterais, observando e relatando qualquer sinal clnico de intolerncia droga. Em humanos, os AINEs ou analgsicos no narcticos, podem produzir uma variedade de leses hepticas; porm, clinicamente, no h indcio de dano significante com o uso teraputico normal (Traversa et al., 2003). O padro de hepatotoxicidade causado pelos salicilatos, paracetamol e AINEs em geral, difere e tambm podem causar leso renal (KHURSHEED, 1999). Dependendo da droga em questo, os riscos de danos podem ser condicionados idade, sexo, dose e durao do tratamento, sendo que um padro consistente e caracterstico de hepatotoxicidade pode ser evidente (Prescott, 1986, Traversa et al., 2003). Sendo o fator de risco principal, em humanos, para a hepatotoxicidade, a idade (Garcia-Rodriguz et al., 1994; Traversa et al., 2003).

A utilizao da escala alomtrica, embora pouco aplicada, tende a contribuir para a utilizao de drogas de forma mais segura e fidedigna, pois leva em conta as caractersticas fisiolgicas de cada espcie juntamente com seu peso e rea de superfcie corprea; esses fatores, quando observados em conjunto, podem interferir, significativamente, no clculo de doses de medicamentos. O uso preciso de drogas, evita a utilizao de sub-doses que no produzem efeitos benficos e reais ao paciente, bem como a utilizao de sobre-doses que podem intoxicar, produzir leses agudas e/ou crnicas, ou em casos mais severos levar o paciente a bito (PACHALY & BRITO, 2000). Pequenos roedores como as cobaias, hamster, ratos e gerbilos so bons animais de estimao desde que, cuidadosamente, manuseados e tratados. Podem ser condicionados rapidamente, possuindo uma variedade de vocalizaes que correspondem a diferentes comportamentos sociais. Esses animais, quando sofrem traumas, muitas vezes ficam sem o aporte de analgsicos, ou em outras situaes, surgem dvidas em relao dose e os efeitos colaterais desses medicamentos (FLECKNELL, 1996). Harkness & Wagner (1993) descreveram que a variedade domstica do rato castanho , geralmente, representada nos biotrios por animais albinos ou malhados que tiveram sua origem no Velho Mundo. Desde muito tempo esse animal ocupa um importante lugar na pesquisa biomdica e comportamental. Aproximadamente, quatro milhes de ratos, so utilizados anualmente na pesquisa e em testes nos Estados Unidos da Amrica (EUA). Este estudo tem como objetivo a avaliao clnica de Rattus norvegicus, aps a administrao de dois tipos distintos de antiinflamatrios no-esteroidais: um inibidor de COX-1 e 2 e outro seletivo para COX-2, segundo a indicao da extrapolao alomtrica.

2 REVISO DE LITERATURA

2.1 Fisiologia da dor:

A dor foi conceituada em 1986, pela Associao Internacional para o Estudo da Dor, como uma experincia sensorial e emocional desagradvel, que est associada a leses reais ou potenciais (Teixeira, 1994; Hellebrekers, 2002). Nas antigas sociedades, a dor sem outra causa aparente, como o traumatismo, era atribuda invaso do corpo por maus espritos e como punio dos deuses. Na ndia, a dor foi reconhecida como uma sensao e j era relacionada a aspectos emocionais. Na Grcia, nos sculos V e VI a.C., foi relacionada ao crebro e nervos e no ao corao. Somente aps o Renascimento foi, definitivamente, atribudo ao Sistema Nervoso Central (SNC) o papel fundamental no mecanismo da dor e da nocicepo (Teixeira & Pimenta, 1994). Nos sculos XVI e XVII introduziram-se conceitos sobre a especificidade das vias nervosas envolvidas na percepo da dor que, finalmente, firmaram-se completamente no sculo XIX (Teixeira, 1994). Thurmon et al. (1996) e Clark (1999) declararam, que ao entender-se os mecanismos fisiolgicos da dor, podem-se compreender como os analgsicos podem atuar: inibindo os impulsos aferentes no crebro ou medula espinhal (como os opiides); interrompendo diretamente a conduo do impulso (anestsicos locais); ou prevenindo a sensibilizao do nociceptor que acompanha o processo inflamatrio (antiinflamatrios no-esteroidais). Atualmente, sabe-se que a dor originada da transformao dos estmulos ambientais (trauma) em potenciais de ao que, das fibras nervosas perifricas,

so transferidos para o SNC (Figura 1).

FIGURA 1 - Sensibilizao dor segundo Gottschalk & Smith (2001).

Os receptores nociceptivos so representados por terminaes nervosas livres presentes em fibras mielnicas A- e amielnicas C (Carrol, 1999), presentes na pele, peritnio, pleura, peristeo, osso subcondral, msculos, tendes, vasos sangneos e tambm vsceras (Carrol, 1999; Paddleford, 2001). A atividade dos receptores de dor modulada por vrias substncias qumicas, denominadas algognicas, liberadas em decorrncia de processos inflamatrios, traumticos e/ou isqumicos. Tais substncias so originadas de clulas lesadas, leuccitos, mastcitos, plaquetas e de molculas livres nos vasos sangneos. Como substncias algognicas citam-se a acetilcolina, histamina, as prostaglandinas, serotonina, bradicinina, leucotrieno, substncia P, tromboxano, fator de ativao plaquetria e ons potssio (Teixeira, 1994).

2.2 Conseqncia da dor em pequenos animais:

Os processos dolorosos acarretam uma srie de alteraes fisiolgicas que podem ser gravemente deletrias. A diminuio na ingesto de gua e comida resulta em perda de peso, catabolismo protico e at desidratao (Morton, 1985; Haskins, 1997; Redrobe, 1997), resultando em alteraes metablicas, hormonais e desconforto para o animal (Popilskis et al., 1993), motivos pelos quais tem havido crescente preocupao com o bem estar animal. Nas ltimas dcadas, tem-se reconhecido a importncia ao tratamento da dor, atravs de avanos considerveis, referentes fisiopatologia da dor aguda, introduo de novos frmacos e desenvolvimento de tcnicas mais atuais para a administrao de medicamentos, com os quais obtm-se uma melhora bastante objetiva no tratamento da dor (Carr & Goudas, 1999). A dor causa vrias interferncias nos eixos neuroendcrinos com aumento nos nveis de aldosterona, causando reteno de sdio e desequilbrio hidroeletroltico (Hamill, 1994); aumento nos nveis de cortisol, levando a hiperglicemia e aumento tambm nas catecolaminas que so responsveis por alteraes cardacas como arritmias e aumento no consumo de oxignio pelo miocrdio (Fox et al., 1994). Entre as alteraes respiratrias em animais com dor, podem-se citar variaes no tnus vascular pulmonar, aumento nas concentraes de dixido de carbono no ar expirado, atelectasias e, por conseqncia, hipoventilao e hipxia (Gaynor, 1999). Em coelhos e pequenos roedores o manejo da dor ps-operatria vital, pois esses animais, com dor, ficam anorxicos e desenvolvem leo paraltico, o que exige uma terapia especfica, isto , estimuladores da motilidade do trato gastrintestinal assim como analgesia, ou a condio pode ser fatal. Essa seqela uma causa comum de morte ps-operatria em filhotes de coelho que no receberam analgesia (Hellebrekers, 2002). Os critrios de perda de peso e alteraes no consumo de alimento e gua so indicadores sensveis de dor ps-operatria em roedores. Uma avaliao

simples do comportamento, pode no ser to til na avaliao da dor (Hellebrekers, 2002; Redrobe, 2002). A utilizao de analgsicos como, por exemplo, a morfina produz depresso no sistema nervoso central (SNC), cardiovascular, respiratrio e termorregulador, podendo seus efeitos colaterais variar em muito conforme a espcie do roedor (Harkness & Wagner, 1993). Uma nica dose intra-operatria de um AINE, pode conferir analgesia suficiente depois de cirurgias de grande porte, sendo que o perodo crtico para o uso desses analgsicos so as primeiras 6-12 horas ps-cirurgia, no caso de ratos e camundongos (Redrobe, 2002). A dor como experincia sensorial e emocional desagradvel subjetivada, sendo que por anos houve resistncia em reconhec-la, a literatura humana relutava em admitir que a dor ps-operatria era sub-tratada, assunto que comeou a ser debatido na administrao da dor do cncer e em salas de emergncia (Ilkiw, 1999; Redrobe, 2002). Na Medicina Veterinria temos mais culpa em ignorar a dor, pois estudos mais recentes de prticas analgsicas, em ces de companhia, tambm sugerem cuidado inadequado da dor ps-operatria (Ilkiw, 1999).

2.3 Dinmica do processo inflamatrio:

A inflamao (L. inflammare, pr fogo), uma srie complexa de alteraes vasculares que se desenvolvem em resposta injria (Cheville, 1994). Quando ocorre a leso tecidual causada por bactria, trauma, substncias qumicas, calor ou qualquer outro fenmeno, mltiplas substncias so liberadas pelo tecido lesado. O conjunto total das mudanas teciduais denominado de inflamao (Guyton & Hall, 1997).

Celsus, um filsofo romano e contemporneo de Cristo, enunciou quatro sinais cardeais que so observados macroscopicamente na inflamao aguda: o rubor, o tumor, o calor e a dor, seguido de um quinto fator, que corresponde perda da funo (Cheville, 1994). O processo inflamatrio agudo, caracteriza-se pela curta durao e apresenta os sinais cardeais da inflamao (completamente explicados pelas observaes de Lewis em 1927); j o processo inflamatrio crnico, alm de perdurar por um perodo indeterminado, no apresenta padro to estereotipado, variando de acordo com os tipos de mediadores celulares e humorais envolvidos (Tasaka, 2002). Dentre os principais produtos teciduais liberados, durante o processo inflamatrio, so citados a histamina, bradicinina, serotonina, prostaglandinas (Boothe, 1989; Adams, 1992; Guyton & Hall, 1997; Fantoni & Mastrocinque, 2002; Tasaka, 2002; Oliva 2004), produtos da reao do sistema complemento, produtos da reao do sistema de coagulao sangnea, mltiplas substncias hormonais denominadas de linfoquinas, que so liberadas por linfcitos T, quando sensibilizados (Boothe, 1989). Vrias dessas substncias ativam intensamente o sistema de macrfagos e, dentro de poucas horas, esses comeam a fagocitar o tecido lesado; s vezes, os macrfagos tambm lesam clulas ainda vivas (Guyton & Hall, 1997). Os mediadores qumicos inflamatrios mais estudados so os eicosanides. O termo eicosanide, refere-se a lipdios insaturados liberados devido ciso do cido araquidnico, a partir de enzimas especficas. Assim, uma injria qualquer que danifique a membrana das diferentes clulas do organismo, ser capaz de liberar fraes de fosfolipdeos denominados cidos araquidnicos, atravs da ao da fosfolipase A2 (PLA2) que, no estado no ativado, encontra-se na forma esterificada ligada membrana celular (Adams, 1992; Booth, 1992; Tasaka, 2002). O cido araquidnico, quando liberado, no tem ao antiinflamatria

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(Andrade, 1997; Guyton & Hall, 1997; Tasaka, 2002), entretanto, os produtos de sua degradao, formados atravs da ao das enzimas cicloxigenases e lipoxigenase, so mediadores qumicos fundamentais para o desenvolvimento do processo inflamatrio (Tasaka, 2002). As ciclooxigenases so enzimas que convertem o cido araquidnico em endoperxidos cclicos instveis os quais se transformam em prostaglandinas (PGs) (Guerra et al., 2001), prostaciclinas (PGI2) e tromboxanos (Boothe, 1989; Adams, 1992; Booth, 1992; Andrade, 1997; Tasaka, 2002), substncias conhecidas globalmente com o nome de eicosanides (Feria, 1998; Isel, 1998; Olivera, 2004). Os chamados eicosanides so os agentes participantes dos diversos graus dos mecanismos patgenos da inflamao, da dor e da febre (Feria, 1998). Por sua vez, as lipoxigenases do origem aos leucotrienos (LTs); durante esse processo, as diferentes vias enzimticas podem gerar radicais livres (Boothe, 1989; Tasaka, 2002). A fase denominada celular, ocorre concomitantemente com a fase vascular, devido alteraes sangneas (Booth, 1992). De incio verifica-se marginao de leuccitos no leito vascular e a passagem destes para o tecido atravs de diapedese. O tipo celular predominante nessa fase poder ser de clulas polimorfonucleares como: neutrfilos, eosinfilos e basfilos (Andrade, 1997). A migrao celular constante, e durante as primeiras seis horas o predomnio celular dos neutrfilos. A partir das 12 horas, os macrfagos so numerosos e se igualam com os neutrfilos, por volta das 24 horas comeam a aparecer, na leso, os linfcitos. A migrao de clulas ocorre primariamente das vnulas, imediatamente aps o incio das alteraes vasculares (Coelho, 2002). Sabe-se que os corticides endgenos estabilizam as membranas dos lisossomos e so inibidores potentes dos grnulos dos neutrfilos, da digesto intracelular e da quimiotaxia. Assim, dessa forma, reduzem a aderncia do neutrfilo, bloqueando sua habilidade de aderir-se ao endotlio e de migrar para

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o tecido na tentativa de inibio da reao inflamatria (Cheville, 1994). No trauma e na infeco no parece lgico antagonizar a inflamao, componente indispensvel reparao tecidual. Embora essa seja uma resposta orgnica a uma agresso, a inflamao pode tornar-se indesejvel quando muito intensa, e o paciente se beneficiar com o uso de antiinflamatrios para seu controle (Bovill, 1997). Dependendo do trauma, no h condies do prprio organismo controlar a reao inflamatria, a dor e a febre, sendo que, nessas situaes h necessidade do uso de drogas antiinflamatrias (Khursheed, 1999). Observa-se uma boa resposta clnica a esses medicamentos em situaes dolorosas e inflamatrias, como por exemplo, em fraturas, leses ps-traumticas de tecidos moles e dores musculares em geral (Bovill, 1997).

2.4 Utilizao de antiinflamatrios no-esteroidais (AINEs):

Os termos frmaco, droga e medicamento, podem ser utilizados por muitos autores como sinnimos e tm por finalidade manter a sade de pessoas e animais, tratando suas enfermidades a aliviando seu sofrimento (Valle et al., 1988). Os primeiros frmacos a serem utilizados para combate da dor, foram os opiides (Reid & Nolan, 1996; Clark, 1999). Alguns estudos demonstram que os opiides promovem melhor analgesia no trans-operatrio imediato do que os AINEs, porm, com maior grau de sedao (Reid & Nolan, 1996; Lasceles, 1999) e depresso do SNC (Harkness & Wagner, 1993; Fantoni & Cortopassi, 2002). Portanto, os AINEs esto colocados entre os medicamentos mais indicados, principalmente, por sua ao perifrica com a vantagem de no produzirem

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depresso central, em comparao com analgsicos como os opides (Clark, 1999). AINEs apresentam diferenas distintas dos analgsicos opiides bem como dos glicocorticides (Feria, 1998; Isel, 1998, Clark, 1999). O uso de AINEs para a analgesia ps-operatria tem aumentado nos ltimos anos, e hoje se sabe que sua analgesia pode ser equiparada, ou at superior aos opiides (Hellebrekers, 2002; Olivera, 2004), alm de inibirem a sntese de mediadores da reao inflamatria, tais como as prostaglandinas, tromboxanos e prostaciclinas, responsveis pelo estmulo de nociceptores e de desencadeamento do processo inflamatrio (Kehlet, 1989; Isel, 1998) e sua ao perifrica aludida para evidncias precoces e recentes, sugeridas, de que haja uma ao central (Ilkiw, 1999; Gottschalk & Smith, 2001). Os AINEs so analgsicos perifricos, cuja ao se exerce diretamente no foco doloroso (Clark, 1999). As prostaglandinas, principalmente a PGE2, so capazes de baixar o nvel de excitao de nocireceptores de fibras C (Fox & Campbell, 2000). As fibras C sensibilizam esses receptores de dor aos estmulos mecnico e qumico, diretamente ou atravs de mediadores como a histamina e a bradicinina. Isso explica o rpido e efetivo efeito dos AINEs sobre as dores de origem inflamatria e sua ao no controle de algumas dores ps-operatrias (Boothe, 2003). Os AINEs, so um conjunto de compostos quimicamente hetergenos (Feria, 1998). Estruturalmente os AINEs (Tabela 1) podem ser classificados em salicilatos ou derivados do cido carboxlico, incluindo os indis (indometacina), cidos propinicos (ibuprofeno e naproxeno), fanamatos (cido meclofenmico), oxicans (piroxican), ou as pirazolonas ou cidos enlicos (fenilbutazona e dipirona) (Boynton et al., 1988). Representando os inibidores COX-2 especficos, os chamados coxibs, citam-se os de primeira gerao como celecoxib, rofecoxib e os de segunda

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gerao como parecoxib, valdecoxib e etoricoxib (McMurray & Hardy, 2002). TABELA 1 - Classificao de AINEs, com representantes principais de cada grupo, estando grifadas as drogas utilizadas neste estudo:

Grupo farmacolgico CIDOS Salicilatos Enlicos Pirazolonas Pirazolidinas Oxicans Actico Indolactico Pirrolactico Fenilactico Propinico Amino-nicotnico Fanamatos NO-CIDOS Sulfoanilidas Alcalonas Paraminofenis Coxibs Primeira gerao Segunda gerao

Principal representante cido acetilsaliclico Metamizol Fenilbutazona Piroxicam, Meloxicam Indometacina Ketorolaco Diclofenaco Cetoprofeno, Carprofeno Flunixim meglumina cido meclofenmico Nimesulida Nabumetona Paracetamol Celecoxib, Rofecoxib Valdecoxib

Os AINEs correspondem classe de medicamentos mais utilizados no

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Brasil, tanto para humanos como para animais, sendo que existem mais de 50 nomes disponveis no mercado (Tasaka, 2002). S nos EUA cerca de 70 milhes de drogas antiinflamatrias so prescritas anualmente, sem contar os pacientes que as usam sem prescrio mdica (Fox & Campbell, 2000).

2.5 Bioqumica dos AINEs:

Embora as drogas AINEs tenham sido variavelmente definidas, o termo usado para descrever compostos que no sejam esterides e que deprimam a inflamao (Boothe, 2003). Geralmente, a classificao dos AINEs fica restrita quelas drogas que inibem uma ou mais etapas do metabolismo do cido araquidnico, sendo que essas drogas variam na sua capacidade de influenciar a inflamao (Boynton et al., 1988). A aspirina, um dos componentes mais antigos da fitoterapia, o AINE progenitor, e termos como semelhante aspirina e aspirina e drogas relacionadas so comumente usados para referir-se a esse grupo de drogas (Vane, 1971; Hochberg, 1989).

2.6 Farmacodinmica dos AINEs:

Em 1971, John Vane havia demonstrado que a inibio da sntese de prostaglandinas, pela aspirina, ocorria pela inibio da cicloxigenase, em 1995, Vane & Botting demonstraram a existncia de duas formas de cicloxigenases, a COX-1 e a COX-2.

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Recentemente, essa descoberta da existncia de ao menos duas isoformas de ciclooxigenases (Mathews, 1996; Ct, 1998; Salido et al., 2001; Tasaka, 2002; Olivera, 2004). Conforme (Hawkey, 1999; Salido et al., 2001) a COX-1 e COX2, por possurem localizaes e funes diferentes, possibilitaram a introduo de novos frmacos que inibem seletivamente uma ou outra isoforma (Figura 2).

Fosfolipdios da membrana

Fosfolipase A
cido Araquidnico

Endotoxinas Citocinas Mitgenos

COX-1
Antiinflamatrios No Esteroidais
Proteo: Estmago Intestino Rim

COX-2

Zonas de inflamao: Macrfagos Leuccitos Histamina

FIGURA 2 - Representao esquemtica da ao dos AINEs, modificado de Feria (1998).

Conforme Turner (1995); Isel (1998); Wright (2002) e Olivera, (2004) a ciclooxigenase-1 constitutiva e extremamente importante para funes fisiolgicas normais. Por exemplo, a degradao do cido araquidnico pela COX-1, origina PGE2, PGI2 e tromboxano, responsveis respectivamente pela vasodilatao renal, que garante aporte sangneo para esse rgo, assegurando a

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taxa de filtrao glomerular. Na mucosa estomacal a ao vasodilatadora fisiolgica das PGs, principalmente da PGE2, proporciona um sistema de tamponamento, pelo bicarbonato, que consegue atenuar a ao corrosiva do cido clordrico (HCl) presente no suco gstrico (Turner, 1995; Ct, 1998; Tasaka, 2002; Olivera, 2004). Por sua vez, as aes inibitrias da PGs sobre os tromboxanos causam aumento de processos hemorrgicos, j que a coagulao e a agregao plaquetria encontram-se comprometidas (Fox & Campbell, 2000; Tasaka, 2002). Assim sendo, quando um agente qualquer bloqueia a COX-1, automaticamente essas funes estaro prejudicadas. Por outro lado, a COX-2 uma forma induzvel, sendo formada a partir de determinados estmulos, como presena de endotoxinas e estmulos inflamatrios que liberam as citocinas que, por sua vez, induzem a sntese de COX-2 por clulas, como macrfagos, resultando na liberao de PGs inflamatrias (Carvalho & Lemnica, 1998), ou seja, a COX-2 induzida pela prpria reao inflamatria (Matthews, 1996; Tasaka, 2002; Beubler, 2003). Foi postulado que a COX-2 a principal responsvel pela sntese dos mediadores prostanides de dor, inflamao e febre (Vane & Botting, 1996). Tambm se acredita que a COX-2 esteja envolvida na ovulao, implantao e fechamento do ducto arterioso, alm de nas funes do SNC, com induo da febre e percepo da dor, e nas funes cognitivas (DuBois et al., 1998). A liberao de prostaglandinas juntamente com proteases e outros mediadores inflamatrios como, por exemplo, radicais livres de oxignio resultam em inflamao (Carvalho & Lemnica, 1998). A via da COX-2 pode ser interrompida em diversos nveis por antagonistas ou anticorpos para citocinas e mitgenos inibidores da induo de COX-2, como exemplo, os glicocorticides ou os inibidores efetivos de COX-2 (Vane & Botting, 1995; Mathews, 1996; Carvalho & Lemnica, 1998).

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Portanto, a maior ou menor probabilidade de um AINE provocar efeitos adversos est condicionada a sua capacidade de inibir seletivamente apenas a COX-2 (Mathews, 1996; Beubler, 2003).

2.6.1 Ao analgsica:

Muitos AINEs produzem analgesia por ao ao nvel do Sistema Nervoso Perifrico e Central. A nvel perifrico, inibem a sntese de prostaglandinas por sua ao inibidora dose-dependente sobre a COX (Isel, 1998). Com a reduo das prostaglandinas, no foco doloroso, diminui-se a irritao inflamatria e dolorosa das terminaes nervosas envolvidas (Boothe, 2003; Olivera, 2004). Os mecanismos de ao dos AINEs sobre o SNC no esto totalmente estabelecidos, embora sejam observados interaes com os sistemas serotoninrgico e gabaminrgico (atravs de receptores do cido gama aminobutrico), e com o glutamato (Beirith, 1998). Assim como o aumento na liberao de glicocorticides atravs dos mecanismos endgenos (Beirith, 1998; Isel, 1998). Segundo Kaufmann et al. (1997) as prostaglandinas atuam nas sinapses neuronais, podendo dessa forma, influir por mecanismos desconhecidos, no desenvolvimento do SNC, na aprendizagem e na memria, assim muitos estudos sugerem uma ao analgsica central dos AINEs, como ocorre com sua atividade antipirtica. Sabe-se que os AINEs tm maior efeito sobre a dor somtica do que sobre a dor visceral (Adams, 1992); porm, s sero eficazes nas dores potencializadas pela presena de prostaglandinas, principalmente, aquelas associadas e envolvidas nos processos originados pela reao inflamatria (Adams, 1992;

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Tasaka, 2002). 2.6.2 Ao antiinflamatria:

Atuam inibindo as ciclooxigenases (Vane & Botting, 1995; Ilkiw, 1999, Dardn et al., 2001; Tasaka, 2002; Oliva, 2004; Olivera, 2004), responsveis pela sntese de prostaglandinas. Os AINEs diminuem a inflamao por bloquearem a enzima responsvel pela transformao do cido araquidnico em uma srie de substncias que desencadeiam o processo inflamatrio, como as prostaglandinas, tromboxanos e prostaciclinas (Ilkiw, 1999; Khursheed, 1999; Fantoni & Mastrocinque, 2002; Tasaka, 2002; Boothe, 2003).

2.6.3 Ao antipirtica e inibio da agregao plaquetria:

A ao antipirtica e a diminuio da agregao plaquetria so produzidas, pela inibio de ciclooxigenase. A COX-1 bastante sensvel sobre os metablitos liberados por AINEs como o metil-amino-antipirina (MAA), observando-se, em humanos, um resultado antiagregante com doses nicas de 500 mg, efeito esse que se mantm durante 24 horas (Shimada et al., 1994).

2.7 Exemplo de AINEs inibidores no seletivos para COX-1/COX-2 e seletivos para COX-2:

Os AINEs pertencem a estruturas qumicas diversas, mas so em sua grande

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maioria molculas cidas. Esta acidez no parece essencial para a atividade antiinflamatria, mas responsvel, em conjunto com a inibio da COX-1, pelos efeitos adversos destes medicamentos sobre a mucosa gstrica (Carvalho & Lemnica, 1998). So medicamentos sintomticos, no interferindo na causa da doena, podendo, inclusive, mascarar sintomas que podem confundir e/ou negligenciar o tratamento especfico (Tasaka, 2002), porm, so medicamentos amplamente utilizados para o controle da dor em pacientes traumatizados (Kehlet, 1989; Ilkiw, 2002). Dentre os AINEs, o cido acetilsaliclico o antiinflamatrio padro. Sua descoberta ocorreu no sculo XVIII (Booth, 1992; Tasaka, 2002) mais especificamente em 1763, quando o reverendo Edmund Stone, relatou as propriedades antifebris da casca do salgueiro, o Salix Alba. Verificou-se posteriormente que a rvore continha a salicilina, a partir da qual Lenoux, em 1829, sintetizou o cido acetilsaliclico; sendo que em 1899 iniciou-se o seu uso na prtica mdica (Tasaka, 2002). A Farmacologia tem, atualmente, direcionado sua busca para os AINEs que inibem seletivamente a COX-2, preservando a COX-1. Antiinflamatrios clssicos como a dipirona, piroxican, paracetamol, flunixin meglumine e cetoprofeno inibem as duas ciclooxigenases. AINEs com maior atividade sobre a COX-2 (meloxican, loxoprofeno e o mais recente grupo dos coxibs - celecoxib, rofecoxib, parecoxib, valdecoxib) tem menor incidncia de efeitos colaterais, por no interferirem com a COX-1, porm sua limitao refere-se via de administrao, pois so administrados na forma de cpsulas, por via oral, o que restringe, muitas vezes, seu uso em espcies de tamanho pequeno. Para McMurray & Hardy (2002) provvel que a classe de inibidores seletivos tornar-se-o as drogas de primeira escolha no sculo 21 para tratamento da dor aguda, dor crnica, (e na maioria das condies inflamatrias e

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reumticas). 2.7.1 Cetoprofeno:

O cetoprofeno derivado do cido arilcarboxlico pertencente ao grupo do cido propinico, das drogas antiinflamatrias no esteroidais. Possui atividades antiinflamatria, antipirtica e .apresenta atividade analgsica (Tasaka, 2002; Oliva, 2004). um inibidor de dupla ao, pois inibe COX-1 e 2; atuando tanto sobre a ciclooxigenase quanto sobre a lipoxigenase, levando ao bloqueio das respostas inflamatrias celulares e vasculares (Tasaka, 2002). Artigos mais recentes tm questionado sua ao inibitria sobre a via das lipoxigenases, sendo o derivado mais potente e seguro dentro do grupo do cido propinico (Tasaka, 2002). Possui ao analgsica central, atravessando rapidamente a barreira hematoenceflica, atuando diretamente no tlamo; e ao analgsica perifrica, inibindo as prostaglandinas moduladoras da dor, alm de agir por inibio direta da bradicinina (Grisneaux et al., 1999). um dos mediadores mais potentes da dor, sendo considerado cerca de 100 vezes superior a fenilbutazona ou a aspirina (Landoni et al., 1995; Malinovisky et al,. 1998). Possui ao condroprotetora, j que a maioria dos antiinflamatrios diminui a sntese de proteoglicanos e acelera a destruio das cartilagens articulares (Malinovisky et al., 1998). Esse frmaco indicado para pacientes com dor de grau leve a moderado (Fantoni & Mastrocinque, 2002; Oliva et al., 2004) e, aparentemente no h diferena significativa mediante seu uso preventivo ou posterior ao estmulo cirrgico, sendo bem-vindo seu uso em animais que apresentam dor de origem inflamatria como, por exemplo, a dos procedimentos ortopdicos (Alves et al., 2001).

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Sua ao analgsica de longa durao, devendo ser administrado de 24 em 24 horas, por ser potente inibidor da sntese de PGs e prostaciclinas; existe risco de toxicidade renal e gastrintestinal (Grisneaux et al., 1999). Seu uso tem se mostrado seguro em ces (Pirabot et al., 1997), e segundo Silveira (2000), ces tratados com AINEs no seletivos, por cinco dias, no apresentam nenhuma manifestao clnica. Porm Forsyth et al. (1996) e Cruz et al. (2000), observaram leses digestrias, com manifestaes clnicas dignas de nota, nessa espcie, aps a utilizao de AINEs no seletivos para COX-2. Para McNeil (1992); Elwood (1992) e Krummel et al., (2000) a falncia renal aguda pode ser uma complicao conhecida atravs da utilizao de AINEs. Krummel et al. (2000) realizaram um estudo em que foi utilizado o cetoprofeno, na forma de pomada, para tratamento de artrite inflamatria; aps cinco dias do uso da droga a paciente apresentou falncia renal aguda reversvel, com aumento de enzimas plasmticas como a alanina aminotransferase e a fosfatase alcalina. metabolizado por dois principais processos: uma menor parte por hidroxilao e a maior parte por conjugao com o cido glicurnico envolvendo a enzima citocromo P-450 (Grisneaux et al., 1999). Pode ser utilizado, em ces e gatos, na dose de 2 mg/kg, via subcutnea, a cada 24 horas por 3 a 5 dias (Cruz et al., 2000). J na dose de 1 mg/kg pode ser empregado de 7 a 14 dias (Sackman, 1991). Para animais de peso baixo, o cetoprofeno indicado na dose de 2 mg/kg, via subcutnea e, segundo Flecknell (1996), garante boa analgesia.

2.7.2 Parecoxib/Valdecoxib:

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O antiinflamatrio no esteroidal parecoxib um composto quimicamente designado de N-[[4-(5-metil-3-fenil-isoxazolil)fenil]sulfonil] propanamida, sal sdico (Karim et al., 2001). Considerado um novo inibidor seletivo da ciclooxigenase-2, foi desenvolvido como agente analgsico e antiinflamatrio para uso no psoperatrio em humanos, administrado via oral ou parenteral, por via intravenosa ou intramuscular (Pfizer, 2003). Achados recentes contriburam para a melhor compreenso do

envolvimento da COX-2 nos processos dolorosos, apresentando importantes implicaes na escolha dos inibidores especficos da COX-2, entre eles o parecoxib, como uso ideal para ambientes clnicos; sabe-se que as prostaglandinas produzidas pela COX-2, incluindo as que provm do trauma associado cirurgia, causam sensibilizao de nociceptores, acentuando a sensibilidade dor (Simon et al. 1999). Aps injeo muscular, o parecoxib rapidamente hidrolisado no fgado transformando-se no composto ativo valdecoxib, um derivado da benzenossulfonamida e do cido propinico (Figura 3).

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FIGURA 3 - Hidrlise do parecoxib em valdecoxib (Pfizer, 2003). O parecoxib e o valdecoxib so quimicamente distintos dos inibidores no seletivos das isoenzimas COX (Pfizer, 2003). Assim o parecoxib uma pr-droga do valdecoxib. O mecanismo de ao do valdecoxib se d pela inibio da sntese de prostaglandinas mediadas pela COX-2 (Vane & Botting, 1996; Karim, 2001), sendo que o medicamento mostrou ser altamente especfico e potente inibidor da COX-2 com fraca atividade inibitria sobre a COX-1 (Talley et al., 2000), reduzindo assim o uso dos processos fisiolgicos dependentes da COX-1 em tecidos, particularmente no estmago, no intestino e nas plaquetas (Pfizer, 2003). A metabolizao do parecoxib rpida, sendo convertido em valdecoxib e cido propinico in vivo, com meia vida plasmtica de aproximadamente 22 minutos; a eliminao do valdecoxib se d atravs de um extensivo metabolismo heptico que envolve vrias vias, incluindo as isoenzimas CY3A4 e CYP2C9 e a glicuronidao (aproximadamente 20%) do princpio ativo da sulfonamida, sendo eliminado por meio do metabolismo heptico, com menos de 5% recuperado na urina de forma inalterada (Talley et al. 2000), e 70% da dose sendo excretada pela urina como metablitos inativos (Pfizer, 2003). Foi identificado, no plasma humano, um metablito hidroxilado do valdecoxib que est ativo como inibidor da COX-2 (Talley et al., 2000) e segundo Chavez & DeKorte (2003), essa pode ser a justificativa pela qual o valdecoxib no altera a funo plaquetria (tempo de sangramento e agregao plaquetria) em pacientes adultos ou idosos. Um estudo realizado por Cheer & Goa (2001), aps avaliaes globais do medicamento, pde-se concluir que a eficcia analgsica do parecoxib considerada excelente, proporcionando a reduo severa no consumo de opiceos como a morfina.

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A dose diria recomendada de parecoxib de 40 mg/kg, administrado por via intravenosa ou intramuscular; baseando-se num paciente de 70 kg (Pfizer, 2003), no havendo citaes para seu uso clnico em animais.

2.8 Efeitos sobre os aspectos fisiolgicos produzidos pela inibio seletiva da

COX-2:

A COX-1 se expressa constitutivamente em praticamente a totalidade de todos os tecidos, especialmente plaquetas, clulas endoteliais, trato gastrointestinal, microvasculatura renal, glomrulos e tbulos coletores (Abramson & Weissmann, 1989). Sua quantidade pode aumentar de duas a quatro vezes aps a estimulao, sendo que glicocorticides no tem grande poder de inib-las. Assim a COX-1 responde pela regulao do fluxo sangneo renal, excreo de sdio e pela proteo da mucosa gstrica (Oliveira, 2001; Salido et al., 2001). A COX-2 indetectvel na maioria dos tecidos em situao basal. No entanto, com o desenvolvimento dos inibidores seletivos constatou-se que a COX-2 participa no s da mediao da inflamao, como tambm em funes reguladoras e outras circunstncias patolgicas. Aparecendo tambm, em determinadas situaes, no rim, crebro, fgado, mucosa do clon, osteoclastos e em algumas neoplasias (Abramson & Weissmann, 1989). A COX-2 aumenta de 10 a 80 vezes na presena de citoquinas inflamatrias, endotoxinas e clulas migratrias como macrfagos e moncitos (Salido et al., 2001). Com o aumento contnuo na produo da COX-2 h exposio do organismo aos seus efeitos fora do foco inflamatrio. Assim, a utilizao de antiinflamatrios inibidores de COX-2 tende a diminuir essas

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reaes (Harris & McKanna, 1994; Salido et al., 2001). A descoberta de que a COX-2 leva a formao de PGs que participam de eventos inflamatrios, tem impulsionado pesquisas sobre novos AINEs mais seletivos para a COX-2 e, se possvel, que inibam somente essa forma; nesse sentido que os AINEs recm-lanados no mercado geram menos efeitos adversos (Mathews, 1996; Pfizer, 2003).

2.9 Efeitos indesejveis dos AINEs:

Sabe-se que os AINEs promovem alguns efeitos colaterais (Kore, 1990, Parton et al., 2000), tais como: leses no sistema digestrio (Cruz et al., 2000, Guerra et al., 2001; Olivera, 2004), inibio da agregao de plaquetas, aumentando o tempo de coagulao sangnea (Kore, 1990) e falncia renal aguda (Elwood et al., 1992; McNeil, 1992). Os efeitos adversos renais produzidos pelos AINEs parecem ser exclusivamente dependentes das PGs, visto que esses diminuem sua sntese provocando uma diminuio do fluxo sangneo renal, diminuio do filtrado glomerular, insuficincia renal aguda (Villar et al. 1998), reteno de Na e gua, nefrite intersticial, necrose papilar e insuficincia renal crnica (Guerra et al., 2001). Os efeitos gastrointestinais so definitivamente os principais problemas relacionados com o uso de AINEs (Kore, 1990; Langman, 1999; Salido et al., 2001). Os AINEs no seletivos provocam leso na mucosa gstrica por dois mecanismos bsicos: mecanismo sistmico (responsvel por 80% dos casos) e mecanismo tpico (Oliveira, 2001). No mecanismo sistmico, h enfraquecimento dos fatores defensivos da

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mucosa por inibio da ciclooxigenase, enzima essencial para a produo de prostaglandinas (Kore, 1990; Oliveira, 2001; Tasaka, 2002). Com a inibio das prostaglandinas que agem na inflamao, os AINEs tambm inibem a produo de prostaglandinas E1, E2, I2 e F2, que so amplamente sintetizadas pela mucosa gastroduodenal e, so importantes no mecanismo de regulao do dbito sangneo gastrointestinal, pois tm ao vasodilatadora e favorecem a irrigao da mucosa digestiva, sendo importantes na renovao das clulas epiteliais (Albornoz, 1997), na inibio da secreo cida do estmago e no estmulo produo de muco citoprotetor de ons bicarbonato (Albornoz, 1997; Guerra et al., 2001; Tasaka, 2002). No mecanismo tpico, h efeito txico direto mucosa por aumento da permeabilidade celular, inibio do transporte inico e da fosforilao oxidativa. Ambos os mecanismos reduzem as propriedades defensivas da mucosa, expondoa ao efeito deletrio do cido clordrico (Oliveira, 2001, Tasaka, 2002). Em casos mais severos, se atribuem aos AINEs perfuraes intestinais e hemorragias digestivas fulminantes com complicaes de maior gravidade, com taxas de mortalidade no homem, com valores considerveis (Olivera, 2004). Inibidores seletivos da COX-2 tm sido referidos como drogas de efeitos colaterais menores, pois fariam inibio apenas do stio inflamatrio, mantendo a sntese de prostaglandinas. Diversos trabalhos tm mostrado ndices inferiores de leses digestivas em pacientes que utilizaram inibidores seletivos da COX-2 (Mathews, 1996). Para Salido et al. (2001) os AINEs seletivos esto associados a uma menor toxicidade gstrica, apontando uma notvel segurana no trato gastrointestinal (Mathews, 1996; Needleman & Isakson, 1997; Olivera, 2004). Os antiinflamatrios no-esteroidais tradicionais aumentam em 3,5 % o risco de eroses e hemorragia submucosas gastrointestinais que podem resultar em anemia crnica e morte (Allyn & Johnston, 1998). Dessa forma, os antiinflamatrios no-esteroidais no devem ser prescritos para pacientes idosos ou com mltiplos problemas de sade como mecanismos

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hemostticos anormais, pois esses tm uma maior tendncia a efeitos adversos e devem ser cuidadosamente monitorados Olivera, 2004 Para Mathews (1996) a administrao de AINEs totalmente contraindicada em doenas erosivas como lcera gstrica ou qualquer distrbio gastrointestinal. Anomalias hepticas foram relatadas aps a utilizao de AINEs em ces, incluindo elevao das enzimas hepticas com ou sem evidncia clnica de disfuno heptica; segundo os autores, deve-se ter em mente que mesmo quando os relatos de alterao heptica sejam categorizados como hepatopatias, nem todas resultam em disfuno heptica (Fox & Campbell, 2000). Ces tratados com AINEs podem apresentar evidncias clnicas de insuficincia heptica representadas por vmito, falta de apetite, ictercia e/ou letargia (Sevelius et al., 1995; Budsberg, 1999; Fox & Campbell, 2000). Alm disso, esses ces tm evidncia clnica patolgica de disfuno heptica, que pode incluir elevao nos testes de funo heptica (Fox & Campbell, 2000). A disfuno heptica associada ao uso do AINE carprofeno foi descrita por McPhail & Lappin (1998), como um evento idiossincrtico, no sendo comum nem previsvel. Contudo, quando a disfuno heptica ocorre, a terapia de suporte pode minimizar o dano e maximizar a recuperao, sendo que na maioria dos casos, o paciente ir mostrar melhora em 5 a 10 dias (Fox & Campbell, 2000). Conforme Mathews (1996) absolutamente vetada a administrao de AINEs no seletivos nas doenas hepticas. Para Sevelius et al. (1995), no existem alteraes patognomnias especficas para a hepatotoxicidade pelo uso de AINEs como o carprofeno e o cetoprofeno, e os sinais clnicos relatados, que incluem distrbios gastrintestinais e disfunes hepticas, desaparecem ou so resolvidos com a suspenso da droga. A administrao concomitante de dois AINEs extremamente contra-

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indicada, sendo que tambm no se deve indicar a prescrio dessas drogas na doena do disco intervertebral, na trombocitopenia, na doena de Von Willebrands, na insuficincia cardaca congestiva, e em animais que estejam utilizando anticoagulantes (Mathews, 1996). A utilizao dessas drogas tambm deve ser abolida em pacientes tratados com diurticos, anti-hipertensivos, agentes imunossupressores e analgsicos opiceos (Pfizer, 2003). Para Wright (2002) os danos produzidos pelos AINEs se manifestam na dependncia da potncia da droga escolhida, da sua seletividade para COX-2, dosagem e durao de uso, sendo que estudos e colocaes clnicas podem contribuir para uma utilizao mais segura e por mais tempo dessas drogas.

2.10 Avaliao da funo heptica:

O fgado anatomicamente um componente integral do sistema digestivo e funcionalmente interposto entre o trato gastrointestinal e a circulao sistmica e, desempenha, um papel importante na homeostasia das protenas, carboidratos e lipdios (Meyer et al., 1995). As vias metablicas da gliclise, do ciclo de Krebs, da sntese de degradao de aminocidos e dos processos de fosforilao oxidativa, so todos realizados no hepatcito (Gaw et al., 2001). As clulas do fgado metabolizam, desintoxicam e excretam compostos tanto endgenos como exgenos (Cheville, 1994; Coelho, 2002; Kerr, 2002). A excreo de produtos hidrossolveis ao final das vias metablicas tanto de nutrientes quanto de toxinas e de acessrios digestivos, tais como cidos biliares, ocorre na rvore biliar (Gaw et al., 2001). As enfermidades hepticas so razoavelmente comuns em pequenos animais

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e podem representar risco de vida. O fgado pode sofrer leso direta por uma srie de agentes txicos e infecciosos, bem como por problemas metablicos, imunomediados ou neoplsicos, ou ser acometido de modo secundrio (Lorenz et al., 1996). Geralmente o fgado o local mais comum de agresso txica por duas razes: recebe aproximadamente 80% do seu suprimento sangneo da veia porta que drena o sangue do trato gastrointestinal, metabolizando substncias txicas ingeridas, incluindo plantas, metais e substncias qumicas como drogas; a segunda razo que o fgado possui enzimas com capacidade de biotransformao de vrias substncias endgenas e exgenas para elimin-las do organismo (Carlton, 1998). A hepatite um processo inflamatrio e necrtico das clulas hepticas que pode ser produzido por toxinas, vrus, e grande diversidade de medicamentos e agentes qumicos (Carlton, 1998; Garcia-Rodriguz, 1999). Muitos frmacos e agentes qumicos podem causar a hepatite, apresentando reaes idiossincrticas e imperceptveis que geralmente no dependem da dose administrada (Garcia-Rodriguz et al., 1994). Sabe-se que a metabolizao dos AINEs feita no fgado, na dependncia de enzimas de oxidao e vrias reaes de conjugao envolvem a eliminao dessas drogas (De Lcia & Serti, 1980). Drogas AINEs como a aspirina, acetaminofeno, naproxeno e derivados do cido acetilsaliclico mesmo em baixas doses, podem produzir hepatite txica em felinos (Booth, 1992; Lorenz et al., 1996) em at 50% dos animais utilizados, pois produzem uma diminuio da conjugao do cido hidroxmico com o glutatio induzindo leso celular no fgado e em outros tecidos (Booth, 1992). Na maioria dos casos, a hepatite txica pode ser reversvel, porm pode ser necessrio tratamento de suporte para complicaes de insuficincia heptica crnica (Lorenz et al., 1996). A leso hepatocelular pode produzir ictercia. A ictercia pode ser gerada

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por leso no hepatcito por infeco ou toxinas, nos humanos adultos as causas mais comuns da ictercia aguda so a hepatite viral e o envenenamento pelo AINE paracetamol (Gaw et al., 2001). Ces da raa Labrador Retriever so comumente afetados por distrbios msculo esquelticos, requerendo um tratamento com drogas antiinflamatrias; aps essa terapia os animais podem ser acometidos por doena heptica crnica como relatado por McPhail & Lappin (1998). Contudo, no possvel afirmar ou determinar qualquer predisposio da raa para a hepatotoxicidade com AINE (Fox & Campbell, 2000). Sabe-se que investigaes bioqumicas podem ajudar a diferenciar leses como obstruo do trato biliar, leso hepatocelular aguda e doena crnica do fgado, produzidas ou no, por drogas (Meyer et al., 1995; Kerr, 2002). McPhail & Lappin (1998) afirmam que quando se observam leses no fgado de ces, aps a utilizao de AINEs no seletivos de COX-2, a plena recuperao clnica dessas hepatopatias esperada dentro de 2 a 4 semanas, mas o efeito em longo prazo da toxicidade aguda desconhecido. Em recente estudo, verificou-se que a nimesulida, um AINE no inibidor seletivo, comercializado em mais de 50 pases, causou um alto ndice de hepatotoxicidade em pacientes humanos, estando suspenso seu uso na Finlndia e Espanha, at que novos estudos possam comprovar os efeitos colaterais da droga (Traversa, 2003).

2.11 Testes de funo heptica:

Os

chamados

testes

de

funo

heptica

(TFH)

no

avaliam

quantitativamente a capacidade desse tecido de realizar suas funes metablicas, porm, essas investigaes bioqumicas podem ajudar a diferenciar o seguinte:

31

obstruo do trato biliar, leso hepatocelular aguda e doena crnica do fgado (Gaw et al., 2001). Conforme Kerr (2002), pode-se concluir, a partir de achados bioqumicos, a presena de hepatopatia; sendo possvel caracterizar essa hepatopatia, at certo ponto, especialmente com relao a cronicidade. A atividade da fosfatase alcalina pode indicar ndice de colestase; as atividades das aminotransferases, do uma medida da integridade das clulas do fgado e a concentrao da albumina no soro uma da capacidade de sntese do mesmo (Traversa et al., 2003). Em ensaios cirrgicos ortopdicos e ginecolgicos de parecoxib versus placebo, morfina e AINEs convencionais, menos de 0,3% dos pacientes de qualquer grupo de tratamento apresentaram funo heptica anormal ou aumento dos nveis de AST ou ALT (Langland et al., 2000).

2.11.1 As aminotransferases:

As atividades das aminotransferases tambm denominadas de enzimas de vazamento ou de leso (Meyer et al., 1995) so amplamente utilizadas na prtica mdica como ndice sensvel, porm no especfico, da leso aguda dos hepatcitos, independentemente de sua etiologia (Lorenz et al., 1996; Gaw et al., 2001). De acordo com Kaneco et al. (1997), a alanina aminotransferase (ALT), tambm chamada de transaminase glutmico pirvica (TGP), catalisa a transaminao reversvel da L-alanina e 2-oxoglutarato a piruvato e glutamato no citoplasma da clula. H grande especificidade da atividade da ALT em primatas, ces, gatos, coelhos e ratos como indicador de hepatopatias, sendo recomendada para apontar hepatopatias em estudos toxicolgicos nos quais se utilizam

32

roedores e ces. A aspartato aminotransferase (AST) ou transaminase glutmico-oxalactica (TGO), no uma enzima especfica para o fgado, pois pode originar-se tanto em msculos como no tecido heptico devendo-se interpretar seu aumento sempre considerando esta inespecificidade (Kaneco et al., 1997). Conforme Fox & Campbell (2000) a ALT e AST podem ser considerados os exames de bioqumica sangnea mais informativos para avaliao da toxicidade aguda por AINEs e sua elevao em conjunto pode indicar leso heptica significativa. Como j brevemente descrito, as causas de leso heptica incluem a hepatite, que no leva em conta o agente causal, e a injria txica que pode acompanhar qualquer um dos insultos ao fgado, incluindo doses excessivas de drogas (Booth, 1992; Lorenz et al., 1996; Gaw et al., 2001). O citoplasma do hepatcito rico em alanina aminotransferase em ces, gatos e primatas (Meyer et al., 1995; Kerr, 2002), sendo que um insulto membrana hepatocelular resulta num aumento da ALT srica (Meyer et al., 1995; Gaw et al., 2001; Kerr, 2002). De forma aguda (horas ou dias), a magnitude do aumento torna-se mais ou menos paralela ao nmero de hepatcitos com a permeabilidade da membrana alterada (Meyer et al., 1995).

2.11.2 Fosfatase alcalina (FA):

Aumentos da atividade da fosfatase alcalina na doena heptica o resultado do aumento na sntese dessa enzima pelas clulas que revestem os canalculos biliares (Lorenz et al., 1996), geralmente em resposta a colestase; pode ocorrer atividade alta da fosfatase alcalina tambm em leses infiltrativas do fgado, quando leses que ocupam espao (por exemplo, tumores) esto

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presentes e na cirrose (Gaw et al., 2001). O fgado no a nica fonte de atividade de fosfatase alcalina. Quantidades substanciais esto presentes no osso, intestino delgado, placenta e rim (Meyer et al., 1995; Gaw et al., 2001). No sangue normal, a atividade da fosfatase alcalina deriva principalmente do osso e do fgado, com pequenas quantidades do intestino (Gaw et al., 2001). Os maiores aumentos de FA esto associados com desordens colestticas difusas ou focais, neoplasias hepticas primrias e, em ces, com a induo medicamentosa. Em geral, os valores sricos de FA se elevam em decorrncia do aumento da sntese heptica e no da imediata liberao celular; aps uma necrose heptica aguda, os valores de FA aumentam entre duas a cinco vezes o normal em ces e at trs vezes, os valores normais para gatos (Kaneco et al., 1997). O aumento de FA resultante do uso de agentes qumicos, pode ocorrer posteriormente ao aumento de ALT e AST, e pode continuar a crescer durante o retorno dessas enzimas a nveis normais (Bush, 1991). Durante a reparao heptica depois de uma leso, a atividade da AST diminui lentamente, enquanto que a atividade da ALT muitas vezes aumenta. Conseqentemente, a ALT , geralmente, a ltima enzima heptica srica a voltar aos nveis normais no co, depois da resoluo de hepatotoxicidade aguda (Meyer et al., 1998).

2.12 Escala alomtrica para clculo de protocolos posolgicos em espcies exticas:

O tamanho corporal a caracterstica isolada mais importante de um organismo, influenciado pelo meio ambiente fsico enfrentado, pelos provveis

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predadores, e pelas respostas do organismo a tais circunstncias (Mordenti, 1986; Pachaly & Brito, 2000). Caracteres fundamentais dos organismos, incluindo sua anatomia, dispndio energtico para a manuteno, hbitos alimentares, forma de reproduo e meios de locomoo variam com o tamanho corporal (Pachaly & Brito, 2000). As relaes existentes entre esses caracteres e o tamanho corporal variam quantitativamente, havendo modificao nos parmetros de um carter orgnico em funo de mudanas no tamanho corporal. Essas relaes tamanhodependentes so freqentemente denominadas alomtricas (McNab, 1988). As relaes alomtricas so geralmente descritas como uma funo exponencial da massa corporal, uma vez que a conexo entre um carter e tamanho, geralmente no linear e porque um polinmio, que poderia ser empregado para descrever uma relao to complexa, tornar-se-ia quase incompreensvel (McNab, 1988). Segundo Mordenti (1986), vrias aplicaes da escala alomtrica para extrapolao de doses entre as diferentes espcies basearam-se no trabalho de Freireich e cols. em 1966. A falha ao se utilizar a rea superficial como mtodo para a extrapolao de tratamentos em vrias espcies veterinrias baseia-se no fato de que essa abordagem ignora as grandes variaes na proporo superfcierea. Isso, obviamente, no o caso de extrapolaes mdicas, em humanos, ao se tratar de uma nica massa morfolgica (Homo sapiens). Existem, tambm, diferenas espcie-especficas na temperatura corporal de animais, com exceo de mamferos placentrios; frmulas de energia que descrevem as semelhanas da qumica metablica e de fludos, comum para todas as espcies, parecem funcionar bem nas extrapolaes veterinrias (Paddleford, 2001). A taxa de metabolismo basal tambm denominada custo energtico mnimo considerada o melhor meio de comparao entre organismos diferentes, por ser uma relao fundamental que existe entre todos os

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organismos, e a base para o processo de extrapolao alomtrica (Mader, 1991; Sedgwick, 1993). A extrapolao alomtrica permite, atravs do conhecimento das taxas metablicas de dois diferentes vertebrados, extrapolar matematicamente para cada um deles, doses de medicamentos indicadas para o outro, para o qual j foram feitos estudos laboratoriais de experimentao farmacocintica e farmacodinmica (Pachaly & Brito, 2000). Utilizando a escala alomtrica para extrapolar a dose, o clnico reconhece que tamanhos corporais maiores, de qualquer taxa energtica, alcanam as doses de medicamento mais elevadas, porm alcanam tambm, a menor dose proporcional, enquanto que os menores tamanhos corporais, qualquer que seja o grupo energtico, obtm a maior dose proporcional e a menor dose de tratamento (Paddleford, 2001). Schmidt-Nielsen (1984) resumiu e simplificou esses fatos, afirmando que animais menores tm mais ferramentas que animais maiores. Como tal, o propsito do mtodo alomtrico a extrapolao das doses de drogas entre animais de formas e/ou tamanhos dspares, possibilitando o uso de dados farmacolgicos obtidos em um animal modelo (animal para o qual o frmaco foi desenvolvido), para a farmacoterapia em um animal alvo; paciente selvagem ou domstico (Sedgwick & Pokras, 1988). Assim, considera-se a medida mtrica a melhor para todos os clculos, porque fornece uma melhor perspectiva da continuidade da variao do tamanho corporal necessria em teraputica zoolgica, mostrando que o tamanho corporal e a taxa metablica influenciam o medicamento e a dose proporcional (Mordenti, 1986). Isto , a anotao mtrica facilita a extrapolao alomtrica do tratamento de um indivduo a outro, desde um animal muito pequeno a um muito grande, um exemplo disso que um pssaro com tamanho variando de 0,004 kg (4 g), um beija flor; at uma avestruz com 150 kg tm sido medicados e anestesiados com sucesso (Paddleford, 2001).

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2.12.1 Taxa metablica basal:

O conhecimento atualmente disponvel sobre o metabolismo de vertebrados muito vasto e baseia-se, em grande parte em trabalhos de Kleiber, realizado nas dcadas de 30 e 40. Esse pesquisador demonstrou que a relao entre a taxa metablica e a massa corporal no linear e props o expoente de massa 0,75 para expressar o metabolismo basal com relao massa corporal, em comparaes interespecficas (Feldmann & McMahon, 1983; Withers, 1992), sendo que a taxa metablica uma das variveis fisiolgicas mais comumente medidas, existindo uma imensa quantidade de informaes referentes s taxas metablicas dos mais diversos animais, sob uma ampla variedade de condies (Withers, 1992). A taxa metablica basal (TMB) o valor medido, quando um animal endotrmico encontra-se quieto, inativo, no digerindo qualquer alimento, sem sofrer qualquer tipo de estresse e mantido sob temperatura ambiental tima (Withers, 1992). Dividindo-se a taxa metablica basal pela massa do animal obtm-se o valor denominado taxa metablica especfica (TME), definida como a menor taxa metablica por unidade de massa, em animais endotrmicos (Pachaly & Brito, 2000).

2.12.2 Extrapolao alomtrica:

Alometria o estudo da maneira pela qual uma varivel dependente, como a taxa metablica, varia em relao a uma varivel independente, como a massa

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corporal. Em outras palavras, a representao matemtica da conseqncia funcional da diferena de massa entre os animais e serve para padronizar as medidas diferentes, ou seja, colocar valores dentro do mesmo padro numrico (Withers, 1992). O mtodo de extrapolao alomtrica envolve o estudo das relaes de funes e sistemas orgnicos ao tamanho corporal (Sedgwick & Borkowski, 1996). Clculos alomtricos podem ser uma ferramenta muito til, quando se necessita determinar dados fisiolgicos bsicos, de qualquer amniota, de qualquer tamanho, como freqncia cardaca em repouso, freqncia respiratria e volume minuto, volume do espao morto anatmico, consumo de oxignio, volume sangneo, dbito cardaco e tamanho de rgos como o corao (Sedgwick, 1991).

2.12.3 Consideraes fisiolgicas sobre a biodisponibilidade das drogas:

Animais menores, de determinado grupo taxonmico, concomitantemente com sua taxa metablica mais alta, so diferentes dos maiores no que tange a particularidades biolgicas, incluindo-se a a velocidade de ocorrncia de eventos fisiolgicos (Pachaly & Brito, 2000). Comparativamente, animais menores tm um tempo mdio de circulao sangnea maior, e freqncias cardacas mais elevadas que animais maiores (Schmidt-Nielsen, 1984). Tm maior rea de superfcie corporal e maior necessidade de oxignio por unidade de massa corporal. Tm ainda maior densidade de capilares por unidade de determinado tecido, ou seja, tm maior rea de superfcie para difuso de substncias, maior rea de superfcie de trocas gasosas respiratrias, taxa de filtrao glomerular mais alta, maior densidade de

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hepatcitos e maior densidade intracelular de mitocndrias e citocromos C, por unidade de massa corporal, que um animal maior (Calder, 1984; SchmidtNielsen, 1984; Mader, 1991). Assim evidente que eventos fisiolgicos relacionados absoro, distribuio, ao e eliminao de drogas, no organismo de animais menores, sejam diferentes daqueles observados nos animais maiores (Pachaly & Brito, 2000). Segundo Sedgwick & Pokras (1988) e Mader (1991), animais menores tendem a ter necessidades maiores, em relao a sua massa corporal, para drogas cuja dinmica seja influenciada pela taxa metablica, em funo de suas taxas metablicas mais altas, nesses animais as drogas tendem a ter absoro, distribuio e excreo mais rpidas que nos maiores; isto significa que para manter nveis sricos efetivos de uma determinada droga em animais menores, a dosagem (mg/kg/dia) e a freqncia de administrao devero ser maiores que em animais maiores, levando em considerao que todos os outros fatores que influenciam a farmacocintica so os mesmos.

3 MATERIAL E METODOLOGIA

Nesse experimento foram utilizados 36 Rattus norvegicus adultos, machos, com pesos variando entre 200 a 400 gramas, clinicamente sadios e vermifugados, submetidos a um perodo de adaptao ao ambiente de 15 dias, no Biotrio da Universidade de Cruz Alta, RS. Os animais foram mantidos, separados aleatoriamente, em caixas plsticas, prprias para a espcie, com alimentao e gua ad libidum, com trs animais por gaiola, identificados atravs de marcao

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com tinta hipoalergnica, na cauda. A rao utilizada foi a considerada ideal para a espcie com alto teor de protenas variando de 20 a 27%. Aps a separao aleatria e adaptao por mais 10 dias, os ratos foram divididos em dois grupos com 15 animais cada. No grupo K os animais receberam o AINE cetoprofeno1, e no grupo V o valdecoxib2. Houve a diviso aleatria dos grupos K e V. O grupo K ficou constitudo de K1, K2 e K3, sendo que cada um desses sub-grupos ficou preenchido por cinco animais para a administrao do cetoprofeno, e mais um animal para cada subgrupo K destinado utilizao de placebo3, o qual foi destinado colheita de amostras de sangue e tecidos a fim de estipularem-se parmetros normais para a espcie. Todos os animais desse experimento, aps conteno adequada, receberam as medicaes, conforme Quadro 1, e a soluo placebo por via intra-muscular (IM) profunda, na regio gltea compreendida pelos msculos semitendneo e semimembranceo, utilizaram-se seringas de 1 ml4 descartveis e em cada administrao alternava-se entre a musculatura do lado direito e esquerdo.

QUADRO 1 Organizao dos Grupos K e V em relao ao medicamento, intervalo e via de administrao.

ANIMAIS Grupo K Grupo V

FRMACO Ketofen Bextra

ADMINISTRAO 6/6 horas 10/10 horas

VIA Intramuscular Intramuscular

1 2

Ketofen 10%. MERIAL Sade Animal LTDA, Paulnia/SP. BextraTM-Pfizer. Importado por Pharmacia Brasil LTDA, So Paulo/SP. 3 Soluo Cloreto de Sdio 0,9%. Indstria farmacutica Texon LTDA, Viamo/RS 4 Becton Dickinson Indstria Cirrgica LTDA, Curitiba/PR

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As doses dos AINEs foram calculadas em mg/kg para cada animal, segundo o mtodo de emprego de Extrapolao Alomtrica conforme programa de computador MS Excel, demonstrado por Pachaly & Brito (2000). Assim os animais do grupo K, constitudo dos sub grupos K1, K2 e K3, receberam doses de cetoprofeno a cada seis horas, durante dois dias, de acordo com o Quadro 2.

QUADRO 2 Organizao do sub grupo K1, que recebeu o AINE cetoprofeno, conforme dosagem alomtrica, de 6/6 horas, por dois dias. Animal K1.1 K1.2 K1.3 K1.4 K1.5 Gaiola CX 1 CX 1 CX 1 CX 2 CX 2 Peso (g) 0,36 0,37 0,43 0,29 0,34 Dose (mg/kg) 1,65 1,68 1,88 1,40 1,58 Dose (ml) 0,016 0,016 0,018 0,014 0,015

O sub-grupo K2 recebeu, da mesma forma, o medicamento cetoprofeno conforme demonstrao no Quadro 3.

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QUADRO 3 Organizao do sub grupo K2, que recebeu o AINE cetoprofeno, conforme dosagem alomtrica, de 6/6 horas, por dois dias. Animal K2.1 K2.2 K2.3 K2.4 K2.5 Caixa CX 5 CX 5 CX 5 CX 6 CX 6 Peso (g) 0,26 0,29 0,32 0,32 0,33 Dose (mg/kg) 1,29 1,40 1,51 1,51 1,54 Dose (ml) 0,012 0,014 0,015 0,015 0,015

Finalizando o grupo K, o sub-grupo K3 recebeu o cetoprofeno conforme o Quadro 4.

QUADRO 4 Organizao do sub grupo K3, que recebeu o AINE cetoprofeno, conforme dosagem alomtrica, de 6/6 horas, por dois dias. Animal K3.1 K3.2 K3.3 K3.4 K3.5 Gaiola CX 9 CX 9 CX 9 CX 10 CX 10 Peso(g) 0,17 0,30 0,38 0,30 0,31 Dose (mg/ml) 0,94 1,44 1,72 1,44 1,47 Dose (ml) 0,009 0,014 0,017 0,014 0,014

O segundo grupo denominado V ficou constitudo de V1, V2 e V3, sendo que cada um desses sub-grupos ficou constitudo por cinco animais para a

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administrao do valdecoxib. No grupo V, cada sub grupo tambm se constituiu de um animal para a administrao de placebo. Os animais receberam as doses de valdecoxib a cada dez horas, durante quatro dias, conforme a escala alomtrica (Quadro 5).

QUADRO 5 Organizao do sub grupo V1, que recebeu o AINE valdecoxib, conforme dosagem alomtrica, de 10/10 horas, por quatro dias. Animal V1.1 V1.2 V1.3 V1.4 V1.5 Gaiola CX 2 CX 3 CX 3 CX 3 CX 4 Peso (g) 0,49 0,27 0,29 0,33 0,29 Dose (mg/kg) 0,96 0,61 0,65 0,71 0,65 Dose (ml) 0,048 0,030 0,032 0,035 0,032

O sub-grupo V2 recebeu, da mesma forma, o medicamento valdecoxib conforme demonstrao no Quadro 6. QUADRO 6 Organizao do sub grupo V2, que recebeu o AINE valdecoxib, conforme dosagem alomtrica, de 10/10 horas, por quatro dias. Animal V2.1 V2.2 V2.3 V2.4 Gaiola CX 6 CX 7 CX 7 CX 7 Peso (g) 0,34 0,33 0,35 0,38 Dose (mg/kg) 0,73 0,71 0,75 0,79 Dose (ml) 0,036 0,035 0,037 0,039

43

V2.5

CX 8

0,26

0,60

0,030

Finalizando o grupo V, o sub-grupo V3 recebeu o medicamento cetoprofeno conforme demonstrao no Quadro 7.

QUADRO 7 Organizao do sub grupo V3, que recebeu o AINE valdecoxib, conforme dosagem alomtrica, de 10/10 horas, por quatro dias. Animal V3.1 V3.2 V3.3 V3.4 V3.5 Gaiola CX 10 CX 11 CX 11 CX 11 CX 12 Peso (g) 0,35 0,19 0,21 0,21 0,19 Dose (mg/kg) 0,75 0,47 0,51 0,51 0,47 Dose (ml) 0,037 0,023 0,025 0,025 0,023

No grupo K, o modelo utilizado foi de um co com 10 kg e, atravs da escala alomtrica utilizou-se a constante referente a mamferos placentrios. Os animais, ao final de cada respectivo perodo, foram eutanasiados de forma humanitria (Spinosa & Spinosa, 2002). Ao final de seis horas aps a administrao da ltima dose de cetoprofeno os animais do sub grupo K1 foram eutanasiados com utilizao de acepromazina 1%5 na dose de 10 mg/kg, via intramuscular, seguida da inalao de ter etlico6, atravs de caixa de induo. No sub grupo K2 os animais foram eutanasiados sete dias aps o trmino do tratamento e, por sua vez, no sub-grupo K3 os ratos foram eutanasiados quatorze dias aps o trmino do tratamento com o AINE
5 6

Acepran 1%.Univet S.A. So Paulo/SP. Cintica. Jand Qumica Indstria e Comrcio LTDA. So Paulo/SP.

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cetoprofeno, inibidor no seletivo para COXs. O mesmo aconteceu com os animais do grupo V, que receberam o tratamento com o valdecoxib, AINE inibidor seletivo para COX-2, com intervalos de 10/10 horas, durante 4 dias, baseando-se no modelo de peso representado por um homem com 70 kg, nesse grupo tambm se utilizou a constante referente a mamferos placentrios. No sub grupo V1 a eutansia foi realizada dez horas aps o trmino do tratamento. No sub grupo V2 a eutansia ocorreu sete dias aps. No subgrupo V3 a eutansia foi realizada quatorze dias aps o trmino da utilizao da droga. Aps o procedimento de eutansia, o sangue dos animais foi coletado, atravs de puno cardaca, e acondicionado em tubos de vidro. Por quinze minutos o sangue era depositado em banho-maria a 370C e aps colocado em centrfuga eletrnica por dez minutos com 1500 rpm. A seguir o plasma era aspirado por pipeta automtica, colocado em frascos tipo ependorff identificados para realizao da bioqumica. As amostras foram guardadas em congelamento a -10 0C, e os exames laboratoriais bioqumicos7 foram realizados, de forma seriada, no Laboratrio de Anlises Clnicas da Universidade de Cruz Alta, RS. Aps a coleta do sangue, os animais foram necropsiados. Observou-se na cavidade abdominal, o aspecto macroscpico do fgado e dos rins. O fgado foi removido, em sua totalidade, para posterior processamento histolgico e confeco de lminas. Optou-se tambm pela retirada de um dos rins, o esquerdo, para envio anlise histolgica. O material era lavado com soluo tampo8 e imediatamente imerso em formol 10% tamponado, utilizaram-se frascos plsticos com tampa, devidamente identificados, para a deposio do fgado e do rim. Aps o material era anexado a observao macroscpica e enviado ao Setor de Patologia da Universidade de Cruz Alta, RS. As lminas foram analisadas atravs de microscopia ptica.
7 8

Labtest Diagnstica S.A. Lagoa Santa/MG Fosfato de Na 0.2 M com pH 7,2.

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3.1 Processamento do material para confeco das lminas do fgado e rim: Fragmentos do fgado e rim foram coletados em partes especficas dos rgos; o processamento foi realizado aps a fixao em formol tamponado a 10% e clivagem do material. Aps procedeu-se a desidratao gradativa em srie crescente de lcool etlico, com trocas de hora em hora, conforme a seqncia: 70 GL, 80 GL, 90 GL, 96 GL at o fim do dia, quando ento se deixou, o material, no lcool 100 GL durante toda noite. No dia seguinte desidratao, o material foi lavado com xilol por 30 minutos. Trocou-se novamente o xilol, permanecendo por mais 30 minutos dentro da estufa a 48C. De hora em hora se fez a troca da parafina de baixo ponto de fuso (46C48C), totalizando 3 horas. Repetiu-se este procedimento, porm com a parafina de alto ponto de fuso (56C-58C). Para o emblocamento do material procedeu-se o corte longitudinal em frma apropriada, despejando-se, em seguida, parafina de emblocamento (parafina de alto ponto de fuso misturada com 10% de cera de abelha). Para o corte no micrtomo efetuou-se seces de espessura de 7m, colocando-as sobre a superfcie de gua morna para completa distenso do material. A pelcula sobrenadante foi capturada com uma lmina de vidro atravs de aderncia. Esperou-se secar, quando ento se removeu o excesso de parafina para iniciar a colorao com hematoxilina-eosina (Gurr, 1963). Finalizou-se com a montagem da lamnula sobre o tecido na lmina, obedecendo-se o tempo de secagem mnimo de 8 horas. Aps a limpeza da lmina a mesma foi identificada conforme seu grupo e sub grupo.

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3.2 Testes de enzimas hepticas:

Estes testes podem indicar leso hepatocelular e aumento na produo enzimtica conseqente a leso induzida por drogas (MEYER, 1995). Nas amostras coletadas foram realizados os testes bioqumicos da enzima alanina aminotransferase (ALT), da aspartato aminotransferase (AST), da fosfatase alcalina (FA) atravs de kits comerciais especficos.

4 RESULTADOS

4.1 Avaliao bioqumica do fgado:

A avaliao plasmtica de ALT/TGP foi realizada atravs da metodologia cintica-UV introduzida por Karmen (1955), sendo otimizada por Henry et al., em 1960, procedimento esse que ganhou aceitao mundial por ser rpido, preciso e exato. Os valores foram obtidos atravs de analisador automtico. Da mesma forma foi realizada a avaliao plasmtica referente a AST/TGO utilizando-se a determinao atravs da metodologia cintica e leitura atravs de analisador automtico. A FA demonstrada com a utilizao de um substrato, a timolftalena, que permite a medida direta da amostra, por alterao do pH (Roy, 1970). A anlise laboratorial bioqumica do plasma sangneo, para averiguao da funo heptica, de animais que receberam o cetoprofeno, via IM, durante dois dias est disposta, individualmente, em tabelas.

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Salienta-se que foi possvel colher o sangue dos animais eutanasiados, esclarecendo que no houve condies de colheita do material para a bioqumica, dos ratos que vieram a bito. A avaliao bioqumica da funo heptica dos Rattus norvegicus, representando o sub grupo K1 est disposta na Tabela 2. Os animais foram eutanasiados seis horas aps a administrao da ltima dose do medicamento cetoprofeno. Salienta-se que todos os resultados, referentes avaliao bioqumica de ALT/TGP, AST/TGO e FA, dispostos nas tabelas so representados pela unidade UI/l.

TABELA 2 - Valores da funo heptica referente a ALT/TGP, AST/TGO e FA do sub-grupo K1.

AMOSTRA K1.1 K1.2 K1.3 K1.4 K1.5

ALT/TGP * 52 41 282 **

AST/TGO * 398 199 377 **

FA * 89 26 56 **

* Animal morreu dia 31/03, algumas horas aps receber a ltima dose do cetoprofeno. ** Animal morreu dia 30/03, sem receber a ltima dose do cetoprofeno.

A bioqumica, dos animais do sub grupo K2 est na Tabela 3, os ratos foram eutanasiados sete dias aps a ltima administrao de cetoprofeno.

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TABELA 3 - Valores da funo heptica referente a ALT/TGP, AST/TGO e FA do sub grupo K2.

AMOSTRA K2.1 K2.2 K2.3 K2.4 K2.5

ALT/TGP * 72 92 ** **

AST/TGO * 370 380 ** **

FA * 89 95 ** **

* Animal morreu dia 31/03, sem receber a ltima dose do cetoprofeno. ** Animal morreu dia 01/04.

A avaliao bioqumica da funo heptica dos Rattus norvegicus, representando o sub-grupo K3 est disposta na Tabela 4, nesse grupo os animais foram eutanasiados quatorze dias aps a ltima administrao do medicamento cetoprofeno.

TABELA 4 - Valores da funo heptica referente a ALT/TGP, AST/TGO e FA encontrados nos animais do sub-grupo K3.

AMOSTRA K3.1 K3.2 K3.3 K3.4 K3.5

ALT/TGP * 52 98 * 102

AST/TGO * 382 399 * 410

FA * 79 93 * 108

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* Animais morreram dia 02/04.

No grupo V, os animais receberam o AINE valdecoxib. Dez horas aps a administrao da ultima dose, o sub-grupo V1 foi eutanasiado para a coleta de material, o plasma foi separado para a anlise bioqumica do fgado, semelhante ao grupo K, assim no grupo V as amostras quantificaram a ALT, a AST e FA, sendo que os valores obtidos nesse experimento esto dispostos na Tabela 5.

TABELA 5 - Valores da funo heptica referente a ALT/TGP, AST/TGO e FA encontrados nos animais no sub grupo V1. AMOSTRA V1.1 V1.2 V1.3 V1.4 V1.5 ALT/TGP 52 73 68 78 57 AST/TGO 172 282 314 317 272 FA 34 34 37 30 30

A bioqumica heptica do sub grupo V2 est na Tabela 6, nesse grupo os animais foram eutanasiados sete dias aps a ltima administrao de valdecoxib.

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TABELA 6 - Valores da funo heptica referente a ALT/TGP, AST/TGO e FA encontrados nos animais do sub grupo V2. AMOSTRA V2.1 V2.2 V2.3 V2.4 V3.5 ALT/TGP 31 104 52 47 47 AST/TGO 267 199 120 146 136 FA 27 36 48 46 32

A avaliao bioqumica da funo heptica dos ratos (Rattus norvegicus), representando o sub-grupo K3 est disposta na Tabela 7, nesse grupo os animais foram eutanasiados quatorze dias aps a ltima administrao de valdecoxib.

TABELA 7 - Valores da funo heptica referente a ALT/TGP, AST/TGO e FA encontrados nos animais do sub grupo V3.

AMOSTRA V3.1 V3.2 V3.3 V3.4 V3.5

ALT/TGP 62 68 41 36 36

AST/TGO 534 513 157 172 309

FA 59 48 51 57 48

No grupo controle ou placebo, como foi nomeado nesse experimento, os

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animais receberam dose de 0,01 ml de soluo fisiolgica, via IM, na regio muscular compreendida entre os msculos semitendneo e semimembranceo. Esses animais foram colocados aleatoriamente nas caixas entre os grupos K e V para que se pudessem estabelecer critrios de comparao para a bioqumica srica bem como padres histolgicos para a espcie em estudo. Esse grupo controle contou com um total de seis exemplares de ratos (Rattus norvegicus), os quais apresentaram um padro de normalidade para a ALT/TGP que variou de 26 a 78 UI/l com mdia de 52 UI/l. Em relao ao valor bioqumico para a AST/TGO a variao deu-se entre 157 UI/l a 246 UI/l caracterizando mdia de 211 UI/l; e na avaliao da FA os valores encontrados variaram de 28 UI/l a 55 UI/l com mdia para a espcie de 36 UI/l. Na Tabela 8, esto representados os dados bioqumicos de funo heptica dos animais que receberam soluo fisiolgica por via intramuscular, representantes do grupo placebo.

TABELA 8 - Valores da funo heptica, referente a ALT/TGP, AST/TGO e FA encontrados nos animais pertencentes ao grupo placebo, representado pelos grupos: PK1, PK2, PK3, PV1, PV2 e PV3.

AMOSTRA PK.1 PK.2 PK.3 PV.1 PV.2 PV.3

ALT/TGP 78 62 36 57 52 26

AST/TGO 193 225 188 246 157 261

FA 36 28 55 31 36 29

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4.2 Avaliao macroscpica:

Durante a necropsia dos animais foram avaliados macroscopicamente o fgado, o rim esquerdo e o aspecto da cavidade abdominal. O exame macroscpico, realizado no sub grupo K1, est demonstrado na Tabela 9.

TABELA 9 - Aspectos macroscpicos observados na necropsia dos animais do sub grupo K1, eutanasiados sete dias aps a ltima administrao do cetoprofeno.

Animal K1.1*

Fgado Frivel, manchas enegrecidas Frivel, manchas enegrecidas Pouco frivel Frivel Frivel

Rim S/A S/A S/A S/A S/A

Cavidade Abdominal Lquido serosanguinolento Lquido serosanguinolento S/A Lquido serosanguinolento Lquido serosanguinolento

K1.2

K1.3 K1.4

K1.5*

* Animais morreram antes da necropsia.

A observao macroscpica do sub grupo K2 est demonstrado na Tabela 10.

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TABELA 10 - Aspectos macroscpicos observados na necropsia dos animais do sub grupo K2, eutanasiados sete dias aps a ltima administrao do cetoprofeno.

Animal K2.1*

Fgado Bastante frivel, manchas escuras Bastante frivel, manchas escuras e claras Frivel, manchas escuras Frivel, manchas escuras Frivel, secreo presso, rugoso

Rim Colorao escura S/A

Cavidade Abdominal Lquido serosanguinolento Lquido serosanguinolento

K2.2

K2.3

S/A S/A S/A

Lquido serosanguinolento Lquido serosanguinolento Lquido serosanguinolento

K2.4*

K2.5*

* Animais morreram antes da necropsia.

O exame macroscpico do sub-grupo K3 est demonstrado na tabela 11.

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TABELA 11 - Aspectos macroscpicos observados na necropsia dos animais do sub grupo K3, eutanasiados 14 dias aps a ltima administrao do cetoprofeno.

Animal K3.1*

Fgado Aderido a outros rgos, fibrina

Rim Colorao escura

Cavidade Abdominal Lquido purulento, fibrina, aderncia serosa de mltiplos rgos

K3.2

Manchas enegrecidas, aderido a outros rgos, fibrina Manchas enegrecidas, aderido a outros rgos, fibrina Bastante frivel Extremamente frivel, manchas claras, fibrina

S/A

S/A

K3.3

S/A

S/A

K3.4*

S/A S/A

Lquido serosanguinolento Lquido purulento, fibrina

K3.5*

* Animais morreram antes da necropsia.

No Grupo V onde se procedeu a administrao do valdecoxib, foi realizada a observao e avaliao dos sub grupos V1, V2 e V3, em diferentes tempos aps a ltima administrao da droga.

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O exame macroscpico do sub grupo V1 est demonstrado na Tabela 12. TABELA 12 - Aspectos macroscpicos observados na necropsia dos animais do sub grupo V1, eutanasiados dez horas aps a ltima administrao da droga.

Animal V1.1 V1.2 V1.3 V1.4 V1.5

Fgado S/A Aderido ao bao Pouco frivel S/A Aderido a outros rgos

Rim S/A S/A S/A S/A S/A

Cavidade Abdominal S/A S/A S/A S/A S/A

O exame macroscpico do sub grupo V2 est demonstrado na Tabela 13.

TABELA 13 - Aspectos macroscpicos observados na necropsia dos animais do sub grupo V2, eutanasiados sete dias aps a ltima administrao da droga.

Animal V2.1 V2.2 V2.3 V2.4 V2.5

Fgado S/A Aderido ao bao Pouco frivel S/A Aderido a rgos

Rim S/A S/A S/A S/A S/A

Cavidade Abdominal S/A S/A S/A S/A S/A

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O exame macroscpico para o sub grupo V3, em relao ao fgado, rim e cavidade abdominal est demonstrado na Tabela 14. TABELA 14 - Aspectos macroscpicos observados na necropsia dos animais do sub grupo V3, eutanasiados 14 dias aps a ltima administrao da droga.

Animal V3.1 V3.2 V3.3 V3.4 V3.5

Fgado S/A Frivel S/A S/A S/A

Rim S/A S/A S/A S/A S/A

Cavidade Abdominal S/A S/A S/A S/A S/A

Nos grupos placebo, compreendidos por PK e PV, aos quais administrou-se soluo fisiolgica, no foi observado, macroscopicamente, alterao digna de nota; esses resultados esto dispostos na Tabela 15. TABELA 15 - Aspectos macroscpicos observados nos animais dos grupos placebo, representados por: PK1, PK2, PK3, PV1, PV2 e PV3.

Animal PK.1 PK.2 PK.3 PV.1 PV.2

Fgado S/A S/A S/A S/A S/A

Rim S/A S/A S/A S/A S/A

Cavidade Abdominal S/A S/A S/A S/A S/A

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PV.3

S/A

S/A

S/A

4.3 Avaliao microscpica:

A avaliao microscpica do fgado e do rim esquerdo dos ratos (Rattus norvegicus) foi feita atravs de microscopia ptica. O material, depois de acondicionado adequadamente, era processado conforme metodologia j citada. No grupo K, sub grupo K1, o exame de microscopia ptica revelou os resultados colocados na Tabela 16. TABELA 16 - Aspectos histolgicos observados aps a microscopia optica do fgado e rim esquerdo, dos animais do sub grupo K1.

Animal K1.1

Fgado S/A S/A S/A S/A S/A

Rim Degenerao e necrose tubular multifocal acentuada Degenerao e necrose tubular multifocal discreta S/A Degenerao e necrose tubular multifocal moderada Degenerao e necrose tubular multifocal moderada

K1.2

K1.3 K1.4

K1.5

No grupo K, sub grupo K2, a microscopia revelou os dados dispostos na Tabela 17.

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TABELA 17 - Aspectos histolgicos observados aps a microscopia ptica do fgado e rim esquerdo, dos animais do sub grupo K2.

Animal K2.1 K2.2

Fgado S/A Apoptose discreta e aleatria Apoptose discreta e aleatria S/A S/A

Rim S/A Degenerao e necrose tubular multifocal moderada Degenerao e necrose tubular multifocal moderada S/A Degenerao e necrose tubular multifocal acentuada

K2.3

K2.4 K2.5

No grupo K, sub grupo K3, o exame de microscopia ptica revelou os resultados colocados na Tabela 18.

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TABELA 18 - Aspectos histolgicos observados aps a microscopia ptica do fgado e rim esquerdo, dos animais do sub grupo K3.

Animal K3.1

Fgado Infiltrado inflamatrio mononuclear, linfcitos, macrfagos, fibrina Tumefao celular discreta e difusa, mltiplos microvacolos Tumefao celular discreta e difusa Apoptose com distribuio aleatria Apoptose com distribuio aleatria

Rim Degenerao e necrose tubular multifocal moderada S/A S/A Degenerao e necrose tubular multifocal acentuada Degenerao e necrose tubular multifocal discreta

K3.2

K3.3 K3.4

K3.5

No grupo V, sub grupo V1, a microscopia revelou os dados dispostos na Tabela 19.

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TABELA 19 - Aspectos histolgicos observados aps a microscopia ptica do fgado e rim esquerdo, dos animais do sub-grupo V1.

Animal V1.1 V1.2 V1.3 V1.4 V1.5

Fgado Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa S/A Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa

Rim S/A S/A S/A S/A S/A

No grupo V, sub grupo V2, a microscopia revelou os dados dispostos na Tabela 20. TABELA 20 - Aspectos histolgicos observados aps a microscopia ptica do fgado e rim esquerdo, dos animais do sub-grupo V2.

Animal V2.1 V2.2 V2.3 V2.4 V2.5

Fgado Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa

Rim S/A S/A S/A S/A S/A

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No grupo V, sub-grupo V3, a microscopia revelou os dados dispostos na Tabela 21.

TABELA 21 - Aspectos histolgicos observados aps a microscopia ptica do fgado e rim esquerdo, dos animais do sub-grupo V3.

Animal V3.1 V3.2 V3.3 V3.4 V3.5

Fgado Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa Tumefao celular discreta e difusa

Rim S/A S/A S/A S/A S/A

Nos grupos placebo PK e PV, aos quais administrou-se soluo fisiolgica, no foi encontrada qualquer alterao microscpica no fgado e rim esquerdo, sendo esses resultados situados na Tabela 22.

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TABELA 22 - Aspectos histolgicos observados nos animais dos grupos placebo, representados por: PK1, PK2, PK3, PV1, PV2 e PV3.

Animal PK.1 PK.2 PK.3 PV.1 PV.2 PV.3

Fgado S/A S/A S/A S/A S/A S/A

Rim S/A S/A S/A S/A S/A S/A

5 DISCUSSO

A administrao de AINEs uma prtica habitual para o tratamento de processos inflamatrios e dolorosos em animais (Tasaka, 2002; Boothe, 2003). O objetivo para a utilizao dessas drogas, alcanar uma analgesia efetiva, sem depresso do SNC, bem como a reduo do processo inflamatrio e suas repercusses (Clark, 1999). Quando se utilizam os AINEs, seus efeitos farmacolgicos se manifestam atravs da reduo da inflamao, da dor e tambm na capacidade de deprimir o centro trmico, reduzindo assim, a temperatura corprea (Bogan, 1983; Boothe, 1989; Pirabot et al., 1997; Duncan, 2002). Produzem esses efeitos atravs da diminuio nas PGs pela inibio das COXs (Boothe, 1989; Adams, 1992; Booth, 1992; Andrade, 1997; Feria, 1998; Tasaka, 2002), substncias conhecidas

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globalmente com o nome de eicosanides (Isel, 1998; Oliveira 2004). A descoberta de que a enzima COX existe em, pelo menos, duas formas diferentes, deu nova fora para o campo da pesquisa em relao a analgesia e inflamao (Mathews, 1996; Duncan, 2002; Beubler, 2003; Olivera, 2004). Observa-se que diferentes autores citados acima, bem como em todo esse estudo, esclarecem o processo inflamatrio, a farmacognosia, farmacodinmica e farmacocintica de AINEs, inibidores seletivos ou no. Vale salientar, que no presente experimento, foram utilizados animais sem alteraes clnicas, no apresentando fatores que poderiam desencadear processo inflamatrio e doloroso. As medicaes foram utilizadas a fim de buscar esclarecimentos sobre a utilizao de dois tipos distintos de AINEs, utilizados em pequenos roedores, atravs da sugesto de doses e intervalos de tempo, segundo a alometria. O uso da extrapolao alomtrica, que leva em conta a anatomia, dispndio energtico para a manuteno, hbitos alimentares, tamanho corporal, taxa metablica, permitiu, a princpio, que se administrassem doses adequadas para pequenos roedores, respeitando sua fisiologia. Assim, a medicao foi testada na busca de segurana para sua prescrio, atravs do enfoque de avaliao heptica, visto que no se tm estudos, at o presente momento, avaliando fgado de animais aps a utilizao de AINEs; essa afirmao concorda com Krummel et al. (2000) e Wright (2002), que destacam a necessidade de realizao de estudos nos quais se observem a potncia, seletividade, dosagem e tempo de uso de antiinflamatrios no esteroidais para uma prescrio mais segura. Embora a utilizao desses medicamentos, na prtica clnica e anestsica de animais, seja feita em larga escala, pode-se dizer que muitas vezes essa utilizao de forma emprica, pois no se conhecem claramente os efeitos farmacolgicos benficos ou indesejveis. Segundo Duncan (2002), estudos relacionados com dor e inflamao em animais, vm sendo realizados por quase dois mil anos, entretanto, apenas nas ltimas dcadas ocorreram avanos reais na compreenso da dor e na implementao de sua terapia efetiva; muitas vezes agentes

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analgsicos comuns, quando utilizados em animais no apresentam segurana efetiva em relao posologia, mesmo em animais de companhia. Essa afirmao sustenta a necessidade da busca de um mtodo seguro para a indicao de medicamentos para animais. A extrapolao de doses de uma espcie para outra, pode ser equivocada levando ao emprego de sub doses, sem efeito algum, ou sobre-doses, caracterizando o aparecimento de efeitos colaterais e deletrios ao paciente (Flecknell, 1996). Nesse estudo optou-se pela utilizao de dois AINEs distintos, o primeiro inibe cicloxigenase-1 e 2, inibindo tanto PGs constitutivas, como tambm as PGs responsveis pela inflamao e dor; o segundo AINE um medicamento, cuja forma injetvel foi recm lanada no Brasil, inibe seletivamente a cicloxigenase2 tendendo a produzir menos efeitos prejudiciais, protegendo assim tecidos como o gastrointestinal, o renal, o heptico e o sangneo. Na avaliao bioqumica realizaram-se provas de funo heptica, no grupo K no foi possvel a colheita de sangue de todos os animais. Dos quinze ratos (Rattus norvegicus) sete morreram antes do perodo necessrio, conforme cada grupo, para a colheita do soro. Esse nmero representa aproximadamente 46% do total de animais do grupo K; essa informao corrobora com dados publicados por Prescott (1986), nos quais o autor afirma que analgsicos no narcticos como o cido acetilsaliclico e o paracetamol, podem produzir um dano mais severo, podendo ser associado ao fracasso renal e heptico, levando pacientes a bito por encefalopatia, porm o autor expressa que o risco relativo pela utilizao de AINEs no seletivos no pode ser estabelecido pois a incidncia em relao ao seu uso no completamente declarada; e segundo Farmcia On-Line (2003) a encefalopatia pode ser um fato eminente aps a utilizao de AINEs. Para Garcia-Rodriguz (1994) a utilizao do acetaminofeno, em humanos, por 48 a 72 horas pode produzir intoxicao, sendo seus sinais representados por hemorragia, encefalopatia, coma e morte. Villar et al. (1998), afirmam que a

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toxicose dos AINEs deve representar preocupao aos clnicos, pois mesmo uma nica ingesto pode ocasionar alteraes no fgado e eritrcitos de ces e gatos. Em relao a doses txicas, essas podem ser compreendidas pelo dobro ou triplo da dose teraputica, causando hepatotoxicidade grave potencialmente fatal, esses efeitos ocorrem devido a saturao das enzimas hepticas que catalizam reaes de conjugao normais (Farmcia On-Line, 2003). Na avaliao bioqumica heptica dos animais dos grupos placebo obtiveram-se as seguintes mdias: 52 UI/l para a ALT, 212 UI/l para AST e 36 UI/l para a FA. Esses resultados esto compatveis com os de Kaneco et al. (1997). Nos grupos K1, K2 e K3 observou-se um aumento na AST do soro, nos animais onde foi possvel realizar a colheita; como mdia os animais apresentaram 325 UI/l, 375 UI/l e 397 UI/l, respectivamente. Esse aumento na AST tambm foi constatado por McPhail & Lappin (1998), em relao avaliao heptica de ces tratados com o AINE no seletivo, carporfeno. Porm, Parton et al. (2000), utilizando o mesmo medicamento, em dose nica, no observaram resultados significativos para essa espcie. Para Fiorucci et al. (1992) o nvel da AST, em ratos, pode dobrar mediante a utilizao do acetaminofeno, podendo indicar uma necrose centrolobular do hepatcito. Para Traversa et al. (2003), esse aumento por ns observado de ocorrncia comum, havendo necessidade de monitorao heptica em pacientes tratados por um perodo considervel, com AINEs no seletivos. Fiorucci et al. (1992), McPhail & Lappin (1998), Traversa et al. (2003), afirmam que os valores de AST podem aumentar, normalmente, em duas vezes, e em casos mais severos observa-se um aumento superior a oito vezes do valor considerado normal em relao a humanos. Em relao enzima ALT, apenas o grupo K1 apresentou aumento da mesma, em relao a parmetros considerados normais para a espcie, com mdia de 125 UI/l. Esse fato coincide com afirmaes de Taylor et al. (1994), nesse estudo os autores constataram que felinos tratados com o AINE flunixim

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meglumine apresentaram um valor bastante elevado de ALT nos primeiros dias do tratamento, sendo que a seguir os valores tendiam a voltar ao normal ou prximo dele, sugerindo-se que os gatos podem desenvolver certa tolerncia droga, embora o mecanismo dessa tolerncia no fosse revelado, insinuando apenas que esse fato pode ocorrer porque a meia vida do flunixim relativamente curta. Os valores de FA apresentaram um aumento crescente entre os grupos K1, K2 e K3, sendo as mdias citadas, respectivamente: 57 UI/l, 92 UI/l e 93 UI/l; esses achados, podem ser explicados por Kaneco et al. (1997); que afirmam que os aumentos de FA podem estar associados induo medicamentosa, e que em geral, essas elevaes sricas, de fosfatase alcalina, ocorrem pelo aumento da sntese heptica, podendo originar uma necrose heptica aguda. Para Traversa et al. (2001) a FA pode estar aumentada em duas vezes o seu valor normal aps a utilizao de AINEs, no significando, necessariamente, uma leso heptica; afirmaes essas que puderam ser observadas, de modo claro, nesse estudo. Na avaliao bioqumica do grupo V, o aumento da ALT se deu de forma decrescente, ou seja, o valor mediano maior de 164 UI/l foi observado no sub grupo V1, seguido dos valores mdios de 56 UI/l e 49 UI/l, respectivamente, para V2 e V3; esses resultados, coincidem com as informaes publicadas por Salido et al. (2001), as quais revelam que aps a utilizao de AINEs seletivos, h um aumento da ALT, com posterior decrscimo da mesma, at sua normalizao aps o trmino da prescrio do medicamento. Nesse estudo constatou-se o aumento progressivo da enzima AST para os sub grupos V1 e V3, com mdias de 271 UI/l e 337 UI/l; para OBeirne & Cairs (2001), esse aumento de AST poder ser crescente, sendo que, devemos estar atentos em relao ao perfil de segurana dos AINEs mesmo que seletivos; para esses autores e, ainda, para Traversa et al. (2003) mesmo os COXIBs podero estar associados a hepatotoxicidade severa, principalmente, em pacientes idosos, com doenas virticas ou auto imunes.

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Em relao a fosfatase alcalina, do grupo V, os valores encontram-se dentro dos normais para a espcie, com ligeiro aumento entre V1, V2 e V3. Essas observaes vm ao encontro de Chavez & DeKorte (2003), que declaram que AINEs seletivos, como o valdecoxib, parecem no aumentar significativamente a fosfatase alcalina de pacientes adultos, produzindo menos toxicidade heptica; tambm Goldstein et al. (2003), em estudo de longo prazo, afirmaram que o valdecoxib at mesmo em doses altas, no eleva os nveis sricos de fosfatase alcalina, sendo bem tolerado durante a metabolizao heptica. Na avaliao macroscpica, observou-se o aspecto geral do abdmen, fgado e rim esquerdo. Dos quinze animais do grupo K, sub grupos K1, K2 e K3, onze animais ou 73,33% apresentaram coleo de lquido no abdmen, dos quais, nove animais ou 60% apresentaram lquido serosanguinolento na cavidade abdominal. Esse fato pode ser justificado por Garcia-Rodriguz et al. (1994), j que esses autores citam que o surgimento de insuficincia heptica inicial, mesmo que considerada leve, quando induzida por drogas, como os AINEs, pode levar a manifestao de ascite. Esse achado experimental sustenta tambm as afirmaes de Diaz-Cruz et al. (1996), as quais concluem, em pesquisa realizada em aves, que uma resposta integrada e complexa se origina pela tenso oxidativa do hepatcito, levando ao aparecimento da ascite. Ainda na observao macroscpica dois ou 13,33% dos animais do grupo K, sub grupo K3, apresentaram lquido purulento e presena de fibrina aderida ao fgado, estmago e dispersa na cavidade abdominal. Essas alteraes justificamse pela ocorrncia da ruptura do estmago, correlacionando-se com as afirmaes de Forsyth et al. (1996) e Oliveira (2001) nas quais os autores salientam que tanto o co quanto o homem, quando tratados com AINEs, podem apresentar perfuraes e ulceraes, atravs da leso da mucosa gastrointestinal por mecanismos, j citados, sistmicos e tpicos. Sabe-se que os AINEs tradicionais, como o cetoprofeno, aumentam em 3,5% o risco de sangramentos gastrointestinais, resultando em lceras perfuradas, anemia crnica e morte

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(Farmcia On-Line, 2003). No grupo V, onde se utilizou o AINE inibidor com seletividade para COX-2 nenhum dos animais, ou 100% deles, apresentaram qualquer alterao ao exame macroscpico do fgado, rim e cavidade abdominal, sugerindo assim, um perfil de segurana maior dos COXIBs em relao a AINEs clssicos, como o cetoprofeno. Da mesma forma Valat et al. (2001) e Accardo et al. (2003), concluram que pacientes tratados com o meloxicam, inibidor de mdia seletividade para COX-2, apresentaram um nmero bastante reduzido de casos de hemorragia, perfurao e ulcerao do trato digestivo superior. Em estudo recente Goldstein et al. (2003), compararam o valdecoxib como naproxeno e comprovam a segurana na utilizao do valdecoxib at mesmo em doses suprateraputicas confirmando tambm, dados publicados por Langman et al. (1999), Grant & Cannon (2000), Drdon et al. (2001) e Guerra et al. (2001), nos quais esses autores salientam a proteo gastrointestinal das drogas seletivas para COX-2, diminuindo ou excluindo o aparecimento de sinais que levam a hemorragias ou perfuraes. A posio de Salido et al. (2001), tambm confirmam os dados observados, macroscopicamente, nesse estudo em relao proteo gstrica dos AINEs seletivos. Chavez & DeKorte (2003), constataram atravs de uma reviso literria bastante abrangente, que o valdecoxib produz baixssima toxicidade gastrointestinal, quando comparado com AINEs convencionais. Para Perini et al. (2004), os inibidores seletivos produzem um efeito analgsico comparvel ou superior a AINEs convencionais, com toxicidade do trato gastrointestinal bastante reduzida. Essas afirmaes sustentam os achados de Albornoz (1997), Langman et al. (1999), Ginori & Barreda (2000), Grant & Cannom (2000), Salido et al. (2001) e Olivera (2004), de que os efeitos gastrointestinais, podem ser definitivamente os principais problemas relacionados com o uso de AINEs no seletivos para COX2. Para Traversa et al. (2003), a incidncia, em hospitais, de pacientes com

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complicao gastroduodenal sria (sangramento e perfuraes) quase 10 vezes mais alta em relao a hepatotoxicidade. Na avaliao macroscpica do fgado nos sub grupos K1 e K2 no foram observadas alteraes representativas no fgado, j no sub grupo K3, dos cinco animais quatro apresentaram presena de fibrina aderida ao rgo e dispersa na cavidade abdominal, fato esse que pode ter sido originado pela toxicidade gstrica do medicamento, segundo Papich (2003). Na avaliao microscpica nos animais do sub-grupo K1, nenhum dos animais apresentou evidncia de alterao heptica, concordando com Silveira et al. (2004), que realizou um estudo comparativo com o cetoprofeno, que frmaco no causou alterao macroscpica severa no fgado de Rattus norvegicus. Em outra pesquisa, o mesmo autor, afirma que AINEs no seletivos, como o cetoprofeno, o flunixin meglumine, e o piroxican, podem ser utilizados com segurana durante cinco dias, em doses teraputicas para ces, sem evidncia da presena de efeitos txicos (Silveira, 2000). Porm Garcia-Rodriguz et al. (1994) e Duncan (2002), ressaltam que os efeitos adversos de AINEs no seletivos podem incluir danos hepticos, devendo ser considerada a relao eficcia-toxicidade e Traversa et al. (2003), declaram que o risco na utilizao de AINEs em relao ao fgado, no pode ser considerado pequeno, porque o mecanismo em potencial gerador de hepatotoxicidade desconhecido, sendo avaliados, na maioria das vezes, efeitos hepticos sintomticos aps a utilizao dessas drogas. No sub grupo K2, dois animais apresentaram apoptose discreta e aleatria sendo que, esse achado no representa alterao heptica significativa segundo Carlton (1998), pois leses focais e discretas no podem produzir efeitos como a perda da funo heptica normal (Carlton, 1998; Kerr, 2002). J no sub grupo K3, todos os animais apresentaram alteraes no fgado, como infiltrado mononuclear, fibrina, tumefao e apoptose concordando com Carlton (1998), que cita o metabolismo heptico de Fase 1, atravs da enzima

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citocromo P-450, como o maior sistema enzimtico do fgado envolvido com o metabolismo de drogas. Sendo que esse processo pode tambm bioativar algumas substncias nocivas em uma forma mais txica, podendo com o tempo, causar uma leso heptica (Kerr, 2002; Traversa et al., 2003). Para Carlton (1998) a morfologia da leso heptica induzida pode variar, consideravelmente, com o tipo, a dose e a durao da exposio toxina e reaes do hepatcito agresso txica aguda pois incluem tumefao celular e acmulo de lipdios. A tumefao celular citada por Carlton confirma as observaes deparadas no sub grupo K3, onde trs animais apresentaram tumefao celular discreta e difusa. Para Garcia-Rodriguz (1994) o fgado tem uma grande capacidade de reserva funcional, portanto seu funcionamento no de altera quando existem apenas leses focais localizadas, mesmo assim perante a injria com drogas, como o acetaminofeno e drogas AINEs no seletivas, possvel observar alteraes histolgicas como tumefao, apoptose e necrose do hepatcito. Concordando com a apoptose, observada nesse estudo, Fiorucci et al., (2002) declara que os hepatcitos de ratos quando tratados com o acetaminofeno podem apresentar tumefao e morte induzida. A infiltrao celular, observada no fgado dos animais, coincide tambm, com achados de Shimpo et al. (1990) que, em estudo realizado com ces, constataram nos animais sobreviventes, aps a terapia com AINE tradicional, infiltrao celular heptica e necrose do hepatcito. Prem Silveira (2000), no encontrou alterao histopatolgica em ratos envolvidos na terapia por 15 dias, com o AINE cetoprofeno, obedecendo a intervalo de 24 horas. Na avaliao macroscpica do rim esquerdo dos animais pertencentes ao grupo K, no se constataram alteraes, porm na avaliao microscpica do rim, independente do sub-grupo, visualizou-se em nove animais ou 60% deles degenerao e necrose tubular sendo que a necrose tubular variou de multifocal discreta a acentuada, concordando plenamente com Shimpo et al. (1990), que afirmam que a utilizao de AINEs semelhantes ao cetoprofeno podem produzir

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dilatao, degenerao e necrose tubular renal. Essas observaes sustentam a opinio de Carlton (1998); o autor declara que a necrose tubular ocorre por dois mecanismos gerais: isquemia e nefrotoxididade. Para Elwood et al. (1992), os AINEs tradicionais como o flunixim meglumine e o cetoprofeno podem causar nefrite analgsica, culminando em insuficincia renal aguda e falncia renal crnica, mantendo a opinio de Guerra e cols. (2001) e de Oliveira (2001), afirmando que os efeitos adversos renais gerados por AINEs no seletivos, parecem ser dependentes das PGs, produzidos pela diminuio do fluxo sangneo renal, podendo causar desde nefrite at insuficincia renal crnica. A degenerao e necrose tubular acentuada do rim, observada nesse estudo, um dado bastante semelhante ao citado por Krummel et al. (2000); em estudo realizado em pessoas, os autores concluram que o cetoprofeno, mesmo quando utilizado por via drmica, pode induzir o aparecimento de necrose tubular gerando uma insuficincia renal aguda, quando utilizado, por cinco dias, em duas aplicaes dirias. Esses autores afirmam que o fracasso renal, uma condio eminente aps a utilizao do cetoprofeno e que sua prescrio deve ser terminantemente abolida em pacientes de risco ou idosos. O uso de AINEs na espcie humana, no pode ser simplesmente extrapolado, de forma simples, para animais, pois diversos fatores que influenciam na farmacocintica e farmacodinmica desses medicamentos, apresentam um comportamento diferente em relao espcie a ser considerada (Silveira, 2000). Portanto, muito importante considerar a relao eficcia/toxicidade no caso de qualquer AINE em particular, antes de ser administrado em uma determinada espcie (Duncan, 2002). Na observao microscpica do fgado no grupo V, independente do sub grupo, foi constada tumefao celular discreta e difusa do hepatcito, esse achado confirma a publicao de Beubler (2003), na qual o autor relata que esse efeito pode ser esperado durante a metabolizao do parecoxib/valdecoxib,

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atravs da biotransformao pelo sistema citocromo P450; e segundo Carlton (1998) a tumefao celular representa uma reao normal do hepatcito frente agresso txica aguda, podendo progredir para necrose, se a intoxicao for persistente e suficientemente grave. interessante salientar que o valdecoxib no produziu nenhuma alterao microscpica no rim; esse achado consolida os dados relatados por McMurray & Hardy (2002), onde se questionam os efeitos deletrios entre AINEs seletivos e no seletivos, afirmando que drogas como o valdecoxib pode apresentar uma segurana maior em relao funo renal dos pacientes. Esse fato tambm pode ser explicado porque os COXIBs, no rim, interferem menos sobre os mecanismos de regulao, se comparados com antiinflamatrios convencionais (Salido et al., 2001), podendo aportar um benefcio teraputico com adequado perfil de tolerabilidade (Cheer & Goa, 2001; Salido et al., 2001 e Oliveira 2004). Para Redrobe (2002), as doses de AINEs empregadas em pequenos animais como roedores, coelhos, aves e rpteis so muitas vezes empricas e podem no estar adequadamente aprovadas para essas espcies. De acordo com Silveira (2000), fatores como o pH do estmago, a via de administrao, o ciclo entero-heptico e a dose capaz de atingir um nvel plasmtico efetivo, so condies que requerem a realizao de estudos aprofundados em cada espcie, tornando-se relevante a busca de parmetros que possam oferecer segurana na prescrio. Para Wright (2002), deve-se observar a potncia, seletividade, farmacocintica, dosagem e durao de uso dos AINEs. Nesse trabalho, os dois ltimos parmetros citados por Wright: dosagem e tempo de utilizao, foram estabelecidos atravs da alometria, na tentativa de obterem-se doses mais efetivas para animais de pequeno porte, com metabolismo bastante particular diferenciando-se de animais domsticos como ces ou gatos. Essas relaes tambm so salientadas por Flecknell (1996). Dessa forma, a extrapolao alomtrica torna-se um instrumento capaz de

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auxiliar no clculo de doses empregadas para o tratamento de espcies menores ou selvagens, justificando a importncia do seu emprego, sendo que seu fundamento a taxa metablica basal que possibilita a comparao entre animais de diferentes massas e grupos taxonmicos (Pachaly & Brito, 2000). Atravs desse trabalho sugere-se que a utilizao da escala de extrapolao alomtrica pode ser bem vinda para a utilizao de AINEs seletivos para COX-2, em Rattus norvegicus, visto que atravs dos resultados obtidos nenhum dos animais do grupo do valdecoxib apresentou qualquer efeito, digno de nota, em relao a exames histolgicos do fgado e rim, bem como exames bioqumicos de avaliao heptica na espcie utilizada. Para Ferreira (1977), medicina significa arte e cincia de curar ou atenuar doenas, animal significa todo o ser vivo organizado, dotado de sensibilidade e movimento; para Spinosa (2002), medicamento toda e qualquer substncia qumica destinada a curar e droga refere-se a qualquer substncia qumica que possa produzir alteraes sobre um organismo vivo. Assim, como Mdicos Veterinrios, devemos estar sempre atentos posologia dos medicamentos e drogas, uma vez que estas podem variar drasticamente entre as vrias espcies animais, podendo haver contra-indicao para uma determinada espcie, em funo de suas caractersticas anatmicas e fisiolgicas, alm da prpria susceptibilidade individual.

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6 CONCLUSES

Atravs da observao dos resultados obtidos no modelo experimental desta pesquisa, conforme dose, freqncia, perodo de administrao e estudos, segundo o mtodo de alometria, possvel concluir que: I. O medicamento cetoprofeno na concentrao a 10%, utilizado em Rattus norvegicus, segundo recomendaes da escala alomtrica leva esses animais a bito. II. O cetoprofeno, nas doses utilizadas, produz o aumento de enzimas hepticas ALT/TGP, AST/TGO e FA, em Rattus norvegicus. III. Os hepatcitos de ratos tratados com o cetoprofeno, apresentam tumefao celular e apoptose. IV. O AINE valdecoxib, segundo a alometria, no produz alteraes macroscpicas dignas de nota, no fgado de Rattus norvegicus, podendo ser administrado via IM, por at 4 dias com intervalo de 10/10 horas. V. No so observadas alteraes histolgicas renais em ratos (Rattus norvegicus) submetidos a tratamento com o AINE, seletivo para COX-2, valdecoxib.

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