RECVET. Vol. II, N 05, Mayo 2007 http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050507.html RECVET- Revista Electrnica de Cnica Veterinaria RECVET http://www.veterinaria.

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Descripcin de un caso de ascitis en broilers asociado a un brote de aspergilosis pulmonar (Description of a case of ascitis in broilers associated to lung aspergillosis outbreak)
C. Tarradas: Departamento de Sanidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad de Crdoba.| Zafra, R: Departamento de Anatoma y Anatoma Patolgica Comparada. Facultad de Veterinaria. Universidad de Crdoba | Prezcija, R.A: Departamento de Anatoma y Anatoma Patolgica Comparada. Facultad de Veterinaria. Universidad de Crdoba.| Borge, C: Departamento de Sanidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad de Crdoba.| Bustamante, R: Veterinario Clnico Especialista en Avicultura | Carbonero: Departamento de Sanidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad de Crdoba.| A., Prez, J: Departamento de Anatoma y Anatoma Patolgica Comparada. Facultad de Veterinaria. Universidad de Crdoba | Correspondencia: pv2pemac@uco.es RECVET: 2007, Vol. II, N 5 Recibido: 20.2.06 / Referencia: 050703_RECVET / Aceptado: 20.02.07 / Publicado: 01.05.07 Este artculo est disponible en http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050507.html concretamente en http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050507/050701.pdf
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Resumen En este trabajo se estudian dos lotes de broilers entre los 15 y los 30 das de vida que presentaban signos respiratorios de disnea y una mortalidad superior al 25%. Los lotes afectados fueron los nicos donde se utiliz la cscara de pipas de girasol como cama para los pollitos. En la necropsia se observaron signos de ascitis, congestin pulmonar y una extensa neumona granulomatosa multifocal. El examen histopatolgico revel una neumona granulomatosa crnica multifocal de etiologa fngica. El estudio microbiolgico de las muestras de pulmn determin la presencia de la especie Aspergillus fumigatus. Tras la

sustitucin de las camas y la desinfeccin del suelo, los signos clnicos desaparecieron de la granja. Son varios los factores que tanto por s mismos, como en combinacin con otros, pueden desencadenar un cuadro de ascitis en broilers, destacando entre ellos la hipertensin pulmonar. La hipoxia es un factor muy importante que causa hipertensin pulmonar en broilers. La neumona granulomatosa crnica producida por A. fumigatus en los animales estudiados podra haber provocado hipoxia, hipertensin pulmonar, insuficiencia cardiaca y ascitis. Palabras claves: Ascitis | broilers | aspergilosis

Abstract Two flocks of broiler chickens aged 15 to 30 days presented respiratory signs such as dyspnea and mortality up to 25%. These were the two only flocks in the farm where a bed of sunflower shells was used instead of the rice-shell used in other flocks. At

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RECVET. Vol. II, N 05, Mayo 2007 http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050507.html necropsy, severe ascites, pulmonary congestion and extensive multifocal granulomatous pneumonia were recorded. Histopathological examination revealed chronic multifocal mycotic granulomatous pneumonia. Aspergillus fumigatus was identified by microbiological study from pulmonary specimens. After disinfecting the floor and changing the bed no clinical signs were recorded in the farm. Several factors alone or in combination may cause ascites in broilers, pulmonary hypertension being one of the most important. Hypoxemia is a major factor causing pulmonary hypertension in broiler chickens. The severe chronic granulomatous pneumonia caused by A. fumigatus in the chickens of the present study may have caused hypoxia, pulmonary hypertension, heart failure and ascites. Keywords: ascites, aspergillosis, broilers chickens.

1. Introduccin La ascitis, tambin conocida en aves de corral como sndrome de hipertensin pulmonar, se considera una alteracin orgnica que consiste en la acumulacin de lquido (linfa y plasma sanguneo) en el interior de la cavidad corporal. Este proceso tiene su origen en un aumento de la demanda de oxgeno por parte del organismo que no puede responder de forma eficiente. Como consecuencia de esta demanda, se produce un aumento del ritmo cardiaco, provocando una hipertensin en la arteria pulmonar que a su vez desencadena hipertrofia del ventrculo derecho. A pesar de realizar un sobreesfuerzo cardaco, no se satisface la necesidad de oxigeno exigida y se produce una disfuncin en la vlvula mitral, con reflujo de sangre tras la contraccin del ventrculo derecho. Esta acumulacin de sangre en la aurcula conduce a una hipertensin en la vena cava que da lugar a la extravasacin de lquidos que tiene como consecuencia un cuadro de ascitis (Currie, 1999; Beker y cols., 2003). En los ltimos aos se ha producido una importante intensificacin en la cra de broilers, teniendo como resultado un mayor ndice de conversin y por lo tanto un tiempo ms reducido hasta obtener el peso recomendado para el sacrificio. Una de las principales consecuencias que tiene esta presin en la produccin, es que los pulmones no pueden abastecer de oxigeno suficientemente al organismo, sobre todo durante el primer mes de vida, de ah que haya incrementado considerablemente la prevalencia de ascitis en las explotaciones avcolas (Sols de los Santos y cols., 2005). Por otro lado, los cuadros de ascitis pueden tambin asociarse a factores de tipo gentico, ya que posee cierta heredabilidad (Moghadam y cols., 2005; Tona y cols., 2005) y a un conjunto de factores ambientales entre los que podramos nombrar: Sobreingesta calrica, que supone un excesivo crecimiento corporal comparado con el desarrollo pulmonar (Luger y cols., 2001; Camacho y cols., 2004). Bajas temperaturas y por lo tanto un aumento en el metabolismo que incrementa la demanda de oxgeno (Balog y cols., 2003; Yang y cols., 2005). Altitud, normalmente la presin baja de oxgeno compromete el sistema cardiorrespiratorio (Olkowski y cols., 2005). Concentracin elevada de polvo o gases irritantes (amoniaco) en el ambiente, que producen daos en el aparato respiratorio y una disminucin de la eficiencia en el intercambio de oxgeno (Wideman y cols., 1999). Adems tambin podemos considerar como un factor muy importante la presencia de algn agente infeccioso.

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RECVET. Vol. II, N 05, Mayo 2007 http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050507.html Si consideramos en conjunto todos los procesos clnicos que pueden afectar a las aves, ocupan un lugar muy destacado, tanto los trastornos digestivos como los procesos de tipo respiratorio, estos ltimos pueden tener etiologa bacteriana, vrica o bien procesos asociados a hongos. Dentro de las infecciones fngicas una de las ms frecuentes y con mayor repercusin en la produccin avcola es la Aspergilosis, que puede presentarse en todas las edades y en cualquier sistema de produccin, siendo ms prevalente en los animales jvenes donde presentan cuadros clnicos muy bien diferenciados. La aspergilosis aviar se ha descrito ampliamente en todos los pases de cra aviar, estando en la actualidad representada en todos los continentes (Richard y cols., 1984; Chaudhary y cols., 1988; Okoye y cols., 1989; Reissig y cols., 2002). Existen tres formas clnicas de aspergilosis: nerviosa, donde puede aparecer tortcolis y falta de equilibrio (Akan y cols., 2002), ocular, en la que se observa ceguera y un exudado amarillento en el ojo (Beckman y cols., 1994) y respiratoria, caracterizada por disnea, respiracin acelerada y prdida de peso progresiva con caquexia (Akan y cols., 2002), siendo esta ltima la ms frecuente, especialmente en paseriformes, psitcidas, rapaces y aves acuticas. As mismo, existe una forma aguda en jvenes en la que slo se observa una grave dificultad respiratoria que antecede a la muerte. A medida que las aves alcanzan una mayor edad, las formas clnicas pasan a subagudas o crnicas. A pesar de la asociacin lgica entre la ascitis y la aspergilosis en su forma respiratoria este es el primer trabajo que describe la asociacin de estos dos procesos. 2. Descripcin del caso Los animales afectados fueron pollos de carne o broilers procedentes de una granja localizada en cija (Sevilla) situada a baja altitud (84 m). Se hace referencia a la altitud por haberse comprobado, cmo se ha mencionado con anterioridad, la asociacin entre la ascitis y la cra de pollos en zonas elevadas. El proceso tuvo lugar en dos lotes de 20.000 broilers cada uno, dnde se observ dificultad respiratoria, disnea, picos abiertos y toses no productivas en animales entre 15 y 30 das de edad, llegando la mortalidad al 25 por ciento. Los dos lotes afectados se criaron sobre una cama de salvado de girasol, a diferencia del resto de lotes de la granja donde la yacija estaba compuesta por salvado de arroz. Mediante la necropsia se observ que los animales muertos estaban en buena condicin corporal, si bien presentaban una grave ascitis, tonalidad blanquecina de la superficie heptica e hipertrofia evidente del ventrculo derecho. Ambos pulmones se encontraban muy congestivos y con mltiples ndulos blanquecinos en su superficie de un dimetro entre uno y cinco milmetros. No se observaron lesiones macroscpicas en el resto de los rganos. Figura 1. Aspecto macroscpico de un animal en el que se aprecia buen estado de carne y severa ascitis compuesta por material de aspecto gelatinoso.

Figura 2. Aspecto macroscpico de los pulmones que muestran coloracin oscura debido a congestin severa y mltiples reas redondeadas de color blanquecino o blanco-rojizo.

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RECVET. Vol. II, N 05, Mayo 2007 http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050507.html Se tomaron muestras de todos los rganos fijndose a continuacin en formol al 10 por ciento durante 24 horas. A continuacin, dichas muestras fueron procesadas y embebidas en bloques de parafina, realizndose cortes de cuatro micrmetros de grosor, que fueron teidos con hematoxilina eosina, PAS (periodic acid Schiff) y Glocott Gomory metenamina plata para el examen histopatolgico. La lesin principal consisti en una neumona granulomatosa multifocal asociada a la presencia de hifas fngicas. El centro de los granulomas se encontraba necrosado y contena una cantidad variable de hifas rodeadas de numerosos macrfagos, clulas epiteliales y/o clulas gigantes multinucleadas con un gran citoplasma eosinfilo en cuyo interior se encontraban con frecuencia estas mismas hifas. Ocasionalmente se encontraron en la periferia del granuloma linfocitos, observndose una moderada fibrosis. El msculo cardaco presentaba edema moderado, y en las fibras cardacas, especialmente las del ventrculo derecho, se observ microvacuolizacin del citoplasma y pequeos grnulos de tonalidad marrn. Se emple la tincin de Grocott, para la tincin de las hifas, observndose que eran septadas y se ramificaban en forma dicotmica. Por otra parte, se enviaron muestras frescas de pulmn al laboratorio de Enfermedades Infecciosas de la Facultad de Veterinaria de la Universidad de Crdoba para su estudio microbiolgico. En primera instancia, muestras de los ndulos pulmonares fueron suspendidas en una solucin de hidrxido potsico durante 20 minutos, colocndose a continuacin en un portaobjetos para observacin de las hifas al microscopio. As mismo, dichas muestras fueron sembradas en los siguientes medios: Sabouraud glucosa agar suplementado con Cloranfenicol (SAB), medio Mycophil (MY) y Dermasel (DERM), incubndose durante al menos tres das a temperaturas de 22, 27, 30 y 48 C tanto en condiciones de luz como de oscuridad. Figura 3. Fotomicrografa de pulmn en el que se aprecian mltiples granulomas de gran tamao con centro necrtico y acidfilo (N) ocupando luces bronquiales y alveolares de amplias reas de parnquima pulmonar. H-E, x25. Figura 4. Fotomicrografa de pulmn en el que se aprecia un detalle de un granuloma con centro necrtico en el que se observan restos de hifas (flechas), rodeado por clulas epitelioides. PAS, x200.

Figura 5. Fotomicrografa de pulmn mostrando detalle de una hifa septada y ramificada de forma dicotmica (flecha) asociada a una clula gigante multinucleada. PAS, x400.

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RECVET. Vol. II, N 05, Mayo 2007 http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050507.html En los medios de cultivo crecieron colonias de color verde azulado oscuro en su superficie y con una tonalidad amarillenta en la base. El crecimiento fue similar en los medios SAB y MY despus de 24 horas a 37 y 48 C, y tras 3 5 das a 22 y 30 C. A los 15 das se dio por negativo el cultivo en el medio DERM, al no observarse crecimiento de colonias. Las colonias cultivadas se observaron al microscopio, comprobndose que las hifas eran septadas y formaban un micelio con conidiognesis enteroblstica, y que las filidas eran uniseriadas y mostraban una vescula ampliamente ramificada de aproximadamente 20 30 micrmetros de anchura. As mismo, los conidios eran de tipo verrucoso, esfricos y con un dimetro comprendido entre 25 y 3 micrmetros. Todas estas caractersticas son coincidentes con descripciones previas de Aspegillus fumigatus (Guarro y cols., 1995). Tanto las lesiones macroscpicas e histopatolgicas como los hallazgos microbiolgicos coinciden en sealar un diagnstico de ascitis, hipertrofia cardiaca y aspergilosis pulmonar. A pesar de la buena condicin corporal de los animales y de tener alrededor de 30 das de edad, se aconsej sacrificar el lote y sustituir la yacija de salvado de girasol por salvado de arroz. Tras la puesta en marcha de estas medidas, no han vuelto a presentarse nuevos casos, habiendo transcurrido ms de dos aos desde el ltimo. De las causas de ascitis descritas en la introduccin, descartamos desde un primer momento la altitud, por las razones expuestas al inicio de este apartado, y la alta concentracin gaseosa, ya que la ventilacin de las naves era adecuada. Por otra parte, las nuevas lneas de broilers son ms propensas a sufrir ascitis, debido a su mayor velocidad de crecimiento (Julian y cols., 1987; Jones, 1994). Con objeto de reducir la presentacin de ascitis por esta causa, se aconseja que los piensos no sean granulados y la puesta en prctica de restricciones alimenticias durante las primeras semanas de edad (Da Silva y cols., 1988; Camacho y cols., 2004). Los broilers afectados en nuestro estudio pertenecan a una lnea de crecimiento rpido y fueron alimentados con pienso granulado y si bien estos factores pueden haber contribuido a la presentacin de la ascitis, creemos que no pueden ser considerados los principales responsables del brote, debido a que los otros lotes eran de la misma lnea y fueron alimentados de idntica forma. Respecto al fro, factor predisponente que tambin ha sido ya descrito, los brotes se presentaron en enero, momento en que las temperaturas en la zona de estudio resultan ms bajas. Por la misma razn expuesta respecto a la lnea y la alimentacin consideramos que, si bien este factor pudo contribuir al desarrollo de la enfermedad, no fue el determinante. Otros factores que han sido descritos en relacin a este sndrome como dficit en la produccin de hormonas tiroideas, bajo nivel de antioxidantes, anemia o intoxicacin por cobalto o sodio han sido descartados en los lotes afectados. En trabajos previos y de forma experimental, ha logrado asociarse el dao pulmonar desencadenado por la aspergilosis con la ascitis o sndrome de hipertensin pulmonar (Julin y Goryo, 1990). En este estudio, se han encontrado graves y extensas lesiones crnicas originadas por A. fumigatus que se consideran como la causa principal del sndrome de ascitis. La fuente de infeccin de este hongo sera la yacija compuesta de salvado o cscara de girasol, nica diferencia hallada entre los sistemas de crianza de los lotes afectados y no afectados. Apoya esta hiptesis el hecho de que desde el momento en que este tipo de cama dej de emplearse, no se han observado nuevos casos. A pesar del elevado nmero de estudios realizados sobre el sndrome de hipertensin pulmonar, nunca se haba descrito su asociacin en condiciones naturales con un brote de arpergilosis aviar. 3. Agradecimientos Este trabajo ha sido financiado por los proyectos de la Junta de Andaluca AGR137 y AGR149.

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RECVET. Vol. II, N 05, Mayo 2007 http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050507.html 4. Bibiografa 1. Akan, M., Haziroglu, R., Ilhan, Z., Sareyyupoglu, B., Tunca, R., 2002. A case of aspergillosis in a broiler breeder flock. Avian. Dis. 46, 497-501. 2. Balog, J.M., Kidd, B.D., Huff, W.E., Huff, G.R., Rath, N.C., Anthony, N.B., 2003. Effect of cold stress on broilers selected for resistance or susceptibility to ascites syndrome. Poult. Sci. 82, 1383-1387. 3. Beckman, B.J., Howe, C.W., Trampel, D.W., DeBey, M.C., Richard, J.L., Niyo, Y., 1994. Aspergillus fumigatus keratitis with intraocular invasion in 15-day-old chicks. Avian. Dis. 38, 660-665. 4. Beker, A., Vanhooser, S.L., Swartzlander, J.H., Teeter, R.G., 2003. Graded atmospheric oxygen level effects on performance and ascites incidence in broilers. Poult. Sci. 82, 1550-1553. 5. Camacho, M.A., Suarez, M.E., Herrera, J.G., Cuca, J.M., Garcia-Bojalil, C.M., 2004. Effect of age of feed restriction and microelement supplementation to control ascites on production and carcass characteristics of broilers. Poult. Sci. 83, 526-532. 6. Chaudhary, S.K., Sadana, J.R., 1988. Experimental aspergillosis in Japanese quails (Coturnix coturnix japonica). Clinical signs and haematological changes. Mycopathologia 102, 179-184. 7. Conkova, E., 1994. [The bioclimate in housing for broilers and its effect on mycotic contamination]. Vet. Med. (Praha) 39, 329-336. 8. Currie, R.J., 1999. Ascites in poultry: recent investigations. Avian Pathol. 28, 313326. 9. Guarro, J., Gene, J., 1995. Opportunistic fusarial infections in humans. Eur J Clin. Microbiol. Infect. Dis. 14, 741-754. 10. Jones, G.P., 1994. Energy and nitrogen metabolism and oxygen use by broilers susceptible to ascites and grown at three environmental temperatures. Br. Poult. Sci. 35, 97-105. 11. Julian, R.J., Friars, G.W., French, H., Quinton, M., 1987. The relationship of right ventricular hypertrophy, right ventricular failure, and ascites to weight gain in broiler and roaster chickens. Avian Dis. 31, 130-135. 12.Julian, R. J., Goryo, M., 1990. Pulmonary aspergillosis causing right ventricular failure and ascites in meat-type chickens. Avian Pathol. 19, 643-654. 13. Lamas da Silva, J.M., Dale, N., Luchesi, J.B., 1988. Effect of pelleted feed on the incidence of ascites in broilers reared at low altitudes. Avian Dis. 32, 376-378. 14. Luger, D., Shinder, D., Rzepakovsky, V., Rusal, M., Yahav, S., 2001. Association between weight gain, blood parameters, and thyroid hormones and the development of ascites syndrome in broiler chickens. Poult. Sci. 80, 965-971. 15. Maxwell, M.H., Robertson, G.W., 1998. UK survey of broiler ascites and sudden death syndromes in 1993. Br. Poult. Sci. 39, 203-215. 16. Moghadam, H.K., McMillan, I., Chambers, J.R., Julian, R.J., Tranchant, C.C., 2005. Heritability of sudden death syndrome and its associated correlations to ascites and body weight in broilers. Br. Poult. Sci. 46, 54-57. 17. Okoye, J.O., Gugnani, H.C., Okeke, C.N., 1989. Clinical and pathological features of Aspergillus fumigatus infections in poultry in southern Nigeria. Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 42, 153-154. 18. Olkowski, A.A., Abbott, J.A., Classen, H.L., 2005. Pathogenesis of ascites in broilers raised at low altitude: aetiological considerations based on echocardiographic findings. J. Vet. Med. A Physiol. Pathol. Clin. Med. 52, 166-171. 19. Owen, R.L., Wideman, R.F., Jr., Hattel, A.L., Cowen, B.S., 1990. Use of a hypobaric chamber as a model system for investigating ascites in broilers. Avian Dis. 34, 754-758. 20. Pakdel, A., van Arendonk, J.A., Vereijken, A.L., Bovenhuis, H., 2005. Genetic parameters of ascites-related traits in broilers: effect of cold and normal temperature conditions. Br. Poult. Sci. 46, 35-42. 21. Pan, J.Q., Tan, X., Li, J.C., Sun, W.D., Wang, X.L., 2005. Effects of early feed restriction and cold temperature on lipid peroxidation, pulmonary vascular

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RECVET. Vol. II, N 05, Mayo 2007 http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050507.html remodelling and ascites morbidity in broilers under normal and cold temperature. Br. Poult. Sci. 46, 374-381. 22. Reissig, E.C., Uzal, F.A., Schettino, A., Robles, C.A., 2002. Pulmonary aspergillosis in a great rhea (Rhea americana). Avian Dis. 46, 754-756. 23. Richard, J.L., Thurston, J.R., Peden, W.M., Pinello, C., 1984. Recent studies on aspergillosis in turkey poults. Mycopathologia 87, 3-11. 24. Solis de los Santos, F., Farnell, M.B., Tellez, G., Balog, J.M., Anthony, N.B., Torres-Rodriguez, A., Higgins, S., Hargis, B.M., Donoghue, A.M., 2005. Effect of prebiotic on gut development and ascites incidence of broilers reared in a hypoxic environment. Poult. Sci. 84, 1092-1100. 25. Wideman, R.F., Jr., Maynard, P., Bottje, W.G., 1999. Venous blood pressure in broilers during acute inhalation of five percent carbon dioxide or unilateral pulmonary artery occlusion. Poult. Sci. 78, 1443-1451. 26. Yang, Y., Qiao, J., Wu, Z., Chen, Y., Gao, M., Ou, D., Wang, H., 2005. Endothelin1 receptor antagonist BQ123 prevents pulmonary artery hypertension induced by low ambient temperature in broilers. Biol. Pharm. Bull. 28, 2201-2205.

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