-1UNIVERSIDAD DEL CAUCA FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD ASIGNATURA INFECCIOSAS

BACTERIAS ANAEROBIAS
Maria Amparo Bravo

Es importante recordar que tanto en las clulas eucariticas (protozoarios, hongos y algas) como en las procariticas (bacterias, y algas verde-azules) se llevan a cabo reacciones qumicas que incluyen biosntesis y transformacin de macromolculas que constituyen gran parte de la masa celular a partir de compuestos ms simples presentes en el entorno extracelular. Para estos procesos metablicos se requiere un aporte de energa, la cual se encuentra en el compuesto altamente reactivo llamado adenosin-trifosfato, ATP. El ATP es generado por dos mecanismos bioqumicos: 1.- Fosforilacin a nivel del substrato. Uno de los mecanismos ms sencillos generadores de ATP es la fermentacin; en este proceso metablico compuestos orgnicos sirven tanto de donadores de electrones (oxidndose) como de receptores (reducindose). Los compuestos que realizan stas dos funciones son usualmente metabolitos derivados de un nico substrato fermentable tal como un azcar. Los carbohidratos son los principales substratos de la fermentacin. Entre las bacterias pueden ser fermentados tambin otros compuestos como cidos orgnicos, aminocidos, purinas y pirimidinas. La fosforilacin a nivel de substrato es el nico modo de sntesis de ATP a partir del proceso de fermentacin. Pasteur, fue el primero en reconocer el papel fisiolgico de la fermentacin, la llamo la consecuencia de la vida sin aire, muchos de los organismos que generan ATP por fermentacin son anaerobios estrictos, otros son anaerobios facultativos, siendo capaces de desarrollarse tanto en presencia como en ausencia de aire, generalmente cambian el modo de generar ATP al quedar expuestos al aire, la presencia de oxgeno molecular induce un desplazamiento metablico de la fermentacin a la respiracin. Las anaerobias aerotolerantes presentan la excepcin a la regla, la presencia de oxgeno no modifica su metabolismo generador de ATP. La fermentacin contina an en presencia de aire. 2.- Transporte de electrones: realizado en la respiracin; proceso metablico generador de ATP en el que compuestos orgnicos e inorgnicos sirven como donadores de electrones (oxidndose) y como ltimos aceptores actan compuestos inorgnicos (reducindose). Usualmente el ltimo aceptor de electrones es el oxgeno molecular.

-2-

CLASIFICACION
1.- Teniendo en cuenta la tolerancia al oxigeno las bacterias anaerobias se clasifican en: Anaerobias estrictas: Crecen en atmsferas con una tensin de oxgeno inferior a 0.5%. Anaerobias aerotolerantes: Toleran el oxgeno hasta un 8% pero son incapaces de utilizarlo para su metabolismo. La tolerancia al oxgeno de stas bacterias est dada por la presencia de enzimas superoxido dismutasa (SOD), catalasa y peroxidasa que catalizan la conversin de radicales superoxido a perxido de hidrgeno menos txico y a oxgeno molecular. Anaerobios Facultativos: No necesitan oxgeno para su desarrollo normal, pero si est presente lo pueden utilizar metabolicamente, es decir que crecen bajo condiciones tanto aerbicas como anaerbicas utilizando el oxgeno como aceptor final de electrones. Microaerofilicas: Crecen en presencia de tensiones de oxigeno mnimas y lo metabolizan utilizndolo como aceptor final de electrones. Necesitan atmsfera de CO2. 2.- Teniendo en cuenta la morfologa y Tincion de Gram: Se clasifican en cocos, bacilos, Cocobacilos y fusobacterias. Gram positivas y Gram negativas. 3.- La presencia o no de esporas los clasifica en esporulados y no esporulados.

FUENTES DE INFECCION
Las Bacterias anaerobias estn ampliamente distribuidas en la naturaleza. Podemos diferenciar dos clases de fuentes: * FUENTES EXOGENAS: - El suelo. - El agua: Lagos, sedimento de ros, ocanos, aguas cloacales. - Alimentos. - Tracto gastrointestinal de animales. * FUENTES ENDOGENAS: Cuando se encuentran en el ser humano formando parte de la flora normal en piel y mucosas. En algunos lugares superan a los aerobios en una proporcin de 1:1000. Las fuentes ms importantes son: o CAVIDAD ORAL

En la boca existe una flora polimicrobiana muy compleja ligada a la variabilidad de las condiciones existentes en el interior de la misma como son: 1.-El potencial redox (Eh) en los diferentes espacios como pliegues bucales, superficie de la lengua, surcos gingivales, espacios periodontales. 2.- Presencia de clculo y placa bacteriana: Entre ms antigua es la placa mejores son las condiciones de anaerobiosis.

-33.- Edad: A los pocos das del nacimiento hay temprana implantacin de Lactobacilos y Streptococcus, posteriormente Staphylococcus y Veillonelas. A los 6 meses de edad encontramos Actinomyces, Nocardias, Fusobacterias. Podemos mencionar como anaerobios componentes de la flora normal de cavidad oral y Tracto Respiratorio Superior los siguientes gneros: o TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

NASOFARINGE: Son gneros encontrados con mayor frecuencia: Peptostreptococcus Veillonella Propionibacterium Clostridium Actinomyces Eubacterium Prevotella Bacteroides Fusobacterium o OJOS: A nivel de conjuntiva y conductos lacrimales existen factores de Proteccin que realizan el control de la flora como son las lgrimas y la lisozima. Los gneros de anaerobios encontrados con mayor frecuencia son: Propionibacterium Clostridium o TRACTO GENITO URINARIO

URETRA: La uretra solo est colonizada por microorganismos en la parte ms prxima al pein.La flora normal es parte de la flora que coloniza la piel que la recubre. Bacteroides frgilis, Propionibacterium s.p, Peptostreptococcus, Peptococcus, Lactobacillus, Clostridium, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella. VAGINA: La flora vaginal tiene variaciones de acuerdo a la edad, al nacer predominan los lactobacilos aerobios. Posteriormente el pH se torna neutro por lo cual la flora predominante es mixta (cocos y bacilos) hasta la pubertad, poca en la cual el pH se torna nuevamente cido y hay proteccin, predominan los lactobacilos aerobios y anaerobios. El moco cervical tambin es un factor de proteccin porque contiene la lisozima. En el periodo de la menopausia cambia el pH y predomina nuevamente una flora mixta. La flora normal vaginal incluye: Bacteroides frgilis, Propionibacterium s.p, Peptostreptococcus, Peptococcus, Lactobacillus, Clostridium, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella. o PIEL: A nivel de piel el pH cido, los cidos grasos de las secreciones Sebceas y la presencia de lisozima son factores de proteccin.Los gneros de anaerobios que se encuentran con mayor frecuencia Son: Clostridium, Propionibacterium, Peptostreptococcus.

-4o TRACTO GASTROINTESTINAL

Existen factores que influyen en el tipo de flora a nivel del tracto gastrointestinal Estos son: La flora normal de oro faringe y boca y la presencia de alimentos. Por lo anterior encontramos una flora residente y una flora transitoria. La concentracin bacteriana vara de acuerdo a las condiciones de pH y a las funciones de cada una de las partes que conforman el tracto. Entre ms avanzamos en el trayecto del TGI mayor concentracin de bacterias encontramos.Asi a nivel gstrico despus de comida podemos encontrar concentraciones de 10 2 -10 3 bac/ml. Es una flora pasajera pues el pH cido no permite sino la permanencia de algunos microorganismos que toleran el medio. A nivel de duodeno y yeyuno las concentraciones son de 10 3 -10 4 bac/ml. A nivel de Ileon 10 7 bac/gr. A nivel de Ciego 10 9 bac/gr. A nivel de heces 10 11 bac/gr. La flora normal intestinal cumple funciones benficas como: * Produccin de vitamina K * Transformacin de pigmentos biliares en ac. Biliares. * Contribuyen en la absorcin y metabolismo primario de numerosos nutrientes. * Antagonismo para microorganismos patgenos. INTESTINO DELGADO: Son gneros de anaerobios encontrados con mayor frecuencia en duodeno y yeyuno: Peptostreptococcus. Peptococcus, Lactobacillus. INTESTINO GRUESO: ileon colon: Bacteroides frgilis, Prevotella, Fusobacterium, Peptostreptococcus, Peptococcus, Lactobacillus.

FACTORES DE VIRULENCIA DE BACTERIAS ANAEROBIAS

CAPSULA: Compuesta de polisacridos. Posee caractersticas heterogneas segn las diferentes especies a modo de glicoclix en unas especies, a manera de capa gruesa en otras (cpsula). Inhibe la accin bactericida mediada por el complemento por lo cual los microorganismos resisten la opzonizacin y la fagocitosis. Tiene propiedades de quimiotactismo lo que explica la capacidad del microorganismo de formar abscesos. Favorece la adherencia. PRODUCCION DE ENZIMAS: Estas modifican el ambiente local favoreciendo la proliferacin del microorganismo y la destruccin tisular.Ej: Heparinasa, colagenasa, hialuronidasa, fibrinolisina, neuraminidasa, Dnasa. CAPACIDAD DE ADHERENCIA: Mecanismo por el cual se adhieren al epitelio por diferentes mecanismos e inician su proceso de patogenicidad.

-5PRODUCCION DE ACIDO SUCCINICO: Mecanismo se favorece la destruccin celular. FIMBRIAS: Las fimbrias son estructuras que forman parte del soma bacteriano. En las especies que las poseen est relacionada con la adherencia inespecfica de bacterias Gram negativas a las superficies de la mucosa. Su composicin es de naturaleza proteica. Su tamao vara en cada especie. En Bacteroides frgilis se han demostrado fimbrias largas compuestas por fimbrilina. En Porphyromona gingivalis son mas cortas y finas. PROTEINAS DE PARED: Protenas que realizan funciones de adherencia celular, facilitan el reconocimiento de superficies, actan como capa protectora. Se han observado porinas, proteinas S, protena L (en peptostreptococcus) y poseen la propiedad de unirse inespecficamente a Igs facilitando la invasin de mucosas. Tambin se han observado protenas en Bacteroides, Prevotella, Eubacterium. LIPOPOLISACARIDO: El lipopolisacrido (LPS) de bacterias anaerobias Gram negativas posee menos actividad endotxica que el de las Enterobacterias.El LPS Tiene relacin con la induccin de fiebre, estimula a las clulas B policlonales e inducen la produccin de citoquinas por los macrfagos.El LPS del Fusobacterium y Bacteroides mueven el complemento por la va clsica y ms an por la va alterna, generando C5c que acta como quimiotctico para PMN. SINERGISMO: Los microorganismos anaerobios pueden actuar como patgenos directos o sinrgicamente con la flora aerobia para dar lugar al proceso infeccioso. Las bacterias aerobias asociadas consumen oxgeno y producen gas contribuyendo a descender el Eh; preparando el medio para el desarrollo de los anaerobios. Por otra parte las bacterias aerobias producen metabolitos como Vit K requerida por algunos anaerobios. PRODUCCION DE BETALACTAMASAS: Factor indirecto de patogenicidad, provocando la inactivacin de betalactmicos. La asociacin de comensales productores de betalatamasas en el rea de infeccin permite que los patgenos sensibles a los betalactmicos queden cubiertos por estos antimicrobianos dificultando el xito de la terapia.

FACTORES PREDISPONENTES ANAEROBIOS

DE

INFECCION

POR

Factores dependientes del husped, influyen directamente sobre la formacin del proceso infeccioso por el cual un microorganismo incluso comensal puede invadir tejidos y ser responsable de la infeccin. Pueden ser: - Alteraciones del sistema del complemento. - Alteraciones en la accin de los macrfagos. - Alteraciones en la integridad de las barreras mucosas

-6- En edades extremas se presentan alteraciones de la deglucin y alteraciones en el sistema inmune. - Desnutricin - Alcoholismo - Traumas - Mordeduras - Inmunosupresin. - Tromboflebitis - Arteriosclerosis - Terapia antimicrobiana - Diabetes

FISIOPATOLOGIA DE INFECCION POR ANAEROBIOS

Las infecciones causadas por bacterias anaerobias son generalmente polimicrobianas (Anaerobios, anaerobios facultativos, aerobios) Las superficies intactas del cuerpo impiden que los anaerobios comensales penetren a tejidos sanos en nmero significativo.Cuando esto ocurre las condiciones normales y el alto potencial Eh inhiben la multiplicacin. Cuando la integridad de piel y mucosas se pierde, los tejidos se lesionan o hay necrosis que reduce el potencial Eh, los anaerobios encuentran las condiciones propicias para proliferar e iniciar un proceso infeccioso. La infeccin se produce cuando los anaerobios y otras bacterias de la flora normal contaminan sitios del organismo normalmente estriles.Exepto cuando se adquieren de fuentes exgenas como por ejemplo infecciones por Clostridium tetani, botulinum entre otros. Las manifestaciones clnicas y los sndromes dependen del rgano afectado y de las condiciones particulares de cada paciente.

SIGNOS CLINICOS CARACTERISTICOS

- Exudado maloliente caracterstico. (Se produce por metabolismo anaerobio de los ac. Grasos de cadena corta) - Localizacin de la infeccin en lugares prximos a mucosas. - Necrosis tisular. - Abscesos. - Gas en tejidos. (Co, H2) - Infecciones pos mordeduras. - Existencia de tromboflebitis sptica. - Grnulos de azufre en la secrecin (Actinomicosis) - Heridas penetrantes en abdomen y pelvis. - Infecciones posteriores a ciruga de TGI o TGU. - Abortos spticos. - Cuadros tpicos como Gangrena Gaseosa. productos del

-7-

SINDROMES CLINICOS 1.-SISTEMA NERVIOSO CENTRAL MENINGITIS POR BACTERIAS ANAEROBIAS

No es frecuente. En caso de que se presente los hallazgos en el LCR son los caractersticos de cualquier otra meningitis bacteriana. Turbidez, pleocitosis con predominio de PMN o de mononucleares, aumento de protenas y glucosa baja. MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Cocos Gram positivos anaerobios, Bacteroides sp, Fusobacterium sp, Clostridium sp, Actinomyces sp, Propionibacterium sp. ABSCESO CEREBRAL Con frecuencia es polimicrobiano pudindose encontrar una o ms especies. MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES. Peptostreptococcussp, Bacteroides sp, Actinomyces, Veillonella sp, Fusobacterium sp. EMPIEMA SUBDURAL Coleccin de pus localizada en el espacio potencial entre aracnoides y duramadre. MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES. Bacteroides, Fusobacterias, Actinomyces. Streptococcus anaerobio,

ABSCESO EPIDURAL Entre duramadre, periostio y ligamentos que conforman el canal espinal.Este espacio virtual es entre vrtebras dorsales, lumbares y sacras. Se puede infectar por: va hematgena, a partir de osteomielitis vertebral, implantacin de catteres, cirugas, herida penetrante, ulceras de decbito, absceso paraespinal. MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Streptococcus anaerobios, actinomices israeli (ocasionalmente), Bacilos Gram negativos anaerobios 2.- INFECCIONES PERIODONTALES Las ms frecuentes son la gingivitis y periodontitis segn se localicen en enca o invadan estructuras ms profundas del sistema periodontal. Factores predisponentes: Placa dental y mala higiene oral. A partir de la formacin de la placa del diente que diseca la unin virtual de encas a superficie dentaria se produce una bolsa con condiciones de bajo potencial redox, facilitando el crecimiento de anaerobios, provocando formacin de abscesos y diseminacin bacteriana.

-8-

MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES. peptostreptococcus sp, ,Actinomyces sp,Lactobacillussp,Eubacterium sp,Actinobacillus actinomycetencomitans,Eikenella corrodens,Capnocitophaga, Veillonellasp,Bacteroides sp,Fusobacterium sp. En embarazo aumentan los niveles hormonales por lo cual hay exacerbacin de algunas especies como Bacteroides pigmentados, Aumentando la incidencia de infecciones gingivales, aumentando las caries y afeccin de piezas dentarias. ABSCESO PERIODONTAL Infeccin mixta, en su mayor porcentaje por Bacilos Gram negativos anaerobios como: Porphyromonas, Fusobacterias, Prevotella. Como Gram positivos tenemos Peptococcus, Peptostreptococcus, Capnocytophaga.

3.-TRACTO RESPIRATORIO
Los microorganismos anaerobios que forman parte de la flora orofaringea normal en determinadas situaciones pueden invadir el aparato respiratorio y producir neumona, con posible necrosis del parenquima pulmonar (absceso) y extensin a la pleura (empiema) La mayora de infecciones por anaerobios son consecuencia de la aspiracin de secreciones orofaringeas.En condiciones normales el reflejo de cierre de la glotis, los mecanismos de aclaramiento de las vas respiratorias (tos y transporte muco ciliar) y el alto potencial de oxido reduccin de los tejidos evitan la invasin del parenquima pulmonar y la infeccin posterior por microorganismos anaerobios de la flora orofaringea. Cuando el volumen del aspirado es muy grande, la densidad de grmenes muy alta o el potencial de Eh en tejidos disminuye por debajo de 100mV, este proceso se ve alterado pudindose presentar ABSCESOS PULMONARES, NEUMONIA NECROTIZANTE, EMPIEMA entre otros. MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Prevotella sp, Fusobacterium sp, Peptostreptococcus sp, Con menor frecuencia se pueden encontrar microorganismos anaerobios de la flora oro farngea.

4.-INFECCIONES INTRA-ABDOMINALES
Pueden presentarse como complicacin en enfermedades de tratamiento mdico inicial (Peritonitis primaria bacteriana, pancreatitis aguda.) En procesos quirrgicos que evolucionan hacia una peritonitis (apendicitis aguda, perforacin de un ulcus peptico) o como complicacin postoperatoria tras ciruga abdominal. El contacto de bacterias con el peritoneo, produce una reaccin inflamatoria inmediata con un componente local y uno sistmico.

-9A nivel local se produce una reaccin vascular con un aumento en la capacidad de absorcin peritoneal y aumento de la permeabilidad vascular, esto conlleva a la salida del torrente vascular de protenas (reactantes de fase aguda), fibringeno que comienza a formar mallas pretendiendo limitar el proceso mediante la formacin de adherencias. Por otra parte se produce marginacin de elementos formes, especialmente neutrofilos que comienzan a fagocitar bacterias y clulas cebadas que producen histamina y aumentan la permeabilidad vascular. Cuando se limita el proceso por sta reaccin se producir una peritonitis localizada o absceso intra -abdominal, si no se produce sta limitacin se genera la peritonitis difusa. Una caracterstica propia de infecciones intra-abdominales es la de ser difsicas. En primera instancia predominan las bacterias aerobias que una vez se ha disminuido la tensin de oxgeno se lleva a cabo la proliferacin de la flora anaerobia. INFECCION DE VIAS BILIARES La alteracin de vas biliares conlleva a la disfuncin de la ampolla de water y a cambios fisiolgicos en el duodeno y en el peristaltismo intestinal, esto produce una modificacin ecolgica del intestino aumentando la flora anaerobia en tractos altos. Se colonizan las vas biliares por anaerobios que actan en el epitelio lesionado qumicamente y se produce la infeccin biliar.

5.- INFECCIONES GINECOLOGICAS

VAGINOSIS BACTERIANA Trastorno polimicrobiano producido por el cambio del pH cido de la vagina y de la concentracin de Lacto bacilos lo cual hace que se eleve la concentracin de otros microorganismos especialmente anaerobios . MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Gardnerella vaginalis, Mobiluncus Bacteroides, Peptostreptococcus. ENDOMETRITIS POSTPARTO Existen dos factores importantes en la patogenia de stas infecciones: - Es necesario que los microorganismos patgenos alcancen una concentracin crtica. - La diseminacin de las bacterias en la cavidad abdominal aumenta el riesgo de infeccin. Durante el parto, el lquido amnitico se contamina con bacterias despus de la ruptura de membranas, las cuales representan la fuente ms comn de infeccin postparto.El lquido contiene sustancias que tienen poder antibacteriano por lo tanto tienen que haber condiciones que favorecen la infeccin como son: Parto prolongado, cesrea, ruptura prematura de membranas, elevado nmero de exmenes plvicos, presencia de anemia.

- 10 -

MICROORGANISMOS ANAEROBIOS MAS FRECUENTES: Es una entidad polimicrobiana se encuentran bacterias aerobias y anaerobios como: Bacteroides sp, Fusobacterium sp, Peptococcus sp, Peptostreptococcus sp. SEPSIS POSTABORTO Los servicios de personal no mdico para interrumpir la gestacin, las condiciones de higiene en que se realizan las maniobras, la presencia de productos de concepcin retenidos, la existencia de cualquier traumatismo uterino y la vaginosis bacteriana previa son factores condicionantes en la patologa del aborto sptico MICROORGANISMOS IMPLICADOS: Los anaerobios presentes en vagina y cervix. ENFERMEDAD PELVICA INFLAMATORIA Infeccin de la parte superior del tracto genital: Endometrio (endometritis), trompas (salpingitis), ovario (ooforitis), pared uterina (miometritis) o porciones del peritoneo parietal (peritonitis). Factores de riesgo: ETS, presencia de DIU, Irrigaciones vaginales. MICROORGANISMOS ANAEROBIOS MAS FRECUENTES: Bacteroides sp, Peptostreptococcus sp,

6.- PIEL Y TEJIDOS BLANDOS Y OSTEOARTICULARES

ULCERAS CUTNEAS La infeccin suele ser mixta, microorganismos procedentes de flora fecal y urinaria. Los anaerobios ms frecuentes: Bacteroides sp, Porphyromonas sp, peptococcus sp, y Peptostreptococcus sp. ABSCESOS La presencia de bacterias provoca atraccin de PMN y macrfagos. Una vez se destruyen las clulas por los microorganismos se liberan enzimas.Las bacterias se multiplican y pasan de fase logartmica a estacionaria, consumen el oxgeno creando un ambiente anaerobio que impide la accin normal de PMN. Los PMN parasitados viran su ambiente a ph cido que al romperse cambian el ph del exudado. Algunos antimicrobianos actan con dificultad a ph cido. La accin de los betalactmicos en fase estacionaria es escasa. El antibitico no resuelve el absceso y debe drenarse quirrgicamente. MICROORGANISMOS MAS Bacteroides sp, Prevotella sp. FRECUENTES: Peptostreptococcus sp

- 11 -

PIE DIABETICO Los problemas vasculares y nerviosos junto a alteraciones defensivas e higinicas conducen al desarrollo de lceras infectadas. MICROORGANISMOS ANAEROBIOS MAS FRECUENTES: Peptostreptococcus sp, Bacteroides sp, Clostridium sp. MIONECROSIS Infeccin muy grave, con alto ndice de mortalidad. Se caracteriza por aparicin sbito de dolor en una herida previa, edema frialdad, palidez con reas de color bronce, bullas hemorrgicas, necrosis y un cuadro de toxemia. MICROORGANISMOS MAS FRECUENTES: Clostridium perfringens, C. novi, C. spticum, C. histolticum. CELULITIS ANAEROBIA Se localiza en tejidos epifasciales, puede evolucionar con grandes necrosis. Las manifestaciones sistmicas son raras. Se puede presentar dolor, edema, eritema, hipersensibilidad y crepitacin, supuracin maloliente. Anaerobios ms frecuentes: Clostridium sp, Peptostreptococcus, Bacteroides sp, Prevotella sp.

DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DE INFECCION POR ANAEROBIOS

El diagnstico microbiolgico de infecciones por anaerbios se realiza mediante cultivos en anaerobiosis, los cuales nos permiten recuperar el microorganismo y confirmar el diagnstico clnico de la infeccin. MUESTRAS ADECUADAS PARA EL PROCESAMIENTO: Se consideran muestras inadecuadas las que provienen de las superficies mucosas ya que es difcil diferenciar si el agente causal aislado es un comensal o el germen infeccioso. Muestras de sitios que no albergan flora normal, obtenidas por aspiracin son adecuadas para cultivar en anaerobiosis. TOMA DE MUESTRAS Para obtener unos resultados satisfactorios, es indispensable una buena Seleccin, y recoleccin de la muestra. Un transporte rpido, evita que las bacterias esten expuestas al oxgeno. Es de particular importancia realizar una perfecta decontaminacin de piel con jabn quirrgico y solucin desinfectante como alcohol o compuestos yodados, para eliminar la flora normal.

- 12 La toma de la muestra debe hacerse con jeringa, los hisopados no se recomiendan por la exposicin del espcimen al aire y porque son ms susceptibles a contaminacin con bacterias de la flora normal. Una vez tomada la muestra debe evitarse la exposicin al oxgeno tapando el extremo de la aguja con un tapn de caucho despus de eliminar el aire si ste ha pasado a la jeringa. Transportar al laboratorio en el menor tiempo posible, existen factores que pueden modificar la composicin bacteriana inicial tales como temperatura, o humedad, El tiempo no debe exceder de 20 minutos. Las muestras no se deben guardar o transportar refrigeradas porque en el fro el oxgeno se difunde ms rpidamente. En caso de tener acceso a medios de transporte debe realizarse en un medio especfico para bacterias anaerobias y deben tener atmsfera anaerobia. SISTEMAS DE INCUBACION ANAEROBIA Jarra anaerbica: Recipiente de cierre hermtico, en el que se elimina el oxgeno por diferentes medios (sobres generadores de gases como hidrgeno, nitrgeno y CO2 que desplazan el oxgeno y crean un ambiente anaerobio), incluyen un catalizador y un indicador de anaerobiosis. Cmara de anaerobiosis: Cabina hermticamente cerrada de plstico, metal, fibra de vidrio o polivinilo, con un sistema de intercambio, dos puertas interna y externa y que puede llenarse de gas libre de oxgeno, lleva adems soportes con guantes incorporados para realizar manipulacin de muestras en el interior. Bolsas de anaerobiosis: Bolsas de plstico transparente.Usan tambin sobres generadores de gases proporcionales a su tamao e indicadores de anaerobiosis. MEDIOS DE CULTIVO Se utilizan medios selectivos, no selectivos y de enriquecimiento.Los medios de cultivo para anaerobios tienen una alta proporcin de peptonas e hidratos de carbono ya que su metabolismo es ms exigente que el de bacterias facultativas y requieren adems factores de crecimiento como la hemina y vitamina K. Los medios empleados con mayor frecuencia son: - AGAR SANGRE ANAEROBIO (ASA): Agar sangre complementado con Vitamina K y hemina Medio no selectivo. Crecen anaerobios y anaerobios facultativos.

- 13 - AGAR SANGRE LACADA KANAMICINA VANCOMICINA (ASLKV): Medio selectivo para bacilos Gram negativos anaerobios, favorece produccin de pigmento. - FENILETIL ALCOHOL AGAR (FEA): Inhibe el crecimiento de bacilos Gram negativos aerobios facultativos.Crecen la mayor parte de anaerobios Gram positivos y Gram negativos, el alcohol sirve como aceptor final de electrones. AGAR BACTEROIDES BILIS ESCULINA (BBE): Selectivo para Bacteroides sobre todo grupo frgilis, pueden crecer tambin fusobacterium. - AGAR YEMA DE HUEVO (EYA): Para Clostridium sp. - AGAR CICLOSERINA CEFOXITINA FRUCTOSA (CCFA): Para Clostridium difficile. - AGAR CHOCOLATE: Contiene hemina. - CALDO TIOGLICOLATO - CALDO GLUCOSA CON CARNE: Suplementado con vit k y hemina - CALDO INFUSION CEREBRO CORAZON INCUBACION La mayora de los casos se incuban a una temperatura de 35 a 37 C. El tiempo de incubacin debe ser de 72 a 96 horas ya que estos microorganismos a diferencia de los aerobios son de crecimiento lento. Se debe evitar la exposicin al aire. IDENTIFICACION DE BACTERIAS ANAEROBIAS Una vez ingresa la muestra al laboratorio, se procede a confirmar datos de identificacin como: Nombre y apellidos del paciente, N de historia clnica, Fecha y hora de toma de la muestra, servicio donde est hospitalizado, N de cama. TINCION DE GRAM : Se deben observar caractersticas morfolgicas y de Tincin que son sugestivos de las bacterias anaerobias: Bacilos Gram negativos decolorados o mal teidos. Es importante observar la forma, el tamao y la disposicin de las bacterias, nmero relativo de microorganismos presentes, presencia de esporos, rasgos morfolgicos como ramificacin.filamentos, cuerpos esfricos, extremos en punta y formas granulares. La presencia y cantidad de leucocitos PMN (reaccin leucocitaria) y de clulas epiteliales.

- 14 INOCULACIN EN MEDIOS DE CULTIVO: Antes de realizar la inoculacin se deben tener en cuenta aspectos como: * Tipo de muestra (lquidos, tejidos, secreciones) para aplicar los protocolos respectivos. * Sistema anaerbico que se va a usar: Cuando no se trabaja en cmara anaerbica se debe tener agilidad en la realizacin del procedimiento porque la presencia del oxgeno del aire ocasiona prdida de gran nmero de bacterias. * Tcnica de aislamiento adecuada. La inoculacin inicial se realiza en medios de inoculacin primaria. Slidos y lquidos. Se realiza atmsfera anaerbica y se incuban 35-37 C durante 24 a 96 horas. En ste lapso de tiempo se realiza observacin directa diaria, buscando la presencia de crecimiento bacteriano; colonias en medios slidos o turbidez y cambios de color en medios lquidos. Una vez se presenta crecimiento de colonias se debe observar sus caractersticas como tamao, color, superficie, consistencia.Se realizan tinciones de Gram a las colonias aisladas. PRUEBA DE AEROTOLERANCIA: Se realiza a toda colonia que haya crecido en ambiente anaerbico. Consiste en transferir cada colonia de la placa de aislamiento anaerobio a una placa de agar sangre aerobio, incubndose de 12 a18 horas con atmsfera de CO2 del 5 al 10% en aerobiosis. El crecimiento o no del microorganismo en aerobiosis nos hace la diferencia entre un anaerobio estricto o un anaerobio facultativo. FASES DE IDENTIFICACION Existen diferentes mtodos de identificacin de bacterias anaerobias. Se pueden diferenciar tres fases de identificacin de bacterias anaerobias, de acuerdo al nivel de complejidad y a los recursos del laboratorio donde se realiza. FASE I: Se relaciona con la morfologa y tincin; se realiza mediante la Tincin de Gram. FASE II: Identificacin de gnero mediante: 1.- Pruebas de sensibilidad a antimicrobianos: se realizan con discos de papel de filtro impregnados con antimicrobianos (sensidiscos) como kanamicina, colistina, vancomicina. La lectura se realiza a las 24-48 horas de incubacin siendo sensible cuando el halo de inhibicin es igual o mayor de 10mm de dimetro.

- 15 2.- Pruebas bioqumicas: Una vez se obtiene un cultivo puro del microorganismo se pueden realizar pruebas bioqumicas de acuerdo al tipo de microorganismo segn sea Gram positivo o Gram negativo. Ejemplo catalasa, indol, nitratos, urea, lecitinasa, lipasa. FASE III: Para identificacin definitiva de anaerobios la cual incluye genero y especie. Requiere adems de las pruebas utilizadas en el nivel II, una serie de mtodos adicionales. Y pruebas sofisticadas como la cromatografa liquido-gas. Existen tambin sistemas enzimticos rpidos como RapID-ANA II, MicroScan, o ANI Card (Vitek).Para utilizar stos sistemas es necesario tener un aislamiento del microorganismo en cultivo puro.

GENERO CLOSTRIDIUM
Las Bacterias del gnero Clostridium son bacilos Gram positivos esporulados, la mayor parte de sus especies son anaerobios estrictos .Su hbitat es el medio ambiente, el suelo y el tracto gastrointestinal del hombre y animales.Las esporas los hacen muy resistentes a los factores externos como calor, humedad, desecacin,desinfectantes. MORFOLOGIA: Pueden observarse como bacilos largos, estrechos, Pleomorficos a veces de formas filamentosas de gran longitud.Forman esporas que pueden situarse en la regin terminal, subterminal o central de acuerdo a la especie. Algunos son mviles poseen flagelos pertricos, otros son capsulados como el Clostridium perfringens. METABOLISMO: Carecen de citocromos necesarios para el transporte de electrones, de catalasas y peroxidasas. La mayora producen grandes cantidades de gas (CO2 e H) por fermentacin butrica.Fermentan varios azcares lo que permite la diferenciacin de especies junto con reacciones bioqumicas como: Liquefaccin de la gelatina, reduccin de nitratos, produccin de indol a partir de triptfano. Existen especies proteoliticas y otras sacarolticas. FACTORES DE PATOGENICIDAD: Poseen enzimas como colagenasa Proteinasas, hialuronidasas, desoxirribonucleasa, lecitinasa y neuraminidasa las cuales actan a nivel local produciendo destruccin de tejidos, algunas de stas actan como toxinas en el husped. Toxinas: Protenas que elabora el microorganismo y llegan a ser potentes exotoxinas que actan a nivel de rganos y sistemas ,como la toxina tetnica y botulnica, cuya potencia se halla relacionada con su afinidad por el sistema nervioso central y sus acciones farmacolgicas estn relacionadas con el bloqueo de la liberacin de acetilcolina en las terminaciones nerviosas.

- 16 Pueden diferenciarse varias clases segn el tropismo del microorganismo: Neurotoxinas, enterotoxinas, hemolisinas, histotoxinas. Las esporas, Altamente resistentes al calor y a los desinfectantes sobreviven durante largos periodos de tiempo expuestas al aire, germinan cuando encuentran las condiciones necesarias de oxido-reduccin. Poseen antgenos flagelares (H) termo lbiles y antgenos somticos (O) lipopolisacridos que son termo estables. ESPECIES CLINICAMENTE IMPORTANTES - Clostridium tetani. Produce el ttano - Clostridium botulinum produce botulismo, botulismo infantil, botulismo de heridas. - Clostridium perfringens. Produce intoxicacin alimentaria, mionecrosis, celulitis anaerobica, colitis necrotizante. - Clostridium difficile. Produce colitis pseudomembranosa.

GENERO BACTEROIDES
Bacilos Gram negativos pequeos de extremos redondeados, poseen largas vacuolas, contienen esfingolpidos en la membrana .Algunos poseen enzima sper oxido dismutasa (SOD) y otras protenas inducidas por el oxgeno. Anaerobios aerotolerantes, no forman esporas, son inmviles. Forman parte de la flora normal del TGI, est comn mente en leon terminal y prolifera en colon en proporciones de 10 9 microorganismos/gr.Tambin se puede encontrar en boca, vagina y uretra. METABOLISMO: Producen un conjunto de cidos succnico, lctico, actico, Frmico y propinico y algunos de ellos una mezcla de ac.actico y butrico, como productos de la fermentacin de la glucosa. FACTORES DE PATOGENICIDAD: - Cpsula compuesta de polisacridos A y B, la cual puede conferir resistencia para mecanismos de defensa del husped.Los antgenos capsulares pueden causar ms una respuesta de clulas T que una mediada por anticuerpos. Puede estimular los depsitos de fibrina e inducir la formacin de abscesos. - Degrada el complemento del husped por factores no identificados. - Produce enzimas como neuraminidasa, hialuronidasa, Dnasa, fosfatasa y muy ocasionalmente fibrinolisinas. - Produce heparinasa que puede predisponer a trombosis vascular. - Produce Zinc metalo proteasas (Entero toxina).

- 17 ESPECIES CLINICAMENTE IMPORTANTES: Bacteroides frgilis. Bacteroides melaninognicus. PATOGENIA Los Bacteroides son microorganismos comensales no invasores, pero en ciertas circunstancias, pueden producir infecciones graves y mortales se ha reportado hasta un 60% de mortalidad. Infecta cualquier sitio del organismo. Producen secrecin purulenta y suelen producir gases en el interior de los tejidos. Los factores predisponentes de mayor frecuencia son los traumas quirrgicos o accidentales, edema, anoxia y destruccin de tejidos, en stas circunstancias, pueden invadir los tejidos multiplicndose rpidamente. Con frecuencia pueden producir abscesos. Beneficios: - Estos microorganismos producen ac. Actico, butrico y propinico Proporcionando el 70% de la energa a los entericitos colonicos. - Juegan un papel clave en la recirculacin de ac. Biliares entero hepticos y en la biotransformacin de cidos biliares. - Compite por los substratos con microorganismos patgenos. - Produce algo de vit K. DIAGNOSTICO MICROBIOLGICO * Toma de muestra por aspiracin. * Cultivo para anaerobios. BIBLIOGRAFIA - Jawetz, Ernest. Microbiologa mdica. 17. ed. Editorial Appleton and Larg. 2002 - Mims, Cedric A. Microbiologa mdica. Editorial Mosby/doyma, 1995. - Murray, Patgrick R. Microbiologa mdica, 2da ed. Editorial Harcourt Brace, Espaa, 1.997 - Sherris, John C. Microbiologa mdica: Introduccin a las Enfermedades Infecciosas. Editorial Mosby/Doyma, 1993 - Zinsser, H. Zinsser Microbiologa, 20 ed. Editorial Panamericana, 1995 - Mandell, Gerald. Enfermedades Infecciosas. Principios y prctica, Vol., 2. ed. Editorial. mdica Panamericana, 1997 - Schaechter, Moselio. Microbiologa. Mecanismos de las Enfermedades Infecciosas. Estudio y enfoque mediante resolucin de problemas. 2 ed. Editorial Panamericana. - Koneman, Elmer. Diagnostico microbiolgico Texto y Atlas color. 5. Editorial Panamericana, 1999

- 18 - Muoz, Agredo Barcelona1993. Julio. Infecciones por Anaerobios. RMNS.4589/90

- 19 -