http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/centrifugacio_tipus.

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11. CENTRIFUGACIn > 11.1 Fundamentos de la tcnica

El mejor mtodo para separar un slido insoluble de un lquido es la filtracin. Tambin se puede utilizar la tcnica de decantacin si el slido se deposita fcilmente por gravedad en el fondo del recipiente (sedimentacin), o si permanece en la superficie del lquido (flotacin). Un slido sedimenta o flota dependiendo de su densidad respecto a la del lquido. En otras palabras, el slido experimenta una fuerza ascendente debida al empuje que el lquido ejerce sobre ste, cuya magnitud es igual a la del peso del lquido desplazado por el slido (principio de Arqumedes). El slido sedimentar si esta fuerza es inferior a la fuerza que la gravedad ejerce sobre el slido; en caso contrario, flotar. Si las partculas son muy pequeas, los procesos de sedimentacin o flotacin pueden ser extremadamente lentos debido, por un lado, a la resistencia al avance de las partculas provocada por la friccin que se establece entre stas y las del lquido, y, por otro, a los movimientos aleatorios de las partculas inducidos por las turbulencias trmicas que se generan en el seno del lquido (difusin). En estos casos, hay que recurrir a la centrifugacin para separarlas. La centrifugacin es una tcnica de separacin que se utiliza para aislar o concentrar partculas suspendidas en un lquido aprovechando la diferente velocidad de desplazamiento segn su forma, tamao o peso al ser sometidas a una fuerza centrfuga. La fuerza centrfuga es la que se ejerce sobre un cuerpo cuando ste gira alrededor de un eje. Esta fuerza, cuya magnitud es directamente proporcional a la masa del cuerpo, el radio de giro y la velocidad de giro (o angular), es perpendicular al eje y tiende a alejar el cuerpo del mismo. La fuerza centrfuga puede acelerar el proceso de sedimentacin de partculas que tienen tendencia a hacerlo espontneamente (densidad superior a la del lquido), o provocar este proceso en aquellas que tienden a flotar (densidad inferior a la del lquido). En este sentido, la tecnologa actual permite llegar a fuerzas de centenares de miles de veces la fuerza de la gravedad (1g es aproximadamente la fuerza centrfuga generada por un rotor de 25 cm de radio girando a una revolucin por Segundo). 11. CENTRIFUGACIn > 11.2 TIPoS DE CENTRIFUGACIn

La centrifugacin se puede llevar a cabo a escala preparativa o escala analtica. La primera se utiliza para aislar partculas y la segunda permite determinar propiedades fsicas como la velocidad de sedimentacin o el peso molecular. Las partculas se pueden separar en funcin de la velocidad de sedimentacin (centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin zonal) o la densidad (centrifugacin isopcnica). La centrifugacin zonal y la centrifugacin isopcnica constituyen ejemplos de centrifugacin mediante un gradiente de densidades. Hay diferentes tipos de centrfugas segn el rango de velocidades de giro:

A. Centrfugas de baja velocidad, de sobremesa o clnicas. De pequeo tamao y sin refrigeracin. Alcanzan una velocidad mxima de 5000 rpm. tiles para la separacin de partculas grandes como clulas o precipitados de sales insolubles.

Las centrfugas micrfugas son una variante de las anteriores que permiten llegar a velocidades de ms de 10.000 rpm, siendo los volmenes de trabajo muy pequeos. Son tiles en el campo de la biologa molecular.

B. Centrfugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades de entre 18.000 y 25.000 rpm. Son refrigeradas y algunas tienen sistema de vaco para evitar el calentamiento del rotor a causa del rozamiento con el aire. Son tiles en la separacin de fracciones celulares, pero insuficientes para la separacin de ribosomas, virus o macromolculas en general.

C. Ultracentrfugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que tienen sistemas auxiliares de refrigeracin i de alto vaco. Hay ultracentrfugas analticas que permiten la obtencin de datos precisos de propiedades de sedimentacin (coeficientes de sedimentacin, pesos moleculares), y preparativas, tiles para aislar partculas de bajo coeficiente de sedimentacin (microsomas, virus, macromolculas).

11.2.1 Centrifugacin diferencial Es el proceso que tiene como resultado la obtencin de un sobrenadante y un material sedimentado.

11.2.2 Centrifugacin mediante un gradiente de densidades: Este tipo de centrifugacin es un proceso mediante el cual las partculas se distribuyen en fracciones de diferentes densidades de un fluido lquido. El mtodo es un poco ms elaborado que la centrifugacin diferencial, no obstante presenta ventajas que compensan el trabajo aadido. La tcnica permite la separacin de varios o todos los componentes de la muestra y la realizacin de medidas analticas. El mtodo de gradiente de densidades implica la utilizacin de un soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior. El gradiente se consigue con un soluto preferiblemente de baja masa molecular, de tal manera que la muestra a analizar pueda ser suspendida en la solucin resultante. Como solutos se utilizan la sacarosa, polisacridos sintticos, derivados yodados del cido benzoico, o sales de metales alcalinos pesados como el rubidio o el cesio, entre otros. La muestra se deposita en la parte superior del gradiente como una fina banda y, tras centrifugar, la separacin de los componentes de la muestra se presenta como diferentes bandas o zonas que pueden ser separadas (o fraccionadas). Hay dos variantes de este mtodo, la centrifugacin zonal y la centrifugacin isopcnica:

11.2.2.1 Centrifugacin zonal En la centrifugacin zonal la muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de densidades previamente formado. A causa de la fuerza centrfuga las partculas se mueven a velocidades que dependen de la masa y sedimentan en diferentes zonas del gradiente. La densidad mxima del gradiente no ha de exceder a la de las partculas a separar.

11.2.2.2 Centrifugacin isopcnica La centrifugacin isopcnica separa les partculas en un gradiente de densidades en funcin de la densidad de las mismas. Las partculas se mueven en el gradiente hasta que llegan a un punto donde la densidad de stas i la del gradiente son idnticas (de aqu el nombre de isopcnico). En este caso, es condicin fundamental que la densidad mxima del gradiente final ha de exceder siempre a la densidad de las partculas. Por

este motivo la sedimentacin final no se produce si se controlan las condiciones de centrifugacin, ya que las partculas flotan sobre un "colchn" de material que posee una densidad superior a la de stas. Esta tcnica se utiliza, por ejemplo, para separar partculas similares en tamao pero de diferente densidad. En este sentido, la centrifugacin isopcnica es un mtodo adecuado para separar cidos nucleicos o diferentes orgnulos celulares.

11. CENTRIFUGACIn > 11.3 Aplicacin La centrifugacin se utiliza para separar partculas en suspensin en el seno de un lquido o partculas en disolucin, siendo ste el caso donde se encuentran ms aplicaciones. As, se utiliza habitualmente en biologa ya que permite separar clulas, orgnulos subcelulares o macromolculas. 11. CENTRIFUGACIn > 11.4 UTillaje / Material Independientemente del tipo de centrifugacin que se vaya a utilizar, el elemento bsico necesario es la centrfuga. Una centrfuga consta de un motor, un rotor adaptado especialmente para poner tubos de muestra y un compartimento donde est alojado el motor para aislarlo del exterior. Cuando la velocidad de giro es muy elevada, este compartimento es totalmente estanco y se refrigera para poder trabajar al vaco y evitar el calentamiento del rotor. Por otro lado, este recinto suele estar blindado para evitar accidentes en caso de rotura del rotor 11. CENTRIFUGACIn > 11.5 Montaje Slo se requiere que la centrfuga est sobre una base slida exenta de vibraciones y en un espacio suficientemente amplio para que pueda ser manipulada sin problemas.

11. CENTRIFUGACIn > 11.6 Procedimiento a) Colocar el tubo de muestra (suspensin o disolucin) en uno de los receptculos del rotor.

b) Compensar el tubo de muestra colocando en el receptculo diametralmente opuesto otro tubo con un volumen de lquido de peso idntico al de la muestra.

c) Cerrar hermticamente el compartimento del rotor y poner en funcionamiento la centrfuga. Una vez acabada la centrifugacin (normalmente las centrfugas tienen un temporizador que desconecta automticamente el motor una vez transcurrido el tiempo programado), esperar a que se detenga el rotor para abrir la tapa del compartimento donde est alojado y sacar el tubo de muestra y el de compensacin.

11. CENTRIFUGACIn > 11.7 riesgos y normas de seguridad La centrfuga ha de estar sobre una base slida y fija. El rotor ha de ser compatible con la centrfuga que se quiere utilizar y ha de estar perfectamente fijado al motor. La distribucin de los tubos en el rotor ha de ser tal que ste est perfectamente equilibrado (compensado) para evitar vibraciones durante el giro y, por lo tanto, su rotura. Si es necesario, se utilizan tubos adicionales con volmenes de lquido de pesos idnticos a los de las muestras. Los tubos han de ser compatibles con la centrfuga para evitar roturas durante el funcionamiento de la misma. La tapa que asla el rotor del exterior ha de estar bien cerrada y asegurada. Nunca se ha de dejar la centrfuga sin atencin hasta llegar a la velocidad mxima de giro.

4. pesada ndice Introducci Metodologa en el treball al laboratori Material i muntatges Pesada Punt de fusi

Filtraci Precipitaci i cristallitzaci Evaporaci i dessecaci Extracci Destillaci Centrifugaci Cromatografa

tancar tancar

Las balanzas son instrumentos destinados a equilibrar la fuerza de la gravedad que acta sobre la masa de un cuerpo con la que acta sobre otro que se toma como referencia. Las balanzas se caracterizan por su exactitud y por su sensibilidad. La primera cualidad se refiere a la propiedad que posee cualquier instrumento fsico para suministrar el resultado de una medida con un valor coincidente con el verdadero; ello implica que el error sea lo ms reducido posible. El trmino exactitud se toma con frecuencia como equivalente al de precisin. La sensibilidad est determinada por la aptitud de determinar con exactitud resultados de valores muy reducidos, y puede expresarse como la diferencia entre valores extremos de varias medidas de la misma magnitud. En general en todos los mtodos de anlisis qumicos es necesario determinar la masa (pesar) exacta en alguna etapa, y para esto se utiliza una balanza analtica de precisin de 0,1 mg. . En otras ocasiones no es necesario conocer la masa de una manera tan precisa, y entonces se utilizan balanzas monoplato que son ms resistentes y de menor precisin . sta es la situacin habitual en un laboratorio de sntesis y podis observar su correcta utilizacin en el vdeo. Como utilizar correctamente la balanza:

La balanza analtica La balanza analtica tiene una capacidad mxima comprendida en general entre 120-200 g. La exactitud o la fiabilidad de los resultados de pesada estn muy relacionados con su emplazamiento y por esto se ha de colocar en un lugar:

a) con muy pocas vibraciones. b) sin corrientes de aire. c) con una temperatura ambiente y humedad lo ms constantes posible.

Normas de utilizacin de una balanza analtica Antes de empezar se ha de asegurar que la balanza est bien nivelada (la mayora de las balanzas tienen una burbuja de aire que permite comprobar su nivel). Es necesario verificar que la balanza seale exactamente el cero; es caso de no ser as, hay que calibrarla nuevamente.

Para efectuar la pesada hay que tener en cuenta: - No pesar las sustancias directamente sobre el plato de la balanza. - Utilizar un recipiente limpio y seco: un vidrio de reloj o un recipiente lo ms pequeo posible. - El recipiente y la carga que se han de pesar tienen que estar a la misma temperatura que el entorno. - Colocar el material que se quiere pesar en el centro del plato de la balanza. - Al acabar el proceso de medida, retirar la carga del plato de la balanza.

Procedimiento Se pesa el recipiente idneo que ha de contener a la muestra (esto se llama tarar). Se retira de la balanza y una vez fuera se aade la sustancia que se quiere pesar con una esptula, si es un slido, o se adiciona con una pipeta, si es un lquido. Siempre se debe retirar el recipiente del plato de la balanza para adicionar el producto, para evitar que se nos caiga un poco sobre el plato y deteriore a la balanza. El recipiente con la muestra se vuelve a colocar en el centro del plato de la balanza y se efecta la lectura de pesada. Hay que anotar el peso exacto, indicando todas las cifras decimales que d la balanza utilizada. La diferencia entre este valor de pesada y la tara nos dar el peso del producto. Despus de pesar se ha de descargar la balanza, es decir ponerla a cero (a menos que las indicaciones del fabricante aconsejen otra cosa). La cmara de pesada y el plato de la balanza se deben dejar perfectamente limpios.

Entre dos pesadas independientes hay que lavar la esptula con el disolvente adecuado, en general agua desionizada y secarla.

Errores de pesada Al intentar pesar nos podemos encontrar que la lectura del peso sea inestable. Las causas ms frecuentes de este hecho y sus posibles soluciones son:

Lectura de peso inestable Soluciones Manipulacin incorrecta de la carga Colocar la carga en el centro del plato Diferencia de temperatura entre la carga y Aclimatar la muestra el entorno Absorcin de humedad Poner un agente desecante en la cmara de pesada Evaporacin Utilizar un recipiente con tapa Oscilacin del valor Evitar las corrientes de aire