1

MINISTRIO DA EDUCAO SECRETARIA DE EDUCAO PROFISSIONAL E TECNOLGICA INSTITUTO FEDERAL DO RIO DE JANEIRO IFRJ Campus Nilpolis

Equipe: Andra Mello Zara Santanna Fernando Bezerra Ttulo da prtica: _____________________________________________ Data da realizao: _________ Turma: ________ Componentes do grupo: _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ n ____ n ____ n ____ n ____ n ____ n ____ n ____ n ____
E-Excelente(0,2)

Data limite de entrega: Data de entrega: Avaliao

Critrios na avaliao do grupo: (1,0 ponto) I- Insatisfatrio(0) R- Razovel(0,05) B-Bom(0,1)

1. 2. 3. 4. 5.

Pontualidade______________________________________ Organizao da bancada durante o trabalho______________ Apresentao final do material e da bancada_____________ Nvel de autonomia do grupo_________________________ Uso do caderno do analista___________________________

Comentrios: Professor responsvel pelo acompanhamento da prtica: Professor responsvel pela avaliao do relatrio:

NORMAS GERAIS DE FUNCIONAMENTO DO LABORATRIO E ELABORAO DE RELATRIOS DE ANLISE INSTRUMENTAL.

1. No ser permitida a entrada no laboratrio, depois de decorridos 15 min. do incio da aula. 2. No ser permitida a realizao da aula prtica pelo aluno, que no estiver portando cala comprida e sapato fechado, bem como o EPI pertinente. O aluno que tiver cabelos compridos dever prend-lo. 3. Os alunos devero trazer os clculos j feitos, pertinentes aula prtica que iro realizar. 4. Os relatrios devero ser entregues, impreterivelmente na aula seguinte, sob pena de ter descontado 1(um) ponto da nota final do relatrio.
5.

Devero constar em todos os relatrios os seguintes itens (5,0 pontos no total): Capa fornecida aos alunos pelo professor no dia da prtica, contendo a identificao da aula e dos componentes do grupo (quando for o caso) e avaliao do professor, sobre o andamento do trabalho experimental durante a aula.

Descrever o equipamento e material utilizado na aula prtica (marca, tipo, modelo, vidraria, etc...). (0,5 ponto) Descrever as condies de anlise (caminho tico, clula de absoro, comprimento de onda, tipos de eletrodos, etc...). (0,5 ponto) Listar os dados obtidos na prtica. (0,5 ponto) Discutir os resultados obtidos. (2,0 pontos) Citar a bibliografia consultada. (0,5 ponto) Comentar os procedimentos de descarte de resduos. (1,0 ponto)

QUANTIFICAO DE CIDO ACETILSALICLICO EM COMPRIMIDOS DE AAS 100 mg POR ESPECTROFOTOMETRIA NA REGIO DO ULTRAVIOLETA 1) Reagentes Padro de cido acetilsaliclico (AAS); lcool isoproplico (grau espectroscpico); Comprimidos de AAS 100 mg (AAS infantil). 2) Procedimento 2.1) Preparao da Soluo-Estoque Pesar com exatido cerca de 60 mg de cido acetilsaliclico e transferir para balo volumtrico de 50,00 mL, previamente rinsado com lcool isoproplico, chamado de soluoestoque (S.E.). Dissolver at o desaparecimento de slido no fundo do balo volumtrico, para tal, submeter a (S.E.) a banho ultrassnico no tempo necessrio. Completar o balo volumtrico de 50,00 mL ao volume e homogeneizar. 2.2) Preparao da Curva de Calibrao A partir da soluo-estoque (S.E.), criar as solues-padro (S.P.) por diluio. As S.P. sero submetidas leitura no espectrofotmetro. Utilizar lcool isoproplico grau espectroscpico para proceder as diluies conforme a tabela 1: Tabela 1: Preparao das diluies das S.M. Padro n Diluio Volume final 1 10 x 10,00 mL 2 20 x 10,00 mL 3 40 x 10,00 mL 4 100 x 10,00 mL 5 200 x 10,00 mL Realizar a varredura da S.P. de menor concentrao, a fim de determinar o mx do analito, no intervalo de comprimento de onda na regio do ultravioleta. Aps definir o comprimento de onda adequado, proceder a leitura da soluo em branco (solvente) por meio da tecla ZERO do espectrofotmetro. Realizar as leituras das S.P. conforme a seqncia da tabela 1 e anotar os resultados na tabela 2.

OBS2: Levar em considerao o teor do padro utilizado para proceder aos clculos.

Tabela 2: Dados das leituras e concentraes das S.P. Padro n [S.P.] em mg/mL Aborvncia 1 2 3 4 5 Criar uma curva de calibrao de Absorvncia x [S.P.] em mg/mL e, pelo mtodo de regresso linear, plote a equao da reta que passa pelos pontos das S.P. 3) Preparao da Amostra Selecionar 5 comprimidos de AAS 100 mg e pes-los, individualmente, com exatido. Calcular a mdia para obter o peso mdio do comprimido (P.M.). Juntar e triturar os 5 comprimidos em graal at obter um p muito fino. Pesar, com exatido, a massa equivalente a do P.M. e transferir quantitativamente para balo volumtrico de 50,00 mL. Adicionar lcool isoproplico at cerca de do volume do balo volumtrico. Submet-lo em seguida a banho ultrassnico durante 20 minutos. Completar o balo volumtrico de 50,00 mL ao volume e agitar, vigorosamente, por mais 5 minutos. Submeter a amostra filtrao com papel do tipo quantitativo. Diluir a amostra 20 vezes para balo volumtrico de 10,00 mL. Ao filtrado, realizar a medio da absorvncia em espectrofotmetro no comprimento de onda selecionado. 4) Clculos Relacionar o valor de absorvncia da amostra com a equao obtida das S.P., levando em considerao as diluies realizadas. Demonstrar os clculos de massa de AAS contida no peso mdio encontrado no comprimido.

5) QUESTES A SEREM RESPONDIDAS NO RELATRIO (Total 5,0 pontos):

1.

Construir a Curva Analtica de A x C (Mg/mL) de cido acetilsaliclico e calcular a equao da reta. (1,0 ponto)

5 2.

Calcular a concentrao de cido acetilsaliclico presente no comprimido de AAS, demonstrando os clculos. (2,0 pontos) Apresentar a Curva de Varredura (curva de absoro) do cido acetilsaliclico, explicando a escolha do mx. utilizado na prtica. (0,5 ponto) Calcular o desvio relativo percentual relativo ao mximo permitido pela legislao, ou em relao ao fornecido no rtulo. (0,5 ponto) Discutir as vantagens e limitaes do mtodo, abordando os seguintes aspectos: praticidade do mtodo, possveis interferentes e fontes de erro (dica: pesquisar e comparar com os mtodos de HPLC e titulao potenciomtrica). (1,0 ponto)

3.

4.

5.

DETERMINAAO ESPECTROFOTOMTRICA DE FOSFATO EM BIOTNICO FONTOURA.

1) INTRODUO: O cido fosfrico utilizado como acidulante em alguns tipos de refrigerantes. Os ons PO43-, HPO42- e H2PO- gerados no meio aquoso, dependendo do pH, correspondem ao contedo total de fsforo inorgnico. A determinao espectrofotomtrica possvel a partir da formao do cido molibdofosfrico que ento reduzido, pelo sulfato ferroso, a uma substncia intensamente colorido (azul de molibdnio) cuja concentrao proporcional concentrao de fsforo. 2) PROCEDIMENTO:
2.1) Aparelhagem Antes de iniciar a prtica limpar as vidrarias com HCl diludo e rinsar com H2O deionizada. No use detergente, pois alguns detergentes comerciais contem fosfato. 2.2) Preparo da soluo colorimtrica A soluo vanadomolibdato de amnio em meio cido j estar preparada previamente, 2.3) Preparo das solues-padro Preparar uma soluo-padro a uma concentrao de 10 g de P/mL, a partir da soluo estoque (j preparada) de fosfato a aproximadamente 500g de P/mL. Anotar a concentrao exata da soluo. Preparar solues-padro 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 e 2,5 g de P/mL em B.V. 25,00mL e antes de avolumar com gua o B.V 25,00mL adicionar 2,5 mL de soluo de vanadomolibdato de amnio em meio cido em cada balo. Aps o preparo das solues anotar a hora. Aguardar cerca de 20 minutos para a leitura no espectrofotmetro. 2.4) Preparo da amostra Diluir 20 vezes a amostra em B.V. 100 mL. Diluir novamente 2 vezes em b.v de 10 mL e antes de avolumar o B.V. adicionar 1,00mL de soluo de vanadomolibdato de amnio em meio cido. Avolumar e anotar a hora. Aguardar cerca de 20 minutos para a leitura no espectrofotmetro. 2.5) Preparo do Branco: Em B.V. 25,00 mL adicionar 2,5 mL de soluo de vanadomolibdato de amnio em meio cido e avolumar com gua. 2.6) Leitura: Realizar as leituras espectrofotomtricas a = 420 nm. Ajustar o 100% de transmitncia com o branco e em seguida fazer a leitura dos padres e amostra.

OBS: A soluo estoque de fosfato a 500g de P/mL preparada dissolvendo 2,194g de KH2PO4 anidro (seco previamente por uma hora em estufa a 110C), ou outro sal disponvel no laboratrio, em gua destilada, em balo volumtrico de 1L. 3) DESCARTE DE RESDUOS Todas as solues devero ser descartadas em recipiente apropriadamente identificado como rejeito. 4) QUESTES A SEREM RESPONDIDAS NO RELATRIO (Total 5,0 pontos)
1.

Construir em papel milimetrado a Curva de Calibrao de Absorbncia versus Concentrao de fsforo (g / mL) e calcular a equao da reta. (1,0 ponto) Calcular a concentrao de fosfato na amostra de refrigerante analisada, demostrando os clculos. Expresse o resultado em % (m/v) de cido fosfrico. (2,0 pontos) Calcular o desvio percentual relativo ao mximo permitido pela legislao ou em relao ao valor fornecido no rtulo do refrigerante, pelo fabricante. (1,0 ponto) Discutir as vantagens e limitaes do mtodo, para esse tipo de amostra (corada), abordando os seguintes aspectos: praticidade do mtodo, possveis interferentes e fontes de erro. (1,0 ponto)

2.

3.

4.

Obs: Os seguintes ons interferem em concentraes superiores a 1000 mg/L: Al +, Fe+, Mg+, Ca+, Ba+, Sr+, Li+, K+, NH4+, Cd+, Mn+,Pb+, Hg2+, Hg+, Sn+, Cu+, Ni+, Ag+, U4+, Zr4+, AsO3-, Br-, CO3-, ClO4-, CN-, IO3-, SiO44-, NO2-, NO3-, SO4+, SO3+, pirofosfato, molibidato, tetraborato, selenato, benzoato, citrato, oxalato, lactato, tartarato, formato e salicilato. A presena de slica e de arsenato causa interferncia positiva, somente se a amostra for aquecida. Interferncias negativas so causadas por arcenato, fluoreto, trio, bismuto, sulfeto, tiosulfato, tiocianato ou excesso de molibidato. A interferncia causada pelo on ferroso, ocorre somente se sua concentrao exceder a 100 mg/L. O on sulfeto pode ser removido por oxidao com gua de bromo. Se HNO3 for usado no teste, o on cloreto interfere a 75 mg/L. 3) DESCARTE DE RESDUOS: Medir o pH da gua de lavagem e rinsagem das vidrarias, neutraliz-las e descart-las na pia. Descartar a amostra e as solues lidas no espectrofotmetro, normalmente, na pia; 4) QUESTES A SEREM RESPONDIDAS NO RELATRIO:
5. 6. 7. 8. 9.

Construir a Curva de Calibrao de Absorbncia versus Concentrao de fsforo (g / mL) e calcular a equao da reta. (1,0 ponto) Calcular a concentrao de fosfato na amostra analisada, demostrando os clculos. Expresse o resultado em % (m/v) de cido fosfrico. (2,0 pontos) Calcular o desvio percentual relativo ao valor especificado no rtulo do produto. (0,5 ponto) Calcular o desvio percentual relativo ao resultado obtido pelo mtodo potenciomtrico. (0,5 ponto) Discutir as vantagens e limitaes de cada um desses mtodos, para esse tipo de amostra, abordando os seguintes aspectos: praticidade dos mtodos, possveis interferentes e fontes de erro. (1,0 ponto)

* as questes 4 e 5 devero ser respondidas aps a realizao das duas prticas.

pHMETRIA.
1) INTRODUO: A medio e o controle da atividade do on H+ de suma importncia para os processos em soluo aquosa e no-aquosas. Essa medida s pode ser feita com o auxlio da potenciometria. a determinao potenciomtrica mais importante e fundamental que o profissional domine a tcnica. A medio do pH est mais limitada pela exatido dos tampes utilizados na calibrao do que pela qualidade do medidor. Escolher, preparar e manter em ordem os tampes fundamental para a medida do pH. Em sistemas de baixa condutividade difcil obter leituras estabilizadas de pH. A medida do pH feita utilizando o eletrodo de vidro. Utilizaremos um eletrodo de vidro combinado. 2) PROCEDIMENTO: 2.1) Preparo da amostra: Transferir a amostra para um Becker de 10 mL 2.2) Calibrao do aparelho e determinao do pH. a) Calibrao com um s ponto: Uma correlao menos exata entre a leitura do medidor e o valor correto de pH pode ser feita com um nico tampo. Deve-se lembrar que o valor de pH lido no aparelho corresponde a um valor de E entre o eletrodo indicador (menbrana de vidro) e o eletrodo de referncia correspondente. a.1) Colocar o eletrodo combinado de vidro no suporte. Lavar e secar o eletrodo usando um papel macio (leno de papel), evitando atritar demais. Deixar aberto o orifcio que leva soluo interna do eletrodo de referncia. Conectar o eletrodo ao medidor. O medidor dever estar em stand-by, isto , ligado, mas sem medir. a.2) Colocar o tampo 7 em um Becker pequeno (50 mL) e submirja o eletrodo na soluo tampo at que a juno cermica fique mergulhada no tampo. O tampo deve estar na temperatura ambiente, ou ser necessrio utilizar o ajuste de termo compensao. a.3) Agitar o frasco sem elev-lo da bancada, para homogeneizar o lquido na interface da membrana de vidro. a.4) Apertar a tecla de pH e aguardar a estabilizao da leitura do aparelho. a.5) Calibrar o pH ao valor exato do tampo naquela temperatura, utilizando o boto indicado para o primeiro padro. a.6) Voltar a colocar o aparelho em stand-by, antes de retirar o eletrodo da soluo, lav-lo e seca-lo. a.7) Transferir a amostra para outro Becker, mergulhar o eletrodo combinado de vidro, agitar, apertar a tecla para medir o pH e ler o valor aps estabilizao. a.8) Aps a leitura, retornar o aparelho para o modo stand-by (e faa isto sempre que no estiver usando). b) Calibrao com dois pontos: Esta calibrao a mais utilizada na rotina do laboratrio, j que ela melhora a correlao da leitura do aparelho com o valor exato de pH, pois ajusta melhor a inclinao da curva de calibrao. b.1) Conferir novamente o valor do primeiro tampo, ajustar se necessrio.

b.2) Colocar o segundo tampo (que deve ser cido, j que amostra cida) num Becker pequeno. b.3) Aps lavar e secar o eletrodo, mergulh-lo no segundo tampo, agitar e retirar do sytandy-by. Aps estabilizao da leitura, ajustar a escala do pH para o valor correto utilizando o outro boto de calibrao. Colocar em standy-by. b.4) Lavar e secar o eletrodo e proceder a leitura da amostra. Coloque o aparelho em standby. c) Calibrao com vrios pontos. Para ganhar maior exatido, pode-se traar a curva de calibrao do eletrodo utilizando vrios padres. Para isso, procede-se a leitura de cada tampo em milivolts. Os resultados serviro para a construo da curva de calibrao: E x pH. O valor de pH da amostra pode ser determinado por interpolao no grfico, ou pela equao da reta obtida por regresso linear. c.1) Proceder a leitura em mV todos os tampes, conforme procedimento anterior. Neste caso, os botes de calibrao no tm serventia. c.2) Fazer a leitura da amostra tambm em milivolts para obteno posterior do valor mais exato do pH. 3) TESTE DE DESEMPENHO: Nas anlises potenciomtricas os eletrodos so peas fundamentais, e a maioria dos problemas desse mtodo so oriundos da m utilizao, da conservao inadequada ou de desgastes inevitveis dos eletrodos. Sendo assim, os testes de desempenho devem ser feitos periodicamente. Antes de executar os testes abaixo, os seguintes parmetros devem ser sempre verificados: 1. Se o nvel da soluo interna dos eletrodos est acima do nvel da soluo. 2. Se a abertura lateral, por onde introduzida a soluo interna, est livre. 3. Se o medidor acusa muita oscilao no sinal devido falta de aterramento do aparelho, ou a juno porosa no est em contato com a soluo a ser medida, ou devido a algum problema no cabo do eletrodo. 4. Se h turvao, partculas em suspenso ou sal cristalizado nas solues internas. 3.1) Teste da resposta do eletrodo indicador: Esse teste avalia o desempenho da membrana seletiva. A partir dos dados da calibrao E x pH, determinar a equao da reta, cuja declividade a o fator de resposta do eletrodo de vidro. Admite-se um valor de, no mnimo, 92% da resposta terica. 3.2) Teste do pH0: Esse teste avalia o desempenho do sistema de referncia. A partir dos dados da calibrao E x pH, determinar o valor de pH quando a reta corta o eixo das abcissas (E = 0). Admite-se uma variao em torno de 6,5 a 7,5. Esse intervalo s vlido se o sistema for simtrico, por isso confira com o professor qual o sistema de referncia (interno e externo) que est sendo utilizado.

3.3) Teste de reprodutibilidade: Fazer dez determinaes de pH para uma mesma soluo (por exemplo o tampo 4,0), lavando e secando o eletrodo entre elas. interessante que as medidas sejam feitas por diferentes operadores. Ao mesmo tempo mea o teste de tempo de resposta. aceitavl uma variao

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de = 0,02 pH. Para calcular a variao, determine o desvio-padro (S) a partir da mdia dos resultados. O desvio-padro calculado pela equao: S = (Xi X)2 n-1

3.4) Teste do tempo de resposta: o tempo necessrio para que o valor de E ou de pH se estabilize dentro de uma faixa. O tempo de resposta dos eletrodos de vidro da ordem de 10-20 seg. Se ultrapassar 60 s deve haver problemas na membrana, na juno, no cabo coaxial ou falta aterramento no aparelho.

4) FINALIZAO: Lavar e secar o eletrodo, desconect-lo do medidor e mergulh-lo em KCl 0,1 mol/L. Tamponado em pH 5. Enrolar o cabo (sem dobr-lo) e prenda-o com fita ou arame. Com um anel de borracha, fechar o compartimento interno do eletrodo de referncia. Observar a juno do eletrodo para ver se resta quaisquer impurezas que possam obstru-la. Observar a membrana sensvel ao pH e informar ao professor se notar algo anormal. Desligar o medidor.

5) DESCARTE DE RESDUOS: Descartar a amostra de refrigerante, normalmente, na pia; Medir o pH da gua de lavagem e rinsagem, neutraliz-la e descart-la na pia. RELATRIO:
1. 2. 3. 4.

5.

Construir, em papel milimetrado o grfico da curva de calibrao pH x E do eletrodo utilizado. Apresentar a equao do eletrodo e calcular o pH da amostra. (1,0 ponto) Calcular %S e pH0, desvio padro do teste de reprodutibilidade e tempo de resposta. (2,0 pontos) Fazer um breve comentrio sobre as condies do eletrodo, baseado nas respostas da questo anterior. (1,0 ponto) Comparar os resultados de pH da amostra obtidos pelas diferentes tcnicas de calibrao e fazer um comentrio sobre a convenincia da adoo de cada uma das tcnicas para realizar leituras rotineiras de pH e para realizar medidas que exija maior rigor analtico. (0,5 ponto) Calcular o desvio percentual relativo (ou coeficiente de variao) do resultado obtido atravs das tcnicas de calibrao em relao a tcnica de maior rigor analtico. (0,5 ponto) S% = CV = 100 [S ( X/n)]

Dado:

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TITULAO POTENCIOMTRICA DO CIDO FOSFRICO EM BIOTNICO FONTOURA. 1) INTRODUO: O cido fosfrico, utilizado como acidulante em refrigerantes, pode se encontrado nos mesmos a um limite mximo de 0,06 % segundo a legislao vigente. Um dos mtodos empregados para o seu doseamento baseia-se na volumetria de neutralizao com acompanhamento potenciomtrico. 2) PROCEDIMENTO: Rinsar a bureta duas vezes com a soluo titulante antes de iniciar a anlise. Encher a bureta automtica com a soluo titulante (NaOH 0,1 mol/L), de acordo com as instrues em anexo. 3) Transferir 10,00 ml da amostra para o copo de titulao (becher de colo longo de 250 mL) contendo agitador magntico e adicionar aproximadamente 100 mL de gua destilada. 4) Construir uma tabela com as seguintes colunas: pH x V (volume de titulante); (pH)/ v x V; e [(pH)/v] x V. Anotar os valores obtidos a medida em que a prtica for se desenvolvendo. 5) Inserir o eletrodo de vidro combinado, de modo que a juno fique imersa na soluo. Ligar a agitao com cuidado verificando se o agitador pode danificar a membrana do eletrodo, quando em movimento. Ler e anotar o valor inicial de pH. 6) Mantendo a agitao constante titular a soluo de amostra. Adicionar incrementos de 0,5 em 0,5 mL, at 20 mL (volume da bureta), lendo o pH aps cada adio. 7) Titular novamente uma outra alquota da amostra, adicionando inicialmente incrementos de 0,5 em 0,5 mL enquanto a variao da leitura for pequena (nesse caso o valor de pH/V tambm ser pequeno), manter o ritmo de adio. Quando a variao aumentar (observe o valor de pH/V na 1 titulao feita), diminuir o incremento de volume, para 0,1 em 0,1 mL. 8) Lavar a bureta 3 vezes com gua destilada antes de deslig-la.
1) 2)

Obs.: Caso a bureta automtica no esteja em condies de uso, utilize uma bureta de 25,00 mL, limpa e desengordurada.

ANEXO: Operao da bureta automtica 5. Existem dois seletores na bureta: Um para o ajuste da vazo de titulante (B2) e outro para encher e zerar a bureta (B1). B2 tem as seguintes marcaes: 1. 2. 3. 4. 5. 6. T1. T2. T3. E enquanto B1 tem as seguintes: F, O e T. 6. Para encher a bureta basta colocar B1 na posio F (Filling = enchendo). 7. Para esvaziar e zerar leve B1 at 6. 8. Para titular leve B2 at T. E selecione a velocidade de titulao (T3 = 0,5 ml; T2 = 0,2 ml e T1 = 0,1ml). Obs: O controle da adio de titulante ser feito atravs do controle manual.

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ESQUEMA DA BURETA AUTOMTICA

3) DESCARTE DE RESDUOS: Medir o pH da amostra analisada, neutraliz-la, se necessrio, e descart-la, normalmente, na pia. 4) QUESTES A SEREM RESPONDIDAS NO RELATRIO:
1.

2. 3. 4. 5.

Construir trs grficos, tendo como abscissa comum o volume de base em mL e como ordenadas o E ou pH e (E)/V ou pH/V e (E)/V. Podendo ser feito em planilha eletrnica ou em papel milimetrado. (0,5 ponto) Determinar os volumes de equivalncia das titulaes. (0,5 ponto) Calcular a concentrao de cido fosfrico no biotnico (%m/v). (2,0 ponto) Calcular o desvio percentual relativo ao valor especificado no rtulo do produto. (1,0 ponto) Discutir as vantagens e limitaes de cada um desses mtodos, para esse tipo de amostra, abordando os seguintes aspectos: praticidade dos mtodos, possveis interferentes e fontes de erro. (1,0 ponto)

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CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA (CLAE) Cromatografia em Fase Normal Anlise de Acares

1) OBJETIVO - Separao e quantificao dos teores dos acares glicose, frutose e sacarose em amostras comerciais de mel, melado e xarope de glicose.

2)EQUIPAMENTOS UTILIZADOS - Cromatgrafo:____________________________________________________________ - Coluna: _________________________________________________________________ - Detector: ________________________________________________________________ - Vlvula de Injeo: ________________________________________________________

3) PROCEDIMENTO 3.1) Preparo da soluo-padro Pesar 100mg de glicose, 100mg de frutose e 100mg de sacarose em becher de 50mL, transferir para uma balo de 10,00mL com 5mL de gua deionizada e completar o volume com acetonitrila grau HPLC.

3.2) Preparo das amostras Pesar 1g (anotar as massas) de cada amostra em becher de 50mL, transferir para balo de 25,00mL e completar o volume com gua deionizada. Transferir uma alquota de 0,50mL (500 L) para um tubo de microcentrfuga e diluir com 0,50mL (500L) de acetonitrila grau HPLC. Centrifugar por 10min a 2000rpm, aproximadamente. Usar o sobrenadante para a anlise cromatogrfica. NO ESQUECER DE USAR UM QUARTO TUDO COM 1,0mL DE GUA NA CENTRFUGA PARA EQUILIBRAR. 3.3) Anlise Cromatogrfica - Preparar a fase mvel Acetonitrila/gua 75:25 v/v. (Antes, verificar se j est pronta.) - Ajustar a vazo da fase mvel para 1mL/min. - Ajustar o tempo de anlise para 14 minutos. - Esperar equilibrar o sinal do detector. - Injetar o padro e as amostras.

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4) RELATRIO:
1. 2. 3. 4.

Descrever o preparo da soluo-padro e das amostras. (0,5 ponto) Apresentar os cromatogramas obtidos. (0,5 ponto) Justificar a ordem de sada dos acares. (1,0 ponto) Calcular os teores (%m) de glicose, frutose e sacarose nas amostras de mel, melado e xarope de glicose. (2,0 pontos) Responda: Por que as tcnicas de normalizao no so indicadas para esta anlise? (1,0 ponto)

5.

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CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA (CLAE) Cromatografia em Fase Reversa Otimizao da Separao Cafena e cido Acetilsaliclico Determinao de Cafena e cido Acetilsaliclico em medicamento antigripal

1) OBJETIVO - Escolher a proporo de metanol/ tampo acetato 10 mM (pH=3,0) mais adequada para ser utilizada como fase mvel na anlise dos componentes. - Separar e quantificar a cafena e o cido acetilsaliclico em amostra de antigripal. 2)EQUIPAMENTOS UTILIZADOS - Cromatgrafo:____________________________________________________________ - Coluna: _________________________________________________________________ - Detector: ________________________________________________________________ - Vlvula de Injeo: ________________________________________________________

3) PROCEDIMENTO 3.1) Preparo das solues-padro A partir de solues-estoque 10 mg/mL de acido acetilsaliclico e 1 mg/mL de cafena preparar 500L as seguintes solues-padro, usando como solvente 50% metanol:50% tampo acetato 10mM pH 3,0:

3.2) Preparo da Amostra Pesar, um a um, os comprimidos de uma cartela do medicamento (adquirida pelo grupo), calculando a mdia destes valores. Macer-los e pesar o equivalente a meio comprimido. Transferir a massa pesada para balo volumtrico de 50 mL, completando o volume do balo com 50% de metanol e 50% de soluo tampo acetato pH 3,0. Em seguida filtrar a soluo utilizando o sistema seringa-microfiltro.

3.3) Anlise Cromatogrfica - Ajustar a vazo da fase mvel para 1 mL/min. - Ajustar o comprimento de onda do detector para 272 e 254nm. - Ajustar o tempo de anlise para 20 minutos. - Para a otimizao da fase mvel, injetar o padro 1, variando a proporo entre metanol e tampo acetato 10 mM pH 3,0. - Com a fase mvel selecionada, injetar os outros padres e a amostra.

Cafena 1m Cpadro (g/mL) padro 1 200 padro 2 300 padro 3 400

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4) RELATRIO:
1.

Apresentar os cromatogramas obtidos para a otimizao da fase mvel. (0,5 ponto) Justificar a escolha da fase mvel e a ordem de sada dos alcalides analisados. (1,0 ponto) Apresentar os cromatogramas obtidos para a quantificao dos alcalides (padres e amostra). (0,5 ponto) Construir o grfico da curva analtica para cada um dos componentes (rea x concentrao) e determinar a equao da reta. (1,0 ponto) Calcular os teores (%m/v) de cafena e teobromina na coca-cola.(2,0 pontos)

2.

3.

4.

5.

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Simulao I Experimento em Cromatografia Gasosa Otimizao da Temperatura do Forno da Coluna

1) Objetivo Simulao de uma anlise cromatogrfica para a separao de uma amostra contendo sete componentes, utilizando o programa CG Instrument Simutator. Para avaliar como a programao de temperatura da coluna influencia na resoluo e na eficincia do processo, apenas este parmetro cromatogrfico ser variado. 2) Procedimento 6. Acessar o programa atravs do cone gcsim. GO OK Acessar o primeiro cone Sample Preparation. Selecionar o arquico CMPDATA2.GCD. OK New Sample Single Sample Mixture Preparar a mistura de acordo com a tabela abaixo, primeiro selecionando o teor e depois a substncia. GO

9. Acessar o segundo cone Select Column & Detector. Selecionar a coluna capilar polar (anotar a Tmx da coluna). Ligar os gases: He, ar e H2. Ligar o equipamento em START (Main Power On). Ligar o detector FID e acender a chama (ignio). Selecionar o volume de injeo igual a 1L. GO

Acessar o terceiro cone Temperature Control. Selecionar condio isotrmica: Tinjetor = 200C Tdetector = 200C Tcoluna = 150C GO Acessar o quarto cone Manual Sample Injection.

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Injetar a amostra em Inject (se necessrio, aumentar a atenuao at que no haja nenhum pico estourando a escala). Observar: a resoluo do cromatograma.

Aumentar ou diminuir a temperatura da coluna em 50C, conforme avaliao do grupo, de modo a melhorar a resoluo. Injetar. Observar: a resoluo do cromatograma. Selecionar programao de temperatura: Tinjetor = 200C Tdetector = 200C Tcoluna = programar uma rampa de temperatura com temperatura mxima de 150C. Visualizar a rampa programada em Lock. Injetar. Observar: a resoluo do cromatograma. Repetir o tem anterior at atingir a resoluo e a eficincia esperadas. Copiar (com a tecla print screen do teclado) o cromatograma e a tabela com os tempos de reteno e colar num arquivo do Paint.

Acessar o primeiro cone Sample Preparation. New Sample Single Sample Pure Selecionar, separadamemte, cada uma das substncias que compem a amostra. Injetar. Observar: os tempos de reteno de cada uma das substncias.

Repetir o procedimento para coluna capilar apolar, usando como condio inicial a que forneceu melhores resultados para a coluna polar.

3) RELATRIO 1- Apresentar os cromatogramas da mistura, obtidos com as duas colunas, junto com as condies de temperatura utilizadas. (1,0 ponto) 2- Construir uma tabela contendo: as substncias que compem a amostra, seus pontos de ebulio, suas massas moleculares e seus respectivos tempos de reteno, obtidos com as duas colunas (polar e apolar). (1,0 ponto) 3- De acordo com a polaridade dos componentes da amostra e seus pontos de ebulio, explicar a ordem de sada das substncias nas duas colunas (polar e apolar). (1,0 ponto) 4- Responda:Qual o efeito da temperatura do forno das colunas sobre a resoluo do cromatograma? (1,0 ponto) 5- Responda: Por que os teores calculados pelo programa GC-Simulator (normalizao interna) no correspondem aos valores reais para a mistura? (1,0 ponto)

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POLARIMETRIA 1. PROCEDIMENTO 1.1 Determinao da rotao especfica da sacarose padro

Com o polarmetro previamente ligado (cerca de 10min. para estabilizao da lmpada), pesar com exatido a massa suficiente para preparar uma soluo de sacarose padro com cerca de 0,2500 g/mL em balo volumtrico de 25,00 mL;

Verter a soluo no tubo de teste de 100 mm fechado em uma das pontas; Preencher o tubo de teste at o limite de sua capacidade; Com cuidado, fechar o tubo de teste, vedando-o bem, tomando todo cuidado para evitar a formao de bolhas; Lavar o tubo de teste por fora com gua corrente; Enxugar o tubo de teste com papel macio (leno de papel), principalmente nas extremidades das lentes; Abrir a tampa do compartimento de amostras do equipamento, e colocar o tubo de teste no compartimento para a medio. Comparar a rotao observada mdia dos observadores ( dos determinar a rotao especfica []t na temperatura ambiente.
componentes do grupo

) e

1.2 Determinao do teor de sacarose do ch gelado Preencher o tubo de teste com a amostra de ch, sob temperatura ambiente e previamente degaseificado (mesmo no sendo uma bebida gaseificada o ch gelado possui muitas bolhas); Com cuidado, fechar o tubo de teste, vedando-o bem, tomando todo cuidado para evitar a formao de bolhas; Lavar o tubo de teste por fora com gua corrente; Enxugar o tubo de teste com papel macio, principalmente nas extremidades das lentes; Abrir a tampa do compartimento de amostras, e colocar o tubo de teste no compartimento para a medio. Determinar o teor de sacarose na amostra e comparar com o especificado na embalagem.

1.3 Determinao do teor de sacarose do acar refinado

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Pesar com exatido a massa suficiente para preparar uma amostra de acar com cerca de 0,2500 g/mL em balo volumtrico de 25,00 mL de amostra em balo volumtrico de 25,00 mL;

Verter a soluo no tubo de teste de 100 mm fechado em uma das pontas; Preencher o tubo de teste at o limite de sua capacidade; Com cuidado, fechar o tubo de teste, vedando-o bem, tomando todo cuidado para evitar a formao de bolhas; Lavar o tubo de teste por fora com gua corrente; Enxugar o tubo de teste com papel macio, principalmente nas extremidades das lentes; Abrir a tampa do compartimento de amostras, e colocar o tubo de teste no compartimento para a medio; Comparar a rotao observada mdia dos observadores ( ) e determinar o teor de sacarose na amostra.

3. Relatrio
1)

Determinar o teor de sacarose na amostra ch gelado e comparar com o especificado na embalagem; (2,0 pontos) Calcular o erro percentual entre os teores determinados acima; (0,25 pontos) Determinar o teor de sacarose na amostra de acar refinado e comparar com o a sacarose padro; (2,0 pontos) Calcular o erro percentual entre os teores determinados acima; (0,25 pontos) Discutir os resultados obtidos acima; avaliando a eficincia do mtodo utilizado. (0,5 pontos)

2) 3)

4) 5)