FACULTE DE MEDECNE, DE PHARMACE ET D'ODONTO-STOMATOLOGE
DEPARTEMENT DE PHARMACE ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS THESE Prsente et soutenue pour obtenir le grade de DOCTEUR EN PHARMACE (DPLOME D'ETAT) par BIAYE Mamadou Sous la direction de M. Emmanuel BASSENE, Professeur Le 21 dcembre 2002 No 101 Devant le jury compos de : Prsident : M. Emmanuel BASSENE, Professeur Membres : M. Abdoulaye SAMB, Professeur M. Mamadou BADANE, Matre de Confrence Agrg M. Amadou DOUF, Matre de Confrence Agrg TabIe des matires INTRODUCTION . 1 PREMIERE PARTIE.GENERALITES SUR LES TANINS . . 3 - DEFNTON [5] . 3 - STRUCTURE DES TANNS . . 4 .1- LES TANNS HYDROLYSABLES[50] . 4 .2- LES TANNS CONDENSES : Proanthocyanidols [7] . . 7 - BOGENESE DES TANNS [6] . 9 V- PROPRETES PHYSCO-CHMQUES . . 9 V- EXTRACTON, CARACTERSATON ET DOSAGE . 10 V.1- EXTRACTON . 10 V.2- CARACTERSATON . . 10 V.3- DOSAGE DES TANNS . . 11 DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS . 15 . ACTVTES ANTBACTERENNES . 15 .1. TRAVAUX DE MAHAMAT [32] ET BASSENE [4] . 15 .2. TRAVAUX DE KOLODZE ET AL. [27] . 16 .3. TRAVAUX DE BABA MOUSSA ET AL. [2, 3] . 17 . ACTVTES ANTVRALES . . 17 .1. TRAVAUX DE CHEN LU ET AL. [7] . 17 .2. TRAVAUX DE POUSSET J.L. ET AL. [44] . . 18 .3. TRAVAUX DE NONAKA. ET AL. [39] ET DE ROBERT ETAL. [45] . . 19 .4. TRAVAUX DE XY HONG X. ET AL. [52] . . 19 . ACTVTES ANT-NFLAMMATORES . 20 .1.TRAVAUX DE MOTA ET AL. [36] . 20 .2. ACTVTE ANT-HYPERTENSVE . . 21 .3. ACTVTE ANTMUTAGENE . . 22 .4. ACTVTE MMUNO-STMULANTE . . 23 .5. ACTVTE ANTTUMORALE . 23 .6. ACTVTE ANT-DARRHEQUE . . 24 .7. ACTVTE NDUCTRCE DE L'APOPTOSE . 24 .8. LES AUTRES EFFETS . 25 V- UTLSATON DES TANNS . 28 V.1. UTLSATON DES TANNS EN PHYTOTHERAPE [7] . 28 V.2. UTLSATON NDUSTRELLE DES TANNS . . 38 CONCLUSION GENERALE . 41 BIBLIOGRAPHIE . . 45 ANNEXES . 51 1- Dtermination de la teneur en phnols totaux . 51 a)- Prparation du ractif de Folin-Denis . . 51 b)- Protocole du dosage . 51 2- Dtermination de la teneur en tanins . 52 3- Calcul des rsultats . . 53 INTRODUCTION L'utilisation des plantes a toujours t une pratique courante dans nos socits, surtout la socit africaine et asiatique. En effet depuis trs longtemps, la mdecine africaine, du moins celle pratique par les tradipraticiens s'est toujours base sur l'utilisation des diffrentes parties des vgtaux. Ainsi, les drogues tanin ont connu une trs large part dans l'utilisation des plantes mdicinales. Historiquement, leur importance est lie surtout aux proprits tannantes, c'est dire la proprit qu'ils ont de transformer la peau frache en un matriau imputrescible. Depuis une vingtaine d'annes, le dveloppement rapide des mthodes d'investigation structurale a permis de grands progrs dans la connaissance de la structure des tanins. C'est en particulier le cas de la spectromtrie de masse par bombardement d'atomes rapides. Cependant, la complexit structurale des tanins implique encore malgr tout le recours des tudes chimiques plus ou moins complexes. Actuellement, l'utilisation des tanins couvre un vaste domaine, allant de la bactriologie, virologie, l'hmatologie ., traduisant ainsi leur importance dans la mdecine humaine surtout. C'est la raison pour laquelle, nous nous sommes proposs d'initier l'tude relative aux plantes mdicinales, telles que les drogues tanins. Notre travail consiste prsenter les principales actions pharmacologiques des drogues tanins. INTRODUCTION 1 L'expos comporte deux parties : Une premire partie comportant les gnralits sur les tanins, avec les structures, la biogense, la caractrisation et le dosage. Une deuxime partie consacre aux diffrentes actions pharmacologiques, objectif principal de notre travail, avec l'usage des tanins tant dans le domaine thrapeutique, qu'industriel. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 2 PREMIERE PARTIE.GENERALITES SUR LES TANINS I- DEFINITION [5] Les tanins sont des composs polyphnoliques ayant la proprit de tanner la peau, c'est--dire de la rendre dure et imputrescible, en se fixant sur les protines. Cependant on a deux grands groupes de tanins : les tanins hydrolysables ; les tanins condenss, non hydrolysables ou tanins catchiques drivant des catchols et des proanthocyanidols par condensation. Historiquement, l'importance des drogues tanins est lie leurs proprits tannantes, c'est--dire la proprit qu'ils ont de transformer la peau frache en matriau imputrescible : le cuir. La rsultante du tannage est l'tablissement de liaisons entre les fibres de collagnes de la peau, ce qui confre celle-ci une rsistance l'eau, la chaleur et l'abrasion. PREMIERE PARTIE.GENERALITES SUR LES TANINS 3 II- STRUCTURE DES TANINS Habituellement on distingue chez les vgtaux suprieurs deux groupes de tanins par leur structure et par leur origine biogntique : les tanins hydrolysables, les tanins condenss. II.1- LES TANINS HYDROLYSABLES[50] Ce sont des oligo- ou des polyesters d'un sucre (ou d'un polyol apparent) et d'un nombre variable de molcules d'acides-phnol, le sucre est trs souvent le glucose. L'acide phnol est soit l'acide hexahydroxydiphnique (HHDP) et ses drivs d'oxydation (DHHDP : dehydrohexahydroxydiphnoyle, acide chbulique) dans le cas des tanins classiquement dnomms tanins ellagiques [7, 13, 28, 54]. Depuis 1985, plusieurs reprsentants d'une nouvelle catgorie de tanins ont t isols [7] : Les tanins : les tanins complexes sont des ellagitanins modifis, rsultant de l'addition d'un driv phnyl chromanique sur une molcule d'ester HHDP du glucose : flavanol (flavono-ellagitanin). Les tanins galliques, ellagiques et dehydro-ellagiques (simples ou complexes) sont caractristiques des Angiospermes dicotyldones (surtout : Rosidae, Dilenidae, Hamamelidae), sauf des Asteridae, chez lesquelles, ils sont gnralement absents. II.1.1 BIOGENESE DES ELLAGITANINS [50] Le groupe HHDP a t suppos biogntiquement produit par la liaison C-C forme entre deux groupes galloyl. Une investigation rcente sur les variations saisonnires des structures de tanins hydrolysables de Liquidambar formosana, a rvl une formation d'un groupe HHDP dans plusieurs tanins, la place de deux groupes galloyl avec les mmes localisations sur le glycopyranose dans la molcule de tanin d'une mme plante en bonne saison. Le liquidambin, un compos possdant un groupe aldhyde hydrate est peru comme un produit intermdiaire de la biosynthse des ellagitanins C-glucosidiques a galement t isol. Un exemple de sries de biosynthses de plusieurs types d'ellagitanins, soutenu par ces dcouvertes, est prsent au schma 1. Biogntiquement, l'acide gallique (acide 3,4,5-trihydroxybenzoque) est issu du mtabolisme de l'acide shikimique. On admet qu'il est habituellement form par dshydrognation directe de l'acide 3-dehydroshikimique ou, dans certains cas particuliers par oxydation de l'acide proto-catchique (lui-mme driv d'un acide en C 6 -C 3 , l'acide cafique). ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 4 Au total on distingue des tanins hydrolysables monomres et des tanins hydrolysables oligomres. II.1.2. STRUCTURES DES TANINS HYDROLYSABLES MONOMERES [7] Le penta-ester (2, 3, 4, 6-penta-O-galloyl--D-glucose) est le tanin le plus commun. l occupe une position centrale dans le mtabolisme des tanins. En effet, la plupart des vgtaux sont susceptibles de poursuivre le mtabolisme de cette molcule et de ses homologues et ce dans deux directions. Evolution vers une molcule plus lourde (Hexagalloyl, un dcagalloyl glucose) par formation, en 3,4 et / ou en 6 du glucose ; de chanes latrales constitues de plusieurs acides galliques lis selon un mode mta ou para-depsidique (les deux formes s'quilibrent en solution par migration d'anyl). Ces tanins galliques sont caractristiques d'un petit groupe de familles : Anacardiaceae (Rhus) Fagaceae (Quercus) Ericaceae Geraniaceae Aceraceae. Formation des tanins ellagiques Le couplage oxydatif C-2-C-2' des groupes galloyl de la molcule, engendre un motif hexahydroxybiphnidique, dicarboxylique. La penta substitution du glucose autorise plusieurs couplages entre les rsidus galloyl en position relative 1 ; 2 ou 1 ; 3 pour former des esters hexahydroxy-diphniques : la molcule peut tre un mono-ou bis-HHDP. Enfin, la condensation de certains ellagitanins avec le C 8 ou le C 6 d'un flavane (ou d'une flavone) conduit aux tanins complexes qui sont assez frquents (Fagaceae, Combretaceae, Myrtaceae, etc). II.1.3- STRUCTURES DES TANINS HYDROLYSABLES OLIGOMERES [7] Le couplage oxydatif (C-C ou C-O-C) intermolculaire explique l'existence d'un grand nombre d'oligomres ellagiques de masse molculaire comprise entre 2000 et 5000. Ainsi, la rugosine D isole de Filipendula ulmaria et d'autres Rosaceae, a une masse molculaire de 1874 ; c'est le dimre de la tellimagrandine ou 1, 2, 3 tri-O-galloyl-4-6-O-O-hexahydroxy-diphnoyl -D-glucose. (Figure 2) La distribution des formes dimres des tanins hydrolysables semble limite aux dicotyldones, gamoptales exclues. La connaissance de leur structure a progress trs rapidement : en effet, dix ans aprs la description du premier dimre (l'agrimoniine en PREMIERE PARTIE.GENERALITES SUR LES TANINS 5 1982), cent cinquante structures taient dcrites (environ 85% de dimres et 10% de trimres). La diversit des structures rencontres a conduit certains auteurs proposer de les classer en fonction de la nature des motifs engags dans la liaison des units monomres (acide gallique, HHDP) et de leur mode de liaison. L'utilisation de ces critres permet de distinguer cinq groupes : Les GOG : L'unit de liaison est compose de deux (ou trois) rsidus galloyl (G) lis par une liaison ther impliquant l'hydroxyle en mta (m-GOG = dhydrodigalloyl) ou en para (p-GOG = isodhydro digalloyl), du carboxyle de l'un et l'hydroxyle en ortho du carboxyle de l'autre. (Exemple : agrimoniine [m-GOG] des Rosaceae ( Agrimonia, Potentilla, Rosa), nupharines des Nymphacaceae) ; Les DOG : L'unit de liaison est de type tergalloyl (c'est--dire p-DOG) ou valonyl (m-DOG). La liaison ther implique un hydroxyle en ortho d'un reste galloyl et un hydroxyle en mta ou en para d'un reste hexahydroxydi-phnoyl (HHDP = D). Exemple de ce type : les rugosines ou, en formant en plus un macrocycle, l'oenothine de diverses Onagraceae (oenothero, Epilobium) et Lythraceae ; Les GOD C'est un couplage oxydatif entre carbone d'un reste HHDP et l'oxygne de l'hydroxyle d'un reste galloyl qui assure la liaison des deux monomres : le motif ainsi cr est dit : sangui sorbyle. Exemple : sanguiines des Sangui sorba et Rubus D(OG) 2 (mm, m - , m, p - ) L'unit reliant les deux monomres implique deux liaisons ther entre les hydroxyles de deux galloyl et d'un HHDP (Exemple : Euphorbines). La structure peut galement tre d'un type macrocyclique (Exemple : Wood fordines). Les Oligomres d'ellagitanin C-htrosidiques Remarques : Les composs construits autour d'un autre polyol que le glucose sont rares. C'est le cas de l'hamamelitanin ou 2', 5-di-O-galloyl--hamamlose qui, du fait de sa faible masse molculaire, ne peut tre considr comme un tanin au sens strict. C'est le cas de l'acritanin ou 2, T-di-O-galloyl 1,5-anhydro-D-glucitol et ses drivs ; tri et ttra galloides. Un autre exemple fourni par les drivs polygalloyls de l'acide ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 6 quinique constitutif du tanin de tara extrait des gousses de Caesalpinia spinosa (Malina) Kuntze. On connat aussi des polygalloyl shikimates (Castanopsis sp). On donne parfois le nom de tanin aux polymres du phloroglucinol, halogns ou non, qui ont t isols dans plusieurs genres d'algues pheophyceae. Ces polymres sont galement connues sous le nom de phlorotanins. On exclut volontairement ici les gallates de flavanols, les gallates de glycosyl-flavonols (mme si certains prsentent des proprits biologiques voisines de celles de tanins hydrolysables), ainsi que les gallates d'htrosides phnoliques comme les drivs galloyls de l'arbutoside isols d'Arctostaphylos sp. (Ericaceae) ou de Bergenia sp.(Saxifragaeae). II.2- LES TANINS CONDENSES : ProanthocyanidoIs [7] La nomenclature propose pour les proanthocyanidols, initialement fonde sur le nom de l'anthocyanidol form lorsque le polymre est trait chaud par un acide (procyanidol, prodelphinidol, proplargonidol), prend plus gnralement en compte le nom de monomre partir duquel il est construit. S'il est pratique d'utiliser les dnominations communes, il est recommand de nommer les structures en respectant une rgle inspire de la nomenclature des oligo- et polysaccharides : nom des units et indication de la position et du sens de la (ou des) liaisons(s) interflavonique entre parenthses. Exemples : L'oesculitanin A (isol du tgument sminal de la graine du marronnier d'nde) est le picatchol-(4 8)- picatchol (48 ; 27) picatchol-(48) picatchol. L'lment structural de base de ces polymres est un flavon-3-ol et picatchol (3, 5, 7, 3', 4'-pentahydroxyls, constitutifs des procyanidols), gallocatchol et picatchol (3, 5, 7, 3', 4'-ttra hydroxyls, constitutifs des profistidinols, plus rarement afzlchol et pifzlchol (3, 5, 7, 4' ttrahydroxyls, constitutifs des proplargonidols) pour ne citer que les principaux. Biogntiquement ces flavan-3-ols sont issus du mtabolisme des flavonodes par hydroxylation en 3 d'une flavanone. Les 2,3-dihydroflavon-3-ols, forms sont ensuite rduits en flavan-3,4-diols puis en flavan-3-ols par un mcanisme qui demeure en partie hypothtique. La configuration habituelle des flavon-3-ols est 2-R, 3-5 ou 2-R, 3-R (srie pi). Des nantiomres comme l'ent-catchol (2-5, 3-5) sont beaucoup moins frquents. Chimiquement, la formation des oligomres et polymres implique les flavan-3,4-diols. Ces molcules, trs ractives du fait du caractre benzylique de leur hydroxyle en C 4 donnent facilement un carbocation qui ragit aussitt sur les carbones nuclophiles C 8 ou C 6 d'un flavan-3-ol. La rptition du mcanisme conduit aux oligomres et polymres. PREMIERE PARTIE.GENERALITES SUR LES TANINS 7 Proanthocyanidols de Type B Les dimres les plus frquents sont les procyanidols B-1, B-2, B-3 et B-4, c'est--dire des proanthocyanidols constitus de deux units de 2-R, 3-S (+)- catchol et/ou de 2-R, 3-R (-)-picathchol lis en C 4 C 8 selon une configuration (B-3 et B-4) ou (B-1, et B-2). Les procyanidols existent l'tat libre et ont une large distribution. Proanthocyanidols de Type A Un autre groupe important de Proanthocyanidols est constitu par des dimres ayant une liaison interflavanique double : C 4 C 8 et C 2 O C 7 . Les plus connus sont les aesculitanins, procyanidols du tgument de la graine du marronnier d'nde (Aesculus), on en trouve aussi dans la noix de cola et l'corce du cannelier de Chine. Dans les deux groupes A et B (Exemple : Procyanidol B-5) la liaison C 4 C 8 peut tre remplace par une liaison C 4 C 6 . Les autres dimres (proplargonidols, prodelphinidols) sont plus rares. On connat galement des O- et C-glucosides de procyanidols (chez la Rhubarbe officinale ou le th), des dimres C 6' C 6' (chez Camellia sinensis [L] O. Kuntze), des dimres impliquant un chalcane (assamicanes) et des dimres impliquant des nantiomres caractriss dans l'corce d'une Malpighiaceae de l'Amrique tropicale aux fruits comestibles. Les Oligomres Forms par additions successives d'une unit flavanique, de nombreuses structures sont maintenant connues dans le groupe B : trimres C4 (3 picatchols lis 4 8) et C2 (3 catchols lis 4 8) et oligomres correspondants, mais aussi dans le groupe A trimres et oligomres forms par addition d'une unit flavanique sur un dimre doublement li. (Exemple : les Aesculitanius et les Cinnamtanins), les Polymres ls peuvent compter jusqu' 50 units lmentaires. Les plus largement rpandus sont des poly-picatchols et des co-polymres procyanidol-prodelphinidol. La liaison interflavanique est majoritairement de type C4 C8 et est toujours trans par rapport l'hydroxyle en 3 (c'est--dire que si l'unit lmentaire est l'picatchol (3-R), le C4 est R. L'examen des modles molculaires rvle un empchement partiel de rotation autour de la liaison interflavanique, ce qui induit une hlicit gauche ou droite du polymre, fonction du prcurseur (B-1, B-2 ou B-3, B-4). Les autres polymres (propelargonidols et polymres des ent-flavan-3-ols) sont moins frquents et, semble-t-il pour les derniers, limits aux monocotyldones. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 8 Signalons enfin : que les monomres flavaniques peuvent se lier avec l'acide cafique dihydroxycinnamique pour former des lactones (cinchonanes et homologues). que les tanins condenss peuvent exister l'tat d'esters galliques, c'est ce que l'on observe dans le cas du tanin des fruits verts du Diospyros kaki L. f (Ebenaceae) dont la moiti des units flavoniques sont galloyls en O-3, c'est aussi ce qui caractrise les tanins condenss de Rhubarbe officinale. III- BIOGENESE DES TANINS [6] IV- PROPRIETES PHYSICO-CHIMIQUES Les tanins se dissolvent dans l'eau sous forme de solutions collodales, mais leur solubilit varie selon le degr de polymrisation (elle diminue lorsque celui-ci augmente). ls sont solubles dans les alcools et l'actone. Les solutions aqueuses ont une stabilit variable selon la structure, gnralement modre. Ainsi lors de l'extraction par l'eau bouillante (c'est--dire dans les conditions d'une dcoction) un tanin comme la graniine est dcompos en 30mn (en acide gallique, acide ellagique et corilagine ou 1-galloyl-3-5-HHDP glucose). Les formes dimres et oligomres des esters galliques et HHDP du glucose sont galement assez instables. Comme tous les phnols, les tanins ragissent avec le chlorure ferrique. ls sont prcipits de leurs solutions aqueuses par les sels de mtaux lourds et par la glatine. Les tanins hydrolysables et tanins condenss peuvent tre distingus sur la base de leur comportement en milieu acide chaud. Les premiers, polyesters du glucose, sont hydrolyss, librant le sucre, l'acide gallique et/ou l'acide hexahydroxydiphnique. Ce dernier se lactonise rapidement en acide ellagique (ce qui explique la terminologie traditionnelle de tanins ellagiques). L'hydrolyse des oligomres conduit galement des composs 3 ou 4 cycles benzniques dont la structure varie selon la nature de la liaison intermonomrique. ExempIe : La rugosine D (vide supra) rsultant de l'tablissement d'une liaison biphnyl ether entre un reste galloyl et un reste hexahydroxydiphnolyle, son hydrolyse conduira un produit 3 cycles, l'acide valonique (en fait la dilactone de celui-ci). Remarque : Dans le cas des polygalloyl glucoses ayant une chane latrale depsidique, les liaisons depsidiques peuvent tre rompues en milieu acide faible et temprature ambiante, conditions qui laissent intactes les liaisons esters engageant les PREMIERE PARTIE.GENERALITES SUR LES TANINS 9 hydroxyles du glucose. Dans les mmes conditions exprimentales, la liaison inter flavanique des seconds est rompue et en prsence d'air, le carbocation form conduit un anthocyanidol. Lorsque les conditions sont contrles, cette raction peut tre utilise pour l'tude structurale ; mais on peut notamment capter les intermdiaires ractionnels par un nuclophile appropri. Ce nuclophile peut tre un alcool, un thiol (tolune--thiol), mais aussi un driv flavanique, ce qui explique que la raction s'accompagne de la formation de polymres insolubles et fortement colors : les phlobaphnes. V- EXTRACTION, CARACTERISATION ET DOSAGE V.1- EXTRACTION L'extraction des tanins peut tre ralise par l'eau, les alcools (mthanol et thanol) ou un mlange eau-actone. Seigler et al [ ], en faisant l'extraction de quatre espces d'acacia du Mexique et du Texas, ont montr que l'actone, 70% dans l'eau donne un meilleur rendement que l'eau ou le mthanol 80%. Lorsqu'on utilise le mthanol, il faut avoir prsent l'esprit que ce solvant peut provoquer la mthanolyse des depsides galliques et tre ainsi l'origine d'artefacts (gallate de mthyle). L'extrait aqueux peut tre dbarrass des pigments et lipides par agitation avec du dichloromthane. Cette phase aqueuse dlipide traite l'actate d'thyle qui extrait la plupart des tanins galliques et les dimres de proanthcyanidol ; les tanins plus condenss restent dans la phase aqueuse. Pour l'isolement d'un tanin, on a recours la chromatographie d'exclusion sur Sephadex LH-20 et en phase inverse. V.2- CARACTERISATION V.2.1- LES REACTIONS COLOREES Les tanins condenss et les tanins hydrolysables sont mis en vidence sans distinction par les ractions colores gnrales. Caractrisation par les sels ferriques Avec une solution aqueuse de chlorure ferrique : les tanins galliques et ellagiques donnent des colorations et des prcipits bleu-noir ; cette raction permet de mettre en vidence les acides phnols. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 10 Mode opratoire 5ml de solution extractive, 1ml d'une solution aqueuse de chlorure ferrique 2%. l se dveloppe une coloration bleu-noir intense en prsence des tanins galliques. Avec une solution aqueuse de perchlore de fer 2% l apparat un prcipit brun-verdtre en prsence des tanins catchiques. Mode opratoire 5ml de solution extractive ; 1ml de solution aqueuse de perchlorure de fer 2%. l apparat un prcipit brun-verdtre en prsence des tanins catchiques. Caractrisation avec l'acide phosphotungstique 1ml de solution extractive ; 1ml d'acide phosphotungstique ; 9ml d'une solution aqueuse de carbonate de sodium 25%. l apparat un prcipit bleu-indigo en prsence des tanins catchiques. V.2.2- LES REACTIONS DE DIFFERENCIATION V.2.2.1- REACTION DE STIASNY A 15ml de l'infus, on ajoute 8ml de ractif de STASNY (formol 30% ; 2 volumes, acide chlorhydrique concentr ; 1 volume). La solution obtenue est chauffe pendant 30mn au bain-marie bullition. La formation d'un prcipit tmoigne la prsence de tanins condenss. On filtre, on sature le filtrat par l'actate de sodium, puis quelques gouttes d'une solution de chlorure ferrique 2% sont ajoutes. l apparat une coloration bleu-noir qui indique la prsence de tanins hydrolysables ou de tanins galliques non prcipits par le ractif de STASNY. V.2.2.2- AUTRES REACTIONS DE DIFFERENCIATION Avec l'iodate de potassium : Les tanins galliques donnent une coloration rose. Avec l'acide nitreux en milieu actique : Les tanins ellagiques sont colors en rose, la coloration vire au pourpre puis au bleu. Avec la vanilline chlorhydrique : Les tanins condenss sont colors en rouge. V.3- DOSAGE DES TANINS Le dosage des tanins est dlicat. l est difficile d'obtenir une extraction complte et les mthodes fondes sur le caractre phnolique de ces composs ne sont pas toutes spcifiques. PREMIERE PARTIE.GENERALITES SUR LES TANINS 11 Certaines mthodes permettent toutefois une certaine slectivit, en particulier l'gard des tanins condenss. Pour nombre d'auteurs, les meilleures mthodes pour dtecter et doser les tanins sont celles qui visent valuer leur capacit (spcifique) prcipiter les protines. V.3.1- DOSAGE IMPLIQUANT LA PRECIPITATION PROTEIQUE [48] L'une des mthodes les plus utilises est la mthode au sang hmolys et centrifug. Elle est fonde sur la capacit des tanins de se combiner l'hmoglobine et sur la possibilit que l'on a d'estimer colorimtriquement, par rapport un blanc, l'hmoglobine rsiduelle non combine et ce dans une zone du spectre ou les interfrences sont improbables. Une variante de la mthode permet, en utilisant un tmoin (Exemple : l'acide tanique ou la graniine), de dterminer l'astringence relative (par rapport celle du tmoin). Une mthode voisine consiste remplacer l'hmoglobine par l'albumine srique bovine. Celle-ci solubilise son pH iso lectrique, est prcipite par les tanins de l'extrait doser. La teneur en protines du prcipit est dtermine, aprs hydrolyse alcaline et raction de l'hydrolysat avec la ninhydrine, par colorimtrie. On peut galement avoir recours une albumine pralablement couple un colorant, ce qui simplifie le protocole. La mthode traditionnelle la poudre de peau est galement fonde sur la capacit des tanins de se lier aux protines. Cette mthode est toujours utilise, en particulier, pour le contrle de certaines drogues officinales (Pharmacope). Aprs avoir dtermin par vaporation d'un infus de la drogue, les matires solubles totales (S), on procde la prcipitation des tanins d'une fraction aliquote de l'infus par la poudre de peau ; le prcipit est limin et le surnageant vapor jusqu' siccit (rsidu N). La diffrence de masse de tanins entre les deux rsidus (S-N) correspond la masse des tanins contenus dans la prise d'essai. Noter que la casine peut tre utilise la place de la poudre de peau selon la mthode de Seigler et al [48]. V.3.2- DOSAGE DES TANINS CONDENSES (VOIR ANNEXES) Pour valuer les proanthocyanidols, on peut apprcier la coloration obtenue aprs transformation en anthocyanidols par bullition dans le n-butanol chlorhydrique. Une acclration de la dpolymrisation et une meilleure reproductibilit de la raction sont obtenues par l'addition, dans le milieu ractionnel, de sels de fer (mais l'absorption une longueur d'onde donne variera selon la structure de l'anthocyanidol form). Les proanthocyanidols peuvent aussi tre doss sous forme d'adduit color avec la vanilline en milieu mthanolique acide (HCl). Cet aldhyde s'additionne en effet sur le C6 des units flavaniques dihydroxyles en C5 et C7. On peut galement utiliser le paradimethylaminodibenzaldehyde. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 12 La thiolyse, surtout utilise pour l'tude structurale et la dtermination du degr de polymrisation moyen peut aussi, couple la HPLC, tre une mthode de dosage (y compris des proanthocyanidols non extractibles). V.3.3- DOSAGE DES TANINS HYDROLYSABLES [48] Dans le cas des tanins galliques, il est possible d'hydrolyser le tanin en milieu sulfurique, de faire ragir l'acide gallique form avec de la rhodamine et de mesurer l'absorbance du produit de la raction. Eventuellement, on peut mettre en ouvre la raction l'iodate de potassium. Pour viter les tanins ellagiques, on a classiquement recours la raction avec HNO2aprs hydrolyse sulfurique. Les carbones non substitus de l'acide ellagique libr tant susceptibles d'une attaque lectrophile, il se forme une quinone oxime. V.3.4- DOSAGE DES PHENOLS TOTAUX [48] Les mthodes gnrales de dosage des phnols totaux sont parfois utilises, conjointement avec la technique de prcipitation par la poudre de peau, pour apprcier les tanins totaux d'une drogue. La teneur en composs phnoliques est alors mesure avant et aprs fixation des tanins par la poudre de peau ou un autre adsorbant spcifique. C'est en gnral un protocole driv de la mthode de Folin et Denis qui est retenu : l'ion phnolate (form par ajout de carbonate de sodium) est oxyd par un mlange d'acide phosphotungstique et phosphomolybdique qui, simultanment est rduit en donnant une solution colore bleue dont on dtermine l'absorbance. PREMIERE PARTIE.GENERALITES SUR LES TANINS 13 ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 14 DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS L'activit pharmacologique des tanins a fait l'objet de nombreux travaux dont voici les principaux. I. ACTIVITES ANTIBACTERIENNES Les tanins sont dous d'activits antibactriennes et antifongiques, comme le montrent ces quelques travaux que nous prsentons parmi tant d'autres. I.1. TRAVAUX DE MAHAMAT [32] ET BASSENE [4] Ces auteurs ont compar l'activit antibactrienne de trois Combretaceae : Combretum micranthum (racines), Guiera senegalensis (racines) et Terminalia avicennioides (feuilles et racines). Les indications en mdecine traditionnelle portent dans le traitement des diarrhes infantiles, des bronchites, de la toux, des maladies vnriennes et des plaies. Les constituants isols antrieurement partir des feuilles de C. micranthum sont : DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 15 des tanins catchiques et galiques, des flavonodes, des alcalodes. Les feuilles de G. senegalensis sont riches en tanins et renferment en outre des alcalodes du groupe de l'harmane. Les extraits ont t obtenus sous forme de macr et de dcoct aqueux. Le test antibactrien utilis est la mthode de dilution en milieu glos. Les solutions aqueuses des extraits titrant entre 10mg/ml et 0,01mg/ml sont dilues dans la glose en bote de ptri selon la technique de Mitscher et coll. Les germes sont inoculs l'aide du Denley Multipoint nocular A-400. Les concentrations sont dtermines en CM (concentrations minimales inhibitrices) (Tableau ). Au vu des rsultats obtenus, on remarque que globalement, les dcoctions sont plus actives que les macrs sauf pour G. senegalensis. Les utilisations des ces plantes en mdecine traditionnelle en usage externe peuvent tre justifies par cette action antiseptique. Les auteurs attribuent cette activit la prsence des tanins. Germes (rfrence) C. micranthum (racine) G. senegalensis (racine) T. avicennioides Feuille----------------Racine Amika Mico Ma Dc Ma Dc Ma Dc Ma Dc g/ml Bacilus subtilis (FMPD 002) 5 5 0,5 0,5 2 1 1 0,5 0,25 - 1,0 Corynebacterium diphteriae (FMPD 008) 5 5 2 3 5 2 5 3 0,50 - 2,0 Escherichia coli (FMPD 0007) 5 5 2 3 5 2 3 3 0,50 - 4,0 Klebsiella pneumoniae (FMPD 0012) 7 5 3 7 >10 3 10 3 2,0 - 8,0 Lsteria monocytogenes (FMPD 0010) >10 7 2 3 7 5 7 5 0,06 - 0,25 Micrococcus Luteus (FMPD 0001) 1 1 1 1 2 1 1 0,5 1,0 - 4,0 Pseudomonas aeruginosa (FMPD 0009) 5 5 2 2 3 2 1 1 2,0 - 8,0 Salmonella typhi (FMPD 0004) 3 3 2 2 2 1 1 0,5 0,25 - 8,0 Serratia macescens (FMPD 0006) 5 5 2 3 2 2 2 2 0,4 - 16, 0 Staphylococcus aureus (FMPD 0003) 2 1 1 1 2 0,5 1 0,5 1,0 - 4,0 Enterococcus faecalis (FMPD 0011) >10 7 3 7 7 7 7 7 64,0 - 256 Candida albicans (FMPD 0005) 3 5 2 2 >10 2 1 1 0,1 - 2,0 FMPD : Facult de Mdecine et de Pharmacie de Dakar Ma : Macr Dc : Dcoct Amika : Amikacyne Mico : Miconazole I.2. TRAVAUX DE KOLODZIE ET AL. [27] ls ont procd l'valuation du potentiel antimicrobien des tanins et composs apparents en utilisant la mthode de micro-dilution. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 16 A cet effet, 27 composs tanniques ont t tests sur 8 souches microbiennes dont : 2 bactries Gram positif (Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus) 4 bactries Gram ngatif (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis), 2 levures (Candida albicans, Cryptococus neoformans). Ces chercheurs ont pu montrer que les composs tests prsentent gnralement une activit antimicrobienne faible modre, mais une grande activit anticryptococus. Une attention particulire sera accorde la relation structure-activit, avec un accent particulier sur les esters de galloyl simple, les tanins hydrolysables et les proanthocyanidines. I.3. TRAVAUX DE BABA MOUSSA ET AL. [2, 3] En utilisant sept combretaceae ouest-africains de la mdecine traditionnelle (Pteleopsis suberosa, Terminalia avicennioides, Combretum nigricans), l'tude a permis l'investigation de l'action antifongique sur les souches de Candida albicans, Epidermaphyton floccosum, Microsporum supseum, Trichophyton mentagraphytes et Trichophyton rubrum. Ainsi, Pteleopsis suberosa et Terminalia avicennioides apparaissent comme tant les plantes les plus actives. Les travaux ont montr que ces vgtaux contenaient un taux trs important de tanins et saponines qui pourraient tre responsables de l'activit antifongique. Par la suite, en comparant de l'activit antifongique des feuilles et corces de tronc de Pteleopsis suberosa E. Don (Combretaceae), ils ont trouv que ces dernires, plus riches en tanins sont plus actives, confirmant ainsi le rle des tanins dans cette activit. II. ACTIVITES ANTIVIRALES De trs nombreux travaux ont t mens concernant ce sujet. II.1. TRAVAUX DE CHEN LIU ET AL. [7] Ces travaux ont t mens sur l'activit antivirale des tanins provenant de deux Euphorbiaceae du genre Phyllanthus. l s'agit de Phyllanthus myrtifolius (parties ariennes) et de Phyllanthus urinaria (plantes entires) : Euphorbiaceae. Les tanins ont t isols des fractions ethylactate et butanolique des extraits thanoliques des plantes, par chromatographie sur colonne. Le test antiviral utilis est le titrage de l'anti-EBV-DP et de l'anti-DNA polymerase. Les activits biologiques de ces composs actifs sont rsumes dans le tableau . DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 17 l est intressant de voir que les C 50 contre EBV-DP de tous les sept composs actifs sont dans une gamme micromolaire, alors que sur le DNA polymerase humain, les C 50 sont substantiellement suprieurs. Les tanins isols, au nombre de 7 donnent la fois de l'acide gallique et ellagique l'hydrolyse. l apparat que les activits biologiques observes sont principalement dues aux molcules intactes, mieux que les produits d'hydrolyse COMPOSE EBV-DP (A) C50 (M) -DP (B) B/A M.W (D) PAA 33,5 121,4 3,6 140 1 (corilagine) 2,67 20,2 7,5 634 4,39 2 (graniine) 1,91 15,7 8,2 952 8,95 3 (acide chebulagique) 4,19 18,6 4,4 954 9,82 4 (elaecarpusine) 1,24 16,5 13,3 1110 2,06 5 (mallotusinine) 2,53 9,4 3,7 918 10,41 6 (phyllanthusiine c) 2,53 16,9 6,7 926 8,53 II.2. TRAVAUX DE POUSSET J.L. ET AL. [44] Dix plantes de diverses provenances ont t testes sur l'antigne de surface du virus de l'hpatite B (HBs Ag) et sur l'ACE (Angiotensine Enzyme Convertase) Cocculus pendulus J.R. et G. Forst (racines) ; Cochlospermaceae - Burkina Faso Cochlospermum planchonii Hook (racines) Cochlospermum tinctorium A. Rich (racines) ; Cochlospermaceae - Sngal Combretum glutinosum Perr (feuilles) ; Combretaceae - Sngal Enantia chlorantha Olivier (corce) ; Annonaceae - Gabon Gardenia sp (racines) ; Rubiaceae - Sngal Nauclea latifolia Sm (racines) ; Rubiaceae -Sngal Phyllanthus amarus Schum et Thann. (racines) ; Euphorbiaceae - Gabon et Sngal Phyllanthus niruri L. (racines) ; Euphorbiaceae- Gabon et Sngal Tinospora bakis A. Rich (racines) ; Menispermaceae - Sngal Seules C. glutinosum et P. niruri ont montr une activit de l'ordre du nanogramme (100-500ng/ml). Les extraits actifs ont t obtenus par extraction au Soxhlet avec du mthanol aprs dlipidation au benzne. L'extrait de C. glutinosum s'est rvl douze fois plus actif que celui de P. niruri. TabIeau III : Inhibition de HBsAg par Ies extraits aqueux et mthanoIiques ( SEM n = 3 dans chaque extrait) ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 18 [44] Extrait Nom plante Partie utilise Source Quantit plante inhibant 50% de HBsAg Extrait aqueux Phyllanthus niruri Feuilles Gabon 650 14 Phyllanthus niruri Feuilles Sngal 3300 73 Phyllanthus amarus Feuilles Gabon 5000 115 Phyllanthus amarus Feuilles Sngal 5000 121 Combretum glutinosum Feuilles Sngal 500 10 Combretum planchonii Racines Burkina F 6000 149 Combretum tinctorium Racines Sngal > 10 000 Tinospora bakis Racines Sngal > 10 000 Nauclea latifolia Racines Sngal > 10 000 Gardenia sp Racines Sngal > 10 000 Cocculus pendulus Ecorce Sngal > 10 000 Enantia chlorantha Feuilles Gabon > 10 000 Extrait mthanolique Phyllanthus niruri Feuilles Gabon 1200 26 Combretum glutinosum Sngal 100 2 II.3. TRAVAUX DE NONAKA. ET AL. [39] ET DE ROBERT ETAL. [45] Nonaka et al [39] ont montr que 9 tanins incluant des gallo-tanins et des ellagitanins ont une activit inhibitrice de la transcriptase reverse (TR) du virus HV dans les lymphocytes H9. Parmi ces tanins, l'acide 1,3,4-tri-O-galloyl quinique et l'acide 3,5-di-O-galloyl shikinique sont les plus actifs. Tous les tanins ont inhib l'interaction virus-cellule. Robert et al. [45], reprenant les travaux avec 48 tanins ont montr que l'activit anti-TR n'a pas de corrlation avec la rplication du virus ; par consquent, l'action anti-HV des tanins ne serait pas lie l'activit anti-TR, mais plutt lie l'inhibition virus-cellule. Les structures II.4. TRAVAUX DE XY HONG XI. ET AL. [52] Les travaux abondent dans le sens de la recherche de l'activit inhibitrice des produits polyphnolique sur la HV-1-protase. L'essai a t ralis avec 29 flavonodes et 6 tanins hydrolysables en s'appuyant sur la mthode de fluorescence et la HPLC. Parmi les flavonodes on note : les flavones, les flavanones, les flavonols, les catchols et chalcones. Ainsi, les flavonols se sont rvls les plus actifs, tandis que les flavanones et catchols ont prsent une activit plus faible. La querctine est apparue comme tant le plus puissant inhibiteur de l'enzyme cible avec un taux d'inhibition C 50 de 58,8 muM. La butine et la lutoline vont suivre avec des DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 19 activits modres. Cependant, parmi les tanins hydrolysables tests, trois ellagitanins contenant une unit hexahydroxydiphnoyl lie au sucre en 3 et 6, inhibe fortement la HV-1 protase. La contration d'inhibition C 50 de la corlagine et de l'acide rpandusique sur l'HV-1 protase sont respectivement 20,7 et 12,5 muM. III. ACTIVITES ANTI-INFLAMMATOIRES III.1.TRAVAUX DE MOTA ET AL. [36] Les auteurs ont tent de dterminer les actions anti-inflammatoires des tanins isols des corces de Anacardium occidentale L.. Pour cela, ils ont utilis un mlange de tanins (hydrolysables et non hydrolysables) issus de la plante. Anacardium occidentale L (Anacardiaceae) est communment connu comme de grands arbres cajou, dans les pays tropicaux incluant le Brsil. En plus des connaissances industrielles et ses applications nutritionnelles, des parties de la plante sont galement utilises au brsil pour leurs proprits diurtiques et anti-inflammatoires. Les premires tudes d'une fraction aqueuse obtenue de l'extrait thanolique de l'corce du tronc de Anacardium occidentale ont montr une action anti-inflammatoire contre le dextrane et le carraguenane, induisant des odmes sur les pattes de rats quand ils sont administrs des doses de 10-80mg i.p.et 300-900mg/kg P.O. respectivement. Le criblage phytochimique de cette fraction a montr la prsence d'une grande quantit de tanins. solement et identification des tanins Des morceaux d'corces, frachement rcolts, sont macrs dans de l'actone 10% dans l'eau pendant 72 heures. La solution obtenue est extraite l'actate d'thyle. Les tanins sont obtenus partir du rsidu de cet extrait aprs une chromatographie sur colonne de silice, avec comme luant un mlange mthanol-eau (60-40). Tests anti-inflammatoires utiliss Parmi les tests utiliss on dnombre : Cdme de la patte de rat la carraghenine, odme de la patte de rat au dextrane, granulome provoqu chez le rat par des pilules de coton, arthrite chronique du rat provoqu par injection de Mycobacterium tuberculosis ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 20 dsactiv la chaleur. RsuItats Les rsultats suggrent que les tanins d'Anacardium occidentale apparemment ont une activit anti-inflammatoire aussi bien sur l'inflammation aigu (carraghenine et dextrane) que sur l'inflammation chronique (pilule de coton). Les rsultats indiquent que l'action des tanins ne sert pas d'intermdiaire dans la libration d'adrenaline. l est probable que les actions anti-inflammatoires de ces agents soient dues un effet sur la migration des leucocytes et une action antiphlogistique. Cette activit dcoulerait de l'effet astringent des tanins qui prcipitent les protines membranaires affectant ainsi la permabilit cellulaire. L'action analgsique sur la douleur induite par l'acide actique peut s'expliquer de manire similaire par un effet non spcifique, puisque les tanins, dans les tudes prliminaires sont inactifs quand la chaleur est utilise pour induire la douleur. l pourrait apparatre de ces tudes que l'usage populaire de la dcoction de l'corce d'Anacardium occidentale sur les rhumatismes, se justifie par la prsence des tanins. Cependant, les auteurs prconisent de ne pas utiliser cette plante, car les tanins ont prouv leur toxicit chez les animaux et chez l'homme. III.2. ACTIVITE ANTI-HYPERTENSIVE Travaux de TACHEN LN et al. [49] Travaux sur l'activit anti-hypertensive de la corilagine et de l'acide chbulinique, des tanins de Lumnitzera racemosa. Lumnitzera racemosa Wilol (Combretaceae) est un arbuste grandissant dans les marais sales le long des mangroves de Taiwan. Procds d'isolement des tanins Les feuilles sches l'air de L. racemosa (800 g) sont trempes dans de l'actone 60% dans l'eau. Aprs trois extractions, les extraits combins sont concentrs sous pression rduite suivie de filtration pour supprimer les prcipits bruns. Le filtrat est chromatographi sur gel DOS G3, Bondapack C18 et Sephadex LH-20. Rsultats 11 composs sont obtenus ; tous sont des tanins hydrolysables. Les structures suivantes ont t identifies : 2,3-di-O-galloyl-D-glucopyranose; 1,2,3,6-ttra-O-galloyl--D-glucopyranose; 2,3,4,6-ttra-O-galloyl-D-glucopyranose ; DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 21 1,2,3,4,6-penta-O-galloyl--D-glucopyranose ; 2,3-5-HHDP-D-glucose 9 ; corilagine ; acide chbulagique ; punicalagine ; castalagine ; acide nochbulinique ; acide chbulinique. L'activit hypertensive de ces composs a t dpiste en utilisant des rats spontanment hypertendus. La corilagine, l'acide chbulinique et la castalagine abaissent les pressions sanguines des rats conscients aux diffrents temps d'attaque. L'action anti-hypertensive de ces composs est produite de faon dose-dpendante. Les changements maximums de la pression sanguine en mmHg des rats conscients montrent que l'acide chbulinique est plus actif que la corilagine dont l'action se rapproche de la castalagine. Cependant, ces composs lvent la pression sanguine chez les rats normotendus. III.3. ACTIVITE ANTIMUTAGENE III.3.1- TRAVAUX DE SCHIMMER O ET AL. [47] C'est l'Universit Erlagen-Nuremberg (Allemagne) que ces auteurs ont recherch les proprits antimutagniques des tanins extraits des plantes Alchemilla sp et Potentilla anserina (Rosaceae). Les extraits thaloniques et les extraits obtenus partir de teintures de Alchemilla sp et Potentilla anserina ont t compars pour leur pouvoir antimutagnique, en utilisant le 2-nitrofluorine comme mutagne standard. Tous les chantillons tudis ont prsent une activit faible modre et il n'existe pas de corrlation entre la teneur en tanins et le degr d'inhibition. Cependant les extraits sans tanins ne prsentent aucune inhibition de mutagnicit. Le constat est que, une fraction de tanins participe au moins partiellement dans l'antimutagnicit des extraits examins. III.3.2- TRAVAUX DE KAUR S.J. ET AL. [25] Ces travaux portent sur la recherche d'effet modulateurs d'une fraction de tanins isole partir de Terminalia arjuna sur la gnotoxicit des mutagnes dans Salmonella typhimurium. Apartir de la fraction isole, on a tudi l'effet antimutagnique sur la 4-nitro-O-phnyline-diamine (4NPD) dans la TA98, le sodium azide dans la TA100 et le 2-aminofluorne (2AF-S9-dpendant), un pro-mutagne de TA98 et TA100 de Sallmonella thyphimirium est utilis comme tmoin. La fraction isole inhibe la ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 22 mutagnicit de la 2-aminofluorne (2AF) de manire significative dans le tmoin, les colonies induites par la 4-nitro-O-phnylne diamine (4NPD) et le sodium azide sont rduites modrment. Les mthodes d'analyses utilises telles que la rsonance magntique nuclaire (MRN), l'infrarouge (R), les donnes de la spectromtrie UV de la fraction isole ont donn la nature du tanin contenu dans Terminalia arjuna. Ceci a permis une confirmation de l'effet modulateur sur Salmonella typhimirium. III.4. ACTIVITE IMMUNO-STIMULANTE Travaux de FELDMAN K.S et al. [9] Cette quipe a tent la mise en ouvre de cette activit partir des plantes polyphnols. Les auteurs ont dmontr que L'immuno-stimulation induite par ces plantes est en relation avec la capacit des ellagitanins antitumoraux (Corianiin A) d'induire la scrtion de l'L-1 bta et du TNF-alpha par les mononuclaires du sang priphrique humain. Des tudes conjointes sur la gallotanin-D-pentagalloyl glucose monomrique et la synthse du dimrique gallotanin-ellagitanin hybride, ont montr que le TNF-alpha plutt que L-bta tait l'agent responsable de l'action anti-tumorale des tanins in vitro. III.5. ACTIVITE ANTITUMORALE Beaucoup de chercheurs se sont intresss cette activit. Ce sont surtout les Japonais et les Amricains qui se sont les plus illustrs. Travaux de YOSHDA T. et al. [54] ls se sont penchs sur l'action anti-tumorale et les activits des ellagitanins oligomres. l a t rapport prcdemment que plusieurs dimres, tels que l'agrimoniine et l'oenothine B exposent une remarquable activit anti-tumorale obtenue par l'intermdiaire de l'hte, contre Sarcoma 180, tumeurs ascite MM 2 et le Meth-A un type de tumeur solide chez les rats. L'activit anti-tumorale des tanins condenss et polyphnols apparents et les tanins hydrolysables monomriques incluant les drivs bergenine et galloyl glucoses est ngligeable. Bien que beaucoup d'ellagitanins monomriques slectionns sont inactifs, tellimagranine exceptionnellement supprime la tumeur excroissante chez 3 6 rats sur 31, une dose de 10mg/kg. DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 23 Classe du compos Nombre test Activit * - + ++ +++ Tanins condenss et polyphnols apparents 8 8 0 0 0 Tanins hydrolysables 97 66 6 20 5 Drivs d'acide cafique 3 3 0 0 0 Drivs bergnines 3 3 0 0 0 Galloyl glucoses 10 9 1 0 0 Ellagitanins Monomres 31 28 1 1 1 Dimres 41 21 4 12 4 Trimres 7 2 0 5 0 Ttramres 2 0 0 2 0 (-), < 100% LS (+), < 100% LS avec un survivant (++), > 100% LS ou deux survivants (+++), > 3 survivants LS (%) = [(moyenne jours de survivance des rats traits/ moyenne jours de survivance du groupe de contrle) - 1] x 100 Les tanins hydrolysables contenus frquemment de large proportion dans les plantes mdicinales et alimentaires prsentent des activits biologiques varies. La puissance de leur activit dpend de leur structure. Beaucoup d'ellagitanins oligomres activit antitumorale stimulent fortement in vitro l'induction d'L-1 des macrophages priphriques humains suggrant que ces oligomres sont de nouveaux inducteurs de cytokine. Dans le mme sens, des chercheurs de l'Universit linois de Chicago, dirigs par FONG HHS ont tudi l'activit antitumorale de certaines plantes, due aux tanins. Ainsi, le fractionnement des quatre plantes suivantes : Rubus odoratus, Cornis canadensis, Calycogonium squamulosum, Lespedeza capitata van velutina a montr que l'activit antitumorale de ces plantes est lie aux tanins de la fraction soluble dans l'eau. III.6. ACTIVITE ANTI-DIARRHEIQUE Beaucoup de travaux ont montr l'utilisation des tanins comme anti-diarrhique et gnralement sur les diarrhes ne dpassant 3 4 jours. Ainsi, BRUNETON Y. dans son ouvrage a prsent l'utilisation des plantes tanins comme anti-diarrhique [7]. III.7. ACTIVITE INDUCTRICE DE L'APOPTOSE ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 24 - Travaux de YANG L.L. et aI. [51, 53] L'apoptose est la rduction de la ligne leucocytaire humaine. YANG L.L. et al., ont travaill sur l'induction de l'apoptose par les tanins hydrolysables de Eugenia jambos (Myrtaceae) sur les cellules leucocytaires humaines. E. jambos L. est une plante antipyrtique et anti-inflammatoire de la mdecine traditionnelle asiatique. Des extraits de cette plante obtenus partir de l'actone 70% ont t utiliss sur les cellules leucmiques HL. 60. A partir des courbes obtenues sur 15 plantes, on a pu dmontrer que les extraits utiliss exeraient des effets cytoxiques importants sur ces cellules. Les principes actifs cytoxiques ont t spars par Fractionnement bio-guid par action sur les cellules HL.60. Deux tanins hydrolysables (1-0-galloylcastalagine et casuarinine) sont isols de l'extrait actonique 70%. Les auteurs ont montr que ces tanins inhibent toute la ligne des cellules de la leucmine promylocytaire humaine (HL.60) et prsentent une cytotoxicit sur la ligne des cellules (SK-HEP-1) de l'adnocarcinome et sur la ligne des cellules textees lymphocytaires humaines. L'analyse cytomtrique d'coulement montre la prsence de cellules apoptotiques contenant peu d'ADN et une diminution du nombre de cellules. L'apoptose induite par ces deux composs a t galement dmontre par la fragmentation du DNA et l'observation microscopique. Ces rsultats suggrent que le mcanisme cytotoxique de ces molcules rside dans l'induction de l'apoptose sur les cellules HL.60. III.8. LES AUTRES EFFETS III.8.1- ACTIVITES ANTI-OXYDANTES III.8.1.1- TRAVAUX DE BOUCHET N. ET AL. [6] ls ont examin les proprits anti-oxydantes et antiradicalaire des tanins de Guiera senegalensis. A partir de l'activit du radical qui fixe, et les proprits antixoydantes des extraits, ces chercheurs ont valu ces proprits sur neuf tanins isols et caractriss des diffrentes parties de la plante. Sept (7) gallotanins avec un noyau d'acide quinique et deux tanins condenss (picatechine et gallate d'epicatechine) sont isols et caractriss partir des galles de la plante. L'extrait tannique a t obtenu par le mlange actone-eau (20/80). Les tanins sont ensuite spars sur colonne de Sephadex LH-20 On utilise des microsomes du foie de rats pour dterminer l'activit anti-oxydante. Les tests valuent deux proprits de ces composs : activit antioxydante rsultant de l'induction de la peroxydation lipidique des microsomes et l'effet antiradicaux libre exerc DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 25 sur un radical stable comme le DPPH (1,1-diphnyl-2-picrylhydrazyl). L'acide quinique qui a quatre groupes d'hydroxyle sur le cycle satur, ne montre aucune activit antioxydante, l'oppos de l'acide gallique (acide 3,4,5-tri-hydroxybenzoque) qui a un cycle aromatique. Les rsultats soutiennent le concept que l'activit antioxydante est associe au nombre de groupes hydroxyles, l'exception du gallate d'pigallocatchine qui est moins actif que l'picatchine. L'tude produit une preuve certaine que ces gallotanins et deux tanins condenss ont des proprits antioxydantes intressantes exprimes soit par leur effet inhibiteur de la peroxydation lipidique induite par Fe 2+ des microsomes du foie de rat, soit par la capacit de piger des radicaux libres. Le prsent rsultat montre que ces composs peuvent tre retenus comme mdicaments dans la prvention de pathologies dans lesquelles des radicaux libres sont troitement impliqus, tel que l'athrosclrose. III.8.2- ACTIVITES CATALYTIQUES Activits anticoagulantes [24] Hui Dong et al. [24] ont travaill sur les effets des tanins de Green japonicum (Rosaceae). Le fractionnement de l'extrait mthanolique de la plante entire a conduit l'isolement de sept tanins connus et l'identification s'est faite par des mthodes spectroscopiques. On a pu isoler : le penta-O-galloyl-bet-glucose (a) le pdunculagine (b) la 2,3-(S)-hexahydroxydiphnoyl-D-glucose (c) la tellimagrandine (d) la 2,6-di-O-galloyl-D-glucose (e) la casuariine (f) la 5-desgalloylstachyurine (g) l en rsulte que les composs a,b,d,f et g prsentent une puissante activit anticoagualante par prolongement significatif de la coagulation du plasma de lapin. L'effet inhibiteur de la substance (b) est directement comptitif avec la thrombine sur un substrat synthtique et le fibrinogne. Les valeurs d'inhibition C 50 sont respectivement de 0,18 et 0,15 muM. Pour d'autres sources, les composs a,d,f et g mlangs sont inhibiteurs non comptitifs de la thrombine et leur valeur C 50 d'inhibition des fibrinognes d'hydrolyse sont deux fois sept fois plus basses que celles de l'inhibition du substrat d'hydrolyse. Le facteur de la coagulation Xa est comptitivement inhib par les composs a,b,d,f et g. l en rsulte que les groupes hydroxyles phnoliques des tanins jouent un rle important dans l'effet inhibiteur sur les enzymes. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 26 III.8.3- ACTIVITES ASTRINGENTES ET CICATRISANTES On a montr qu'en appliquant sur les muqueuses et la peau un extrait de tanins, il y'a une sorte de tannage. l s'y ajoute une activit vasoconstrictrice sur les petits vaisseaux qui complte cette activit. Cette proprit explique leur emploi contre les hmorrodes et les blessures superficielles [7]. III.8.4- ACTIVITES VITAMINIQUES P [26, 29, 34] Les tanins sont hmostatiques. ls possdent galement des proprits vitaminiques P dues des formes moins condenses, l'instar des flavonodes. Le problme biologique que pose la vitamine P est encore loin d'tre rsolu. Mais il semble qu' la lumire des faits qui, quoique fragmentaires, sont maintenant bien tablis. Ce sont ces faits que nous voudrions numrer maintenant pour noncer en conclusion l'hypothse qui sert actuellement de base de travail. Action vitaminique P Quelques annes seulement, aprs la dcouverte de la vitamine C, SZENT GYORGY remarquait que l'acide ascorbique ne pouvait lui seul, gurir le syndrome hmorragique accompagant le scorbut. Ces purpurars vasculaires cdent cependant par l'administration de jus de citron. La conclusion logique est que le jus de citron contient un facteur ncessaire au bon fonctionnement des capillaires sanguins. Ce facteur, isol du citron sous le nom de citrine, est un mlange o domine l'hespridoside ; on lui donne le nom de vitamine P. Malheureusement, ces expriences furent mises en doute, la citrine n'ayant qu'une activit rduite. En 1943, Lavollay et al. [29] montraient que l'picatchine exerce sur la rsistance vasculaire une action mille fois plus intense que la citrine. Masquellier [34] reconnaissait au procyanidol une activit comparable. Dans ces conditions, il devenait possible de montrer exprimentalement que ces substances actives comme la catchine ou le procyanidol sont capables de maintenir textee la rsistance capillaire du cobaye recevant un rgime carenc en vitamine C, ce qui avait t contest la citrine de SZENT-GYORGY. Cette troite dpendance entre ces deux vitamines conduira considrer la vitamine P comme un facteur d'conomie d'acide ascorbique, d'o la dnomination vitamine C 2 . Action sur la C.O.M.T isol un driv possdant la structure suivante : Des produits analogues de condensation avec le procyanidol ont t souponns. Ce mode de liaison n'est possible qu'avec les flavanols. l semble exclu pour les autres flavonodes. Fixation dans l'organisme de la vitamine C 2 l est possible par hmisynthse de prparer du procyanidol monomre marqu au 14 C. DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 27 L'tude des autoradiographies de coupes d'animaux auxquels on a inject ce traceur, semble apporter des lments dcisifs pour la connaissance de l'activit vitaminique C 2 . On note la prsence du procyanidol dans la peau, le prioste, les parties scrtrices du tractus gastro-intestinal et les diffrents cartilages. Les expriences montrent donc l'affinit particulire du procyanidol pour le tissu conjonctif. Action antihyaluronidasique On a galement pens que la vitamine P pouvait agir comme inhibiteur de la hyaluronidase, enzyme ayant la proprit d'augmenter la permabilit vasculaire, mais le rle anti-anaphylactique des facteurs vitaminiques P ayant t mis en vidence. Tayeau montrait que les proprits antagonistes vis--vis de l'hyaluronidase, bien qu'elles ne suffisent pas expliquer, elles seules, le renforcement de la rsistance vasculaire, peuvent cependant tre le support des proprits anti-anaphylactiques. IV- UTILISATION DES TANINS IV.1. UTILISATION DES TANINS EN PHYTOTHERAPIE [7] IV.1.1. TANIN DE CHENES (QUERCUS SP.) (FAGACEAE) IV.1.1.1- LE TANIN OFFICINAL Le tanin officinal a t dcrit par la 9 me dition de la pharmacope franaise. l peut tre prpar partir des galles d'un chne de la Mditerrane orientale (Quercus infectoria olivier). La formation des galles est conscutive la ponte des oufs d'insectes hymnoptres (cynips) dans les tissus du chne : la larve en se dveloppant, induit une prolifration cellulaire des tissus de l'hte. Cette prolifration se traduit par la formation d'une masse globuleuse, dure, dense, de coloration variable selon son degr de dveloppement, la galle, dans laquelle s'accumulent des esters galliques du glucose. Les galles contiennent des tanins hydrolysables (m-depsides du pentagalloyl, pdunculagine, tellimagrandine , etc.) en forte proportion (50 70% dans le cas de Quercus infectoria) des acides galliques et ellagiques libres des strols et des triterpnes, de l'amidon. Le tanin officinal ou acide tannique ou tanin ther est prpar par extraction des galles avec un mlange ther alcool satur d'eau, on ralise la sparation des phases et vaporation de la couche aqueuse. Emploi ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 28 Le tanin officinal de Suisse, peut tre utilis comme astringent pour la voie externe comme astringent (brlures, dermatites) ; c'est galement un hmostatique. l prsente de nombreuses incompatibilits (sels ferriques, oxydants, protines, alcalodes, htrosides, etc.). IV.1.1.2- LE TANIN DE L'ECORCE DE CHENE Origine Officinale en Suisse pour l'usage humain aussi bien que vtrinaire, anciennement inscrite au formulaire national des Etats-Unis, l'corce de chne est fournie par Quercus robur L., Q. petroea, Q. sessilis et Q. pubescens Willd. La drogue renferme des tanins en quantit trs variable (8-20%) au moins 12% pour la pharmacope helvtique. La composition de l'corce de Q. petroea est la mieux connue : pdunculagine, vescalagine, castalagine, mongolicanine, oligomres pro-anthocyanidoliques, monomres flavoniques, et leurs esters galliques, etc.. Emploi En Allemagne, la commission E reconnat l'corce de chne des proprits astringentes et virostatiques et prcise : au titre des usages par voie interne, en cas de diarrhe aigu, sur les muqueuses (de gorge, du vagin), en cas d'inflammation modre. l n'y a pas de contre indication pour la voie interne, mais l'on doit noter une possible diminution de l'absorption des mdicaments basiques. Effet antipoison sur les alcalodes toxiques Les indications autorises pour l'tiquetage des produits pr-conditionns sont les inflammations de la gorge, la transpiration des pieds, le traitement adjuvant des fissures anales et des engelures. IV.1.2. TANIN D'HAMAMELIS (HAMAMELIS VIRGINIANA L.) (HAMAMELIDACEAE) Origine des tanins Les feuilles sches de l'hamamlis de Virginie (Ph. Eur., 3 e d.) sont utilises pour les proprits astringentes et vasoconstrictives. On utilise aussi, principalement en Allemagne et pour les mmes proprits, l'corce des tiges. L'hamamlis est un arbuste ou un petit arbre assez semblable au noisetier, connu sous le nom de noisetier des sorcires. l est trs commun dans les forts de l'Est du continent amricain (Qubec, Nord-Est des Etats-Unis et jusqu' la Virginie). La drogue de couleur vert mat ou brun-vert a une saveur lgrement astringente. Les feuilles renferment 0,5 ml/kg d'huile essentielle (caractrise par la prsence de DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 29 2-hexane-1-al, d'actaldhyde et d'ionomes), des glucosides de flavanols (astragaloside, myricitroside) et jusqu' 10% de tanins (lato sensu), acides galliques, polygalloyl glucose, hamamlitanin, flavones monomres libres et estrifis (gallate d'picatchol), proanthocyanidols. L'hamamlitanin est le 2', 5-di-O-galloyl--D-hamamelofuronose (en mlange 2/1 avec son anomre ). l n'est prsent dans les feuilles qu'en faibles quantits. Les constituants polyphnoliques majoritaires sont des procyanidols et des copolyurnes procyanidols-prodelphinidols. Emplois En France et en l'absence d'exprimentations cliniques rigoureuses, les phytomdicaments base de feuilles d'hamamlis sont traditionnellement utiliss, par voie orale aussi bien qu'en usage local, dans les manifestations subjectives de l'insuffisance veineuse telles que jambes lourdes et dans la symptomatologie hmorrodaire. Par voie locale, ils sont galement utiliss en cas d'irritation ou de gne oculaire d des causes diverses (atmosphre en fume, effort visuel soutenu, bains de bouche, pour l'hygine buccale). Les prparations pour tisanes et extraits aqueux hydroalcoolique (quel que soit leur titre) ne ncessitent aucune tude toxicologique, ce qui n'est pas pour la poudre de drogue totale. En Allemagne la commission E reconnat la feuille et l'corce des proprits astringentes, anti-inflammatoires et hmostatiques locales, l'usage est identique (Phlebites, hmorrodes, affections dermatologiques). L'tiquetage des produits pr-conditionns base d'hamamlis (feuilles ou corce) doit comporter les indications suivantes : Traitement adjuvent de la diarrhe aigu nflammation des gencives et de la muqueuse buccale. l prcise en outre que, chez certains patients, cette drogue peut provoquer des drangements d'estomac. Toute persistance de la diarrhe doit conduire consulter un mdecin. Au Royaume-Uni, seul l'usage externe est autoris pour les deux drogues. La drogue est galement utilise en formulation cosmtique sous forme d'eau distille d'hamamlis, prsente comme astringente bien qu'elle ne contienne thoriquement pas de tanins. Applique la peau, elle s'avre anti-inflammatoire. Les tanins sont par contre prsents dans les extraits (fluide, hydro-alcoolique, glycolique) utiliss pour la formulation de gels astringents aux applications diverses. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 30 IV.1.3. TANIN DE RATANHIA DU PEROU : KRAMERIA LAPPACEA (DOMBEY) BURDET SUMPSON, (K. TRIANDRA RUIZ ET PAV.) KRAMERIACEAE [7] Origine Class dans une petite famille monotypique ayant des affinits avec les polygonaceae, c'est un sous-abrisseau fleurs rouges qui pousse en altitude du Chili au Prou. l est utilis pour ses organes souterrains schs, gnralement fragment, inscrits la 3 me dition de la pharmacope europenne. Les racines, presque droite partent d'un collet pais et noueux ; le bois est dense et l'corce, brun-rouge fonc, est lisse sur les parties les plus jeunes, rugueuse sur les parties ges. La drogue renferme 10 15% de tanins condenss. Ceux-ci, des proplargonidols (65%) et des procyanidols (35%) comprennent de deux quatorze units flavoniques lies (4->8). Dans le cas des molcules les plus condenses, quelques liaisons (4 6) tmoignent d'un branchement. Les ttramres sont les constituants majoritaires. On note galement la prsence de 0,3% de composs benzofuraniques (ratanhiaphnols, conocarpane, etc.). L'extrait hydro-alcoolique est antibactrien. Emplois Une AMM (autorisation de mise au march) selon la procdure abrge pour un phytomdicament base de racine de Ratanhia peut tre obtenue avec l'une des indications suivantes : traditionnellement utilis (voie orale et usage local) : dans le traitement symptomatique des troubles fonctionnels de la fragilit capillaire cutane, tels que ecchymoses, ptchies ; dans les manifestations subjectives de l'insuffisance veineuse telles que jambes lourdes et dans la symptomatologie hmorrodaires. En usage local, la drogue peut tre utilise en bains de bouche pour l'hygine buccale. En Allemagne, la commission E n'admet comme usage de la gorge (gingivites, stomatites). Elle recommande de ne pas l'utiliser plus de deux semaines sans avis mdical et signale que, dans de trs rares cas, on peut observer des ractions allergiques locales. IV.1.4- TANIN DE ACACIA NILOTICA (MIMOSACEAE) [7] Acacia nilotica var Adansonii (Guill et Per.) Source A. nilotica, arbre ou arbuste sarmenteux de 5 6m de haut. On note trois varits : DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 31 A. nilotica var. Adansonii (Guill et Per.) A. nilotica L. (Willd et Del var. nilotica). A. nilotica var. tomentosa (BENTH A. F. Hill). Arbre fret droit et cylindrique, l'corce brun-fonc est arrondie et rgulire, feuilles bipennes, fruit est une gousse pubescente gris-cendre. A. nilotica var Adansonii forme des peuplements la limite des zones inondables dans le delta du fleuve Sngal [7]. Les gousses renferment surtout des tanins galliques, le pricarpe du fruit renferme un certain nombre d'acide gallique. On y trouve : catchine procyanidol Emplois traditionnels Acacia possde de trs nombreuses proprits mdicinales. A. nilotica a toujours t utilise pour soigner diffrentes maladies et affections. Les feuilles sont presque essentiellement utilises en dcoction. Elles sont utilises sous forme de collyre ou bains oculaires contre certaines formes e conjonctivites de l'enfant et de l'adulte. Elles sont utilises sous forme de bains de bouche ou gargarisme, en solution pour le traitement des aphtes et des gingivites. Elles sont galement utilises pour leur action antiscorbutique. Les fruits sont utiliss dans le traitement des lsions labiales et dans le traitement des diarrhes de l'enfant et de l'adulte. La gousse chez les prostitues serait utilise sous forme de macr aqueux trs concentr, en application locale pour la toilette vaginale dans le but de rtrcir le vagin. Certaines filles utilisent aussi cette pratique pour faire croire au partenaire qu'elles sont vierges. En mdecine vtrinaire, la gousse entire serait aussi utilise pour ses proprits anti-inflammatoires. On peut utiliser la poudre de pricarpe, mlange du vinaigre et du bicarbonate de soude pour une application sur la partie inflamme. Cette application concerne les chevaux de course souffrant de tendinite. La poudre de gousse malaxe avec l'eau est aussi utilise pour soigner la plaie des animaux. Les utilisations de l'corce sont nombreuses comme anti-diarrhique, antihmorragique, cicatrisante. La racine quant elle est utilise dans le traitement dysentrique. En plus de ces utilisations, A. nilotica possde des proprits anti-bactriennes et antiseptiques, des proprits mollucicides. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 32 IV.1.5- AUTRES DROGUES A TANINS UTILISEES EN PHYTOTHERAPIE [7] IV.1.5.1- AIGREMOINE (AGRINONIA EUPATORIA L.) Sommit fleurie sche, la drogue officinale renferme au minimum 5M de tanins. La mdecine chinoise utilise les parties souterraines de A. pilosa Ledeb (Xianhecao). Elle renferme en outre des flavonodes, glycosides du querctol, du kampfrol, du lutolol et de l'apignol. Elle est utilise comme antidysentrique et hmostatique. IV.1.5.2- ALCHEMILE VULGAIRE (ALCHEMILLA GLABIA NEYGENF) (A. VULGARIS) C'est une espce trs polymorphe. Les parties ariennes sches. La drogue renferme 6-8% de tanins (pdunculagine) et des flavonodes. A. xanthochlora Rothm ne renferme que des tanins hydrolysables (agrimoiine, pdunculagine, laevigatine F) et pas de tanins condenss ; on note la prsence de triterpnes. La drogue jouissait, dans les sicles antrieurs, d'une rputation flatteuse dans le traitement des maladies des femmes . Ses extraits sont antibactriens. IV.1.5.3- BENOITE (GEUM URBANUM L.) Le rhizome de cette espce trs commune pourrait renfermer plus de 25% de tanins (tanins galliques) ; il contient aussi 3ml/kg d'huile essentielle ( eugniol majoritaire) et un arabinosido-glucoside d'eugniol. IV.1.5.4- FRAISIER (ROSA GALLIA L. : ROSE ROUGE) (ROSA CENTIFOLIA L. : ROSE PALE, ROSE SANS FEUILLE) Ptales et boutons floraux schs. Les ptales de rose rouge furent longtemps employs pour la confection du miel rosat (mellite de rose rouge). Les ptales de rose ple servent l'obtention de l'eau distille de rose. Officinale, sa teneur en phnylthanol est comprise entre 0,03 et 0,1% (dtermine par CPG). Eventuellement additionne d'agents antimicrobiens, elle est utilise pour ses proprits astringentes lgres (dermatologiques, collutoires, gargarismes, collyres). IV.1.5.5- RONCIER OU RONCE (RUBUS SP.) Feuille compose ou foliole. La drogue officinale (feuille compose pennatisque dont les nervures principales portent des pines) contient au minimum 5% de tanins, ceux-ci sont notamment reprsents par des ellagitanins dimres. La drogue renferme galement des acides organiques, des flavonodes et des triterpnes. Au dbut du sicle (20 me ), on utilisait, aux Etats-Unis, la dcoction de l'corce des parties souterraines comme anti-diarrhique. DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 33 En Allemagne, les feuilles de roncier fermentes entrent dans la composition d'un succdan mnager du th (Frhstcketee, Deutscher hanstee). Les fruits, comme ceux du framboisier (R. idacus L.), feuilles blanches la face infrieure), sont comestibles et peuvent tre utiliss pour l'aromatisation. A propos du framboisier, on note que sa feuille est pare, par les traditions populaires de nombreuses vertus, susceptibles de prparer l'accouchement, sdatif des rgles douloureuses, anti-diabtique purificateur du sang, etc. Dans les annes cinquante, l'tude de son activit sur organe isol (fragments utrins compris) ne s'est pas rvle trs concluante et l'on remarque que la commission allemande prcise qu'aucune de ces actions n'ayant t dmontr, l'usage thrapeutique de la feuille ne peut tre prconis. Cette feuille demeure, et l, utilise comme la feuille du roncier, c'est--dire dans le traitement des diarrhes. IV.1.5.6- LES AUTRES ESPECES Tormentille (Potentilla recta L.) ROSACEAE Rusech : (P. tormentilla stokes) La souche rhizomateuse, trs dure et peu ramifie, est particulirement riche en tanin : tanins condenss (70%, oligomres comprenant 2 6 units) et hydrolysables (pedunculagine, agrimoniine, laevigatines B et F. Bistorte(Polygonum bistorta L.) POLYGONACEAE Cette plante vivace des pturages de montagne contiendrait 15 20% de tanins dans ses parties souterraines. L'extrait hydro-alcoolique est un anti-inflammatoire per os forte dose (rat, odme aux carraghnanes). Pour la mdecine chinoise, c'est un antidiarrhique (quanshen). Herbe ROBERT (Geranium robertianum L.) GERMNACEAE Comme d'autres espces indignes (G. sanguineum L.) ou nord-amricaines (G. maculattum Bieb. Alun-root). Cette espce est rpute riche en tanins (plante entire). Noisetier (Corylus avellana L.) Corylaceae ( feuilles) Egalement dnomm coudrier, arbuste indigne surtout intressant pour le caractre olagineux et alimentaire de ses graines qui fournissent une huile de composition analogue celle d'huile d'amende. La composition de la feuille est mal connue. On sait toutefois qu'elle renferme des proanthocyanidols et un flavonode, rhamnoside du myrictol, la myricitrine (ou myricitroside). La drogue officinale contient au minimum 2% de tanins. Salicaire (Lythrum salicaria L.) Lythraceae ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 34 Sommit fleurie. La drogue officinale contient au minimum 10% de tanins. Commune dans tous les lieux humides, cette plante herbace se reconnat aisment ses fleurs, rose violace, groupes en pis allongs, terminaux ou latraux. La drogue renferme des anthocyanosides (dans les fleurs), des C-glucosides de flavons (orientine, vitexine) et des tanins galliques. Emplois de ces drogues Pour simplifier, nous prsenterons sous forme synthtique les indications que ces drogues peuvent revendiquer. Traditionnellement utilis dans le traitement symptomatique des diarrhes lgres (voie orale) : aigremoine, alchmille, benote, bistorte, fraisier, herbe Robert, noisetier, ronce, salicaire, tormentille. Dans cette indication et pour toutes ces drogues, le libell destin au public doit comporter une mise en garde quant au risque de dshydratation auquel expose toute diarrhe importante, surtout chez le nourrisson et l'enfant de moins de 30 mois. l prcise qu'une telle diarrhe ncessite une consultation mdicale. Traditionnellement utilis dans les manifestations subjectives de l'insuffisance veineuse telles que jambes lourdes ; Dans la symptomatologie hmorrodaire (voie orale et usage local) : aigremoine, alchmille, benote, bistorte, noisetier, ronce, salicaire, tormentille. Traditionnellement utilis par voie locale (collutoires, pastilles), comme antalgique dans les affections de la cavit buccale et/ou du pharynx : bistorte, noisetier, ronce, salicaire. Traditionnellement utilis par voie locale en bain de bouche pour l'hygine buccale : aigremoine, alchmille, benote, bistorte, fraisier, herbe Robert, rosier. Les ptales et boutons floraux de rose peuvent aussi tre utiliss en usage local comme traitement d'appoint adoucissant et antiprurigineux des affections dermatologiques, comme trophique protecteur dans le traitement des crevasses, corchures, gerures et contre les piqres d'insectes. En Allemagne la commission E retient pour le traitement des diarrhes lgres : l'aigremoine, l'alchmille, la ronce, et la tormentille. Elle prcise que si la diarrhe persiste plus de trois (03) quatre (04) jours, il est ncessaire de consulter le mdecin. En cas d'inflammations des muqueuses de la bouche et de la gorge (ou de la peau), on peut utiliser aigremoine, potentille ou ronce. La commission prcise par ailleurs que l'usage thrapeutique de la feuille de fraisier n'est pas justifi mais que rien ne s'oppose sa prsence dans des tisanes composes (comme additif). IV.1.6- UTILISATION DES TANINS CONDENSES OU DES DROGUES A PROANTHOCYANIDOLS [7] IV.1.6.1- AUBEPINE (CRATAEGUS MONOGINA JACQ, C LAEVIGATA DC. : DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 35 POIRET) ROSACEAE [7] Origine La baie d'aubpine fait l'objet d'une monographie la 3 me dition de la pharmacope europenne [add. 1998] et, pour la pharmacope franaise (10 me d.), l'arrt du 07 Novembre 1996 prcise que restent en vigueur, au 1 er Janvier 1997, la fleur d'aubpine et la sommit fleurie d'aubpine. Ces deux drogues sont fournies par Cratagus monogyma Jacq. Emmend. Lindman ou C. laevigata DC (poiret). La sommit fleurie renferme un minimum de 20% et un maximum de 10% de parties ligneuses. Les aubpines sont des arbustes pineux communs dans presque toutes les zones tempres de l'hmisphre Nord. Les feuilles sont vert-brillant, et les fleurs groupes en corymbes rameux. Les aubpines sont constitues ct d'acides tri terpniques pentacycliques, des amines aromatiques, une trace d'huile essentielle, des acides phnols, 1 2% de flavonodes et 2 3% de proanthocyanidols. Le constituant flavonodique majoritaire des feuilles est l'hyproside, galactoside en 3 du querctol. Emplois En France, la sommit fleurie et la fleur d'aubpine peuvent entrer dans la formulation de phytomdicaments base de plantes avec les indications suivantes (voie orale). Traditionnellement utilis dans les troubles de l'rthisme cardiaque de l'adulte (cour sain) et dans le traitement symptomatique des tats neurotoniques des adultes et des enfants, notamment en cas de troubles mineurs du sommeil. L'information donne au public prcise que la drogue est utilise pour rduire la nervosit des adultes notamment en cas de perception exagre des battements cardiaques (palpitations) aprs avoir cart toute maladie cardiaque . Si l'automdication en cas de troubles cardiaques (mme mineur) n'est srement pas recommande, il semble que l'aubpine et ses associations constituent, pour le mdecin, une prescription alternative utile. La drogue (poudre, extraits, teinture, etc.) est gnralement associe d'autres espces : passiflore, valriane voire tilleul ou mlisse. Plusieurs spcialits associent les prparations d'aubpine du phnobarbital (traitement des manifestations mineures de l'anxit). La drogue n'est pas toxique en aigu, on lui connat ni effets secondaires majeurs, ni interactions mdicamenteuses, ni contre-indications. Sa toxicit chronique n'a semble-t-il, jamais t tudie. En France, seules les prparations base de poudre doivent satisfaire une tude toxicologique allge. En Allemagne on reconnat la drogue (sommit fleurie) des actions inotropes et dromotropes positives et une action bathnotrope ngative ainsi que la capacit augmenter la circulation coronarienne et myocardique. Sur ces bases, elle retient comme usage, depuis 1994 et uniquement pour la sommit florifre, l'insuffisance cardiaque ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 36 correspondant au stade du NYHA (New York Heart Association). Avant cette date, elle retenait aussi le sentiment d'oppression dans la rgion du cour, la bradycardie lgre ainsi que le cour g ne ncessite pas encore de digitaliques. IV.1.6.2- AUTRES ESPECES SOURCES DE PROANTHOCYANIDOLS DIMERES La Vigne (Vitis vinifera L.) VTACEAE La vigne est utilise par la phytothrapie (feuille de vigne rouge) et par l'industrie pharmaceutique, qui prpare un extrait purifi standardis en oligomres procyanidoliques partir des graines (ppins) de raisin. Ceux-ci constituent galement une source d'huile. Exprimentalement, les procyanidols des ppins de raisin sont angioprotecteurs sur plusieurs modles mettant en ouvre une altration de la permabilit capillaire. nhibiteurs in vitro de la collagnase, de l'lastase, de la hyaluronidase, de la xanthine-oxydase, de l'enzyme de conversion de l'angiotensine et pigeurs des radicaux, ils prserveraient le collagne et l'lastine de la dgradation. Nonobstant leurs biais mthodologiques, plusieurs tudes chez l'homme tendent montrer une certaine capacit de ces proanthocyanidols (150-300mg/J) attnuer les manifestations fonctionnelles de l'insuffisance veineuse, augmenter la sensibilit visuelle aprs blouissement, attnuer la symptomatologie subjective d'une fatigue visuelle. En thrapeutique, les procyanidols des ppins du raisin ont deux indications : Traitement du lymphoedme du membre suprieur aprs traitement radiochirurgical du cancer du sein en complment des mthodes physiques (ou seuls si celles-ci ne sont pas possibles). Traitement des manifestations fonctionnelles de l'insuffisance veinolymphatique. Les formes faiblement doses sont, en outre proposes dans le traitement des troubles impliquant la circulation rtinienne et ou chorodienne. Comme beaucoup d'autres pigeurs de radicaux, les proanthocyanidols ont retenu l'attention des formulateurs de produits cosmtiques dermoprotecteurs . Le Pin (Pinus sp.) PNACEAE Si l'intrt du pin est li, entre autres la trbenthine, son corce est aussi une bonne matire premire pour l'obtention d'oligomres proanthocyanidoliques (comme d'ailleurs beaucoup d'autres conifres dont les corces peuvent renfermer jusqu' 5% de procyanidols dimres B-1-B-4). Utilisations Les proanthocyanidols du pin sont proposs dans le traitement des symptmes en rapport avec l'insuffisance veino-lymphatique. DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 37 Le Cyprs (Cupressus sempervirens L.) CUPRESSACEAE Le cyprs est un arbre feuilles opposes dcusses, triangulaires, troitement imbriques et appliques sur le rameau. Les diffrentes varits de cette espce mditerranenne sont largement utilises des fins ornementales. Ce sont les cnes femelles (galement appels galbules) qui sont utiliss en phytothrapie. Ces derniers sont forms d'cailles peltes et charnues qui se lignifient progressivement. Chimiquement, les cnes renferment une huile essentielle (5ml/kg, -pinne. '-carne, etc.), des dimres et des oligomres proanthocyanidoliques et des acides diterpniques, alors que les rameaux sont caractriss par la prsence de biflavones et de 3-8 ml/kg d'huile essentielle carbures mono-, sequi- et diterpniques. L'exprimentation pharmacologique chez le rat montre une activit angioprotectrice des oligomres ; ces molcules sont par ailleurs des inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine (lapin, voie V) et des inhibiteurs de l'lastase et de l'activit trypsique (in vitro). Les phytomdicaments base de cnes de cyprs sont traditionnellement utiliss dans les manifestations subjectives de l'insuffisance veineuse telles que jambes lourdes et dans la symptomatologie hmorrodaire (voie orale et usage local). IV.2. UTILISATION INDUSTRIELLE DES TANINS Elles sont nombreuses et, si l'utilisation en tannerie est devenue ngligeable (au moins dans les pays dits dvelopps), d'autres usages sont apparus. IV.2.1. APPLICATIONS FONDEES SUR LEUR ACTION SUR LES PROTEINES [7,12,14,15,16,17,35, 37,38] Dans cette catgorie rentreront, non seulement le tannage des peaux, mais aussi l'tude des impratifs technologiques qui dcoulent de l'astringence qu'ils confrent leurs solutions. Le tannage des protines des papilles du got est en effet la cause de la saveur astringente de ces substances [12]. D'o leur importance dans la technologie des industries alimentaires comme celle du vin, de la bire, du cidre, des jus de fruits. Les tanins contribuent d'une manire importante la qualit du produit, comme c'est le cas pour le vin. Au contraire, il est parfois ncessaire de les liminer pour viter des troubles au cours de la conservation, comme le cas pour la bire [14,15,16,17]. IV.2.2. APPLICATIONS FONDEES SUR LEUR NATURE POLYPHENOLIQUE [15] Le tannage vgtal des peaux tant de plus en plus abandonn, le tannage mondial des tanins naturels est en diminution constante. Certains pays producteurs, comme l'Australie, se sont mus de cette situation et tentent de favoriser leur emploi dans d'autres applications industrielles. Nous les numrerons brivement. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 38 IV.2.2.1- PRESERVATION DES FILETS DE PECHE Les polyphnols sont en effet des antifongiques et antibactriens capables d'empcher la prolifration des germes producteurs de celluloses, enzymes tenues pour responsables de la dgradation de la cellulose constituant les filets. IV.2.2.2- FABRICATION D'ADHESIF ET DE PLASTIQUE Les tanins condenss fournissent avec le formol et l'acide chlorhydrique des prcipits constitus par des polymres hautement condenss. C'est la base de la raction de Stiasny qui a servi longtemps de procd analytique pour diffrencier les tanins catchiques des tanins pyrogalliques. Sur le principe mme de cette raction, on a prpar divers plastiques : des poudres de moulage, obtenues partir de mlanges de tanins, formol et plastifiant possdant une grande ractivit et diminuant ainsi le temps de coulage ; des catalyseurs de condensation du formaldhyde avec l'aniline, le phnol, la cyclohexanone, l'ure qui permettent d'abaisser la temprature de condensation ; des adhsifs suprieurs ceux obtenus avec d'autres phnols, car ils rsistent mieux au gonflage par l'eau. IV.2.2.3- PREPARATION D'HUILES DE PERAGE [35] Les produits obtenus permettent un contrle efficace de la viscosit de l'huile et favorisent le maintien en suspension de la bentonite. ls permettent aussi un meilleur coulement. IV.2.2.4- PROTECTION DES METAUX [35] Des quantits importantes de tanins sont actuellement utilises dans la prparation de solutions antirouille . On a mme constat que cette protection pouvait s'tendre aux mtaux non ferreux comme l'aluminium. l est difficile d'valuer la consommation annuelle des tanins, car les industries locales de tannage utilisent souvent des tanins indignes non recenss. En 1957, on valuait 200 000 tonnes la production de tanin de quebracho et 120 000, celle de tanin de mimosa. La majeure partie sert au tannage des peaux. Ces tanins naturels sont rservs des oprations bien prcises, moins ralises avec des tanins minraux. Leur principal dfaut est la lenteur des oprations qui entrane des stockages et des immobilisations de capitaux. Actuellement, les procds industriels d'extraction des substances vgtales ont fait de tels progrs qu'il est possible de prparer des solutions tannantes concentres, permettant des tannages rapides, capables de concurrencer les tannages minraux. DEUXIEME PARTIE . ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 39 ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 40 CONCLUSION GENERALE Les tanins sont des composs polyphnoliques ayant la proprit de tanner la peau, c'est--dire la rendre dure et imputrescible, en se fixant sur les protines. On distingue gnralement deux types de tanins : les tanins hydrolysables : qui sont des esters d'oses et d'acide gallique ou digallique, les tanins condenss : non hydrolysables et drivant des catchols et des proanthocyanidols par condensation des molcules. Le catchol le plus frquent est la catchine. Ces tanins condenss sont des esters d'oses et d'acide ellagique. ls ne sont hydrolysables ni par les acides, ni par la tannasse, mais sont transforms par les acides forts ou les agents d'oxydation. La diffrenciation de ces deux types de tanins (galliques et catchiques) se fait par le ractif de Stiasny. Ce ractif entrane une polymrisation suivie d'un prcipit qui atteste de la prsence des tanins catchiques. Notre expos a port sur les activits pharmacologiques des tanins et a permis la mise en vidence de plusieurs actions lies ces substances. Nous allons en donner quelques exemples : Activits antibactriennes Les tudes menes ont montr que certains tanins prsentent des actions antibactriennes des concentrations pouvant atteindre 0,01mg/ml. CONCLUSION GENERALE 41 Les rsultats obtenus par Mahamat B. et al. [32], et aussi par le professeur Bassne E. et son quipe [4] montrent que les dcocts sont plus actifs que les macrs, sauf pour Guiera senegalensis. Ces auteurs ont attribu cette activit la prsence des acides phnols et des tanins catchiques. Kolodziej et al. [27] ont montr que les tanins prsentent une activit antibactrienne faible modre aussi bien, sur les bactries Gram+ que les bactries Gram- et galement une grande activit anticryptococcus (levures). Activits antivirales : Karin C.S. Chen Liu [8] dcouvre que Phylanthus myrtifolius et Phylanthus urinaria prsentent de puissantes activits antivirales sur l'EBV et sur l'HV-RT (HV-reverse transferase), la confirmation ft apporte par Gen-chiro Nonaka et al [39] montrant ainsi que les acides galloyl quiniques, spcialement les acides ttragalloyl quiniques sont de puissants inhibiteurs de la rplication de l'HV dans les lymphocytes H9. Les tanins constituent ainsi un espoir dans la thrapie anti-HV. Activits anti-inflammatoires : Mota et al. [36] ont examin l'activit anti-inflammatoire de Anacardia occidentale L. Les tudes ont t menes sur les tanins isols des corces. Ainsi les tudes ont montr une action anti-inflammatoire contre des odmes provoqus par le dextrane et le carraghenane sur les pattes de rats, des doses de 10-80mg, 300-900mg/kg respectivement. Activits anti-hypertensives : Cette activit est tudie partir de la corilagine et de l'acide chebulinique, tanins de Lumnitzera Racemosa. Ces substances abaissent les pressions sanguines des rats conscients aux diffrents temps d'attaque. L'activit anti-hypertensive est produite de faon dose dpendante. Activits antimutagnes : En comparant les pouvoirs antimutagniques de Alchemillo sp et Potentilla anserina par l'utilisation du 2-nitrofluorine comme mutagne standard, on a pu observer une activit faible modre sans corrlation entre les teneurs en tanins et le degr d'utilisation. De mme Terminalia arjuna prsente une gnotoxicit des mutagnes dans Salmonella typhimurium. Activits immuno-stimulantes : Feldman K.S et al. [9] parviennent tablir l'activit immuno-stimulante des plantes polyphnols. l a t dmontr que les ellagitanins oligomres stimulent fortement l'induction de l'interleukine-1 (L-1) des macrophages priphriques humains, donc sont inducteurs des cytokines. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 42 Activits antitumorales Plusieurs dimres, tels que l'agrimoniine et l'oenothine B prsentent une remarquable activit antitumorale obtenue par l'intermdiaire de l'hte, contre Sarcoma 180. Les tudes menes par Yoshida et al. [54] rvlent que la tellimagrinine supprime la tumeur excroissante chez trois six rats sur cent, une dose de 10mg/kg. Activits anti-diarrhiques : Toutes les tudes menes prsentent les tanins comme tant des substances anti-diarrhiques. La confirmation a t apporte par les tudes de Bruneton Y.[7]. Cette activit semble tre lie leur pouvoir astringent et anti-infectieux. Autres activits : En plus de ces diffrentes actions, il a t dmontr que les tanins prsentent d'autres activits : activit inductrice de l'apoptose activit anti-oxydante activit catalytique avec une puissante activit anticoagulante l faudra galement retenir des tanins, une action astringente et cicatrisante, et une activit vitaminique P, surtout avec les formes moins condenses polymres flavanques. Au regard de ces diffrentes actions que prsentent les tanins, leur utilisation couvre de vastes domaines allant de la phytothrapie l'application industrielle. Les tanins sont galement utiliss dans les manifestations subjectives de l'insuffisance veineuse, dans la symptomatologie hmorrodiaire, dans l'hygine buccale, comme antihmorragique, antidysentrique, dans les troubles de l'rthisme cardiaque et les troubles de sommeil [7]. En application industrielle : les tanins sont trs largement utiliss dans l'industrie du tannage (tannage des peaux) ; mais il faut noter une trs grande importance dans la technologie des industries alimentaires comme celle du vin, de la bire, du cidre et des jus de fruits. Cependant, l'utilisation des tanins s'oriente de plus en plus dans d'autres applications industrielles telles que : la prservation des filets de pche la fabrication d'adhsif et de plastique la prparation d'huile de perage la protection des mtaux. l en dcoule de trs nombreuses perspectives dans nos pays en voie de dveloppement o l'exploitation des plantes tanins reste toujours inacheve ; ce qui donne matire CONCLUSION GENERALE 43 rflexion aux dcideurs sur la rsolution des problmes de sant. Actuellement, l'heure des thories doit tre dpasse et entrer dans une phase pratique o les ides dveloppes trouvent des issus concrtes. ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 44 BIBLIOGRAPHIE 1- ALXELROD J. et TOMCHICK R. 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On agite nergiquement et on laisse reposer pendant 3 minutes. On ajoute nouveau 2ml de la solution de carbonate de sodium, puis on secoue et on laisse reposer pendant 2 heures. A ce moment, l'chantillon est soumis la centrifugation petite vitesse jusqu' dpt des matires particulires. Un blanc sera fait chaque instant et la lecture de l'absorbance se fait au spectrophotomtre 725nm. En utilisant une srie de dilutions de la solution de tanin prpare ci-aprs : 1/250 ; 1/100 ; 1/40 ; 1/25 ; 1/10 et tablir la courbe d'talonnage de l'acide tannique. Sries 1 2 3 4 5 6 Facteur dilution 1/250 1/100 1/50 1/40 1/25 1/10 Dilution (ml) 0,1 0,1 0,2 0,5 0,5 1 Eau distille (ml) 24,9 9,9 9,8 19,5 12 9 Absorbance 0,06 0,16 0,32 0,38 0,66 1,38 Concentration (gml) 0,2 0,5 1 1,25 2 5 Ce tableau donne l'absorbance et la concentration correspondante de chaque dilution de la solution tannique. Ces valeurs ont permis de tracer la courbe d'talonnage de l'acide tannique. Dosage des phnols totaux 500mg de l'extrait sec sont dissous dans 1000ml d'eau distille. Une dilution au 1/100 est faite et la teneur en phnols totaux de chaque chantillon est dtermine par la mthode de Folin-Denis dcrite plus haut. 2- Dtermination de Ia teneur en tanins Les solutions extractives prpares pour la dtermination des phnols totaux (500mg pour 1000ml d'eau distille) sont utilises pour le dosage des tanins par la prcipitation la casine. On prlve 6ml d'aliquote de chaque chantillon et on ajoute 12ml d'eau distille ; 1g de casine en poudre et on agite pendant 3 heures. Un blanc sera fait avec 18ml d'eau distille et 1g de casine. On filtre avec du papier Wattmen n1 ; 9.0 cm. Chaque becher utilis est soigneusement rinc avec 10ml d'eau distille et on ajuste le filtrat 25ml. Un aliquote de 2ml de ces solutions est prlev pour la dtermination des phnols ACTIONS PHARMACOLOGIQUES DES TANINS 52 totaux. 3- CaIcuI des rsuItats L'valuation de la teneur en phnols totaux se fait partir de la courbe d'talonnage. Pour cela, on lit directement sur la courbe d'talonnage, la concentration correspondant l'absorbance enregistre. Les quantits de phnols dans les extraits sont dtermines en multipliant la concentration par les diffrentes dilutions effectues. Les quantits de tanins est donne par la diffrence entre la quantit des phnols totaux et celle obtenue aprs fixation des tanins sur la casine. Les rsultats obtenus seront analyss statistiquement par le test de Student : La diffrence entre les deux moyennes n'est pas significative si t < t (lu sur la table de Student avec 0,05 de degr de libert). La diffrence est significative si t > t. ANNEXES 53