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Tincin de Bacterias
Si se desean observar las caractersticas morfolgicas de las
bacterias, resulta sumamente til el utilizar las preparaciones fijas y
teidas, debido a que estas permiten que las clulas se visualicen de
mejor manera y se puedan diferenciar las distintas especies por su
coloracin, este mtodo en particular se llama tincin diferencial o
selectiva.
Los pasos a seguir para la tincin de las bacterias es hacer el frote, la
fijacin y la aplicacin de las soluciones colorantes. La amplia gama
de colorantes que se pueden utilizar, ha obligado a separarlos en tres
grupos generales, los de trifenilmetano, los de oxacina y los de tiacina.
Esta clasificacin es buena para la distincin de las familias de
colorantes, pero en general se utiliza la clasificacin de acuerdo a su
carcter cido base, es decir, cidos, bases o neutros, debido a que
de esto depende mucho su comportamiento.
La coloracin se da de acuerdo con a la accin de los iones complejos
del colorante y los sitios activos de la superficie o del interior de la
clula.
Coloracin Simple:
Este tipo de coloracin consiste en inundar con un colorante
cualquiera la lmina donde se tienen las bacterias, luego lavarlas con
agua, y algunas clulas retendrn el colorante, por reaccin con el
mismo.
Coloracin diferencial:
Este tipo de coloracin es sumamente importante, ya que discrimina
entre un tipo de bacterias y otro de acuerdo con su susceptibilidad
ante uno u otro colorante.
Entre estos mtodos se encuentra la coloracin de Gram, que es
sumamente importante en microbiologa. Este mtodo discrimina entre
clulas grampositivas y clulas gramnegativas, es generalmente
utilizado debido a que muchas de las clulas patgenas son del tipo
gramnegativo, aparte de esta diferencia las clulas grampositivas son
ms susceptibles a la penicilina y ms resistentes a la accin
mecnica y exposicin a algunas enzimas que las gramnegativas. La
forma en que se realiza este mtodo es aplicando cristal violeta a la
laminilla, luego se aplica yodo como colorante, luego se lava con
alcohol, para finalmente aadirle un colorante de contraste. En
general, se obtienen bacterias de color rojo y violeta. Las clulas
gramnegativas pierden el cristal violeta durante el lavado, por lo tanto
aparecen rojas ante el contraste de la safranina, las clulas
Preparacin de colorantes
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Glicerol.............................................................................................200 ml
Agua.................................................................................................100 ml
Lactofenol al Azul Algodn: Para preparaciones en fresco y tinciones de mohos.
o Solucin de azul algodn
Sol. saturada de azul algodn (azul anilina soluble)......................10
ml
Glicerol.....................................................................................10 ml
Agua.........................................................................................80 ml
Mezclar esta solucin con lactofenol a partes iguales
Lugol: Solucin de yodo para tincin Gram.
o Yodo...................................................................................................1 g
o Yoduro potsico..................................................................................2 g
o Agua destilada.................................................................................300 ml
Orcena A: Tincin de cromosomas.
o Orcena................................................................................................2 g
o cido actico.....................................................................................45,8 ml
o cido clorhdrico 1 mol/l......................................................................8,3 ml
o Agua..................................................................................................45,8 ml
Orcena B: Tincin de cromosomas.
o Orcena................................................................................................2 g
o cido actico.....................................................................................55 ml
o Agua..................................................................................................55 ml
Safranina: Colorante de contraste para tincin Gram (preferible a la fucsina) y
esporas.
o Safranina.........................................................................................0,25 g
o Agua destilada..................................................................................100 m
Sudn III: Tincin especfica de grasas.
o Alcohol etlico...................................................................................100 ml
o Sudn III...................................................................................hasta
saturacin
Verde de metilo actico: Igual composicin que la eosina (num. 7)
o
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