INTRODUCCION La invencin del microscopio a principios del siglo XVII permiti a la biologa penetrar en el microcosmos, (Swammerdam descubri los

glbulos rojos, Leeuwenhoek las bacterias, Hooke las clulas). (DETLEV GANTEN-THOMAS DEICHMANN-THILO SPAHL, 2003) La aplicacin del microscopio al estudio de los seres vivos supuso un paso de gigante en el conocimiento de los organismos. A partir del holands Leeuwenhoek, en el siglo XVII, empieza a saberse de las pequeas estructuras vivientes, conocimientos que el microscopio compuesto perfecciona despus y, con la aplicacin del microscopio electrnico de nuestros das, se hace posible la observacin de estructuras finsimas, al conseguir aumentar 100.000 veces las partculas protoplasmticas. (ATLAS TEMTICO-Biologa, 2004) El descubrimiento del microscopio electrnico y de las tcnicas de preparacin de los tejidos para el examen correspondiente han revelado un orden de complejidad totalmente nuevo en la materia viva. El advenimiento ms reciente del microscopio electrnico explorador ha permitido obtener mayores conocimientos de la estructura fina de clulas vegetales y animales. En los ltimos aos se han ideado muchos mtodos fsicos y qumicos nuevos aplicados a problemas de la biologa, as se han descubierto en la funcin de los seres vivos grados de complejidad comparables a los adelantos estructurales que debemos al microscopio electrnico. (CLAUDE A. VILLE, 1993 - Sptima Edicin) El microscopio electrnico ha revelado notable complejidad estructural donde el microscopio de luz solo permita apreciar una matriz ms o menos homognea. (CLAUDE A. VILLE, 1993 - Sptima Edicin) En las investigaciones citolgicas, el microscopio electrnico representa un prodigioso auxiliar exploratorio, aunque se sigue empleando el microscopio ptico que es todava de gran utilidad. (LAROUSSE - Biblioteca Practica1992) Los microscopios pticos usan lentes, casi siempre de vidrio, para enfocar y amplificar los rayos de luz que pasan a travs de un espcimen o bien rebotan en el. Estos microscopios proporcionan una amplia gama

de imgenes, dependiendo de la forma en que se ilumine el espcimen y de si se le ha teido o no. La capacidad de definicin de los microscopios pticos, es decir, la estructura ms pequea que puede verse, es de aproximadamente 1 micra (una millonsima de metro). Los microscopios electrnicos utilizan haces de electrones en vez de luz. Los electrones se enfocan con campos magnticos, no con lentes. Algunos tipos de microscopios electrnicos pueden distinguir estructuras de unos cuantos nanmetros (millonsimas de metro). Los microscopios electrnicos de transmisin (TEM, por sus siglas en ingles) hacen pasar electrones a travs de un espcimen delgado y pueden revelar los detalles de la estructura celular interior, incluidos los organelos y membranas plasmticas. Los microscopios electrnicos de barrido rebotan electrones de especmenes que se han recubierto con metales y proporcionan imgenes tridimensionales. Los SEM pueden servir para ver los detalles superficiales de estructuras cuyo tamao vara desde insectos enteros hasta clulas e incluso organelos. (TERESA AUDESIRK GERALD AUDESIRK BRUCE E. BYERS, Sexta Edicin 2003) El microscopio electrnico de barrido, que presenta una imagen tridimensional de las superficies de los especmenes. El espcimen se prepara recubrindolo con una delgada capa de metal pesado (digamos platino), que se vaporiza y deposita en la superficie del objeto que se desea ver. El microscopio dirige un haz de electrones a la superficie recubierta y los iones metlicos de la superficie emiten electrones como respuesta. El nmero de electrones emitidos dependen del ngulo del haz de electrones relativo a la superficie del espcimen, el cual a su vez dependen del contorno del espcimen. As, la imagen final, que se forma detectando los electrones emitidos, tiene un aspecto tridimensional. (TERESA AUDESIRK GERALD AUDESIRK BRUCE E. BYERS, Sexta Edicin 2003) La microscopia es la ciencia que se ocupa de los usos y de las aplicaciones interpretativas de los microscopios, los cuales hacen posible que partculas muy pequeas sean percibidas por el ojo humano. (JORGE L. ZUAZO SILVA)
http://mvz.unipaz.edu.co/textos/biblioteca/microbiologia/microbiologia_y_parasitologia_medica s_-_tomo_i/microcap04.pdf

OBJETIVOS Los objetivos de la prctica fueron conocer y describir las partes y el correcto funcionamiento del microscopio compuesto binocular de luz incorporada. Tambin aprendimos a desarrollar los preparados en fresco. MATERIAL Y METODO La prctica de laboratorio se baso en el reconociendo de la estructura del microscopio compuesto binocular de luz incorporada (partes), funcionamiento y cuidados. Sistema ptico
y y y y y y

OCULARES: Lentes situados cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. LAMPARA: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. TUBO OPTICO: Es una cmara oscura unida al brazo mediante una cremallera.

Sistema mecnico
y

y y y y

SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes:  Pie: base del microscopio y en el se integra la fuente luminosa.  Brazo: Es la columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie con el tubo. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular. REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto.

Durante la prctica N 1 realizamos un preparado fresco: Las etapas para hacerlo son muy simples, NUESTRA MUESTRA FUE AGUA ESTANCADA. 1. Con ayuda de un gotero extrajimos una pequea muestra de agua del fondo de la botella. 2. Tomamos un portaobjetos y limpiamos su superficie. 3. Colocamos la muestra sobre el portaobjetos. 4. Apoyamos el cubreobjetos sobre la muestra, evitando que se forme burbujas para no daar la muestra. 5. Automticamente llevamos el preparado al microscopio para su observacin.

CONCLUSIONES y El microscopio compuesto binocular de luz incorporada est formado por tres partes o sistemas, el primero es el sistema mecnico (soporte, tubo ocular, cabezal, revolver, platina y tornillos de enfoque), el segundo es el sistema ptico (ocular, objetivo), y el tercero es el sistema de iluminacin (condensador, diafragma, portafiltro, espejo y fuente de luz). y Los preparados en microorganismos vivos. fresco nos sirven para observar

ENLACES ACEITE DE INMERSION Aplicacin El aceite de inmersin para microscopia tiene aproximadamente el mismo ndice de refraccin que el vidrio. Mediante el aceite de inmersin se elimina casi completamente la desviacin de los rayos de luz y se aumenta considerablemente la eficacia de los objetivos de los microscopios. Almacenamiento y estabilidad  El reactivo debe almacenarse entre 15 y 30C. Despus de abierto el contenido almacenado entre 15 y 30C es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.  Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados. Precauciones y advertencias  Observe la simbologa en los rtulos de las soluciones y los reactivos.  Las soluciones y reactivos usados y los caducados deben eliminarse como desechos especiales, debiendo cumplir las regulaciones locales para el desecho de compuestos peligrosos. Materiales adicionales requeridos no suministrados  Microscopio  Lamina portaobjetos

 Laminillas cubreobjetos Muestras  Todas las muestras deben estar rotuladas inequvocamente.  Deben usarse los materiales o instrumentos adecuados para la toma de muestras y en la preparacin, y deben seguirse las instrucciones del fabricante para la aplicacin y/o empleo.

 Toda muestra biolgica debe ser considerada como potencialmente infecciosa.

Procedimiento En la observacin al microscopio debe inicialmente enfocarse la correspondiente parte en el preparado de la lmina. Entonces se gira algo la torre del objetivo. Se agrega una gota de aceite de inmersin sobre el rea a observar y se gira a su posicin original el objetivo de inmersin. Cuando se ha acabado el proceso de observacin al microscopio, se limpian la lente frontal y el preparado para eliminar el aceite de inmersin. Se puede utilizar el limpiador de lentes IHR Diagnostica.

Nota:  El microscopio usado debe cumplir los requisitos de un laboratorio de diagnostico medico.  Los preparados deben estar secos antes de la observacin al microscopio con aceite de inmersin, es decir, deben dejarse secar bien los preparados o, si es necesario, montar un cubreobjetos, ya que de lo contrario la imagen se enturbia. Caractersticas Caracterstica ndice de Refraccin n20/D Densidad (d20C/4C) Especificacin 1.515- 1.517 1.0245- 1.0265

Transmitancia % 380nm, 1cm 400nm,1cm 450nm,1cm Fluorescencia (como quinina a 365nm) Viscosidad 20C Aptitud para microscopia Solubilidad en: SISTEMA PTICO

65% 78% 90% 1500ppb 100-120 mPa.s Corresponde Xileno- tolueno

El sistema ptico es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Est formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una imagen de la muestra que el ocular luego ampla. y El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la imagen formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de aumento van desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y otros que poseen una escala micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad de medir el tamao del objeto observado. y Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver y producen el aumento de las imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersin. y Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento que producen, la abertura numrica y otros datos. As, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su apertura numrica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero de objetivos vara con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X. y El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a travs de este objetivo es

necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos crculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior. COLORACION Es una tcnica auxiliar en microscopa para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Hoy en da se dispone de una amplia variedad de tinciones microbiolgicas que constituyen herramientas muy importantes para la deteccin, identificacin y control de los microorganismos, que van desde tcnicas sencillas y rutinarias, hasta tinciones altamente sofisticadas para el diagnstico y la investigacin. Coloracin: proceso por el cual un cuerpo toma color por la accin de una sustancia colorante. Tincin directa Hablamos de tincin directa cuando el colorante directamente con el sustrato, sin otro tratamiento previo. Tincin indirecta Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido tnico. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora s podr atacar el colorante.1 Clasificacin de colorantes: Pueden ser: Naturales:  Animales: carmn.  Vegetales: hematoxilina, azafrn. Artificiales: interacciona

 cidos: eosina, son colorantes citoplasmticos  Bsicos: azul de metileno, son colorantes nucleares.  Neutros: eosinato de azul de metileno, tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro. La coloracin puede ser: y Ortocromtica: cuando los tejidos toman el mismo color al de la solucin empleada. y Metacromtica: cuando los tejidos toman un color diferente el del color empleado. La tcnica de coloracin ms empleada es la de hematoxilina-eosina.  Montaje: para proteger el preparado y evitar su deterioro se lo cubre con un cubre objetos de vidrio, colocando previamente blsamo de canad.  Basofilia: tejidos que reaccionan con colorantes bsicos, por ejemplo cromatina y los nucleolos.  Asidofilia: tejidos que reaccionan con colorantes cidos, por ejemplo filamentos citoplasmticos. Clasificacin de fijadores: Qumicos:  Simples: constituidos por una solo sustancia qumica. Formol al 40%, conocido tambin como formalina y se emplea al 10%, 25% diluido en agua. Para fijar extendidos desangre y de lquidos de puncin  Compuestos: liquido de flemming que es un excelente fijador para la clula. Liquido de bouin que permite fijar piezas de hasta 1cm de grosor. Fsicos: y Color seco: se unas en bacteriologa. y Color hmedo: se usa para fijar invertebrados. y Fri: es un buen fijador, pues cuando deja de actuar, se reinician los procesos pos mortem. y Desecacin: en extendidos de sangre. Lquidos de puncin.

Tincin In vivo e In vitro Mtodo in vivo: Se realiza a organismos o clulas vivas en su estado natural incluso orgnulos celulares. Se utilizan colorantes llamados colorantes vitales, estos no causan dao al organismo o clula durante un tiempo corto, a largo plazo son txicos y mortales. Mtodo in Vitro: Estudia al organismo vivo pero colocado en condiciones artificiales. Se realiza en clulas aisladas y fciles de separar. Estas clulas se colocan sobre un sustrato adecuado que se llama medio de cultivo en el cual se mantienen con vida mientras dura el estudio conocido como cultivo celular. BIBLIOGRAFIA  ATLAS TEMATICO BIOLOGA ( Idea Books 2004)  AUDESIRK, Teresa; AUDESIRK, Gerald; BYERS, Bruce, BIOLOGIA, La vida en la tierra; Sexta Edicin, Prentice Hall, Mxico, 2003.  VILLE, Claude A., BIOLOGIA, Septima Edicin, McGraw-Hill, Mexico, 1993.  GANTEN, Detlev; DEISCHMANN, Thomas; SPAHL, Thilo; VIDA, NATURALEZA Y CIENCIA. Todo lo que hay que saber. Editorial Santillana, Espaa, 2005.  QUIMICA Y CIENCIAS NATURALES Biblioteca Practica, Laurousse, Colombia 1992.  ZUAZO SILVA, Jorge, Microscopia y Coloraciones. Disponible es: http://mvz.unipaz.edu.co/textos/biblioteca/microbiologia/microbiologi a_y_parasitologia_medicas_-_tomo_i/microcap04.pdf  Estudio Microscpico de los microorganismos. Disponible en: http://es.scribd.com/doc/14173114/3-Estudio-Microscopico-de-LosMicroorganismos#  Tincin ,Wikipedia, enciclopedia libre 2011.Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n  Aceite de Inmersin Medio de inmersin para microscopia. Disponible en: http://www.ihrdiagnostica.com/tecnias/pdfAceiteDeInmersionv2.pdf