Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
PROFESOR :
MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA PRIMERA MICROBIOLOGIA GENERAL, INMUNOLOGA Y BACTERIOLOGA MEDICA Agentes fsicos y qumicos: desinfeccin y esterilizacin. Antimicrobianos: quimioterpicos y antibiticos. Mecanismos de accin y resistenc ia bacteriana. Mblgo. Luis Alberto Snchez Angulo.
Quimioterpicos son compuestos qumicos con actividad microbicida o microbiosttica, con una toxicidad suficientemente baja como para permitir su administracin a un organismo superior, en cuyos fluidos corporales y tejidos permanece estable un cierto tiempo a concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos dentro del organismo. Todos los das usamos agentes qumicos para controlar el crecimiento microbiano: detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloracin de las aguas potables, antispticos para la piel y el tratamiento de heridas, desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los laboratorios, quimioterpicos y antibiticos para tratar enfermedades bacterianas, etc.
o En los hospitales, para esterilizar termmetros, catteres, instrumentos, etc., se suele recurrir a un tipo de autoclave que usa el ga s xido de etileno o formaldehido gaseoso (ambos son agentes alquilantes) . o Pequeos objetos se pueden esterilizar en perxido de hidrgeno (agente oxidante). o Las cmaras de cra de animales libres de grmenes se esterilizan con cido peractico, un fuerte agente oxidante. Los halgenos son agentes oxidantes muy potentes, y que tienen usos muy importantes: o El yodo es un magnfico antisptico de la piel (el mejor que se conoce) . o El cloro se presenta como cloro gaseoso (Cl 2), hipocloritos y cloraminas. El efecto desinfectante se debe a la liberacin de cloro libre (Cl 2); a su vez, el Cl 2 reacciona con el agua para dar cido hipocloroso (ClOH), que a pH cido o neutro es un oxidante fuerte. Cloro gaseoso: a 1-3 ppm se usa en la cloracin de aguas para b ebida y de aguas de piscinas. Su actividad se ve muy influida (mermada) por la presencia de materia orgnica; por ello, se suele determinar la demanda de cloro del agua a tratar. Descontada dicha demanda, el cloro gaseoso mata rpidamente (15 -30 segundos) a slo 1 ppm. Soluciones de hipocloritos: hipocloritos de sodio, de calcio o de litio. A 200 ppm de cloro se usan ampliamente, ya como lquidos (lejas), o en polvo, en industrias alimentarias y lcteas (para desinfectar el equipamiento y maquinaria que h a de entrar en contacto con los alimentos a procesar), en restaurantes, hoteles, hospitales, etc. Ciertos cidos orgnicos se usan como conservantes de alimentos. Tal es el caso del cido benzoico y del cido srbico. Por otro lado, los alimentos fermenta dos producen sus propios conservantes, como el cido actico, lctico y propinico.
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
1. Modifican la velocidad de crecimiento, provocando cambios que, a determinados valores de dichos factores pueden llegar a ocasionar la muerte de microorganismos; 2. Condicionan la distribucin de los microorganismos en sus ecosistemas y hbitats naturales; 3. Permiten a los humanos controlar el crecimiento micro biano, por medio de la fijacin de parmetros para: a) la mutagnesis, b) la esterilizacin y desinfeccin, c) la quimioterapia. No todos los microorganismos toleran del mismo modo un determinado factor ambiental. As, unas determinadas condiciones pueden ser nocivas para una especie bacteriana, y en cambio ser neutras o beneficiosas para otra. Antes de abordar el estudio de distintos agentes ambientales, conviene distinguir entre los efectos que un determinado agente puede tener sobre la viabil idad y los efectos que pueden simplemente afectar al crecimiento, a la capacidad de diferenciacin (si la hubiera) o de reproduccin. Los principales tipos de factores fsicos a considerar se pueden desglosar de la siguiente manera: AGENTES FSICOS Temperatura Desecacin Radiaciones Ondas sonoras Presin hidrosttica Presin osmtica
Efecto de la temperatura
La temperatura es uno de los parmetros ambientales ms importantes que condicionan el crecimiento y la supervivencia de lo s microorganismos. La temperatura afecta a la velocidad de crecimiento (y, por lo tanto al tiempo de generacin, g). Cada bacteria (y suponiendo que el resto de con diciones ambientales se mantien en constantes) muestra una curva caracterstica de tasa de c recimiento en funcin de la temperatura, donde se puede distinguir tres puntos caractersticos llamados temperaturas cardinales: o Temperatura mnima: por debajo de ella no hay crecimiento; o Temperatura mxima: por encima de ella tampoco existe crecimiento; o Temperatura ptima: permite la mxima tasa de crecimiento (o sea, g mnimo).
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
El margen entre la temperatura mnima y la mxima se suele llamar margen de crecimiento, y en muchas bacterias suele comprender unos 40 grados. La temperatura mnima se puede explicar en funcin de un descenso de la fluidez de la membrana, de modo que se detienen los procesos de transporte de nutrientes y el gradiente de protones. Por encima de la temperatura mnima la tasa de crecimiento va aumentando pr oporcionalmente hasta alcanzar la temperatura ptima, debido a que las reacciones metablicas catalizadas por enzimas se van aproximando a su ptimo. En dicha temperatura ptima las enzimas y reacciones se dan a su mxima tasa posible. A partir de la temperatura ptima, si seguimos subiendo la temperatura se produce un descenso acusado de la tasa de crecimiento hasta alcanzar la temperatura mxima. Dicha temperatura refleja desnaturalizacin e inactivacin de protenas enzimticas esenciales, colapsamiento de la membrana citoplsmica y a veces lisis trmica de la bacteria. Obsrvese en el grfico que la temperatura ptima est ms cerca de la mxima que de la mnima.
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
Antes de seguir adelante, es importante tener claro que, dependiendo de la temperatura y el tiempo a que sometamos un material a tratamiento trmico, lograremos inactivacin par cial de la poblacin microbiana (es decir, queda una fraccin de clulas viables) o bien esterilizacin (=inactivacin total). En general, entendemos por ESTERILIZACIN todo tratamiento de un material con un agente fsico (como el calor, que nos ocupa e n este momento) o qumico que acarrea la eliminacin de toda forma de vida en l. Una vez estril, el material sigue estril indefinidamente con tal de que est encerrado en un compartimento estanco, sellado y libre del contacto con microorganismos del ambiente exterior.
Calor hmedo
La inactivacin por calor hmedo requiere menores temperaturas que la que se realiza en ausencia de agua. Veamos el ejemplo ms comn de condiciones de inactivacin total por calor hmedo: o Autoclave (introducido por Chamberlan d en 1884): Es un aparato que permite calentar muestras por calor hmedo a temperaturas superiores a las de ebullicin del agua (sin que sta hierva), debido a que el tratamiento se efecta en un compartimento estanco saturado con vapor de agua y a presiones superiores a la atmosfrica. (El funcionamiento del autoclave ser oportunamente explicado en clases prcticas). Los parmetros de esterilizacin suelen ser: temperatura 121C y 10 -15 min. Como se puede deducir, estos parmetros vienen fijados por la re sistencia de las esporas de especies saprofitas (ver ltima lnea de la tabla anterior), que son las formas de vida que ms aguantan el calor sin perder viabilidad.
Liofilizacin
La liofilizacin es la desecacin al vaco de una muestra previamente conge lada. Aplicada a bacterias, es uno de los mtodos que mantiene por ms tiempo la viabilidad bacteriana (varios aos). Para obtenerla, el cultivo bacteriano se adiciona de leche o suero (vase epgrafe anterior), se congela sobre nieve carbnica ( -78C), y se conecta a una bomba de vaco, que provoca la desecacin. La eliminacin de toda el agua sobre la muestra congelada aumenta la
MBLGO. LUIS ALBERTO SANCHEZ ANGULO MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
viabilidad de sta, que se guarda en ampollas cerradas de vidrio a temperatura ambiente, hasta su uso, que como vemos, puede se r incluso muchos aos despus.
Radiaciones
Su accin depende de: o Tipo de radiacin. o Tiempo de exposicin. o Dosis. Ionizantes Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos. Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos. No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes. Ultravioletas Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas adyacentes que inducen error es en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.
ANTIMICROBIANOS QUIMIOTERAPICOS
Los quimioterpicos son sustancias con actividad antimicrobiana (microbicida o microbiosttica) con toxicidad suficientemente baja como para poder ser administrados a un organismo por la va adecuada, hasta alcanzar y mantener concentraciones eficaces en los tejidos. Las propiedades deseables de un quimioterpico ideal seran las si guientes: Que tenga toxicidad selectiva, es decir, actuar segn el principio de bala mgica que daa al microorganismo respetando al hospedador . Que sea microbicida, es decir, que mate o inactive irreversiblemente el microorganismo, provocando la prdida total de viabilidad. En el mundo real, sin embargo, hay muchos quimioterpicos microbiostticos. En estos casos, los sistemas de defensa natural del hospedador (mecanismos de inmunidad) hacen el resto, eliminando el agente microbiano previamente inhibido por el quimioterpico. Los microorganismos susceptibles no deberan desarrollar resistencias al quimioterpico. Pero desgraciadamente, en muchos casos, al cabo de un tiempo de uso del antimicrobiano comienzan a surgir cepas microbianas resistentes al mi smo. La quimioterapia es una autntica escalada de armamentos entre los microorganismos y los humanos, en los que ante una nueva arma de estos ltimos los microbios pueden responder al cabo del tiempo con estrategias de resistencia, lo que obliga a un uso racional de los quimioterpicos, y a una bsqueda continua de nuevos agentes.
MBLGO. LUIS ALBERTO SANCHEZ ANGULO MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
Que el quimioterpico sea efectivo contra un amplio espectro de microorganismos. Pero no existe (ni existir) un solo agente capaz de inhibir a todos los microorganismos. Algun os antibiticos son de amplio espectro, pero no son eficaces contra todos los microorganismos. Por otro lado, existen quimioterpicos de espectro estrecho, pero muy selectivos contra ciertas bacterias que son patgenas importantes.
Que no sea alergnico, y que no tenga efectos secundarios. Que permanezca de forma activa en plasma, tejidos, etc. durante el tiempo necesario. A ser posible, que sea soluble en agua y que alcance pronto la concentracin teraputica en los tejidos.
ANTIBITICOS
Los antibiticos son sustancias normalmente de bajo peso molecular producidas por seres vivos (antibiticos naturales) o modificadas artificialmente a partir de ellas (antibiticos semisintticos), que a pequeas concentraciones tienen efect os antimicrobianos (microbicidas o microbiostticos), tras ser administrados por va adecuada a un organismo receptor. La mayor parte de los antibiticos proceden del metabolismo secundario de microorganismos procariotas (actinomicetos, Bacillus, etc.) o eucariotas (hongos de los gneros Penicillium, Cephalosporium, etc.). Se conocen unos 5.000 antibiticos distintos, y cada ao se descubre unos 300 nuevos, pero en clnica solo se usa un 1% de los descubiertos. Su importancia econmica se pone de manifiesto al pensar en las 100.000 Tm. de antibiticos producidas al ao, por un valor equivalente a 3.000 millones de euros, lo cual representa una de las industrias biotecnolgicas ms importantes.
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
La mayor parte de los antibiticos comerciales se emplea para tratar enfermedades de etiologa bacteriana, aunque algunos se usan contra hongos y levaduras, y unos pocos presentan actividad antitumoral. Desde el punto de vista qumico, se clasifican en grandes familias: antibiticos que contienen carbohidratos; lactonas macrocclicas; quinonas y compuestos relacionados; antibiticos peptdicos y con aminocidos; heterociclos del N; heterociclos del O; aromticos; alifticos, etc. La mayora de los antibiticos son molculas relativamente pequeas pero complejas, con regiones hidrofbicas que facilitan el transporte al interior celular. Muchos poseen varios anillos, algunos de los cuales mejoran la interaccin de la molcula con su diana macromolecular. Para estudiarlos es ms til agrupar a los antibiticos no por clases segn su naturaleza qumica, sino en funcin de las dianas sobre las que actan y con las que interfieren: A) antibiticos que interfieren con la biosn tesis de la pared celular B) antibiticos que actan sobre la membrana celular C) antibiticos que inhiben la sntesis de protenas D) antibiticos que actan sobre la sntesis de cidos nucleicos. Los antibiticos ms abundantes, y los mejor estudiado s, son los que interfieren con enzimas de la biosntesis del peptidoglucano de las eubacterias, y los que interfieren con la funcin del ribosoma eubacteriano (obviamente, esto cumple el requerimiento de balas mgicas). A continuacin estudiaremos alguno s grupos importantes de antibiticos, dando importancia a sus mecanismos de accin.
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
10
RESISTENCIA BACTERIANA
Desde el punto de vista medico, la resis tencia de los antibiticos, se define como la falta de respuesta clnica a su administracin. A pesar de los recursos con los que se cuenta en la actualidad, an resultan muy difciles simular las situaciones dinmicas presentes en el hospedero, como son el entorno bioqumico, las concentraciones fluctuantes del frmaco y la falta de penetracin de ste a los espacios anatmicos o fisiolgicos que se encuentran infectados. Existe una gran variedad de compuestos qumicos capaces de impedir el crecimiento de las bacterias. A estos compuestos se les ha denominado antibiticos o antimicrobianos. En la naturaleza se encuentran bacterias que son, por s mismas, resistentes a los antibiticos, y bacterias que pueden llegar ser resistentes debido a mutaciones. Los genes involucrados en la resistencia se localizan en el cromosoma y en elementos genticos mviles, como son los plsmidos y los transposones. La resistencia bacteriana es un fenmeno intrnseco y por lo tanto antiguo, que se evidenci desde la incorporacin de los primeros antimicrobianos. Afecta a microorganismos tanto de la comunidad como del ambiente hospitalario, aunque por sus repercusiones en multirresistencia llama ms la atencin a nivel del hospital. Este fenmeno se ha profundizado por la pres in selectiva del uso intensivo de antimicrobianos y se focaliza particularmente en algunas bacterias como Stapylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa. La resistencia bacteriana se produce por mecanismos como la produccin de enzi mas inactivantes, alteracin del sitio de unin en la bacteria y por disminucin de la permeabilidad celular.
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
11
La resistencia bacteriana es un fenmeno creciente caracterizado por una refractariedad parcial o total de los microorganismos al efecto del an tibitico generado principalmente por el uso indiscriminado e irracional de stos y no slo por la presin evolutiva que se ejerce en el uso teraputico. Desde el principio de la era antibitica los fenmenos de resistencia a estas sustancias han sido descritos. Cabe destacar la importancia inicial de cepas de Staphylococcus aureus capaces de degradar la penicilina y la posterior aparicin de esta misma bacteria con resistencia a la meticilina. Inicialmente el problema fue resuelto con el descubrimiento o sntesis de nuevas sustancias que eran capaces de controlar las bacterias con este fenmeno, y aparecen medicamentos como los aminoglucsidos, macrlidos, glicopptidos, entre otros. Sin embargo, esto no es suficiente y cada vez aparecen nuevos me canismos que son difciles de controlar por estos medicamentos. Se ha encontrado que la prevalencia de organismos patgenos humanos resistentes a los antibiticos es cada vez mayor, pero el descubrimiento y desarrollo de nuevos antibiticos que controlen stos es mucho ms lento. Desde el inicio mismo de la era antibitica (ap aricin de la penicilina) se ha descrito el fenmeno de la resistencia, se destaca en los aos sesenta la aparicin de la resistencia a la meticilina y posteriormente diversos mecanis mos de resistencia a los betalactamicos (betalactamasas de espectro extendido, neumococo resistente a la p enicilina) y a vancomicina (Enterococcus vancomicino resistente, Staphylococcus aureus con sensibilidad disminuida a la vancomicina). Entre los diversos factores que han contribuido al incremento significativo de la expectativa de vida durante el siglo pasado se encuentra sin duda el control de numerosas enfermedades infecciosas gracias a intervenciones como vacunas y antibiticos espec ficamente. La resistencia bacteriana es un fenmeno creciente con implicaciones sociales y econmicas enormes dadas por el incremento de morbilidad y mortalidad, aumento de los costos de los tratamientos y de las largas estancias hospitalarias generadas. Varios son los factores que han contribuido a su aparicin: La presin selectiva ejercida al prescribir formal o libremente medicamentos para uso teraputico en humanos o animales. La utilizacin generalizada de antimicrobianos en pacientes inmunocompro metidos y en la unidad de cuidados intensivos. El uso de dosis o duracin inadecuada de la terapia antimicrobiana. El desconocimiento de los perfiles de sensibilidad de los diferentes grmenes teniendo en cuenta la flora local de cada institucin o comun idad.
Mecanismos de resistencia
El fenmeno de resistencia tiene un sustrato gentico intrnseco o adquirido que se expresa fenotpicamente por mecanismos bioqumicos. De esta manera puede observarse la resistencia desde el ambiente biolgico y otro el bioqumico. LA RESISTENCIA genticamente, no ejemplo de esto bencilpenicilinas y clindamicina. NATURAL a los mecanismos permanentes determinados correlacionables con el incremento de dosis del antibitico. Un es la resistencia de la Pseudomonas aeruginosa. a las al trimetoprin sulfametoxazol; bacilos gram negativos aerbicos a
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
12
LA RESISTENCIA ADQUIRIDA aparece por cambios puntuales en el DNA (mutacin) o por la adquisicin de ste (plsmidos, trasposones, integrones). En el primero se dan casos tales como la transformacin de una Betalactamasa en una Betalactamasa de espectro extendido o como en el caso de mutaciones de los genes que codifican las porinas con el consecuente bloqueo del ingreso del antibitico al interior del microorganismo. Existen otras denominaciones de resistencia como son: o RESISTENCIA RELATIVA O INTERMEDIA : ocurre un incremento gradual de la MIC (concentracin inhibitoria mnima) a travs del tiempo. Para obtener un efecto teraputico es necesario alcanzar niveles sricos y tisulares adecuados. La susceptibilidad o resistencia del germen es en este caso dependiente de concentracin. o RESISTENCIA ABSOLUTA : sucede un incremento sbito en la MIC de un cultivo durante o despus de la terapia. Es inefectivo el incremento de la dosis clnica usual. Ejemplo de ello es la Pseudomonas spp. resistente a gentamicina y el Streptococcus pneumoniae altamente resistente a penicilina y uso de levofloxacina. o SEUDORRESISTENCIA : ocurre una resistencia in vitro pero una gran efectividad in vivo. Se denomina tolerancia antibitica al fenmeno en el cual la diferencia entre la MBC(concentracin bactericida mnima) y la MIC es muy grande lo cual ocurre con relaciones MBC / MIC mayores de 8 lo que permite la persistencia del microorganismo.
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA
13
Mecanismos de resistencia
Desde el punto de vista molecular y bioqumico existen bsicamente tres mecanismos por medio de los cuales una bacteria puede hacerse resistente al efecto del antibitico, a saber: Inactivacin del antibitico. Alteracin del sitio blanco del antibitico. Barreras de permeabilidad. Cabe resaltar que los tres mecanismos pueden ocurrir simultneamente.
Referencias bibliogrficas
1. Enrique Iaez Pareja. 2006. Curso de Microbiologa General. Departamento de Microbiologa. Facultad de Ciencias. Universidad de Granada Espaa. 2. Jawetz, E., J. Melnick y E. Adelberg. 2001. Microbiologa Mdica. 17ava edicin. Editorial El Manual Moderno, S.A., Mxico D.F. 3. Murray, P.; Rosenthal, K.; Kobayashi, G. y M. Pfaller. 2002. Microbiologa Mdica. 4ta. Edicin. Editorial Elsevier Science. Barcelona Espaa.
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGIA