AGENTES FISICOS DE ESTERILIZACION CALOR HMEDO Por lo tanto, la inactivacin por calor hmedo requiere menores temperaturas que

la que se realiza en ausencia de agua. Algunos ejemplos de condiciones de inactivacin total por calor hmedo: Microorganismo condiciones La mayora de clulas vegetativas, de bacterias, levaduras y hongos 80oC , 5-10 min Bacilo tuberculoso 58oC , 30 min Bacilo tuberculoso 59oC , 20 min Bacilo tuberculoso 65oC , 2 min Staphylococcusaureus, Enterococcusfaecalis 60oC , 60 min La mayora de esporas de bacterias patgenas 100oC , pocos min esporas del patgeno Clostridiumbotulinum 100oC , 5,5 horas esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos 100oC , muchas horas esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos 120oC , 15 minutos Los mtodos principales de lograr esterilizacin de materiales por calor hmedo: Autoclave Introducido por Chamberland en 1884. Es un aparato que permite calentar muestras por calor hmedo a temperaturas superiores a las de ebullicin del agua (sin que sta hierva), debido a que el tratamiento se efecta en un compartimiento estanco saturado con vapor de agua y a presiones superiores a la atmosfrica. Los parmetros de esterilizacin suelen ser: temperatura 121C y 10-15 min. Como se puede deducir, estos parmetros vienen fijados por la resistencia de las esporas de especies que son las formas de vida que ms aguantan el calor sin perder viabilidad. La accin rpida del calor hmedo depende en buena parte del alto valor de calor latente del agua (540 calg-1); ello hace que los objetos ms fros se calienten rpidamente por condensacin de agua en su superficie. Tindalizacin Nombre en honor de John Tyndall Es un mtodo de esterilizacin fraccionada para materiales que se inactivan o estropean a ms de 100C. Consiste en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 4) de dos fases sucesivas cada uno: a) En la primera fase el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100C, durante 1 2 horas; b) En la segunda fase el material se incuba en una estufa, a 30-37C durante 24 horas. Durante las fases de tipo a) mueren todas las clulas vegetativas de la muestra, pero permanecen viables las esporas, que quedan activadas para germinar. Durante las fases de tipo b) se produce la germinacin de las esporas activadas en la respectiva fase anterior. En la siguiente fase de tipo a) morirn las clulas vegetativas procedentes de la germinacin en la fase anterior; y as sucesivamente, hasta que al cabo de unos cuantos ciclos no queda ningn microorganismo en la muestra. Aplicaciones principales del calor hmedo: 1. En la prctica cotidiana del laboratorio de microbiologa, en la esterilizacin de medios de cultivo y soluciones.

2. En la esterilizacin de material quirrgico. 3. En la esterilizacin o inactivacin parcial, en las industrias alimentaras (conservas, leche y derivados). a) En la industria lctea se emplean como mtodos de esterilizacin la llamada uperizacin. La uperizacin o tratamiento UHT consiste en un tratamiento de calor hmedo donde se emplean temperaturas muy altas durante unos pocos segundos (p. ej.: 135-150C durante 1-2 seg). b) Pero no siempre es imprescindible esterilizar la leche, sino que puede bastar eliminar los posibles microorganismos patgenos que pueden contaminarla, y que son ms sensibles al calor que los saprofitos inofensivos. Con esta inactivacin parcial de la poblacin microbiana de la leche logramos que sta se conserve durante unos das, sin alterar apenas sus cualidades organolpticas y nutricionales. He aqu los procedimientos ms habituales para conseguir esto: i. La pasteurizacin (en honor a Pasteur, que la introdujo en los aos 1860) consiste en tratar la leche a 63oC durante 30 min, tras los cuales se enfra y envasa rpidamente. ii. La pasteurizacin instantnea (tambin conocida por sus siglas en ingls HTST, de hightemperature-short time) se logra calentando a 72C durante slo 15 segundos, tras de lo cual la muestra se enfra rpidamente. Esta tcnica es la ms usada actualmente, ya que: mata ms rpidamente; mata mejor organismos ms resistentes; altera menos el sabor; acta en flujos continuos (y permite procesar grandes volmenes de leche). Tras la pasteurizacin, el nmero de bacterias viables desciende un 97-99%. Los potenciales patgenos que pueda llevar la leche (Brucella, Salmonella, bacilo tuberculoso, Streptococcus, etc) son eliminados fcilmente. La pasteurizacin tambin se emplea para la preparacin de vacunas a base de microorganismos inactivados por el calor. CALOR SECO La esterilizacin por calor seco necesita recurrir a mayores temperaturas que la efectuada por el calor hmedo, ya que al no existir agua, la rotura de puentes de hidrgeno y la desnaturalizacin de protenas, as como la fusin de membranas, se efectan a mayores energas. Otros efectos del calor seco son los daos por oxidacin y el provocar un aumento de la concentracin de electrolitos. Aplicaciones del calor seco: 1. El llamado horno de Pasteur, mediante calentamiento a 160-170C durante 2-3 horas permite esterilizar materiales inertes de laboratorio resistentes al calor: material de vidrio y metlico, aceites y jaleas, etc. 2. Flameado a la llama (hasta el rojo) de asas metlicas de siembra, con las que se inoculan las bacterias. 3. Incineracin de materiales de desecho.

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FACTORES FISICOS Y QUMICOS QUE ALTERAN EL CRECIMIENTO MICROBIANO. Efecto de la temperatura sobre el crecimiento La temperatura es uno de los factores ms importantes que afectan al crecimiento y a la supervivencia de los microorganismos. A temperaturas muy fras o muy calientes los microorganismos no crecern. Pero los valores absolutos de estas temperaturas mnimas o mximas varan mucho entre los microorganismos diferentes y por lo general reflejan el rango de temperatura media de su hbitat natural. Temperaturas cardinales La temperatura ejerce dos tipos de efectos opuestos sobre los organismos vivos. A medida que se eleva la temperatura, las reacciones qumicas y enzimticos de la clula son ms rpidas y el crecimiento se acelera. En consecuencia dentro de un cierto margen, un aumento de temperatura supone un incremento en el crecimiento y en el metabolismo hasta un punto que tienen lugar las reacciones de inactivasin. Por encima de tal punto, las reacciones celulares caen rpidamente a cero. As para cada organismo existe una temperatura mnima por debajo de la cual no es posible el crecimiento, una tempera optima a la que se produce el crecimiento ms rpido y una temperatura mxima por encima de la cual no es posible el crecimiento. La temperatura optima esta siempre mas cerca de la mxima que de la mnima. Estas tres temperaturas que se llaman temperaturas cardinales o fundamentales, generalmente son caractersticas de cada tipo de organismos, pero no son complementamente fijas, pues pueden ser ligeramente modificados por otros factores del ambiente, en particular por la composicin del medio. La temperatura mxima de crecimiento de un organismo determinado refleja probablemente la inactivacin de una o ms protenas en la clula.

Las temperaturas cardinales o fundamentales de diferentes microorganismos difieren muchos entre s; algunos muestran temperaturas optimas tan bajas como 4C y otros tan altas como ms de 100C, no hay ningun microorganismos que tenga todo este intervalo de temperaturas que para el caso de unos organismos determinado suele ser de unos 30C aunque algunos presentas margenes de temperatura ms amplios que otros. Clases de microorganismos segn la temperatura Cuatro grupos de microorganismos con relacin a su temperatura optima: psicrofilos con temperatura optimas bajas; mesofilos con temperaturas optimas moderadas; termofilos con altas temperaturas optimas; e hipertermofilos con temperas optimas muy elevadas. Los mesofilos se encuentran en animales de sangre caliente y en medios acuticos y terrestres de latitudes templadas y tropicales. Los psicrofilos y los termofilos se encuentran en ambientes muy fros o calientes respectivamente. Los hipertermofilos son tpicos de ambientes concretos extremadamente calientes como fuentes termales, geisers y fuentes hidrotermales submarinas. Crecimiento microbiano a bajas temperaturas Los hbitat normales de muchos microorganismos puede ser extremadamente calientes o extremadamente fros. Tales microorganismos se conocen como extremofilos y han evolucionado hasta crecer de modo optimo en esas condiciones. Ambientes fros Estos ambientes fros son raramente estriles y se encuentran microorganismos vivios creciendo a cualquier temperatura baja en la que aun exista agua liquida. Incluso en muchos materiales congelados existen normalmente pequeas zonas microscopias con agua liquida donde los microorganismos pueden metabolizar y crecer. Microorganismos psicrofilos y psicotolerantes

Un psicrofilo puede definirse como un organismo que tiene una temperatura optima de crecimiento de 15C o inferior, una temperatura mxima 20C y una temperatura mnima de 0C pero tiene temperaturas optimas de 20 40C se llaman psicrotolerantes. Los psicrofilos se encuentran en ambientes permanentemente fros como regiones polares y sus sedimentos marinos y mueren rpidamente si se exponen a temperatura ambiente normal. Los microorganismos psicrotolerantes tienen una distribucin mucho ms amplia que los psicrofilos y se pueden aislar de suelos y aguas en climas templados as como de carnes, leche y productos derivados, sidra y vegetales y fruta almacena bajo refrigeracin (4C). Los psicrotolerantes crecen mejor a temperaturas 20 40C. Congelacin A pesar de la capacidad de algunos organismos para crecer a bajas temperaturas, existe un limite por debajo del cual es imposible la reproduccin. El agua pura se congela a 0C y el agua de mar a 25C, pero la congelacin no es un proceso homogneo e incluso a temperaturas mas bajas existen depsitos microscpicos de agua no congelada. Aunque la congelacin evite el crecimiento microbiano no causa necesariamente la muerte celular, el medio de suspensin de las clulas afecta su sensibilidad al fri. Crecimiento microbiano a altas temperaturas La vida microbiana crece bien en ambientes con elevada temperatura incluso en el agua hirviendo. Por encima de 65C solo viven las formas procariotas de vida pero en esas condiciones existe una enorme diversidad de microorganismos pertenecientes a Bacteris y Archea. Ambientes con temperaturas altas Los microorganismos cuya temperatura optima esta por encima de 45C se llaman termofilos y aquellos que esta por encima de 80C son los hipertermolfilos.

Muchas fuentes termales tienen temperaturas prximas a la ebullicin y las fuentes hidrotermales submarinas pueden alcanzar los 150 500C. Las fuentes hidrotermales del fondo de los ocanos tienen temperaturas de 350C o superiores. Aunque en algunas fuentes termales es variable en otras es muy constante con variaciones de 1 2C en varios aos, adems estas fuentes tienen composiciones qumicas y valores de pH diversos y en general contienen niveles suficientes de nutrientes que permitan el crecimiento de poblaciones de quimioorganotrofos y quimiolitrofos. Hipetermofilos en fuentes termales Los estudios ecolgicos de estos organismos que viven en fuentes termales en ebullicin demuestran que las velocidades de crecimiento son notablemente rpidas y con tiempo de generacin inferiores a 1 hora..algunos de estos hipertermofilostos presentas temperaturas optimas superiores a 100C. Termofilos Muchos termofilos tempera optima de 45 80C se presentan en fuentes termales y otros ambientes clidos. En fuentes termales a medida que el agua hirviendo emerge se desborda de las orillas y se aleja de la fuente se enfra gradualmente de temperatura, a lo largo de este gradiente crecen varios microorganismos con diferentes especies que crecen en los diferentes rangos de temperatura. Estudiando la distribucin de las especies en tales gradientes y examinando las fuentes termales y otros ambientes termales a diferentes temperaturas en distintas partes del mundo es posible determinar los limites superiores de temperatura para cada clase de organismo. A partir de esta informacin se ha llegado a la conclusin de que: 1. en general los organismos procariontes son capaces de crecer a temperaturas mas elevadas que los eucariontes. 2. los mastermofilos de todos los procariontes son algunas especies de Archea.

3. los organismos no fototrpicos son capaces de crecer a temperaturas mas elevadas que las formas fototrpicas. Crecimiento microbiano a pH alto y a pH bajo La acidez o alcalinidad de una solucion se expresa por su pp. en una escala en que la neutralidad es pH. 7. los valores de pH por debajo de 7 son cidos y os mayores de 7 son alcalinos. pH. y crecimiento microbiano Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento y normalmente posee un pH optimo bien definido..la mayora crece en un margen de pH de 2- 3 unidades. La mayoria de los amientes naturales tien un valor de pH entre 5 y 9 y los microorganismos con pH obtimo de esten orden son los mas comunes. Los organismos que crecen mejor a bajo pH constituyen un tipo de extremofilosllamdosacilofilos. El grupo de los hongos son masacidofilos que las bacterias, muchos hongos crcen en forma obtima a pH 5 o inferior e incluso algunos crecen bien a pH 2. Algunas bacterias son acidofilas. De hecho algunas bacterias son acidofilas estrictas incapaces de crecer a pH neutro. Entre las bacterias acidofilas estrictas se encuentran varias especies de Thiobacillus algunos generos de Archea como Sulfolobus, Thermoplasma y Ferroplasma. El factor ctrico mas importante para el carcter acidofilo es la estabilidad de la membrana citoplasmtica. Cuando el pH es neutro la membrana citoplasmtica de las bacterias muy acidofilas se disuelve y las celulas se lisan lo que sugiere que para que la membrana citopliasmatica sea estable se requiern altas concentraciones de iones hidrgeno. Unos cuantos extremofilos presentan un pH obtimo de crecimiento muy elevado a veces tan alto como pH 10 se denominan alcalofilos. Los microorganismos

alcalofilos se encuentran por lo general en hbitat muy bsicos como lagos sodicos y suelos muy carbonatados. Algunos microorganismos alcaloficos extremos son tambienhalofilos y la mayor parte de estos pertenen al dominio Archea. Algunos alcaloficos tienen aplicacin industrial porque producen enzimas hidroliticas como proteasas y lipasas que funcionan bien a pH alcalino y se usan como aditivos de los detergentes domesticos. pH intracelular El pH intracelular debe permanecer proximo a la neutralidad para evitar la destruccin de las macromoleculascellulares que son sensibles al acido o al alcali. En los acidofilicos o alcolofilicos extremos el pH intracelular puede variar algunas unidades respecto a la neutralidad, pero en la mayoria de los microorganismos cuyo pH optimo para el crecimiento esta entre 6 y 8 (neutrofilios), el citoplasma o permanece neutro o muy prximo a la neutralidad. En el acidofilo el pH intracelular es 4.6 y en los alcalofilos extremos se ha logrado medir un pH intracelular de hasta 9.5. Tampones Se aaden con frecuencia a los medios de cultivo microbianos sustancias amortiguadoras denominas tampones a fin de mantener el pH relativamente constante, para valores de pH prximos a la neutralidad (pH 6- 7.5). Efectos osmticos sobre el crecimiento microbiano La disponibilidad del agua se expresa en teminosfisicos como la actividad del agua. La actividad del agua abreviadamente awes el cociente entre la presion del vapor de aire en equilibrio con una sustancia o solucion y la presion de vapor de agua

pura a la misma temperatura. Los valores de awvarian entre 0y 1 .la actividad de agua de terrenos agrcolas oscila generalmente entre 0.90 y 1. El agua difunde desde una region con alta concentracin de agua hasta una region con menor concentracin de agua por el proceso denomina osmosis. En la mayoria de los dos casos el citoplasma de una celula tiene euna concentracin de soljutos mayor que el medio por lo que el agua tiende a entrar dentro de la celula dicindose entonces que existe un balence de positivo. Cuando una celulaesta en un medio de baja actividad de agua, existe una tendencia de agua a salir de la celula. En la naturaleza los efectos osmoticostieneinteres principalmente en habitat con altas concentraciones de sales. El agua de mar contiene un 3% de NaCl ademas de pequeas cantidades de otros minerales y elementos. Los microorganismos marinos generalmente tienen una dependencia especifica del ion sodio ademas de tener un crecimiento optimo al valor de actividad de agua propio del agua de mar, tales microorganismos se llaman halofilos. El crecimiento de los halofilos requiere almenos de algo de NaCl, pero el optimo varia con el organismo; asi se usan los terminoshalofilos discretos y halofilos moderados para describir a los halofilos con requerimientos bajos (1.6%) y moderados (6- 15%) de NaCl respectivamente. Los organismos halotolerantes pueden soportar alguna reduccin en el valor aw del medio pero generalmente crecen mejor en ausencia de solutos aadidos. Los organismos capaces de crecer en ambientes muy salinos se llaman halofilicos extremos y segn las especies requieren 15 30% de NaCl para su crecimiento optimo. Los organismos capaces de crecer en ambientes con alta concentracin de azucares se denominas osmofilos y aquellos capaces de crecer en ambientes muy secos se llaman xerfilos. Clase de microorganismos en relacin al oxigeno

Los microorganismos son muy variados en cuanto a la necesidad y tolerancia del oxigeno, se puede dividir en varios grupos dependiendo del efecto del oxigeno. Los aerobios son especies capaces de crecer a tensiones de oxigeno normales (el 21% del aire es O2) y muchos incluso pueden tolerar concentraciones mas elevadas de oxigeno. Los microaerofilos por el contrario son aerobios que pueden usar el O2 solo cuando esta presente a niveles mas bajos que en el aire, normalmente a causa de su limitada capacidad para respirar o porque contiene alguna molcula sensible al oxigeno. Muchos aerobios son facultativos lo que significa que en condiciones nutritivas y de cultivo aporopiadas pueden crecer tanto en condicines aerbicas como anaerbicas. Algunos microorganismos no pueden respirar O2; tales organismos se llaman anaerobios. Existen dos clases de anaerobios: Las anaerobios aerotolerantes, que toleran el oxigeno y crecen en su presencia aunque no pueden usarlo. Los anaerobios estrictos; que son inhibidos o incluso mueren en presencia del oxigeno. Puede deberse que son incapaces de eliminar algunos productos txicos que se originan en el metabolismo del oxigeno. La anaerobiosis estricta ocurre en tres clases de microorganismos: una amplia variedad de procariotas, unos cuantos hongos y unos cuantos protozoos. BIBLIOGRAFA Brock, Biologa de los microorganismos, Pearson Prentice Hall, Mxico 2004, 151 165 pp.

El agar MacConkey II es una medio selectivo y diferencial para la deteccin de organismos coliformes y patgenos entricos. Actualmente existen una gran cantidad de medios diseados para el aislamiento, cultivo e identificain de bacterias entricas. El artculo base sobre el agar MacConkey, uno de los primeros que se desarrollaron, fue publicado en 1905 y contena una descripcin detallada de su composicin y de los diferentes patrones de crecimiento obtenidos. Su composicin se ha modificado en numerosas ocasiones Se parti de la idea de que las sales Biliares precipitan cidos y que ciertos microorganismos entricos fermentan la Lactosa mientras que otros no lo hacen. La frmula del agar MacConkey II es de 1983 y se dise especialmente para mejorar su capacidad de inhibir el "swarming" de Proteusspp y para alcanzar una definitiva diferenciacin entre fermentadores y no fermentadores de la Lactosa. Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentracin de sales Biliares, que inhiben el crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es baja en relacin con otros medios similares. Se incluye tambin cristal violeta para inhibir el crecimiento de las bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y enterococos. La diferenciacin de organismos entricos se lleva a cabo con la combinacin de Lactosa con el indicador Rojo neutro.Se producen colonias rosas a rojas si el aislado es capaz de fermentar la Lactosa y colonias sin color en caso contario. LECTURA:

colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentacin de la Lactosa). Salmonella, Shigella, Pseudomonas colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. E. coli (rosa/roja), E. aerogenes (rosa y mucosa)

formulacin (segn BectonDickinson): Digerido pancretico de gelatina Digerido pancretico de caseina Digerido pptico de tejido animal Cloruro Sdico Agar Lactosa Sales biliares Rojo neutro Cristal violeta 17.0 g 1.5 g 1.5 g 5.0 g 13.5 g 10.0 g 1.5 g 0.03 g 0.001 g

http://www.danival.org/600%20microbio/6000notasmicro/medioscult/medios_mc.html

FILTRACIN: Este procedimiento es aplicable a la esterilizacin de lquidos y gases, especialmente los primeros. Cuando el lquido a filtrar no puede resistir, sin descomponerse , la accin del calor, se aplica la tcnica de filtracin, la que puede efectuarse mediante presin o aspiracin. Se basa en el pasaje de lquidos a travs de sustancias porosas que detienen a los microbios. Los antiguos filtros se fabricaban en forma de bujas que son cilindros huecos abiertos por una extremidad y cerrados por otra, de paredes de espesor variable. La filtracin se reconoci como tcnica de esterilizacin a partir de las observaciones de Koch en 1893, con la epidemia de clera y la presencia del vibrin en el agua. Esta observacin fue ilustrada en la epidemia Hamburgo-Altona en 1892. El agua del ro Elba, que contena Vibrio comma pasaba a las caeras de agua de Hamburgo. Solo aparecieron unos pocos casos de clera en el suburbio de Altona, donde el agua del Elba era filtrada por arenas (ntese el plural, refirindose tal vez a varios grados de arena), antes de su distribucin. Los filtros de porcelana se llaman "de Chamberland" y los de tierras infusorias calcinadas se denominan "Berkefield" En la actualidad se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que se utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin

segn el dimetro de poro que se utilice. La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas. Existen tres tipos bsicos de filtros: a-Filtros profundos o Filtros de profundidad: Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz. b- Membranas filtrantes: Tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao de la partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriza del filtro debido a efectos electrostticos. La firma Millipore ha desarrollado membranas de 0,45 Q y 14 cm de dimetro, con un soporte de papel siliconado para su proteccin debido a la fragilidad de la misma, la ue debe ser monada en un soporte estril y que permita el ingreso del lquido a esterilizar a presin. c- Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro.
http://www.monografias.com/trabajos24/esterilizacion-laboratorio/esterilizacionlaboratorio.shtml