cidos Nucleicos

Bioqumica - Reproduccin Biolog.

Elaborado por: Departamento Ciencias Fisiolgicas. Revisado por: Lena Wu Rivas Jos A. Tavrez R. Mayo 2004. Santiago, Rep. Dominicana rea Ciencias Fisiolgicas. Departamento de Medicina. PUCMM

CIDOS NUCLEICOS. A. Introduccin Estructura Primaria. En todas las clulas vivas hay cidos nucleicos; en su mayora estn constituyendo las nucleoprotenas, complejos formados por protenas bsicas (protaminas e histonas) y cidos nucleicos. Desde que Miescher aislara por vez primera una nucleoprotena, en 1869, se han puesto a prueba numerosas tcnicas para separar los cidos nucleicos de las protenas a las que estn unidas. Se sabe que no todos los cidos nucleicos son iguales; en los tejidos constituidos por clulas provistas de grandes ncleos, como el Timo, predomina un tipo de cido nucleico, llamado antes cido timonucleico; en otras clulas, que tienen ncleos diminutos, como las levaduras, predomina un tipo distinto: cido nucleico de levadura. Estos dos tipos de cidos nucleicos se denominan hoy, atendiendo a su composicin qumica, cido desoxirribonucleico (ADN) y ribonucleico (ARN) respectivamente. El ADN est fundamentalmente compuesto de fosfato, las bases pricas: adenina y guanina, las bases pirimdicas: uracilo; en lugar de la timina y el azcar 2-desoxi-dribosa. El ARN difiere del ADN por contener la base pirimdicas uracilo en lugar de la timina y el azcar 2-desoxi-d-ribosa. Los datos que hoy poseemos ponen de manifiesto la existencia de una frmula qumica bsica, comn a ambos tipos de cidos nucleicos y consistente en una cadena o esqueleto constituido por grupos alternados de fosfato de azcar furanosa unidos por enlaces regulares 35fosfodiester. Las bases pricas o pirimdicas se une a este esqueleto o cadena de azcar fosfato a travs de enlaces Beta N glicsilo en la posicin 1de la ribosa o de la desoxirribosa. A cada sub-unidad estructural, formada por una base nitrogenada y un azcar, se le denomina nuclesido. A estos que contienen un fosfato en las posiciones 2, 3 5 se les llama nucletidos (el nmero seguido del signo () indica la posicin en la base. A los compuestos formados por asociacin de dos o ms nucletidos, constituyendo pequeas molculas, se les denomina oligonucletidos. Estructura Secundaria. Los diversos estudios fisioqumicos del ADN en solucin acuosa han demostrado que se trata de un polmero del elevado peso molecular (5 x 10 elevado a la sexta potencia) y que ofrece una configuracin mas bien rgida y distendida. Entra las consecuencias de su elevado peso molecular de la rigidez de sus molculas destaca la elevada viscosidad de las soluciones acuosas de ADN. Solucin con 10 4 g/ml de ADN, es dos veces ms viscosa que el agua. Otra consecuencia de las citadas propiedades de la

molcula de ADN es la gran finalidad con que las fuerzas de friccin (agitacin a gran velocidad, paso a travs de una pipeta o jeringa) reducen su peso molecular por rotura de su cadena. Es prcticamente imposible obtener a partir de material biolgico ADN sin que tenga cierto grado de friccin, por lo que es muy probable que los pesos moleculares del ADN aislado ( 5 -10 a la sexta potencia) tengan poco que ver con el tamao de la molcula del ADN en Vitro. El ADN fibroso aislado tiene un modelo de difraccin de rayos X muy neto, indicio experimental directo de una estructura secundaria muy regular. Watson y Crack propusieron en 1953 una estructura secundaria del ADN, que dedujeron de stos modelos de difraccin de rayos X, y que estaban de acuerdo con las observaciones de Chargaff (4), mostrando que ciertos pares de base de ADN, se presentan en cantidades equimoleculares. Esta estructura de Watson y Crack est constituida por dos cadenas de ADN que se enrollan helicoidalmente en torno a un eje central comn, originando una molcula de cadena doble y de unos 20 Amgstron de dimetro. Las cadenas de azcarfosfato estn situadas en la parte externa de estas hlices orientadas con direccin de enrollamiento a la derecha; las bases pricas y pirimdicas se encuentran enlazadas por puentes de hidrgeno, en la parte interna de las citadas hlices, con los planos de sus anillos orientados perpendicularmente al eje central. Slo se tolera el apareamiento de bases entre la adenina y la timina o entre la guanina y citosina. Nucleoprotenas. Como se dijo anteriormente, los cidos nucleicos se encuentran conjugados con protenas. Las nucleoprotenas pueden degradarse el ADN y ARN en sus componentes. B. Objetivos 1. Estudiar los cidos nucleicos: clasificacin, diferencias estructurales y funcionales, localizacin y sus componentes. 2. Analizar la importancia de la homogenizacin de las levaduras, pruebas de Bial, Biuret y de identificacin de fosfatos y bases nitrogenadas en el reconocimiento de los componentes que formas los cidos nucleicos.

C. Procedimiento 1. Suspenda 15 grs de levadura en 125 ml de NaOH 0.04 M y homogenice con licuador por 5 minutos. Transfiera el contenido a un matraz Erlemeyer y caliente en un bao de Mara por 20 minutos. Luego debe centrifugar por 3 minutos y tomar el sobrenadante el cual llevar a un beaker (250ml) donde le agregarn gotas de cido actico glacial hasta que el medio este cido.

2. Tome la muestra y agregue 100mL de una solucin de HCl/Etanol 95% (1:99). Proceda a centrifugar por 3 minutos. Tome precipitado y lave con Etanol 95%. Centrifugue nuevamente, tomando luego el precipitado. Tome una muestra del precipitado y haga la prueba de Biuret.

3. A cada tubo de ensayo con el precipitado restante de la muestra agregue 3mL de H2SO4 3N y lleve a bao de mara durante 3 minutos. Hecho esto realice las siguientes pruebas: A. Identificacin de la Ribosa. Tome 4 tubos de ensayo y agregue lo siguiente en cada uno: TUBOS 1 2 3 4 SUSTRATO 1mL H2O destilada 1mL Ribosa 1mg/mL 1mL Ribosa 0.1mg/mL 1mL Precipitado REACTIVO DE BIAL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL HCl Concentrado 2.5 mL 2.5 mL 2.5 mL 2.5 mL

Lleve al calor por 5 minutos o hasta que observe un cambio de color El reactivo de Bial est compuesto por iones frricos, etanol y orcinol. Consiste en la formacin de un producto de color azul entre el furfural y el orcinol en medio clorhdrico. Es especfico de pentosas. B. Identificacin Base Nitrogenada. Agregue gotas de Hidrxido de amonio (NH4OH) concentrado hasta obtener un medio bsico y algunas gotas de Nitrato de Plata 0.1 M a una pequea cantidad del precipitado obtenido que ha sido colocado en un tubo de ensayo. Observe. C. Identificacin de Fosfatos. Agregue un poco del precipitado en un tubo de ensayo y aada Hidrxido de Amonio (NH4OH) concentrado hasta obtener un medio bsico, acidifique con algunas gotas de HNO3 y agregue Molibdato de Amonio (1mL). Observe.