BIOTECNOLOGA PRACTICAS DE INMUNOLOGA

PRCTICA NO. 1 ANATOMIA DEL SISTEMA INMUNOLOGICO INTRODUCCIN Sistema inmunolgico. Todas las expresiones de la respuesta inmunolgica dependen de la existencia y funcin del sistema inmunolgico. Este sistema incluye a los rganos linfoides, al tejido linfoide disperso y a los elementos de la circulacin sangunea y linftica. rganos linfoides. En los mamferos, los rganos linfoides estn representados por el timo, la mdula sea, el bazo, las amgdalas, los ganglios linfticos, tambin llamados linfonodos, el apndice ileocecal y las placas de Peyer. En las aves existe un rgano adicional llamado "bolsa de Fabricio". Los rganos linfoides se clasifican en dos grandes grupos: los primarios o centrales (mdula sea, timo y bolsa de Fabricio), y los secundarios o perifricos (bazo, amgdalas, ganglios linfticos, apndice ileocecal, y las placas de Peyer). Existe adems tejido linfoide que no se encuentra limitado por una cpsula de tejido conectivo, es el tejido linfoide disperso que se encuentra asociado a las mucosas (MALT), principalmente en la regin subepitelial. En el tejido linfoide encapsulado y en menor grado en el disperso, las clulas linfoides se encuentran "contenidas" por el tejido de sostn formado por las clulas y fibras reticulares. En los rganos linfoides primarios o centrales, las clulas del tejido linfoide terminan su proceso de diferenciacin y/o maduracin que las hace inmunolgicamente competentes. En los rganos linfoides secundarios o perifricos, las clulas del tejido linfoide hacen

contacto con el antgeno, proliferan en respuesta al estmulo antignico, y producen los efectores solubles de la respuesta inmune celular (citocinas) y de la respuesta inmune humoral (anticuerpos). Clulas del sistema inmunolgico. Todas las clulas del sistema inmunolgico se desarrollan a partir de clulas madre pluripotenciales presentes en mdula sea. La diferenciacin de los glbulos blancos o leucocitos es a travs de dos vas principales: la lnea linfoide que produce linfocitos T, lifocitos B y clulas NK (asesinas naturales o natural killer), y la lnea mieloide que da lugar a los leucocitos polimorfonucleares (PMN) neutrfilos, basfilos y eosinfilos, clulas cebadas, monocitos y rnacrfagos. Existe una poblacin heterognea de leucocitos que tienen un papel fundamental en la induccin de una respuesta inmune, denominada de manera general como clulas presentadoras de antgeno, en la que se encuentran las clulas de Langherhans, clulas celadas, clulas interdigitantes, clulas dendrticas, etc. Las clulas presentadoras de antgeno se derivan de mdula sea, muy probablemente de las mismas clulas pluripotenciales que las clulas linfoides y mieloides, aunque no se ha definido con precisin cul es su clula progenitora. Linfocitos. Aunque morfolgicamente todos los linfocitos son iguales, en realidad, estas clulas constituyen una poblacin heterogneo. Para empezar, existen dos tipos fundamentales de linfocitos: los linfocitos T, cuya diferenciacin y maduracin se completa en el timo, y los linfocitos B, que terminan su diferenciacin y maduracin en la mdula sea (o en la bolsa de Fabricio en las aves). De los linfocitos T se distinguen dos subpoblaciones, los linfocitos T cooperadores (Th) y los linfocitos T citotxicos (Tc). Ms an, en la actualidad se reconocen al menos dos variedades de linfocitos T cooperadores, los linfocitos Th1 y los linfocitos Th2. Mientras que los primeros se consideran responsables de la respuesta inmune celular los segundos se involucran ms con la respuesta humoral. Los linfocitos Th2, a travs de los factores

solubles

que

producen,

llamadas

linfocinas,

estimulan

la

proliferacin de los linfocitos B, su transformacin en clulas plasmticas y su capacidad de sntesis de anticuerpos. OBJETIVO. Al finalizar el desarrollo de la prctica, el alumno deber ser capaz de localizar e identificar los rganos ms aparentes del sistema inmunolgico como: timo, ganglios linfticos (linfonodos), bazo, placas de Peyer y apndice ileocecal. Deber reconocer la estructura histolgica general de los rganos linfoides ms prominentes (timo, bazo, ganglios linfticos y placas de Peyer). Por ltimo, deber ser capaz de identificar y describir las clulas linfoides y mieloides que se encuentran en la circulacin sangunea. MATERIAL Y MTODOS Material por grupo Papel higinico. Microscopio ptico. Cloroformo. Solucin salina isotnica (SSF). Cortes histolgicos tejidos de timo, bazo, ganglio y placa de Peyer. Frotis sanguneo teido con sol Wrigth. Detergente Cloro Jabn de manos Material por equipo Rata joven (4 a 6 semanas). Equipo de diseccin: pinzas, bistur, aguja de diseccin y tijeras. Charola o tabla de diseccin. 10 Alfileres con cabeza de perla. 3 pipetas Pasteur con bulbo. Algodn.

Papel de estraza Una caja de Petri (100 x 15 mm). Franela Metodologa. Diseccin del animal de experimentacin Se recomienda manejar a los animales extremando las precauciones para evitar mordeduras. 1. Sacrificar los animales con cloroformo, utilizando un frasco con tapa de cierre hermtico preparado para este efecto. 2. Colocar los animales boca arriba sobre la charola de diseccin y fijarlos a la misma utilizando alfileres o agujas. 3. Empapar el pelaje del animal con una torunda con alcohol. 4. Iniciar procedimiento de necropsia, realizando inspeccin externa, realizar la incisin primaria haciendo una incisin longitudinal en el animal, desde el cuello hasta la cola, afectando solamente la piel y evitando cortar las capas ms profundas (usar pinzas, tijeras y bistur). 5. Separar por diseccin roma la piel del cuerpo del animal, utilizando las pinzas y la parte roma de la tijera. Fijar la piel "suelta" a la charola de diseccin utilizando alfileres o agujas. Localizar los ganglios linfticos cervicales, los inguinales y los axilares. 6. Los ganglios linfticos inguinales se pueden notar dentro del depsito de grasa en la piel correspondiente a la regin abdominal adheridos a la piel, protegidos por la capa de grasa subcutnea, se observan como protuberancias discretas. 7. Levantar la piel del cuello para descubrir los ganglios cervicales; stos son los ganglios de mayor tamao y se encuentran constituyendo un "cinturn ganglionar" alrededor del cuello. Su forma ovoide permite distinguirlos de las glndulas submandibulares localizadas tambin en la parte anterior del cuello. 8. Seguir las indicaciones del instructor y proceder a disecar los ganglios linfticos cervicales, axilares e inguinales utilizando pinzas

y tijeras finas. Tener cuidado de no destruir los ganglios y colocarlos en una caja de Petri que contenga SSF. 9. Realizar la incisin secundaria cortando en el plano longitudinal la membrana que recubre la cavidad peritoneal y descubrir la cavidad torcica cortando la pared anterior de la misma (incluyendo las costillas), cuidar de no daar los rganos internos. 10. Observar los rganos protegidos por la cavidad torcica, localizar la posicin del timo (ste se encuentra en el rnediastino, descansando sobre la parte apical del corazn en la regin anterior de los grandes vasos) y removerlo sin lesionarlo. Depositarlo en la caja de Petri. 11. Localizar el bazo en la cavidad abdominal, por encima de la curvatura mayor del estmago, proceder a su extirpacin separando el rgano cuidadosamente del tejido conectivo que lo fija al estmago y al intestino delgado. Depositarlo en la caja de Petri. 12. Localizar la regin duodenal del intestino delgado (aquella parte que lo conecta al estmago) y, con cuidado, extender el tubo intestinal cortando la fina membrana conectiva que lo mantiene en posicin. Identificar las placas de Peyer distribuidas a intervalos en esta regin intestinal Localizar la parte donde el intestino delgado se une al intestino grueso e identificar el apndice ileocecal. Dada la composicin del contenido intestinal no se considera conveniente extirpar estos rganos linfoides. 13. Buscar los ganglios linfticos mesentricos que se encuentran azarosamente distribuidos en las membranas que mantienen unidas las asas intestinales. 14.- Obtener una gota de sangre sin coagular y extenderla sobre un portaobjetos para realizar un frotis sanguneo, teir con sol. de Wrigth durante 1 minuto, enjuagar con agua corriente. 15. Analizar y discutir con su instructor las caractersticas histolgicas generales del timo, de un ganglio linftico, de las placas de Peyer, del bazo y del frotis sanguneo observando en el microscopio compuesto preparaciones de estos tejidos.

RESULTADOS Anotar las caractersticas morfolgicas, de consistencia y de color de los ganglios linfticos, del timo, del bazo y de las placas de Peyer. Esquematizar la histologa general de los ganglios linfticos, del bazo, de las placas de Peyer,,y del timo. Discutir sus observaciones con su instructor. Esquematizar las clulas observadas en las extensiones de sangre identificando los diferentes tipos celulares encontrados: linfocitos, rnonocitos y leucocitos polimorfonucleares (neutrfilos, basfilos y eosinfilos). CUESTIONARIO.

1.- Cules son los rganos linfoides? 2.- Cules son y cul es la funcin de los rganos linfoides primarios? 3.- Cules son y cul es la funcin de los rganos linfoides secundarios? 4.- Qu es y cul es la funcin del MALT? 5.- Qu es y cul es la funcin del GALT?