Universidade Federal da Bahia Escola de Medicina Veterinria Programa de Ps-Graduao em Cincia Animal nos Trpicos

USO DO MEDICAMENTO HOMEOPTICO SULPHUR NO CONTROLE DO Amyloodinium sp. EM BIJUPIR (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766)

Bartira Guerra Santos

Salvador 2011 BARTIRA GUERRA SANTOS

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USO DO MEDICAMENTO HOMEOPTICO SULPHUR NO CONTROLE DO Amyloodinium sp. Brown (1931) em bijupir (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766)

Dissertao apresentada Escola de Medicina Veterinria da Universidade Federal da Bahia, como requisito para a obteno do ttulo de Mestre em Cincia Animal nos Trpicos, na rea de Sade Animal.

Orientador: Prof Dr. Ricardo Castelo Branco Albinati

Co-Orientadora: Prof Dr Fernanda Washington de Mendona Lima.

Salvador 2011

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Sistema de Bibliotecas da UFBA Santos, Bartira Guerra. Uso do medicamento homeoptico Sulphur no controle do Amyloodinium sp Brown (1931) em bijupir (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766) / Bartira Guerra Santos. - 2011. 101 f. : il. Orientador: Prof. Dr. Ricardo Castelo Branco Albinati. Co-Orientadora: Prof. Dr. Fernanda Washington de Mendona Lima. Dissertao (mestrado) - Universidade Federal da Bahia, Escola de Medicina Veterinria, Salvador, 2011.

1. Peixe - Parasito. 2. Amyloodiniose. 3. Parasito. 4. Aqicultura. 5. Cobia (Peixe). 6. Homeopatia. I. Albinati, Ricardo Castelo Branco. II. Lima, Fernanda Washington de Mendona. III. Universidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinria. IV. Ttulo.

CDD - 597 CDU - 597

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A Dudu e Boni.

AGRADECIMENTOS

Os agradecimentos constituem-se como um momento de reflexo muito especial que, a despeito de qualquer vestgio de pieguice, permitem que se faa reverncia s atitudes das pessoas que nos cercam ao longo da escritura de uma dissertao. E eu, como todos que chegam concluso de um experimento do porte do que foi empreendido ao longo desses dois anos, tive muito com quem contar. Por conta dos momentos em que estivemos juntos, muito mais que em minha casa, por determinado perodo, tenho muito a agradecer ao grupo LASOA, especialmente Tati Maslowa pela ateno e o trabalho prestado a esse estudo em todo seu curso, e amizade que pode ser firmada nesse perodo, que incluiu debates em algumas mesas de bar, na companhia de Deni Soledade, que tambm participou de vrias etapas desse projeto e principalmente pelo seu papel na assessoria social. A dedicao incondicional, em todas as fases do projeto, de Sil Medeiros foi fundamental para a pesquisa (teve at choro!), valeu Sil. Jaci Carvalho, agradeo pela sua contribuio durante o experimento e pelas sugestes feitas para o melhor andamento da pesquisa. Al Danile deu sangue na contagem das clulas sanguneas. Tai Almeida trabalhou duro na fase experimental e anlise, Rafa ajudou durante o experimento. Com uma turma dessa no foi difcil acreditar que daria certo. Aos professores, agradeo primeiro ao Prof. Dr. Albinati, para alm da orientao, agradeo pela amizade, pela confiana e pela iniciao naquela que, segundo Hahnemann, a nica e maior forma de curar. Profa. Dra. Fernanda Lima, que foi a primeira pessoa a dizer que eu deveria fazer mestrado, que tinha alguma coisa de mestre e tal... e vejam s, eu acreditei!! Ao Prof. Dr. Eduardo Moreira, sou imensamente grata pelo entusiasmo. No dia em que encontramos o parasito, ele disse: Bartira, hoje ganhei meu dia. Saiba que ao longo desse perodo ganhou tambm o meu respeito e a minha admirao. professora Consulo Ayres pela colaborao para a realizao das anlises hematolgicas. Aos professores do Mestrado em Cincia Animal nos Trpicos UFBA e aos professores do Curso de Especializao em Homeopatia, Maria Amlia Soares da Cunha, Vicente Dias e Zacharias Farouk. A minha gratido estende-se ainda aos tcnicos Althemar e Eva do Laboratrio de Anatomia Patolgica pelo cuidadoso trabalho na confeco do material para anlise histopatolgica; Capes pelo incentivo pesquisa; Bahia Pesca pelo fornecimento dos peixes, especialmente a Tom Tosta e a Jernimo Filho, pela liberao dos mesmos.

Agradeo Cris Farias, pois seu peculiar olhar de guia, sempre perscrutador dos implcitos e explcitos de um texto, deu forma a esse trabalho. Por fim, quero agradecer ao Grupo Guerra, esse to grande e grandioso que no cabe em toda extenso desse trabalho. Vocs so mola mestra para os meus avanos.

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A mais alta e nica misso do mdico restabelecer a sade nos doentes, que o que se chama curar.

Samuel Hahnemann

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RESUMO
O confinamento dos peixes em altas densidades favorece o aparecimento de epizootias como consequncia do estresse fisiolgico que se reflete na sua homeostasia, ocasionando diminuio da capacidade de resposta imunolgica. As espcies de parasitos que atualmente so consideradas problemas para a sade dos peixes no ambiente marinho so em nmero reduzido, entretanto, considerando o aumento da atividade de cultivos em ambientes marinhos no mundo, esses parasitas despontam como responsveis por danos nos cultivos. Dentre os parasitos, est o Amyloodinium, um dinoflagelado, ectoparasito obrigatrio de peixe que se aloja, inicialmente, nas brnquias, mas, logo em seguida, se instala rapidamente por toda a superfcie do peixe. A amyloodiniose representa uma das principais restries ao desenvolvimento da aquicultura marinha e os tratamentos qumicos tm se mostrado insuficientes para o controle do Amyloodinium nas espcies afetadas. O sulfato de cobre o produto mais usado no controle do parasito. Contudo, essa substncia apresenta efeito fortemente adstringente sobre epitlio branquial alm de ser hepatotxico. um produto que agride o meio ambiente, requerendo muitos cuidados com sua aplicao e no existe, at o momento, conhecimento que garanta segurana quanto aos resultados e eficincia na reduo da infestao. A Homeopatia, concebida como um modelo teraputico baseado na similitude dos sintomas e nos medicamentos diludos, desponta como uma prtica no tratamento e preveno de doenas em peixes que atende aos requisitos de uma aquicultura sustentvel. Assim, constitui-se numa alternativa a ser avaliada no tratamento de animais aquticos, uma vez que tais medicamentos, por serem ultradiludos no causam danos aos peixes e nem ao meio ambiente. Assim, esta pesquisa tem o objetivo de avaliar o Sulphur no controle da amyloodiniose em bijupir, considerando sua eficcia em relao ao desempenho zootcnico, as alteraes parasitolgicas, aos parmetros hematolgicos e as alteraes histopatolgicas dos animais. No experimento 1 desse trabalho foram descritas as principais alteraes e os sintomas desencadeados pelo Amyloodinium, atravs das avaliaes da prevalncia e da intensidade mdia parasitrias, dos parmetros hematolgicos e histopatolgicos em juvenis de bijupir naturalmente infectados. No experimento 2 testou-se o efeito do medicamento Sulphur sobre o desempenho, o ndice hepato-somtico, a prevalncia e incidncia parasitrias, os parmetros hematolgicos e as alteraes histopatolgicas de juvenis de bijupir naturalmente infestados com Amyloodinium.

PALAVRAS-CHAVES: Amyloodiniose; Aquicultura; Cobia; Homeopatia; Parasito.

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ABSTRACT

The confinement of fish at higher densities encouraged the emergence of epidemics as a result of physiological stress that is reflected in its homeostasis, causing impairment of immune response. The parasite species that are currently considered problems for the health of fish in the marine environment are few in number, however, considering the increased activity of aquaculture in marine environments in the world, these parasites appear as responsible for damage to crops. Among the parasites, is the Amyloodinium, a dinoflagellate, obligatory ectoparasite of fish that lodges itself initially in the gills, but right then settles quickly across the surface of the fish. The amyloodiniose represents a major constraint on the development of marine aquaculture and chemical treatments have proven insufficient to control the Amyloodinium the affected species. Copper sulfate is the most used in the control of parasito.However, this substance has strong astringent effect on the gill epithelium in addition to being hepatotoxic. This a product is harmful to the environment, requiring much care with your application and there is still no the time, aware that ensures security for the outcome and efficiency in reducing the infestation. Homeopathy, conceived as a therapeutic model based on similarity of symptoms and medications diluted, emerges as a practice in the treatment and prevention of fish diseases that meets the requirements of sustainable aquaculture. Thus, it constitutes an alternative to be evaluated in the treatment of aquatic animals, such as medications, being ultradiluted do not cause damage to fish and not the environment. Thus, this research aims to evaluate the control of Sulphur in amyloodiniose bijupir, considering its effectiveness in relation to animal performance, changes parasitological, haematological parameters and histopathological changes of the animals. In experiment 1 of this work, were described the main changes and the symptoms triggered by Amyloodinium through assessments of the prevalence and mean intensity of parasitic diseases, haematological parameters and histopathology in juvenile bijupir naturally infected. In Experiment 2 tested the effect of the medication Sulphur on performance, the hepatosomatic index, prevalence and incidence of parasitic diseases, haematological parameters and histopathological changes in the juvenile bijupir naturally infested with Amyloodinium. KEYWORDS: Amyloodiniose; Aquaculture; Cobia; Homeopathy; Parasite.

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LISTA DE TABELAS

ARTIGO 1

Tabela 1. Intensidade mdia parasitaria valor mnimo e mximo e desvio padro do nmero de parasitos nas brnquias e no muco de bijupir.....................................................................57 Tabela 2. Valores de VG, Eritrcitos, VGM e PPT de juvenis de bijupir parasitados por Amyloodinium sp.......................................................................................................................58 Tabela 3. Resultados de leuccitos e trombcitos totais dos juvenis de bijupir parasitados com Amyloodinium...................................................................................................................59 Tabela 4. Valores mdios de alterao histopatolgica (VMA) e seu significado (entre parntese) para as leses em brnquias de juvenis de bijupirs coletados de unidade de aquicultura.................................................................................................................................61 ARTIGO 2 Tabela 1. Valores mdios e desvio-padro de salinidade, Oxignio dissolvido, pH, temperatura pela manh e tarde da gua de manuteno dos peixes parasitados, tratados com homeopatia ou sem....................................................................................................................81 Tabela 2. Sobrevivncia, biomassa final, peso mdio final, ganho de peso mdio e ganho de peso dirio dos juvenis de bijupir submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica.............................................................................................................................82 Tabela 3. Consumo alimentar mdio, converso alimentar aparente e ndice hepato-somtico dos juvenis de bijupir submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica..............................................................................................................................82 Tabela 4. Numero mdio de Amyllodinium sp nas brnquias e no muco tegumentar de juvenis de bijupirs submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com o numero inicial observado nos animais capturados para o estudo........................................................................................................................................83 Tabela 5. Prevalncia e intensidade parasitria mdia de juvenis de bijupirs submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com os valores observados nos animais capturados para o estudo....................................................................84 Tabela 6. Eritrcitos,VG, VGM, Hb, CHGM, PPT de juvenis de bijupir submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com os valores observados nos animais capturados para o estudo inicial.........................................................84 Tabela 7. Valores mdios de Leuccitos e trombcitos totais de juvenis de bijupirs submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com os valores observados nos animais capturados para o estudo inicial............................................85

Tabela 8. Valores VMA e seu significado (entre parnteses) para hiperplasia/hipertrofia, fuso, descolamento e ruptura de epitlio lamelar, necrose, dilatao, aneurisma, infiltrado, parasito desarranjo lamelar em brnquias de bijupirs do ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com os valores observados nos animais capturados para o estudo.....................................................................................................................................87 Tabela 9. ndices de Alterao Histopatolgica (IAH) de brnquias de juvenis de bijupirs submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com o observado nos animais capturados para o estudo......................................................................88

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LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Ciclo biolgico do Amyloodimium ocellatum. A = trofonte, B, C e D = tomontes, E = dinosporo. Figura adaptada de Ramos e Oliveira (2001)......................................................27

ARTIGO 1
Figura 1. Brnquias de jubenis de bijupir. Trofontes em exame a fresco observados em estereomicroscpio (2X)...........................................................................................................57 Figura 2. Seces de brnquias de bijupirs infestados com Amyloodinium. (A) hiperplasia e fuso de lamelas (1000X. HE); (B) hiperplasia e fuso focal disseminada (40X.HE); (C) fuso lamelar apical (1000X. HE); (D) descolamento do epitlio respiratrio (1000X. HE); (E) dilatao do seio venoso (1000X. HE); (F) aneurisma (40X. HE)............................................................................................................................................63 Figura 3. Seces de brnquias de bijupirs infestados com Amyloodinium. (G) congesto, dilatao do canal venoso, descolamento e ruptura do epitlio com hemorragia (1000X. HE); (H) rompimento do epitlio sem hemorragia (seta amarela) e infiltrado linfoctico (seta vermelha) (1000X.HE);(I) acmulo sanguneo interlamelar com desarranjo lamelar (40X.HE); (J) trofonte entre lamelas, hiperplasia e fuso com leve descolamento (1000X.HE); (K,L) trofontes atracadas a regio apical de lamelas hiperplsicas e fusionadas (1000X.HE)...............................................................................................................................64

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LISTA DE QUADROS

Quadro 1. Principais espcies de peixes suscetveis e regies de ocorrncia do Amyloodinium ocellatum...................................................................................................................................26 ARTIGO 1 Quadro 1. Pontuao e ocorrncia das alteraes nas brnquias, modificado de Schawiger et al (1997)....................................................................................................................................54 Quadro 2. Categorias de IAH baseada na severidade das leses e funcionamento do rgo (POLEKSIC; MITROVIC-TUTUNDZIC,1994) ....................................................................55 Quadro 3. Classificao das alteraes histopatolgicas das brnquias quanto ao tipo das leses e dos estgios em que se inserem de acordo com Poleksic e Mitrovic-Tutundic (1994)........................................................................................................................................56 ARTIGO 2 Quadro1. Pontuao e ocorrncia das alteraes nas brnquias, modificado de Schawiger et al (1997)....................................................................................................................................79 Quadro 2. Categorias de IAH baseada na severidade das leses e funcionamento do rgo (POLEKSIC; MITROVIC-TUTUNDZIC,1994).....................................................................80 Quadro 3. Classificao das alteraes histopatolgicas das brnquias quanto ao tipo das leses e dos estgios em que se inserem de acordo com Poleksic e Mitrovic-Tutundic (1994).......................................................................................................................................80

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LISTA DE ABREVIATURAS

ANVISA - Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria CAA converso alimentar aparente CHGM - concentrao de hemoglobina globular media COBEA - Colgio Brasileiro de Experimentao Animal cm - centmetro ELISA ensaio imunossorvente ligado enzima EMEV Escola de Medicina Veterinria FAO - Organizao das Naes Unidas para Agricultura e Alimentao FDA - Food and Drug Administration fL fentolitro GP- ganho de peso g-grama g/dL grama por decilitro Hb hemoglobina
HE hematoxilina-eosina

HLPs - protenas semelhantes a histonas

HOSPMEV Hospital de Medicina Veterinria IAH ndice de alterao histopatolgica IHS ndice hepato-somtico LABAP Laboratrio de Anatomia Patolgica

LASOA - Laboratrio de Sanidade de Organismos Aquticos mL/L mililitro por litro L - microlitro OPG - ovos por grama pH - potencial hidrogeninico SAEG Sistema de Anlises Estatsticas e Genticas UFBA Universidade Federal da Bahia VG - volume globular VGM - volume globular mdio VMA valor mdio de alterao

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SUMRIO

RESUMO ABSTRACT LISTA DE TABELAS LISTA DE FIGURAS LISTA DE QUADROS LISTA DE ABREVIATURAS 1 INTRODUO 2 REVISO DE LITERATURA
2.1 Aquicultura 2.1.1 Bijupir Rachycentron canadum 2.2 Amyloodinium ocellatum 2.2.1 Principais hospedeiros e distribuio geogrfica 2.2.2 Ciclo biolgico 2.2.3 Transmisso 2.2.4 Sintomas 2.2.5 Patogenia 2.2.6 Resistncia imunolgica dos peixes ao Amyloodinium ocellatum 2.2.6.1 Imunidade inata 2.2.6.2 Imunidade adquirida 2.2.7 Diagnstico 2.2.8 Profilaxia e Tratamento

VII VIII IX
XI XII XIII 16 19 19 21 24 24 27 28 29 29 30 30 31 32 33 35 36 38 39 40 43 45 47

2.3 Homeopatia
2.4 Filosofia homeoptica 2.5 Cincia homeoptica 2.6 O medicamento homeoptico 2.7 Homeopatia veterinria 2.8 A homeopatia na aquicultura 2.9 A escolha do medicamento homeoptico

3 ARTIGOS CIENTFICOS

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3.1 Artigo 1: Descrio da amyloodiniose em bijupir (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766). 3.2 Artigo 2: O efeito do medicamento homeoptico Sulphur sobre o desempenho zootcnico, alteraes parasitolgicas, parmetros hematolgicos e histopatolgicos em juvenis de bijupir (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766) infestados naturalmente com Amyloodinium.

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71 93 94

4 CONSIDERAES FINAIS REFERNCIAS

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1 INTRODUO
A aquicultura, atividade amplamente desenvolvida no mundo, uma prtica agropecuria de produo em cativeiro de organismos com habitat predominantemente aqutico, tais como peixes, crustceos, moluscos e plantas aquticas. Segundo dados da FAO (2009), o crescimento da aquicultura tem ocorrido num ritmo mais acelerado que qualquer outro setor de produo de alimentos de origem animal. Parece provvel que a pesca tenha atingido seu potencial mximo de captura nos oceanos, tendendo para uma estabilizao da captura com ndices de crescimento de 1,2% ao ano. Em contrapartida, a aquicultura aumentou sua produo e atinge ndices mdios de crescimento de 8,8% ao ano (FAO, 2009), significando uma possibilidade eficiente para aumentar a oferta de pescado. Nessa perspectiva, a piscicultura marinha tem se desenvolvido muito ultimamente. Tsuzuki (2006) atribui tal fato sua importncia na produo de alimento, na atividade de repovoamento, na produo de isca viva e de peixes ornamentais e, principalmente, aos preos atrativos que seus produtos alcanam no mercado. A FAO (2005) apresenta a China no topo do ranking mundial entre os maiores produtores no ano de 2003 e destaca a Grcia, Espanha, Itlia, Frana, Japo, Egito e Coria como principais produtores de peixes marinhos. Entre as principais espcies cultivados a FAO elenca o salmo do Atlntico (Salmo salar), o peixe-rei (Chano chano), a truta arco-ris (Onchorynchus mykiss), o olhete japons (Seriola quinqueradiata), a tainha (Mugil cephalus) e o pargo europeu (Sparus aurata) como os mais produzidos. Segundo Brandini et al (2000), o potencial da piscicultura marinha brasileira imensurvel, contudo, essa atividade ainda incipientel, com tentativas de desenvolvimento muito pontuais. Pesquisas apontam vrias espcies detentoras de caractersticas importantes para o sucesso. Tsuzuki (2006) destaca o robalo-peva (Centropomus paralellus), o robaloflecha (Centropomus undecimalis), o linguado (Paralichthys orbignyanus), a garoupa (Epinephelus sp) e o olhete (Seriola lanlandi). Diversas espcies de peixes marinhos tm demonstrado condies para criao, em vrios pases ao redor do mundo, por suas caractersticas zootcnicas e em virtude da aceitao pelo mercado consumidor. Dentre as espcies mais cultivadas, destaca-se o bijupir ou cobia (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766). Para Benetti et al (2007) e Liao et al (2004), se trata de uma excelente espcie para o cultivo. Aceita bem o alimento artificial;

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apresenta baixa mortalidade e boa taxa de converso alimentar; proporciona excelente aproveitamento para o consumo humano; se adapta facilmente ao ambiente de cativeiro alm de tolerar variaes de qualidade da gua (KILDUFF et al, 2002; LIAO et al, 2004; BENETTI, 2007; HOLT et al, 2007). Pavanelli et al (2000) destacam a piscicultura no Brasil como importante atividade econmica e relaciona seu sucesso diretamente possibilidade de se cultivar o maior estoque possvel de peixes, no menor volume de gua disponvel. Por outro lado, advertem quanto aos riscos relativos ao aparecimento de doenas quando se promove a intensificao dos sistemas. O confinamento dos peixes em altas densidades de estocagem, peculiar ao modelo intensivo de criao, favorece o aparecimento de epizootias que em condies naturais teriam expresso mnima. Altas densidades populacionais provocam nos peixes estresse fisiolgico (estresse crnico) que se reflete na sua homeostasia, ocasionando diminuio da capacidade de resposta imunolgica, ficando susceptveis s infeces de variadas etiologias, destacandose entre elas as parasitias (PAVANELLI et al, 2008). As espcies de parasitos que atualmente so considerados problemas para a sade dos peixes no ambiente marinho so em nmero reduzido, entretanto, considerando o aumento da atividade de cultivos em ambientes marinhos no mundo, esses parasitas despontam, com grande potencial, como causadores de danos nos cultivos. Dentre esses parasitos, est o Amyloodinium, um dinoflagelado, ectoparasito obrigatrio de peixe, como se descrever a seguir, que tem provocado grandes perdas econmicas na piscicultura marinha ao redor do mundo, representando grande entrave ao desenvolvimento da aquicultura marinha (REED FRANCIS-FLOYD, 1994; EIRAS et al, 2006). Trata-se de parasito muito comum em populaes selvagens de ambientes marinhos. No primeiro momento da parasitose, o Amyloodinium invade as brnquias, mas, logo em seguida, se instala rapidamente por toda superfcie do peixe, dando-lhe uma aparncia aveludada (EIRAS, 2006). O controle de surtos de amyloodiniose representa uma das principais restries ao desenvolvimento da aquicultura marinha. No existe produto qumico teraputico registrado como parasiticida na Food and Drug Administration - FDA1 para peixes destinados ao consumo (SMITH; SCHWARZ, 2009). Os tratamentos qumicos tm se mostrado insuficientes para o controle do Amyloodinium nas espcies afetadas pelo parasito. O sulfato de cobre a forma mais usada
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Food and Drug Administration FDA o rgo governamental dos EUA responsvel pelo controle dos alimentos, suplementos alimentares, medicamentos, cosmticos, equipamentos mdicos, materiais biolgicos e produtos derivados do sangue humano.

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nos Estados Unidos (REED; FRANCIS-FLOYD, 1994). Contudo, essa substncia apresenta efeito fortemente adstringente no epitlio branquial e hepatotxico para os peixes (SCOTT, 2000). um produto txico ao meio ambiente, requerendo muitos cuidados com sua aplicao e no existe, at o momento, conhecimento que garanta segurana quanto aos resultados e eficincia na reduo da infestao (REED; FRANCIS-FLOYD, 1994). A grande dificuldade encontrada quando se pretende aplicar tratamento em peixes no Brasil, a escassez de estudos que atestem a eficcia e os mecanismos de ao atravs do quais as drogas utilizadas no controle s enfermidades atuam sobre as funes bioqumicas ou fisiolgicas dos animais (PAVANELLI et al 2008). A Homeopatia, concebida como um modelo teraputico baseado na similitude dos sintomas e nos medicamentos diludos, desponta como uma prtica no tratamento e preveno de doenas em peixes que atende aos requisitos de uma aquicultura sustentvel. Assim, constitui-se numa alternativa a ser avaliada no tratamento de animais aquticos, uma vez que tais medicamentos, por serem ultradiludos, no deixam resduos e, dessa forma, no causam danos aos peixes e nem ao meio ambiente. Diante de tais consideraes, sero expostos, ao longo deste trabalho, os resultados da investigao bibliogrfica e experimental cujo objetivo foi avaliar o Sulphur no controle da amyloodiniose em bijupir, considerando sua eficcia em relao ao desempenho zootcnico, alteraes parasitolgicas, histopatolgicas e parmetros hematolgicos dos animais.

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2 REVISO DE LITERATURA
2.1 Aquicultura

A aquicultura uma atividade agropecuria de produo em cativeiro de organismos com habitat predominantemente aqutico, como peixes, crustceos, moluscos e plantas aquticas. Apesar de milenar, trata-se de uma prtica atividade economicamente emergente (BURSZTYN, 2000), e se baseia nos pilares da produo lucrativa, da preservao ambiental e do desenvolvimento social (VALENTI, 2000). Segundo a FAO (2009), o crescimento da aquicultura se faz em um ritmo mais acelerado que qualquer outro setor de produo de alimentos de origem animal. No ano de 2008, das 143 milhes de toneladas de pescado produzidas no mundo, 115 milhes foram destinadas ao consumo humano e os produtos gerados pela aquicultura contriburam com 46% para esse fim. Ao avaliar a situao da pesca mundial, a FAO (2009) - Organizao das Naes Unidas para Agricultura e Alimentao - considera provvel que a pesca tenha atingido seu potencial mximo de captura nos oceanos, tendendo para uma estabilizao da captura em cerca de 90 milhes de toneladas, com ndices de crescimento de 1,2% ao ano. Em contrapartida, a aquicultura aumentou sua produo de 35,5 milhes de toneladas em 2000 para 47 milhes em 2007, crescendo a uma taxa mdia de 8,8% ao ano (FAO, 2009). Essa tendncia o reflexo da diminuio dos recursos pesqueiros marinhos devido pesca predatria, deteriorao de reas essenciais ao desenvolvimento das espcies e, principalmente, presso de captura exercida sobre os estoques (AMARAL; JABLONSKI, 2005). Segundo Dias Neto (2003), o excessivo esforo de pesca aplicado sobre a maioria dos recursos que compem a produo de pescado o fator responsvel pela intensa crise por que passa a pesca marinha brasileira. Assim, a aquicultura significa uma possibilidade eficiente para aumentar a oferta de pescado no mercado mundial. Nessa perspectiva, a piscicultura marinha tem se desenvolvido muito ultimamente. Tsuzuki (2006) atribui tal fato sua importncia na produo de alimento, na atividade de repovoamento, na produo de isca viva e de peixes ornamentais e, principalmente, aos preos atrativos que seus produtos alcanam no mercado. A atividade representa uma alternativa capaz de gerar emprego e renda; incrementar de forma sustentvel a produtividade das reas costeiras; promover a fixao dos produtores em sua comunidade de origem;

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estimular a cadeia produtiva do pescado; diminuir a presso extrativista sobre os recursos explotados (BRANDINI et al, 2000). A piscicultura marinha j uma atividade consolidada, gerando emprego e renda a pequenos, mdios e grandes produtores em diversos pases, como Indonsia, Filipinas, Taiwan, dentre outros (SILVA, 2006). Dados da FAO (2005) apresentam a China no topo do ranking mundial entre os maiores produtores no ano de 2003. Destaca pases como Grcia, Espanha, Itlia, Frana, Japo, Egito e Coria como principais produtores de peixes marinhos. Entre as principais espcies cultivados a FAO elenca, entre os didromos, o salmo do Atlntico (Salmo salar), o peixe-rei (Chano chano) e a truta arco-ris (Onchorynchus mykiss) como sendo os mais cultivados; enquanto que, entre os peixes tipicamente marinhos, destaca o olhete japons (Seriola quinqueradiata) a tainha (Mugil cephalus) e o pargo europeu (Sparus aurata) como os mais produzidos. Para Brandini et al (2000), o potencial da piscicultura marinha brasileira imensurvel frente s condies climticas e hidrogrficas adequadas em grandes extenses do litoral, alm da elevada diversidade de peixes de interesse comercial. Contudo, essa atividade ainda incipiente no Brasil, com tentativas de desenvolvimento muito pontuais. Pesquisas apontam vrias espcies detentoras de caractersticas importantes para o sucesso do cultivo. Tsuzuki (2006) destaca o robalo-peva (Centropomus paralellus), o robalo-flecha (Centropomus undecimalis), o linguado (Paralichthys orbignyanus), a garoupa (Epinephelus sp) e o olhete (Seriola lanlandi). Alm desses recursos, Brandini et al (2000) apontam a produo de peixes ornamentais marinhos como um recurso importante a ser explorado da piscicultura marinha para atender a demanda do mercado da aquariofilia. Vale ressaltar que, embora nem todos os aspectos tecnolgicos da piscicultura marinha estejam to avanados quanto aos da piscicultura de gua doce, essa atividade considerada bastante promissora. Aspectos relativos reproduo e larvicultura ainda se constituem em principais variveis limitantes ao seu desenvolvimento (TSUZUKI, 2006). Ainda so necessrias pesquisas com vistas a melhorar as tcnicas de produo intensiva em cativeiro. Na avaliao de Benetti (1993), alm da carncia dessas pesquisas, o desinteresse por parte do setor privado so fatores responsveis pela falta de produo comercial de peixes marinhos no Brasil. Conforme literatura corrente, dentre as diversas espcies de peixes nativos da costa do Brasil, o bijupir, vem se destacando nos ltimos anos como uma espcie alternativa

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aquicultura mundial. Isso se justifica por sua elevada taxa de crescimento, baixa converso alimentar, tima qualidade de carne, alm de bom valor de mercado.
Para ser considerado ideal para o cultivo, o peixe precisa dispor de caractersticas zootcnicas e biolgicas que justifiquem o investimento em pesquisas para conhecimento sobre a espcie e desenvolvimento de tecnologia. Essas caractersticas, de uma maneira geral, esto relacionadas ao ganho de peso, hbito alimentar, adaptao ao alimento artificial, resistncia s doenas, facilidade para produo de ovos e larvas, boa aceitao pelo mercado consumidor e condies econmicas. No Brasil algumas espcies dispem dessas caractersticas e o bijupir aquela que ocupa o primeiro lugar no ranking dessa classificao, seguido pelo robalo (CAVALLI; HAMILTON, p. 55, 2007).

2.1.1 Bijupir (Rachycentron canadum)

O bijupir (Rachycentron canadum, Linnaeus, 1766), tambm conhecido por beijupir, barriga branca, o rei dos peixes ou cao de escamas2 o nico representante da famlia Rachycentridae. Espcie migratria epipelgica, de hbito natatrio ativo, encontra-se amplamente distribudo em guas tropicais e subtropicais de todos os oceanos, entre as latitudes de 32N e 28S, mas ausente na costa leste do Oceano Pacfico (SHAFFER; NAKAMURA, 1989). A aparncia morfolgica externa dessa espcie marcada por um achatamento dorsoventral na regio da cabea, um corpo alongado e subclnico, com a pele recoberta por escamas muito pequenas. Ao longo das laterais do corpo do bijupir distendem-se duas faixas prateadas, contrastando com a colorao marrom-escura do seu corpo e a cor amarelada do seu ventre. O bijupir habita toda a costa brasileira, podendo atingir at 60kg e mais de 2m de comprimento e pode ser encontrado em guas rasas com fundos rochosos ou de recife, assim como em esturios e baas (FIGUEIREDO; MENEZES, 2000). Embora seu formato tenha semelhana com o peixe rmora (Echeneidae), Ditty e Shaw (1992) em estudos sobre morfologia das larvas, indicam uma relao filogentica mais prxima ao peixe dourado (Coryphaenidae). Peixe detentor de timas caractersticas zootcnicas e com rpido crescimento que o coloca na condio de espcie promissora aquicultura. Nessa perspectiva, Arnold et al (2002) asseguram que o bijupir pode crescer numa razo mdia superior a 1mm por dia nas
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O bijupir recebe diversos nomes ao redor do mundo. Nos EUA conhecido por cobia, lemofish, black fingfish, ling, cabio e creab-eater; na Espanha por cabie; na Franca por mafou; no Japo por suji; na Costa Leste da Africa por runner; na Itlia, Austrlia e Paquisto por black kingfish e nas Amricas Central e do Sul conhecido por bacalao, medregal ou esmedregal.

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fases iniciais de desenvolvimento. Esse ganho pode levar o animal a alcanar de 4 a 7kg durante um ano ou de 8 a 10kg por 16 meses, conforme Su et al (2000). Por sua vez, Liao (2003) verificou ganhos de 7kg ao longo do mesmo tempo. Esse ritmo de crescimento empreendido, segundo informam Stevens et al (2004), s custas de uma taxa de converso alimentar prximas a 1,1:1. Alm dessas caractersticas, outras tantas conferem ao bijupir, conforme consideraes de Benetti et al (2007) e Liao et al (2004), o atributo de excelente espcie para o cultivo. Aceita bem o alimento artificial, uma vez que se condiciona com 30 a 40 dias de criao rao (KILDUFF et al, 2002; LIAO et al, 2004); apresenta baixa mortalidade e boa taxa de converso alimentar (BENETTI, 2007); proporciona excelente aproveitamento para o consumo humano, visto que 60% podem ser utilizados para esse fim (KILDUFF et al, 2002); se adapta facilmente ao ambiente de cativeiro (HOLT et al, 2007); alm de tolerar variaes de qualidade da gua (KILDUFF et al, 2002). O Brasil apresenta excelentes condies para o desenvolvimento do cultivo de bijupir. Entretanto, essa prtica incipiente, ainda no existindo em escala comercial. A despeito do evidente interesse no cultivo dessa espcie, inclusive com iniciativas do setor privado nos estados da Bahia, Pernambuco e So Paulo, so poucos os estudos cientficos a seu respeito (CAVALLI; HAMILTON, 2007; OSTRENSKY et al, 2008). Quanto ao comportamento alimentar do bijupir, Frankes et al (1996) relataram que indivduos adultos e juvenis so carnvoros e se alimentam preferecialmente de pequenos peixes, crustceos e lulas. Chou et al (2001) os caracterizam como nadadores velozes e predadores agressivos capazes de capturar sua presa em pleno movimento, geralmente se alimentando na coluna dgua. A tima performance de crescimento do bijupir conseguida em ambientes com temperatura da gua entre 22 e 32C (CHANG, 2003). Em condies de temperaturas abaixo de 16C, Liao e Leao (2005), constataram diminuio no crescimento e elevada mortalidade. Quanto salinidade, estudos demonstram que larvas e juvenis so capazes de tolerar uma ampla variao. Nesse sentido, Resley et al (2006) afirmam que o crescimento de bijupirs mantidos em salinidade de 5ppt foi equivalente ou melhor do que dos peixes mantidos em salinidades de 15 e 30ppt. Contrariamente, Chen et al (2007) consideram que a salinidade pode ter um imediato e significante efeito sobre o crescimento de bijupir, ao tempo em que recomenda uma salinidade em torno de 30ppt para o cultivo de juvenis de bijupir. Corroborando esses estudos, Denson et al (2003) reportaram significativa reduo no

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crescimento e sobrevivncia de juvenis de bijupir mantido em salinidade 5 e 15ppt, quando comparados ao crescimento de peixes mantidos a 30ppt. Indicadores econmicos avaliados em estudos desenvolvidos por Sanches et al (2008) demonstraram a viabilidade do cultivo do bijupir em sistema offshore3, consistindo em uma atraente atividade econmica quando se considera o potencial de produo das espcies marinhas. Contudo, esse tipo de sistema no se adapta ao pequeno pescador ou ao cultivo familiar devido aos elevados investimentos exigidos pelo empreendimento para sua implantao e para o custeio da atividade. Luz (2001) adverte que, apesar das vrias caractersticas conferidas s espcies carnvoras, a produo em escala comercial ainda enfrenta dificuldades relacionadas ao alto ndice de canibalismo, dificuldade de alimentao, assim como aos elevados custos requeridos manuteno desses peixes. Este panorama parece indicar que o bijupir, espcie nativa do Brasil - com registros de estatsticas de capturas pouco expressivas, quando comparadas produo de outros peixes - representa uma das espcies com potencial para a aquicultura marinha, tendo em vista ser detentor de diversas caractersticas zootcnicas e mercadolgicas favorveis ao cultivo. Pavanelli et al (2000) destacam a piscicultura no Brasil como importante atividade econmica e relaciona seu sucesso diretamente possibilidade de se cultivar o maior estoque possvel de peixes, no menor volume de gua disponvel. Por outro lado, advertem quanto aos riscos relativos ao aparecimento de doenas quando se promove a intensificao dos sistemas. Estudos demonstram que nos ambiente marinhos poucas so as espcies de parasitos consideradas problemas sade dos peixes. Pavanelli et al (2008) ponderam, entretanto, que, tendo-se em vista o incremento da aquicultura nesses ambientes, esses patgenos podem emergir como promotores de doenas e que o aumento do prevalncia e da intensidade do parasitismo estabelece uma relao direta com as altas densidade de estocagem. O confinamento dos peixes em altas densidades de estocagem, peculiar ao modelo intensivo de criao, favorece o aparecimento de epizootias que em condies naturais teriam expresso mnima. Altas densidades populacionais aliada ao tipo de alimentao, degradao de qualidade da gua, s formas de tratamento e s prticas de manejo, prprias dos modelos intensivos, provocam nos peixes estresse fisiolgico (estresse crnico) que se reflete na sua homeostasia, ocasionando diminuio da capacidade de resposta imunolgica. Consequentemente gera uma menor resistncia s infeces de variadas etiologias que podem
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Sistema offshore so cultivos de organismos aquticos implantados distante da rea costeira, em alto mar.

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provocar grave ameaa ao sucesso da explorao, destacando-se entre elas as parasitrias (PAVANELLI et al, 2008). Alm das questes a respeito dos atributos necessrios indicao de uma espcie piscicultura, importante considerar sua capacidade de resistir s doenas. Para Holt et al (2007), bijupirs so peixes muitos resistente s condies de cativeiro, alimentam-se vorazmente e crescem rapidamente. No entanto, ocasionalmente surgem doenas que precisam ser controladas. Dentre os parasitos causadores de problemas sade de peixes marinhos, o Amyloodinium ocellatum, Brown, 1931, se destaca como o mais importante patgeno que pode trazer srias ameaas aquicultura marinha (PAPERNA, 1980; NOGA et al, 1991; EIRAS et al, 2006). O Amyloodinium ocellatum um dinoflagelado, ectoparasito obrigatrio de peixe, que tem provocado grandes perdas econmicas na piscicultura marinha ao redor do mundo e tem sido um grande entrave ao desenvolvimento da piscicultura destinada ao consumo e da piscicultura marinha ornamental (REED; FRANCIS-FLOYD, 1994; EIRAS et al 2006). Os surtos decorrentes dessa parasitose resultam em altos ndices de morbidade e mortalidade (SINDERMANN, 1990).

2.2 Amyloodinium ocellatum

O Amyloodinium ocellatum, Brown, 1931, um ectoparasito que se destaca como um dos mais importantes patgenos de peixes marinhos de guas tropicais. Dinoflagelado de distribuio cosmopolita (LOM; DYKOV, 1992) agente etiolgico da amyloodiniose ou doena do veludo, com localizao no tegumento ou nas brnquias. Sem especificidade parasitria pode ser responsvel por altos ndices de morbidade e por elevadas taxas de mortalidade em pisciculturas e aqurios pblicos (PAPERNA, 1980; SINDERMANN, 1990; NOGA et al, 1991; EIRAS et al, 2006; PAVANELLI et al, 2008).

2.2.1 Principais hospedeiros e distribuio geogrfica

O Amyloodinium um parasito responsvel por diversos surtos epidmicos na aquicultura ao redor do mundo. A ocorrncia da amyloodiniose no robalo legtimo (Dicentrarchus labrax) foi registrada por Gallet de Saint Aurin (1987) no Mar do Caribe na

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Martinica. Enquanto Ghittino et al (1980), Giavanne (1988) e Paperna (1980) a descreveram na Itlia, Alvarez-Pellitero et al (1993) observaram na Espanha e Paperna et al (1981) relataram sua presena no Mar Vermelho. A ocorrncia desse dinoflagelado foi tambm registrada no dourado (Sparus aurata) por Paperna e Larencin (1979) no Mar mediterrneo e na Frana. Tareen (1986) descreveu surto no Mar Egeu, na Turquia. Paperna (1981) a registrou em Eilat em Israel. Enquanto Rigos (1998) faz referncia em dourado cultivado em gaiolas flutuantes na Grcia. Paperna (1980) fez referncia ao parasito em Tilpia de Moambique (Tilapia mossambicus) no Mar Vermelho em Israel. Aiello e DAlba (1986) referem-se no peixe charuteiro-catarino (Seriola dumenerili) na regio de Siclia na Itlia. Rigos et al (1998) descrevem em sargo-bicudo (Diplodus puntazzo) em gaiolas flutuantes na Grcia Central. No Brasil, em estudos com a espcie de linguado Paralichthys orbignyanus desenvolvidos no departamento Oceanogrfico da Fundao da Universidade Federal do Rio Grande, foram observados recorrentes surtos de amyloodiniose em reprodutores e alevinos mantidos em cativeiro (ABREU et al, 2005). A amyloodiniose tambm foi registrada em muitos outros peixes de cultivo nos Estados Unidos e em outros pases (CARVALHO-VARELA, 2005), conforme sumarizadas no quadro abaixo.

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Quadro 1. Principais espcies de peixes suscetveis e regies de ocorrncia do Amyloodinium ocellatum ESPCIE Robalo legtimo (D. labrax) REGIO DE OCORRNCIA Mar do Caribe na Martinica Itlia REFERNCIA GALLET de SAINT AUTIN, 1987. GHITTINO et al,1980, GIAVANNE, 1988 e PAPERNA, 1980. ALVAREZ-PELLITERO et al, 1993. PAPERNA; LARENCIN, B. 1979 TAREEN, 1986 PAPERNA, 1981 PAPERNA, 1980 AIELLO; DALBA, 1986 ABREU et al, 2005 LAWLER, 1980 e LANDSBERG et al, 1994 NOGA et al, 1991

Espanha Mar Mediterrneo e na Frana Dourado (S.aurata) Tilapia de Moambique (O. mossambicus) Charuteiro-catarino (S.dumenerili) Linguado (P.orbignyanus) Mar Egeu, Turquia Eliat, Israel Mar Vermelho, Israel Siclia, Itlia Brasil Golfo do Mxico (Mississipi, Texas, Louisiana, Florida, EUA) Oceano Atlntico (Carolina do Norte, EUA)

Striped bass (M. saxatilis) Redfish (Sciaenops ocellata) Grey mullet (Mugil cephalus) Pompano (Trachinotus Carol) Hbrido (Morone chrysops X Morone saxatilis) Linguado (Paralichthys dentatus) Hbrido (M. chrysops X M. saxatilis) Redfish Linguado (Paralichthys lethostigma) Bullseye puffer (Spheroides annulatus) Pompano (Trachinotus goodei, T. carolinus) Pacific threadfin (Polydactylus sexfilis) Grey mullet Ayu (Plecoglossus altivelis) Mulloway (Argyrosomus japonicus) Barramundi (Lates calcarifer )

Oceano Atlntico (Carolina do Sul, EUA) Oceano Atlntico (Flrida, EUA)

JENKINS et al, 1998; SMITH et al, 1999; SANDIFER et al, 1993 BENETTI et al, 2001

Oceano Pacfico (Mxico) Mar do Caribe (Ilha da Margarida, Venezuela) Oceano Pacfico (Havai, EUA) Oceano Pacfico (Filipinas) Oceano Pacfico (Taiwan) Oceano Pacfico (Austrlia) Oceano Pacfico(Tailndia)

FAJER-VILA et al, 2003 GASPAR, 1987 MONTGOMERY-BROCK et al, 2001 BATICADOS; QUINITIO, 1984 CHIEN; HUANG, 1993 FIELDER; BARDSLEY,1999 CHONCHUENCHOB et al, 1987

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2.2.2 Ciclo biolgico

O ciclo biolgico do Amyloodinium complexo quando comparado com outros parasitos de peixes. Apresenta ciclo trifsico (Fig. 1), incluindo o trofonte, estgio parasitrio, que se fixa e se alimenta nas brnquias e tecido epitelial; o tomonte, estgio reprodutivo, que realiza divises sobre o substrato e o estgio infeccioso, o dinosporo, que nada livremente na gua ao encontro de um hospedeiro susceptvel. O desenvolvimento, bem como sua morfologia, foi criteriosamente descrito por Brown (1931,1934); Nigrelli (1936); Brown e Hovasse (1946); Cheung et al (1981).

Figura 1. Ciclo biolgico do Amyloodimium ocellatum. (A) = trofonte, (B, C e D) = tomontes, (E) = dinosporo. Figura adaptada de Ramos e Oliveira (2001).

Os trofontes (50 a 100m), com aspecto ovide ou piriforme, alimentam-se fixando-se no epitlio das brnquias e da pele dos peixes. So organismos limitados por uma membrana celular fina e resistente, que forma uma camada de vesculas achatadas, nas quais vrias organelas podem estar presentes. Os trofontes so dotados de um pednculo proeminente, com ganchos de fixao de filamentos radiculares ou rizocistos, por meio dos quais se fixam ao hospedeiro e em alguns casos, tambm absorvem os nutrientes. Ao alcanar um

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determinado tamanho e maturao, essas estruturas de fixao tornam-se mecanicamente insuficientes e ento o parasito se desprende do hospedeiro. Uma vez sobre o substrato, os parasitos absorvem gua, possivelmente atravs do canal presente no pednculo e aumentam de volume. Todas as organelas, inclusive o flagelo, so gradualmente retrados dentro do corpo do parasito quando ento forma-se um cisto reprodutivo e protetor (tomonte) com divises sucessivas assexuadamente (NIGRELLI, 1936; BRONW; HOVASSE, 1946; CARVALHO-VARELA, 2005), influenciadas pela temperatura e salinidade (BROWN; HOVASSE, 1946). Aps a ltima diviso dos tomontes, formas mveis (dinosporos), com cerca de 20m de dimetro so liberadas e podem infectar um novo hospedeiro. Cada tomonte pode liberar at 256 dinosporos, os quais so capazes de infectar vrias espcies de peixes suscetveis (BROWN; HOVASSE, 1946). Conforme afirmam Reed e Francis-Floyd (1994), a diviso celular no interior do tomonte cessa em guas com temperatura inferiores a 10C, mas pode ser completada de 3 a 5 dias a temperatura de 22C a 25C. Temperaturas superiores a 20C e salinidades entre 16.7 a 28.5ppt frequentemente so favorveis ao seu desenvolvimento, completando o ciclo at sete dias, contexto que pode dizimar uma populao de peixe parasitada muito rapidamente em uma piscicultura. Ainda segundo Reed e Francis-Floyd (1994), os dinosporos liberados, quando comparados aos trofontes maduros, so muito pequenos, medindo em torno de 12 a 15m de dimetro e que mesmo na ausncia de um hospedeiro ele mantm o seu poder de infeco por um perodo de at quinze dias. Quando finalmente encontra um hospedeiro, liga-se a este, perde seus flagelos e entra na fase parasitria.

2.2.3 Transmisso

Visto que as fases do ciclo de vida do Amyloodinium no se completam no prprio hospedeiro, pode-se inferir que a transmisso ocorre atravs de formas infectantes, os dinosporos, caracterizando um ciclo indireto. A gua do abastecimento a principal porta de acesso dos tomontes ou dinosporos ao sistema de criao e consequentemente aos peixes. Entretanto, muito criterioso considerar que a introduo de peixes infectados funcionar como uma fonte importante da parasitose to logo os trofontes se desprendam e iniciem seu ciclo reprodutivo (CARVALHO-VARELA, 2005).

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2.2.4 Sintomas

No existe uma sintomatologia especfica na amyloodiniose. A evidncia dos sintomas so aquelas relacionadas s diversas parasitoses dos peixes. De uma maneira geral, diante de eventos desencadeadores de mortes de peixes, mantidos em sistemas de guas estuarinas ou marinhas, prudente, conforme indica Reed e Francis-Folyd (1994), suspeitar da manifestao do Amyloodinium. Geralmente, os sinais iniciais so alteraes comportamentais as quais incluem diminuio ou completa perda de apetite. Os peixes ficam se raspando contra objetos, paredes ou substrato dos tanques, refluxo de gua atravs das brnquias (coughing), respirao rpida, natao errtica, aglomerao dos peixes prximos aos aeradores, assim como na superfcie da gua. Com a evoluo do processo patolgico, podem se observar manchas de despigmentao, congesto e eroso das nadadeiras, hipersecreo mucosa, perda de escamas e dilatao do ventre (PAPERNA, 1980; REED; FRANCIS-FLOYD, 1994; RAMOS; OLIVEIRA, 2001; CARVALHO-VARELA, 2005).

2.2.5 Patogenia

Segundo Carvalho-Varela (2005), as brnquias so o primeiro rgo de infeco. Entretanto, h registros que indicam, em algumas espcies de peixe, a pele como sitio de predileo a ser parasitado. As infeces macias podem envolver a pele, as nadadeiras e os olhos. Porm, os peixes podem morrer sem apresentar grandes leses cutneas. As formas de trofontes podem ser encontradas nas brnquias, na cavidade branquial e nas fossas nasais. J foi referida as formas de tomontes no esfago, estmago e intestino, contudo, acredita-se que o desenvolvimento nestes rgos tenha sido aps ingesto. Apenas uma nica forma parasitria pode alimentar-se sucessivamente sobre mltiplas clulas epiteliais, e ser responsvel pela extenso das leses causadas. Nveis medianos de infeces, com presena de 1-2 trofontes por filamento brnquial e causam ligeiras alteraes patolgicas. Contudo, as fortes infeces, com um nmero superior a 200 trofontes no filamento branquial, provocam hiperplasia, inflamao, hemorragia,e necrose e a morte, geralmente devida anxia, pode ocorrer dentro de 12 horas. O autor pondera ainda que, em casos agudos, nem sempre a morte

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dos peixes est associada anxia, mas s alteraes osmorreguladoras e s infeces microbianas secundrias. Nas parasitoses intensas pode-se manifestar hiperplasia epitelial acompanhada de necrose a hemorragias (PAVANELLI et al, 2008). Conforme Paperna (1980), leses como hiperplasia, fuso das lamelas de ordem focal ou difusa e fuso apical de lamelas foram frequentemente observadas. Ramos e Oliveira (2001), em estudos sobre amyloodiniose em pregado (Psetta maxima), registraram hiperplasia do epitlio branquial com fuso das lamelas seguidas de edema, levando ao descolamento das clulas de suporte das brnquias. Constataram ainda alteraes degenerativas, necrose das clulas do epitlio branquial e depleo das clulas mucosas. Segundo Scott (2000), as formas parasitrias provocam uma leso grave nos pontos de fixao sobre a pele e as brnquias, desencadeando hemorragias, inflamao e hiperplasia epitelial extensa.

2.2.6 Resistncia imunolgica dos peixes ao Amyloodinium ocellatum

Embora a maioria dos peixes residentes em guas contaminadas com Amyloodinium seja suscetvel amyloodiniose, alguns fatores limitam claramente a sua capacidade de proliferao, envolvendo tanto a imunidade inata quanto a adquirida (DICKERSON; CLARK,1996; WOO, 1996). Algumas espcies de peixe so naturalmente resistentes a infeco, como killifish (Fundulus grandis), american eel (Anguilla rostata), molly (Poecilia latipinna) e outros.

2.2.6.1

Imunidade inata

Investigaes tm revelado a resistncia imunolgica dos peixes ao Amyloodinium. Nesse sentido, Dickerson e Clark (1996) e Woo (1996) asseguram que a resistncia a infeco pelo parasito envolve tanto a imunidade inata quanto a adquirida. De uma maneira geral as espcies resistentes so aquelas que produzem muco espesso ou tem tolerncia a baixos nveis de oxignio (LAWLER, 1977), como tambm em peixes mais velhos parecem ser mais resistentes, em algumas circunstncias. Diversos fatores inerentes ao hospedeiro devem ter importante papel nas interaes hospedeiro parasito (NOGA; LEVY, 2006).

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O Amyloodinium tambm altamente sensvel aos antibiticos naturais do hospedeiro, designados como protenas semelhantes histona (HLP), presente em altas concentraes na pele e brnquias conforme observado no hbrido striped bass e outros peixes. As HLP foram letais para Amyloodinium, pois inibiu severamente a infeco, o crescimento e sua diferenciao nas clulas do hospedeiro, provavelmente justificando seu importante papel na proteo dos peixes contra este parasito (NOGA et al, 2001). Ainda de acordo com Noga (2001), curiosamente as HLP so altamente letais para trofontes, mas no tm nenhum efeito sobre dinosporos. Essa toxicidade preferencial muito incomum, visto que as drogas agem contra os dinosporos, enquanto as trofontes so geralmente resistentes terapia. Por outro lado, foi demonstrado que o magainin 2, um antibitico produzido na pele do sapo africano (Xenopus laevis), foi igualmente txico tanto para trofontes, quanto para dinosporos. H evidncias de que HLP-1 e o magainin 2 causam graves anormalidades no desenvolvimento do parasito, principalmente nas fases de trofontes e tomontes. Estes dados sugerem que pele e tecidos branquiais contm potentes defesas contra os protozorios.

2.2.6.2

Imunidade adquirida

Estudos recentes tm revelado importantes mecanismos de defesa que podem ser usados para aumentar especificamente a proteo a esses parasitos. Pesquisas fornecem evidncias de que peixes, uma vez recuperados de Amyloodinium foram resistentes reinfeco (LAWLER, 1977; PAPERNA, 1980). Segundo Smith et al (1993) soro de peixes imunizados com dinosporos pode aglutinar e destruir o Amyloodinium em cultura de clula. Peixes imunizados foram tambm capazes de montar uma resposta de anticorpo que foi detectada via ensaio imunoadsorvente ligado enzima (ELISA). Em outras pesquisas Smith et al (1994), detectaram anticorpo anti-amyloodinium de soro de hbrido striped bass (Morone saxatilis X Morone chrysops) aps surto de amyloodiniose em uma aquicultura comercial na Carolina do Norte. Os autores sugerem que uma infestao de A. ocellatum pode induzir produo humoral de anticorpos ao parasito e seus resultados fornecem futuras evidncias que infestaes naturais podem conferir resistncia protetora em peixes que sobrevivem a uma infestao.

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Cecchini et al (2001), por sua vez, utilizando antgeno de trofontes, detectaram anticorpo anti-amyloodinium em cultivo de robalo legtimo (Dicentrarchus labax). Dados experimentais demonstram que algumas espcies desenvolvem uma resposta imunolgica adaptativa que pode ser detectada por ELISA. Os autores conjecturam, com base nos seus resultados, que o robalo (Dicentrarchus labax), que demonstrou uma imunidade adquirida contra A. ocellatum, pode desenvolver uma parcial resistncia nova infestao. Cobb et al (1998) estudando a imunidade adquirida da amyloodiniose associada com uma resposta de anticorpo em peixe palhao (Amphirion frenatus), sugerem que esse peixe capaz de montar uma resposta protetora mediada por anticorpos ao Amylodinium. Os autores consideram ainda que futuros estudos so necessrios sobre a resposta imune, incluindo o papel da imunidade das mucosas ao A. ocellatum, assim como a identificao e caracterizao de antgenos dos parasitos. Diversas pesquisas tm demonstrado, ao longo dos anos, que os peixes so capazes de desenvolver resposta imune, frente a um desafio por um patgeno, seja experimental ou naturalmente, como tambm montar uma resposta mediada por anticorpo contra o Amyloodinium ocellatum. Existe a necessidade de mais estudos com o intudo de novos esclarecimentos quanto a essas respostas. Situao essa que direcionar procedimentos que permitam o controle de uma parasitose desencadeadora de muitas perdas na piscicultura marinha.

2.2.7 Diagnstico

A nica maneira segura de diagnosticar uma infestao por Amloodinium pela identificao do parasito em tecido infectado. Essa deteco efetuada atravs de preparaes de raspado de branquias e tegumento os quais podem ser observados em microscpio tico. Sua fixao pode ser feita diretamente em lmina, com formol a 5% e, para colorao, podem empregar-se, rotineiramente, os corantes May-grunwald e Giemsa ou Hematoxilina e Eosina. Os trofontes, em forma de pra ou esfrica, com colorao variando do dourado ao marrom escuro, so facilmente vistos, mesmo com pequeno aumento (40x). A estrutura atravs da qual o trofonte liga-se ao tecido do peixe, tambm pode ser vista ao microscpio de luz (REED; FRANCIS-FLOYD, 1994; CARVALHO-VARELA, 2005; EIRAS et al, 2006; PAVANELLI et al, 2008).

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2.2.8 Profilaxia e Tratamento

O controle de surtos de amyloodiniose representa uma das principais restries ao desenvolvimento da aquicultura marinha. No existe produto qumico teraputico registrado como parasiticida na Food and Drug Administration FDA para peixes destinados ao consumo. Contudo, pesquisas tem identificado diversos produtos qumicos que demonstram ter razovel sucesso no controle (SMITH; SCHWARZ, 2009). O sulfado de cobre a substncia mais amplamente utilizado no controle da amyloodiniose (BOWER, 1983; CARDEILHAC; WHITAKER, 1988; REED; FRANCIS-FLOYD, 1994 SMITH;

SCHWARZ, 2009). No existe comprovao da eficcia desses produtos, assim como sua segurana para os animais-alvo (REED e FRANCIS-FLOYD (1994). O cobre usado no tratamento de infestaes por ectoparasitos, principalmente de peixes marinhos. Seu comportamento qumico na gua complexo e pode ser altamente txico aos peixes e invertebrados marinhos. O uso do sulfato de cobre estressa os peixes, tornando-os mais suscetveis a septicemias entricas e quando utilizado em imerso ou na forma de banho, demonstra severo efeito adstringente, com eliminao de muco das brnquias mediante retrao das clulas mucgenas e ao hepatotxica (SCOTT, 2000). Em sistemas marinhos, esse autor recomenda concentrao 0,1mg de cobre por litro, mas alerta sobre a necessidade de seguidos testes para mant-lo em 0,1- 0,2mg/L e garantir o controle da amyloodiniose sem matar os peixes. O uso desse produto em Cyprinus carpio desencadeia estresse crnico, registrando aumento dos teores de glicose e epinefrina circulantes, conforme referido por Vig et al (1987) e Toth et al (1996). Danos nas brnquias, fgado e rim foram observados em Puntius conchorius aps exposio droga (KUMAR; PANT, 1981). Diversos estudos demonstram alteraes nas propores dos elementos do sangue perifrico de Oncorhynchus mykiss, de Heteropneustes fossilis, de Channa punctatus e de Cyprinion watsoni (WILLIAMS; WOOTTEN, 1981; DICK; DIXON, 1985; SINGH; REDDY, 1990; SAXENA; CHUAHAN, 1994; SINGH, 1995). Segundo Noga (2001), o cobre um elemento com atividade imunossupressora, do que se pode supor que peixes submetidos a sua exposio poder se tornar mais vulnervel a ao de agentes infecciosos. Campagna et al (2008) concluram que, apesar da importncia do cobre como um micronutrientes no metabolismo dos organismos aquticos, mesmo em concentraes muito baixas, este metal pode coprometer a sobrevivncia e o crescimento de Danio rerio. Ao

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mesmo tempo sugerem novas investigaes para a formulao de normas de qualidade da gua que permitam efetivamente proteger a vida aqutica. Por sua vez, Pickering e Pottinger (1987) asseguraram que o cobre contaminante comum do ambiente aqutico, exercendo diferentes efeitos agudos e crnicos sobre populaes de peixes. Outros produtos tm sido preconizados como capazes de controlar a amyloodiniose. O difosfato de cloroquina, um produto antimalrico, eficaz no controle da amyloodiniose nas concentraes de 5-10mg/L de gua, em nica aplicao por dez dias, contudo, tambm txico para algas e vrios invertebrados. Formol aldedo, produto amplamente usado nas ectoparasitoses, embora integre a listas dos produtos com restries, provoca o desprendimento dos trofontes, mas os tomontes continuam a diviso, aps remoo do produto (CARVALHO-VARELA, 2005; REED; FRANCIS-FLOYD, 1994). As medidas profilticas so de extrema importncia na tentativa de prevenir focos da amyloodiniose e evitar os surtos da doena. Algumas delas podem ser adotadas com relativo xito. Os peixes, antes de serem introduzidos na piscicultura devem ser submetidos quarentena, pelo menos por 3 a 4 semanas e a gua de entrada do sistema deve passar por irradiao ultravioleta. Embora do ponto de vista prtico seja muito difcil, tem sido sugerido imerso dos peixes em gua doce, diminuio da temperatura e choque de salinidade. Tais medidas so apenas adjuvantes no processo de controle do Amyloodinium, no se constituindo em prticas acertadamente exitosas, podendo ter maior ou menor nvel de sucesso, em funo da complexidade do ciclo do parasito (REED; FRANCIS-FLOYD, 1994; CARVALHOVARELA, 2005). A grande dificuldade encontrada quando se pretende aplicar tratamento em peixes no Brasil, a escassez de estudos que atestem a eficcia e o mecanismo de ao das drogas utilizadas no controle das enfermidades. Em funo disso, muitas vezes, a atitude adotada no aplicar qualquer forma de tratamento, pois alm de no haver conhecimento acerca da farmacodinmica da droga, no se sabe sobre a extenso de seus danos ao ambiente (PAVANELLI et al, 2008). Assim, o uso da homeopatia no tratamento de animais aquticos uma alternativa a ser avaliada, uma vez que tais medicamentos, por serem ultradiludos, no deixam resduos e, dessa forma, no causam danos aos peixes e nem ao meio ambiente.

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2.3 Homeopatia

A homeopatia, elaborada pelo mdico alemo Cristhian Frederic Samuel Hahnemann, no sculo XVIII, um sistema de interveno mdica baseada na aplicao de substncias diludas e no princpio das semelhanas com o objetivo de alcanar resultados clnicos. A lei da similitude j era adotada pela escola grega de Alexandria e pela medicina hipocrtica, as quais se valiam dos recursos da analogia para selecionar o medicamento ideal para o pronto restabelecimento da sade (ROSENBAUM, 2002). A partir de seus experimentos com a quina 4 (China officinalis), Hahnemann resgata o princpio da similitude preconizado pelo pai da medicina, no sculo V a. C., para a sustentao de sua teoria sobre a cura das doenas (BENEZ, 2004), conforme enunciado por Hipcrates: O que produz a estrangria, cura a estrangria; o que causa o vmito cura o vmito; o que d febre a um homem so, cura um homem que tem febre. A teoria homeoptica est sustentada pela lei dos semelhantes, e por trs princpios: experimentao no homem so, remdio nico e medicamento diludo e dinamizado. Segundo a lei da similitude, o medicamento capaz de curar, quando, uma vez experimentado no individuo so, desencadeia sintomas semelhantes aos sintomas deflagrados pela doena. Segundo Hahnemann (2007) para se alcanar o sucesso no tratamento de uma enfermidade necessrio administrar um princpio medicamentoso que gere no organismo sadio os sintomas da molstia que se quer tratar. As experimentaes da droga no homem so permitem relacionar minuciosamente os sintomas provocados pelos medicamentos que so as chamadas patogenesias ou doena artificial, descrita pelos experimentadores nas Matrias Mdicas. Esse mtodo torna possvel o conhecimento das propriedades curativas do medicamento (HAHNEMANN, 2007). No Organon, obra que inaugura a homeopatia, Hahnemann (2007, p. 166) recomenda o uso do medicamento nico, afirmando que: em nenhum caso de tratamento necessrio e, por conseguinte, no admissvel, administrar a um doente mais do que uma nica substncia medicamentosa de cada vez. O medicamento deve ser administrado e que este seja capaz de cobrir o quadro atual do enfermo, ou seja, apenas o remdio mais semelhante, mais de acordo com os sintomas apresentados pela pessoa enferma deve ser administrado. Para expressar o seu potencial curativo, as substncias medicamentosas precisam ser diludas. Hahnemann (2007) demonstrou que quanto mais diludo e dinamizado o remdio,
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Planta de origem peruana utilizada no tratamento da malria.

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mais eficaz e penetrante sua ao. O autor afirma, ainda, que a capacidade de cura encontrase na razo direta da sua similaridade com os sintomas do enfermo. A homeopatia surgiu no cenrio brasileiro em 1840, trazida pelo mdico francs Benoit Mure. Entretanto, somente a partir dos anos 80 conquistou status de especialidade mdica, tendo sido reconhecida pelo Conselho Federal de Medicina atravs de Resoluo n 1000 de 1980; Conselho de Farmcia, Resoluo n 232 de 1992; e Conselho Federal de Medicina Veterinria, Resoluo 662, de 14 de julho de 2000.

2.4 Filosofia Homeoptica

O corpo biolgico, na concepo do modelo homeoptico, dotado de uma natureza dinmica fsico-vital, na qual ocorre interao das funes orgnicas com pensamentos e sentimentos, tornando-o susceptvel ou no ao processo de adoecimento. Com essa viso holstica do binmio sade-doena os mltipos aspectos do indivduo doente so valorizados, (TEIXEIRA, 2006). A medicina do sculo XVII estava marcada por duas correntes de pensamento: o mecanicismo e o vitalismo. Para os vitalistas, o organismo animado e gerido por princpio denominado fora vital, condio que o torna distinto de um ser inanimado. Nessa concepo, os organismos so direcionados por uma espcie de fora de sade que se impe normalmente como fora dominante. O desequilbrio desse princpio vital provocaria o surgimento da doena (ROSENBAUM, 2005). Compartilhando as ideias do pensar da medicina vitalista, Hahnemann (2007) considera que sem fora vital, o organismo incapaz de sentir, de funcionar e de prover sua prpria conservao. Esse princpio dinmico capaz de sofrer a ao dos agentes hostis vida. A sade est relacionada ao estado de equilbrio dessa fora e a doena, ao seu desequilbrio. Os fenmenos vitais descritos por Hahnemann correspondem aos mecanismos homeostticos abordados pela fisiologia moderna. Na concepo hahnemanianna o desequilbrio vital ou homeosttico, desencadearia o surgimento e a progresso das doenas. O organismo, uma vez atingido por diversos agentes nocivos, reagiria em uma ao secundria ou reao vital, atravs de manifestaes de sintomas em propores relacionadas

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magnitude da sua suscetibilidade individual gerando indisposies passageiras ou doenas crnicas (TEIXEIRA, 2006). Segundo Vithoulkas (1980), doena o resultado de um estmulo morbfero, chamado causa excitante, que ressoa no nvel particular de suscetibilidade do organismo. Para que haja a manifestao da doena, necessria uma forte suscetibilidade ao agente morbfico. Essa predisposio chamada de causa mantenedora, pois a fragilidade do mecanismo de defesa que mantm um estado de sade reduzido e no as ocorrncias sucessivas de causas excitantes. Teixeira (2006) enfatiza que o estmulo teraputico das substncias ultradiludas promove uma reao homeosttica de cura, desencadeando uma reao do organismo contra seus prprios sintomas e por meio de auto-ajustes fisiolgicos, promove o equilbrio interno. Esse estmulo, conforme esclarece Ullman (1995), capaz de induzir o sistema imunolgico do indivduo a modelar uma resposta adequada ao estmulo da doena. Portanto, o tratamento homeoptico permite ao indivduo restabelecer a sade e prevenir doena. As doenas, de acordo com Hahnemann (2010), so classificadas em agudas, que se expressam como um processo mrbido rpido da fora vital, mas sempre em termos moderados; e em crnicas que manifestam sintomas que aparecem progressivamente de forma vagarosa e alternada. No que diz respeito s doenas de carter crnico, Hahnemann (2010) considera que elas provm dos miasmas crnicos: Syphilis, Sycosis e Psora, sendo que as enfermidades causadas pelos memso manifestam-se atravs de sintomas locais e dos quais se origina a maioria das doenas crnicas. Sobre a psora Hahnemann afirma no pargrafo 80 do Organon:
[...] h o miasmaa da Psora que se revela, aps o trmino da infeco interna de todo o organismo, por uma erupo cutnea peculiar, consistindo, s vezes, apenas de pequenas vesculas acompanhadas de prurido forte e voluptuoso (e de odor caracterstico), o miasma interno crnico [...] a Psora, a nica causa fundamental real, produtora de todas as demais numerosas outras, direi mesmo incontveis, formas de molstia, que, com os nomes de debilidade nervosa, histeria, hipocondria, mania, melancolia, demncia, furor, epilepsia e convulses de toda a sorte, amolecimento dos ossos (raquitismo), escrofulose, escoliose e cifose, crie, cncer, fungus haematodes, neoplasmas, gota, hemorridas, ictercia, cianose, hidropsia, amenorria, hemorragia gstrica, nasal, pulmonar, vesicular e uterina; asma e lcera pulmonar, impotncia e esterilidade, enxaqueca, surdez, catarata, amaurose, clculos nos rins, paralisia, defeito dos sentidos e dores de milhares de espcies etc., figuram nas obras sitemticasde patologia como doenas peculiares e independentes (HAHNEMANN, p. 61, 2007)

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Os principais sintomas produzidos pela psora se expressam principalmente na pele e nas mucosas, estando associados diretamente s parasitoses, ocorrendo a manifestao de outros sinais clnicos, com destaque para distenso abdominal, palidez da face, pele seca e debilidade geral (HAHNEMANN, 2010).

2.5 A cincia homeoptica

Apesar de bicentenria, a homeopatia ainda se defronta com um grande desafio frente comunidade cientfica contempornea que comprovar como substncias diludas e agitadas em srie, em concentraes abaixo da constante de Avogadro5, podem induzir resposta nos sistemas biolgicos, contrariando o modelo farmacolgico bioqumico e dose respostadependente (TEIXEIRA, 2006). Assim, a homeopatia permanece marginalizada pelo pensamento cientfico contemporneo, que, segundo Reale (1994), herdeiro direto do positivismo de August Comte (1793-1857) avesso Metafsica e a qualquer ideia que no seja fruto da experimentao. Estudos cientficos modernos fundamentados em modelos fsico-qumicos e biolgicos confirmam que a informao presente nas substncias ultradiludas desencadeariam alteraes nos nveis orgnicos semelhantes s substncias ponderais. Pesquisadores do departamento de Fsica Nuclear da Universidade de Milo e do Instituto de Qumica da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) respaldam essas pesquisas na buscam de explicao racional e cientfica para o fenmeno de transmisso da informao atravs das modificaes de natureza eletromagntica da gua (TEIXEIRA, 2006). Pesquisas fundamentadas no modelo biolgico, por sua vez, asseguram que as ultradiluies homeopticas de substncias reguladoras do sistema imunolgico, demonstram atividade imunomoduladora. Para Bastide (GUEDES et al, 2004, apud BASTIDE, 1998) pesquisadora da Faculdade de Farmcia da Universidade de Montpellier na Frana, o sistema de regulao biolgico envolve mais a noo de informao do que a quantidade de molculas recebidas. Sua hiptese a de que os imunomoduladores transmitiriam as informaes especficas para as molculas utilizadas na diluio no momento do preparo do medicamento maneira homeoptica (GUEDES, 2004).
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A constante de Avogrado (nmero de Avogrado), definida por Amedeo Avogrado, representa um mol de algumas entidades elementares (tomos, molculas, ons, eltrons). Formalmente definida como o nmero de tomos do carbono-12 em 12gramas, ou seja, 6,02X1023.

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Guedes et al (2004), estudaram a influncia do tecido tireoidiano, de girinos de rtouro (Rana catesbeiana) na alterao da velocidade da metamorfose desses animais. A investigao revelou que o tecido tireoidiano diludo teve efeito oposto ao da tintura me e transmitiu a informao s molculas hidroalcolicas usadas na diluio, e,

subsequentemente, transferiu essas informaes aos girinos. Pesquisa desenvolvida por Sukul et al (2003) testou a capacidade do Mercuric chloride 30C e Nux vomica 30C em alterar a permeabilidade da gua atravs dos eritrcitos em Catfish (Clarius batrachus), submetidos intoxicao aguda por etanol. Os resultados demonstraram que as potncias homeopticas foram capazes, in vitro, de aumentar a permeabilidade dos eritrcitos gua nos peixes em estudo. Os autores concluram que esses resultados indicavam que o Merc.cor 30C e o Nux vom 30 podem interagir com protena do canal de gua e com isso facilitar a penetrao da mesma atravs dos eritrcitos. O alvo primrio da potncia homeoptica parece ser uma protena da membrana plasmtica.

2.6 Medicamento homeoptico

Buscando tornar prtica a concepo da cura pelo semelhante, Hahnemann instituiu mtodo teraputico com substncia que fosse capaz de provocar sintomas semelhantes aos observados no indivduo doente, mas que no induzisse toxicidade ao mesmo. Assim, usou a substncia semelhante em si prprio, porm em quantidade muito pequena, de forma diluda, antes de serem utilizadas no paciente. Entretanto, percebeu que usando a substncia diluda a sua ao poderia ser diminuda ou nula. Hahnemann constatou que ao agitar a substncia esta se tornava mais potente, mais ativa, apesar de conter menos substncia que a inicial (CESAR, 2002). Esse processo que envolve diluio e sucusso foi denominado dinamizao, e o resultado final de cada etapa de dinamizao se obtm uma potncia (BENITES, 2006). Quanto mais dinamizada maior a potncia do medicamento e mais efetivo do ponto de vista clnico (CESAR, 2002). Os medicamentos homeopticos so originados dos reinos animal, vegetal e mineral. Sua produo obedece s normas estabelecidas pelo Decreto n 57477-66, que dispe sobre a manipulao, receiturio, industrializao e venda de produtos homeopticos, atravs da Portaria n 1180 de 1988 e Resoluo n 23 de 06 de dezembro de 1999 da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.

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Para o preparo do medicamento, preciso inicialmente que a droga seja solubilizada em um solvente, podendo este ser gua, lcool ou glicerina. Quando se tratar de uma substncia insolvel nesses compostos, dever a mesma ser submetida triturao. Essa solubilizao d origem tintura-me, a partir da qual, as diluies podem ser feitas em diferentes propores ou escalas: centesimal (1:100), decimal (1:10) e cinquenta milesimal (1:50.000). Depois de diludo, o medicamento submetido ao processo de sucusso, ou seja, agitao vigorosa em srie atravs de fortes batidas do frasco, em sentido vertical, contra um anteparo. A cada diluio seguem-se 100 sucusses, obtendo-se uma potncia superior (CESAR, 2002). A escala centesimal (C ou CH) e a cinquenta milesimal (LM) foram desenvolvidas por Hahanemann, enquanto que a decimal (X) foi introduzida pelo homeopata Hering (BENITES, 2006).

2.7 Homeopatia Veterinria

Hahnemann foi o precursor da aplicao da homeopatia em animais. Em seguida, seu discpulo Benninghause, advogado e botnico, realizou muitos tratamentos individuais em animais. Contudo, segundo o que se tem notcia, teria sido Joseph Wilhelm Lux (1777-1849), o primeiro mdico veterinrio homeopata a introduzir o tratamento homeoptico na cura das doenas dos animais por volta de 1823 (BENITES, 1999). A despeito de Hahnemann ter preconizado uma teraputica nica e individualizada, ele verificou a ocorrncia de doenas coletivas e recomendou que o tratamento dos sintomas fsicos fosse considerado a partir da sua escala de importncia e alteraes comportamentais, ponderados em funo da movimentao do grupo e no de um indivduo isolado. A esse respeito Hahnemann afirma que:

A maneira de se estudar e de tratar as enfermidades epidmicas ser sempre a mesma [...] o clnico deve ver a imagem caracterstica de cada enfermidade reinante, como algo novo e desconhecido [...] todas as epidemias tm um carter nico [...] necessrio excetuar as epidemias cujo agente infeccioso e contagioso sempre permanece idntico, como a varola e o sarampo etc. necessrio fazer uma anlise com todos os sintomas dos enfermos afetados. Deveremos realizar anotaes cuidadosas de casos epidmicos anteriores causados por aquele agente. Estas anotaes sero aperfeioadas paulatinamente observando-se como os sintomas se repetem, fazendo com que a lista v se tornando significativa e com mais particularidades. O mdico que, nos primeiros casos, j tenha podido escolher um medicamento que se aproxime do especifico homeoptico, poder, nos casos

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subseqentes, verificar a segurana do remdio escolhido ou ento, descobrir o mais apropriado (HAHNEMANN, 2007 p. 45)

A considerao acerca das doenas epidmicas levou Hahnemann a utilizar pela primeira vez a expresso Gnio Epidmico se referindo ao conjunto dos sintomas apresentados na populao, assim como Gnio Medicamentoso para referir-se ao medicamento que representasse a maioria dos sintomas expressos na populao. Resgatando esses conceitos, os veterinrios passaram a contemplar a possibilidade de tratar os animais de produo adotando-se a concepo homeoptica. Assim, o Dr. Claudio Real, o primeiro homeopata veterinrio brasileiro, utilizou pela primeira vez a expresso Homeopatia Populacional para designar uma abordagem que diz respeito ao tratamento de populaes animais acometidas por uma enfermidade comum maioria dos indivduos. Nesse caso, o rebanho encarado como um organismo nico (REAL, 2003). Ao que se sabe, poucos medicamentos homeopticos foram testados quanto sua eficcia na teraputica em animais, sendo este um campo de estudos que ainda requer muita pesquisa e empenho dos mdicos veterinrios, entretanto, o nmero de pesquisas tem aumentado, sendo possvel apresentar aqui alguns resultados de alta relevncia para a rea. No ano de 1993, Benites, na I Jornada Brasileira de Mdicos Veterinrios Homeopatas realizada em Curitiba (BENITES, 1993), referiu-se a um caso de osteomielite piognica pstraumtica em bovino tratada com Mercuris solubilis 6CH, registrando rpido e adequado restabelecimento do processo. Nesse caso, o tratamento homeoptico da doena aguda mostrou-se eficiente na eliminao da infeco e estimulao da cicatrizao ssea sem auxlio de medicao aloptica como antibiticos e antiinflamatrios. No campo da fertilizao, Benites e Roberti Neto (1993) citam caso de tratamento de bovino que apresenta problemas na concepo devido s falhas na fertilizao ou morte embrionria precoce de causa desconhecida. Aps 60 dias de tratamento com Sepia succus 6CH, o animal foi submetido a um processo de transferncia de embries, tendo sido obtido sucesso no mesmo, tanto pela presena de embries morfologicamente viveis, quanto pela confirmao de prenhez nas receptoras submetidas transferncia. A homeopatia tambm foi testada por Samarth (2002), cujo estudo avaliou o desempenho de frangos de corte, frente ao uso da medicao Calcarea phosphorica 200X por um perodo de seis semanas. Os animais que receberam o medicamento apresentaram resultados estatisticamente significativos, com melhora para as taxas de converso alimentar, melhor rendimento de carcaa e superioridade de massa muscular das partes comestveis. Por

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sua vez, em pesquisa desenvolvida tambm com aves, Vivanco (2006) fez uso de Pulsatilla nigricasn 200 CH, com o propsito de estimular a postura de galinhas e constatou aumento de 5% no nmero de ovos produzidos por esses animais. Comparando o uso da Calcarea carbonica e de Baryta carbonica como promotores de crescimento em suno Viamontes et al (2005) verificaram que ambos medicamentos testados contriburam no incremento de peso de leites em recria, com resultados favorveis a Calcarea carbonica. No ano de 2006, Lira-Salazar et al (2006) constataram a eficcia dos medicamentos Eupatorium perfoliatum e Arsenicum album em camundongos infectados com Plasmodium berghei, parasito causador da malria. Uma inibio de 60% na multiplicao do parasito foi observada nos animais tratados com E. perfoliatum 30CH e de 70% naqueles tratados com A. album. Ainda neste mesmo ano, Oliveira (2006) publicou resultado de testes no tratamento homeoptico em caprinos com linfadenite caseosa. Um grupo de animais foi submetido ao Hepar sulphur 30X e Silicea 12X, enquanto outro grupo recebeu Hepar sulphur 200X por 15 dias. Esses grupos foram comparados com um terceiro grupo controle. Foi constatado no estudo que os animais submetidos ao tratamento homeoptico nos dois protocolos apresentaram resultados de cura significativamente superiores comparados ao grupo controle. No ano de 2008, avaliando o efeito dos medicamentos Sulphur 30X, Ferrum phosphoricum 6X, Arsenicum album 6X e Mercurius solubilis 6X em cordeiros mestios, naturalmente infectados com NGI (nematdeos gastrointestinais), Cavalcanti (2008) concluiu que os animais tratados com homeopatia no apresentaram sintomas clnicos da parasitose e tiveram um ganho significativo de peso (p<0,05) em relao ao grupo controle, no entanto, no houve diferenas significativas na reduo de OPG entre os grupos. Outro estudo cujos resultados foram positivos foram as pesquisas empreendidas por Almeida et al (2007) investigando o efeito do Sulphur (6CH) sobre larvas de Dematobia hominis em bovinos mestios naturalmente infestados. Os pesquisadores constataram que o medicamento reduziu em 83% o nmero de ndulos presentes no primeiro ms aps o tratamento. Os autores asseguram que, de acordo com os resultados obtidos, o controle do Dematobia hominis com tratamento homeoptico nos bovinos representa uma perspectiva no controle do berne. Tambm Zacharias (2008) obteve resultados positivos ao verificar a eficcia do Ferrum phosphoricum 12X, do Arsenicum album 6X e da Calcarea carbonica 12X, administrados alternadamente, sobre a reduo de OPG (ovos por grama) e a resposta imune em ovinos mestios naturalmente infectados com NGI, comparados com animais tratados com

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doramectina e com um grupo controle negativo. Os resultados demonstraram reduo (p<0,01) no nmero de larvas de Haemonchus contortus e uma maior concentrao de IgG srico no grupo tratado com homeopatia em relao aos outros grupos. No 68 dia aps tratamento, o OPG reduziu em 50% nos animais tratados com homeopatia, sem, entretanto, apresentar diferenas estatsticas entre os grupos (p>0,05). Embora ainda se tenha um longo caminho a percorrer, ao que se pode ver, tais estudos tm apresentado resultados promissores em animais no aquticos, fazendo crescer as pesquisas nesta rea como forma de buscar solues para as patologias que afetam animais em cativeiro. Tal necessidade, como se ver a seguir, uma demanda tambm no que se refere aos organismos aquticos.

2.8 A homeopatia na aquicultura

A despeito da aparente nulidade de informaes sobre a aplicao teraputica da homeopatia na aquicultura, resolveu-se empreender tal pesquisa por considerar a homeopatia como meio vivel no tratamento de animais aquticos, assim como nas demais espcies, conforme se viu pelos resultados das pesquisas acima apresentadas. Acredita-se que o princpio que rege a homeopatia pode ser aplicado com sucesso em organismos aquticos mantidos em cativeiro, representado uma alternativa saudvel no tratamento das enfermidades que afetam as espcies aquticas cultivadas pelo homem. A literatura cientfica corrente parece no fazer referncia aplicao da homeopatia no tratamento e cura das doenas de organismos aquticos. Os poucos estudos disponveis destacam a possibilidade de o medicamento agir de forma preventiva das doenas. Amaral (2002) considera essa uma abordagem interessante quando se refere a grupos de indivduos mantidos juntos, artificialmente, em altas densidades de estocagem, submetidos ao estresse de manejo e, portanto, vulnerveis a doenas endmicas. Nesse sentido, estudos tm sido desenvolvidos com uso de medicamentos denominados complexos ou ncleos que compreendem vrios medicamentos misturados em um mesmo frasco (BENEZ et al, 2004). Valentim-Zabott et al (2008) verificaram os efeitos do ncleo homeoptico Homeopatila RS sobre o desempenho, o ndice hepato-somtico e a proporo sexual de tilpia do Nilo. Em relao ao desempenho, o grupo tratado com o ncleo, revelou parmetros

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de comprimento total e peso significativamente inferiores, em relao aos no tratados. Contudo, a sobrevivncia foi significativamente maior para o grupo dos animais que receberam Homeopatila RS. Segundo os autores, essa densidade elevada pode ser a

responsvel por um menor crescimento dos peixes. O ndice hepato-somtico nos animais tratados com Homeopatila RS foi significativamente inferior em relao ao dos demais tratamentos. Essa diferena pode ser explicada pelas alteraes metablicas neste rgo induzidas pelo medicamento, j que todos os animais dos diferentes tratamentos apresentavam-se na mesma fase de desenvolvimento. A proporo de gnadas masculinas foi significativamente maior no grupo que recebeu o 17-metiltestosterona. Os pesquisadores concluiram que a adio do ncleo Homeopatila RS na rao de tilpia do Nilo, na fase de diferenciao gonadal, apresentou efeito positivo na sobrevivncia, interferiu no ndice hepato-somtico dos animais e no alterou a proporo sexual, no sentido da masculinizao das gnadas. Piau Junior (2006), estudando a ao do ncleo homeoptico Homeopatila RS sobre o comportamento morfomtrico das fibras musculares brancas de tilpia do Nilo, concluiu que os alevinos do tratamento homeoptico apresentaram maior hipertrofia das fibras musculares do que os alevinos do tratamento controle e os que receberam 17-metiltestosterona. Merlini (2006) estudou o efeito do composto Homeopatila 100 sobre os nveis de cortisol, glicose e os parmetros hematolgicos de tilpia do Nilo. Seus resultados permitiram-lhe considerar que nos animais que recebera m o composto homeoptico os nveis referentes ao cortisol, glicose e hemoglobina plasmtica foram significativamente inferiores, quando comparados aos nveis nos animais do grupo controle. Alm disso, os peixes do tratamento homeoptico apresentaram maior percentagem das clulas de defesa orgnica, como os trombcitos e linfcitos. No grupo controle, o autor identificou um aumento na taxa de hemoglobina e considerou que esta pode estar associada maior demanda de oxignio pelo organismo em condies estressantes, com o objetivo de ampliar a capacidade de transportar oxignio e gs carbnico. Para o pesquisador, esse estudo ofereceu informaes importantes sobre o complexo Homeopatila 100 em tilapia do Nilo, apresentando resultados satisfatrios nas condies experimentais analisadas. Outro estudo com esse mesmo medicamento (ncleo homeoptico Homeopatila 100 ) teve sua eficcia testada sobre o desempenho e a morfologia de brnquias em alevinos revertidos da tilpia do Nilo. O experimento revelou aumento significativo (p<0,05) na sobrevivncia e diminuio do ndice hepato-somtico para os animais que receberam o

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ncleo homeoptico (SIENA, 2009). Esses achados corroboram os dados de Valentim-Zabott et al (2008) e Piau Junior (2006) com Homeopatila RS.

2.9 A escolha do medicamento homeoptico

Pretendeu-se buscar um medicamento para o tratamento dos peixes acometidos por amyloodiniose que apresentasse em sua patogenesia a maioria dos sintomas desta doena. O Sulphur foi o medicamento de escolha nesse estudo, por ser o principal antipsrico e apresentar sintomas semelhantes parasitose. obtido do mineral enxofre sublimado e purificado, triturado nas trs primeiras dinamizaes, diludo em lcool e submetido a sucusses (agitaes) aps cada diluio. Elemento simples da famlia dos metalides, bastante disseminado na natureza, sendo tambm encontrado na forma combinada com outros metais. constituinte das matrias albuminides nos compostos orgnicos e apresenta-se sob a forma slida, inspido, cor amarelo-limo, inodoro, insolvel em gua, quase insolvel no lcool, solvel no ter, benzina e leo (LATHOUD, 2010). O enxofre constituinte dos aminocidos essenciais como cistena, homocistena e metionina e dos no essenciais, como taurina, representando elemento importante para todos os organismos vivos. Atravs de pontes de dissulfeto ligado ao carbono, participa das estruturas espaciais das protenas; constituinte de algumas vitaminas; participa da sntese do colgeno e da secreo da blis (MENEZES et al, 2008). Segundo Lathoud (2010), o enxofre est na base de toda matria protica, constituindo-se em todos os agregados celulares, sendo distribudo em maior ou menor quantidade em todo organismo e sua carncia implica em fenmenos que alteram o funcionamento do organismo. Ainda de acordo com Lathoud 2010, o fgado o responsvel pela distribuio do enxofre da dieta nas suas diversas formas, atuando no combate a infeco intestinal, presidem a sulfonao do fenol impedindo sua nocividade, facilita a assimilao dos sais insolveis e permite a dissoluo dos resduos ps-atividade celular. Para Lathoud (2010), nenhum medicamento tem sobre a pele uma ao to geral, positiva e persistente como Sulphur. Este parece buscar na superfcie da pele todas as inflamaes internas e toxinas. Sobre isso o autor afirma:

Com relao atuao do Sulphur sobre o organismo, o ponto mais importante a metstase do interior para o exterior [...]. A metstase essencial do Sulphur a pele,

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parece que as partculas do metalide buscam um caminho para o exterior nos locais de menor resistncia (alas capilares, que irrigam a derme sob a epiderme: glndulas sudorparas e sebceas, onde o suor se localiza fica ftido, onde houver obstruo definitiva da glndula sebcea na forma de acne, quando a eliminao se generalizar na superfcie da pele, nas grandes descamaes da epiderme, nas leses queratinizadas com espessamentos psoriformes, que levam a um prurido insuportvel. Este ltimo pode levar a um eczema crnico se a pele for atingida profundamente (LATHOUD p. 1107, 2010).

A patogenesia do Sulphur est associada a alguns sintomas relacionados com a amyloodiniose, tais como ao irritante sobre a pele e mucosas, olhos congestionados com vermelhido, debilidade fsica, apatia e emagrecimento, citados por Vanneier e Portier (1987) e Lathoud (2010). Segundo Almeida (2007), a imagem patogensica do Sulphur relaciona esse medicamento aos indivduos predispostos s parasitoses cutneas a qual determina a receptividade do animal infestao parasitria e oferece condies para sobrevivncia e reproduo do parasito. O Sulphur age no aparelho circulatrio determinando alteraes congestivas variadas. Interfere, sobretudo, na circulao venosa, alterando sua distribuio. Tem papel relevante quanto ao poder de absoro nas inflamaes, sobretudo nas serosas e de grande utilidade nos casos de edema (LATHOUD, 2010).

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3 ARTIGOS CIENTFICOS

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3.1 ARTIGO 1

Descrio da amyloodiniose em juvenis de bijupir (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766)

Resumo

O objetivo desse trabalho foi descrever as principais alteraes desencadeadas pelo Amyloodinium, atravs das avaliaes da prevalncia e intensidade mdia parasitria, dos parmetros hematolgicos e histopatolgicos em bijupir naturalmente infectados. Um grupo de 27 peixe foi anestesiado, submetido a colheita de sangue e eutanasiado.Procedeu-se o raspado cutneo e das brnquias e a coleta de fragmentos de brnquias. A prevalncia parasitria nas brnquias foi de 100% e no muco foi de 80,8% e as intensidades parasitrias mdias nas brnquias, 683,5 e no muco cutneo 67,1. A mdia dos eritrcitos foi de 4,3 (x106 L), o VG foi de 26%, o VGM de 64,2fL e da protena plasmtica foi de 5,8%. Os valores de trombcitos e leuccitos totais foram de 5,2 (x103)/L e 3,6 (x103)/L, respectivamente. Dentre as alteraes histolgicas, a hiperplasia do epitlio respiratrio acompanhada de fuso lamelar foi uma alterao registrada com muita frequncia. O descolamento do epitlio respiratrio foi observado tambm muito frequentemente nas lamelas branquiais dos peixes analisados. A congesto vascular provocou dilatao do seio venoso, e dilatao do canal vascular, em muitos casos gerando a formao de aneurismas. A congesto do seio venoso, seguida de descolamento e de ruptura do epitlio lamelar, promoveu a formao de hemorragia. Contrariamente, apesar de ocorrer ruptura com necrose do epitlio respiratrio, aliada reao inflamatria linfoctica, no houve acompanhamento de hemorragia. A presena de acmulos sanguneos em regies interlamelares, promoveu, no raras vezes, o desarranjo lamelar. As formas de trofontes do parasito foram vistas principalmente entre as lamelas respiratrias ou ligadas a estas, na sua regio apical ou lateral. O VMA variou do grau discreto ao severo. Os valores de IAH foram de 76,8.

Palavras-chave: Amyloodinium; Aquicultura; Cobia; Parasito.

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Description of Amyloodinium in bijupira juveniles (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766).

Abstract

The aim of this study was to describe the changes triggered by Amyloodinium through assessments of parasite prevalence and mean intensity, haematological parameters and histopathological bijupir naturally infected. A group of 27 fish was anesthetized, subjected to blood collection and euthanized.Proceeded to the shaved skin and the gills and the collection of fragments of gills. The parasite prevalence in the gills was 100% and the mucus was 80.8% and the average intensity of infestation in the gills 683.5, skin and mucus 67.1. The average erythrocytes was 4.3 (x106L), CV was 26%, MCV of 64.2fL and plasma protein was 5.8%. The values of total leukocytes and thrombocytes were 5.2(x103)/ L and 3.6 (x103)/L, respectively. Among the histological changes, hyperplasia of respiratory epithelium accompanied by lamellar fusion was an amendment filed with great frequency. The detachment of the respiratory epithelium was also seen very often on gill lamellae of the fish analyzed. The vascular congestion caused dilation of venous sinus, and vascular dilatation of the canal, in many cases leading to aneurysm formation. The venous sinus congestion, followed by detachment and disruption of lamellar epithelium, encouraged the formation of bleeding. In contrast, although there was a break with necrosis of respiratory epithelium, coupled with lymphocytic inflammatory reaction, no monitoring of bleeding. The presence of blood accumulation in interlamellar regions, promoted, often, the lamellar disarray. Trofontes forms of the parasite were seen mainly between the respiratory lamellae or connected to those in its lateral or apical region. The AMV ranged from mild to severe. HAI values were 76.8.

Keywords: Amyloodinium; Aquaculture; Cobia; Parasite.

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INTRODUO

O Amyloodinium ocellatum, Brown, 1931 um ectoparasito que se destaca como um dos mais importantes patgenos de peixes marinhos de guas tropicais. Dinoflagelado de distribuio cosmopolita (LOM; DYKOV, 1992) agente etiolgico da amiloodiniose, que acomete uma ampla variedade de peixes marinhos, se localizando nas brnquias ou no tegumento (PAVANELLI et al, 2008). Surtos epidmicos de amyloodiniose tm sido registrado em diversas espcies de peixes na aquicultura mundial. No robalo (Dicentrarchus labrax) foi registrada ocorrncia no Mar do Caribe, Itlia, Espanha, Portugal e Mar Vermelho; na dourada (Sparus aurata) no Mar mediterrneo, na Frana, no Mar Egeu, na Turquia em Israel e Grcia; na Tilpia de Moambique (Tilapia mossambicus) no Mar Vermelho e em Israel.6 Alm dessas ocorrncias, h registros de amyloodiniose em muitos peixes de cultivo nos Estados Unidos e em outros pases (CARVALHO-VARELA, 2005). No Brasil foram observados recorrentes surtos de amyloodiniose em reprodutores e alevinos na espcie de linguado Paralichthys orbignyanus, (ABREU et al, 2005). Apresenta ciclo trifsico, incluindo o trofonte, estgio parasitrio, que se fixa e se alimenta nas brnquias e tecido epitelial; o tomonte, estgio reprodutivo, que realiza divises sobre o substrato e o estgio infeccioso, o dinosporo, que nada livremente na gua ao encontro de um hospedeiro susceptvel (BROWN, 1931; 1934; NIGRELLI,1936; BROWN; HOVASSE,1946; CHEUNG et al, 1981). Os sinais clnicos iniciais geralmente so alteraes comportamentais as quais incluem diminuio ou completa perda de apetite, os peixes ficam se raspando contra objetos, paredes ou substrato dos tanques, refluxo de gua atravs das brnquias (coughing), respirao rpida, natao errtica, aglomerao dos peixes prximos aos aeradores, assim como na superfcie da gua. Com a evoluo do processo patolgico, podem-se observar manchas de despigmentao, congesto e eroso das nadadeiras, hipersecreo mucosa, perda de escamas e dilatao do ventre (RAMOS; OLIVEIRA, 2001; PAPERNA, 1980; CARVALHOVARELA, 2005; REED; FRANCIS-FLOYD, 1994). Segundo Carvalho-Varela 2005, as brnquias so os primeiros rgos de infeco. Nas parasitoses intensas podem se manifestar
6

Tais ocorrncias foram registradas por Gallet de Saint Aurin (1987); Ghittino et al (1980), Giavanne (1988); Paperna (1980, 1981); Alvares-Pellitero et al (1993); Paperna e Larencin (1979); Tareen (1986); Rigos (1998).

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leses, como hiperplasia das clulas do epitlio respiratrio com fuso das lamelas seguidas de edema, levando ao descolamento das clulas do epitlio respiratrio, alteraes degenerativas, inflamao, hiperplasia acompanhada de hemorragia e necrose e depleo das clulas mucosas (PAPERNA, 1980; SCOTT, 2000; RAMOS; OLIVEIRA, 2001; PAVANELLI, 2008). Alguns fatores inerentes ao hospedeiro limitam a capacidade de proliferao do amyloodinium, que dizem respeito tanto imunidade inata, quanto adquirida (DICKERSON; CLARK,1996; WOO, 1996). O parasito se apresenta sensvel aos antibiticos naturais do hospedeiro, como as protenas semelhantes histona (HLPs) (NOGA et al, 2001). Pesquisas fornecem evidncias de que peixes, uma vez recuperados da infeco pelo Amyloodinium, foram resistentes a reinfeco (LAWLER, 1977, 1980; PAPERNA, 1980). Segundo Smith et al (1993), soro de peixes imunizados com dinosporos pode aglutinar e destruir o Amyloodinium em cultura de clula. Esses peixes tambm foram tambm capazes de desencadear uma resposta de anticorpo detectada via ensaio imunoadsorvente ligado enzima (ELISA). De acordo com Reed e Francis-Floyd (1994), diversos produtos so usados no controle dessa parasitose, mas sem comprovao de sua eficcia, assim como, sua segurana para os animais-alvo, sendo o sulfato de cobre o mais amplamente utilizado (BOWER, 1983; CARDEILHAC; WHITAKER, 1988; REED; FRANCIS-FLOYD, 1994). O objetivo desse trabalho foi descrever as principais alteraes desencadeadas pelo Amyloodinium, atravs das avaliaes da prevalncia e intensidade mdia parasitria, dos parmetros hematolgicos e histopatolgicos em juvenis de bijupir naturalmente infectados.

MATERIAL E MTODOS

O experimento foi realizado no Laboratrio de Aquicultura e Sanidade de Organismos Aquticos (LASOA), do Departamento de Produo Animal, da Escola de Medicina Veterinria da Universidade Federal da Bahia (UFBA).

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Animais experimentais

Os juvenis de bijupirs foram doados pela fazenda Oruabo pertencente a Bahia Pesca, localizada no municpio de Santo Amaro da Purificao-BA.

Experimento Um grupo de 27 juvenis de bijupir foi anestesiado com Eugenol (Biodinmica) numa concentrao de 0,5 mL/L e em seguida foi realizada a colheita de sangue, por puno da veia caudal, para anlises hematolgicas no setor de Hematologia do Hospmev (UFBA). Aps colheita de sangue, os peixes foram eutanasiados por seco medular para coleta de material parasitolgico e histopatolgico. Todos os procedimentos utilizados estiveram de acordo com os Princpios ticos na Experimentao Animal, recomendados pelo Colgio Brasileiro de Experimentao Animal (COBEA, 1991).

Colheita de sangue

Foram colhidas amostras de 1,0 mL de sangue, de cada peixe, em seringas com anticoagulante EDTA7 a (10%).

Anlises hematolgicas

Cada amostra de sangue contendo EDTA foi submetida s determinaes de protena total (feita com refratmetro RTS-101ATC), contagem de eritrcitos, em cmera hematimtrica de Neubauer (L de sangue) (modelo CC510 CELM), aps diluio em soluo de cloreto de sdio (0,65%) e volume globular (VG) pela tcnica do microhematcrito (GOLDENFARB et al, 1971). A constante corpuscular do volume globular mdio (VGM) teve seu valor calculado de acordo com Wintrobe (1934). A contagem dos leuccitos e trombcitos totais foi realizada nas extenses sanguneas, coradas
7

segundo

mtodo

rpido

May-Grunwald-Giemsa-Wrigth

(TAVARES-DIAS;

EDTA - cido etilenodiaminotetractico. Optou-se por seu uso, pois, segundo Tavares-Dias, ele no interfere no hematcrito e na concentrao de hemoglobina, alm de impedir a agregao de trombcitos e no interferir com as coloraes dos granulcitos nas extenses sanguneas.

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MORAES, 2003). Os nmeros de trombcitos e leuccitos totais foram calculados, por mtodo indireto, na extenso, conforme Tavares-Dias e Faustino (1998).

Contagem de leuccitos e trombcitos totais

Foi quantificado o nmero de leuccitos e de trombcitos totais na extenso sangunea em relao a 2000 eritrcitos, homogeneamente distribudos nos campos da extenso e juntamente com os valores referentes contagem total de eritrcitos (L de sangue). Foram aplicadas as seguintes frmulas: leuccitos na extenso sangunea x contagem eritrcitos (L) 2.000 eritrcitos na extenso sangunea trombcitos na extenso sangunea x contagem eritrcitos (L) 2.000 eritrcitos na extenso sangunea

Leuccitos (L) =

Trombcitos (L) =

Anlise parasitolgica

Aps a eutansia de todos os peixes, efetivou-se a coleta do muco da superfcie corporal e das brnquias. O muco e brnquias foram colocados em potes plsticos e fixados em formalina a 5% para a observao e quantificao dos parasitos. No Laboratrio de Sanidade de Organismos Aquticos (LASOA-EMEV/UFBA) os potes contendo muco e brnquias ficaram em repouso aps 24h, sendo o sobrenadante descartado e acrescentado lcool 70%. Em seguida, o contedo dos potes foi homogeneizado retirando-se trs alquotas para observao em cmara de Mac Mster. Em seguida o resultado foi estimado pelo volume fixado. Dados relativos prevalncia e intensidade mdia foram calculados segundo Bush et al (1997), como se segue:

TAXA DE PREVALNCIA =

nmero de peixes parasitado nmero de peixes examinados nmero total de parasitos nmero de peixes infestados

INTENSIDADE MDIA =

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Anlise Histopatolgica

No Laboratrio de Anatomia Patolgica (HOSPMEV/UFBA) fragmentos de brnquias foram colocados em recipientes contendo soluo fixadora de formol neutro, tamponado a 10%, por um perodo de 48 horas e, posteriormente submersos em soluo de cido frmico a 10% durante 48 a 72 horas para descalcificao. O processamento histolgico em incluso em parafina foi realizado de acordo com os mtodos convencionais (PROPHET et al, 1992). Seces de 4,0 m de espessura foram coradas pela hematoxilina-eosina (H-E) (LUNA, 1968) para posterior anlise. Foram analisadas duas seces histolgicas dos segmentos branquiais para todos os animais. A presena de alteraes histopatolgicas para cada brnquia foi avaliada semiquantitativamente de duas formas. Para uma delas, utilizou-se o clculo do valor mdio de alterao (VMA), baseado na ocorrncia das leses, mtodo modificado de Schwaiger et al (1997). Para esse clculo foi atribudo um valor numrico para cada animal em uma escala de grau conforme apresentado no Quadro 1.

QUADRO 1- Pontuao e ocorrncia das alteraes nas brnquias, modificado de Schwaiger et al (1997).

Pontuao 0 (zero) 1 (discreta) 2 (moderada) 3 (intensa) 4 (severa)

Ocorrncia das alteraes alterao no observada entre 1 5 ocorrncias entre 6 10 ocorrncias entre 11 15 ocorrncias acima de 15 ocorrncias

A partir desses valores de pontuao, foi calculada uma mdia do grau de alterao para cada grupo e foram classificados em discreto (0,1 a 1,0), moderado (1,1 a 2,0), intenso (2,1- 3,0) e severo (3,1- 4,0). A outra forma de avaliao das alteraes histopatolgicas consistiu no clculo do ndice de alterao histopatolgica (IAH), baseado na severidade das leses, modificado de Poleksic e Mitrovic-Tutundzic (1994). As alteraes foram classificadas nas seguintes categorias:

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estgio I : alteraes que no comprometem o funcionamento do tecido; estgio II : alteraes mais severas e que prejudicam o funcionamento do rgo; estgio III : alteraes muitos severas e irreversveis.

O valor do IAH foi calculado para cada peixe com aplicao da frmula seguinte:

IAH = (1 X SI) + (10 X SII) + (100 X SIII),

Sendo que, I, II e III correspondem ao nmero de alteraes no estgio I, II e III, respectivamente. Valores de IAH foram divididos em cinco categorias, conforme mostrado no Quadro 2.
QUADRO 2 Categorias de IAH baseada na severidade das leses e funcionamento do rgo (POLEKSIC; MITROVIC-TUTUNDZIC, 1994).

Categorias 0 - 10 11 20 21 50 51 100 >100

Severidade das alteraes funcionamento normal do rgo leve dano ao rgo moderada alterao no rgo severa leso no rgo dano irreversvel ao rgo

Este ndice permitiu a avaliao da severidade das leses branquiais, dos peixes experimentais. No Quadro 3 esto apresentadas as alteraes patolgicas quanto ao tipo e os estgios, segundo Poleksic e Mitrovic-Tutundic (1994).

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QUADRO 3 - Classificao das alteraes histopatolgicas das brnquias quanto ao tipo e os estgios em que se inserem de acordo com Poleksic e Mitrovic-Tutundic (1994).

ALTERAOES HISTOPATOLGICAS DAS BRNQUIAS Hipertrofia e hiperplasia do epitlio branquial Descolamento Hiperplasia do epitlio lamelar Desarranjo lamelar Fuso incompleta de vrias lamelas Fuso completa de vrias lamelas Ruptura do epitlio lamelar sem hemorragia Ruptura do epitlio lamelar com hemorragia Necrose Alteraes vasculares/inflamatrias Dilatao do seio sanguneo Congesto vascular Aneurisma lamelar Infiltrado mononuclear Parasitos Branquiais Presena de parasito

ESTGIO

I I I I I II II III

I I II I

Anlise estatstica

Para as anlises estatsticas, os resultados numricos das variveis hematolgicas, parasitolgicas foram submetidos anlise de varincia e teste de mdia (Tukey), em nvel de 5%. Os valores de IAH e VMA, calculados conforme escala de valores pr-determinada foram analisados por teste no-paramtrico de Kruskall-Wallis, tambm a 5%. Para isso foi utilizado o pacote estatstico SAEG (RIBEIRO JUNIOR, 2001).

RESULTADOS E DISCUSSO

Alteraes comportamentais no foram muito evidentes nos animais experimentais, alguns se raspavam contra as paredes ou substrato dos tanques, apresentavam letargia ou se mantinham prximos aos aeradores.

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Parasitolgico

A prevalncia parasitaria nas brnquias foi de 100% e no muco foi de 80,8%, revelando a acentuada capacidade de disperso do agente parasitrio entre os peixes, que foram coletados de tanque de criao, em condies normais de manejo. As intensidades parasitrias mdias (nmero mdio de parasitos nas brnquias e no muco cutneo dos animais infestados) esto apresentadas na Tabela 1.
TABELA 1- Intensidade mdia parasitria, valor mnimo e mximo e desvio-padro do nmero de parasitos nas brnquias e no muco de bijupir INTENSIDADE MDIA Valor Valor mnimo mximo 240,0 1120,0 0,0 120,0

rgo analisado Brnquias (n mdio de parasitos) Muco cutneo (nmdio de parasitos)

Mdia 683,5 67,1

Desvio padro 278,54 33,2

Observa-se pelos resultados que o parasito, alm de apresentar elevada prevalncia, afetando brnquias e muco cutneo da maioria dos peixes coletados, mostra tambm grande capacidade de multiplicao, com grande intensidade parasitria mdia, embora com ampla variao individual. Preparaes a fresco de esfregao de brnquias, examinados ao estereomicroscpio, permitiu observar hipersecreo de muco, congesto branquial e estruturas que caracterizam as formas parasitrias que constituem o ciclo de vida do Amyloodinium. Observou-se a presena de trofontes, nas lamelas e muco branquiais e no muco cutneo dos peixes, com formato arredondado ou oval, desprovidas de flagelo, conforme pode ser visto na Figura 1.

Figura 1. Brnquias de juvenis de bijupir. Trofontes em exame a fresco observadas em estereomicroscpio (2X).

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A observao das brnquias, em exame a fresco e preparaes parasitolgicas de brnquias e muco cutneo, permitiu verificar formas com as caractersticas do Amyloodinium descritas por Brown (1934) e que constituem o ciclo de vida trifsico do parasito (AMLACHER,1970; COBB,1998), correspondendo as fases parasitria (trofontes) e de diviso ou multiplicao (quistos). A fase infectante (dinosporos) no foi evidenciada nesse estudo. Segundo Noga (1996), o ciclo biolgico desse parasito idntico ao do ciliado Ichthyphthirius multifiliis. Paperna (1980) Ramos e Oliveira (2001) tambm observaram a presena de trofontes na pele e brnquias de dourado e do pregado, respectivamente. Segundo Paperna e Laurencin (1979) as infestaes da pele so raramente observadas, exceto com larvas de robalo e de dourado, para as quais a pele se constitui o sitio de eleio para fixao do parasito. Por sua vez, Montgomery et al (1999) em estudo com o

Polydactylus sexfilis, registraram as brnquias como sendo o local de infestao primria. O presente estudo apontou as brnquias do bijupir como stio de predileo do parasito. Por outro lado, em estudos com o peixe-porco (Anisotrenus virginicus L.) foi evidenciado por Cheung et al (1981), a ocorrncia de trofontes na submucosa, no msculo, no tecido conjuntivo da faringe e no rim ceflico. Tais ocorrncias, entretanto, no foram acompanhadas por alteraes significativas nas clulas, sugerindo que a presena interna do parasito compatvel com o hospedeiro. Em ambientes com condies favorveis como temperatura elevada e constante (BROWN, 1934; EIRAS, 1994), o ciclo biolgico normalmente completado no substrato do fundo do tanque. A hipersecreo de muco registrada no presente estudo e por Ramos e Oliveira (2001) reteve as formas de multiplicao e o ciclo se completou tambm no prprio peixe, conforme assegura Sinderman (1999).

Hematolgicos

A tabela 2 apresenta os resultados das anlises hematolgicas dos juvenis de bijupir parasitados.
TABELA -2. Valores de VG, Eritrcitos, VGM e PPT de juvenis de bijupir parasitados por Amyloodinium sp.
Parmetros Eritrcitos (X106 L) 4,30,8 (2,5-5,7) VG (%) 26,14,8 (20-39) VGM (fL) 64,223,1 (35,2-130,4) PPT (%) 5,80,29 (5,2-6,2)

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A mdia dos eritrcitos desse estudo 4,3 (x106 L) foi superior aos valores encontrados nas espcies marinhas Lates caucarifer, Arius subrostratus, Plotosus canius, Siganus javus, Mugil cephalus, Megalopes cyprinoide e Chanos chanos, estudadas por Satheesahkumar et al (2010a) e Satheesahkumar et al (2010b) que encontraram (3,0x10 6L; 2,7x10 6 L; 2,0x106L; 2,3x106L; 2,5x10 6 L; 2,9x10 6L e 2,6 x10 6 L), respectivamente.
O valor mdio do VG, conforme demonstrado na tabela 2, foi de 26% o que corrobora com a mdia de 29% verificada por Denson et al (2003) em juvenis de bijupirs mantidos em diferentes graus de salinidade. Por outro lado, essa mdia se mostrou inferior aos valores observados por Satheesahkumar et al (2010a) e Satheesahkumar et al (2010b) com variaes entre 28% a 44%, nas espcies de Lates caucarifer, Arius subrostratus, Plotosus canius, Siganus javus, Mugil cephalus, Megalopes cyprinoide e Chanos chanos. Pitombeira e Martins (1970) e Pitombeira et al (1976) registraram valors mdios de VG de 49,3% e 47% em estudos com o peixe cavala (Scomberomorus cavalla) e peixe-serra (Scomberomorus maculatus). O volume globular mdio de 64,2fL registrado nesse estudo se mostrou superior aos encontrados por Satheesahkumar et al (2010a) e Satheesahkumar et al (2010b) nas espcies j citadas, variando entre 12 a 16,8fL.

O valor mdio da protena plasmtica foi de 5,8%, resultado superior ao verificado por Denson et al (2003) que foi de 2,9% em estudos com juvenis de bijupiras submetidos a vrios graus de salinidade. J Satheesahkumar et al (2010a) Satheesahkumar et al (2010b) e registraram uma mdia de 4,3% nas diversas espcies j citadas acima. Na tabela 3 esto apresentados os valores dos resultados da contagem de leuccitos e trombcitos totais dos animais parasitados.
Tabela 3 Resultados de leuccitos e trombcitos totais dos juvenis de bijupir parasitados com Amyloodinium. Parmetro Leuccitos totais Trombcitos totais Mdia 3,62 1,6 (1,4-6,83) 5,27 6,1 (0-23,6)

O valor de leuccitos totais foi de 3,6 (x103)/L de sangue. Pitombeira e Martins (1970) e Pitombeira et al (1967) verificaram valores de 3,9 e 3,4 (x106 L) de eritrcitos nas espcies de peixes cavala e peixe-serra, respectivamente. Valores diferentes, variando entres 21,6 (x103)/L a 32 (x103)/L, foram encontrados em diversor outros peixes marinhos estudados por Satheeshkumar et al (2010a) e Satheeshkumar et al (2010b). Vale ressaltar que a metodologia adotada por esses pesquisadores consistiu na contagem direta dos leuccitos,

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diferindo da metodologia aplicada a esse trabalho que fez a contagem de forma indireta, conforme descrito em material e mtodos desse estudo. Segundo Feldman et al (2000), a resposta leucocitria uma ferramenta importante para anlise do estado de sade dos animas e tem papel relevante no desenvolvimento da imunidade humoral e celular. Tavares-Dias (2003) afirma que as diferenas no nmero de leuccitos ocorrem tanto entre as espcies quanto dentro da mesma espcie, podendo ser consideradas variveis individuais naturais e relacionadas espcie. Todavia as caractersticas sanguneas so reguladas em peixes telesteos pelas caractersticas ambientais. Assim esses fatores podem notadamente influenciar os parmetros hematolgicos dos peixes. Ainda segundo Tavares-Dias (2003), a simples avaliao quantitativa dos leuccitos pode sugerir que as espcies com elevado nmero dessas clulas poderiam apresentar mais capacidade de resposta de defesa que as demais. Entretanto, preciso considerar alm dessa avaliao, as atividades qualitativas, como a capacidade de produo e liberao de leuccitos para a circulao, a fagocitose e o poder microbicida em cada espcie. Nesse estudo, conforme se pode observar na Tabela 3, os valores de trombcitos totais foi de 5,2 (x103)/L. Alm de sua participao na hemostasia, os trombcitos so clulas que desempenham relevante papel nos mecanismos de defesa orgnica, evidenciado por sua presena marcante nos processos inflamatrios, e na atividade fagocitria (TAVARES-DIAS, 2003). Merlini (2006) em estudos com tilpia do Nilo, veridicando a ao do ncleo homeoptico Homeopatila100 sobre os parmetros hematolgicos, encontrou maior percentagem de trombcitos nas extenses sanguneas.

Histopatolgico

Os clculos dos valores mdios das alteraes histopatolgicas (VMA) esto apresentados na Tabela 4. Conforme constatado, o dano no tecido branquial dos animais com amyloodiniose variou do grau discreto ao severo.

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TABELA-4. Valores mdios de alterao histopatolgica (VMA) e seu significado (entre parnteses) para as leses em brnquias de juvenis de bijupirs coletados de unidade de aquicultura.

Leses Hiperplasia e hipertrofia das clulas branquiais Fuso incompleta das lamelas secundrias Fuso completa das lamelas Descolamento Ruptura do epitlio sem hemorragia Ruptura do epitlio com hemorragia Dilatao do seio venoso Aneurisma Infiltrado inflamatrio Presena de muco Desarranjo lamelar Necrose Presena do parasito

Mdia 3,8 (severa) 2,4 (intensa) 1,7 (moderada) 3,1 (severa) 0,5 (discreta) 1,1 (moderada) 3,3 (severa) 0,7 (discreta) 0,7 (discreta) 3,3 (severa) 0,4 (discreta) 0,8 (discreta) 0,2 (discreta)

As anlises histopatolgicas das brnquias dos peixes experimentais demonstraram graus de frequncia variados, o que segundo Paperna (1980), pode estar associado ao nvel de severidade da infestao pelo Amylodinium. A hiperplasia do epitlio respiratrio acompanhada de fuso lamelar (Fig. 2A) foi uma alterao, em resposta ao persistente do parasito, registrada com muita frequncia nos cortes histolgicos, de forma focal disseminada (Fig. 2B). Essas alteraes tambm foram registradas de maneira muito evidente comprometendo as regies apicais de lamelas adjacentes (Fig. 2C). O descolamento do epitlio respiratrio, provavelmente em decorrncia de alterao edematosa prvia, foi observado muito frequentemente nas lamelas branquiais dos peixes analisados (Fig. 2D). A congesto vascular, com presena marcante nas seces analisadas, provocou dilatao do seio venoso (Fig. 2E), e dilatao do canal vascular, em muitos casos gerando a formao de aneurismas (Fig. 2F). A congesto do seio venoso, em alguns segmentos branquiais analisados, seguida de descolamento e de ruptura do epitlio lamelar, promoveu a formao de hemorragia ao longo dos espaos interlamelares (Fig. 3G). Contrariamente, pode-se observar que, em algumas

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regies, apesar de ocorrer ruptura com necrose do epitlio respiratrio, aliada reao inflamatria linfoctica, no houve acompanhamento de hemorragia (Fig. 3H). A presena de acmulos sanguneos em regies interlamelares, promoveu, no raras vezes, o desarranjo lamelar onde as estruturas filamentosas encontravam-se comprimidas, delgadas e sinuosas (Fig. 3I). As formas de trofontes do parasito foram vistas principalmente entre as lamelas respiratrias ou ligadas a estas, na sua regio apical ou lateral, demonstrando tamanhos variados (Fig. 3J,K,L). Nesse estgio, o parasito mostrou-se de forma arredondada ou ovide, envolvida por uma membrana, demonstrando grande ncleo esfrico basoflico, circundado por glbulos de protenas e por substncia refringente e citoplasma eosinoflico, conforme descrito por Brown (1931); Brown e Hovasse (1946). Trabalhos sobre as alteraes desencadeadas pelo Amyloodinium so muito escassos e os existentes no apresentam resultados quantitativos das leses provocadas pelo parasito.

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Figura 2. Seces de brnquias de bijupirs infestados com Amyloodinium. (A) hiperplasia e fuso de lamelas (1000X. HE); (B) hiperplasia e fuso focal disseminada (40X.HE); (C) fuso lamelar apical (1000X. HE); (D) descolamento do epitlio respiratrio (1000X. HE); (E) dilatao do seio venoso (1000X. HE); (F) aneurisma (40X. HE).

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Figura 3. Seces de brnquias de bijupirs infestados com Amyloodinium. (G) congesto, dilatao do canal venoso, descolamento e ruptura do epitlio com hemorragia (1000X. HE); (H) rompimento do epitlio sem hemorragia (seta amarela) e infiltrado linfoctico (seta vermelha) (1000X.HE);(I) acmulo sanguneo interlamelar com desarranjo lamelar (40X.HE); (J) trofonte entre lamelas, hiperplasia e fuso com leve descolamento (1000X.HE); (K,L) trofontes atracadas a regio apical de lamelas hiperplsicas e fusionadas (1000X.HE).

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O clculo o IAH, permitiu perceber que as leses revelaram danos severos s brnquias. Essas alteraes, contudo, segundo Poleksic et al (1994), no esgota a capacidade de funcionamento do rgo, podendo regredir, caso seja eliminado o agente agressor. Caso haja persistncia, essas leses podem induzir perda da funo do rgo. A hiperplasia, embora no comprometa a funo do rgo, pode com sua evoluo provocar a fuso das lamelas e isso levar a morte do peixe por asfixia. Os valores de IAH determinados para as brnquias dos peixes iniciais com infestao por Amyloodinium variaram de 6,00 a 138,00, com mdia de 76,8. Os achados histopatolgicos observados no bijupir forma semelhantes aos registrados por Paperna (1980) nas espcies de robalo e dourado e por Ramos e Oliveira (2001) no pregado. Para Lom e Lawler (1973) a elevada patogenicidade que o Amyloodinium empresta ao peixe devido aos danos provocados pelos rizpodes ao se inserir na clula do hospedeiro, como tambm pelo processo de alimentao do parasito no citoplasma de sua clula. Paperna (1980), entretanto, considera que alm do prejuzo imediato causado s clulas parasitadas e s adjacentes ao local de fixao do parasito, graves alteraes histopatolgicas generalizada ocorrem ao longo e todo o tecido epitelial das brnquias. A hiperplasia epitelial, seguida por alteraes edematosas, assim como degenerao celular e necrose extensas, so muito mais prejudiciais s brnquias e, consequentemente, a atividade fisiolgica dos peixes, do que o dano focal induzida pelo parasito. Podendo essas alteraes estar relacionadas excreo de substncias txicas ou irritantes pelo parasito. Para Lom e Lawler (1973) o A. ocellatum injeta fluidos lticos ou digestivos atravs do seu stomatopode nas clulas parasitadas. provvel que as alteraes degenerativadas e necrticas sejam mais

comprometedoras do desempenho fisiolgico que a agresso focal induzida pela estrutura de fixao do parasito. Esse estudo no permitiu afirmar quanto a atividade histoltica do parasito sobre a clula hospedeiro. As leses descritas nesse trabalho no so especificamente induzidas pelo Amyloodinium, visto que tambm se manifestam nas hipeirinfestao por outros ectooparasitos, como o Ichthyophthirius multifiis (HINES; SPIRA, 1974) e Chilodonella hexasticha (PAVANELLI et al, 2008). Segundo Paperna (1980), a diminuio ou a completa ausncia de clulas mucosas consstitue uma caracterstica um pouco mais especfico da patologia do A. Ocellatum. A maioria das infestaes por ectoparasitos induz hiperplasia das clulas mucosas no tecido branquial (HINES; SPIRA, 1974). No entanto, em I. multifiis e tambm em infestaes Argulus e Ergasilus, aps um perodo de hiperplasia de clulas

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mucosas, ocorre depleo dessas, provavelmente isso se justifique pelo esgotamento do tecido em gerar clulas mucosas (HINES; SPIRA, 1974) Segundo Paperna (1980), essa depleo pode ser uma caracterstica principal induzida pelo Amyloodinium , devido a um declnio na capacidade de diferenciao celular do epitlio em proliferao, resultando na produo exclusiva de clulas epidrmicas no diferenciadas. Neste estudo, apesar gravidade das leses nas brnquias, tal achado no pode ser confirmado, corroborando com os dados de Paperna (1980).

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CONCLUSO

O experimento assume importncia por se tratar dos primeiros estudos nessa espcie de peixe que se destaca como potencial candidato ao cultivo. Os parmetros hematolgicos analisados serviro para compor os valores de referncia para bijupirs parasitados. As leses histolgicas demonstram grau de patogenicidade variado sobre o epitlio branquial se manifestando entre o discreto ao severo. Dentre as leses identificadas, a congesto foi observada em todas as seces de brnquias analisadas. A presena do parasito nas brnquias estava sempre relacionada ao grau de leso nesse local e foi confirmada no exame a fresco pelos achados histopatolgicos. Os parmetros avaliados nesse trabalho auxiliaro futuras pesquisas relativas avaliao da sanidade dos peixes.

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REFERNCIAS

ABREU, P.C. et al. Recurrent amyloodiniosis on broodstock of the Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus: dinospore monitoring and prophylactic measures. Journal of the World Aquaculture Society. v.36, n.1, p.42-50, 2005. ALVARES-PELLITERO, P., SITJA-BOBADILLA, A.; FRANCO-SIERRA, A. Protozoan parasites of wild and cultured sea bass, Dicentrarchus labrax (L.), from the Mediterranean area. Aquaculture and Fisheries Management.,v.24, p.101-108,1993. AMLACHER, E. Diseases Caused by Dinoflagellates. In: Textbook of Fish Diseases. Translated by Conroy & Herman. TFH Publications, Inc., New Jersey, U.S.A., 157-162, 1970. BOWER, C.E. The Basic Marine Aquarium. C.H. Thomas, Springfield, Illinois, 1983. BROWN, E.M. Note on a new species of dinoflagellate from de gills and epidermis of marine fishes. Proceedings of the Society of Zoology of London, p.341-346, 1931 BROWN, E.M. On Oodinium ocellatum Brown, a parasitic dinoflagellate causing epidemic disease in marine fish. Proceedings of the Zoological Society of London. v.3, p.583-607, 1934. BROWN, E.M.; HOVASSE, R. Amyloodinium ocellatum (Brown, 1931), a peridian parasiticon marine fishes. Proceedinds of the Zoological Society of London. v. 116, p. 3346, 1946. BUSH, A.O.; LAFFERTY, K.D.; LOTZ, J.M.; SHOSTAK, A.W. Parasitology meets ecology on its own terms. Margolis et al Revisited. J. Parasitol., v. 83. N. 4, p. 575-583, 1997. CARDEILHAC, P.T.; WHITAKER, B.R. Copper treatments: uses and precautions. Vet. Clin. North Am., v.18, p.435-448, 1988. CARVALHO-VARELA, M. Parasitos e parasitoses em piscicultura. Lisboa: Ordem dos Mdicos Veterinrios, 2005. CHEUNG, J. P; NIGRELLI, R. F; RUGGIERI,,G; D. Oodinium ocellatum (Brown, 1931) (Dinoflagellata) in the kidney and other internal tissues of pork fish, Anisotremus virginicus (L.). Journal of Fish Diseases, n.4, 523-525, 1981. COBB, C.S.; LEVY, M.G.; NOGA, E.J. Acquired immunity to amyloodiniosis in associated with an antibody response. Diseases of Aquatic Organisms, n.34, p. 125-33, 1998. COBEA. Princpios ticos na experimentao animal (1991). Disponvel em: <http://www.cobea.org.br/etica.htm#3>. Acesso em: 20 jan. 2009. DENSON, M. R.; STUART, K. R. and SMITH, T. I. J. Effects of Salinity on Growth, Survival, and Selected Hematological Parameters of Juvenile Cobia Rachycentron canadum. Journal of the World Aquaculture Society. v. 34, n. 4 p. 496-504, 2003. DICKERSON, H.W.; CLARK, T.G. Immune response of fishes to ciliates. Annual Review of Fish Diseases, v. 6, n. 1, p.107-120, 1996. EIRAS, J. C. Protozoa. In: Elementos de Ictioparasitologia.Fundao Eng. Antnio de Almeida, Porto, Portugal, 15-123, 1994. FELDMAN, D. M.; ZINKM J. G.; JAIN, N. C. Schalms veterinary hematology. 5. ed. Philadelphia: Donna Balado, 2000. GALLET DE SAINT-AURIN, D. Diseases of the sea bass Dicentrarchus labrax in intensive rearing programs in Martinique French West Indies. Proceedings of the Gulf and Caribbean Fisheries Institute v.38, p. 144-163,1987.

69

GHITTINO, P.S.; BIGNAMI, I.S.; ANNIBALI, A.; BONI, L. First record of serious oodiniasis in seabass (Dicentrarchus labrax) intensively reared in brackish water. Rivista Italiana Piscicoltura e Ittiopatologica, n.15, p. 122-127, 1980. GIAVANNE, R. Some parasitic and other diseases occurring in sea-bass (Dicentrarchus labrax L.) broodstock in Italy. Bulletin of the European Association of Fish Pathologists, n. 8, p.45-46. 1988. GOLDENFARB, P.B. et al. Reproducibility in the hematology laboratory: the microhematocrit determination. Amer. J. Clin. Path., 56:35-39, 1971. HINES, RON S. and SPIRA, DAN T., Ichthyophthiriasis in the mirror carp Cyprinus carpio (L.) III. Pathology. J. Fish Biol., n.6, p.189-196, 1974. LAWLER, A.R. Dinoflagellate (Amyloodinium) infestation of pompano. In: Sindermann, C.J. (ed.) Disease Diagnosis and Control in North America Marine. Aquaculture, Amsterdam: Elsevier, p. 257-264, 1977. LOM, J.; LAWLER, A.R. An ultrastructural study on the mode of attachment in dinoflagellates invading the gills of Cyprinodontidae. Protistologica n. IX, p. 293-309., 1973. LOM, J.; DYKOV, I. Protozoan parasites of fishes. Aquaculture and fisheries science. Netherlands: Elsevier Science Publishers, v.26, 1992. LUNA, L. G. Manual of histologic staining methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3 ed. New York: Mac Graw Hill, 1968, 258 p. MERLINI, L. S. Utilizao de Homeopatila 100 em dieta para tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus). 2006. 50 f. Tese (Doutorado em Zootecnia) Universidade Estadual de Maring. Maring. MONTGOMERY, D.; BROCK, J. A. & SATO, V. T. Using hydrogen peroxide for Pacific threadfin infected by Amyloodinium ocellatum. Regional Notes, Center for Tropical and Subtropical Aquaculture. The Oceanic Institute and the University of Hawaii, n.10, v.2, p. 45,1999. NIGRELLI, R.F. The morfology, cytology, and life history of Oodinium ocellatum Brown, a dinoflagellate parasitic on marine fishes. Zoolgica, n.21, p.129-164, 1936. NOGA, E.JFish Disease: Diagnosis and Treatment. Iowa State University Press, Ames, Iowa,1996, 376 p. NOGA, E.J., Fan, Z. and Silphaduang, U. Histone-like proteins from fish are lethal to the parasitic dinoflagellate Amyloodinium ocellatum. Parasitology 123, 57-65, 2001. PAPERNA, I. Amyloodinium ocellatum (Brown ,1931) (Dinoflagellida) infestations in cultured marine fish at Eilat, Red Sea: epizootiology and pathology. Journal of Fish Diseases, v.3, p. 363-372, 1980. PAPERNA, I.; LAURENCIN,B. Parasitic infections of sea bass, Dicentrarchus labrax and gilt head sea bream, Sparus aurata, in maricultura facilities in France. Aquaculture, n.16, p.173175, 1979. PAVANELLI, G.C.; EIRAS, J. C.; TAKEMOTO,R.M.; Doenas de peixes: profilaxia, diagnstico e tratamento. Maring: EDUEM, 2008. PITOMBEIRA, S.M.; MARTINS, J. M. Hematology. Of Spanish mackerel, Scomberomorus maculatus. Copeia, n.1, p. 182-186, 1970. PITOMBEIRA, S.M. et al. Dados hematolgicos da cavala (Scomberomurus cavalla (Cuvier), do nordeste brasileiro. Boletim de Zoologia e Biologia Marinha, n.30, p. 843-852, 1976.

70

POLEKSIC, V.; MITROVIC-TUTUNDZIC, V. 1994. Fish gills as a monitor of sublethal and chronic effects of pollution. In: MLLER, R.; LLOYD, R. (Eds.) Sublethal and Chronic Effects of Pollutants on freshwater fish. Oxford: Fishing Nrws Books, C. 30, p. 339-352, 1994. PROPHET, E. B. et al. AFIP. Laboratory Methods in Histotechnology. Washington: Am Registry of pathology, 1992, 278 p. RAMOS, P.; OLIVEIRA, J.M. Amyloodiniosis in turbot, Psetta maxima. Revista Portuguesa de Cincias Veterinrias, n.46, p. 201-205, 2001. REED, P.; FRANCIS-FLOYD R. Amyloodinium infections of marine fish. Florida: Univerity of Florida. Florida Cooperative Extension Service. Fact Sheet VM-90,1994. RIBEIRO JUNIOR, J.I. Anlises estatsticas no SAEG. Viosa:UFV, 2001 SATHEESHKUMAR, P. et al. Measurement of heamatological and biochemical studies on wild marine carnivorous fishes from Vellar estuary, southeast coast of India, Comp. Clim. Pathol., 2010a. SATHEESHKUMAR, P. et al. Comparative investigation on heamatological and biochemical studies on wild marine teleost fishes from Vellar estuary, southeast coast of India, Comp. Clim. Pathol., 2010b. SCHWAIGER, J.; WANDE, R.; ADAM, S.; PAWERT,M.; HONNEN, W.; TRIEBSKORN, R. The use of histopathological indicators to evaluate contaminant-related stress in fish. Journal Aquatic Ecosystem Stress Recovery, 6:75-86,1997. SCOTT, P. Teraputica em acuicultura.In: BROWN, L. (Org.). Acuicultura para veterinarios: produccin y clnica de peces. Zaragoza: ACRIBIA, 2000. SINDERMANN, C. J., Disease and Parasite Problems in Marine Aquaria. In: Principal Diseases of Mrine Fish and Shell-fish. Second Edition. Academic Press, U.S.A., 259-277, 1990. SMITH, S.A. et al. Effect of serum from tilapia, Oreochmmis aureus, immunized with dinospoms of Amyloodinium ocellarum, on motility, infectivity and growth of the parasite in cell culture. Dis. Aquat. Org. v.15, p. 73-80, 1993. TAREEN, U.I. Parasitic infestations on cultured marine fish Acanthopagrus cuvieri (Sparidae), incidence and control. Special Publication of the European Mariculture Society, n.9, p. 85-90, 1986. TAVARES-DIAS, M. Variveis hematolgicas de telesteos brasileiros de importncia zootcnica. 2003. 209f. Tese (Doutorado em Aquicultura) Universidade Estadual Paulista, Centro de Aquicultura, Jaboticabal, So Paulo. TAVARES-DIAS, M.; FAUSTINO, C. D. Parmetros hematolgicos da Tilpia-do-Nilo Oreochromis niloticus (Cichlidae) em cultivo extensivo. Ars Veterinria, 14: 254-63,1998. TAVARES-DIAS, M.; MORAES, F. R. Caractersticas hematolgicas da Tilapia rendalli Boulenger, 1986 (Osteichthyes: Cichlidae) capturada em Pesque-Pague de Franca, So Paulo, Brasil. Bioscience J., 19(1):103-110, 2003. WINTROBE, M.M. Variations on the size and hemoglobin content of erythrocytes in the blood of various vertebrates. Folia Haemat., 51:32-49, 1934. WOO, P. T. K. Protective immune response of fish to parasitic flagellates. Annual Review of Fish Diseases, v.6, p.121-131, 1996.

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3.2 ARTIGO 2

Efeito do medicamento homeoptico Sulphur 30x sobre o desempenho zootcnico, alteraes parasitolgicas, parmatros hematolgicos e histopatolgicos de juvenis de bijupir (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766), infestados com Amyloodinium

Resumo

O objetivo desse estudo foi avaliar a eficcia do Sulphur sobre controle do Amyloodinium em bijupir, atravs da avaliao do desempenho, do ndice hepato-somtico, da prevalncia e incidncia parasitria, dos parmetros hematolgicos e das alteraes histopatolgicas. Os resultados de desempenho mostraram que os animais que receberam o medicamento homeoptico apresentaram maior sobrevivncia (p<0,05) e melhor convero alimentar (p<0,05) em relao ao grupo sem medicamento. O nmero de eritrcitos no grupo dos animais iniciais estava aumentado significativamente em relao aos grupos com e sem medio homeoptica. O VG foi significativamente maior no grupo homeoptico em relao ao grupo inicial. O VGM foi significativamente maior no grupo que recebeu a medicao e no grupo que no recebeu, quando relacionado ao grupo inicial. Houve diferena significativa entre o grupo com medicao homeoptica e o grupo dos animais iniciais quanto ao nmero de leuccitos. Houve aumento na prevalncia e na intensidade parasitria no muco e nas brnquias dos animais submetidos ao perodo de confinamento experimental. No houve diferena no nmero de parasitos no muco cutneo entre os tratamentos. Os resultados de VMA apresentaram diferena (p<0,05) entre o grupo homeopatico e os animais iniciais para o infiltrado, enquanto que no grupo sem medicao foi identificada diferena (p<0,05) em relao ao grupo inicial para o desarranjo lamelar. Embora no tenha havido diferena estatstica entre tratamentos para os valores de IAH, o significado das alteraes destacou uma possvel ao protetora do medicamento homeoptico sobre o agravamento das leses.

PALAVRAS-CHAVE: Amyloodiniose; Aquicultura; Cobia; Homeopatia; Parasito.

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Effects of the homeopathic Sulphur 30X on performance, parasitologics changes, hematological paramatros and histopathology of young bijupir (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766), infested with Amyloodinium

Abstract

The aim of this study was to evaluate the effectiveness of the Sulphur in control of Amyloodinium in bijupir by evaluating the performance of the hepatosomatic index, of parasite prevalence and incidence, the haematological parameters and histopathological. The performance results showed that animals receveid the homeopathic medicine showed higher survival (p <0.05) and converting food better (p <0.05) compared to those without medication. The number of erythrocytes on the initial group of animals was increased significantly in the groups with and without measurement homeopathy. The CV was significantly higher in homeopathic group compared to the original group. The MCV was significantly higher in the group receiving the medication and the group that was not, when related to the initial group. There were significant differences between the group with homeopathic and initial group of animals on the number of leukocytes. There was an increase in the prevalence and parasitic intensity in the mucus in the gills of animals subjected to experimental period of confinement. There was no difference in the number of parasites in the skin mucus between treatments. Results VMA differences (p<0.05) among the homeopathic group and initial animals for the infiltration, while the group without medication difference was observed (p <0.05) compared to the initial group for the lamellar disarray. Although there was no statistical difference between treatments for the values of HAI, the significance of the changes highlighted a possible protective action of homeopathic medicine on the worsening of the lesions.

KEYWORDS: Amyloodiniose; Aquaculture; Cobia; Homeopathy; Parasite.

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INTRODUO

A aquicultura uma atividade agropecuria de produo em cativeiro de organismos aqutico, que segundo a FAO (2009) seu crescimento se faz em um ritmo mais acelerado que qualquer outro setor de produo de alimentos de origem animal, alcanando taxa mdia de 8,8% ao ano. O confinamento dos peixes em altas densidades de estocagem, peculiar ao modelo intensivo de criao, favorece o aparecimento de epizootias. Essas densidades, aliada ao tipo de alimentao, degradao de qualidade da gua, s formas de tratamento e s prticas de manejo, prprias dos modelos intensivos, provocam nos peixes estresse fisiolgico (estresse crnico) que se reflete na sua homeostasia, ocasionando diminuio da capacidade de resposta imunolgica. Consequentemente gera uma menor resistncia as infeces de variadas etiologias, que podem provocar grave ameaa ao sucesso da explorao, destacando-se entre elas as parasitrias, (PAVANELLI et al, 2008). O Amyloodinium ocellatum, Brown, 1931 se destaca como o mais importante patgeno que pode trazer srias ameaas aquicultura marinha (EIRAS et al 2006; PAPERNA, 1980; NOGA et al 1991). Existem diversos produtos qumicos usados por muitos anos no controle dos surtos do Amyloodinium, contudo estes no tm comprovadas completamente sua eficcia, assim como, sua segurana para os animais-alvo, sendo o cobre o mais amplamente utilizado (BOWER, 1983; CARDEILHAC; WHITAKER, 1988; REED; FRANCIS-FLOYD, 1994). O comportamento qumico do cobre na gua complexo e pode ser altamente txico aos peixes, e invertebrados marinhos (SCOTT, 2000), alm do que contaminante comum do ambiente aqutico, exercendo diferentes efeitos agudos e crnicos sobre populaes de peixes (PICKERING; POTTINGER, 1987). Assim, o uso da homeopatia, sistema de interveno mdica baseada na aplicao de substncias diludas e no princpio das semelhanas, no tratamento de animais aquticos uma alternativa a ser avaliada, uma vez que substncias ultradiluidas no causam danos aos peixes e nem ao meio ambiente. Segundo Arenales (2006), o uso da homeopatia alm de curar, favorece o desenvolvimento dos animais e melhora o desempenho zootcnico dos animais de produo. Baseado na lei da similitude, o medicamento capaz de curar, quando, uma vez experimentado no individuo so, desencadeia sintomas semelhantes aos sintomas deflagrados pela doena. Segundo Hahnemann (2007) para se alcanar o sucesso no tratamento de uma

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enfermidade necessrio administrar um princpio medicamentoso que gere no organismo sadio os sintomas da molstia que se quer tratar. As amyloodinioses, de acordo com a homeopatia, podem ser consideradas doenas crnicas, originadas de um miasma psrico com surgimento de sintomas de forma hiperaguda, aguda ou crnica e para o seu tratamento deve ser escolhido o medicamento que apresente a maioria dos sintomas da enfermidade. Os principais sintomas produzidos pela psora se expressam principalmente na pele e nas mucosas, estando associados diretamente s parasitoses, ocorrendo a manifestao de outros sinais clnicos, com destaque para distenso abdominal, palidez da face e debilidade geral (HAHNEMANN, 2007). Para Almeida (2007), a imagem patogensica do Sulphur, relaciona esse medicamento aos indivduos predispostos s parasitoses cutneas, predominantemente em animais caracterizados pela predisposio ditese psrica, a qual determina a receptividade do animal infestao parasitria e oferece condies para sobrevivncia e reproduo do parasito. A seleo do medicamento homeoptico para uso em animais de produo feita a partir da identificao dos sintomas da populao acometida por uma enfermidade, ou seja, busca-se identificar o Gnio Epidmico. Pretendeu-se buscar um medicamento para o tratamento dos peixes acometidos por amyloodiniose que apresentasse em sua patogenesia a maioria dos sintomas desta doena. O Sulphur foi o medicamento de escolha nesse estudo, por ser o principal antipsrico e apresenta sintomas semelhantes parasitose. A patogenesia do Sulphur est associada a alguns sintomas relacionados com a amyloodiniose como ao irritante sobre a pele e mucosas, olhos congestionados com vermelhido, debilidade fsica, apatia e emagrecimento (VANNIER; PORTIER 1987; LATHOUT, 2010). A literatura corrente parece no fazer referncia aplicao da homeopatia no tratamento e cura das doenas de organismos aquticos. Assim, nesse estudo, juvenis de bijupir naturalmente infestados com Amyloodinium, foram submetidos ao tratamento com medicamento Sulphur para avaliao do desempenho, do ndice hepatosomtico, da prevalncia e incidncia parasitria, dos parmetros hematolgicos e das alteraes histopatolgicas.

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MATERIAL E MTODOS

O experimento foi realizado no Laboratrio de Aquicultura e Sanidade de Organismos Aquticos (LASOA), do Departamento de Produo Animal, da Escola de Medicina Veterinria da Universidade Federal da Bahia (UFBA), no perodo de 16 de maio a 16 de julho de 2010.

Animais experimentais

Os juvenis de bijupirs foram doados pela fazenda Oruabo pertencente a Bahia Pesca, localizada no municpio de Santo Amaro da Purificao-BA.

Experimento inicial

Dentre os 63 juvenis de bijupirs foi retirada uma amostra de 27 que foram anestesiados com Eugenol (Biodinmica) numa concentrao de 0,5 mL/L e em seguida foi realizada a colheita de sangue, por puno da veia caudal, para anlises hematolgicas no setor de Hematologia do Hospmev (UFBA). Aps colheita de sangue os peixes foram eutanasiados por seco medular para coleta de material parasitolgico e histopatolgico. Todos os procedimentos utilizados estiveram de acordo com os Princpios ticos na Experimentao Animal, recomendados pelo Colgio Brasileiro de Experimentao Animal (COBEA, 1991).

Delineamento experimental

Um grupo de 36 bijupirs com peso mdio de 89,7g e comprimento 22,97cm, foram distribudos aleatoriamente em 12 caixas de poliestireno de 500L, numa densidade de 3 peixes por caixa em dois tratamentos e seis repeties. Um grupo-tratamento recebeu o medicamento homeoptico, sendo alimentados com rao comercial especfica para peixes carnvoros, fornecida duas vezes ao dia ad libitum, contendo Sulphur na 30 diluio decimal e um grupocontrole alimentado com a mesma rao sem adio do medicamento. As caixas receberam sistema de aerao artificial mantido por meio de sopradores e renovao de 20% da gua diariamente.

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Variveis indicadoras da qualidade de gua

Foi realizado diariamente o monitoramento dos parmetros de oxignio dissolvido (mg/L) com oxmetro AT 170, temperatura (C) com termmetro AT 170, pH com peagmetro TECNAL, salinidade com refratrmetro RTS-101ATC. A temperatura foi mensurada duas vezes ao dia, s 09h e s 15h.

Avaliao de desempenho zootcnico Para a avaliao dos dados zootcnicos foi feita a tabulao em planilha eletrnica e anlise de varincia, com a utilizao do pacote estatstico SAEG Sistema de Anlises Estatsticas e Genticas, desenvolvido pela Universidade Federal de Viosa (SAEG, 2001). Assim, os animais foram contados, pesados e medidos individualmente para a determinao dos parmetros relativos ao peso final mdio e comprimento final mdio para obteno da taxa de ganho de peso, taxa de crescimento especfico e sobrevivncia. Procedeuse a necropsia para a retirada do fgado que foi pesado para obter-se o ndice hepato-somtico (IHS). O ganho de peso dos animais foi determinado pela diferena entre o peso inicial e o peso final: GP= peso final peso inicial. Determinou-se o comprimento final pela diferena entre os valores do comprimento de cada peixe ao final do experimento e o comprimento no incio. O valor da converso alimentar aparente (CAA) foi determinado com base na equao: CAA= (peso da rao fornecida no perodo) (peso final peso inicial)-1 O ndice hepato-somtico foi calculado pela razo entre o peso do fgado e o peso do peixe vivo multiplicado por 100: IHS= (Peso fgado em grama) / Peso final em grama) X 100 A taxa de sobrevivncia foi calculada pelo nmero de animais que iniciaram e que finalizaram o experimento em cada tratamento: Sobrevivncia = n animais incio do experimento n animais final do experimento

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Preparo da rao com medicamento

Um volume de 15 gotas do Sulphur 30X foi adicionado em 150mL de lcool e em seguida adicionado por asperso rao, aps a pesagem da mesma. A rao foi mantida por 24 horas em temperatura ambiente, sombra e periodicamente foi revolvida para evaporao do lcool e acondicionada em potes plsticos, fornecida aos animais diariamente.

Colheita de sangue

No inicio e ao trmino do perodo experimental, com durao de 60 dias, foi feita a biometria dos peixes para avaliao do ganho de peso, crescimento e taxa de sobrevivncia. Foram colhidas amostras de 1,0 mL de sangue, de cada peixe, em seringa com anticoagulante EDTA a 10%.

Anlises hematolgicas Cada amostra de sangue contendo EDTA foi destinada s determinaes da protena total (feita com refratmetro RTS-101ATC), contagem de eritrcitos em cmera hematimtrica de Neubauer (L de sangue) (modelo CC510 CELM), aps diluio em soluo de cloreto de sdio (0,65%), volume globular (VG) pela tcnica do microhematcrito (GOLDENFARB et al, 1971) e hemoglobina (Hb) pelos procedimentos recomendados por Collier (1994). As constantes corpusculares do volume globular mdio (VGM), e da concentrao da hemoglobina globular mdia (CHGM), tiveram seus valores calculados de acordo com Wintrobe (1934). A contagem dos leuccitos e trombcitos totais foi realizada nas extenses sanguneas, coradas segundo mtodo rpido May-Grunwald-Giemsa-Wrigth (TAVARES-DIAS;

MORAES, 2003). Os nmeros totais de trombcitos e leuccitos foram calculados, por mtodo indireto, na extenso, conforme Tavares-Dias e Faustino (1998).

Contagem de leuccitos e trombcitos totais

Foi quantificado o nmero de leuccitos e de trombcitos totais na extenso sangunea em relao a 2000 eritrcitos, homogeneamente distribudos nos campos da extenso e

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juntamente com os valores referentes contagem total de eritrcitos (L de sangue) foram aplicados as seguintes frmulas: leuccitos na extenso sangunea x contagem eritrcitos (L) 2.000 eritrcitos na extenso sangunea

Leuccitos (L) =

Trombcitos (L) = trombcitos na extenso sangunea x contagem eritrcitos (L) 2.000 eritrcitos na extenso sangunea

Anlise parasitolgica

A ocorrncia do Amyloodinium sp nos juvenis de bijupir foi avaliada pelo nmero total de parasito em cada peixe afetado, cujos dados foram tabulados em planilha eletrnica e submetidos a anlise de varincia, com a utilizao do pacote estatstico SAEG (RIBEIRO JUNIOR, 2001). Tambm foram feitos os clculos de prevalncia e de intensidade parasitria mdia. Aps a eutansia de todos os peixes, efetivou-se a coleta do muco da superfcie corporal e das brnquias. O muco e brnquias foram colocados em potes plsticos e fixados em formalina 5% para a observao e quantificao dos parasitos. No Laboratrio de Sanidade de Organismos Aquticos (LASOA-EMEV/UFBA) os potes contendo muco e brnquias ficaram em repouso aps 24h, sendo o sobrenadante descartado e acrescentado lcool 70%. Em seguida, o contedo dos potes foi homogeneizado retirando-se trs alquotas para observao em cmara de Mac Mster. Em seguida o resultado foi estimado pelo volume fixado. Dados relativos prevalncia e intensidade mdia foram calculados segundo Bush et al (1997), como se segue:

Taxa de prevalncia =

nmero de peixes parasitado nmero de peixes examinados

Intensidade mdia =

nmero total de parasitos nmero de peixes infestados

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Anlise Histopatolgica

No Laboratrio de Anatomia Patolgica (LABAP/HOSPMEV) fragmentos de brnquias foram colocados em recipientes contendo soluo fixadora de formol neutro, tamponado a 10%, por um perodo de 48 horas e, posteriormente submersos em soluo de cido frmico a 10% durante 48 a 72 horas para descalcificao. O procedimento histolgico em incluso em parafina foi realizado de acordo com os mtodos convencionais (PROPHET et al, 1992). Seces de 4,0 m de espessura foram coradas pela hematoxilina-eosina (H-E) (LUNA, 1968) para posterior anlise. Foram analisadas duas seces histolgicas dos segmentos branquiais para todos os animais. A presena de alteraes histopatolgicas para cada brnquia foi avaliada semiquantitativamente de duas formas. Uma delas foi pelo clculo do valor mdio de alterao (VMA), baseado na incidncia das leses, mtodo modificado de Schwaiger et al (1997). Para esse clculo foi atribudo um valor numrico para cada animal em uma escala de grau conforme apresentado no Quadro 1.
QUADRO 1- Pontuao e ocorrncia das alteraes nas brnquias, modificado de Schwaiger et al (1997) Pontuao 0 (zero) 1 (discreta) 2 (moderada) 3 (intensa) 4 (severa) Ocorrncia das alteraes alterao no observada entre 1 5 ocorrncias entre 6 10 ocorrncias entre 11 15 ocorrncias acima de 15 ocorrncias

A partir desses valores de pontuao, foi calculada uma mdia do grau de alterao para cada grupo e foram classificados em discreto (0,1 a 1,0), moderado (1,1 a 2,0), intenso (2,1- 3,0) e severo (3,1- 4,0). A outra forma de avaliao das alteraes histopatolgicas consistiu no clculo do ndice de alterao histopatolgica (IAH), baseado na severidade das leses, modificado de Poleksic e Mitrovic-Tutundzic, 1994. As alteraes foram classificadas nas seguintes estgios:

estgio I : alteraes que no comprometem o funcionamento do tecido; estgio II : alteraes mais severas e que prejudicam o funcionamento do rgo; estgio III : alteraes muitos severas e irreversveis.

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O valor do IAH foi calculado para cada peixe com aplicao da frmula seguinte: IAH = (1 X SI) + (10 X SII) + (100 X SIII),

Sendo que, I, II e III correspondem ao nmero de alteraes no estgio I, II e III, respectivamente. Valores de IAH foram divididos em cinco categorias, conforme mostrado no Quadro 2.
QUADRO 2 Categorias de IAH baseada na severidade das leses e funcionamento do rgo (POLEKSIC; MITROVIC-TUTUNDZIC, 1994) Categorias 0 - 10 11 20 21 50 51 100 >100 Severidade das alteraes Funcionamento normal do rgo Leve dano ao rgo Moderada alterao no rgo Severa leso no rgo Dano irreversvel ao rgo

Este ndice permitiu a avaliao da severidade das leses branquiais, dos peixes experimentais. No Quadro 3 esto apresentadas as alteraes patolgicas quanto ao tipo e estgio segundo Poleksic e Mitrovic-Tutundic (1994).

Quadro 3. Classificao das alteraes histopatolgicas das brnquias quanto ao tipo das leses e dos estgios em que se inserem de acordo com Poleksic e Mitrovic-Tutundic (1994) ALTERAOES HISTOPATOLGICAS DAS BRNQUIAS Hipertrofia e hiperplasia do epitlio brnquia Descolamento Hiperplasia do epitlio lamelar Desarranjo lamelar Fuso incompleta de vrias lamelas Fuso completa de vrias lamelas Ruptura do epitlio lamelar sem hemorragia Ruptura do epitlio lamelar com hemorragia Necrose Alteraes vasculares/inflamatrias Dilatao do seio sanguneo Congesto vascular Aneurisma lamelar Infiltrado mononuclear Parasitos Branquiais Presena de parasito ESTGIO I I I I I II II III I I II I I

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Anlise estatstica

Para as anlises estatsticas, os resultados numricos das variveis de desempenho zootcnico foram submetidos ao teste t a 5%. As variveis hematolgicas, parasitolgicas, foram submetidas anlise de varincia e teste de mdia (Tukey), em nvel de 5%. Os valores de IAH e VMA, calculados conforme escala de valores pr-determinada, foram analisados por teste no-paramtrico de Kruskall-Wallis, tambm a 5%. Para isso foi usado o pacote estatstico SAEG (RIBEIRO JUNIOR, 2001).

RESULTADOS E DISCUSSO

Variveis de qualidade de gua

A anlise dos parmetros de qualidade da gua, relativas temperatura, salinidade, ao pH, ao oxignio dissolvido, no revelou variao, conforme apresentado na Tabela 1. Vale ressaltar que as caixas encontravam-se dentro de um mesmo ambiente.

TABELA 1. Valores mdios e desvio-padro de salinidade, Oxignio dissolvido, pH, temperatura pela manh e tarde da gua de manuteno dos peixes parasitados, tratados com homeopatia ou sem. Varivel analisada Salinidade (g/L) Oxignio dissolvido (mg/L) Ph Temperatura matutina (C) Temperatura vespertina (C) Peixes tratados com homeopatia 30,45 1,65 7,25 0,82 8,57 0,47 24,51 1,25 24,88 1,36 Peixes sem medicao 30,70 1,84 7,35 0,96 8,63 0,45 24,34 1,17 24,78 1,31

Variveis de qualidade de gua no apresentaram diferena significativa entre os tratamentos e esto dentro dos valores de referncia para a espcie segundo Chang (2003) e Chen et al (2007).

Desempenho zootcnico

As Tabelas 2 e 3 apresentam as mdias dos resultados de desempenho zootcnico dos animais submetidos aos tratamentos com medicao homeoptica e sem medicao.

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TABELA 2. Sobrevivncia, biomassa final, peso mdio final, ganho de peso mdio e ganho de peso dirio dos juvenis de bijupir submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica Sobrevivncia (%) 94,4 66,7 0,02 Biomassa final (g) 471,7 375,8 0,22 Peso mdio final (g) 165,2 144,5 0,31 Ganho de peso mdio (g) 75,5 54,8 0,31 Ganho de peso dirio (g) 1,3 0,9 0,31

Tratamento Homeopatia S/medicao Valor-P

TABELA 3. Consumo alimentar mdio, converso alimentar aparente e ndice hepato-somtico dos juvenis de bijupir submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica Comprimento final 27,7 26,9 0,44 Consumo mdio (g) 107,3 124,4 0,87 Converso alimentar aparente 1,4 3,0 0,002

Tratamento Homeopatia S/medicao Valor-P

ndice hepato-somtico 2,85 2,69 0,30

Como observado nas tabelas 2 e 3 foram detectadas diferenas significativas (p<0,05) para a sobrevivncia e para a converso alimentar aparente para o grupo que recebeu tratamento homeoptico. A sobrevivncia dos animais que receberam o medicamento homeoptico foi de 94,4% o que significa uma taxa elevada. Watanabe et al (1990) consideram que valores de sobrevivncia prximos a 93,5% so altamente significativos para alevinos de tilpia. O medicamento homeoptico no presente estudo foi capaz de impedir o estresse ambiental e fisiolgico nos peixes desencadeados pela situo de confinamento. Segundo Val et al (2004) o estresse produzido por um fator anbiental, fsico ou biolgico que requer ajustes fisiolgicos e/ou bioquimicos, resultando numa diminuico da capacidade de sobrevivncia do animal em persistncia do agente agressor. Siena (2009) encontrou maior sobrevivncia em animais tratados com nucleo Homeopatila 100 em relao ao gurpo controle. Piau-Junior (2006) e Valentim-Zabott (2008) em estudos com tilapia do Nilo registraram maior sobrevivncia tratadas com o ncleo Homeopatila RS durante a reverso sexual. O carter energtico da teraputica homeoptica confere aos animais a reduo do estresse, principalmete aqueles mantidos em confinamento, devido a esse contexto ser muito diferente do ambiente natural. Animais criados em condies de pouco estresse desenvolvem melhor as suas potencialidades de produo com qualidade (SOUZA, 2002).

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Os animais que receberam a medicao homeoptica foram capazes de apresentar melhor converso alimentar. Conforme apresentado na tabela 3 a converso alimentar dos animais que receberam o medicamento homeoptico foi de 1,4:1, enquanto que o grupo que no receveu o medicamento foi de 3,0:1. Tal situao reflete o benefcio gerado pelo medicamento na diminuio do estresse a que os peixes estiveram submetidos, permitindo o funcionamento do metabolismo dentro dos padres considerados normais para o bijupir em cativeiro e, dessa forma, aproveitaram mais eficientemente o alimento. Para Stevens et al (2004), o bijupir crescre muito bem s custas de uma taxa de converso alimentar prximas a 1,1:1. Para as demais varives, no foi demonstrada diferena estatstica significativa entre os tratamentos, o que pode ser atribudo grande variao individual dos peixes pelas prprias caractersticas da espcie, com grande diversidade gentica, por ser animal migrador e no gregrio, mas tambm pela dificuldade de manuteno dos espcimes no ambiente experimental, muito limitado para animais que vivem em ambientes de mar aberto.

Parasitolgicos

Os dados de infestao parasitria nas brnquias e no muco cutneo esto apresentados na Tabela 4.
TABELA 4. Numero mdio de Amyllodinium sp nas brnquias e no muco tegumentar de juvenis de bijupirs submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com o numero inicial observado nos animais capturados para o estudo Tratamento Homeopatia Parasitos nas brnquias 3152,8 a Parasitos no muco 95,2

S/medicao 2345,6 a 72,0 Animais iniciais 683,5 b 67,1 Letras diferentes na mesma coluna indicam diferenas significativas entre valores (P<0,05).

Como se pode verificar na Tabela 4, o nmero de parasitos presentes nas brnquias dos peixes cresceu com o confinamento, quando comparados com aqueles presentes nos peixes que foram sacrificados no incio do perodo experimental. Os animais no responderam ao tratamento com medicao homeoptica que se esperava atuar na reduo da infestao.

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Com relao ao numero de parasitos no muco cutneo, no houve diferena (P>0,5) entre os tratamentos. Os valores calculados de Prevalncia e intensidade parasitria esto apresentados na Tabela 5.

TABELA 5. Prevalncia e intensidade parasitria mdia de juvenis de bijupirs submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com os valores observados nos animais capturados para o estudo Tratamento Homeopatia S/medicao Animais iniciais Prevalncia (%) Brnquias 100 100 100 Muco 100 95,2 80,8 Intensidade parasitria Brnquias 3152 2345 683,5 Muco 95,2 72,0 47,5

Como pode ser observado na Tabela 5, houve um aumento numrico da prevalncia da intensidade parasitria no muco e nas brnquias dos animais submetidos ao perodo de confinamento experimental. Esse incremento da infestao parasitria apresentada nas Tabelas 4 e 5 pode ser explicado pelo estresse a que os animais foram submetidos no decorrer do ensaio medicamentoso, uma vez que so animais migradores e de mar aberto (SHAFFER; NAKAMURA, 1989).

Hematolgicos

Os valores relativos aos parmetros hematolgicos esto apresentados nas tabelas 6 e 7.

TABELA 6. Eritrcitos,VG, VGM, Hb, VHGM, PPT de juvenis de bijupir submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com os valores observados nos animais capturados para o estudo inicial PPT (%) 6,55 a 6,86 a 5,85 b

Tratamento Homeopatia S/medicao

Eritrcitos(106L) 2,25 a 2,05 a

VG(%) 30,38 a 28,67 ab

VGM(fL) 151,52 a 146,94 a

Hb (%) 6,7 6,1

CHGM (g/dL) 22,8 22,01

Animais iniciais 4,37 b 26,17 b 64,20 b Letras diferentes na mesma coluna indicam diferenas significativas entre valores (P<0,05).

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O nmero de eritrcitos no grupo dos animais iniciais est aumentado significativamente (p<0,05) em relao aos grupos com e sem medicao homeoptica. As situaes geradas pelo confinamento e pelo processo de evoluo patolgica podem ter desencadeado uma reduo na quantidade desse tipo celular. Pode-se perceber que o VG foi significativamente maior no grupo homeoptico em relao ao grupo inicial, enquanto que o grupo sem medicao no apresentou diferena em relao ao grupo inicial. Isso pode estar relacionado ao fato do medicamento homeoptico ter sido capaz de induzir a hematopoiese nos animais com aumento da produo de eritrcitos. Entre os animais que receberam a medicao e os que no receberam no ocorreu diferena significativa. O VGM est significativamente aumentado nos animais que receberam medicao e nos animais que no receberam, quando relacionado ao grupo do estudo inicial. A diminuio de eritrcitos na circulao induziu os animais produo de formas jovens de eritrcitos, os eritroblastos, apresentando maior tamanho, conforme constatado em grande quantidade nos esfregaos sanguneos. Os peixes experimentais demonstraram aumento significativo (p<0,05) das PPT em relao aos animais iniciais. Provavelmente pela capacidade de induzir resposta imunolgica (globulinas) pelos animais frente ao parasito, como tambm pela protena da dieta que esses grupos tiveram acesso. A tabela seguinte apresenta os valores mdios relativos aos leuccitos e trombcitos totais encontrados nos peixes analisados no estudo.
TABELA 7. valores mdios de Leuccitos e trombcitos totais de juvenis de bijupirs submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com os valores observados nos animais capturados para o estudo inicial Tratamento Homeopatia S/medicao Animais iniciais Leuccitos totais 2,09 b 2,38 ab 3,62 a Trombcitos totais 1,28 0,47 3,60b

Letras diferentes na mesma coluna indicam diferenas significativas entre valores (P<0,05).

A Tabela 7 demonstra diferena significativa entre os grupos com medicao homeoptica e o grupo dos animais iniciais. Demonstrando um menor nmero de leuccito no primeiro grupo. Isso pode ter ocorrido porque com a evoluo do processo de confinamento o parasitismo se intensificou, caracterizando a leucopenia, que significa uma diminuio de

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leuccitos na circulao, determinado por diversos fatores, dentre eles a infeco. possvel que a leucopenia tenha se dado no grupo com homeopatia, devido migrao dos leuccitos do sangue para as brnquias, rgo diretamente afetado pelo parasito e ficando sua presena no sangue circulante em menor quantidade, conforme observados nos achados histopatolgicos que demonstraram diferena significativa (p<0,05) do infiltrado leucocitrio entre os peixes da medicao homeoptica e o grupo inicial. Apesar da importncia da hematologia para avaliao da sade dos peixes, existem poucos estudos com peixes marinhos nessa rea. Assim, h a necessidade de mais pesquisas para que uma avaliao mais criteriosa seja feita. Os trombcitos nos animais iniciais mostraram diferena (p<0,05) em relao aos experimentais. Estas so clula de defesa, estando presente em grande quantidade nos locais da infeco. Sua diminuio no sangue circulante dos peixes significa sua migrao ao stio lesado no combate ao parasitismo. Alm de sua participao na hemostasia, os trombcitos so clulas que desempenham relevante papel nos mecanismos de defesa orgnica, evidenciado por sua presena marcante nos processos inflamatrios, e na atividade fagocitria (TAVARES-DIAS, 2003). Merlini (2006) em estudos com tilpia do Nilo, verificando a ao do ncleo homeoptico Homeopatila100 sobre os parmetros hematolgicos, encontrou maior percentagem de trombcitos nos animais tratados com o medicamento.

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Histopatolgico

As alteraes histopatolgicas (VMA) e seu significado so apresentados nas Tabelas 8.

TABELA 8. Valores VMA e seu significado (entre parnteses) para hiperplasia/hipertrofia, fuso, descolamento e ruptura de epitlio lamelar, necrose, dilatao, aneurisma, infiltrado, parasito e desarranjo lamelar em brnquias de bijupirs do ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com os valores observados nos animais capturados para o estudo inicial Tratamentos Homeoptico Sem medicao Animais iniciais Hiperplasia/hipertrofia 4,0 (severa) 4,0 severa 3,8 (severa) Fuso incompleta das lamelas 2,8 (intensa) 2,9 (intensa) 2,4 (intensa) Fuso completa das lamelas 2,2 (intensa) 1,7 (moderada) 1,7 (moderada) Descolamento do epitlio 2,6 (intensa) 2,6 (intensa) 3,1 (severa) Ruptura sem hemorragia 2,3 (intensa) 2,1 (intensa) 0,5 (discreta) Ruptura com hemorragia 2,0 (moderada) 2,0 (moderada) 1,1 (moderada) Necrose 1,0 (discreta) 0,8 (discreta) 0,8 (discreta) Dilatao 3,8 (severa) 2,7 (intensa) 3,3 (severa) Aneurisma 1,5 (moderada) 1,1 (moderada) 0,7 (discreta) a ab b Infiltrado 1,8 (moderada) 1,3 (moderada) 0,7 (discreta) Parasito 0,9 (discreta) 0,5 (discreta) 0,2 (discreta) ab a b Desarranjo lamelar 1,2 (moderada) 1,6 (moderada) 0,4 (discreta) Letras diferentes na mesma linha indicam diferenas significativas entre valores (P<0,05). Alteraes

Conforme se observa na Tabela 8, as alteraes apresentaram frequncia em graus variados, se distribuindo do discreto ao severo entre os diversos tipos de leses. O que pode ser justificado pela intensidade de infestao do parasito. Entretanto no apresentaram diferenas significativas (p>0,05) entre os tratamentos, exceto para o processo inflamatrio no grupo homeoptico em relao ao grupo inicial, provavelmente devido ao fato do prolongamento do confinamento e evoluo da doena ter permitido tempo suficiente para gerar uma resposta mediada por clulas. Alm dessa leso, a desorganizao lamelar apresentou diferena significativa quando comparada ao grupo sem medicao, o que pode ter a mesma explicao. Trabalhos avaliando quantitativamente as leses desencadeadas nas brnquias pelo Amyloodinium parecem ser inexistentes. Siena (2009), estudando a ao do ncleo homeoptico Homeopatila 100 sobre a morfologia de brnquias de tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus), no encontrou alteraes significativas, quanto ao clculo do VMA.

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Condies de baixa qualidade de gua, presena de substncias txicas, de agentes infecciosos e parasitos so promotores de alteraes severas nas brnquias, comprometendo seu funcionamento (MALLAT, 1985; SCHWAIGER et al, 1997; PAVANELLI et al, 2008). No presente estudo foram frequentes as leses intensas e severas, demonstrando a ao do parasitismo sobre as brnquias, entretanto, o medicamento (Sulphur 30X), na concentrao e frequncia de administrao utilizadas, no se mostrou eficiente na reduo das leses. A Tabela 9 apresenta os valores dos ndices de Alterao Histopatolgica (IAH) para cada tratamento.
TABELA 9. ndices de Alterao Histopatolgica (IAH) de brnquias de juvenis de bijupirs submetidos ao ensaio experimental com e sem medicao homeoptica, comparado com o observado nos animais capturados para o estudo Tratamento Homeopatia S/medicao Animais iniciais IAH das brnquias 69,6 101,4 76,8 Significado da alterao Modificao severa das brnquias Dano irreparvel nas brnquias Modificao severa das brnquias

Embora no tenha havido diferena estatstica (p>0,05) entre tratamentos para os valores de IAH calculados, o significado das alteraes, tambm apresentado na Tabela 9, destaca uma possvel ao protetora do medicamento homeoptico sobre o agravamento das leses, que se mantiveram no mesmo grau de severidade observado nos peixes avaliados no inicio do ensaio experimental naqueles animais tratados com o Sulphur.

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CONCLUSO

O uso do medicamento Sulphur aumentou a sobrevivncia dos animais e induziu os animais a uma melhor converso alimentar. Em relao s alteraes histopatolgicas, o estudo no permitiu detectadar diferenas estatsticas significativas (p>0,05) entre os tratamentos empregados, ou seja, o Sulphur no foi capaz de impedir ou amenizar os danos provocados pelo parasitismo. Contudo, quanto ao significado do grau das leses, segundo IAH, o medicamento homeoptico induziu uma ao protetora.

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REFERNCIAS

ALMEIDA, L. R. et al. Ttratamento homeoptico da infestao por Dermatobia hominis (Linnaeus, Jr., 1781) (Dptera: Cuterebridae) em Bovinos sob Manejo Orgnico. Rio de Janeiro: EMBRAPA ,2007. ARENALES, M. C. A homeopatia e o bem-estar animal no sistema orgnico, 2006. Disponvel em: http://www.planetaorganico.com.br/arenales.htm acesso em: 10 julho 2010. BOWER, C.E. The Basic Marine Aquarium. C.H. Thomas, Springfield, Illinois, p. 269, 1983. BROWN, E.M. Note on a new species of dinoflagellate from de gills and epidermis of marine fishes. Proceedings of the Society of Zoology of London, 341-346, 1931. BUSH, A.O.; LAFFERTY, K.D.; LOTZ, J.M.; SHOSTAK, A.W. Parasitology meets ecology on its own terms. Margolis et al. Revisited. J. Parasitol. v. 83. N. 4, p. 575-583, 1997. CARDEILHAC, P.T.; WHITAKER, B.R. Copper treatments: uses and precautions. Vet. Clin. North Am., v.18, p.435-448, 1988. CHANG, D. O cultivo do Beijupir em Taiwan. Panorama da Aquicultura. setembro/ outubro, p.43-49, 2003. CHEN, H.; LIAO, I. C. Nutritional research and feed development in cobia: status and prospects In: LIAO, I.C.; LEAO, E.M. (org.) Cobia aquaculture: research, development and commercial production.Department of Aquaculture National Taiwan Ocean University Keelung, Taiwan, p.89-96, 2007. COBEA. Princpios ticos na experimentao animal (1991). Disponvel em: <http://www.cobea.org.br/etica.htm#3>. Acesso em: 20 jan. 2009. COLLIER, H. B. The standardization of blood haemoglobin determinations. Can. Med. Ass. J., v.50, p.550-552, 1994. EIRAS, G. J. C.; TAKEMOTO, R. M.; PAVANELLI, G. C. Mtodos de estudo e tcnicas laboratoriais em parasitologia de peixes. Maring: EDUM, 2006. FAO. - FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS 2009. Fishery Departament, Fishery Information, Data and Staatistic Unit. FishStar Plus version 2.3.2000, Rome, Italy. GOLDENFARB, P. B.; BOWER, F. P.; HALL, E.; BROSIOUS, E. Reproducibility in the hematology laboratory: the microhematocrit determination. Amer. J. Clin. Path., v.56, p.3539, 1971. HAHNEMANN, S. Organon da arte de curar. So Paulo: Robe Editorial , 2007. HAHNEMANN, S. Doenas Crnicas: sua natureza peculiar e sua cura homeoptica. So Paulo: Editora GEHSP Benoit Mure. 2010. LATHOUD, J. A. Estudos de matrias mdicas homeopticas (traduo de Heloisa Helena de Macedo), 3.ed. So Paulo: Organon, 2010. LUNA, L. G. Manual of histologic staining methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3 ed. New York: Mac Graw Hill, 1968. MALLAT, J. Fish Gill Stuctural Changer induced by toxicants and other irritants:A statiatical review. Can. J. Fish.Aquat. Sci., Ottawa, v. 42, p.630-648, 1985. MERLINI, L. S. Utilizao de Homeopatila 100 em dieta para tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus). 2006. 50 f. Tese (Doutorado em Zootecnia) Universidade Estadual de Maring. Maring.

91

NOGA, E. J.; SMITH, S. A. & LANDSBERG, J. H. Amyloodiniosis in Cultured Hybrid Striped Bass (Morone saxatilis X M. chrysops) in North Carolina. Journal of Aquatic Animal Health, v.3, p.294-372, 1991. PAPERNA, I. Amyloodinium ocellatum (Brown ,1931) (Dinoflagellida) infestations in cultured marine fish at Eilat, Red Sea: epizootiology and pathology. Journal of Fish Diseases, v.3, p. 363-372, 1980. PAVANELLI, G.C.; EIRAS, J. C.; TAKEMOTO,R.M.; Doenas de peixes: profilaxia, diagnstico e tratamento. Maring: EDUEM, 2008. PIAU JUNIOR., R. Comportamento morfomtrico das fibras musculares brancas e desempenho de alevinos de tilpias do Nilo (Oreochromis niloticus), tratados com metiltestosterona ou ncleo homeoptico. 2006. 47 f. Dissertao (Mestrado em Zootecnia) Universidade Estadual de Maring, Maring. PICKERING, A.A.D.; POTTINGER, T.G. Crowding causes prolonged leucopenia in salmonid fish, despite interrenal acclimation. J. Fish Biol., London, v. 30, p. 701-712, 1987. POLEKSIC, V.; MITROVIC-TUTUNDZIC, V. Fish gills as a monitor of sublethal and chronic effects of pollution. In: MLLER, R.; LLOYD, R. (org.) Sublethal and Chronic Effects of Pollutants on freshwater fish. Oxford: Fishing Nrws Books, 1994. C. 30, p. 339352. PROPHET, E. B; MILLS, B; ARRINGTON, J.B. et al. AFIP Laboratory Methods in Histotechnology. Washington: Am Registry of pathology, 1992. REED, P.; FRANCIS-FLOYD R. Amyloodinium infections of marine fish. Florida: Univerity of Florida. Florida Cooperative Extension Service. Fact Sheet VM-90.1994. RIBEIRO JUNIOR, J.I. Anlises estatsticas no SAEG. Viosa:UFV, 2001. SCHWAIGER, J.; WANDE, R.; ADAM, S.; PAWERT,M.; HONNEN, W.; TRIEBSKORN, R. The use of histopathological indicators to evaluate contaminant-related stress in fish. Journal Aquatic Ecosystem Stress Recovery, v.6, p.75-86, 1997. SCOTT, P. Teraputica em acuicultura.In: BROWN, L. (Org.). Acuicultura para veterinarios: produccin y clnica de peces. Zaragoza: ACRIBIA, 2000. SHAFFER, R.V.; NAKAMURA, E. L.. Synopisis of biological data on the cobia Rachycentron canadum (Piscees:Rachycentridae). NOAA Tech. Rep. NMFS 82, FAO Fisheries Sinopis 153. Washington, DC, p.21. 1989 SIENA, C. E. 2009. Efeito do ncleo homeoptico Homepatila 100 na eficcia produtiva em alevinos revertidos de tilapia do Nilo (Oreochromis niloticus). 27 p. Dissertao (Mestrado em Zootecnia) Universidade Estadual de Maring Maring SOUZA, M. F. A. 2002. Homeopatia Veterinria. In: CONFERNCIA SOBRE PRODUO ORGNICA DE BOVINOS DE CORTE, 1., 2002. Anais... Corumb: Embrapa Pantanal. Disponvel em: www.cpap.embrapa.br/ agencia/congressovirtual/pdf/portugues/02pt02.pdf. Acesso em: 17out. 2009. STEVENS, O. et al. ACFK: Cobia Fingerling Update. Global Aquaculture Advocate, February, p. 46-47. 2004. TAVARES-DIAS, M. Variveis hematolgicas de telesteos brasileiros de importncia zootcnica. 2003. 209f. Tese (Doutorado em Aquicultura) Universidade Estadual Paulista, Centro de Aquicultura, Jaboticabal, So Paulo.

92

TAVARES-DIAS, M.; FAUSTINO, C. D. Parmetros hematolgicos da Tilpia-do-Nilo Oreochromis niloticus (Cichlidae) em cultivo extensivo. Ars Veterinria, 14: 254-63,1998. TAVARES-DIAS, M.; MORAES, F. R. Caractersticas hematolgicas da Tilapia rendalli Boulenger, 1986 (Osteichthyes: Cichlidae) capturada em Pesque-Pague de Franca, So Paulo, Brasil. Bioscience J., 19(1):103-110, 2003 VAL, A. L.; SILVA, M. de N. P. da; VAL, V. M. F. de A. 2004. Estresse em peixes Ajustes fisiolgicos e distrbios orgnicos. In: RANZANI-PAIVA, M. J. T.; TAKEMOTO, R. M.; LIZAMA, M. A. P. Sanidade de organismos aquticos. So Paulo: Livraria Varela, p.75-88. VALENTIM-ZABOTT, M.; VARGAS, L.; RIBEIRO, R. P.; PIAU JUNIOR, R.; TORRES, M. B. A.; RNNAU, M.; SOUZA, J. C. Effects of a homeopathic complex in Nile tilapia (Oreochromis niloticus L.) on performance, sexual proportion and histology. Homeopathy, n. 97, p.190195, 2008. VANNIER, L.; PORTIER, J. Tratado de matria mdica homeoptica. 9.ed. So Paulo: Andrei, 1987 WINTROBE, M. M. Variations on the size and hemoglobin content of erythrocytes in the blood of various vertebrates. Folia Haemat., 51:32-49, 1934. WATANABE, W. O.; ERNST, D. H.; OLLA, B. L.; WICKLUND, R. I. Aquaculture of red tilapia (Oreochromis sp) in marine environments: state of the art. Advances in Tahiti, French Polynesie Tropical Aquaculture. Actes Colloque.,n.9 p. 487-499. 1990.

93

4 CONSIDERAES FINAIS

O cultivo de organismos aquticos um segmento agropecurio que tem se expandido muito ao longo dos ltimos anos. A aquicultura marinha, pelo valor dos seus produtos no mercado, vem da mesma forma se firmando como interessante atividade produtora de alimento, buscando meios para alcanar produo em escala comercial. Como pode ser visto ao longo desse trabalho, esses sistemas so marcados por prticas intensivas de cultivos, as quais mantm os animais confinados em elevadas densidades de estocagem, gerando assim campo frtil para a proliferao de diversos parasitos. Tal contexto favorvel s parasitoses visto que os animais ficam com seus mecanismos de defesas reduzidos devido situao estressante proporcionada pelo confinamento. A teraputica empregada para o controle dessas doenas, conforme tambm se pode observar nesse estudo, geralmente se faz com produtos de eficcia questionvel, tanto do ponto de vista teraputico, quanto do ponto de vista da sustentabilidade, uma vez que a qumica empregada nos tratamentos gera resduos no peixe destinado ao mercado consumidor, e resduos que, quando descartados no ambiente, podem vir a comprometer seu equilbrio. Assim, a homeopatia desponta como um mtodo teraputico que oferece uma possibilidade real de cura e de preveno s doenas, visto que substncias medicamentosas diludas no causam, ao induzir uma resposta de cura no organismo animal, danos para este e nem aos ecossistemas. Portanto, a homeopatia capaz de produzir um alimento saudvel, contribuindo, desse modo, para a segurana alimentar. Os estudos na rea de medicina veterinria homeoptica, sobretudo no que diz respeito aos organismos aquticos, so ainda muito incipientes, do ponto de vista numrico. As poucas pesquisas que se tem notcia so direcionadas ao desempenho dos peixes de criao, mas ainda se insinua timidamente no que se refere teraputica. Logo, a escassez de trabalhos nessa rea aponta para a necessidade de investigaes, tanto no que diz respeito cura das doenas dos peixes como na sua preveno.

94

REFERNCIAS

ABREU, P.C. et al. Recurrent amyloodiniosis on broodstock of the Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus: dinospore monitoring and prophylactic measures. Journal of the World Aquaculture Society. v.36, n.1, p.42-50, 2005. AIELLO, P.; D'ALBA, A. Amyloodinium ocellatum infestation in yellowtail. Seriola dumerili, intensively reared in Sicily,Italy. Bulletin of the European Association of Fish Pathologists, n.6, p. 110-111, 1986. ALMEIDA, L. R. et al. Ttratamento homeoptico da infestao por Dermatobia hominis (Linnaeus, Jr, 1781) (Dptera: Cuterebridae) em Bovinos sob Manejo Orgnico. Rio de Janeiro: EMBRAPA ,2007. AMARAL, A. C.; JABLONSKI, S. Conservao da biodiversidade marinha e costeira no Brasil. Megadiversidade, v.1 n.1, julho, p. 43-51, 2005. ALVAREZ-PELLITERO, P. et al. Protozoan parasites of wild and cultured sea bass, Dicentrarchus labrax (L.), from the Mediterranean area. Aquaculture and Fisheries Management, n.24, p.101108, 1993. AMARAL, M. T. C. G. Homeopatia veterinria: estratgia de ao. Cultura Homeoptica, n.1, p. 8-10, 2002. ARNOLD, C. R. et al. Spawning of cobia (Rachycentron canadum) in captivity. Journal of the World Aquaculture Society, v.33, n.2, p.205-208, 2002. BATICADOS, M. C.; QUINITIO, G. F. Occurrence and pathology of an Amyloodinium-like protozoan parasite n the gills of grey mullet, Mugil cephalus. Helgolander Meeresunters, n. 37, p. 595 601, 1984. BENETTI, D.D. Reproduo e larvicultura de peixes marinhos: realidade e perspectiva. In: I Congresso Brasileiro de Aquicultura. Joo Pessoa. Resumos... p. 44, 1993. BENETTI, D. D. et al. Development of aquaculture methods for southern flounder, Paralichthys lethostigma: Nursery and grow-out. Journal of Applied Aquaculture, n. 11 p. 135-146. 2001. BENETTI, D.D. et al. Aquaculture of cobia (Rachycentron canadum) in the Americas and the Caribbean. In: LIAO, I.C.; LEAO, E.M. (org.) Cobia aquaculture: research, development and commercial production.Department of Aquaculture National Taiwan Ocean University Keelung, Taiwan. p.57-78. 2007 BENEZ, S. M.; BOERICKE, S.; CAIRO, N. Manual de homeopatia veterinria indicaes clnicas e patolgicas teoria e prtica. So Paulo: Robe Editorial. 2004. BENITES, N. R. A homeopatia atravs dos sculos. Clnica Veterinria, ano IV, n. 20, 1999. BENITES, N. R. Caso clnico de osteomielite piognica ps-traumtica. In: I Jornada Brasileira de Mdicos Veterinrios Homeopatas. Curitiba, Anais, 1993. BENITES, N. R. et al. Farmacologia aplicada medicina veterinria. Rio de Janeiro: Guanabara, 4.ed., p. 827-835, 2006. BENITES, N. R.; ROBERTI NETO, A. Caso clnico de fmea bovina repeat breedere resultado de transferncia de embries e inseminao antes e aps tratamento homeoptico. In: I Jornada Brasileira de Mdicos Veterinrios Homeopatas. Curitiba, Anais, 1993.

95

BRANDINI, F. P.; SILVA, A. S.; PROENA, L. A. O. Oceanografia e maricultura. In: VALENTI, W. C.; et al (org.) Aquicultura no Brasil: bases para um desenvolvimento sustentvel. Braslia, CNPq/MCT, p. 107-141, 2000. BOWER, C.E. The Basic Marine Aquarium. C.H. Thomas, Springfield, Illinois, 1983. BROWN, E.M. Note on a new species of dinoflagellate from de gills and epidermis of marine fishes. Proceedings of the Society of Zoology of London, p.341-346, 1931 BROWN, E.M. On Oodinium ocellatum Brown, a parasitic dinoflagellate causing epidemic disease in marine fish. Proceedings of the Zoological Society of London, v.3, p.583-607, 1934. BROWN, E.M.; HOVASSE, R. Amyloodinium ocellatum (Brown, 1931), a peridian parasitic on marine fishes. Proceedinds of the Zoological Society of London, v. 116, p. 33-46, 1946. BURSZTYN, M.; ASSAD, L. T. Aquicultura sustentvel. In: VALENTI, W. C. et al (org.) Aquicultura no Brasil: bases para um desenvolvimento sustentvel. Braslia, CNPq/MCT, p. 33 -72, 2000. CAMPAGNA, A.F. et al. Effects of the copper in the survival, growth and gill morphology of Danio rerio (Cypriniformes, Cyprinidae), Acta Limnol. Bras., v. 20, n. 3, p. 253-259, 2008. CARDEILHAC, P.T.; WHITAKER, B.R. Copper treatments: uses and precautions. Vet. Clin. North Am., v.18, p.435-448, 1988. CARNEIRO, P. C. F. Estresse provocado pelo transporte e resposta fisiolgica do matrinx Brycon cephalus. 2001. 137p. Tese (Doutorado em Aquicultura) - Centro de Aquicultura da Unesp, Universidade Estadual Paulista, Jaboticabal. CARVALHO-VARELA, M. Parasitos e parasitoses em piscicultura, Lisboa: Ordem dos Mdicos Veterinrios, 2005. CAVALCANTI, A. Efeito do medicamento homeoptico sulphur sobre nematdeos grastritestinais, resistentes a invermectina, de cordeiros infectados naturalmente. 2008.48p. Dissertao (Mestrado em Cincia Animal nos Trpicos) Escola de Medicina Veterinria, Universidade Federal da Bahia, Salvador: CAVALLI, R.O.; HAMILTON, S. A piscicultura marinha no Brasil. Afinal, quais as espcies boas para cultivar? Panorama da Aquicultura, v. 17, n. 104, nov-dez, 2007. CAVICHIOLLO, F. et al. Efeito da suplementao de vitamina C e vitamina E na dieta, sobre a ocorrncia de ectoparasitos, desempenho e sobrevivncia em larvas de tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus) durante a reverso sexual. Acta Scientiarum, Maring, v.24, n.4, p. 943-948, 2005. CECCHINI, S. et al. Detection of antibody response against Amyloodinium ocellatum (Brown, 1931) in serum of naturally infected european sea bass by an enzyme-linked immunosorbent assay ELISA). Bull. Eur. Ass. Fish Pathol., v.21, n.3, p.104-108, 2001. CESAR, A. de T. Preparos dos medicamentos homeopticos. In: ROSENBAUN, P. (org.) Fundamentos de homeopatia para estudantes de medicina e de cincias da sade. So Paulo, Roca, p.166-174, 2002. CHANG, C.I.; LIU, W.Y. An evaluation of two probiotic bacterial strains, Enterococcus faecium SF68 and Bacillus toyoi, for reducing edwardsiellosis in cultured European eel, Anguilla anguilla L. Journal of Fish Diseases. v.25, p.311-315, 2002. CHANG, D. O cultivo do Beijupir em Taiwan. Panorama da Aquicultura. setembro/ outubro, p.43-49, 2003. CHEIN, C.Y.; HUANG, J. D. an observation of infestationof Amyloodinium ocellatum in marine aquaria and cultured marine fish in northen Taiwan. Council of Agriculture Fisheries Series, n. 40, p. 65 70, 1993.

96

CHEN, H.; LIAO, I. C. Nutritional research and feed development in cobia: status and prospects In: LIAO, I.C.; LEAO, E.M. (org.) Cobia aquaculture: research, development and commercial production.Department of Aquaculture National Taiwan Ocean University Keelung, Taiwan, p.89-96, 2007. CHEUNG, P. J. et al. Oodinium ocellatum (Brown, 1931) (Dinoflagellata) in the kidney and other internal tissues of pork fish, Anisot remus virginicus (L.). Journal of Fish Disease, n.4, p.523-525, 1981. CHONCHUENCHOB, P. et al. Diseases of cage-cultured sea bass (Lates calcarifer) in southestern Thailand. Australian Centre for International Agrucultural Research Proceedings Series, n. 20 p. 194-197, 1987. CHOU, R.L.; SU, M.S.; CHEN, H.Y. Optimal dietary protein and lipid levels for juvenile cobia (Rachycentron canadum). Aquaculture, n.193 p. 81-89. Elsevier, 2001. COBB, C.S.; LEVY, M.G.; NOGA, E.J. Acquired immunity to amyloodiniosis in associated with an antibody response. Diseases of Aquatic Organisms, n.34, p. 125-33, 1998. CRAIG, S. R.; SCHWARZ, M.H.; McLEAN, E. Juvenile cobia (Rachycentron canadum) can utilize a wide range of protein and lipid levels without impacts on production characteristics. Aquaculture, Elsevier, n.261 p. 385-391. 2006. DENSON, M. R.; STUART, K. R.; SMITH, T. I. J. Effects of salinity on growth, survival, and selected hematological parameters of juvenile cobia Rachycentron canadum. Journal of the World Aquaculture Society, v. 34, n. 4, p. 496-504, 2003. DIAS NETO, J. Gesto do uso dos recursos pesqueiros marinhos no Brasil. Braslia: IBAMA, 2003. DICK, P.T.; DIXON, D.G. Changes in circulating blood cell levels of rainbow trout Salmo gairdneri Richardson, following acute and chronic exposure to copper. J. Fish Biol., London, v. 26, n. 4, p. 475-481, 1985. DICKERSON, H.W.; CLARK, T.G. Immune response of fishes to ciliates. Annual Review of Fish Diseases, v. 6, n. 1, p.107-120, 1996. DITTY, J.G.; SHAW, R.F. Larval development, distribution, and ecology of cobia Rachycentron canadum (family: Rachycentridae) in the northern Gulf of Mexico. Fishery Bulletim, v.90, n.4, p.668-677, 1992. EIRAS, G. J. C.; TAKEMOTO, R. M.; PAVANELLI, G. C. Mtodos de estudo e tcnicas laboratoriais em parasitologia de peixes. Maring: EDUM, 2006. FAJER-VILA. Toxicity of formalin to bullseye puffer fish (Sphoeroides annulatus Jenyns) and its effectiveness to control ectoparasites. Aquaculture, n. 223, p.41-50, 2003. FAO-FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS. 2005. Aquiculture production: quantites 1950-2003. In: FishStat Plus. Verso 2.3.2000. Rome. FAO- FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS.2009. Fishery Departament, Fishery Information, Data and Statistic Unit. FishStar Plus version 2.3.2000, Rome, Italy FIELDER, D. S.; BARDSLEY, W. A preliminary study on the effects of salinity on growth and survival of mulloway Argyrosomus japonicus larvae and juveniles. Journal of the World Aquaculture Society, n. 30 p. 380 387, 1999. FIGUEIREDO, J. L.; MENEZES, N. A. Manual de peixes marinhos do Sudeste do Brasil. So Paulo: Museu de Zoologia/USP, 2000. FRANKS, J. S., GARBER, N. M., WARREN, J. R. Stomach contents of juvenile cobia, Rachycentron canadum, for the Northern Gulf of Mexico. Fish. Bull, v. 94, p. 374-380, 1996.

97

GALLET DE SAINT-AURIN, D. Diseases of the sea bass Dicentrarchus labrax in intensive rearing programs in Martinique French West Indies. Proceedings of the Gulf and Caribbean Fisheries Institute v.38, p. 144-163,1987. GASPAR, A. G. Algumas enfermedades de Pampanos cultivados experimentale en Venezuel. Revista Latinoamericana de Acuicultura, Lima, Peru n. 3, p. 27-44, 1987. GIAVANNE, R. Some parasitic and other diseases occurring in sea-bass (Dicentrarchus labrax L.) broodstock in Italy. Bulletin of the European Association of Fish Pathologists, n. 8, p.45-46. 1988. GHITTINO, P.S.; BIGNAMI, I.S.; ANNIBALI, A.; BONI, L. First record of serious oodiniasis in seabass (Dicentrarchus labrax) intensively reared in brackish water. Rivista Italiana Piscicoltura e Ittiopatologica, n.15, p. 122-127, 1980. GUEDES, J. R. et al.Homeopathically prepared dilution od Rana catesbeiana thyroid glands modifies its rate of metamorphosis. Homeopathy, n.93, v.3, p. 132-7, 2004. GUEDES, J.R.P. et al. Emprego do tratamento homeoptico nos organismos aqutico. In: RAZANI-PAIVA, M. J. et al; Sanidade de organismos aquticos. So Paulo: Livraria Varela, 2004, p.383-397. HAHNEMANN, S. Organon da arte de curar. So Paulo: Editora GEHSP Benoit Mure. 2007. HAHNEMANN, S. Doenas Crnicas: sua natureza peculiar e sua cura homeoptica. So Paulo: Editora GEHSP Benoit Mure. 2010. HOLT, G. J. et al. Advances in Cobia Research in Texas. In: LIAO, I.C.; LEAO, E.M. (org.) Cobia aquaculture: research, development and commercial production.Department of Aquaculture National Taiwan Ocean University Keelung, Taiwan, p.45-56, 2007 IVERSEN, M. et al. Recovery from loading and transport stress in Atlantic salmon smolts. Aquaculture, v. 168, p. 387-394,1998. JENKINS, W. E. et al. Performance of domesticated striped bass Morone saxatilis, palmetto bass and backcross hybrid striped bas(sunshine bass x striped bass) raised in a tank culture system. Journal of the World Aquaculture Society, n. 29, p. 505 -509, 1998. JOHNSTON, M. D. et al. Effect and time of feed on size distribution of bred muscle fiber types. J. Anim. Sci., n.40, 1975. KILDUFF, P. et al. Induced tank spawning of cobia, Rachycentron canadum, and early larval husbandry. World Aquac. v.33, p.3539, 2002. KUMAR, S.; PANT., S.C. Histopatologic effects of acutely toxic levels of copper & zinc on gills, liver, kidney of Puntius conchonius (Ham.). Indian J. Exp. Biol., New Delhi, v. 19, p. 191-194, 1981. LANDSBERG, J. H. et al. Scanning electron microscope study of dinospores of Amyloodinium cf. ocellatum, a pathogenic dinoflagellate of marine fish and comments on its relationship to the Peridinales. Diseases of Aquatic Organisms n. 20, p.23 32, 1994. LATHOUD, J. A. Estudos de matrias mdicas homeopticas (traduo de Heloisa Helena de Macedo), 3.ed. So Paulo: Organon, 2010. LAWLER, A.R. Dinoflagellate (Amyloodinium) infestation of pompano. In: Sindermann, C.J. (ed.) Disease Diagnosis and Control in North America Marine. Aquaculture, Amsterdam: Elsevier, p. 257-264, 1977. LAWLER, A.R. Studies on Amyloodinium ocellatum (Dinoflagellata) in Mississippi Sound: natural and experimental hosts. Gulf Research Reports, n. 6, p.403-413, 1980.

98

LIAO, I. C. Candidate species for open ocean aquaculture: the successful case of cobia Rachycentron canadum in Taiwan. In: BRIDGER, C.J.; COSTA-PIERCE, B.A. (org). Open ocean aquaculture from research to commercial reality. Boston Rouge, World Aquaculture Society, p. 205-214, 2003. LIAO, I.C. et al.Cobia culture in Taiwan:current status and problems. Aquaculture, n. 237, p. 155 165, 2004. LIAO, I. C.; LEAO, E. M. Cobia aquaculture in Taiwan. World Aquaculture, march, 2005. LIRA-SALAZAR, G. et al. Effects of homeopathic medications Eupatorium perfoliatum and Arsenicum album on parasitemia of Plasmodium berghei infected mice. Homeopathy, v.95, p. 223-228. 2006. LOM, J.; DYKOV, I. Protozoan parasites of fishes. Aquaculture and fisheries science. Netherlands: Elsevier Science Publishers, v.26, 1992. LUZ, R.K. et al. Desenvolvimento de alevinos de trairo alimentados com dietas artificiais em tanques de cultivo. Revista Brasileira de Zootecnia. v.30, n. 4, p.1159-1163, 2001. MENEZES, D.R. et al. Ingesto voluntria por ovinos submetidos a raes com co-produto de vitivincolas desidratado. Rev. Bras. Sade Prod. Animal, v.9, n.1, p. 57-63, 2008. MERLINI, L. S. Utilizao de Homeopatila 100 em dieta para tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus).2006. 50 p. Tese (Doutorado em Zootecnia) Universidade Estadual de Maring. Maring. MONTGOMERY-BROCK, D. et al. The application of hydrogen peroxide as a treatment for the ectoparasite Amyloodinium ocellatum (Brown, 1931) on the Pacific threadifin Polydactylus sexfilis. Journal of the World Aquaculture Society n. 32, p 250 254, 2001. NIGRELLI, R.F. The morfology, cytology, and life history of Oodinium ocellatum Brown, a dinoflagellate parasitic on marine fishes. Zoolgica, n.21, p.129-164, 1936. NOGA, E.J.; LEVY, M.G. Phylum Dinoflagellata. In: WOO, P.T.D. Fish Diseases and Disorders: protozoan and metazoan infections, Canad, University of Guelph, v. 1 p. 1645, 2006. NOGA, E.J., Fan, Z. and Silphaduang, U. Histone-like proteins from fish are lethal to the parasitic dinoflagellate Amyloodinium ocellatum. Parasitology 123, 57-65, 2001. NOGA, E.J., LANDSBERG, J.H.; SMITH, S.A. Amyloodiniosis in cultured hybrid striped bass (Morone saxatilis X M. Chrysops) in North Carolina. Journal of Aquatic Animal Health, n.3, p.294-297, 1991. OLIVEIRA, G. dos R. Avaliao do uso de medicamentos homeopticos no tratamento da lingfadenite caseosa em caprinos. Salvador: EMV/UFBA, 2006. OSTRENSKY, A.; BORGHETTI, J. R.; SOTO, D. Aquicultura no Brasil: o desafio crescer. Braslia: Secretaria Especial de Aquicultura e Pesca/FAO. 2008. PAPERNA, I. Amyloodinium ocellatum (Brown ,1931) (Dinoflagellida) infestations in cultured marine fish at Eilat, Red Sea: epizootiology and pathology. Journal of Fish Diseases, v.3, p. 363-372, 1980. PAPERNA, I. et al. Diseases of marine fish cultured in Eilat mariculture porjecta based at the Gulf of Aqaba, Red Sea. European Mariculture society Special Publication, n. 6, p. 81 91 1981. PAPERNA, I.; LAURENCIN, B. Parasitic infections of sea bass, Dicentrarchus labrax and gilt head sea bream, Sparus aurata, in maricultura facilities in France. Aquaculture, n.16, p.173-175, 1979.

99

PAVANELLI , G.C. et al. Sanidade de peixes, rs, crustceos e moluscos. In: VALENTI, W. C.; POLI, C.R.; PEREIRA, J.A.; BORGHETTI, J.R. (Ed.) Aquicultura no Brasil: bases para um desenvolvimento sustentvel. Braslia, CNPq/MCT, p. 197-245, 2000. PAVANELLI, G.C.; EIRAS, J. C.; TAKEMOTO,R.M.; Doenas de peixes: profilaxia, diagnstico e tratamento. Maring: EDUEM, 2008. PIAU-JUNIOR, R. Comportamento morfomtrico das fibras musculares brancas e desempenho de alevinos de tilpias do Nilo (Oreochromis niloticus), tratados com metiltestosterona ou ncleo homeoptico. 2006.47 p. Dissertao (Mestrado em Zootecnia) Universidade Estadual de Maring. Maring. PICKERING, A.A.D.; POTTINGER, T.G. Crowding causes prolonged leucopenia in salmonid fish, despite interrenal acclimation. J. Fish Biol., London, v. 30, p. 701-712, 1987. RAMOS, P.; OLIVEIRA, J.M. Amyloodiniosis in turbot, Psetta maxima. Revista Portuguesa de Cincias Veterinrias, n.46, p. 201-205, 2001. REAL, C.M. Homeopatia Populacional. In: I Congresso Brasileiro de Homeopatia Veterinria. Associao Mdica Veterinria de Homeopatia do Brasil. So Paulo, out, 2003. REALE, M. Introduo filosofia. So Paulo: Saraiva, 3.ed.,1994. REED, P.; FRANCIS-FLOYD R. Amyloodinium infections of marine fish. Florida: Univerity of Florida. Florida Cooperative Extension Service. Fact Sheet VM-90.1994. RESLEY, M. et al. Growth and survival of juvenile cobia, R achycentron canadum, at different salinities in a recirculating aquaculture system. Aquaculture, v.253, p.398-407. 2006. RIGOS, G. et al. Amyloodinium ocellatum infestation on sharpsnout sea bream, Puntazzo puntazzo Cetti. Bulletin of the European Association of fish Pathologists, Weymouth n. 18 p 198 200, 1998. ROSENBAUM, P. Homeopatia Medicina sob medida. So Paulo: Publifolha, 2005. ROSENBAUM, P. Modelo homeoptico. Fundamentos de homeopatia para estudante de cincias da sade. So Paulo: Roca, 2002. SAMARTH, V.R. et al. Effect of homeopathic drug (Calcarea phosphoric) on performance of broilers. Indian. Vet. J., v.79, p. 402-403, 2002. SANCHES, E. G. et al. Viabilidade econmica do cultivo do bijupir (Rachycentron canadum) em sistema offshore. Informaes Econmicas, v.38, n.12, dez., 2008. SANDIFER, P. A. Experimental pond grow-out of red drum, Sciaenops ocellatus, in South Carolina, Aquaculture n. 118, p. 217 228, 1993. SAXENA, K.K.; CHUAHAN, R.R.S. Copper sulphate induced haematological and biochemical anomalies in the indian catfish, Heteropneustes fossilis (Bl.). Uttar Pradesh. J. Zool., Muzaflanagar, v. 14, n. 2, p. 161-163, 1994. SCOTT, P. Teraputica em acuicultura. In: BROWN, L. (org.). Acuicultura para veterinarios: produccin y clnica de peces. Zaragoza: ACRIBIA, 2000. SHAFFER, R.V.; NAKAMURA, E. L. Synopisis of biological data on the cobia Rachycentron canadum (Piscees:Rachycentridae). NOAA Tech. Rep. NMFS 82, FAO Fisheries Sinopis, n.153. Washington, DC, p.21, 1989. SHOEMAKER, C. A. et al. Density and dose: factors affecting mortality of Streptococcus iniae infected tilapia (Oreochromis niloticus). Aquaculture, n. 188, 2000. SIENA, C. E. Efeito do ncleo homeoptico Homepatila 100 na eficcia produtiva em alevinos revertidos de tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus). 2009. 27 p. Dissertao (Mestrado em Zootecnia) Universidade Estadual de Maring Maring.

100

SILVA, A. A. Da. Viabilidade econmica da piscicultura marinha da garoupa Epinephelus Marginatus (Lowe, 1834) (Pisces, Serranidae) em tanques-rede na regio Sudeste do Brasil.Taubat, 2006, Monografia (Especializao em Biologia Marinha). Universidade de Taubat. SINDERMANN, C. J. Principal Diseases of Marine Fish and Shellfish. California, Academic Press, 1990. SINGH, M. Haematological responses in a freshwater teleost Channa punctatus to experimental copper and chrom-ium poisoning. J. Environ. Biol., Lucknow, v. 16, n. 4, p. 339-341, 1995. SINGH, M.; REDDY, T.V. Effect of copper sulfate on hematology, blood chemistry, and hepato-somatic index of an indian catfish, Heteropneustes fossilis (Bloch), and its recovery. Ecotoxicol. Environ. Saf., Orlando, v. 20, p. 30-35, 1990. SMITH, S. A.; SCHWARZ, M. H.Getting Acquainted with Amyloodinium ocellatum, Virginia Cooperative Extension, p. 1-2, 2009. SMITH, S.A. et al. Effect of serum from tilapia, Oreochmmis aureus, immunized with dinospoms of Amyloodinium ocellarum, on motility, infectivity and growth of the parasite in cell culture. Dis. Aquat. Org. v.15, p. 73-80, 1993. SMITH, S.A. et al. Detection of antiamyloodinium ocellurum antibody from cultured hybrid striped bass (Morone saxurilis x Morone chrysops) during an epizootic of amyloodiniosis. J. Aquat. Animal Hlth. v.6, p.79-81, 1994. SMITH, T.I.J. et al. Broodstock management and spawning of southern flounder, Paralichthys lethostigma, Aquaculture, n. 176, p. 87 99, 1999. SOUZA, M. F. 2002. Homeopatia veterinria. In: Conferncia sobre produo orgnica de bovinos de corte, 1., 2002. Anais... Corumb: Embrapa Pantanal. Disponvel em: www.cpap.embrapa.br/agencia/congressovirtual/pdf/portugues/02/pt02.pdf. Acesso em: 17 out. 2009. STEVENS, O. et al. ACFK: Cobia Fingerling Update. Global Aquaculture Advocate, p. 4647. 2004. SU, M. S. et al. Potential of marine cage aquaculture in Taiwan: cobia culture. In: LIAO, I. C.; LIN C. K. Cage aquaculture in Asia. Proceedings of the First International Symposium on Cage Aquaculture in Asia. Asian Fisheries Society, Manila, and World Aquaculture Society, Bangkok. 2000. SUKUL, N.C. et al. Potentized Mercuric chloride and Nux vomica Facilitate Water Permeability in Erythrocytes of a Fresh-Water Catfish Clarius bathrachus Under Acute Ethanol Intoxication. The Journal of Alternative and Complementary Medicine, v. 9, n. 5, p.719 725, 2003. TAREEN, U.I. Parasitic infestations on cultured marine fish Acanthopagrus cuvieri (Sparidae), incidence and control. Special Publication of the European Mariculture Society, n.9, p. 85-90, 1986. TEIXEIRA, M. Z. Homeopatia: cincia, filosofia e arte de curar. Rev. Med. So Paulo. Abrjun, v.85, n.2, p.30-40, 2006. TOTH, L. et al. Some effect of CuSO4 on carp. J. Environ. Sci. Health Part B Pastic. Food. Contam. Agric. Wastes., Moticello, v. 31, n. 3, p. 627-635, 1996. TSUZUKI, M.Y. Cultivo de peixes marinhos. In: SOUZA-SILVA, A. T. (org.) Sanidade de organismos aquticos no Brasil. Maring: Abrapoa, 2006. ULLMAN, D. A homeopatia - medicina para o Sculo XXI. So Paulo: Cultrix, 1995.

101

VALENTI, W.C. Aquicultura no Brasil: bases para um desenvolvimento sustentvel. Braslia: CNPq. Ministrio da Cincia e Tecnologia, Braslia, CNPq/MCT, p. 25-32, 2000. VALENTIM-ZABOTT, M. et al. Effects of a homeopathic complex in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) on performance, sexual proportion and histology. Homeopathy. n.97, p.190-195, 2008. VANNIER, L.; POIRIER, J. Tratado de matria mdica homeoptica. 9.ed. So Paulo: Andrei, 1987. VIAMONTES, D. et al. Uso de Calcarea carbonica y Baryta carbonica como promotores del incremento en peso en la especie Porcina REDVET. Revista Electrnica de Veterinaria, fevereiro -2005, v.VI. Disponvel em : <http://redalyc.uaemex.mx/src/inicio/ArtPdfRed.jsp?iCve=63612654009>. Acesso em: 16 set. 2010. VIG. E. et al. Pathophysiological effects of selected fungicides and herbicides on carp. Arch. Exp. Vetaned, Stuttgart, v. 41, n. 4, p. 4941-505, 1987 VITHOULKAS, G. Homeopatia cincia de cura. So Paulo: Circulo do Livro, 1980. VIVANCO, J. Una forma de producir ms benvola con el hombre y el medio: el uso de la Homeopata en la avicultura. Disponvel em: <http://www.veterinaria.org/asociaciones/accvcuba/memorias.htm>. Acesso em: 16 ago 2010. WILLIAMS, H.A.; WOOTTEN, R.. Some effects of therapeutic levels of formalin and copper sulphate on blood parameters in Rainbow Trout. Aquaculture, Amsterdam, v. 24, p. 341-353,1981. WOO, P. T. K. Protective immune response of fish to parasitic flagellates. Annual Review of Fish Diseases, v.6, p.121-131, 1996. ZACHARIAS, F. et al. Effect of homeopathic medicines on helminth parasitism and resistance of Haemonchus contortus infected sheep. Homeopathy, n.97, p.145-151, 2008.