AUTOFAGOCITOSIS O AUTOFAGIA

CRECIMIENTO CELULAR

SNTESIS

DEGRADACIN

DEGRADACIN DE PROTENAS INTRACELULARES

Impide la acumulacin de protenas mal sintetizadas o mal plegadas Participa en el control metablico de la clula, eliminando protenas no necesarias o que ya cumplieron su funcin (ej. ciclinas) Es la principal fuente de aminocidos cuando aumentan las necesidades metablicas o disminuye el aporte de nutrientes.

DEGRADACIN INTRACELULAR
NO LISOSOMAL
Es llevada a cabo por el proteosoma Degradacin de protenas de vida media corta Involucra el sistema de ubiquitinacin

LISOSOMAL
Es llevada a cabo en el lisosoma Degradacin de protenas de vida media larga Involucra procesos como la endocitosis, fagocitosis y autofagocitosis

AUTOFAGOCITOSIS

AUTOFAGOCITOSIS Permite la degradacin de macromolculas

citoslicas (ribosomas, RNA) y de compartimientos membranosos (organelas envejecidas, hipertrofiadas)

Participa en la remodelacin celular durante la

diferenciacin, metamorfosis, envejecimiento, cncer, enfermedades neurodegenerativas (Alzheimer)

Mantiene el suministro de aminocidos en ayunos

prolongados mediante el secuestro inespecfico de protenas citoslicas

MADURACIN DE LA VACUOLA AUTOFGICA

FAGOFORO

ENDOSOMAS

LISOSOMAS

AUTOFAGOSOMA

ANFISOMA

AUTOFAGOLISOSOMA

Autofagosomas: microscopa electrnica

Autofagosomas: microscopa electrnica

REGULACIN DE LA AUTOFAGIA

HORMONAS: - Insulina: inhibe la autofagocitosis - Glucagn: estimula la autofagocitosis

AMINOCIDOS: la autofagia aumenta cuando

disminuye la concentracin de AA en el lquido extracelular. Leu, Tyr, Phe, Gln, Pro, Met, His y Trp

REGULACION DE LA AUTOFAGIA

La autofagia es estimulada por el ayuno (falta de aminocidos y suero) y es inhibida en condiciones ricas en nutrientes. Una quinasa llamada Tor (Target of rapamycin) es parte de la cascada de traduccin de seales involucrada en sensar el ambiente nutricional.

+ aminocidos TOR
Rapamicina

- aminocidos
Wortmanina 3-metiladenina

PI3K

Autofagia

MATURATION OF THE AUTOPHAGIC VACUOLE

FAGOFORO

Ayuno Rapamicina

ENDOSOMAS

LiSOSOMAS

LC3

AUTOFAGOSOMA

ANFISOMA

AUTOLISOSOMA

LC3 localiza en autofagosomas despus de ser procesada

LC3-I Citosol

AUTOFAGIA

LC3-II Asociada a membranas

Visualizacin de autofagosomas marcados con la protena GFP-LC3

GFP LC3

Clulas CHO GFP-LC3

+ aminocidos

- aminocidos (ayuno)

Fusin de MVBs con autofagosomas

EGFP-Rab11wt (MVBs) RFP-LC3 (autophagosomes)

Monodansilcadaverina (MDC)

compuesto autofluorescente marcador de autofagosomas

Vacuolas marcadas con MDC

Control

Ayuno (- AA)

+ aminocidos TOR
Rapamicina

- aminocidos
Wortmanina 3-metiladenina

PI3K

Autofagia

INHIBIDORES DE LA VA AUTOFGICA
FAGOFORO

WORTMANINA 3-METIL-ADENINA

LISOSOMAS

AUTOFAGOSOMA

ANFISOMA

AUTOFAGOLISOSOMA

Wortmanina inhibe el procesamiento de LC3 y la formacin de autofagosomas

Ayuno Ayuno + Wortmanina

Wortmanina: inhibidor de PI3K

INHIBIDORES DE LA VA AUTOFGICA
FAGOFORO

LISOSOMAS
VINBLASTINA

AUTOFAGOSOMA

ANFISOMA

AUTOFAGOLISOSOMA

Vinblastina genera grandes vacuolas autofgicas que se marcan con MDC

- Vbl

+ Vbl

AUTOFAGOCITOSIS o AUTOFAGIA Permite la degradacin de macromolculas

citoslicas (ribosomas, RNA) y de compartimientos membranosos (organelas envejecidas, hipertrofiadas)

Participa en la remodelacin celular durante la

diferenciacin, envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas, cncer,

Mantiene el suministro de aminocidos en ayunos

prolongados mediante el secuestro inespecfico de protenas citoslicas. Supervivencia celular.

La autofagia puede ayudar a la supervivencia celular pero tambin puede llevar a la muerte celular

Papel de la autofagia en la salud y la enfermedad

Enfermedad
Cncer

Efectos beneficiosos

Efectos dainos

Supresor de tumores Supervivencia de clulas cancerosas MCP Tipo II en clulas cancerosas en el ambiente pobre en nutrientes de remocin de organelas daadas un tumor evitando la muerte celular Permitira le remocin de agregados proteicos Puede inducir MCP en las neuronas que acumulan agregados proteicos: Huntington, Parkinson, Alzheimer

Enfermedades neuronales

Infeccin con patgenos

Defensa contra la invasin de bacterias y virus

Utilizacin de la va autofgica por parte de ciertos patgenos para establecer la vacuola replicativa Aumento de la autofagia llevara a MCP o defectos en esta va causaran la acumulacin de autofagosomas no funcionales.

Enfermedades lisosomales

Aumento de la autofagia compensara ciertos defectos lisosomales

Microorganismos y la va autofgica
Se benefician
Porphyromonas gingivalis Brucella abortus ( cell type?) Legionella pneumophila Chlamydia trachomatis Coxiella burnetii Staphylococcus aureus Trypanosoma cruzi Poliovirus MHV
Herpes virus

Son destruidos
Listeria monocytogenes Mycobacterium tuberculosis Group A Streptococcus Shigella flexneri Salmonella entrica (20%)

Las vacuolas replicativas de Coxiella son decoradas por GFP-LC3

CRV CV N CRV CV N CRV CV N

Bern et al; Infect. Imm. 70: 5816-5821(2002) Gutierrez et al., Cell. Microb. 7: 981-993 (2005)

La induccin de la autofagia favorece el desarrollo de la vacuola con Coxiella

C
% ce lls with v acuole s 70 60 50 40 30 20 10 0

D
% ce lls with v acuole s

E
**

**

**

**

70 60 50 40 30 20 10 0

Ctrl 2h Full

6h 24h

Ctrl Rap Wm 3-MA Full Starvation

Starvation

Gutierrez et al., Cell. Microb. 7: 981-993 (2005)

Conclusiones
La induccin de la autofagia aumenta el % de clulas infectadas y favorece la generacin y maduracin de las vacuolas con Coxiella. La vacuola con Coxiella colocaliza con protenas de la va autofgica. Sobreexpresin de protenas autofgicas favorece el desarrollo de la vacuola replicativa.

Mycobacterium tuberculosis inhibe la maduracin del fagosoma

Reside en compartimientos que son modificados para evitar la fusin con los lisosomas y la adquisicin de enzimas hidrolticas. Bloquea la maduracin del fagosoma en un punto entre el endosoma temprano y el tardo. Los fagosomas que contienen Mycobacterium restringen la adquisicin de la bomba de protones previniendo la acidificacin.

La induccin de la autofagia favorece la maduracin de los fagosomas con mycobacterium

Cath D
Control
% colocalization

Mycobac
60 50

*** ***

40 30 20 10 0

***

Ayuno

Gutierrez et al., Cell 119:753-766 (2004)

Co n tr ol Sta rv a tion Co ntr ol Sta rv a tion Co n tr ol Sta rv a tion Co nt r ol Sta rv a tio n

CathD LBPA

LAMP-1 VoATPase

La induccin de la autofagia disminuye la supervivencia de Micobacterium

100

% survival

80 60 40 20 0

*** ***

Sta rva tion Ra pam ycin 50 Star v+3M A Star v+W m

Co ntro

Gutierrez et al., Cell 119:753-766 (2004)

Autofagia y microorganismos
Coxiella burnetii
Coxiella

M. tuberculosis
Mycobacterium

phagosome

lysosome

lysosome

autophagosome

Mycobacterium degradation
ER

Coxiella replication

LA AUTOFAGIA COMO MECANISMO DE DEFENSA

Levine, Cell 2005

Papel de la autofagia en la salud y la enfermedad

Enfermedad
Cncer

Efectos beneficiosos

Efectos dainos

Supresor de tumores Supervivencia de clulas cancerosas MCP Tipo II en clulas cancerosas en el ambiente pobre en nutrientes de remocin de organelas daadas un tumor evitando la muerte celular Permitira le remocin de agregados proteicos Puede inducir MCP en las neuronas que acumulan agregados proteicos: Huntington, Parkinson, Alzheimer

Enfermedades neuronales

Infeccin con patgenos

Defensa contra la invasin de bacterias y virus

Utilizacin de la va autofgica por parte de ciertos patgenos para establecer la vacuola replicativa Aumento de la autofagia llevara a MCP o defectos en esta va causaran la acumulacin de autofagosomas no funcionales.

Enfermedades lisosomales

Aumento de la autofagia compensara ciertos defectos lisosomales

Papel de la autofagia en la patognesis de enfermedades lisosomales

MIOPATAS LISOSOMALES

Enfermedad de Danon

Enfermedad de Pompe

Acumulacin de glucgeno

ENFERMEDAD DE DANON Enfermedad poco frecuente ligada al cromosoma X caracterizada por: cardiomiopata hipertrfica Miopata de msculos esquelticos retardo mental variable

Tratamiento Trasplante cardaco

ENFERMEDAD DE DANON
Causada por mutaciones en el gen que codifica a la protena LAMP-2 (Lysosomal Associated Protein-2)
Protena mayoritaria de la membrana lisosomal con un nico dominio transmembrana, un gran dominio intraluminal (altamente glicosilado) y una cola citoslica corta.

Principales alteraciones celulares en la Enfermedad de Danon

Diagnstico
Carencia de protenas LAMP-2 en msculo, leucocitos, y fibroblastos esquelticos y del miocardio

Acumulacin de vacuolas autofgicas con caractersticas de sarcolema en varios tejidos: hgado, rin, msculo cardaco y esqueltico Estas vacuolas contienen enzimas lisosomales, marcadores autofgicos (LC3) y adems protenas del sarcolema como distrofina y acetilcolinesterasa

Acumulacin de vacuolas autofgicas con caractersticas de sarcolema

Malicdan et al., 2008

Por qu se acumulan los autofagosomas?

Se debe a fallas en la maduracin de los autofagosomas (bloqueo en la fusin con lisosomas) y no a un aumento en la produccin de dichos autofagosomas. Estudios demostraron que la protena LAMP es requerida para la fusin de fagosomas y autofagosomas con los lisosomas y para el transporte va microtbulos

La Enfermedad de Danon es un trastorno de la autofagia debido a alteraciones en la fusin y/o motilidad de organelas

ENFERMEDADES LISOSOMALES CON AUTOFAGIA DISFUNCIONAL