Determinao protena Kjeldahl

Relatrio de Aula Prtica de Determinao de Proteinas Pelo Mtodo Kjeldahl. UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE DEPARTAMENTO DE NUTRIO CCS BIOQUMICA DOS ALIMENTOS Determinao de Protenas Totais Mtodo de Kjeldahl PROFa. Karla Suzanne Damasceno 1. Introduo O procedimento mais comum para a determinao de protena atravs da determinao de um elemento ou um grupo pertencente protena. A converso para contedo de protena feita atravs de um fator. Os elementos analisados geralmente so carbonoou nitrognio, e os grupos so aminocidos e ligaes peptdicas (CECCHI, 2003). O mtodo mais utilizado para dosagem de protenas foi proposto por Kjeldahl na Dinamarca em 1883, quando estudava protena em gros. Este mtodo determina N orgnico total, isto , o N protico e no protico orgnico. Porm, na maioria dos alimentos, o N no protico representa muito pouco no total. Para converter o nitrognio medido em protena, multiplica-se o contedo de nitrognio por um fator geral que obtido com base no fato de que, na maioria das protenas, o teor de N em torno de 16%. Ento: 100 gprotenas -------------- 16g N x g protenas -------------- n g N x = n x 100 = n x 6,25 g protenas 16 Fator geral de converso do N em protenas 6,25. 2. Mtodo de Kjeldahl 2.1 Fundamento Baseia-se no aquecimento da amostra com cido sulfrico e catalizador para a digesto at que o carbono e o hidrognio sejam oxidados. O nitrognio da protena reduzido e transformado em sulfato de amnia. Adiciona-se NaOH concentrado e aquece-se para a liberao da amnia dentro de um volume conhecido de uma soluo de cido brico, formando borato de amnia. O borato de amnia formado dosado com uma soluo cida (HCl) padronizada. 2.2. Amostra - 0,2g da amostra seca 2.3 Reagentes

- cido sulfrico P.A, d = 1,84 - 5mL -Mistura cataltica 2g (Na2SO4 e CuSO4.5H2O) - NaOH 40% - 20mL - Soluo de cido brico 3% - 5mL - Soluo de HCl 0,1N - Soluo indicadora: vermelho de metila 0,2% + azul de metileno 0,2% 2.4 Equipamentos - Tubo de Kjeldahl - Bloco digestor - Destilador - Erlernmeyer 250mL - Bureta 2.5 Tcnica O mtodo consiste de 3 fases: a) digesto, b) destilao e c) titulao. 2.5.1. Digesto da amostra - Pese 0,2g da amostra em papel de filtro livre de N. - Coloque a amostra com o papel no tubo de Kjedahl. - Adicione 2g da mistura cataltica. - Adicione, com cuidado, 5mL de cido sulfrico. Agite. (Na capela). - Coloque para digerir no bloco digestor com a chapa a 450C. - Deixar digerindo em aquecimento at que o contedo do balo fique lmpido e transparente (azul ou verde claro). A digesto termina quando os gases brancos desaparecem e o material contido no tubo de Kjeldahl tornar-se lmpido. Isto varia de 1 3h, dependendo da amostra. - Deixe esfriar. 2.5.2. Destilao da amnia (Para operar o destilador siga as instrues em anexo) - Coloque 15mL de gua destilada no tubo at dissolver a amostra. - Esfrie o tubo em banho de gelo ou gua corrente; - Coloque o tubo com a amostra digerida no destilador; - Coloque 20mL de NaOH 40%, com a torneira fechada. Abrir um pouco a torneira e deixar escorrer bem lentamente; - Ligue a chave de aquecimento; - Coloque 10mL de cido brico 3% em um erlenmeyer de 250mL com 3 gotas de indicador misto. - Coloque o erlenmeyer com o cido brico e indicador no bico do condensador; - Deixe destilar at a cor verde, e espere completar um volume de cerca de 50mL para garantir o trmino da evaporao e condensao de toda a amnia presente na amostra.

- Retire o erlenmeyer e desligue a chave de aquecimento; 2.5.3. Titulao - Titule o borato de amnio com soluo de cido clordrico 0,1N - Anote o volume gasto na titulao. Clculos Protena total (%) = V x f x 0,0014 x 6,25 x 100 P(g) Protena total (%) = V x f x 0,008755 x 100 P(g) Onde: V = volume gasto de HCl 0,1N f = fator do HCl 0,1N 0,0014 = miliequivalente grama do nitrognio 6,25 = fator de converso geral do nitrognio em protena P = peso Referncias BRASIL. Ministrio da Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Mtodos Fsico-Qumicos para Anlise de Alimentos. Edio IV. Instituto Adolfo Lutz. Braslia: Ministrio da Sade, 2005. CECCHI, Heloisa Mscia. Fundamentos tericos e prticos em anlise de alimentos. 2ed.rev. Campinas: Editora Unicamp, 2003. SILVA, Dirceu Jorge; QUEIROZ, Augusto Czar de. Anlise de alimentos. Mtodos qumicos e biolgicos. 3 ed. Viosa: UFV, 2002. ANEXO Instrues de uso do destilador Siga os seguintes passos: 1. Ligue o aparelho: - Verifique se todos os botes da frente esto desligados e o potencimetro no zero; - Ligue a gua da torneira e o equipamento na tomada; - Ligue a chave geral; - Verifique a gua da caldeira (se estiver vazia, ligar o boto nvel e verificar o enchimento). 2. Aquea a caldeira: - Verifique se a torneira do copo dosador est fechada; - Conecte um tubo vazio; - Coloque um erlenmeyer no bico do condensador; - Ligue a chave de aquecimento;

- Coloque o potencimetro no n 7; - Quando aquecer, retirar o tubo vazio. Para iniciar a destilao da amostra 3. Inicie a destilao: - Coloque 15mL de gua destilada no tubo de Kjeldahl at dissolver a amostra. - Esfrie o tubo em banho de gelo ou gua corrente; - Coloque o tubo com a amostra digerida no destilador; - Coloque 20mL de NaOH 40%, com a torneira fechada. Abrir um pouco a torneira e deixar escorrer bem lentamente; - Ligue a chave de aquecimento; - Coloque o erlenmeyer com o cido brico e indicador no bico do condensador; - Deixar at a viragem, e aguardar para que complete um volume de 50mL - Retire o erlenmeyer e desligue a chave de aquecimento; - Se for continuar a fazer anlises, verifique o nvel de gua da caldeira. Se estiver vazia, aperte no boto de nvel para encher (com o aquecimento desligado). 4. Limpe o equipamento: - Antes de ser desligado, o equipamento deve ser lavado; - Lave o copo dosador com gua destilada e pisseta; - Conecte um tubo de digesto com gua destilada para fazer uma destilao. 5. Desligue o equipamento - Desligue a chave de aquecimento; - Desligue a chave geral e desligue da tomada; - Feche a torneira.

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