III.

CULTIVO DE ROTIFFROS
En el phylum rotfera se encuentran especies muy importantes objeto de estudio de Zologos y Eclogos, pues son organismos muy activos considerados depredadores en el mundo del plancton pues consumen altas concentraciones de microorganismos, tienen una alta tasa de reproduccin y su afloramiento abate rpidamente la concentracin de oxgeno en el medio. Es por ello que su localizacin en los ambientes acuticos permiten indicar la presencia de materia orgnica (medios eutrficos) por lo que revisten gran inters en estudios de Ecologa y contaminacin. En la dcada de los 60's empezaron a considerarse seriamente como una alternativa de alimentacin en Acuacultura por sus caractersticas de desarrollo, facilidad de cultivo y aporte nutricional. Una de las especies seleccionadas para su uso en Acua ultura es Brachionus plicatilis del que presentamos sus alternativas de produccin en cultivo en los siguientes incisos. 1. CONSIDERACIONES CENERALES SOBRE LOS CULTIVOS DE ROTTFEROS Brachionus plicatlis es miembro de la Familia Brachionidae. El ciclo de vida de este organismo involucra una alternancia en la reproduccin sexual y asexual; la taxonoma de este organismo es descrita por Ruttner & Kolisko (1974). Este organismo ha sido tema de polmica sobre su sistemtica, ya que los datos aportados en cuanto a talla y forma concluyen que esta especie en relacin al hbitat es variable, ya que soporta amplios rangos paramtricos y est ampliamente distribuida, y esta distribucin se debe a la alta longevidad y resistencia de huevos latentes. Los rangos de salinidad que soporta van desde 1 a 97 ppm (Ruthner & Kolisko, 1974) con el lmite extremo de 200 ppm. Este mismo autor concluye que el agua de mar es el medio ptimo de este organismo. Es tambin importante mencionar que en dilucin rpida del agua de mar se obtiene un incremento en el nmero de hembras y produccin de huevos. El nmero de huevos producidos por hembra, es un indicador de las condiciones ptimas del medio. Su amplia distribucin indica que es una especie Euriterma (5~20C). La Figura 12 describe la anatoma de B. plicatilis (R. Huches, en: B. Pejler et al., 1983). B. plicatilis es una especie que no selecciona su alimento (polfago), es un filtroalimentador, se puede alimentar de microalgas: Cianoficeas, Chloroficeas, Pheoficeas, etc., bacterias y levaduras (Hirayama, 1973 y otros). Pejler (1983) seala que no se inlcuye en su dieta las Familias Cryptomonas y Chrysophytas. Otros trabajos demuestran que slo pueden ingerir partculas de 1215 en tamao (Hirayama, 1978). Existen diferentes trabajos que reportan tasas de ingestin de: 0.14 1/min de Chlamidomonas, 0.034 1/min de Olisthodiscus, 0.1 1/min de Chlorella, 0.025 1/min de Dunaliella (Hirayama et al., 1972, y otros. 2. CULTIVO MASIVO Y CALIDAD NUTRICIONAL La produccin masiva del rotfero Brachionus plicatilis se inici en Japn alrededor de los aos 60's. Estos se cultivaron inicialmente transfirindolos de un estanque a otro de Chlorella con una densidad de 10 a 20 106 c/ml (SISFFA, 1964a, b). Por lo imprctico de la tcnica se iniciaron una serie de investigaciones tratando de encontrar el mtodo adecuado para la produccin continua de rotferos, sin depender de los cultivos masivos

de Chlorella y otras microalgas; una de stas propuso el uso de la levadura de pan (Saccharomyces cerevisiae) como alimento (Hirata & Mori, 1963). Se pens que sta resolvera la produccin de rotferos, pues esta tcnica permite obtener densidades muy altas de ms de 100 rotferos/ml, despus de la publicacin de estos resultados, otros investigadores se interesaron en estudiar la composicin qumica de los rotferos alimentados con diferentes microalgas y levaduras (Fukusho et al., 1976; Hirata et al., 1980; Imada, 1980; Watanabe, 1978; Kitajima et al., 1980).

FIG. 11) Anatoma de Brachionus plicatilis (Rotfera) en: B. Pejler et al., 1983). En la Figura 13 se muestran los resultados obtenidos por Hirata et al., en relacin a la utilizacin de: a) Chlorella, b) Levadura y c) Levadura/Chlorella. Como se puede observar los resultados obtenidos con las dietas a y c, son densidades altas hasta de 100 R/ml. Por otro lado, se realizaron investigaciones en cuanto al aporte nutricional de los rotferos para el cultivo de larvas de peces y se observ que en las larvas de peces alimentados con rotferos producidos a partir de ladieta de levadura o la mezcla 95% levadura y 5% Chlorella ocurran altas mortalidades. Se identific la causa como un desvalance nutricional en cuanto a los cidos grasos esenciales (Fukusho et al., 1976; Kitajima et al., 1980ab; Watanabe, 1978). Otras investigaciones aportaron la utilizacin de una levadura mejorada con cidos grasos del tipo W 3 altamente insaturados, la cual recibe el nombre

de Levadura Omega (Imada, 1980; Watanabe, 1978; Kitajima et al., 1980a,b, etc.). En la Tabla 18 se muestra la composicin de aminocidos en B. plicatilis con diferentes dietas. Los estudios comparativos de la concentracin de cidos grasos W 3 que Chlorella (especies marinas) posee, es de 29%, la levadura de pan 1.3% y la Levadura Omega 34.7%. Esta ltima se produce comercialmente en Japn (Kitajima, 1980). Otros trabajos ms prcticos y baratos aportaron datos en relacin a la determinacin del contenido nutricional de diferentes especies del zooplancton: Acartia clausi, Tigriopus japonicus, Artemia sp y Moina sp. Se encontr que la abundancia y calidad de estas especies de zooplancton dependen de su nutricin, y que la eleccin de una especie de microalgas, levadura u otro microroganismo para alimentar a stos depende de la composicin qumica, temperatura, fotoperodo y tipo de cultivo al que est sometida esta especie de microorganismo. Por ejemplo, las especies de zooplancton alimentados con Chlorella obtienen un enriquecimiento en cidos grasos de un 12.7 a un 18.8% (Imada et al., 1979; Imada, 1980; Watanabe, 1978b, 1980). Para fines prcticos, la produccin masiva de microalgas y la utilizacin de levadura de pan aportan buenos resultados en la produccin masiva de larvas de peces y otros invertebrados, tomando en cuenta que esta utilizacin permita un enriquecimiento de los cultivos de zooplancton llamado tratamiento verde, (6 a 12 h en un cultivo de microalgas) despus de haber obtenido una alta densidad con levadura por tres a cuatro das (pueden ser obtenidos ms de 100 R/M). Esto permite que el zooplancton obtenga la concentracin necesaria de cidos grasos y aminocidos esenciales para el buen desarrollo de las diferentes especies de invertebrados y peces producidos mediante esta tcnica. En la Tabla 19 se muestra la composicin de aminoacidos en cuatro especies del zooplancton de uso en acuacultura.

FIG. 12) Densidad de rotferos con diferentes alimentos A) Chlorella; B) Levadura; C) Chlorella/Levadura; D) Control (Hirata, 1980). TABLA 19. COMPOSICION DE AMINOACIDOS EN Brachionus plicatilis, CULTIVADO CON DIFERENTES MICROALGAS Y LEVADURAS (g/100 g PROTEINA CRUDA)
Nagasaki 1975
2

Gifu 1976
1

1975
3

Levadur

Levadur

Chlorell Levadur

Levadura

Chlorell Levadur

Chlorell

a Isoleucina Leucina Methionina Cystina 2.9 5.5 0.8 0.7

a+ a Chlorella 2.8 5.3 0.8 1.1 3.4 3.0 3.1 1.2 3.5 5.8 4.5 1.4 3.2 7.5 8.8 2.9 5.9 3.7 67.9 3.1 5.6 0.8 0.8 3.5 3.2 3.4 1.2 3.8 5.8 4.6 1.4 3.7 8.0 9.3 3.1 5.8 3.9 71.0

a 4.4 6.9 1.0 0.7 4.5 3.0 4.0 1.1 4.4 6.6 5.2 1.7 3.9 9.8 10.1 3.6 5.0 3.7 79.5

+ Chlorella 4.0 6.1 0.9 0.7 4.1 2.8 3.5 1.1 4.0 6.0 4.6 1.5 3.5 8.9 9.7 3.1 4.8 3.6 72.9

a 4.0 6.2 0.9 0.7 4.1 2.9 3.4 1.2 4.2 6.0 4.8 1.7 3.5 8.8 9.5 3.2 4.9 3.7 73.7

a 3.2 6.2 0.9 0.9 3.9 3.2 3.4 1.2 4.0 5.5 4.4 1.5 3.9 8.5 10.1 3.1 6.1 4.2 74.2

a 3.4 6.1 0.8 0.6 3.9 3.1 3.2 1.2 4.2 6.1 4.6 1.5 3.8 8.0 9.8 3.1 6.7 4.0 74.1

Phenylalanin 3.5 a Tyrosina Threonina Valina Lysina Arginina Histidina Alanina Acido Asprtico Acido Glutmico Glycina Prolina Serina TOTAL 3.0 3.5 3.6 5.7 4.2 1.4 3.2 7.7 8.9 2.9 5.2 3.7 67.5

Tryptophano 1.1

Muestra obtenida con Etanol al 80%, por hidrlisis con ter dietlico.
1. Rotferos cultivados con Chlorella minutissima. 2. Rotferos cultivados con levadura. 3. Rotferos cultivados con Chlorella marina y levadura (1 g de levadura/10 cel/ml agua de mar/da). 4. Rotferos cultivados con levadura y enriquecidos con Chlorella marinapor 36 horas (Watanabe, et al., 1978b; Hirata, 1983).

TABLA 20. COMPOSICION DE AMINOACIDOS EN DIFERENTES MICROCRUSTACEOS (g/100 g PROTEINA CRUDA) (WATANABE et al., 1978b)
Aminocidos Isoleucina Leucina Methionina Cystina Artemia salina1 2.6 6.1 0.9 0.4 Acartia clausi 3.5 5.5 1.5 0.8 Trigriopus japonicus 2.5 5.0 1.1 0.7 Moina sp. 2.5 6.0 1.0 0.6

Phenylalanina Tyrosina Threonina Tryptophano Valina Lysina Arginina Histidina Alanina Acido Asprtico Acido Glutmico Glycina Prolina Serina TOTAL

3.2 3.7 1.7 1.0 3.2 6.1 5.0 1.3 4.1 7.5 8.8 3.4 4.7 4.6 68.3

3.7 3.6 4.2 1.1 4.5 5.4 4.3 1.9 5.4 9.0 9.5 4.6 4.6 3.3 76.4

3.5 4.0 3.8 1.1 3.3 5.7 5.2 1.6 4.9 9.0 10.8 4.5 4.8 4.3 75.8

3.6 3.3 3.8 1.2 3.2 5.8 5.1 1.6 4.9 8.3 9.8 3.7 4.2 4.0 72.6

1. Nauplios de Artemia recien eclosionados

3. TECNICAS ALTERNATIVAS DE PRODUCCION MASIVA Para el cultivo de B. plicatilis en condiciones ptimas se recomienda la utilizacin de agua de mar (32~35%), la temperatura ptima de 25C (Hirata & Mori, 1963; Watanabe, 1978, e Hirata 1980), y en cuanto a la seleccin del mejor mtodo de cultivo masivo a continuacin se describen esquemticamente, algunos ejemplos de sistemas de cultivo desarrollados por diferentes autores para la produccin masiva de rotferos. El primer sistema utilizado fue el llamado mtodo de estanque de transferencia en cultivos sucesivos de Chlorella (SISFFA, 1964a,b) (Figura 14). Posteriormente la produccin de B. plicatilis con levadura de pan (Hirata & Mori, 1967) (Figura 15) sustituye la transferencia sucesiva por tanques de recirculacin, mejorando el tanque con grava en el fondo y colocando un ascensor de aire en el centro. La Figura 16 muestra un cultivo sistemtico, alternando la dieta de Chlorella y levadura llamado thinning out method (Fukusho et al., 1976). Este mtodo es el de mayor uso en cultivos masivos pues reporta una alta produccin de rotferos (300 R/ml). Y finalmente el mtodo desarrollado por Hirata et al. (1977), llamado sistema de retroalimentacin, semejando un ecosistema con la participacin de bacterias pseudomonas (produccin de nutrientes por biodegradacin) para Chlorella y sta como alimento de rotferos, los desechos de stos hacia un biodepsito, etc. (Figura 17) (Feedback System; Hirata, 1980). Las tasas de conversin de alimento de este tipo de sistemas diariamente se incrementan. Se puede concluir que los sistemas de

retroalimentacin tienen dos ventajas al mismo tiempo: la purificacin del agua y la minimizacin de prdida de energa a travs de la alimentacin. Esto permite el establecimiento de un cultivo de produccin continua, como se muestra en las Figuras 18 y 19. 4. IMPORTANCIA DEL CULTIVO DE Brachionus plicatilis Las principales ventajas que ofrece el cultivo de Brachionus plicatilis son: rangos amplios de T y S%, y diferentes alternativas prcticas de cultivo masivo, su pequeo tamao (100300 ), lo que permite a las lavas de peces y crustceos ingerirlos cuando todava no pueden ingerir nauplios de artemia, su fcil y barata alimentacin con diferentes especies de fitoplancton, levaduras y dietas artificiales. Su alta velocidad de reproduccin bajo condiciones ptimas de cultivo, pudiendo duplicarse la poblacin en menos de 24 horas, lo que permite obtener altas densidades (Theilacker & McMaster, 1971; Amat, 1975; Funikowa & Idaka, 1973; Hirayama & Kusano, 1972; Hirata, 1975; Hirata et al., 1985; Watanabe et al., 1979; Kitajima et al., 1979; Imada et al., 1979; Yufera et al., 1983; Trotta, 1983). En cuanto a su contenido nutricional, como ya se mencion anteriormente B. plicatilis ofrece la gran ventaja de incrementar su contenido nutricional en relacin de su dieta como lo demuestran los trabajos de Watanabe et al. (1983) y cuyos resultados en relacin a contenido de cidos grasos esenciales se presentan en las Tablas 20 y 21. Para el buen manejo de la poblacin de rotferos en cultivo, es recomendable el uso de ecuaciones sencillas como las que se muestran en la Tabla 22, que nos permiten conocer la concentracin adecuada de alimento y la tasa de reproduccin y fecundidad, factores que nos indican el buen desarrollo del cultivo, que si son bien controlados nos permitirn el establecimiento de cultivos continuos y densos para su uso como alimento vivo.

FIG. 13) Mtodo del tanque de transferencia.

FIG. 14) Esquema del sistema de cultivo en tanque de recirculacin: A) Bomba de aire; B) Rotferos en el medio; C) Tubo de vinil (25 cm de dimetro); D) Filtro de recirculacin; E) Tina de policarbonato (Pan-light), cubierta de fibra de vidrio..

FIG. 15) Tcnica de cultivo desarrollada por la asociacin The Seto Inland Farming Fisheries Association (SISSFFA) y la Estacin de Maricultura de Nagasaki. Este mtodo es el ms comnmente utilizado y es llamado Thinning out method (Fukusho et al., 1976).

FIG. 16) Sistema de retroalimentacin de nutrientes (Feedback System) para el cultivo masivo de rotferos (Hirata, 1980).

FIG. 17) Variaciones en la densidad de rotferos en el sistema de cultivo de retroalimentacin (Feedback System) en tanque de 2,700 l (Hirata et al., 1980).

FIG. 18) Seccin del sistema de retroalimentacin del cultivo de rotferos: A) Tanque de 2,700 l; B) Biodepsito en zig-zag; C) Aereador mvil; D) Motor de reduccin; E) Regulador de automvil; F) Compresor. TABLA 21. TIPO DE ACIDOS GRASOS PRESENTES EN ROTIFEROS PRODUCIDOS EN VARIOS SUSTRATOS
ACIDOS GRASOS CULTIVO 16:0 16:1 7 18:0 18:1 9 18:2 6 + 18:3 3 + ROTIFERO LEVADURA (S. cereviceae) 8.7 24.2 4.8 33.9 5.8 + 0.6 + ROTIFERO ROTIFERO LEVADURA + Chlorella Chbrella marina marina 11.7 16.8 16.6 24.3 6.0 1.7 22.8 10.1 10.4 + 2.2 + 3.2 + 0.4 + ROTIFERO AGUA DULCE 8.9 18.9 1.6 9.0 15.7 + 10.2 +

20:1 20:3 3 20:4 6 20:4 3 20:5 3 22:1 22:5 3 22:6 3

6.0 + 0.4 0.4 0.5 1.0 1.7 0.2 0.5

3.3 2.3 2.3 0.6 8.1 1.5 1.7 0.9 11.3

2.4+ 4.4 4.4 0.2 24.1 1.3 3.8 0.5 28.6

0.3 0.8 0.8 1.1 1.9 0.3 - -

3HUFA 2.2

* Watanabe et al., 1983 Acido graso esencial para especies marinas + Acido graso esencial para especies de agua dulce

TABLA 22. TIPO DE ACIDOS GRASOS PRESENTES EN ROTIFEROS ALIMENTADOS CON LEVADURA (Saccharomyces cerviceae) Y LEVADURA OMEGA

(W)
ACIDOS GRASOS 16:0 16:1 7 18:0 18:1 9 18:2 6 18:3 3 20:1 20:3 3 20:4 6 20:5 3* 22:5 3 22:6 3 3 HUFA* -* -* -* LEVADURA (S. cereviceae) 8.3 20.0 14.2 38.2 3.4 8.4 26.1 43.9 2.8 15.1 0.5 6.4 tr - 1.6 LEVADURA OMEGA 13.4 16.9 5.0 6.6 2.3 2.6 15.5 16.4 1.0 1.1 0.8 0.9 8.4 9.2 3.0 3.4 3.0 3.4 13.4 17.4* 0.9 1.4 12.8 15.6* 33.5 35.8* 34 12 12 12* 00.4 ROTIFEROS LEVADURA 67 2627 34 2630 79 CULTIVADOS EN LEVADURA OMEGA 10 12 10 11 23 22 24 24 0.7 0.8 8 10 34 34 9 12* 23 7 9* 25 26*

*
244*

W La levadura W est enriquecida con una fuente de cidos grasos esenciales * Son cidos grasos esenciales

TABLA 23. TASAS DE ALIMENTACION, REPRODUCCION Y FECUNDIDAD EN CULTIVOS DE ROTIFEROS Brachionus plicatilis

donde: R = tasa de alimentacin S = suplemento alimenticio (g) Tb = peso total de la muestra de rotferos (g)

Reproduccin: donde: P.H. = produccin de huevos NRh = nmero de rotferos con huevos T.R. = nmero total de rotferos de la muestra donde: D.H. = densidad de huevos D.R. = densidad de rotferos

Indice de fecundidad: Tasa de recuperacin: donde: A = poblacin en momento t1 B = poblacin en momento t2