EL MICROSCOPIO PRINCIPIOS OPTICOS Y MANEJO1 GUTIERREZ, Sebastin (273875) PRIETO, Stefania (273891) SANTODOMINGO, Olgher (132897) ZULUAGA, Diego

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OBJETIVOS Estudiar los principios pticos y propiedades del microscopio. Conocer y ejercitar el correcto manejo del microscopio. Determinar el dimetro del campo ptico. Microscopio Compuesto El microscopio compuesto esta constituido por tres sistemas: uno mecnico otro de iluminacin y uno que llamamos ptico. El sistema mecnico son todos aquellos mecanismos que hacen del microscopio una herramienta funcional, permite mover todas las

partes del microscopio: el cabezote, la platina, los objetivos, y el portaobjetos. El sistema de iluminacin suministra la luz que hace visibles las muestras. El sistema ptico, son todas las lentes que se encuentran el microscopio: sus partes principales son: el Objetivo, el Ocular y el condensador. La figura 11 muestra las partes fundamentales de un microscopio. Ocular: Tiene como fin realizar la magnificacin de la imagen aumentada por el objetivo, lleva los rayos de luz al observador, se puede girar para lograr enfocar las imgenes. Objetivo: Lente situada muy prxima al objeto de observacin que llamamos simplemente objeto. Amplifica los rayos que atraviesan el objeto y proyecta una imagen area en el tubo del microscopio que despus es amplificada por el ocular. Porta objetos: En el se fijan las laminas de vidrio en las que se deposita la muestra de inters.

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Condensador: Lentes que concentran los rayos de luz provenientes de la fuente. Patina: Plataforma metlica horizontal entre la fuente de luz y la muestra, consta de dos regletas micromtricas (una horizontal sobre el plano del objeto y otra vertical) que permiten realizar mediciones. Fuente de Luz: Es la que suministra la luz al condensador, en microscopios pticos puede ser un espejo o una bombilla incandescente. Tambor: En microscopio con ms de un objetivo se implementa un tambor rotativo que permite cambiar de un objetivo a otro. Brazo: Estructura que junto con el soporte construyen el microscopio,

cuenta con un tornillo micromtrico que permite acercar o alejar el objetivo a la muestra hasta lograr la distancia focal. El tornillo macromtrico: girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a un mecanismo de cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin. El tornillo micromtrico: mediante el ajuste fino con movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y ntido de la preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm., que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

Principios Fsicos y funcionamiento del microscopio

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La Figura 22 muestra cmo funciona el sistema de lentes de un microscopio para producir una imagen aumentada de una muestra diminuta. Con la finalidad de simplificar el dibujo 3 aqu slo se ve el sistema de lentes del microscopio. Ms adelante veremos el sistema completo, inclusive el sistema de iluminacin, La lente condensadora, situada bajo la platina, y los espejos y prismas del interior del tubo binocular. En la figura 1, a la derecha, se ve el esquema del microscopio tradicional. La funcin del objetivo es comparable a la de una pequea lente de proyeccin. Sin embargo, en vez de proyectar la imagen en una pantalla, proyecta la imagen primaria aumentada del objeto hacia arriba, cerca del extremo superior del tubo del microscopio. Esta imagen primaria se forma en el aire y por lo tanto se denomina "imagen area. (La presencia de esta imagen podra visualizarse si se retirara el ocular y se instalara una pequea pantalla translcida en el plano de esta imagen area.). En la realidad, sin embargo, no utilizamos una pantalla sino que visualizamos esta imagen a travs
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del ocular. El ocular funciona prcticamente como una lupa, con la diferencia principal de que aumenta una imagen area en vez de un objeto real. En realidad no hay un lmite mximo de aumentos en un microscopio, slo existe un lmite en cuanto a los aumentos tiles. La limitacin fundamental no consiste en el aumento sino en el poder de resolucin, o sea, la capacidad del microscopio de visualizar los detalles ms finos del objeto. Una vez que el objeto se ha aumentado hasta el punto en donde la imagen se vuelve borrosa, el hecho de aumentar el objeto an ms producir, debido al lmite del poder de resolucin, una imagen de tamao ms grande, pero tambin ms borrosa y sin visualizacin de ms detalles. Este tipo de incremento intil del aumento se llama "aumentos vacos, indicando que se trata de aumentos ms all del lmite til en cuanto a la reproduccin fiel de los detalles finos.

El Poder de aumento A Es el que determina el nmero de veces en el que se magnifica la imagen esta dado por la relacin entre el tamao real del objeto y el

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tamao de la imagen esta dado por la ecuacin [1], de esta manera un aumento de 100 dimetros se representa por 100X, y nos indica que la imagen esta aumentada 100 del tamao del objeto. A= TIm agen TObjeto [1]

detalles ms finos. La figura 33 nos muestra la relacin entre el poder de resolucin y la apertura numrica. El poder de resolucin esta determinado por la ecuacin [2]. P.R =

[2] 2 N .A

El poder de resolucin El poder de resolucin de un microscopio por lo general

Poder de definicin En el microscopio nos permite formar imgenes con contornos claros y definidos. Poder de profundidad Al enfocar un objeto por medio de un microscopio, hay un margen finito por encima y por debajo de este objeto, en el cual se visualizan ntidamente otros objetos. Este margen se llama profundidad de foco del microscopio y vara considerablemente en funcin de la N.A del objetivo, segn la ecuacin [3].

depende del diseo del objetivo. Un objetivo capaz de aprovechar un gran cono angular de luz procedente de la muestra, tendr mejor poder de resolucin que un objetivo limitado a un cono de luz ms pequeo. Esto se aprecia mirando las imgenes comparativas. El objetivo que recibe un cono de luz mayor, figura 3 proporciona una imagen que reproduce mucho mejor los

( N ( NA) ) d=
2

( NA)

[3]

Para la visualizacin del objeto, hay que aadir ms profundidad, ya que el ojo es capaz de realizar un cierto grado de acomodacin segn la ecuacin [4].
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d=d+

250 [4] M2

no en la parte inferior de la platina para evitar desajustes en el diafragma y condensador. En Microscopios parafocales basta enfocar la muestra con el objetivo de menor aumento X10 y todos los dems objetivos pueden ser usados haciendo una pequea correccin con el tornillo micromtrico, as, es recomendado poner la muestra en la platina y mover el tornillo macromtrico hasta lograr enfocar la muestra, despus se puede cambiar a los dems objetivo solo resta enfocar finamente, en el caso de los microscopio del laboratorio se trata de microscopios parafocales y esto es fcil de comprobar al fijar la preparacin y cambiar de objetivo, al realizar este procedimiento se observa que la imagen queda enfocada para todos los objetivos, condicin que contiene los microscopios de este tipo. En esta prctica determinaremos cual es la distancia de trabajo o distancia frontal con el fin de al trabajar predeterminar la distancia de trabajo y as no es necesario mover la cremallera evitando desgastes innecesarios del tornillo micromtrico y la cremallera. Enfoque visual a menor aumento (x10) Despus de poner la intensidad de la luz en bajo encender el aparato, se dispone el tambor en el de menor aumento (x10). Desplazar el objetivo a una distancia aproximada de 2 cm de la muestra, observando por el ocular se acerca el objetivo

Normas y Recomendaciones generales para el buen uso del Microscopio Transporte el Microscopio con ambas manos, una tomando el brazo y la otra sosteniendo la base del esttico y derecho. Descargue suavemente el microscopio sobre la mesa de trabajo. Haga inventario de las partes del microscopio e informe cualquier irregularidad. Use papel para lentes en caso de ser necesario limpiarlos. Si usa liquido de inmersin debe limpiarlo antes de guardar el microscopio.

El portaobjetos no debe estar hmedo por la parte inferior, ya que la humedad puede causar friccin y esta puede daar el mecanismo del carro. Regule la menor luminosidad cuando deje de hacer observaciones por un periodo largo, al encender o apagar el microscopio verifique que la intensidad lumnica se encuentra en el mnimo. Al guardar el microscopio debe enrollarse el cable en el tubo y

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lentamente hacia la platina hasta lograr enfoque. En el momento en el que se logra enfocar la preparacin debe graduarse los lentes del ocular para lograr las distancias interpupilares del observador, que se consigue girando el ocular. Determinacin del campo ptico dimetro

Tabla 1. Campo de trabajo para Microscopio en el laboratorio. Aberracin en la imagen del los lentes pticos El sistema de lentes no es perfecto. Todos los sistemas de lentes tienen un nmero menor o mayor de aberraciones segn la complejidad del diseo. Los sistemas de lentes estn compuestos por lentes individuales con superficies esfricas; y una de las caractersticas de las superficies esfricas es que no forman imgenes perfectas. Por medio de combinaciones inteligentes de formas de lentes y tipos de cristal se consigue contrarrestar los defectos de una superficie aplicando defectos iguales u opuestos en otras superficies de forma que el resultado final se aproxime a la Imagen. Las aberraciones principales de una imagen formada por una lente esfrica son las siguientes: l. Aberracin esfrica Trmino aplicado para describir el hecho de que los rayos procedentes de un punto y que atraviesan la parte ms externa de la lente tienen distinto foco que los que pasan por el centro de la misma. Para superar este problema se realizan combinaciones de lentes convergentes y divergentes. La Figura 5 muestra la imagen de un objeto puntiforme, comparando la con la figura 6 que nos muestra la imagen distorsionada que debido a la aberracin esfrica algunos rayos de luz que deberan pasar por el

Al conseguir claramente la imagen medimos la distancia de trabajo como se muestra en la figura 4.

Para los diferentes objetivos obtuvimos las distancias de campo consignadas en la tabla 1. Objetiv o x4 x10 x40 Campo de Trabajo 20 mm 8 mm 1 mm

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centro han sido dispersados hacia fuera, a la estructura de aro. Esta difusin desfavorable causa una prdida de contraste en las imgenes.

que son paralelos o perpendiculares al radio del campo. La figura 7 nos muestra esta aberracin en una imagen puntiforme.

Figura 5. Imagen de objeto puntiforme.

Figura 7.Imagen afectada por astigmatismo III. Coma Se dice que una lente est afectada por coma cuando diferentes zonas circulares concntricas de la superficie de la lente proporcionan aumentos diferentes a una imagen desplazada del eje. Debido a este defecto, la imagen de un objeto puntiforme aparece en forma de cometa. En la figura 84 se puede apreciar el grave deterioro que sufre la imagen de un objeto puntiforme debido a la aberracin de coma. Si en el centro del campo tenemos aberracin de coma, ser un claro ejemplo de que el objetivo est daado.

Figura 6. Imagen distorsionada por aberracin esfrica.

II. Astigmatismo Se produce cuando objeto puntiforme situado fuera el eje se visualiza como dos imgenes lineales separadas, las cuales se encuentran a diferentes distancias de la superficie de la lente, el resultado es un deterioro general de la imagen desplazada del eje, sin embargo, una imagen astigmtica nunca puede enfocarse de modo que resulte una imagen ntida, a excepcin de los detalles

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Figura 9. Curvatura de campo.

Figura 8. Imagen afectada por coma. IV. Curvatura del campo Como su nombre indica, esta aberracin produce una imagen curvada de un objeto plano. Esto se debe a que el centro y los lmites de la imagen se enfocan a distancias distintas. Como consecuencia, cuando la parte central de la imagen est claramente enfocada los lmites del campo parecen quedar fuera del foco, y viceversa. La figura 8 muestra la imagen del mismo rayado cruzado que se ve en figura 9, sin embargo, aqu la lente sufre de curvatura del campo.

V. Distorsin en el sistema de lentes Provoca que las lneas rectas aparezcan curvadas. Fjese en las lneas curvadas cerca del contorno.

Figura 9. Distorsin en el sistema de lentes

VI. Aberracin cromtica Se debe a que la distancia focal de la lente vara con la longitud de onda. Este defecto se controla combinando adecuadamente los diferentes tipos de cristal.

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VII. Aberracin cromtica de aumento Se produce cuando los rayos de luz de un determinado color se proyectan con ms aumentos que los rayos de luz de otro color. Resea Histrica Se estima que el primer microscopio fue desarrollado por Anton van Leeuwenhoek hacia 1600, consista en una pequeamente convexa que funcionaba como una lupa, y un tornillo fino. En el ao de 1608 Zacharrias Cansen desarrolla el microscopio con dos lentes convexas, que fue perfeccionado por Kepler en 1611 que lo establece como un microscopio compuesto. De las primeras investigaciones realizadas con el microscopio se resaltan los descubrimientos realizados por Robert Hooke quien mediante observaciones de un corcho plantea una teora de clulas, en 1674 mediante el perfeccionamiento del microscopio compuesto Leeuwenhock logra observar los protozoarios. Descubrimientos cientficos implantados en los microscopios por W. Nicol en el ao de 1828, implement la luz polarizada para la observacin discriminada de sustancias qumicas el los objetos

observados, que pigmentadas y expuestas a alguna frecuencia lumnica polarizada permitan determinar composicin de las muestras. Gracias a su uso se logra en 1838 observar los ncleos celulares, se identifica la clula como unidad estructural y funcional en animales y plantas, diferencindose un gran nmero de clulas y tejidos animales cuando Retzius en 1881 se asuma a un con fines investigativos. En 1849 J. Quekett publica un tratado sobre el uso del microscopio aun usado. Para 1908 se implementa en el microscopio la luz fluorescente por Khler y Sicdentopf, rpidamente aparecieron los Microscopios de interferencia quien los presenta al mundo en 1930, y Zernike disea en 1932 el Microscopio de contraste de fases, muy poco quedo por hacer despus de que Ernest Ruska Y Max Knoll en 1932 desarrollan el microscopio Electrnico que mediante herramientas computacionales mostraron los rincones mas ntimos de las clulas y en la actualidad permiten observaciones nanomtricas. BIBLIOGRAFIA NASON, A. Biologa. Ed. Limusa. Mxico, DF, 2000. SALISBURY, F. Fisiologa de las plantas. Ed. Paraninfo. Madrid 2000.

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[En lnea] http://es.wikipedia.org/wiki/Microsc opio http://www.ite.educacion.es/w3/eos /MaterialesEducativos/primaria/con

ocimiento/reinovegetal/temas/temas framfoto.html http://www.natureduca.com/botan_o rgan_tallo1.ph