Estrutura das Membranas Celulares 1.

A estrutura bsica das membranas celulares a organizao dos lipdeos em uma bicamada, mantida por interaes no-covalentes. Discuta a influncia da composio qumica dos lipdeos na formao, estruturao e permeabilidade da membrana plasmtica. A proporo entre protenas e lipdios varia de acordo com o tipo de membrana. Por exemplo, a bainha de mielina apresenta maior quantidade de lipdios, enquanto que a membrana plasmtica de uma mitocndria ou de um cloroplasto contm mais protenas sendo que a quantidade de protenas est relacionada com o quo funcional a membrana. Alm disso, membranas plasmticas tm mais colesterol e menos cardiolipina, essencial para o funcionamento de algumas protenas da mitocdria, do que a mitocondrial. Lipdios tendem a esconder sua cauda hidrofbica, formada por hidrocarbonetos apolares da gua, assumindo o formato de uma micela (caso tenham apenas uma perna), bicamadas (duas pernas) ou lipossomos (estruturas mais estveis do que as bicamadas). Por serem apolares, na maior parte de sua estrutura, os lipdios da membrana impedem a passagem de molculas polares, e por estarem bastante prximos, de estruturas maiores: Permevel Menos Permevel Impermevel Gases (CO2, N2, O2 ...) Uria ons (potssio, magnsio...) Pequenas molculas sem carga gua Grandes molculas (glicose, frutose, (etanol...) aminocidos, ATP, glicose 6-fosfato, protenas, cidos nuclicos...) 2. Comente os fatores, relacionados aos lipdeos de membrana, que exercem influncia na fluidez, espessura e curvatura da membrana plasmtica. Ligaes duplas: tornam mais difcil agrupar as cadeias, devido a flexo, porm a membrana constituda prioritariamente por eles menos espessa, o que reduz a possibilidade dos hidrocarbonetos interagirem entre si. Desse modo, o aumento de ligaes duplas, aumenta a fluidez; Composio: quanto mais colesterol compe as camadas, menor a fluidez, pois se orientam com seu grupo hidroxila prximo a cabea polar dos fosfolipdeos, enquanto seu anel esteride interage com os hidrocarbonetos. Impede tambm possveis transies de fase; Temperatura: quanto maior a temperatura maior a fluidez. Fluidez Quanto maior a quantidade de colesterol, menor a fluidez. Espessura A presena de esfingomielina caracterstica de membranas espessas. O colesterol e outras molculas que diminuem a fluidez, aumentam sua espessura. Quanto mais ligaes duplas menos espessa a membrana. Curvatura A presena de lipdios curvoflicos (situados no lado interno da membrana e cnicos) e curvofbicos (localizados no lado externo e cilndricos).

Composio

Ligaes Duplas Temperatura

Diretamente proporcional. Diretamente proporcional.

3. Os fosfolipideos de membrana podem ser classificados em glicerofosfolipdeos e esfingolipdeos. Comente a distribuio dessas molculas entre as faces interna e externa da membrana plasmtica. Glicerofosfolipdeos distribuem-se diferentemente, dependendo da clula. Por exemplo, em eritrcitos, o lado citoslico apresenta principalmente fosfatidiletanolamina e fosfatidilserina, e o extracelular fosfatidilcolina e esfingomielina. Os esfingolipdios so ceramidas, esfingomielina e glicoesfingolipdeos. Esses ltimos subdividem-se em gangliosdeos e cerebrosdeos, que contm geralmente longas e saturadas cadeias de hidrocarbonetos e formam rafts lipdicos na bicamada voltada para o exterior celular. Esfingolipdios e colesterol tambm compem aglomerados mais finos e organizados que a sua vizinhana, neles se ligam protenas integrais, usualmente na bicamada externa. Os fosfolipdios fosfatidilserina e fosfatidiletanolamina esto predominantemente na membrana interna, e o fosfatidilcolina e a esfingomielina na externa.

Generalizando, fosfatidilcolina, esfingomielina e glicolipdios localizam-se prioritariamente na membrana externa. Enquato que o fosfatidilserina e o fosfatidilenolamina esto na monocamada interna. 4. Os glicolipdeos podem ser classificados em gangliosdeos e cerebrosdeos. Em que tecidos existe abundncia desses componentes de membrana e qual a razo funcional dessa classe de molculas estar voltada para o lado extracelular? Cerebrosdeos so importantes componentes dos msculos e do tecido nervoso, sendo o principal deles a mielina. Gangliosdeos so componentes da membrana celular, servindo na modulao de sinais, pois apresentam carga negativa, prioritariamente daqueles relacionados com o sistema imunolgico. Esto em maior concentrao nas membranas de clulas nervosas, onde auxiliam na manuteno do potencial. Situam-se na membrana externa, pois desempenham funes de reconhecimento celular e adeso clula-clula. Alm de servirem na separao entre as clulas. 5. Quais os dois fosfolipdeos envolvidos em funo sinalizadora na membrana plasmtica? Fosfatidilserina, relacionada com apoptose, e fosfatidilinositol, pois ambos podem ser fosforilados. 6. Por que importante a presena de flipases para a sntese da fosfatidilcolina no retculo endoplasmtico? Explique A fosfatidilcolina produzida na bicamada interna, porm deve estar presente em maior quantidade na externa. Visto que, para atravessar a membrana, teria que ultrapassar com sua cabea polar uma poro de caudas apolares, processo bastante lento, as protenas flipases aceleram o procedimento, mantendo a assimtria natural das clulas. 7. Quais as maneiras de trfego de lipdeos na clula com fins de incorporao em membranas? Trfego vesicular intracelular, exocitose, trfego mediado por protenas de aproximao de membrana ou por protenas de ligao... 8. Por que razo o fato da membrana interna da mitocndria possuir grande quantidade de cardiolipina e baixssimas quantidades de colesterol refora a teoria endosimbitica do surgimento dos eucariotos? Pois a cardiolipina no caracterstica do restante das clulas do organismo. 9. Quais seriam as repercusses de uma reduo drstica da disponibilidade de colesterol na membrana na estrutura das caveolas? Elas perderiam a solidez, tornando-se fluidas e possivelmente destruindo as caveolas. Caveolas so alteraes na membrana, envolvendo suas duas camadas: a interna com caveolinas e a externa com uma balsa tpica de esfingolipdio, colesterol e protenas associadas GTP. 10. As porinas bacterianas diferem-se estruturalmente e funcionalmente das porinas de mamferos. Explore essas diferenas. As ligaes polipeptdicas tendem a formar pontes de hidrognio entre si, as quais so maximizadas no caso da formao de uma -hlice normal. Uma forma alternativa de organizao, a criao de barris , as quais se unem em grandes estruturas, principalmente na membrana externa mitocondrial, dos cloroplastos e nas bactrias. So chamadas de porinas quando estruturas largas o bastante para permitir a difuso passiva de enormes molculas, entretanto so ainda seletivas a algunas antibiticos. Porinas Bactrias Humanos (aquaporinas) Canais de passagem para disscardeos e outras Canais para a passagem de gua atravs da pequenas molculas. Podendo ser altamente membrana (em maior quantidade em eritrcitos e seletivas (como a malporina da bactria E. nas clulas do tbulo renal proximal). Coli). Barris ligados fortemente por pontes de Compostas por -hlices. hidrognio.

11. Quais so as estratgias para limitar a difuso lateral de protenas na bicamada lipdica? O citoesqueleto e a ancoragem, em ncoras como a de glicosilfosfatidilinositol (GPI). 12. Explique detalhadamente a razo da reduo da resistncia globular dos eritrcitos na doena conhecida como deficincia de glicose-6-fosfato desidrogenase. A resistncia globular a capacidade que os eritrcitos tm de resistir ao rompimento em meio hipotnico. No caso da deficincia de glicose 6-fosfatase desidrogenase no ocorre a converso, no ciclo das Pentoses, de glicose 6-fosfato em 6-fosfogluconolactona com a gerao de NADPH, o qual deveria reduzir a glutationa que se oxidou ao assimilar radicais livres, impedindo que esses alterassem a membrana lipdica e outros componentes celulares. A perturbao na membrana leva a queda na resistncia globular. 13. Por que razo as glicoprotenas esto sempre voltadas para o lado extracelular da membrana? Porque suas funes se aplicam prioritariamente no meio extracelular: reconhecimento de antgenos e adeso celular. Tal qual com as glicoprotenas gangliosdeos e cerebrosdeos. 14. Por que razes as protenas com um grande domnio transmembrana localizam-se em jangadas lipdicas? As protenas com grande domnio transmembrana classificam-se em duas classes: Protenas ancoradas membtana por duas cadeias longas e saturadas de cidos graxos de maneira covalente; Protenas ancoradas por GPI. Elas localizam-se nas balsas lipdicas, deviso a sua maior espessura e rispidez, existentes justamente para segura-las.

Transporte de ons e Pequenas Molculas 1. Por que as clulas necessitam de diversos sistemas de transporte de substncias, to diferenciados, e qual a vantagem que esses sistemas mediados por protenas oferecem para manuteno da homeostase? H dois tipos de transportadores: Carreadores Canais Altamente especficos; Menos especficos; Saturveis em limites inferiores aos da No saturveis. difuso simples. Podem realizar transporte ativo primrio ou secundrio e cotransporte antiporte, no caso, de uma molcula for determinada direo fornecendo energia para que outra entre no sentido oposto, ou simporte, as duas para o mesmo lado. As principais protenas transportadoras so: GLUTs; Trocador de Cloro e Bicarbonato: protena medeia entrada de cloro simultaneo sada de bicarbonato na membrana de eritrcitos, economizando ATPs, visto que a energia vem da passagem do cloro a favor de seu gradiente. ATPases: Na+K+ATPase: mantm a maior concentrao de sdio no meio extracelular e de potssio no intracelular, trata-se de transporte ativo primrio antiporte +2 Ca ATPase Tipo F ATPase Tipo V ATPase ABC Transportador: grande famlia responsvel pela expulso, contra seu gradiente de concentrao (ATP dependentes), de aminocidos, peptdeos, protenas, ons metlicos, muito componentes hidrofbicos (drogas...) para fora da clula. As clulas necessitam de diversos sistemas de transporte de membrana para preservar seu potencial de repouso e, simultaneamente, absorver nutrientes necessrios para sua sobrevivncia. 2. Durante a isquemia cerebral, a privao da oferta de oxignio reduz a produo de ATP. Explique detalhamente a maneira pela qual esse evento repercute no transporte de acares e aminocidos para os neurnios. Aminocidos e glicose adentram a clula prioritariamente por transporte ativo secundrio. Assim sendo, dependem da energia fornecida pela quebra de ATP ao transporte ativo primrio. A falta de ATP geraria de imediato alteraes no potencial de membrana dos neurnios, principalmente, devido a Bomba de Sdio e Potssio. Primeiramente, a glicose adentra os entercitos por sua membrana apical atravs de transporte simporte, acompanhada pelo sdio. Esse ltimo retirado da clula pela Bomba de Sdio e Potssio, transporte ativo primrio antiporte dependente de ATP. Em seguida, a glicose sai das clulas por transporte passivo, a favor de seu gradiente de concentrao. A glicose entra nos eritrcitos pelo GLUT 1, atravs de difuso facilitada, pois sua concentrao maior no meio extracelular. Nas Ilhotas de Langerhans, clulas pancreticas produtoras de insulina, a glicose entra pelo GLUT 2. Nelas so quebradas, originando ATP, o qual fecha canais de potssio, despolarizando a membrana. Com isso, clcio entra e ativa a liberao de insulina, indicativo de altas concentraes de glicose no sangue. Esse mesmo transportador retira glicose, proveniente da quebra de glicognio, dos hepatcitos. O GLUT 4 sensvel insulina, cuja funo inibir a gliconeognese, coordenando a assimilao de glicose pelas clulas musculares e adiposas, de maneira diretamente proporcional ao aumento do hormnio. 3. O que se espera da atividade de uma Ca+2-ATPase ao realizarmos uma deleo do domnio de ligao de nucleotdeos? Explique detalhadamente.

A concentrao de clcio no interior das clulas deve ser pequena, objetivando a evitar a formao de fosfato de clcio, relativamente insolvel, com os ons fosfato ai presentes. Desse modo, o clcio bombeado para fora pela Bomba de Clcio da membrana plasmtica ou para o interior do retculo sarcoplsmatico de msculos por outra bomba, a SERCA. Uma deleo do domnio de ligao de nucleotdeos de uma Ca+2ATPase resultaria na sua incapacidade de ligar ATP e, portanto, na sua inativao. 4. O que se espera da funo lissosomal se realizarmos uma deleo das ATPases tipo V da clula? Explique.

Trata-se, assim como a F, de uma ATPase transportadora de prtons, porm seu objetivo acidificar compartimentos, como os lisossomos. Logo, sua deleo representaria a inativao das enzimas lisossomais, as quais funcionam somente no seu pH, e, conseqentemente, em problemas relacionados com a carncia na digesto de partculas. 5. Explique detalhadamente os mecanismos pelo qual a administrao de oubana, um inibidor da bomba de sdio e potssio, capaz de aumentar a fora contrtil do corao. Oubana, encontrada em plantas, une-se aos stios de ligao de sdio da Bomba de Sdio e Potssio, inibindo-a. Foi usada para tratamento cardaco, visto que aumenta os nveis intracelulares de sdio, a ponto de estimular a Bomba de Sdio e Clcio antiporte, o que eleva a concentrao de potssio no interior da clula, intensificando a despolarizao da membrana e os batimentos cardacos. 6. Caracterize as ATPases tipo F, correlacionando o seu local de ocorrncia com a funo fisiolgica e as peculiaridades dessa classe de bombas de prtons. Catalisa a passagem contra seu gradiente de concentrao de prtons, graas a hidrolise de ATP, principalmente em mitocndrias, cloroplastos e bactrias. Ela possui duas subunidades, a F0 (forma um poro atravs da membrana) e a F1 (quebra ATP). Visto que esse transporte reversvel, o retorno dos prtons fornece energia para a sntese de ATPs. 7. Quais so as funes da bomba de sdio e potssio? Explique-as.

A Bomba de Sdio e Potssio mantm mais alta a concentrao de sdio no meio extracelular e mais baixa a de potssio. Por realizar transporte ativo primrio, possibilita diversos outros transportes secundrios, como a despolarizao da membrana durante a passagem do impulso nervoso; a expulso de prtons (permutador Na+ H+ ou ainda o permutador Cl- HCO3- Na+, que permite a entrada de sdio e bicarbonato simultnea a sada de cloro e prtons), mantendo o pH citoslico; a manuteno da osmolaridade celular, afinal eletrognica, induzindo uma corrente atravs da membrana (trs ons de sdio para fota e dois de potssio para dentro); e a produo de ATP, pois ela pode funcionar ao contrrio. 8. Por que todo transporte ativo secundrio um co-transporte? Explique utilizando como exemplo o transporte do clcio na membrana do retculo sarcoplasmtico. O transporte ativo secundrio envolve a passagem de certa molcula a favor de seu gradiente (visto que estava contra ele devido ao primrio), liberando energia para que outra siga contra ele. Sendo assim, um co-transporte. O clcio, nas clulas musculares, fica armazenado no interior do retculo sarcoplasmtico, quando sua membrana despolarizada, liberado passivamente ligando-se troponina e permitindo a contrao muscular. Em seguida, o transporte ativo primrio faz com que a diferena de gradiente seja retomada. Quando o estmulo nervoso chega ao axnio neuronal, atravs da despolarizao da membrana, ocorre a abertura de canais de clcio, o qual entra na clula a favor de seu gradiente de concentrao, incitando a liberao de neurotransmissores. 9. Explique detalhadamente, baseado em seus conhecimentos a respeito da ao do trocador antiporte Na+/H+ e da bomba de sdio e potssio, a razo pelo qual uma hipercalemia acarreta uma acidose metablica. Hipercalemia o excesso de potssio em meio extracelular, visando a preservar o potencial de membrana, a Bomba de Sdio e Potssio deve assimil-lo, o que acontece simultaneamente com a sada de sdio da clula. Com mais sdio em meio extracelular, temos maior expulso de prtons pelo trocador antiporte e, conseqentemente, uma acidose metablica.

10.

Os canais inicos podem ser regulados por alguns estmulos. Cite-os.

Canais de Sdio Dependentes de Voltagem Canais de Clcio Dependentes de Voltagem Canais de Potssio Dependentes de Voltagem Canais de Potssio Dependentes de Clcio Canais de Cloro Entre muitos outros. Eles diferenciam-se dos poros aquosos por no estarem abertos o tempo todo, assim so controlados pela mudana na voltagem, por um estresse mecnico, por um ligante (que pode ser um neurotransmissor ou nucleotdeo) ou pela fosforilao ou desfosforilao de uma protena. 11. Por que razo os defeitos na aquaporina-2 causam um quadro chamado de Diabetes insipidus nefrognico? Explique. Com a liberao de ADH as aquaporinas 2, anteriormente armazenadas em vesculas, instalam-se na membrana apical das clulas do tbulo coletor dos rins, levando a reabsoro de gua. Na diabetes insipitus defeitos genticos nelas impedem a reabsoro de gua atravs delas. 12. A respeito da superfamlia de transportadores ABC, informe quais os substratos alvo para essas protenas correlacionando-os com as funes fisiolgicas desse sistema de transporte. Informe a fonte energtica desse transporte.

Trata-se da maior famlia de transportadores, sendo que o primeiro foi descoberto em bactrias, como a E. coli (localizados em sua membrana interna e auxiliados por protenas periplasmmicas). So dependentes da energia provinda da hidrlise de ATP, realizam transporte primrio e participam em eucariotos, principalmente, da exportao de aminocidos, acares, ons inorgnicos, polissacardeos, peptdeos e at protenas. Alm disso, bomboeam drogas hidrofbicas para fora do citosol protena multidroga resistente (MDR) , conferindo resistncia a uma srie de parasitas, por exemplo, o Plasmodium falciparum, e clulas tumorais. Em leveduras, so responsveis pela exportao de hormnios sexuais. Na maioria dos vertebrados, bombeiam peptdeos do citosol para o RER, onde eles so quebrados e, eventualmente, carregados a superfcie celular, sendo exibidos aos linfcitos T. Tambm auxiliam no transporte de lipdios de uma bicamada para a outra (flipases), tendo papel importante na biognese e manuteno da membrana. A doena fibrose cstica causada por mutao em um gene que codifica para um transportador ABC, o qual regula um canal de cloro na membrana plasmtica das clulas epiteliais, levando ao funcionamento anormal de glndulas. 13. O transportador de lactose em E.coli um transporte ativo primrio ou secundrio? Explique-o O transportador de lactose em E. coli, membro da famlia MFS, realiza transporte ativo secundrio simporte, pois utiliza a passagem de prtons a favor de seu gradiente para a obteno de energia para absorver lactose. 14. Observe a estrutura do transportador de glicose GLUT, mostrando o domnio uma pequena regio do domnio transmembrana. Os aminocidos 1,4 e 5 interagem com a glicose no centro do domnio enquanto os aminocidos 2, 3, 6 e 7 estabelecem interaes com o cerne hidrofbico da membrana. Explique essas condies, baseado na polaridade desses aminocidos.

Os aminocidos 2, 6, 3, 7 so apolares, ou seja, hidrofbicos. Enquanto que os 5, 1, 4 so hidroflicos. Sendo assim, a -hlice do transportador GLUT 1 anfiptica.

A figura ao lado representa a organizao dessas hlices, cada uma com seu eixo hidrofbico unido ao da outra no centro, formando um canal para resduos polares atravs da membrana apolar e possibilitando a realizao de diversas pontes de hidrognio com a glicose. 15. Por que razo necessrio a renovao contnua de uma soluo dialisante durante a hemodilise?

A renovao contnua da soluo dializante necessria para manter um grande gradiente de concentrao, o que, de acordo com a 1 Lei de Fick, aumenta a velocidade de difuso. 16. Quais caractersticas dos tbulos renais fazem com que a taxa de reabsoro tubular de solutos por simples difuso nunca seja limitante? De acordo com a 1 Lei de Fick, a velocidade de difuso depende da constante do meio, da rea de seco transverdal disponvel, do gradiente de concentrao e da espessura da membrana. Visto que os tbulos renais so longos (maior rea) e finos (menor espessura) a difuso acontece rapidamente, no servindo como um limitante a passagem de substncias. 17. Por que razo a absoro das substncias de carter cido-fraco mais favorvel, por simples difuso, no estmago que no intestino delgado? O pH cido do estmago incita a no ionizao dos cidos, facilitando sua passagem pela membrana.

Transporte de Macromolculas e Partculas

1.

Sob qual o forma o colesterol penetra nas clulas e por que o processo de internalizao to especfico?

O colesterol vaga pelo sangue predominantemente no interior de LDL, a qual apresenta uma capa de fosfolipdios com uma nica molcula da protena a apoB-100 e steres de colesterol em seu interior. A apoB-100 se une com receptores de superfcie especficos e internalizada sendo assim, a absoro de colesterol d-se por endocitose mediada por transportador. Em seguida, pela via endoctica, transportada aos lisossomos, onde ocorre a degradao, sendo que os receptores se dissociam dos ligantes no endossomo tardio, devido ao pH, e so reciclados de volta a superfcie. 2. Compare os processos de endocitose mediada por receptor para a internalizao do colesterol LDL e do ferro ligado a transferrina, esquematizando-os em etapas. Semelhanas Mecanismo de Transporte e Receptores Especficos Colesterol em LDL Receptores de LDL da superfcie celular unem-se com a apoB-100, internalizando o LDL no interior de um sulco revestido por clatrina, mais profundamente, e pelo complexo AP2. Ferro em Transferrina A transferrina a principal glicoprotena do sangue, servindo no transporte de ferro para todos os tecidos a partir do fgado e do intestino. Primeiramente, a apotransferrina liga fortemente ons de Fe+3, formando a ferrotransferrina. Essa se une fortemente, a pH neutro, com receptores presentes em todas as clulas do organismo. O receptor com a ferrotransferrina sofre endocitose. A capa se solta, formando um endossomo precoce (vescula endoctica norevestida). O endossomo precoce se funde com um tardio, porm a apotransferrina permanece ligada ao receptor de transferrina, sendo que o pH baixo do endossomo serve para que haja a +3 dissociao do Fe da +2 ferrotransferrina e sua reduo a Fe , os quais vo para o citosol atravs de transportadores especficos para metais divalentes. O complexo receptor-apotransferrina reciclado e volta superfcie celular.

Endocitose

Endossomo

Juno do endossomo precoce com o tardio e modificaes resultantes do seu pH cido.

Essas vesculas despreendem-se da membrana para dentro da clula, graas a um mecanismo mediado dinamina. A capa se solta, formando um endossomo precoce (vescula endoctica norevestida). O endossomo precoce se funde com um tardio, nele o pH cido provoca a separao do receptor de LDL, o qual liberado em outra vescula e reutilizado na membrana.

O restante do endossomo tardio se une com o lisossomo. 3. Defina endocitose, exocitose, clasmocitose e transcitose.

Endocitose um processo pelo qual as clulas absorvem partculas atravs de suas membranas, subdividindo-se em: Fagocitose: processo no-seletivo mediado por actina, em que h formao de fagossomos; Pinocitose: assimilao de pequenas gotas de fluido extracelular e qualquer substncia ali dissolvida, de forma inespecfica; Endocitose Mediada por Receptor: trata-se de um mecanismo de absoro de compostos especficos. Exocitose a maneira pela qual a clula libera substncias para o fluido extracelular. Na clasmocitose a clula libera suas excretas. Para a distribuio de protenas destinadas especificamente a membrana basolateral ou apical de uma clula. Em hepatcitos, por exemplo, elas so transportadas no interior de vesculas, primeiramente, regio basolateral e, ento, incorporadas por endocitose, nas mesmas vesculas das quais sairam por exocitose, aquelas que devem ir para a poro apical. Tal processo chamado de transcitose transporte de molculas de um lado para o outro da clula, via transcelular. 4. Cite todas as semelhanas e diferenas entre os processos de fagocitose e endocitose mediada por receptor.

Fagocitose Endocitose Mediada por Receptor Grandes partculas, como microorganismo e Basicamente todas as partculas que a clulas clulas mortas. necessita englobar, tambm macromleculas . til na nutrio de protozorios e na defesa Utilizada por todas as clulas do organismo dos animais onde realizada pelos com receptor. macrfagos, neutrfilos e clulas dendrticas. Assim sendo, existem clulas do nosso organismo modificadas especificamente para a realizao da fagocitose. Fagossomos apresentam o tamanho da partcula a Vesculas revestidas por clatrina, cuja forma ser digerida. relativamente bem definida. Na maior parte das vezes o fagossomo segue para o lisossomo, porm existem excees, como na fagocitose de parasitas. Participao mais ativa do citoesqueleto, Invaginao da membrana. devido a formao de pseudpodes. No um processo que acontece continuamente, necessitando de sinais para ativ-la, tal qual a ligao de um linfcito (fagocitose) ou a ligao entre o receptor conectado membrana plasmtica e uma determinada protenas na vescula a ser englobada. Os resduos so reaproveitados pela clula. 5. Quais so as duas situaes de fagocitose mais conhecidas?

O englobamento de microorganismos por clulas de defesa e a fagocitose de clulas apoptticas, principalmente, e hemcias. 6. Alm da defesa do organismo, em quais outros processos a fagocitose importante?

A fagocitose bastante til na alimentao de protozorios unicelulares. Enquanto que, em seres pluricelulares, participa da renovao celular e do controle de partculas estranhas, como o vidro, o ltex... 7. A endocitose mediada por receptor sempre ocorre em regies da membrana cuja face citoplasmtica est recoberta por uma protena. Qual essa protena? Em que regies (em termos de geometria) da membrana o fenmeno ocorre? A endocitose mediada por receptores geralmente ocorre em sulcos e vesculas revestidas por clatrina e AP2. Ainda que os receptores estejam difundidos pela membrana, a ligao faz com que eles se aglomerem nessas regies. Tais sulcos ou vesculas apresentam uma capa externa composta pela protena fibrosa clatrina e uma interna, formada por complexos de protena adaptadora (AP). 8. A formao de vesculas recobertas durante a endocitose mediada por receptor um processo que ocorre sem gasto de energia? Explique. As capas dos trs tipos de vesculas contm uma pequena protena ligadora de GTP na COPI e na clatrina chamada de ARF, na COPII Sar1. A alternncia entre a ligao e a

hidrlise de GTP controla o incio da montagem da capa. Portanto, a formao das vesculas receptoras acontece com gasto de ATP. Primeiramente, no caso da COPII, a protena Sec12 (um fator de alterao) do RE catalisa a liberao do GDP do complexo Sar1 GDP e a ligao de GTP, fazendo com que o Sar1 insira sua extremidade N-terminal hidrofbica na bicamada lipdica. Isso leva a polimerizao de protenas da membrana, formando os brotos vesiculares. Uma vez que essas vesculas so liberadas, acontece a hidrlise do GTP, o qual promove a dissociao do revestimento de COPII. Um ciclo semelhante acontece com a ARF. 9. O que so asialoglicoprotenas e qual a importncia do processo de transporte intracelular dessas molculas? Explique. So protenas especficas do fgado, as quais promovem a internalizao de glicoprotenas anormais nas quais os oligossacardeos terminam em galactose ao invs de cido silico. 10. Explique o mecanismo de penetrao do vrus HIV nas clulas. Ele especfico?

O mecanismo de penetrao do HIV nas clulas semelhante formao de endossomos multivesiculares logo, especfico. Primeiramente, a protena HRS da membrana endossomal, marcada com ubiquitina, promove a colocao das protenas de carga ubiquitinadas especficas em brotos vesiculares. A seguir, recruta ESCRT (complexos endossomais de classificao necessrios ao transporte), incluindo a Tsg101, esse atua liberando a vescula. Finalmente, a ATPase Vsp4 utiliza a energia da hidrlise de ATP para dissociar o ESCRT, que se solta no citosol. No caso do HIV, a protena viral Gag incita todo o mecanismo. Resumindo, o envelope viral contm glicoprotenas que adaptadas a receptores especficos, os Cd4, da membrana plasmtica. Desse modo, so endocitados. No interior do endossomo, o vrus une seu envelope a membrana endossomal, liberando seu genoma e protenas para o citosol. 11. Por que os lipossomas devem ser catinicos para que ocorra xito na fuso de membranas? de carga positiva so atrados pela carga negativa da membrana,

O os lipossomos facilitando sua adeso. 12.

Explique brevemente a ao da toxina diftrica e os mecanismos de transporte envolvidos. A toxina diftrica um polipeptdeo que apresenta duas cadeias: Cadeia B: conecta-se a receptores presentes em todas as clulas do nosso organismo; Cadeia A: aps a unio da B membrana, provoca a formao de poros, permitindo a entrada da toxina na clula, onde inibe a sntese de protenas.

13. a)

Em relao ao trfego vesicular de protenas no interior celular: Sob que forma ocorre esse trnsito? Na forma de trs tipos de vesculas, cada uma com um determinado tipo de revestimento. b) Quais so as caractersticas que tornam esse trfego to especfico? Protenas integrais de membrana na vescula (v-SNARE) que se conectam precisamente a correspontes na membrana plasmtica (t-SNARE). c) Qual a importncia do par t-SNARE e v-SNARE? Garante que as vesculas unam-se s membranas corretas. d) Em que etapa ocorre gasto energtico? Qual a fonte dessa energia? O despreendimento da capa protica hidrolisa ATP. e) O que determina a eliminao da cobertura da vescula ao chegar no destino? A hidrolise do GTP ligado a uma das protenas das superfamlia das GTPases (Sar1 ou ARF). f) Qual a importncia das protenas Rab? So elas que controlam a ligao das vesculas membrana-alvo. Primeiramente, a converso de Rab GDP a GTP gruda-a na vescula de transporte. Logo interage com protenas efetoras de Rab, esse complexo, ento, capaz de ancorar a vescula na membrana-alvo. Aps a fuso, o GTP ligado Rab hidrolisado, levando a dissociao da Rab GDP. Sendo assim, elas formam complexos com o GDP e com o GTP determinando, respectivamente, a formao e dissociao da capa protica. g) Alguns constituintes da vescula so reciclados? Quais? Sim, toda a capa e seus receptores.

10

14.

Diferencia a via de secreo induzida e a via constitutiva, citando um exemplo de protena de cada via.

Na via de secreo induzida h o armazenamento de protenas espera de um sinal de exocitose, tal qual acontece com hormnios peptdeos (insulina, glucagon...), precursores das enzimas digestivas, protenas do leite e neurotransmissores. J na via constitutiva, h a exocitose contnua de produtos como colgeno, protenas sricas e anticorpos. 15. Cite todas as localizaes dos produtos proticos que sero secretados para o meio extracelular, desde a sntese do peptdeo nos ribossomos associados ao retculo endoplasmtico. Na maioria das clulas, as protenas que devem ser secretadas so encaminhadas ao RE Rugoso durante a traduo em ribossomos ligados a sua membrana, embora algumas possam ser sintetizadas naqueles livres no citosol. No primeiro caso:

1. Os ribossomos so direcionados a se ligar membrana do retculo por trechos (seqncia sinal) da cadeia polipeptdica que est sendo sintetizada, esses trechos na poro aminoterminal so removidos com a transferncia da cadeia atravs da membrana por uma protease microssomal. No RNA mensageiro de origem, h uma nica seqncia de cdons localizada imediatamente direita do cdon de iniciao; 2. Quando ocorre a traduo da seqncia, a partcula de reconhecimento de sinal (SRP) liga-se ao ribossomo, inibindo a traduo e direcionando todo o complexo para o RER; 3. No RER, a SRP se junta ao receptor de SRP de sua membrana, o ribossomo a um complexo protico de transporte e a seqncia sinal a um canal de membrana; 4. Com isso, a SRP e seu receptor se soltam, o ribossomo segue ligado a protenas transmembrana Sec61 e a traduo continua. J no segundo caso, as seqncias sinal so reconhecidas por receptores de protenas distintos (o complexo Sec62/63) associados ao Sec61 na membrana do retculo, sem o intermdio da SRP. Nesse caso, h necessidade de chaperonas citoslicas que mantenham a cadeia polipeptdica reta para passar pela protena transmembrana, e outro, o BiP, dentro do retculo, que a puxe. Outras protenas, ao invs de secretadas, devem estabelecer-se na membrana do retculo as protenas integrais de membrana, que se instalam dentre regies hidrofbicas. Elas apresentam uma seqncia sinal normal em seu aminoterminal, a qual se prende parede da protena transmembrana Sec61. O crescimento da cadeia polipeptdica interrompido por uma seqncia transmembrana de parada de transferncia, essa fecha o canal e desloca-se lateralmente, indo ancorar-se na membrana. Existe a possibilidade de a seqncia sinal ser ou no clivada pelas peptidases sinal. Algumas esto ancoradas membrana por glicolipdeos, ncoras glicosilfosfatidilinositol (GPI), ligados a sua poro terminal carboxi. As cadeias polipeptdicas entram retas no retculo, alcanando sua forma tridimensional auxiliadas pelos chaperonas moleculares, principalmente o BiP. Outra maneira atravs de ligaes dissulfeto, facilitada pela enzima protena dissulfeto polimerase. Protenas do RE entram pela face CIS que convexa e habitualmente orientada na direo do ncleo e saem pela TRANS. 16. Para as protenas que so destinadas a outras organelas, qual a importncia da seqncia sinalizadora de destino? Essa seqncia sempre constituda de aminocidos? Explique. A seqncia sinalizadora garante que as protenas alcanaro as organelas em que so necessrias. Ela nem sempre constituda por aminocidos, por exempo, resduos de manose 6fosfato direcionam protenas aos lisossomos. 17. Aps a chegada na organela de destino, o que acontece com o peptdeo-sinal? O peptdeo sinal cortado e reutilizado.

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18. Como as protenas que so sintetizadas nos ribossomos associados ao retculo endoplasmtico so transferidas para a luz da organela? Atravs de protenas especficas as protenas sintetizadas nos ribossomos associados ao retculo endoplasmtico so transferidas para a sua luz. 19. Quais processos importantes, em relao a modificaes ps-traduo, ocorrem no retculo endoplasmtico?

Geralmente ocorre a formao de pontes dissulfdicas, visando a estabilizar a estrutura das protenas que iro encontrar modificaes no pH ao sair do retculo. Muitas delas so convertidas a glicoprotenas pela ligao de covalente de cadeias laterais curtas de oligossacardeos (glicosilao). Alm disso, pode ocorrer a adio de cidos graxos. 20. Onde acontece o dobramento final dos peptdeos que sero destinados a outras organelas? Quais protenas participam desse processo? Na luz do RER, no citosol e na organela-alvo, sendo que as protenas chaperonas participam desse processo. 21. Como acontece o processo de importao de protenas para a mitocndria?

As protenas so desdobradas no citosol para cruzar a membrana mitocondrial e, em seu interior, so novamente dobradas. 22. Qual a importncia do poro nuclear na regulao da expresso gnica?

O poro nuclear controla a importao e exportao de macromolculas, podendo, inclusive, reter por algum tempo RNAm. 23. A endocitose sempre um processo especfico? No, a fagocitose e a pinocitose no so especficas.

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Potencial de Repouso

1. O meio intracelular e extracelular so, praticamente, eletroneutros. Quem so os principais ctions e nions envolvidos e como esto distribudos nesses meios? Qual a tendncia de movimentao de cada um desses ons em relao ao seu gradiente eletroqumico? Os principais ctions so o sdio (influxo) e o potssio (efluxo devido ao gradiente de concentrao), e nios so o cloro (influxo) e os nios orgnicos (efluxo). 2. O que so canais de vazamento e para quais ons existem? Qual dos canais de vazamento mais abundante e freqente nos tipos celulares? Canais de vazamento so canais permenentemente abertos e que, assim, auxiliam na manuteno do potencial de repouso. Sendo que, nas clulas h desses para o cloro, sdio e potssio em quantidades diferentes dependendo do tipo que so. 3. Descreva as etapas de formao do potencial de repouso e de manuteno dessa diferena de potencial ao longo da membrana? O potencial de repouso em clulas da glia e de outras clulas que apresentam pouqussimos canais de vazamento para sdio, se comparados com os de potssio, exceto dos neurnios d-se apenas pelo equilbrio de entrada e sada de potssio. Primeiramente, o potssio sai impulsionado por seu gradiente de concentrao, atraindo os nios orgnicos (aminocidos e protenas) para prximo da membrana. Com isso, o meio extracelular torna-se mais positivo, e o potssio atrado pelos ons orgnicos que esto no interior da clula, retornando. Em neurnios h canais inicos seletivos para potssio, sdio e cloro. Assim, o sdio entra, movido pelos gradientes eltricos e de concentrao, para compensar o potssio sai. O influxo de um consegue equilibrar o efluxo de outro, pois h relativamente poucos canais de sdio, sendo sua condutncia baixa, todavia, a do potssio alta (compensando o fato de ele ter menos motivos para sair da clula). Para evitar que esses ons alcancem o equilbrio e a movimentao cesse a Bomba de Sdio e Potssio, a partir da hidrlise de ATP, desloca trs ons de sdio de volta para o meio extracelular e simultaneamente dois de potssio para o interior. 4. Em clulas que so permeveis somente ao potssio por canais de vazamento, o potencial de repouso da membrana praticamente igual ao potencial de equilbrio do potssio. Explique, definindo potencial de equilbrio para um on. A diferena de voltagem dos dois lados da membrana depende, em todas as clulas exceto os neurnios, basicamente da entrada e sada de potssio. Sendo seu potencial de equilbrio calculado pela equao de Nernst til na obteno do potencial de equilbrio de qualquer on que esteja presente nos dois lados de uma membrana permevel a ele. Assim, o potencial de equilbrio para um on o efluxo e o influxo de um on em equilbrio atravs da membrana. 5. Por que razo, nas clulas da glia no necessrio gastar ATP para manter o potencial de membrana enquanto nos neurnios, o gasto energtico fundamental? Porque o potencial de repouso das clulas da glia depende somente da movimentao de ons de potssio. Enquanto que nos neurnios, devido a canais de repouso abertos tambm para sdio e cloro, a Bomba de Sdio e Potssio tem de enviar de volta o sdio e o potssio, visando a preservar a diferena de potencial entre o meio intra e o extracelular. 6. Qual a importncia do cloro no potencial de membrana?

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O potencial de repouso, em clulas sem bomba cloreto, determinado pelo fluxo de potssio e sdio. Caso contrrio, ele impulsionado por seu gradiente para o interior da clula e retirado pela bomba, criando um fluxo. 7. Por que a equao de Nernst no a mais apropriada para o clculo do potencial de membrana em um neurnio? Qual a soluo para isso? A equao de Nernst calcula independentemente o potencial de equilbrio para apenas um on. Como, em neurnios, o repouso dependente do balano entre sdio e potssio, ela se torna pouco relevante. Sendo utilizada a equao de Goldman. 8. Quais so as conseqncias da reduo brusca do potssio plasmtico no potencial de membrana nos neurnios e nas clulas musculares cardacas. A reduo brusca de potssio plasmtico deixa o hiperpolarizao da membrana plasmtica, o que impede sua uma parada cardaca, visto que as clulas cardacas modificaes. J os neurnios so protegidos pela barreira 9. Todas clulas do organismo possuem potencial de membrana? citosol muito negativo, levando a excitao. Com isso, o indivduo tem so as primeiras a sentirem tais hematoenceflica.

Sim, porm somente as clulas excitatrias podem utilizar o potencial de membrana para criar um de ao. 10. glia? Por que razo o potencial de membrana de um neurnio maior que o valor encontrado em uma clula da

Devido aos canais de repouso abertos para o sdio e cloro, alm do potssio. 11. Quais so os principais tipos celulares encontrados no sistema nervoso e suas funes (sucintamente)?

Os neurnios (transmisso de estmulos) e a neuroglia, subdividida em macroglia com os astrcitos (formam a barreira hematoenceflica, sitentizam substncias trficas para os neurnios e retiram do meio extracelular do SNC os excessos de potssio e de neurotransmissores), oligodendrcitos (clulas satlites dos neurnios) e clulas ependimrias (revestimento interno do tubo neural embrionrio); e microglia (clulas de defesa). Potencial de Repouso e Transmisso Sinptica Anotaes de Aula Em repouso, o potssio deixa as clulas, motivado pelo gradiente de concentrao, e, em seguida, retorna, devido aos nios orgnicos. Gerando, assim, um potencial de equilbrio, entre - 60 e - 70 mV. Caso a membrana tenha canais de repouso que permitam a passagem de sdio e cloro tambm, tal quais os neurnios, o primeiro entrar na clula (gradiente de concentrao e eltrico) por seus poucos canais simultaneamente o potssio continua saindo por vrias passagens, porm atrado somente pela diferena de concentrao , visando a evitar que eles realmente alcancem o equilbrio, a Bomba de Sdio e Potssio retira sdio e absorve potssio. Canais de vazamento esto sempre abertos, sendo responsveis pelo equilbrio de repouso. Enquanto que os canais por voltagem, dependentes de ligantes ou de estiramento mecnico necessitam de estmulos externos. Caracterstica importante para a transmisso de sinal que os canais de sdio dependentes de voltagem so muito mais rpidos do que os de clcio e ambos apresentam o estado autoinativo, o que encaminha o estmulo nervoso em frente. A membrana despolarizada tem suas cargas inversas (o exterior torna-se positivo e o interior negativo), devido abertura dos canais de sdio, os quais abrem e permitem a entrada rapidamente, logo entrando em estado inativo, no podendo mais ser estmulados. Nesse instante, os canais de potssio se abrem, permitindo sua sada em massa. Dessa forma, o estmulo transmitido at o terminal axonal, onde incita canais de clcio dependentes de voltagem. Com a entrada de clcio, ocorre a liberao dos neurotransmissores, e a reorganizao do neurnio prsinptico, graas a Bomba de Sdio e Potssio e a sada de clcio por transporte ativo primrio enquanto ela no acontece, ele permanece no perodo refratrio. A bainha de mielina impede que a clula morra por depresso de ATP (como na esclerose mltipla), isolando ela eletricamente e proporcionando o menor gasto de energia. Em neurnios mielinizados, os canais dependentes de voltagem situam-se nos ndulos de Ravier. A transmisso do estmulo segue as leis do tudo ou nada (mquina fotogrfica) e da somao espacial no cone de implantao (soma de pequenos estmulos de regies diferentes) e temporal (mesmo estmulo com alta freqncia).

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Existem tambm sinapses qumicas inibitrias, em que h a hiperpolarizao da membrana, sendo seu principal neurotransmissor o GABA, presente em medicamentos para uma boa noite de sono os quais deixam os canais de cloro mais tempo abertos, dificultando o estmulo dos neurnios. Aps a transmisso, os neurotransmissores podem ser clivados enzimaticamente ou recaptados pelo neurnio. Em medicamentos, como a fluoxetina, o tempo de permanncia na fenda de serotonina aumentado. Sinapses qumicas esto presentes em todo o sistema nervoso, exceto no corao. Sinalizao Celular Anotaes de Aula Molcula Sinalizadora Hormnios esterides ou polipeptdios Mediadores locais de cinco superfamlias de protenas * Hormnios ou fatores de crescimento Mecanismos de Sinalizao Celular Local de Distncia do alvo produo Clulas O hormnio endcrinas transportado pela circulao a distncia necessria para alcanar o alvo Prpria clula Visa a atingir clulas vizinhas Exemplo Testosterona

Endcrina

Parcrina

Autcrina

Dependente de Contato

Clulas produzem sinalizadores que devem atuar nelas mesmas ou em vizinhas do mesmo tipo, o que auxilia no efeito comunidade durante a diferenciao Molculas sinalizadoras que entram em contato com a membrana plasmtica. deveras especfica, mas no necessita de tantos sinalizadores.

Neurotransmissores em sinapses, inflamao nos locais de infeco, so essenciais pra o desenvolvimento embrionrio Sistema imune ao reagir a antgenos ou secretar hormnios de crescimento Resposta imune.

Hormnios esterides como testosterona, estrgeno e progesterona so produzidos a partir do colesterol pelas gnadas, circulam no sangue ligados a protenas, so molculas apolares, no so armazenados e podem ser ingeridos oralmente; enquanto corticosteride origina-se da adrenal e subdivide-se em duas classes: os glicocorticides, os quais estimulam a produo de glicose, e os mineralocorticides, que agem nos rins, controlando o equilbrio entre as quantidades de gua e sais. Outras trs molculas sinalizadoras, tambm insolveis em gua e, por isso ligados a protenas na circulao, so o hormnio tireide (precursor da tirosina, aumenta o desenvolvimento do metabolismo), a vitamina D (sintetizado na pela a partir da luz solar, regula o metabolismo do clcio e o crescimento dos ossos) e os retinides (formados a partir da vitamina A). Esses sinalizadores comunicam-se atravessando a membrana plasmtica e unindo-se a receptores intracelulares. No caso dos esterides, eles se ligam a um receptor citoslico e juntos se unem ao DNA, ativando ou reprimindo a expresso de um gene. Tais hormnios diferem dos hormnios peptdicos, pois esses so armazenados na membrana das vesculas secretoras, so solveis em gua, no podem ser ingeridos de forma oral e interagem com receptores na superfcie celular. Os hormnios servem como sinalizadores que estimulam os receptores, os quais so protenas integrais da membrana e conectam-se com canais inicos, enzimas ou com a protena G, dando partida a sinalizao intracelular. Os receptores podem ser de acetilcolina ou nicotdicos (deixam o seu sinalizador entrar na clula) ou associados com a protena G ou muscarnico um trmero, com subunidades , e , ativo quando ligada a GTP. Regulao do Metabolismo do Glicognio pelo Glucagon A insulina aumenta perante a elevao da concentrao de glicose no sangue, estimulando a sntese de glicognio. O glucagon(1 mensageiro) incita o contrrio, unindo-se a um receptor muscarnico, o qual faz com que a protena G se desconecte do GDP e una-se com GTP, visto que ele est em maior quantidade, assim assume sua forma ativa. Em seguida, o GTP da subunidade da protena G hidrolisado, o que a inativa. Incitando a enzima adenilato ciclase a hidrolisar ATP, formando AMPc (2 mensageiro). Essa se junta com a protena quinase dependente de AMPc ou quinase A ou PKA nas suas duas subunidades regulatrios, provocando a separao de suas duas catalticas. Ambas entram no ncleo e fosforilam o fator de transcrio CREB, que se liga ao CRE e leva a expresso de alguns genes. Aps ativar a PKA, a AMPc degradado pela fosfodiuresterase e o receptor pode ser endocitado ou sofrer dessensitizao por fosforilao de seus resduos serina, tirosina ou treonina.

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