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Teoria da Totipotencialidade - Schleiden e Schwann (1839) - O que postulava essa teoria ???? Fisiologista vegetal alemo Haberlandt (1902) - Idia de cultivar celular isoladas - Materializar a teoria de Schleiden e Schwan - Muitos desafios para a poca...
Professor Steward e colaboradores (1958) - Obteno de embrio de plantas a partir de clulas maduras - Embriognese Somtica - CCI de raiz de cenoura. - Significado cientfico e potencial prtico
Uma das reas da biotecnologia hoje bastante estudada e aplicada, o cultivo de tecido vegetal melhoramento gentico e tcnicas de micropropagao.
O que micropropagao ?
- Tcnica atravs da qual se propaga plantas dentro de tubos de ensaios ou similares de vidro, sob condies adequadas de assepsia, nutrio e fatores ambientais, como luz, temperatura, O2 e CO2 (CID, 2001).
A micropropagao in vitro a aplicao mais prtica da cultura de tecido e aquela de maior impacto (GRATTAPAGLIA e MACHADO, 1998). - Por qu ?
Como funcionar ? - Forma de reproduo assexuada - Utiliza explantes do vegetal - Divises celulares induzidas
Obs.: Poder ser conduzido pela proliferao de gemas axilares ou induo de gemas adventcias
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Fatores que influenciam no xito do cultivo de tecidos origem e o tipo de material vegetal: 1) Idade da planta; 2) Tipo de explante (pices caulinares, segmentos foliares e razes); 3) posio que este explante ocupa na planta;
Embriognese Somtica
Consiste na produo de estruturas semelhantes ao embrio zigtico sem a fuso de gametas, que iro se desenvolver at a formao completa de uma planta.
Teoricamente a melhor opo para a propagao in vitro, em virtude de suas vantagens:
1) alta taxa de multiplicao comparada a qualquer outro processo de propagao; 2) escalonamento da produo pela manuteno da cultura em meio lquido; 3) plantio direto da muda obtida via ES, sem necessidade de enxertia; 4) possibilidade de transferncia de genes; 5) planta geneticamente igual planta-me.
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Direta: os embries se originam diretamente dos tecidos, sem a proliferao do calo. Indireta: o calo formado, mantido e proliferado antes do desenvolvimento dos embries. Em ambos os casos, os embries passam pelo estado globular, cordiforme e torpedo seguindo pela formao da planta (COLLIN & GROSSER, 1984).
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Rota da ES
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A importncia da composio do meio nutritivo: - Contm nutrientes necessrios sobrevivncia da planta - Favorece o crescimento e o desenvolvimento do material vegetal Constituio bsica: - Macronutrientes inorgnicos (N, K, Ca, Mg, P, S, Si) - Micronutrientes inorgnicos (Cl, Fe, B, Mn, Na, Zn, Cu, Ni, Mo) - Vitaminas (cido nicotnico, piridoxina e tiamina) - Fontes de nitrognio orgnico (glicina e inositol) - Acares (sacarose, glucose e monitol, entre outros) - Reguladores de crescimento (auxina, citocinina, cido giberlico) - Orgnicos opcionais (hidrolizado de casena e extrato de levedura) - Agente gelatinoso opcional (gar ou phytagel).
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Composio qumica natural dos vegetais (Hormnios): - Auxinas - Citocininas - Giberilinas - Etileno - c. abscsico
Tem o propsito de regular os processos metablicos envolvidos no crescimento e desenvolvimento No possui funo nutricional Ativas e com baixas [ ] nos tecidos
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Nvel de hormnios
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O que um fitorregulador ? - Substncias sintticas - Atividades fisiolgicas = aos hormnios naturais necessria a adio para induzir a ES
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Dendezeiro: primeiro projeto no qual plntulas originadas a partir de embriognese somtica foram cultivadas a campo, (Unilever, Malsia, 1975). Eucaliptos: organognese, embriognese somtica (EUA, Europa). Microestacas (Brasil): aumento de 135% na produtividade de polpa a partir de clones selecionados em comparao a populao base.
Cacau e caf: embriognese somtica para a propagao massal de variedades melhoradas e resistentes a molstias (EUA e Costa Rica)
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No campo: multiplicao por estacas estoque! - Brotos ortotrpicos - Estacas com um par de folhas retirar 1/3 do limbo foliar - Casa de Vegetao controle da UR - Plantar em leitos de areia - Transferir mudas bem enraizadas para vasos maiores
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2) Coleta de folha, desinfestao e inoculao: Coleta Folhas bem desenvolvidas terceiro par Coletar no inicio da manh Conduzir p/ laboratrio aguardar 30 min. (estmato) Desinfestao Capela de fluxo laminar desinsfestao parcial (lcool) Corta folhas em 1/2 tratar c/ hipoclorito de sdio Trplice lavagem em gua destilada
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2) Coleta de folha, desinfestao e inoculao: Inoculao Corta as folha com bisturi pequenos seguimentos (Fig. 1) Transferir para placa de Petri (Fig. 2 e 3) Inoculao meio de cultura gelificada (Fig. 4) Parte adaxial deve ficar em contato com o meio Manter as placas no escuro, sob 24 a 27 C
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- Macronutrientes inorgnicos - Micronutrientes inorgnicos - Vitaminas (cido nicotnico, piridoxina e tiamina) - Fontes de nitrognio orgnico (glicina e inositol) - Acares (sacarose, glucose e monitol, entre outros) - Reguladores de crescimento (auxina, citocinina, cido giberlico) - Orgnicos opcionais (hidrolizado de casena e extrato de levedura) - Agente gelatinoso opcional (gar ou phytagel).
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- Formao de calos amarelados sobre os primrios (Fig. 7) - Inicio da formao de setores embriognicos - Em 4 meses possvel observar a olho nu
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5) Multiplicao celular:
Aps 4 a 6 meses:
Multiplicao
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Avaliar a capacidade embriognica Os setores embriognicos de cada explante isolados (Fig. A) Cada um constitui uma linhagem embriognica Processo final dos embries 2 meses (Fig. B)
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6) Diferenciao, maturao e germinao de embries: Maturao/geminao: Modificao da composio do meio transferir Boa maturao ajusta a densidade dos embries Aps 2 meses embries na forma de cotildones Estdio final prontos p/ germinao (Fig. 9) 1 faze a ser conduzida na presena de luz Inicio do desenvolvimento radicular ( Fig. 10, 11 e 12)
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7) Crescimento:
Transferncia das plntulas p/ crescimento e enraizamento:
- Tubos de ensaio (Fig. A) - Frascos Magenta Melhor resultado (Fig. B) Encaminhar plntulas p/ casa de vegetao aclimatao
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8) Aclimatao:
Conduzida em tubetes
substrato tipo PlantMax (peneirado) Ps plantio irrigao diria + soluo macro e micro (semanal) Plantas mantidas em casa de vegetao - Sombreadas 40 a 50% da luz solar - UR de 70 a 90 % - Temperatura entre 20 a 30 C Aps 2 meses e mudas c/ 3 ou mais pares de folhas (Fig. C) 5 meses prontos para plantio em condies de campo (Fig. D)
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Multiplicao massal de um gentipo superior em qualquer estgio Genes desejveis de clones selecionados podem ser mantidos em um banco gentico Eficiente na produo em larga escala 20 mil embries por grama de clula em mdia
Custo elevado Necessidade de laboratrio Fora do alcance do produtores Dificuldade na aplicao de biofbricas.
Vantagens
Limitaes
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Obrigado !!
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