APUNTES BIOLOGIA CELULAR

1. CITOESQULET

1.0. Introducció
- Característiques moleculars: expressió i formes moleculars
Un fenómeno interesante en biología celular es el movimiento de cilios y flagelos y también la generación
de la forma celular, especialmente en los tipos celulares altamente especializados, tales como las células
nerviosas con sus largos axones y las células en cepillos del epitelio intestinal con sus micro-vellosidades.
Aunque las bases moleculares no se conocen en detalle, tanto el movimiento como las características
morfológicas de un tipo celular específico están relacionadas con un conjunto complejo de fibras
proteicas localizadas en el citoplasma: El citoesqueleto.

CITOESQUELETO: Es un sistema citoplasmático (y nuclear) de fibras esencial para la motilidad celular.

Proteínas fibrilares que dan forma a la célula. Es una estructura tremendamente dinámica. Son un
conjunto de estructuras que permiten el mantenimiento de la célula así como el dinamismo de los
orgánulos interiores. Es una especie de autopista móvil. El símil que más justicia le hace es referirse a él
como un ”camino de hormigas”

Todas las células eucarióticas observadas al microscopio electrónico contienen 3 clases principales de
fibras del citoesqueleto.

- Microfilamentos de actina (7-9 nm). Polimerizaciones de actina.

- Microtúbulos (24 nm). Polimerizaciones de tubulina α / β.
- Filamentos intermedios (10 nm). Polimerizaciones de proteínas específicas diferentes. (5 tipos)

FOTO HUEVO FRITO

• En las fotografías se puede observar como los microfilamentos de actina tienden a ser largos y van de
una punta de la célula a la otra.
• Los microtúbulos tienden a ser radiales y parten de un solo punto en la célula. Podríamos decir que
forman estructuras radiales.
• Mientras que los filamentos intermedios tienden a rodear al núcleo ; es decir, forman estructuras
redondeadas en el espacio

- Equilibri fracció soluble/insoluble: cinètica molecular i proteïnes associades

Cada tipo de fibra de citoesqueleto está constituida por:

-Una proteína mayoritaria, que es el monómero. Éstos monómeros polimerizan formando estructuras
grandes.
-Proteínas accesorias.
-Un tipo especial de proteínas accesorias: Proteínas motoras.
Las fibras del citoesqueleto están formadas por múltiples protofilamentos, que habitualmente se enrollan
unos sobre otros en disposiciones helicoidales.
 1.1. Actina

1.1.1. Molècula.
- Expressió i control. Dominis funcionals de G. Formes moleculars.
Modificacions postraduccionals.

La actina es unja proteína globular (actina G) que polimeriza formando fibras. (Actina F) de 43 kDa
aprox. Es una proteína que se ha conservado muy bien evolutivamente. Es muy abundante. La actina de
las células musculares y la de las células no musculares son productos de genes diferentes y por tanto
difieren ligeramente en sus propiedades. Sin embargo, todas las actinas estudiadas tienen un tamaño
similar, poseen unas secuencias de aa muy parecidas y comparten muchas otras propiedades, lo que
sugiere que evolucionaron a partir de un único gen ancestral.
Necesita Mg+2 – ATP ya que tiene capacidad para hidrolizar el ATP. Forma ADP + Pi. La conformación
de la actina es diferente dependiendo de si une ATP o ADP. De hecho la actina G tiene 4 estados:

Poli. Pi Despoli. Cambio ADP/ATP

G-ATP  F-ATP  F –ADP  G-ADP  G-ATP (again)

1.1.2. Equilibri G/F in vitro: Polimerització

- Cinètica de polimerització/despolimerització (gràfica). Nucleació.
Polarització. Concentració crítica. Drogues que afecten la cinètica de
polimerització

Los filamentos de actina crecen por adición de actina G en sus extremos. En las condiciones apropiadas,
la adicción de estas subunidades puede tener lugar por ambos extremos, pero el ritmo de adición de un
extremo, el llamado "extremos de crecimiento", es varias veces superior al del otro. La razón de esto es
que los monómeros de actina G contienen ATP ó ADP fuertemente unido. La velocidad de unión a los
microfilamentos es muy superior para la actina G con ATP unido que para la actina G con ADP. Poco
después de la polimerización de la actina se hidroliza el ATP enlazado, para convertirse en ADP, si bien
este proceso NO es esencial para que la polimerización tenga lugar.

La hidrólisis del ATP origina que en los filamentos de actina tenga lugar un fenómeno similar al de una
"cinta transportadora", esto es, el alargamiento de los filamentos en un extremo al incorporarse
monómeros de actina-ATP al tiempo que se acortan los extremos opuestos al liberarse subunidades de
actina -ADP.

GRAFICAS

* CONCENTRACIÓN CRÍTICA: Concentración en la cual hay un equilibrio entre monómeros y

filamentos. Por encima de ésta concentración se empieza a polimerizar y se alarga el filamento.
La concentración crítica del extremo "-" es superior a la del extremos "+"; así pues el extremo "+" es el
más rápido!!!
*TRADEMILLING:

El trademelling y mantener éste equilibrio dinámico es costoso para la célula. Necesita un mecanismo
rápido para volver a generar ATP a partir del ADP. Con ADP es lento, con ATP es rápido.

Se puede inducir un mecanismo físico de movimiento mediante esto. Sirve para propulsarse. Alguna
bacterias utilizan las polimerizaciones y despolimerizaciones para propagarse. Forman lo denominado
"cometa de actina". Realizan un trabajo mecánico.

DROGAS

A.- Faloidina: Aumenta los filamentos. Polimeriza y fija.

B.-Citocalasina: Disminuye los filamentos. Despolimeriza.
C.-Latrunculina: Se une a Actina G. Se bloquea. Se intenta reequilibrar y el filamento se despolimeriza.
D.- Swinholide: Corta los filamentos; los parte!!!

* NOTA: "In vivo" es más el peso que tienen ciertas proteínas catalíticas que NO la propia química de la
polarización / despolarización de la Actina. Estas proteínas catalíticas son las reguladoras de muchos
procesos como:

-Entrecruzamiento
-Interacciones con la actina
-Unión a la membrana plasmática
-Polimerizaciones de actina (Bloq/Desbloq extremos i/o monómeros)
-Proteínas motoras.

Estas proteínas se pueden clasificar según su función.

- Prot. SECUSTRADORAS

Reducen la actina globular e inducen la despolarización. En células NO musculares el 50 % de actina es

globular. La mayor parte de la G está secuestrada por la timosina (=5 KDa) y por profilina (=15 KDa).
Son proteínas que se unen a la actina-G. El regulador de todo este proceso es el PIP2 .

Una disminución de PIP2 = Profilina se separa de la actina -G

Un aumento de PIP2 = Profilina secuestra la actina-G a saco!!! Baja la concentración de ésta.

La profilina secuestra los monómeros. Tiene más afinidad por ellos libres que no en filamentos. Lo que
pasa es que la profilina da el monómero al filamento. (=en vez de lo normal) (=VER FOTOCOPIAS)

- Prot. NUCLEADORAS

Forman complejos y sustituyen estos núcleos. "In vivo" lo realizan otras proteínas. (No hay aquel desfase
en la gráfica).
Mimetizan o reproducen agregaciones de monómeros de Actina-G. Inducen la polimerización de otros
filamentos.
Los filamentos preexistentes empujan la membrana. La profilina está unida a la membrana. El receptor
recibe el ambiente i disminuye la concentración de PIP2 . La profilina deja ir la actina G y se produce una
polimerización local. (=QUIMIOTAXI: fenómeno por el cual la célula se desplaza.)

ARP 2 y ARP 3 se asemejan a la actina G solo que éstas NO producen filamentos. En la célula, ARP 2 y
ARP 3 se unen a 5 proteínas (=Complejo ARP 2 , 3). Éste complejo se asemeja a un grupo preexistente
de monómeros. Entonces la actina se une a él y se polimeriza. El complejo ARP 2,3 puede unir más
filamentos y además también reconoce lateralmente a la Actina de tal manera que se producen estructuras
ramificadas. Como es lógico, el complejo ARP 2 ,3 se une al extremo negativo del filamento.

* En el borde de migración es donde se produce todo este proceso.. "In vitro" también se producen
ramificaciones.

- Prot. ENTRECRUZADORAS

Hay tres grandes tipos de organizaciones:

* Fibras de estrés: Antiparalelas No densos
* Filopodium: Paralelas y densas.
* Córtex: Mallas en el borde de migración.

Como mínimo tienen 2 dominios de interacción con la actina. Hay muchos tipos de estructuras.

Microvilli : Invaginaciones del citosol rellenos de filamentos de actina.

Espectrina ==> Hace que el glóbulo rojo sea plástico. La espectrina se une a filamentos de actina y a
proteínas como Banda 4.1 las cuales se unen a la membrana plasmática.

Filamina ==> Cuando 2 filamentos se cruzan entre sí encontramos la filamina. Están en los cruces de 2
filamentos de actina

- Prot. RECUBRIMIENTO

Cap Z ==> Proteína que bloquea los extremos " + " de los filamentos.
Tropomodulina ==> Proteína que bloquea los extremos " - " de los filamentos.

Éstas intervienen en los músculos y en la contracción muscular; lo veremos más adelante.

- Prot. FRAGMENTADORAS.

Éstas aumentan la pendiente de la polimerización; pero no en las concentraciones críticas. Aumentan la

velocidad de polimerización pero NO las concentraciones críticas. (=Ver gráfica)

Cofilina ==> Tensa los filamentos. El paso de rosca se hace más pequeño. Acaba rompiendo el filamento

Gelsolina ==> Más de lo mismo. Igual que cofilina.

Plaquetas: Son fragmentos de mega-células. De echo es citosol de una célula grande que se separa; se
secreta.. Son trozos de célula. Éstas plaquetas NO son activas; hay que activarlas. Una vez activas se
pegan a todo !!
Es un proceso que se realiza en fracciones de segundo. La plaqueta aumenta de superficie y fabrica fibras
"por doquier." La plaqueta está llena de Actina - G y profilina. La plaqueta se activa por las citoquininas
( NOx ). Las señales producen una entrada de Ca+2 ; se activa la gelsolina y se fragmentan los filamentos;
genera extremos " + " Entonces se inactiva la gelsolina debido a que PIP2 disminuye de concentración. La
profilina libera Actina - G y entonces hay un crecimiento explosivo. Hay mucha polimerización.!!!

ALGUNOS MODELOS DE ANCLAJE (=a modo de curiosidad)

Plaqueta: Los filamentos se unen a la filamina.

Musculo liso: Los filamentos se unen a la distrofina ??
Células epiteliales: Los filamentos se unen a la cadena lateral en un receptor de membrana. CFTR
Eritrocito: Se unen a través de espectrina y filamentos de actina. (=complejo).
Cell- Sustrato: Medianto un contacto focal.
Cell-Cell: Mediante interacción de 2 proteínas situadas en forma de anillos para impedir que nada difunda
en los espacios de las 2 células. Es un sistema de barrera. Caso del esófago (=Barrera gastrointestinal).
Este tipo de sistema está destinado a proteger estructuras muy importantes dentro de un organismo.

LA FAMILIA ERM (Ezrina, Radixina, Moesina)

Proteínas de interés que actúan como enlace de moléculas de membrana plasmática con Actina - F.
Los dominios C y N están plegados, si es así, la proteína está inactiva. Una vez se activa se despliega y
actúa con Actina - F. Muy importante la actividad Rho A inactiva. Separa el filamento de Actina - F.

Rho A: Es una proteína. Son GTPasas de peso molecular pequeño. Tienen 2 situaciones. El GTP no
hidroliza el GTP; necesita de GAP's específicas para que se active la actividad GTPásica. Entonces sí se
obtiene GDP. Cuando hay GDP se remplaza a GTP otra vez mediante una GEF específica. (2o3 en
asociación)

Al ser GTP actúa de manera que forma un complejo estable. Se separa cuando GTP se vuelve GDP. GDP
se forma en el citosol (Hay GEF)

Hay GTP (=estable) entonces van al núcleo, Se encuentra con un GAP; entonces se suelta. Todo esto
asegura la existencia de un ciclo.

27/9/04

Familia Rho A

ERM y Rho A son de la misma familia. Unión de N-C sobre sí mismos. (estado inactivo). La activación la
da Rho A.

Rho A és una GTPasa pequeña.

- Oncógeno :Es tumoral.

- Protoncógeno : Puede convertirse en oncógeno.
- Oncoproteína: Proteína codificada por un oncógeno.
- Protooncoproteína: Proteína codificada por un protoncogeno.

* En las células hay una inhibición por contacto a la hora de replicarse. Por eso no se dividen. Los
protoncogenes codifican para proteínas que le dicen a la cell que NO se divida. Cada una que "se calla"
hace que la probabilidad de que haya una proliferación (tumor) aumenta. La proteína Ras es un típico
ejemplo. Es meramente probabilístico.

De GTPasas pequeñas hay muchas (200 aprox.) Ras es definitoria de una sub-familia. También hay Rac /
Rho / cdc42 / Rab,etc... . controlan todo el citoesqueleto.

Éstas GTPasas interaccionan con complejos de proteínas inestables y los estabilizan cambiando de
configuración. Está activa unida a GTP e inactiva unida a GDP. No se fosforila sino que transloca todo el
GDP por un GTP. Esto lo hace GEF.
El mismo GEF NO hidroliza sino que es GAP quién cambia GTP por GDP. Son todas específicas.

Si Ras NO funciona, No hay AMPc y por tanto NO hay señal para la cell. Es entonces cuando aumenta la
probabilidad del tumor.

EJERCICIO.....
A.- Estado Quiescente: Cell con vida normal.
B.- Al activar Rho hay más fibras de estrés y más puntos focales
C.- Al activar Rac hay más estructuras de mallas
D.- Al activar cdc42 hay "pelos"; protusiones.
GTP S: El enlace NO se puede hidrolizar !!. Inhibimos todas las GAP. Veríamos todos los resultados a la
vez.

Dominancia

Dominante negativo: la expresión de una proteína anómala hace inhibir lo que es la acción normal de una
proteína.

MOTORES MOLECULARES

Los filamentos solo tienen un motor; es la miosina. Hay 18 tipos. Todas las miosinas tienen cabezas
globulares (ATP asa), cuello con proteínas reguladoras y la cola lleva el orgánulo (o demás) a arrastrar.

La miosina consta de dos sub-unidades:

Si tratamos con quimiotripsina encontramos:

Meromiosina pesada
Meromiosina ligera.

La papaína rompe las S1 y S2 es decir, los dos dominios globulares.

Los filamentos de miosina son agrupaciones de ésta molécula; es lo que forman el músculo estriado.

Miosina I = Motor en células NO musculares. (monómero)

Miosina II = Motor en células muscular estriada (dímero)
Miosina V = Causante del desplazamiento de vesículas.

* En el dominio motor hay una gran homología. Todas las miosinas van hacia el extremos "+"
(Excepción: Miosina VI )
La actina avanza en dirección " - ".

Miofibras: Paquete muscular. Sarcómero de músculo estriado.

La musculatura lisa es la musculatura NO voluntaria (vasos, intestinos, etc....) Regulada por el SNC i/o
hormonas. No presentan sarcómeros. Placas de adhesión. Cuerpos densos. Tienen la misma composición
que la banda Z de los sarcómeros. (=Es como más difuminado)

Actina , miosina y proteínas cap Z. Bloquea el extremo "+" de los filamentos en músculo liso/estriado. La
alfa-actina separa 30 nm. Provoca que NO se despolimerize el filamento.

Retículo endoplasmático liso. Retículo sarcoplasmático. En contacto con las bandas Z (=invaginación).
Provoca la liberación de Ca+2. Provoca que se modifique la actina / tropomiosina. Se desplaza dejando al
descubierto los puntos de unión con la miosina. Cuando el Ca+2 disminuye de concentración; el músculo
se relaja (=VER CONTRACCIÓN MUSCULAR)
MICROTUBULOS

Los microtúbulos son el tercer componente principal del citoesqueleto, son varillas rígidas y huecas de
aproximadamente 25 nm. de diámetro. Los microtúbulos son estructuras dinámicas que están
continuamente ensamblándose y desensamblándose en la célula. Intervienen en algunas formas de
locomoción celular, el transporte intracelular de orgánulos y la separación de cromosomas durante la
mitosis.

Los microtúbulos se componen de un único tipo de proteína, denominada tubulina. La tubulina es un

dímero constituido por dos polipéptidos de 55 KDa cada uno (=110 KDa), estrechamente relacionados.
α-tubulina y β-tubulina. Los dos tipos se codifican por pequeñas familias de genes relacionados. Es una
proteína bastante conservada en eucariotas desde el punto de vista evolutivo. Hay muchas copias en el
DNA; en vertebrados hay 6 genes que codifican para α-tubulina y otros 6 para β-tubulina.
Existe un tercer tipo de tubulina, la denominada γ - tubulina, ésta se localiza en el centrosoma y
desempeña un papel clave en el inicio del ensamblaje de los microtúbulos.

Los dímeros de tubulina polimerizan para formar microtúbulos, que generalmente consisten en 13
protofilamentos lineares ensamblados alrededor de un centro hueco. Se disponen en paralelo. Como
consecuencia, los microtúbulos (al igual que la actina) son estructuras polares con dos extremos
diferenciables. Un extremo "más" de crecimiento rápido y un extremo "menos" de crecimiento lento.

Tanto la α-tubulina como la β-tubulina se unen a GTP (que actúa de forma análoga al ATP unido a la
actina para regular la polimerización). Concretamente el GTP unido a la β-tubulina (NO el α-tubulina-
GTP) se hidroliza a GDP durante o justo después de la polimerización. Ésta hidrólisis del GTP disminuye
la afinidad de la tubulina por las moléculas adyacentes, lo que favorece la despolimerización.

Los microtúbulos sufren un intercambio rotatorio, un comportamiento dinámico en las que las moléculas
de tubulina unidas a GDP se liberan continuamente del extremo "menos" y son remplazadas por
moléculas de tubulina-GTP por el extremo "más". El que un microtúbulo crezca o se acorte viene
determinado por la velocidad de adición de la tubulina respecto la velocidad de hidrólisis de GTP.
Mientras las nuevas moléculas de tubulina unidas a GTP se añadan a mayor velocidad que la hidrolisis de
GTP, el microtúbulo mantiene la caperuza de GTP en su extremo "más" y el crecimiento del microtúbulo
continua. Sin embargo, si la velocidad de polimerización decrece, el GTP fijado en el extremo "mas" será
hidrolizado. Es entonces cuando la tubulina asociada a GDP se disociará, dando lugar a un acortamiento
del microtúbulo.

DROGAS

COLCHICINA= Inhibe la polimerización.

COLCEMIDA= Inhibe la polimerización.
TAXOL= Estabiliza los microtúbulos. Es un fijador.

ORGANIZACIÓN DE MT

* El extremo "menos" se estabiliza mediante el MTOC (Centro Organizador de MT).

Los mictoúbulos se extienden a partir de un centro organizador de microtúbulos, al que se anclan los
extremos "menos". En las células animales, el principal MTOC es el centrosoma, que se localiza junto al
núcleo. El centrosoma sirve como lugar de inicio del ensamblaje de los MT que crecerán a partir del
centrosoma hacia la periferia celular. Los centrosomas de la mayoría de las células animales están
constituidos por centriolos. Los centriolos son estructuras cilíndricas constituidas por nueve tripletes de
microtúbulos. Aunque los centriolos probablemente sean los precursores de los cuerpos basales, parece
ser que NO son indispensables para el funcionamiento del centrosoma (huso mitótico). Los centriolos no
parecen ser necesarios para el ensamblaje o la organización de los MT. (en vegetales y algunas células
animales NO están presentes).

La proteína fundamental en el centrosoma que nuclea el ensamblaje de los MT es la γ - tubulina.

Complejos de ésta proteína forman unas estructuras en anillo que contiene de 10 a 13 moléculas de
γ -tubulina y que tienen un diámetro similar a los microtúbulos. Estos anillos sirven como sitios de
nucleación para el ensamblaje de MT y pueden permanecer unidos a sus extremos "menos".

Otro centro organizador de MT son los crepúsculos basales en cilios y flagelos. Lo veremos más adelante.

* El extremos "más" se estabiliza mediante GTP. Forma caperuzas de GTP.

La inestabilidad dinámica por el extremo "más" viene dada por la concentración crítica de tubulina y por
la disponibilidad de GTP. Si el MT no crece, éste entra en una fase de depolimerización. La caperuza de
GTP es muy importante.

La β-tubulina ligada a GTP se puede hidrolizar a GDP. Los dímeros que se unen al microtúbulo son de
GTP. Al interior del MT los dímeros se estabilizan y se hidrolizan. A la parte más externa encontramos
GTP que es la forma más estable. Si no hay polimerización el GTP más exterior pasa a GDP y empieza la
inestabilidad y la consecuente despolimerización.

MICROTUBULOS DE HALF - LIFE.

EXPERIMETO.
Incubamos con dímeros de tubulina-biotina. Existe una proteína que tiene afinidad por la biotina
(=marcador)(=AVIDINA). Si el MT crece tenemos una alta concentración de Tubulina-Biotina. La
avidina está marcada con fluorescencia y se engancha a los extremos que crecen.

Para ver aquellos que NO crecen tenemos Ac contra tubulina y NO tubulina-biotina. Entonces veremos
los MT estables; que no crecen.

El extremo "mas" también se puede estabilizar temporalmente y la tubulina de los MT puede sufrir
maduraciones reversibles.

* Acetilación de Tyr , Eliminación de Tyr C- terminal , etc..

* Asociación a MAP's. A otras proteínas.

PROTEÍNAS ASOCIADAS A MICROTUBULOS (=MAP's)

Encontramos las MAP's estructurales y las MAP's motoras.

* MAP'S Estructurales:

Son proteínas que se fijan a los microtúbulos e incrementan su estabilidad .Dichas interacciones permiten
a la célula estabilizar los microtúbulos en localizaciones definidas y son un mecanismo para determinar la
forma y la polaridad de la célula. Controlan la vida media de los microtúbulos así como su alargamiento y
pueden formar puentes de enlace cruzados.

Tienen 2 dominios bien diferenciados y polarizados:

* Un dominio básico de unión con el microtúbulo.

* Un dominio ácido de unión con otras proteínas, "carriers" , citoesqueleto, incluso otros microtúbulos.

Se han indentificado un gran número de ellas. Nosotros veremos....

MAP's TIPO I : Presentan una secuencia " -Lys-Lys-Glu - X " Con carga negativa.
MAP's TIPO II: Presentan una secuencia de 18 aa repetida 3 o 4 veces en el lugar de unión.

La unión de las MAP's al citoesqueleto controla los microtúbulos. Si se fosforila (o desfosforila) pierde la
capacidad de estar unida. La acción de fosforilar o desfosforilar la llevan acabo unas MAP's kinasas. Las
MAP kinasas al fin y al cabo son las que regulan la función del citoesqueleto.

A su vez las MAP kinasas están reguladas por señales de receptores, AMPc, PIP, PI3 que acaban
modificando a las MAP kinasa y éstas activan o inactivan las MAP's favoreciendo o desfavoreciendo la
polimerización de microtúbulos.

* MAP's Motoras

Los microtúbulos son responsables de diversos movimientos celulares, incluyendo el transporte

intracelular y el posicionamiento de las vesículas de membrana y de los orgánulos, la separación de los
cromosomas en la mitosis y el batir de los cilios y flagelos; también en animales al mimetizar-se
(transporte de pigmentos).

La quinesina y la dineína son prototipos de proteínas motoras de los microtúbulos, se mueven a lo largo
de los microtúbulos en direcciones opuestas. La quinesina se mueve hacia el extremo "mas" y la dineína
hacia el extremo "menos"

QUINESINA

La quinesina es una molécula de aproximadamente 380 Kda constituida por 2 cadenas pesadas (120 Kda
cada una) y 2 cadenas ligeras (64 Kda cada una). Es un dímero de 4 cadenas. Las cadenas pesadas tienen
regiones largas de α-hélice que se enrollan una alrededor de la otra en una estructura de hélice enrollada.
Los dominios de cabeza globular amino-terminales de las cadenas pesadas son los dominios motores de la
molécula: se unen tanto a los MT como a ATP, cuya hidrólisis proporciona la energía necesaria para el
movimiento. (Semejante a la miosina lo cual evoca a que provienen de un ancestro común).
La zona de la cola está constituida por cadenas ligeras unidas a los dominios carboxilos- terminales de las
cadenas pesadas. Esta región es la responsable de la unión a otros componentes celulares (vesículas,
etc...) que se transportan a lo largo de los MT por la acción de los motores de quinesina. Presentan 34 aa
modificados que determinan una unión específica a aquellas estructuras que hay que transportar.

F(X)

La función es transportar el "carrier". Están separados 5nm los lugares de unión; (5-8nm deformados). Se
desplaza por un protofilamento solamente. Por cualquier de los 13; pero seguro que si engancha uno; ya
no se suelta. Necesita ATP para enlazarse.

FAMILIA DE LA QUINESINA

Son 12 miembros. Son diméricas.

El dominio motor N-terminal tiene el movimiento hacia el extremo "mas".
El dominio motor C-terminal tiene el movimiento hacia el extremo "menos" (=Excepción)

La regulación de la activación/desactivación (cadenas plegadas) se lleva a cabo por fosforilación /

desfosorilación. Las enzimas que controlan esto son kinasas.

DINEINA

La dineína es una molécula extremadamente grande (2.000 KDa), que está constituida por dos o tres
cadenas pesadas (500 Kda cada una) unida con un número variable de polipéptidos ligeros e intermedios,
que oscilan entre 14 y 120 Kda. Al igual que la quinesina, las cadenas pesadas forman dominios
globulares motores de unión a ATP que son los responsables del movimiento a lo largo de los MT.
La quinesina convencional y otros miembros de la familia que se dirigen hacia el extremo "mas,
transportan su carga hacia la periferia celular, mientras que las dineínas citoplasmáticas se dirigen hacia el
extremo "menos" transportando los materiales hacia el centro de la célula.

Los microtúbulos y las proteínas motoras asociadas colocan los orgánulos con membrana en la célula
(como AG, RE, lisosomas, mitocondrias). Los fármacos que depolimerizan los mictrotúbulos, provocan
que el RE se retraiga hacia el centro de la célula, lo que indica que se requiere la asociación con los
microtúbulos para mantener el RE en su estado extendido. Requiere la acción de quinesina, la cual estira
del RE a lo largo de los microtúbulos en dirección "más" hacia la periferia celular.

Por otro lado, la dineína citoplasmática interviene en la colocación del AG (Aparato de Golgi). El AG se
localiza en el centro de la célula, cerca del centrosoma. Si los microtúbulos se disgregan, bien por un
fármaco o debido a que la célula entra en mitosis, el AG se rompe en vesículas que se dispersan por todo
el citoplasma. Cuando los microtúbulos se vuelven a formar, el AG también se reensambla y parece ser
que las vesículas de Golgi son transportadas al centro de la célula.

CILIOS Y FLAGELOS.

La dineína también se encuentra presente en cilios y flagelos.

Los cilios y flagelos son estructuras muy similares, cada una con un diámetro de 0.25 µm aprox.
La estructura fundamental tanto de los cilios como de los flagelos es el axonema, que está constituido
por microtúbulos y sus proteínas asociadas.. Los microtúbulos se disponen en un patrón característico.
Son 9 + 2 microtúbulos. “centrales y 9 periféricos. Éstos últimos constan de un 2 microtúbulos asociados.
Uno completo de 13 protofilamentos y el otro incompleto con sólo 10 ó 11 protofilamentos. (Ver
esquema). Forman un microtúbulo "doble." Los dobletes exteriores se conectan con el par central
mediante espinas radiales mientras que entre ellos se conectan mediante puentes formados por una
proteína que se llama nexina. A cada doblete periférico (a la subunidad completa - 13 protofilamentos-)
se le une2 brazos de dineína (uno exterior y uno interior) y es la actividad motora de estas dineínas la que
dirige el batido del cilio o flagelo.

Los extremos "menos" de los microtúbulos de cilios y flagelos están unidos a un cuerpo basal que tiene
una estructura similar a los centríolos (9 tripletes de microtubulos). Los cuerpos basales sirven para
iniciar el crecimiento de los microtúbulos al axonema, así como para anclar los cilios y los flagelos a la
superficie de la célula.

Los movimientos de los cilios y flagelos se producen por el deslizamiento de los dobletes externos de los
microtúbulos uno respecto a otro, impulsados por la actividad motora de la dineína axonémica. La base de
la dineína se une al microtubulo de 13 protofilamentos (el completo) mientras que la cabeza se une al
microtubulo de 10 protofilamentos. Cuando la dineína se desplaza al extremo "menos" hay una curvatura
del microtubulo ya que están unidos por puentes de nexina. Sino resbalarían de manera normal. La nexina
hace que se doblen, lo que constituye la base del movimiento de cilios y flagelos. Tiene que haber una
sincronización total. (Proceso poco estudiado).

FILAMENTOS INTERMEDIOS
Compuestos de proteínas variables Presentan un dominio central y otro globular. Se organizan en
dimeros, tetrámeros, filamentos. Tienen un diámetro de 10 - 11 nm. Cada tipo de tejido o tipo celular
presenta sus propias proteínas.

Presentan dominios centrales en hélice α bastante conservados, los extremos son globulares y más
variables. El tetrámero es antiparalelo, el filamento NO está polarizado.
NO se asocia ni hidroliza GTP o ATP. No consume ATP al polimerizar.
Su función es mecánica. Refuerza las cells, asocia tejidos que deben resistir tensiones.
También sirven de puntos de asociación con otras estructuras de la célula. Lugares de contacto entre las
cells:
- Contacto de adhesión: Ligados a actina.
-Desmosomas / Hemidesmosomas: Ligan membranas vecinas

DOMINIOS

* CENTRAL: Presenta una hélice α muy conservada.

Tienen 7 aa que se repiten periódicamente. Hay tres interrupciones. Forman 4 hélices α. 1A, 1B, 2A, 2B.
En vertebrados hay 310 aa; en invertebrados 350 aa. Los 26 aa del inicio y los 32 del final no varían
mucho. Están implicados en la formación de dímeros.

A la secuencia 2B encontramos 4 aa intercalados !! Rompen la pauta de 7 aa comentada anteriormente. Es

un lugar muy conservado pero aún se desconoce su función. (VER FOTOCOPIAS)

* GLOBULAR: son dominios variables. Generalmente son secuencias largas (55 KDa)
Dan variedad a las proteínas (interacción con estructuras vecinas). Este dominio es importante para el
ensamblaje de los filamentos y a veces sobresale de la superficie de los filamentos.

ENSAMBLAJE

* DIMERO: Una hélice α se "enrosca" con otra hélice α. Presentan una orientación paralela. Puede ser un
mono / hetero / homopolímero. Si es hetero son de familias diferentes.

*TETRAMERO: Es una agrupación de dímeros. Se disponen de manera antiparalela lo que asegura unos
filamentos NO polarizados.

N |-------------------| C

C |--------------------| N

*FILAMENTO: Unión más larga, dan más resistencia. Los filamentos presentan 60nm. Se asocian
lateralmente.

NOTA: Primero se forman los dímeros en los cuales los dominios de eje central de 2 cadenas
polipeptídicas están enrollados uno alrededor del otro formando una estructura de espiral enrollada (tipo
coiled - coil) (Similar a las cadenas pesadas de miosina)
Los dímeros se asocian de un modo escalonado antiperalelo para formar tetrámeros que se ensamblan
extremo con extremo para formar protofilamentos. (NO polarización)

El ensamblaje de filamentos requiere interacciones entre los tipos específicos de proteínas de filamentos
intermedios. Por ejemplo, los filamentos de queratina siempre se ensamblan a partir de heterodímeros que
contienen un polipéptido de tipo I y uno de tipo II. Por el contrario, las proteínas del tipo III pueden
ensamblarse en filamentos constituidos por un único polipéptido (vimentina) o constituidos por dos
proteínas de tipo III diferentes (vimentina-desmina)

Los filamentos intermedios suelen ser más estables que los filamentos de actina o los microtúbulos y NO
exhiben el comportamiento dinámico asociada a la poly/despolimerización. Sin embargo las proteínas del
filamento intermedio suelen ser modificadas por fosforilación, que puede regular su ensamblaje y
desensamblaje en la célula.

- Los F. Intermedios resisten a los detergentes. Al centrifugar , en el sobrenadante tenemos Actina,

tubulina, etc... y en el "pellet" quedan los filamentos intermedios polimerizados.
- Con urea se despolimerizan.
- Por diálisis los podemos purificar; más tarde los podemos purificar mediante una columna de
intercambio iónico.
* son muy dinámicos. Son pocas las subunidades (tetrámeros) libres "in vivo" Hay un recambio
constante; salen y entran. El intercambio viene regulado por inhibidores, etc...la vida media de las
subunidades dentro de un filamento es 1 hora aproximadamente.

Los filamentos intermedios tienen un diámetro de 10 nm. A diferencia de los filamentos de actina y de los
microtúbulos, los filamentos intermedios NO están directamente implicados en los movimientos
celulares. Parecen desempeñar básicamente un papel estructural proporcionando resistencia mecánica a la
célula y tejidos.

1.- EXPERIMENT PER VEURE EL DINAMISME

Afegim a un cultiu Biotina - Keratina. S'utilitza com a marcador. Incubem amb avidina + cromófor. Ens
indica on está la queratina. Fixem amb formaldheid, que mata peró fixa. A 20 segons la distribució es a
"grumolls". S'intercalen al llarg del filament. Al cap de 4 minuts es tot ja uniforme. Indica que hi ha un
recambi constant.

2.- EXPERIMENT PER VEURE EL DINAMISME

Mitjançant fotobloqueig. (Els fluorocroms també es gasten) Teñim tot amb fluorocrom e irradiem. Ara no
es veu res a la zona irradiada. Al cap de uns cuants minuts la zona blanquejada torna a tenir rodamina
fluorescent. Aixó es un clar exemple de que hi ha dinamisme.

Mientras que los filamentos de actina y los microtubulos son polímeros constituidos por un solo tipo de
proteínas (actina y tubulina respectivamente), los filamentos intermedios están compuestos por diversas
proteínas que se expresan en distintos tipos de células. Más de 50 proteínas diferentes han sido
identificadas. Hay muchos tipos:

* Queratinas: (Tipo I y II)

Hay 2 grupos de queratinas, constituidos cada un por aproximadamente 15 proteínas diferentes, que se
expresan en las células epiteliales. Cada tipo de célula epitelial sintetiza al menos una queratina del tipo I
(acida) y otra del tipo II (básica o neutra) que polimerizan para formar filamentos Forman heterodímeros
de familias diferentes. Hay 50 genes que codifican estas proteínas.. Funciones mecánicas
.

Hay queratinas duras (pelo, uñas) y blandas; constituyen el grupos de las citoqueratinas.

*Derivados del mesodermo. (Tipo III)

Forman monopolímeros o heteropolimeros.
Incluyen la vimentina, que se encuentra en diferentes tipos de células, fibroblastos, glóbulos blancos,
etc...aguanta membranas etc.. presente también en células del tejido conjuntivo.
Otra es la desmina, presente en células musculares, donde conecta los discos Z de los elementos
contráctiles individuales. Mantiene la estructura bien ligada.
Otra la GFAP

* Neurofilamentos (Tipo IV)

Engloba 3 tipos de proteínas. NF-L, NF-H, NF-M. Asociados a microtubulos. Presentes en neuronas, son
los responsables del diámetro del axón.

* Láminas nucleares: (tipo V)

Se encuentran en el núcleo, NO en el citoplasma. Presente en todas las células eucariotas. Hay 3 tipos, A,
B, C. Son filamentos delgados que se unen formando un entramado ortogonal a modo de "malla". La
fosforilación determina la disgregación de la "malla". Tienen la función de controlar la envoltura nuclear
al largo del ciclo celular.
Son filamentos especializados para reforzar la cubierta del núcleo por dentro. Son dinámicos pero NO en
el sentido de poly /despoly. Van cambiando pero NO por los extremos sino por el medio. Son dinámicos
porque al dividirse una célula los filamentos nucleares se desorganizan. Después se vuelven a asociar en
las células hijas.

* Otras como...: NESTINA (Tipo VI)

Relacionada con células madre del sistema nervioso central.

MATRIZ EXTRACELULAR
Son proteínas que rellenan los espacios entre las células. Es lo que se denomina tejido conjuntivo. Piel /
cartílagos / Dermis, etc.... la propia célula produce esta matriz extracelular.

Principalmente se compone de colágeno de tipo I (= prot. Predominante en el tejido conjuntivo),

fibroblastos, o colágeno o fibroblastos.

Encontramos:

A) Proteínas fibrilares : Colágeno o elastina. Relacionadas con la estructura.

Las proteínas de la familia del colágeno presentan una triple hélice α de torsión levógira debido a la
repetición de la secuencia (Gly - X - Y) n donde generalmente X: Pro o Lys e Y: hidroxiPro o hidroxiLys.
Hay unos 20 tipos diferentes codificados por unos 38 genes.
Las fibrillas de colágeno están unidas de modo covalente por los extremos N y C -terminal. La Gly da
estabilidad a la cadena de 3-D. Se une covalentemente por puntos terminales. Esto da una idea de la
periodicidad de las fibras de colágeno. Son codificadas como propéptidos. Se forma una cadena de hélice
α , luego otra, se van al RER y se madura todo en el AG. (glucosilación, poliadenilación, etc....)

Tienen propiedades mecánicas y diversas mutaciones pueden provocar graves dolencias.

- Ostogenesis imperfecta: la hélice α presenta una estructura deficitaria. Altera la estructura de
los huesos; puede ser letal.
- Fibrosis hepática: Se crea una matriz sólida. Altera la funcionalidad.

Hay de muchos tipos (=Ver cuadro)

Mutaciones en Gly dan la desestabilización.

Del tipo IV ayudan a unir a las del tipo I. Las del tipo IX se unen a las del tipo II. Esto se da para poder
unir un polisacárido a la fibra.
Las laminas (tipo IV) se forman debido a que el colágeno se distribuye en forma de res "malla". Los
extremos globulares interaccionan entre sí. El extremo N y C-terminal se queda fuera de plano de la
lámina y pueden interaccionar con otras proteínas. Es una alfombra; así pues las células se pueden
orientar de una forma polarizada.

Las fibras elásticas dan elasticidad al tejido.

B) Glucoproteínas adhesivas: Fibronectina / Laminina

* FIBRONECTINA: molécula grande 450 Kda. Dímero con 1 puente di-S Fibro-nectina (unión de fibras)
Hay muchos elementos. Forma soluble / insoluble en sangre.
Tiene una infinidad de dominios. Hay una secuencia llamada RGD (Arg-Gly-Asp) que es la responsable
de la unión de la superficie de la célula, en contactos locales.
Dicha secuencia RGD reconoce integrinas. La fibroncetina reconoce colágeno, RGD, fibrina i GAG's. La
fibronectina es como un circunflejo ( ^ ) Cunado se rompe se forman monómeros / \ .
Presente en la cascada de cicatrización (=Opsonicación), en el desarrollo embriológico, en la unión,
expansión y migración de células.
Alteraciones en esta molécula produce malformaciones en S.N, cardíacos incluso puede ser letal para el
embrión.

* LAMININA: principal componente de las láminas basales (junto con el colágeno de tipo IV)
Forma un tapiz en forma de red. Asociado en el tejido conectivo (=epitelial cells).
También presentes en células de Schwan, células musculares, etc...
La forma de la laminina es una cruz ( T ). Es un heterodímero.
Formada por una cadena α (hay 5 tipos) , una cadena β (hay 3 tipos) y una cadena γ (hay 2 tipos). Solo
se conocen 11 de todas las que hay. La más común es la Laminina - 5 (α3 β3 γ2 ).
Se une también a GAG's, colágeno, heparina, integrina lo cual quiere decir que presenta el triplete RGD.
Toda glucoproteína de la matriz extracelular que tenga RGD se une a integrinas. GRAFICO

LAMINAS BASALES

Lamina fina dispuesta en red. Presente en epitelios, cell.schwan, músculo, etc.. presentan diferente
organización en cada uno de estos diferentes tejidos.
Sirve para soporte físico de cells, control del desarrollo, función de filtro en riñón, permiten la migración
de sangre hacia zonas de inflamación, intervienen en la formación de metástasis, etc...
Los constituyentes principales son, colágeno IV, laminina, perlecano (proteoglucano).

También encontramos más proteínas de las láminas basales.

Perlecano: Un proteoglicano con un heparan sulfato. Contribuye a las funciones de filtración.
Entactina: Interactúa con laminina y colágeno del tipo IV.
Nigogeno: Proteína de unión a la laminina.

La laminina y el colágeno de tipo IV forman una lámina basal bidimensional (red).

La lamina basal sirve para mantener juntas las células durante el desarrollo embrionario; antes que se de
la diferenciación.. También hace de guía para los axones de las células neuronales.

C) Glucoaminoglycanos (GAG's)

Los gag son cadenas poliméricas de disacáridos de repetición (80 - 200 residuos) . Su función es la de
rellenar espacios.
Si se unen covalentemente a proteínas se forman los llamados proteoglucanos.

Existen 5 tipos de GAG's:

- Condroitin: Condrotoín sulfato. El más abundante. (ac.glucurónico + N-Acgalactamina)

- Heparina: Heparán sulfato.. Es anti-trómbico .(ac.idurónico + N-Acglucoamina)
- Dermatán: Dermatán sulfato. Abundante en la piel. .(ac.idurónico + N-Acgalactamina)
- Queratan: Queratán sulfato. Es el menos abundante. (galactosa + N-Acglucoamina)
- Hiularan: Acido hialurónico: NO une proteínas; NO tiene grupos sulfato.!! Importante en cáncer
(ac.glucoronico + N-Acglucoamina) Cadenas largas.

Los GAG's retienen agua, iones, etc...

Alteraciones en los genes que codifican para estos GAG's originan enfermedades graves como el
"gargolismo", provoca fallos en determinados órganos, son enfermedades con consecuencias altamente
fenotípicas.

El ácido hialurónico es el más importante. Potencia la integridad estructural de la matriz extracell. Sirve
también para la señalización de proliferar o migrar. No está sulfatado, sirve de elongación en la MP una
vez sintetizado.

Este ácido hialurónico está fuertemente relacionado con el cáncer. Altos niveles de AH se asocian con
diversos tipos de cánceres humanos.
AH promueve la proliferación y reduce la diferenciación. También promueve la migración celular, la
invasión.
Una sobre-expresión de HAS (hialurato sintasa) induce el crecimiento del fibrosarcoma y carcinoma de
próstata.
Alteraciones de las interacciones endógenas del AH inhiben crecimiento, invasión y metástasis de varios
tipos de tumores "in vivo".

PROTEOGLUCANOS

Se forma de una proteína central ( o núcleo) que se adhiere a GAG's. Estos GAG's representan un 95 %
del peso molecular del proteoglucano. Hay un tetrasacárido que forma un link de unión entre el GAG y el
núcleo proteico. Este tatrasacárido suele ser NP - xilosa - 2 galactosas - Ac.glucorónico - GAG.

Hay muchos tipos de proteoglucanos:

- Decorina: NP corto. Tiene una cadena de GAG con 80-100 residuos.

- Aggrecano: NP largo. Tiene 100 cadenas de GAG con 100-200 residuos. IMPORTANTE
- Ribonucleasa: NP muy corta. Una cadena de GAG con 15 residuos únicamente.
- Serglicina: GAG's destribuidos de manera radial.
- Perlecano: GAG's en forma de T.

Las funciones de los proteoglycanos son estructurales. Son el componente estructural de las laminas
basales. (perlecano). De tejidos como el cartílago. También realizan funciones de receptor y de
transducción de señal.

Algunos proteoglucanos como el agrecano interaccionan con el ácido hialurónico para formar grandes
complejo de la matriz extracell.

Los proteoglucanos son capaces de reclutar moléculas de ligando pero NO de generar una señal. Aug
Aumentan la concentración de un ligando localmente y hacen que el receptor se estimule con más
eficiencia.
 ADHESION MOLECULAR

Adhesión molecular: Conjunto de relaciones físicas que establece una célula con su entorno con otras
células o con la matriz extracelular. Para que la cell sea funcional precisa estar adherida; si no lo está NO
será funcional o morirá. (Caso de las cell de la glándula mamaria, necesitan estar polarizadas para
funcionar). (=Transwell: Dispositivo para cambiar la polaridad de la célula).

De moléculas de adhesión hay 2 grupos:

- Responsables de unión al cell -sustrato.

- Integrinas (reconocen RGD)
- Proteoglucanos transmembrana como: Sindecanos, gliglucanos, B-glucanos.

NOTA: Estos 2 tipos se unen a moléculas distintas mediante uniones heterofílicas.

- INTEGRINAS

Son proteínas de membrana. (=Transmembrana)

Responsables de unión cell-sustrato y cell-cell
Reconocen secuencias RGD principalmente (También LDV)
Necesitan Ca+2 o Mg+2 para activarse. (Regiones MIDAS)

Las integrinas constan de 2 subunidades una α y β. La α (120 - 180 Kda) y β (90 - 110 Kda). La unión α
β determina la especificidad. Hay más de 20 diferentes. Se han encontrado 18 α y 8 β. Esto representa
muchas combinaciones.
Las integrinas son glucoproteinas. Es un heterodímero. El dominio Aα (de la subunidad α) reconoce
proteínas de la matriz extracelular. Es como una pinza. Si no esta presente este dominio entonces se
reconoce mediante el dominio Aβ (de la subunidad α).

El Grupo β2 y β3 forman superfamilias; son muy importantes. La familia αv - β3 es también muy

importante en tumores sólidos. Si se bloquea el tumor está controlado.
Reconocen RGD presentes en colágeno, fibronectina, laminina
Hay también interacciones integrina - citoesqueleto. (=Adhesiones focales como hemidesmosoma). En las
adhesiones focales, los dominios citoplasmáticos de la subunidad β se unen a la actina y modifican el
citoesqueleto.

Diferentes integrinas actúan con un mismo ligando; o diferentes ligandos. En diferentes tejidos producen
acciones diferentes también. (Hay muchas combinaciones posibles).

Integrinas actuando como cell-sustrato (Pág. 510 del COOPER)

Hay una placa de adhesión entre la integrina y el citoesqueleto (ya puede ser actina o FI). Cuando se
activan hay una reorganización de la célula.

Las integrinas median 2 tipos de uniones estables en las que el citoesqueleto se fija a la matriz
extracelular.
* Adhesiones focales: Los haces de filamentos de actina se anclan a las subunidades β de la mayoría de
las integrinas mediante asociaciones con otras proteínas, incluyendo α-actina, talina y vinculina.
Las fibras de estrés (que son haces de filamentos de actina entrelazados por α-actina) se unen al dominio
citoplasmático mediante asociaciones complejas en las que intervienen un cierto número de de proteínas
como talina, vinculina y otras más.
Por la cara exterior la integrina esta asociada a la fibronectina.

* Hemidesmosomas: La integrina α6 β4 une la lamina basal (laminina + colágeno) a los filamentos

intermedios (keratina) a través de la plectina. Típico de cells polarizadas.

NOTA: Hay un tercer tipo de contacto cell-sustrato que se considera un tipo de adhesión focal un poco
diferente. Es el llamado contacto focal. Dicho contacto une la célula con la matriz extracelular
directamente mediante la integrina.. Directamente al vidrio. Vinculina más actina.

La organización de los filamentos viene inducida por una GTPasa de la familia Rho. Se llama Rac.

La primera que se activa es la FAK (focal adhesión kinasa). Activa las proteínas de adhesión o los
contactos focales. Hay un cluster. Se unen los filamentos de actina (=forman fibras de estrés).
Las integrinas están unidas a la talina de manera antiparalela. CN-NC. Están unidas a vinculina y a fak
también. Cuando esta cambia la vinculina también hay una reorganización total. Se activan proteínas de
señal. Es un proceso muy complejo (Símil del dominó chino).
Las integrinas tocan de todo: regulan proteínas, cambios de señal, cambios del citoesqueleto...de todo..!!

Cuando in - out : Regulación de la actividad

Cuando out - in : Transducción de señal.

COMO SE ACTIVAN LAS INTEGRINAS ?

Si se rompe una subunidad citoplasmática están totalmente en el estado de máxima afinidad. Se entendió
como unas tijeras. Hay un complejo activador de integrinas IAC (suposición). Se observó que en todas
ellas había ciertos aa pauta. Se hicieron experimentos de mutagénesis (Problema 13)

Se observó que mutaciones puntuales en la región bisagra de la subunidad αβ induce cambios de afinidad
al ligando. (=Conclusión xunga).La FAK es el concepto de IAC. Se activa la FAC (=fosforilación en Tyr),
cambia de configuración la integrina; es decir, se activa, hay cambio de cationes MIDAS. (Ca +2 - Mg +2 )
y se reconoce al ligando. Es entonces cuando la señalización se da. Cuando el ligando entra hacia dentro y
la cell toma conciencia de lo que hay. (outside - in).

- Responsables de unión cell - cell. (CAM's)

- Integrinas
- Superfamilia de inmunoglobulinas. (Por su parecido a las inmunoglobulinas)
- Selectinas
- Cadeninas (unión homofilica)

- INMUNOGLOBULINAS (Superfamilia) (=MIRAR MNEJOR)

Presentan uniones homo/hetero.

Poseen un dominio característico.
Estructura en pliegues. Altamente conservados .70 / 110aa.
Son independientes de Ca+2.
Se adhieren a cell NO-inmunitarias. Algunas Ig unen cell-cell mediante integrinas.

* NOTA: Uniones Ig-integrina y Ig- proteglucano de tipo heparan. Son las 2 excepciones de unión
heterofílica que presentan las Ig.

Hay muchos miembros de Ig:

I-CAM: Presente en leucocitos. Estas se unen con integrinas. Unión transitoria para transporte.
V-CAM: Presentes en cell endoteliales
N-CAM: Presentes en el desarrollo de SN. Forman el tubo neuronal.
Existen 2 formas:
* proteínas transmembrana (2 elementos)
* Membrana externa. (1 elemento) Unión covalente. (N-CAM ----- N-CAM)
Los 20 tipos descritos tienen sitios de unión para heparan, para proteína G i para N-CAM.
Pueden formar uniones homo / hetero.

- SELECTINAS

proteínas de la membrana plasmática

Necesitan Ca+2 para la unión.
Unión heterofílica con oligosacáridos de la superficie de la cell.

Hay 3 tipos:

L-Selectina: Constitutiva en leucocitos.

E-Selectina: Inducida en endotelios.
P-Selectina: Inducida en plaquetas.

NOTA: En vegetales las lectinas reconocen residuos de glúcidos. Pequeñas regiones intracelulares.
Encontramos dominios EGF. Es un lectina - like domain.

Este dominio de lectina reconoce azúcares. Tiene que ser un tetrasacárido. Es: Ac.siálico + Galactosa +
N-Acetilglucosamina + Fucosa. (=Sial.lil - Lewis).El dominio de lectina reconoce esto. Sirve para activar
integrinas.

"RODAMIENTO DE SELECTINAS"

Uno de los papeles claves de las selectinas es iniciar las interacciones entre los leucocitos desde la
circulación a los lugares de inflamación tisular. Las selectinas median la adhesión inicial de los leucocitos
a las células endoteliales. Se pegan y se despegan. Van rodando !!! Tras esto se forman adhesiones más
estables, en las que integrinas de la superficie de los leucocitos se unen a moléculas de adhesión cell (I-
CAM). (=Diapenesis) Los leucocitos firmemente sujetos son capaces de penetrar la pared de los capilares
y entrar al tejido circundante, migrando entre las células endoteliales.

Las selectinas son dianas terapéuticas en la investigación de fármacos, anti-inflamatorios, anticuerpos.

Las antiselectinas inhiben el rodamiento de los nutrofilos con la supresión de la reacción inflamatoria. En
los linfocitos T pasa algo similar, aunque las selectinas en este caso están anclada a linfocitos T.

- CADHERINAS

Familia de glucoproteinas transmembrana.

Dependen de Ca+2 para hacer unión homofílica.
Tienen dominios de cadena
Suelen realizar estructuras muy especializadas (=unión específica)
Contacto Cell - Cell y señalización (out - in)

En la parte citoplasmática forman desmosomas. Encontramos cadherinas desmosomales (FI) y cadherinas

(con actina). Involucradas en el desarrollo embrionario y en el mantenimiento de la morfología epitelial.
En el desarrollo del embrión de los vertebrados promueven especificidad adhesiva.

Hay 3 principales miembros.

P - Cadehrinas: Placentarias. (Trofoblasto) DIBUJO
E - Cadherinas: Epiteliales. (Embrión)
N - Cadherinas: Nervioso. En el mesodermo.

Tienen 2 características:

- Expresión Diferencial
Así que se forma el tejido se empiezan a expresar. Esto es esencial para la diferenciación.

-Adhesión Cuantitativa
Cuanta más cadherina hay también es específico. Células con muchas cadherinas se "juntan" con células
con muchas; y células con pocas se "juntan" con células con pocas.

Las cadherinas presentan un dominio externo con 5 repeticiones de tipo tándem. En la parte más externa
hay un triplete de aa. (H-A-V). (Muy importante). El dominio intracelular carboxi está unido a cateninas.
Es aquí donde encontramos los filamentos de actina.

- CATENINAS

Se presentan en forma de dímeros. Hay 3 tipos de cateninas. ( α , β , γ )

En un ambiente deficiente de Ca+2 están flácidos. Cuando el Ca+2 aumenta se une entre las 2 subunidades
y hace que se presenten rectas. Pueden hacer uniones entre sí.

α: Asociada con la vinculina. F-actina

β:Asociada al extremo carboxi de las cadherinas. (Son importantes)
γ: Complejo formador.(La proteína P120 estabiliza al complejo)

La catenina β una vez fosforilada por una enzima ya no sirve. Va al proteosoma donde será degradada vía
ubiquitinización. La enzima se activa con receptores Tyr Kinasa. Si se inhibe la acción de la enzima
entonces la catenina β NO estará fosforilada. Normalmente está fosforilada.(MIRAR MEJOR)

UNIONES CELULARES
Modificaciones especializadas de la membrana plasmática entre 2 células vecinas. Hacen función de
anclaje, adhesión y reconocimiento (=señalización). Se clasifican según la superficie en zónulas, fáscias,
máculas.(Ver grafico)

Hay 3 tipos de uniones cell-cell:

A.- Estrechas: Ocludentes / impermeables.

Impermeabilizan la cell.
Función de barrera. Cinturón.
Presentes en epitelio intestinal, sistema urinario, riñones, etc...
Polarizan la cell. Bloquean el movimiento de proteínas lateralmente entre 2 cell vecinas.
Varias proteínas involucradas en su formación.

COMO SE FORMAN ?
Forman un "cosido". Polimerizan y hay como puntos de unión de membarana plasmática de células
vecinas. (=Forman un cinturón) Bloquean el paso intracelular; NO hay paso de moléculas.
Si hacemos un corte mediante criofractura encontramos Ocludinas, Claudinas, JAM

Forman unas 4 hélices transmembrana. Forman 2 loops extracelulares. En la cara del citoplasma
encontramos el extremo N-Terminal y el C-Terminal.
Claudinas: Forman loops diferentes, se unen las subunidades grandes con las grandes y pequeñas con
pequeñas. (Complementariamente tb), se unen a actina. (Zónula Ocludens). Las JAM también

Ocludina: Co-polimeriza con las claudinas. Solo existe paso extacelular. Algunas veces hay trasnporte
basolateral.

B.- Adherentes: De anclado

Realizan funciones de anclaje.

Unión cell-cell y cell-sustrato

Hay 4 tipos según el tipo de filamento al que se unen.

-Banda de adhesión: Unión con filamentos de actina. Vista anteriormente

-Contacto Focal: Unión con filamentos de actina. Vista anteriormente.

-Desmosoma: Unión con filamentos intermedios. Forman un disco que soporta el estrés mecánico (p.e: en
encías, piel, etc...). La placa de adhesión se une a los tonofilamentos (FI = citoqueratina) Las proteínas
que forman el disco son: Placaglobulinas y Desmoplaquina.
Las cadherinas asociadas son: Desmogleínas y desmocolinas. (cadherinas desmosomales)
Aparecen en la fase embrionaria.

-Hemidesmosoma: Unión con filamentos intermedios. Adhesión de células epiteliales a lámina basal. Hay
placa de adhesión que forma el anclaje con los tonofilamentos. Aparece asociada con la integrina α6 β4 .

NOTA COOPER: Los desmosomas son uniones entre células adyacentes, en las que contactos cell-cell
están mediados por proteínas transmembrana relacionadas con las cadherinas. En al cara citoplasmática,
los desmosomas se asocian con una placa densa característica de proteínas intracelulares, a la que se
anclan los filamentos de queratina. Estos anclajes están mediados por la desmoplaquina, un miembro de
una familia de proteínas denominada plaquinas que unen filamentos intermedios y los vinculan a otras
estructuras celulares.

Los hemidesmosomas son uniones morfológicamente similares entre las células epiteliales y el tejido
conectivo subyacente, en las que los filamentos de queratina se unen a las integrinas a través de otras
proteínas de la familia de las plaquinas. La plectina.

Los desmosomas y los hemidesmosmas unen los filamentos intermedios a regiones de contacto de manera
similar a como se une el citoesqueleto de actina a la membrana plasmática en las uniones adherentes y en
las adhesiones focales.

La plactina además de unirse a FI se puede unir a filamentos de actina, y a microtúbulos por lo que puede
proporcionar puentes entre estos componentes del citoesqueleto dando estabilidad mecánica a la célula.

C.- Comunicantes: en hendidura. (Tipo gap junctions)

La proteína en cuestión es la conexina. Se agrupa formando complejos. Forma una conexión. Una especie
de "tubito" . La cell vecina también forma éste "tubito". Estos tubitos se juntan y se permite el paso de
citoplasma entre éstas células. Pasan pequeñas moléculas como H2O, y otras cosas.

SEÑALIZACIÓN CELULAR
El mecanismo básico requiere un ligando (=señalizador) que se une a un receptor que convierte la señal
extracelular en una señal intracelular (Transducción + Molécula efectora)
Transducción: Preséncia de una señal extracelular produce cambios en el estado intracelular sin que la
señal pasa a través de la membrana.

Cascada: Permite la amplificación, la modulación, la distribución de la señal dentro de la cel. (Piezas de

dominio.)

Son 6 etapas:

1.- Síntesis del ligando

2.- Liberación del ligando
3.- Transporte del ligando
4.- Detección de la señal (Receptor)
5.- Respuesta (cambios celulares) (motilidad, proliferación, desarrollo,etc..)
6.- Retirada de la señal. Finaliza la señal.

CARACTERÍSTICAS

1.- Transferencia física de la señal del sitio receptor-membrana. (RECEPTOR)

2.- Transformación de la señal. Proteínas intermedias que realizan respuestas. (TRANSDUCTOR)
3.- Amplificación de la señal. Con poca cantidad ya hay respuesta. (EFECTOR)
4.- Distribución de la señal. Una señal da diferentes respuestas. (INTEGRADOR)
5.- Cada proceso se puede modificar o alterar. (MODULACIÓN)

Moléculas señalizadoras actúan a diferente distancia en el organismo. Los receptores tienen mucha
especificidad por un determinado ligando.

Hay 4 tipos:

- Endocrína: Hormonas. Se liberan y actúan en células alejadas.

- Paracrína: Actúa a nivel de células vecinas. (Fact. de crecimiento, procesos informativos.)
Neuronal: Sub-tipo de paracrína. (Neurotransmisores).
- Autocrína: Actúan en el mismo sitio.
- Dependiente de contacto: Una molécula señal anclada a la membrana se une a otra célula mediante un
receptor de membrana.

Una respuesta suele estar asociada a muchas señales. Las respuestas son múltiples, genéticas, reguladoras,
etc...
El mismo receptor en diferentes tejidos i/o diferentes receptores en el mismo tejido producen respuestas
diferentes.

Una amplificación masiva de 2º mensajeros produce una respuesta contundente.

Encontramos también hormonas gaseosas.

Producidas por el endotelio (liberan acetilcolina)
Difunden rápidamente a la musculatura lisa.
Relaja la pared vascular con el aumento del flujo sanguíneo y aumenta la concentración de O2 en órganos.

COMO SE INICIA LA CASCADA DE LA SEÑALIZACIÓN ?

Proteínas GTPasas Interruptortas.

Proteínas Quinasas (dependen del residuos)
Proteínas Adaptadoras
Ligando + receptor = respuesta.

4 Tipos de receptores.
- Ion chanel
- Membrana bound enzyme
- G-protein
-intracelular.....

CANALES IONICOS:

- Sinapsis SNC
-NT
-Gradiente electroquímico --> Proteínas de membrana
- Ca+2 : Altera muchas enzimas. Se considera un 2º mensajero.
- Conductividad de iones. (Na + , K+ , Ca+2)

PROTEINA G

Ligando + Receptor = Proteína G = Activa enzimas o canales iónicos. = Formación de 2º mensajeros.

Es una familia de receptores de membrana con 7 hélices transmembrana.

Proteína G: Une nucleótidos de guanina. Es trimérica. Tiene 3 subunidades α, β, γ. La subunidad α esta
unida a GTP. Se hidroliza el GTP.

La unión del ligando al dominio extracelular de estos receptores induce un cambio conformacional que
permite al dominio citosólico del receptor unirse a una proteína G, la cual se disocia del receptor y
transmite la señal a una diana intracelular, que puede ser una enzima o un canal iónico.
La subunidad α se une a los nucleótidos de guanina, que regulan la actividad de la proteína G. En el
estado inactivo, α se une al GDP formando un complejo con β y γ . La unión estimula la liberación del
GDP y su intercambio por GTP. La subunidad α unida al GTP, se disocia del complejo βγ . Tanto la
subunidad α unida a GTP como el complejo βγ, interaccionan con sus dianas para dar lugar a una
respuesta.. La subunidad αse inactiva por la hidrólisis del GTP unido a ella, de tal manera que se inactiva
(α - GDP) y se reasocia con el complejo βγ, quedando así listo para un nuevo ciclo.

Si actúa sobre canales iónicos va a K+ ó Ca+2 (=2º mensajeros) (NT-acetilcolina)

Si actúa sobre enzimas serán adenilato ciclasa (= formación de AMPc) o fosfolipasa C (= Ca+2 ).
Se pueden dar las 3 vías a la vez. Siempre hebra una respuesta a la vez.

*NOTA: La toxina del cólera no permite la hidrólisis de GTP - α. Las células no paran de secretar H2O.
Muerte por deshidratación. Formación de "excrementos aquosos".

REGULACIÓN

FOSFOLIPASA C (PCL)
FOSFATIDIL INOSITOL ( PIP2 ) -------> IP3 se une a RER citosol = aumenta Ca+2
DAG va a activar las protein quinasa C (Junto cn las Ca+2 del
IP3)

Las Protein kinasas C se activan ya sea por Ca+2 , DAG o por ambos

Liberación de Ca+2 a partir de RER mediada por IP3.

-Acetilcolina / músculo liso
- Trombina
 -Acetilcolina / pancreas

EFECTORES 2º MENSAJEROS

Adenilat ciclasa AMPc

Fosfolipasa C Ca + 2 , IP 3 , DAG
Iones Hiperpolarización / Despolarización

RECEPTORES CON ACTIVIDAD ENZIMATICA

- Asociados a Tyrosina kinasa

- Asociados con actividad enzimática intrínseca.
- Están asociados a factores de crecimiento --> Expresión génica, Crecimiento, proliferación, Cáncer

- Receptores: * Actividad enzimática intrinseca .La guanilato ciclasa. / Tyr- fosfatasa.

* Complejo con actividad enzimática (=kinasas)

Guanilato ciclasa ( Via NOx )

GTP-------GMPc------- PK-G relaja el músculo liso. Vasodilatación.

NOx

Asociados a Tyr-Kinasa intrínseca.

- No hay zonas catalíticas. No se asocian a proteínas G ni ion- channel

- Asociada a proteina tyr-kinasa NO receptora
- Receptor asociado a NRPTK. Unión a proteínas con actividad tyr-kinasa como FAK.

Tyr-Kinasa "a secas" ( Mas importantes.)

- Sufren autofosforilación
- Transfieren ATP a Tyr de otras proteínas
- Activan proteínas RAS

El receptor EGF actúa como una proteína tyrosina - kinasa, se postuló que la fosforilación de las tirosinas
de la proteina era un mecanismo de señalización esencial en la respuesta celular a la estimulación por
factores de crecimiento. Se incluyen receptores para EGF, NGF, PDGF, insulina y más factores de
crecimiento.

Estos receptores comparten una estructura en común: un dominio N-.term extracelular de unión al ligando
y otro dominio citosólico C-terminal con actividad proteína-tyrosina kinasa.
La unión del ligando al dominio extracelular de estos receptores activa el dominio quinasa citosólico,
dando lugar a la fosforilación del propio receptor (=AUTOFOSFORILACION) y de las proteínas diana
intracelulares, que propagan la señal indicada por el factor de crecimiento.
El primer paso del proceso de señalización en la mayoría de los receptores proteina-tirosina kinasa és la
dimerización del receptor inducida por el ligando. La dimerización conduce a la autofosforilación; las dos
cadenas se fosforilan la una a la otra.. Esta fosforilación supone:
- incrementa la actividad proteína kinasa del receptor
- genera sitios de unión específicos para que otras moléculas señal interaccionen.
Estas moleculas señal se asocian mediante un dominio de la proteína (-SH) que se une a péptidos
específicos del receptor que contengan fosfotirosinas.
PROTEINAS RAS

Las proteínas ras se unen a Tyr kinasa "a secas" a través de proteínas adaptadoras. De adaptadoras hay
muchas, hay sitios de reconocimiento SH2 y SH3 .
Las más comunes son : GTP, IP3, PLC, CAM's.

El 30 % de los cánceres está asociado a este tipo de proteínas. Es una proteína monomérica unida a GTP.
GTPasa interruptora. RAS asociada a metabolismo y proliferación. Cambian la expresión génica y la
actividad proteica.

Una vez activada la RAS se activa la cascada de MAPK's

COMPARTIMENTACIÓN CELULAR. TRANSPORTE.

Las proteínas se sintetizan de 2 maneras.
-En el citosol mediante ribosomas libres
- En el citosol mediante RER

También en la mitocondria.

Hay miles de proteínas. DONDE, COMO y CUALES van a 1 sitio determinado.!!

Gen ---> hn RNA ---> mRNA

hn RNA: Permiten que el RNA abandone el núcleo. Siempre con ciertas proteínas.

Tenemos una proteína. Supongamos hexoqinasa. Tiene su lugar de acción en el citosol.

Hay proteínas que tienen vida media altas y otras cortas. Esto va mediado por proteólisis programada.
(=UBIQUINONA). (=Complejo y proteosoma).

La hexoquinasa puede ser destinada a:

- Núcleo
- Mitocondria. (Al espacio intermembrana o a la matriz)
- Cloroplasto
- Peroxisoma

Evolutivamente el material genético de la mitocondria ha pasado al núcleo; la mitocondria ha perdido su

material genético. Sólo el 5 % se SUS proteínas las fabrica la mitocondria (=Cuestión de compartimentos)

En mitocondrias la proteína puede recabar en la membrana interna, externa, espacio intermembrana,

matriz .
En cloroplastos hay 6 destinos posibles. 3 membranas y 3 espacios.
En peroxisomas encontramos 2 destinos
En el núcleo 1.

En total son 13 destinos posibles.

El péptido señal es reconocido por una proteína llamada SRP. Se une e impide la traducción. Sólo libera
la proteína cuando el ribosoma se une a un receptor. Se produce una translocación post-traduccional
El translocador SEC 61 queda allí.

Encontramos un transporte anterógrado (que sale) y un transporte retrógrado (que vuelve).

TIPOS DE TRASNPORTE
- Transporte controlado. "Gated trasnporte"
- Transporte transmembrana
- Transporte vesicular. (Saben de donde salen y donde van) "Tráfico vesicular"

EXPERIMENTO:
Hipótesis señal. La señal la lleva la misma secuencia de proteínas

FUNCIONES DEL NUCLEO

- Guarda el material genético

- Expresión genética
- Ensamblaje de ribosomas (=NUCEOLO)
- Replicación del cromosoma.

Funciones del núcleo celular.

CROMATINA: Conjunto de ac.nucleicos (DNA++, RNA+) y proteínas que forman el llamado

cromosoma. El cromosoma como tal existe siempre en forma descondensada. En la mayoría de nuestras
células hay cromatina de éste tipo. (Cromosoma disperso).
En cromosomas metafásicoas hay 2 cadenas de DNA. (G2 / M)

MATRIZ NUCLEAR: Lo que permanece en una matriz histológica después de haber extraído todo lo que
podamos mediante métodos químicos. Gradiente de NaCl, detergente, proteasas, Dnasas, Rnasas. Lo que
queda és la matriz nuclear.
És una malla proteica que sustenta todos estos elementos. Se trata de una malla extremadamente
insoluble; és por eso que no se puede estudiar.

EXPERIMENTO:
Se intenta solubilizar matriz nuclear de pacientes con lupus eritomatoso sistémico. Es
una enfermedad autoinmune. Es un "chollo" para el investigador. El paciente fabrica Ac para
TODAS las proteínas del cuerpo. Hay sonda para todo!!!. Un ejemplo también es la enfermedad
de Croon. Estos pacientes producen Ac que atacan al duodeno. Provocan una oclusión del
intestino. El Croon se reproduce!!.

El echo és que un Ac de lupus eritomatoso da positivo para la matriz nuclear.

Se engancha a una proteína llamada DNA topoisomerasa II. Deshace tensiones del DNA. La
matriz nuclear tiene funciones de éste tipo. Hay un conjunto de proteínas implicadas en el DNA,
ya sea para su síntesis, posición, etc...motivos estructurales y funcionales.

Láminas nucleares. Son como filamentos intermedios, siempre anclados a la membrana nuclear. Forman
mallas.

El segundo elemento que se diferencia es el complejo del poro.

El tercer elemento son fibras más internas.

NUCLEOLO (=de fibroblasto)

Los puntos oscuros son nucleolos.

Encontramos 3 grandes elementos:

-Fibras.
-Centro fibrilar. Componente con más densidad
 -Matriz. Componente granular.

En el nucleolo se fabrican ribosomas. Complejo grande formado por 2 sub-unidades (=polipéptidos).

Sale RNA entra proteína al núcleo para formar ribosomas y vuelven a salir (=MIRAR MEJOR).
Al RNA del ribosoma se le llama RNAr . Hay 4 tipos.

3 de ellos se forman a partir del mismo gen. (28 S, 5'8 S , 18 S). Gen de 13 mil nucleótidos.

EXPERIMENTO.
Hacemos un marcaje con un trazador UTP-35 S. Se incorpora UTP en el RNA que se sintetiza
en el momento .Seguidamente hacemos una autoradiografía. Sumergimos la sección en una
emulsión de plata. (El revelado es en oscuro.) Está bien pensado. (=MIRAR MEJOR).

* NOTA: Conforme más afuera del núcleo más elaborado está el rRNA. Al borde del nucleolo ya está
maduro.

DNAr: Los ribosomas NO tienen DNA. El DNAr es la secuencia del DNA del cromosoma que codifica
para los RNA del ribosoma. El número de copias es alto. (miles). Se encuentra en diferentes cromosomas
en tándem (=sec. NOR). Cada copia forma un RNA de 45 S que es cortado formando los 3 descritos
anteriormente.

* NOTA: Al finalizar la mitosis aparece el centro fibrilar. Aparecen tantos como genes NOR hay. Después
aparece el componente fibrilar denso y posteriormente el punteado de ribosomas. Esto es la manifestación
de un proceso biológico.

La secuencia 45 S (13.000 pb) es la secuencia organizadora de nucleolos. Se forma un centro fibrilar,

luego se forma el componente fibrilar denso y luego el granular.
Los 13.000 bp son necesarios y suficientes para formar un nucleolo. En nuestro genoma hay miles de
éstas. En cromosomas diferentes.

COMPLEJO DEL PORO NUCLEAR (=Modelos variantes)

- Lado citosólico.
Proteínas citosólicas

- Lado nuclear.
Proteínas fibrosas que se anclan a la lámina nuclear.

En 1 núcleo puede haber una concentración de poros muy alta; de echo en oocitos de Xenopus la
concentración de poros es altísima .Los anfibios se reproducen en el ambiente, por eso el oocito está
cargado de materiales de reserva para el embrión. Todo el alimento lo produce ella.

Se estima que 120 Mda pasan a través del núcleo.

WGA: Aglutinina del gérmen de trigo. (=inhibe el transporte). Es una lectina. Se une a carbohidratos. Hay
lectinas también en animales. (en plantas muxo!!). Presenta algunas nucleoporinas. Secuencias de
carbohidratos reconocidas por WGA.

También pueden entrar libremente. Las fibrilares de 20 Kda , las globulares de 40 Kda. Transporte activo
para el resto.
*NOTA: Las globulares pasan mejor que NO las fibrilares. Como es eso ??! De echo el complejo hace un
codo. Son dependientes de Ca+2. Cuanto más Ca+2 más se abren.

TRANSOPORTE DE ENTRADA AL NUCLEO

- Xenopus
- Cultivo celular
- Sistemas libres de cell ("in vitro"). (símil relojero).

EXPERIEMENTO 1: Iidentificación de la señal NLS

Trabajamos con células en cultivo. Microinyectamos (muy costoso) al citoplasma o al núcleo

proteínas completas o delecionadas marcadas con un fluorocromo.

Concretamente se realizó con la proteína Nucleoplasmina (NP). FITC és el fluorocromo (verde)

Inyectamosen el citosol

NP-FITC: Va al núcleo. Control positivo

Pyr-Kinasa - FITC: Se queda en el citosol. Control negativo.
NP-FITC (C-terminal degradado): Se queda en el citosol.
NP-FITC (N-terminal degradado): Va al núcleo.

De éste experimento se deduce que el extremo C-terminal es el que da la señal de que la

proteina vaya al núcleo. De todas maneras existen 2 hipótesis:

A) Se retienen en el núcleo cunado pasan

B) Viene una proteína que la reconoce y la lleva al núcleo. Existe un receptor.

EXPERIMENTO 2 (MIRAR MEJOR

El antígeno T grande del virus SV40 no necesita de replicación celular. El mismo se replica.
Aquí vemos que la proteína se va al núcleo. El T grande NO entra nunca al núcleo. Este residuo
de 128 es clave par ala señal; redirecciona al antígeno T grande al núcleo. Esta secuencia es
necesaria y suficiente para que vaya al núcleo.

CUAL ES EL RECEPTOR NLS ?

* Células permeabilitzades con digitonina .(=orificios) Sucede que pierden ATP

* ATP ponemos nosotros
*NP-FITC
* Extracto células de Xenopus. (Se añade para compensar gradientes iónicos)

Para observar donde está el marcado se hace uso de el microscópio confocal el cual sólo ilumina un plano
de la célula. Disecciona la célula por planos.

EXPERIMENTO 1:

Cel.permeaibilizadas + NPI + ATP + oocitos: Aparece dentro del núcleo.

Cel.permeabilizadas + NPI + ATP: Se queda en el citosol

Hay algo que compensa los gradientes. Productos solubles que son importantes en el citosol. Es como un
citosol de recreación.

El citosol de Xenopus contiene algo que nos interesa. Separamos el citosol en 2 fracciones, la fracción A
(FrA) y la fracción B (FrB)

FrA= Marca la periféria nuclear

FrB = No marca nada
FrA, FrB = Hay transporte hacia el interior
FrA, lavamos, FrB = Hay transporte hacia el interior.
FrB, lavamos, FrA = No hay transporte.
Hacemos algo similar con NP y le añadimos BSA-NLS

BSA-NLS: Desplaza NP. Escoge a la más abundante

BSA-revNLS. No desplaza; es la misma composición pero NO es señal de transporte.

* NOTA: la entrada es dependiente de ATP. La FrA se denomina importina. La FrB és una proteína
llamada Ran. La importina NO sufre tantas modificaciones post-traducionales como es de esperar. La
recombinante está activa también.

Con el citosol completo; el transporte aumenta.

Con el citosol empobrecido (2.5 µg/ml) también hay transporte; pero menos.
Existe algo que hace que aumente mucho la eficacia del proceso.

Hay algo en el citosol que hace que el sistema sea más eficaz. Plantean una hipótesis. Esta estima que en
algún momento hay una unión con la importina.
Se realizó una inmunoprecipitación de Xenopus. Realizaron también un Western Blot.

RECEPTOR NLS
Es citosólico. Son 2 proteínas. Una de 60 Kda, la otra de 90 Kda. La 60reconoce la señal. La de 90 ayuda
(proteína β). La entrada la hace Ran. GTPasa pequeña.

Hay otra señal que es la M90 (Reconocida por Transportina)

Es propia de proteínas que salen i entran.

NFAT-GFP (el GFP es un marcador)

NFAT está en el citosol. Se mueve por niveles de Ca+2 . Si aumenta el Ca+2 citosólico, la proteína se va al
núcleo. Si disminuye vuelve al citosol. Es un factor de transcripción.

QUE ES RAN?

Es una GTPasa pequeña. Ver esquema....

Ran GEF: Solo en el núcleo.

Ran GAP + Ran BP1: Solo en el citosol.

DIBUJITO!!!

TRANSPORTE DE SALIDA DE PROTEINAS.

Trabajamos con células híbridas. Células de Xenopus y Hela.

Se detecta la forma humana de proteínas nucleares.
Human RNP C (NLS)
Human RNPA1 (M9) (es como lanzadera; entra y sale)
Proteína que entra y sale. Se ve dentro de Xenopus, del núcleo de Xenopus. Esto demuestra que entran y
salen y que pueden cambiarse de núcleo dentro de una célula híbrida.

Existen 3 señales para la salida del núcleo.

NES (Nuclear Export Sec)

M9
KNS
Son familias de importina β. Se conocen 14 miembros en levaduras y 22 en animales.
La subunidad 60 es α
La subunidad 90 es β. No és receptor. Aumenta la eficacia del proceso. Actúa junto con α. Se dice que es
un Co-receptor.

El responsable de la unión a Ran es el co-receptor.

MECANISMOS DE SALIDA DE RNA

Los RNA's NO tienen mecanismos de salida. La señal la aporta una proteína que se une a ellos.
Cada tipo de RNA (tRNA, rRNA, mRNA, catalítico...) utiliza una ruta distinta; están bien estudiados.
Todos los RNA abandonan el núcleo con proteínas que hacen de puente con otras proteínas distintas.

HIV RETROVIRUS.

El transcrito virial NO puede salir del núcleo. Forma un transcrito más pequeño. Éste sí que tiene una
señal. Abandona el núcleo. Este fabrica unas proteína llamada REV. REV tiene una secuencia NLS. Entra
dentro del núcleo .Tiene 3 señales.
Que entre al núcleo
Que salga del núcleo.
Que procese el RNA del HIV
Se une a una región que se llama de respuesta a REV. (RRE= rev response element). Rev se engancha
aquí. Es exclusiva de los transcitos HIV. Tiene una señal de trasnporte celular. Ahora, pues, tenemos el
transito total que SI que sale. Es ahora cuando infecta. Si rompemos el ciclo este que sólo es exclusivo de
virus tenemos una diana !!! (=Hay que atacar contra aquí). Actualmente existen 3 tratamientos en 1 para
el sida.

PROTEINAS QUE INTERACTUAN CON per-mRNA y RNA

hnRNP: Núcleo RNA y proteínas asociadas; unas 9.

Non-hnRNP
SR: Implicadas en el reconocimientos exón-intrón. RAA + 1 o 2 proteínas. Pero estructuralmente
diferentes. Pasamos a un RNA que NO tiene intrones y presenta una cola polyA. (=RNA maduro).
La señal de transporte se une cuando en el RNA NO hay señal SR. (es lógico)

PROTEINAS CITOSOLICAS

Como se pliegan las proteínas cuando se hacen? Como se modifican ? Como se degradan?

Entre el 15-20 % llegan a la configuración final sin ayuda. Pero gastan ATP; es mucho mejor ayudarlas.
Hsp= heat shockproteins.
Se expresan con un xoc térmico. Hay que ir con mucho cuidado. Hay que aumentar la temperatura pero
poco. NO hay que llegar a la desnaturalización.

Hsp son ATPasas. Se unen a polipéptidos que NO están totalmente plegados. Los despliega. Se llega a un
estado más abierto para ver si él sólo se puede plegar bien.
Lo que se intenta es evitar que cuando se forma se pliege. Hasta que la proteína NO está totalmente
formada no saltan. Cuando saltan hacen que se pliegen de la forma nativa.
Las chaperoninas forman un barril de 2 anillos. Complejo Gro. Si hay un xoque térmico “groel” pasa de
un estado "tight" a otro "relaxed".Consume ATP.

MODIFICACIOPNES POST-TRADUCIONALES

Facilitan el plegamietno correcto. Se han descrito más de 100 modificaciones. Hay reversibles e
irreversibles.
- Glucosilación: Irreversible. Se añaden hidrocarburos. (Proteoglucanos). Es necesario que primero se una
al proteoglucano y luego a su receptor. Los factores de crecimiento se enganchan y aumentan su
capacidad. Siempre la glucosilación tiene lugar sobre una Ser ó Thr. Tiene 2 finalidades esta
modificación:

*Interaccionar con otras moléculas

* Facilitar el plegamiento.
- Acilación ??: En ras. Se le añade un ac.graso a la proteína. Esta se ancla en la membrana plasmática de
manera correcta. Una forma de RAS oncogénico tiene una mutación en la cola del acido graso y hace que
no se ancle en la membrana.

VIDA MEDIA DE UNA PROTEINA

Degrada todo lo que está mal. "Data maining" (Rollo asegurançes). Puro trabajo descriptivo. Hay una
discrepancia.

Posición 1 estan muy por debajo de lo esperado. En posición final es más elevado de lo normal.

DIBUJO

Se descubrió que proteínas que tienen aa como Arg, Lys, Phe, Leu, Trp en posición primera; tienen una
vida corta. Si hacemos la prueba y ponemos una actina con un aa de estos en posición primera se observa
que la actina pasa a tener una vida corta. Esto es una señal. Son AA desestabilizantes. !!!

Otra señal son las ciclinas. Son proteínas que se manifiestan al final de cada una de las fases del ciclo
celular. Son de vida corta. Las señales PEST (degradación proteolítica) provocan una vida media/corta.

VIA PROTEOSOMAL: Sistema de degradación proteolítico. Tanto en el citosol como en el RE. El

material a ser degradado es marcado por un polimero de ubiquitina y lo degrada en forma de péptidos
diferentes y de peso molecular bajo. Este proceso de añadir Ub (76 aa) lo hacen 3 enzimas. La ubiquitina
se llama así porque es ubicua; es decir se encuentra en todos los lugares. A veces se engancha con
histonas. Las polimerizaciones son de 30 ó 40 moléculas ramificadas.

Las enzimas son E1, E2, E3. La E3 engancha la cola de Ub al sustrato. Las otras dos añaden Ub. Es
lógico pensar que de E3 hay muchas diferentes; y de echo así es. De E3 se conocen unas 30 diferentes.
Cada una reconoce un sustrato diferente.

PROTEOSOMA: 700 Kda Cilindro hueco. 2 sub-unidades de 19 S cada una. Es algo más pequeño que un
ribosoma. Se conocen inhibidores. Cuando falla este proceso hay deficiencias. Pej: Alzheimer. Se
acumulan placas de β-amiloide. Se forma un péptido de degradación insoluble. Normalmente se degrada
bien y ya esta. A veces se acumula en forma de lámina β y forma agregados. Forma placas que son la base
de la patología.

CICLO VITAL DEL VIRUS DEL PAPILOMA

Provoca un tumor benigno. Las células de G0 infectadas tienen la proteína P53 activa. La P53 bloquea la
replicación de DNA. Es un antioncogeno. Reduce la probabilidad de que entren en replicación.
Dicho virus cuando infecta va al núcleo. En el núcleo activa "Early gens" y fabrica E6. E6 es una proteína
de vida media corta; contiene aa desestabilizantes. Tiene mucha afinidad por P53. Desde el momento en
que se crea ya se une formando el complejo E6-P53.

La proteína E3 es la encargada de enganchar la cola de Ub. Viene E3 y a la hora de marcar a E6; marca
alostearicamente a P53. LIADA !!!. La célula entra en replicación. Se ha de dividir. Forma un tumor
benigno.

RETICULO ENDOPLASMATICO
Encontramos 2 orgánulos en la célula. Tienen un aspecto similar dentro de la célula. Son estructuras muy
dinámicas .

RER: Retículo Endoplasmático Rugoso.

REL: Retículo Endoplasmático Liso.

GEN --> hn RNA --> m RNA --> RER

El mRNA va a un ribosoma anclado a la RER. La proteína entra hacia adentro. Vía traslocación por poro.

Péptido señal: Van a dentro del RER de una manera muy efectiva y eficaz.

CUAL ES LA SEÑAL DE QUE VAYA HACIA RER ?

Diferencia de PM. 35 aa del extremo amino. Entra en la ruta de secreción; a estos 35 se les llama péptido
señal.

RECONOCIMINETO DEL PÉPTIDO SEÑAL

Sistema de traducción "in vitro" de mRNA específicos.

Microsomas: NO existen "in vivo". Es un artefacto creado. Se producen al lisar la célula. Los aislamos a
través de la centrífuga y de un gradiente de densidad.

Microsomas lisos(ML): Golgi, Endosomas, REL

Microsomas rugosos (MR): Vesículas del RER. Presentan ribosomas en la superfície.

EXPERIMENTO 1

1.- MR + tRNA + ATP + mRNA

2.- MR lavados + t RNA + ATP + mRNA
3.- MR + tRNA + ATP + mRNA + lavado extraido

Los MR se lavan con salina. Se extrae lo que NO está unido covalentemente. Hay algo en el lavado que
proporciona una síntesis óptima.

Pancreas exocrino= Aumenta fuertemente la síntesis proteica .Contiene también enzimas hidrolíticas,
etc...
Pancreas endocrino= Insulina y glucagón
.
EXPERIMENTO 2

A: sin nada
B: con proteasa
La proteína queda protegida. Si esta fuera como en el caso 2, con la proteasa se degrada. Con SDS se la
come también.

Con el gradiente salino se ha extraído al partícula SRP.

Toda la proteína se sintetiza en el citosol. Sino esta NO se detiene. NO entra en RER.

El Translocador de RER és SEC 61. Actualmente hay 70 SEC's. Hay unas 70 fases críticas en el proceso
de secreción de proteínas .En el 3' NO hay codón de paro. El ribosoma queda unido al RER. Se para la
síntesis de manera urgente. (=MIRAR MEJOR)

A esta proteína se le da el nombre de SEC 61. (Grupo de Complementación)

COMO DETECTAR EL TRANSLOCADOR SEC 61?

Mutamos un mRNA y ponemos una Lys (p.ej) con un grupo fosforeactivo. Técnica entrecruzante
(Crosslink). Establece enlaces covalentes. Luego purificamos el mRNA y encontramos todo aquello que
está enganchado a él.
De Rutas SRP hay 2:

A- Ruta SRP dependiente: Ya la sabemos. A medida que se añade un aa la proteína entra.

B- Ruta SRP independiente. Es un mecanismo minoritario en nosotros.

La ruta SRP independiente se estudió en el pre-profactor α. Proteínas de levadura que NO tienen péptido
señal. Su síntesis es citosólica. Entra a través de SEC 61. Permanece unida a chaperonas una vez
sintetizada. Estas la presentan a SEC 62-Sec 63. Estas a su vez la presentan a SEC 61 y és ésta última
quien la hace entrar. !!

SRP-Dep NO hay en bacterias; solo en eucariotas. Las SEC 61, 62 y 63 si que hay. (Rollo reminiscéncia)
Se están dejando.!!

En la ruta independiente la proteína entra por chaperonas de dentro del RER. PnP = GRP 98.

*NOTA: Existe la hipótesis del "trinquete térmico". A la que cierta longitud de proteína que entra se une
un chaperona. Ya no sale. Esto consume ATP. Se van uniendo.!!

Existe también la hipótesis de "trinquete cross-bridge". Se une i ella estira de la proteína cambiando su
configuración. Consume ATP. Una vez dentro queda en el lumen o en la membrana.

El péptido señal SRP no es eliminado. Aquí SRP si es eliminado.

N C

C N

Adición de glucanos ricos en manosa: N-Glucosilación sobre residuos de Asn - Thr. Siempre tienen la
misma forma
Tunicomicina= No se pliegan bien las proteínas. En Asn la N-glucosilación és muy importante. Hay una
eliminación de 3 glucosas. Ricos en manosa. Ahora abandona el RE (=El último es irreversible). La
proteína se determina si esta bien plegada o NO.

Disulfuro isomerasa ==> Cataliza puentes disulfuro en el interior de RER. Dominios citosólicos NO
tienen puentes di-sulfuro.Solo en el exterior de la célula hay formación de puentes disulfuro.
CONTROL DEL PLEGAMIENTO

Dos proteinas. Calnexina (Transmembrana) y calreticulina (Soluble). Se bloquean con brefeldina A.

Tienen dos actividades
1.- Actividad lectina: Reconocen el glúcido. Sólo a 1.
2.- Actividad chaperona. ATPasa que se une y consumiendo ATP abren la proteína para que se plieguen
mejor.

SISTEMA SENSOR

Receptor Tyr-kinasa. Se forma el dímero. Si hay un aumento de ??????? No hay dímero. Si se liberan , se
autofosforilan y se dimerizan. !! Al dimerizar-se dan la señal. UFPR

Las proteínas mal plegadas o erróneas se degradan vía proteosomal (Ubiquitinizción).

Son devueltas por el mismo canal por el que han entrado. SEC 61.llegan al citosol y allí se les añade la
cola de Ub y etc.....

Cuando se utilizan los lisosomas para degradar hablamos de autofagocitosis.

TRANSPORTE ENTRE EL RER Y AG

El conjunto de todos los dictiosomas es el AG. Los dictiosomas o cisternas más cercanos al núcleo son las
"cis"; las más exteriores son "trans"

1.- RE
2.- AG
3.- Membrana nuclear.

El AG está próximo al RER. Entre RER y AG hay muchas vesículas. Cada una de las cisternas contienen
diferentes enzimas, las membranas también; cada una presenta su tipo de enzimas. No es lo mismo en
"cis" que en "trans"

CUALES SON LAS ETAPAS DEL TRANSPORTE?

Para estudiar esto van muy bien un tipo de proteínas denominadas "spike" (proteína G) de las cubiertas de
ciertos virus.

Se utilizan Criométodos. Si la Temperatura disminuye hay un bloqueo. A 15º C hay vesículas que NO se
pueden unir al Golgi. Se observan vesículas como Coatómeros.

Sucede que hay 2 tipos de transporte. El transporte retógrado y el anterógrado

El anterógrado está inhibido por brefaldina A.

El transporte retógrado es ATP dependiente como es lógico. Se bloquea porque NO hay ATP.
Nocodozol = Despolimeriza Mtúbulos.
Se dispersan los dictiosomas. El retógrado es microtúbulo dependiente. La brefaldina tiene un efecto
reversible. El anterógrado también és MT dependiente.
Se utiliza un tripéptido Asn-Tyr-Thr que es señal de glucosilación.En la via de secreción hay un flujo
masivo.

MECANISMOS DE RETENCION DE PROTEINAS EN RER

1.- Unión a Bip
2.- Egastina
3.- KDEL
4.-KKXXX

La señal KDEL del extremo C-terminal hace de retenedor. De hecho se cree que es una señal de
retención. Si NO está, la proteína se excreta; NO es retenida.

EXPERIMENTO

Cogemos una proteína que sabemos que se excreta (=lysozima).

Obtenemos 3. En levaduras mediante proteínas recombinantes y Western Blot.
Hay un control; se observa una especificidad que es cnt en todos los pocillos.

La proteína se ha sintetizado pero está retenida KDEL.

CUAL ES EL RECEPTOR KDEL ? DONDE ESTA?

Se sobreexpresa una proteína llamada α pero con KDEL. La célula se le escapa bip. Ac contra Bip.
La sobreexpresión de α satura los receptores y se les escapa Bip. Todo se escapa.

Erd1: Efecto pliotrópico.

Erd2: Proteína de mamíferos mutada. RER y Golgi. Gen que codifica para el receptor de la señal KDEL.
A más copias del gen; más capacidad receptora hay! (Solo cuando hay señal)
Erd2 codifica para el transporte de RER (=específico)
KDEL capta plicones.

Aparentemente la señal está en la secuencia trasnsmembrana transporte hacia el interior del Golgi.
Avanzada = Trans
Atrasada = Cis

Hipótesis de compartimentos estables (=cisternas)

Hay resultados que NO apoyan ésta hipótesis.

Hipótesis de maduración de cisternas. (Hipótesis buena)

Hay un intercambio entre cisternas. Van y vienen las vesículas. Hay un movimiento dinámico. Las
cisternas van madurando !!
Van evolucionando de "cis" a "media" y luego a "trans" siempre dejando atrás la misma composición
enzimática. (CURIOSO)

TECNICA DEL FRAP

Iluminamos una zona marcada (=quemada). Vemos si es móvil o NO. Nos lo indica el tiempo de
regeneración de la fluorescencia.
TRAFICO VESICULAR
Kiss & run
Proteínas que fabrican vesículas

* Clatrina : RER – cis

* Coatomero I: Intragolgi – retógrado RER-cis
* Coatomero II: Salida del retículo

Son proteínas de cubierta que se enganchan y deforman la membrana. Cada proteína tiene sus proteínas
específicas.

Hay diferentes proteínas (y GTPasas)

Tenemos 6 fases:

1.- Class.
2-. Vesiculación
3.- Desprendimiento
4.- Direccionamineto
5.- Reconociemiento
6.- Fusión

Proteínas se enganchan; clatrina, complejos adaptadores

Coatomero 1: α ,β , C
Coatomero 2: Sec 23, Sec 24, etc..

Clatrina: Unidad básica de la cubierta. Al polimerizar se forma la cubierta. 50 – 100 nm de diámetro.

Elemento básico 6 polipéptidos. Són 3 cadenas pesadas y 3 cadenas ligeras. Presentan una disposición
hexagonal.

La clatrina tiene 2 situaciones:

1.- Polimeriza en la membrana
2.- Soluble siempre bloqueada por chaperonas 70. Proceso por el que libera el trisquero. Nunca se une a
las membranas sola. Se une porque hay algo que se une antes y recluta moléculas de clatrina. Esto es un
adaptador, formado por 4 polipéptidos. Se han descrito 4; actualmente hay 9 diferentes.
Reconocen la membrana y la clatrina (=Mickey Mouse)
La cara reconoze la membrana. Las cejas interaccionan con la clatrina. Por cada 1 adaptador encontramos
1 clatrina.

Miembros de la familia de Stoned B

Un mismo adaptador se une a diferentes clatrinas (=Polifacetidad)
Dinamina: Proteína contráctil. Utiliza GTP. Es citosólica. Un mutante termosensible (ts) se manifiesta en
clatrinas distintas. En otras NO. La dinamina NO funciona en determinadas condiciones. En condiciones
permisivas si que funciona. Son mutantes muy útiles.

Dinamina es vital; por eso han de ser termosensibles.

GTP αs= Es un análogo NO hidrolizable de GTP. Se bloquea.

Ac contra dinamina. Marcamos el Ac con Au coloidal (miramos por microscopio óptica)

Son bolas de 5nm/10 nm acopladas al fragmento constante del Ac. La dinamina está en el cuello.

VESICULAS COP I

Aisladas “in vitro”. Forman el llamado coatormero. Se conocen muchas: α , β ,γ ,δ ,ε

Son sistemas de transporte intra golgi. (=Hipótesis de maduración de cisternas.)

ARF

ADP – ribosilation factor. Es una GTPasa pequeña. Encontramos 2 estados:

ARF – GDP: Es citosólica.

ARF-GTP: Está unido a la membrana.

Hay 6 ARF. El coatomero es uno de ellos. Madura en un tramo determinado de la ruta de transporte.
Esta GEF se llama Sec 7
ARF en la membrana recluta coatómero. En la vesícula se une a GAP específica (de ARF). Provoca que
GAP se solubilize. El coatómero se libera. La unión de coatómero es dependiente del estado de ARF.
ARF se engancha siempre que de GTP se pase a GDP. Hay que mirar la relación GEF/GAP

Periodo ventana: Si durante ese periodo NO se forma la vesícula; ya NO se formara. Si se ha formado

perderá la cubierta de coatómero.

VESICULAS COP II

Se aíslan a partir de experimentos de transporte “in vitro·. Son SEC 23 , SEC 24, Sec 13,-Sec 31 que
forman un dímero. Sec 16 también.
La polimerización de estas proteínas forman la cubierta. La entrada está regulada por una proteíina
GTPasa del tipo ARF (Pero NO de la misma familia) Sar 1 tiene su GEF. La GAP específica es SEC23.
La migración NO suele hacer más de una micra. El Golgi está entorno al núcleo. Puede haber entre 190 y
15 micras. La migración és muy corta. Entre RER y el golgi hay compartimentos que reciben el nombre
de compartimentos intermedios del RER.

FORMACION DE AGREGACIONES

Se unen a MT y se desplazan de la cisterna trans a la cisterna cis del Golgi. El ensamblaje es muy similar.
El reconocimiento se hace ya que la vesícula tiene su receptor y busca su complementario. Si hay
reconocimiento se funcionan. Cada sistema tiene su “esnore” vesicular y su “esnore” diana.
(complementaria)

Intervienen 6 elementos:
Snore V
Snore T
Rab: GTPasa pequeña
SNAP 25: Proteína asociada
NSF: N-etilamida. Hace de factor sensitivo
SNAP-γ: Sitio de anclaje

FUNCION DE Rab
Rab actúa sobre un efector que bloquea el Snore T. Esto hace que suelte la protección ; entonces si se
reconocen se fusionan ; si NO se vuelve a proteger. La forma GAP desacopla a Rab y PUM… !!!(Ya
está.) De moléculas GAP hay muchas.

FUSION

Hay 2 tipos de fusión :

-Endoplasmática: Entre membranas que interactúan por la cara citosólica
-Ectoplasmática: Por monocapas exteriores (Entrada del virus a la célula)

Para que se fusionen; los lípidos se mezclan. In vivo es necesario formar un complejo (=poro hidrofóbico)

En levaduras 2 grupos de 5 subunidades se unen y se forman un canal!!

Trabajo mecánico: Dos proteínas se enrollan excluiendo el agua y se fusionan. Hay proteínas que tiran de
ellas.(Como los virus). Funciones ectoplásmicas. Proteína G.

ENDOCITOSIS
Molécula de hemoglutinina. Estructura de pétalos de flor. Se abren; hay cilindros contráctiles. Aumenta la
hidrofobicidad. En el Ph crítico se abre la cápsula y estas membranas se aproximan y se fusionan.

El receptor SNARE hace lo mismo; aproxima membranas.

SNAP 25 está allí; es determinante; si se muta; la fusión NO se da!!

LISOSOMAS
Mitotraquer ===> Colorante de la mitocondria. (=verde)
El colorante de los lisosomas es rojo. Se observa teñido todo el citosol.
Los lisosomas són estructuras que captan orgánulos (incluso bacterias) y mediante las hidolasas los
degrada. Se los "come".

Tienen 3 elementos:
- Membrana con alta concentración de trasnportadores
- Contienen muchas hidrolasas, proteasas, etc....
- Hidrolasas funcionan con Ph ácido. (Bomba de H+ ) (alta [ ] transportadores)

Tienen aspectos diferentes en función del material a degradar. Existen mucha nomenclatura con respecto
a ellos.
- Fagocitosis: Degrada material extracell enorme!
- Endocitosis: Degrada material extracell de PM bajo!
- Autofagocitosis: Suicidio
- Autofagosoma: En condiciones de stress.

*NOTA: Cuando se degrada a ella misma su masa celular sirve para utilizarla como energia o como
productos (=sustratos).

Las enzimas proceden de AG. Sigen una ruta de secreción. Existen enfermedades genéticas lisosomales.
Afectan a procesos vitales .NO hay un gen que codifique para hidrolasas características. Cuando esto
sucede hay toxicidad. Muerte de tejidos. Hay una enfermedad que consiste en que NO se tienen
hidrolasas. Se llama "i cell desease".

CELULAS "I CELL DESEASE" (ICD)

Consiste en que NO hay un grupo fosfato en una manosa del residuo Asp. Las hidrolasas se sintetizan
pero NO se mandan al lisosoma; sino que van a parar al citosol.

Se añaden fosfatos, en "cis" golgi y en "trans" golgi. Uno reacciona en el "cis"; y el otro en el "trans". El
primero se añade mediante la N-acetil-glucosamina-P-transferasa. Si esta mutado NO se añade manosa en
el 6-P
En el "trans"golgi hay reconocimiento de ésta manosa 6-P y hace que vayan al lisosoma. La primera
enzima la marca como lisosomal!

Endosoma tardio + enzimas = lisosoma.

Disección genética en levaduras. La vacuola es un lisosoma en yeast. Transporte de carboxipeptidasa Y.

(F(x) del lisosoma).
Se sintetiza en el retículo. El péptido de activación se elimina en el lisosoma. (=preacaución). Solo se
activa en el compartimento final.

Hay una mutación en VPS. Lsa proteínas NO llegan al lisosoma. (=es secretada en la forma P2)
Hay tres tipos de células

A.- Presentan de 1 a 3 vacuolas NO funcionales

B.- Presentan Vacuolas pequeñas del orden de 30-40
C.- No presentan Vacuolas.

Es mejor para estudiar todo esto las A. VPS 15 y VPS 34. Se han alterado unos genes que codifican para
una kinasa autofosforilativa y fosforila 34.

La 34 codifica para una fosfatidil inositol 3-kinasa

Forma un complejo 15-34 (Inmunoprecipitación recíproca).

Si se elimina el 15 se encuentra en el citosol en forma de precursor-2

Esto es sólo un modelo.!

Estructura verde; receptor de manosa 6-P. Autofosforila la kinasa VPS 15 y VPS 34 fosforila a
fosfolípidos de la membrana. Se forma una vesícula. "Clusterizan". Se forma una vesícula siempre que
tenga algo para transportar.

EXOCITOSIS
Tramo final de la ruta de secreción.. Hay 2 tipos
- secreción: normal; sin sentido (=constitutiva) como mínimo!
- regulada: Productos que acumulados se almacenan y ahora son secretados para producir un
estímulo. (Secreción a Go-Go).

Todas las células presentan constitutiva. La regulada es muy importante; es un proceso muy dinámico.
La secreción regulada NO es mediante un receptor. Sintetizan un producto y allí alcanza el "trans" golgi y
por agregación se libera!

Tiempo Real >> Tiempo Teórico

Lo que retiene son proteoglucanos. Se unen a las ramificaciones.

Vesiculas impeduras??: tanto en la secreción constitutiva y regulada .Se van las constitutivas mediante
clatrina a secreción; i se quedan las reguladas; cuando llega un estímulo se liberan.

Hay un fenómeno de procesamiento.

Pre-insulina. No en vesículas maduras. Solo la forma madura estará en las vesículas. La 1era expulsión
NO será dependiente de ATP; salen y ya está. Las de luego ;la segunda tanda si que son ATPO
dependientes. Estan casi listas. Están unidas al citoesqueleto de actina; estas son las que se unen gastando
un ATP.
Células con 2 membranas. GPI dominio apical. A 4ºC No hay exocitosis.
Mecanismo mediado con receptor.

1.- Endocitosis mediada por receptor

2.- Pinocitosis
3.- Fagocitosis. (Cuando degrada bacterias; procesos especializado)
4.- Potocitosis (mediado por cavreola)
5.- Transcitosis

1.- Procesos selectivos.

Vesículas de clatrina. Forman los endosomas tempranos. Reciben del "trans" golgi lo que lleven.
Proteínas Rab regulan los compartimentos.
El receptor NO se degrada. En el compartimento RGLL es reciclado el receptor. (Compartimento del
Golgi)

- Vía de degradación = receptor LDL

- Vía de reciclaje = Receptor y ligando son destruidos. (ferrotransferasa)
- transcitosis = la célula NO recibe nada. La vesícula nunca llega a ningún sitio; las entra en un sitio y las
deja salir en otro dominio. (=Células polarizadas). (P.Ej: la madre pasa Ig al bebé).

PATOLOGIA DEL LDL

Toxina diftérica.. Es un dímero. Taca a ef2. Esta es una proteína crítica. La subunidad A es catalítica.
Si ponemos

1.- A-B: Letal

2.- A: No mata
3.-B: No mata
4.-A + B: No mata

por un proceso de endocitosis B pasa dentro de la célula; va a la membrana y es a través de B que pasa A.
A se une con ef2; este con ATP y ya está liada!!

FAGOCITOSIS: Captación de elementos grandes. Se rodea la partícula. Este es el mecanismo de amebas

y paramecios a la hora de reconocer bacterias.
CICLO CELULAR
Conjunt de fenòmens de manera repetida y que té com a resultat donar célules filles.

Hepatocits: En semanes es regenera. Es recupera la funció pero NO l'estructura.

Cell Madre: Amb capacitat de dividir-se. Hi ha de molts tipus diferents. Cambia la seva potencialitat a
donar diferents linatges. No están diferenciades, es pode dividir sense límits. Poden ser célules mare o es
poden diferenciar (Diferenciació tumoral)

CICLE CELULAR.

La célula un cop neix (acaba de fer la fase M) ha de créixer. Fa la fase G1. Si surt del cicle celular diem
que esta en fase G0. Pot sortir de manera temporal com els hepatòcits o per sempre; com es el cas de les
neurones.
Durant G1 la célula viu. Ara doncs, si pasa el punt de NO-retorn que es troba cap al final de la fase G1, ja
no pot tornar enrere. Ara necesariament ha de completar el cicle celular.
Després trobem la fase S on es dóna tota la síntesis de DNA, algunes proteines com MTOC, etc....

Ara ens trobem a la fase G2. Entre la fase S i la Mitosis. Es de preparació, es de creixement. Síntesis
important d'elements que provoquen canvis en la mitosis. Després ve la Mitosis. Es una fase que ja se
sap!

En 24 hores es completa el cicle celular.

La S dura aproximadament 1 hora en diferents espécies, tot hi que varia molt. La mitosis si que es més
constant en diferents espécies.

MPF = factor estimulador de mitosis.

El control del cicle celular el fan les quinases. CDK's. Son dependent de ciclines. En mamifers s'han
estudiat fins a 10 diferents. Reconeixen sustrats i realitzen una cascada de reaccions. Condueixen a la
síntesis de DNA, etc...Provoquen canvis a l'interior de la célula per que es doni el cicle celular.

Regulació:
La regulació la fan les ciclines. Es la subunitat reguladora de l'enzim. Sense un NO hi és l'altre. Si falta la
ciclina NO hi ha activitat quinasa en les CDK's. Les ciclines es sintetitzes i són degradades via
ubiquitinització. La vida mitjana de les ciclines és bastant constant.

CYCLINAS

-D cyclinas

S'uneixen a CDK4 y CDK6

Sintesis en G1 temprano (=conspicua)
Permiten salir del estado quiescente
Degradadas a G1 tardío coincidiendo con la síntesis de Cyclina E

- E cyclinas

Síntesis en G1 tardío. Se une a cdk2

Hace pasar a la fase S. Es determinante (=Punto de NO retorno).
- A cyclina

Al final de la G1.
Requerida para que toda la fase S vaya perfectamente
Se une a cdk2

- B cyclina

Síntesis al final de S
Forma MPF (=Cdc2- Cyclina B). Este echo marca el final de la fase G2 y comienzo de la fase M
A la metafase hay una degradación (es tan importante la síntesis como la posterior degradación)

- H cyclina

Se expresa constante en el ciclo celular.

NOTA del COOPER:

Al comienzo de G1 tiene lugar la síntesis de la cyclina D que se une a CdK4 y a CdK6. Estos complejos
se activan aproximadamente en el 2º tercio de G1 y son responsables de la progresión de la fase G1 y de
la transición a S Además en G1, a la mitad, tiene lugar la síntesis de cyclina E que se une a CdK2; que
junto los anteriores complejos promueve la transición hacia la fase S.

Hacia finales de G1 tiene lugar la síntesis de Cyclina A que se une con CdK2. Este complejo es el
responsable de que la fase S transcurra perfectamente.

En la fase G2, hacia el inicio, se sintetiza la cyclina B,que se une con CdK1; y mientras la cyclina A (ya
sintetizada) se une con la CdK1 también. Estos 2 complejos son los responsables de llevar a la célula a la
fase M.

Al complejo de CdK1-cyclina B se le llama MPF (=Factor promotor de la mitosis).

Los niveles de cyclina H son constantes a lo largo de todo el ciclo celular, se une a CdK7, formando el
complejo CdK7-cyclina H. También denominado CaK.

REGULACION DE LAS CICLINAS

* Transcripcional: E2F es el factor de transcripción de las cyclinas E i A.

Varios factores de crecimiento inducen a D cyclinas. Se considera un sensor que conecta las señales
extracelulares con la maquinaria del ciclo celular.

*Proteolisis Regulada: la mayoría se degradan vía ubiquitinización.(=Via proteosoma)

las A,B,D,E impiden que se vuelvan a formar.
APC es la E3 para cyclinas A y B
SCF es E3 para la cyclina E.
Esto asegura que las transiciones del ciclo celular sean acontecimientos del todo o nada e irreversibles.

REGULACION DE COMPLEJOS CDK-CYCLINAS

1.- Proteinas que activan los complejo CdK-cyclinas

Para que se produzca la activación del complejo se necesita de CAK. Cuando la cyclina se une a la CdK
ésta sufre un cambio conformacional que provoca que la Thr 160 quede expuesta. CAK actúa a este
nivel. Esta nueva fosforilación provoca una nueva reestructuración de la molécula permitiendo el acceso a
los sustratos.
CAK a su vez está regulada por:
-MAT1: Unión a CAK formando un complejo activador.

-CAKAK: Se produce una fosforilación a nivel de Thr 170 de CAK. Dicha fosforilación la realiza o bien
CdK2-Cyclina A o bien, CdK1-cyclina B
Kap: Fosfatasa inhibidora. Desfosforila el que ha fosforilat CaK. Treu el P de la treonina fosforilada.

2.- Proteínas que inhiben los complejo CdK- cyclina (CKI's)

Inhibidors del'activitat dels complexes. Provoquen la detecció temporal o permanent

Familia INK 4: Formadas por p15, p16, p18 todos los miembros se unen a CDK dependientes de la
cyclina D. CdK 4 / 6. Pueden unirse a la CdK sola y al complejo CdK-cyclina. Si se unen a CdK impiden
la unión a la cyclina; si lo hacen al complejo, provocan la disociación.
INK4: Inhibeixen G1. TGF inhibeix el Cicle celular

Familias Cip, Kip: Formadas por p21, p27, p57. Regulan:

Cdk4/6 - cyclina D: Estabiliza el complejo.
CdK 2 - cyclina E/A: Desestabilizan el complejo.

* P21: es un producto de p53. Bloquea el G1. El domini de unió es CDK y la regió C-terminal. Inhibeix la
replicació peró NO la reparació.

REGULACION CDK's

1.- Enzimas que modifican covalentemente las CDK's (por fosforilación)

QUINASAS INHIBIDORAS

Són Wee1, Myt1 y Mic1.

Wee1: En todos los eucariotas fosforila el residuo tyr 15 conservado en todas las CdK. Es una
fosforilación inhibidora ya que dicha tyr está en la región catalítica de la molécula.
Myc 1: En levaduras
Myt 1: Fosforila tyr 15 y también thr 14.

FOSFATASAS ACTIVADORAS

Son la familia de Cdc 25.

Eliminan los grupos fosfato de las quinasas inhibidoras (Wee 1). Mediante éste mecanismo la célula
puede acumular grandes cantidades de CdK-cyclina inactivas que luego podrán ser activados de golpe.

TRANSICION ANAFASE / METAFASE

Las cromátidas hermanas están unidas mientras que las cohesinas sean funcionales. La separasa
proteoliza la cohesina. Hasta que las cromátidas No estén unidas al huso mitótico está inactiva porque
esta unida a una segurina.
Durante dicha transición. Se dan 2 proteólisis:

- Degradación de Cyclina B: Se inactiva MPF.

- Degradación de la segurina: Se activa la separasa que da lugar a la separación de cromátidas.
Las 2 degradaciones se dan en el proteosoma. (APC). Hasta que el último cinetocor NO esté unido al
huso; APC estará inactivo.

TRANSICIÓN G1-S

CdK 4 - cyclina D
CdK 6 - cyclina D
CdK 2 - cyclina E

Estos complejos tienen como sustrato la proteína del retinoblastoma. (Rb)

Rb: Proteina supresora de tumors. Retinoblastoma. Participa en el cicle celular. Es una proteina
sagrestadora. Són factors de transcipció.Conecta el sistema de control del cicle celular amb la maquinária
transcripcional. Són capaces de inhibir a moltes proteinas entre las quales está el factor de transcripción
E2F.

Cyclina D-CdK 4 / 6 Cyclina E-CdK 2

Rb-E2F ----------------------------> Rb + E2F

"activa" P P "inactiva"
Mid G1 P Late G1
NO se hace fase S Se hace fase S. Se expresa Cyclina E

Los comlpejos CdK 4/6 -cyclina D fosforilan a Rb y la inactivan. Se libera E2F y la cyclina E se forma.
Todos aquellos estímulos que favorezcan la proliferación celular deben provocar la fosforilación de Rb.
Los que impidan la proliferación deben evitar dicha fosforilación.

És un punt de restricció. Un aument de E2F provoca una gran cascada. Es un bon punt de regulació

FAMILIA E2F

Factors de Transcripció que controlen: C-Myc, E2F, CDK 1, Cyclina A, Cyclina E, etc..Timidina K.
Dispara una cascada dirigida en el cicle celular. És dóna una retroalimentació positiva en el nostre sistema
d'estudi..
Al final de la mitosis s'inactiven les Cyclines - Cdk y es fosfata. Es comená amb G1 altre cop.

DIFERENCIACIÓ

CdK 4 - cyclina D es inactivado por P21, P27, P57.

MORT CELULAR

La célula rep moltes informacions del exterior i del interior. Lesions importants fan que la celula programi
la mort. Tot aixó ho regulen bateries de gens. (Gens Proapoptótics / Antiapoptótics)

Tisular homeostátic: la homeostasis és el balanç entre proliferació i apoptosis. Aqeusta relació depén de
les relacions correctes entre la proliferació de la celula, la diferenciació i la mort celular.

Sempre hi d'haver un equilibri:

Si es decanta cap a la mort= Distrófia.
Si es decanta ca a la vida= Cácncer.
APOPTOSIS

Canvis en el nucli, la cromatina cambia alhora de condensar-se. Ho fa de manera irregular. Hi ha un

encongiment de la celula. Creixen bombolles a la superfície celular. L'interior está relativament intacte.
Després hi ha una desfragmentació. (=NO lisis). Es la formació de trosso que englobe orgánuls
(mitocondries, RER, AG, etc..) Després es formen cosos apoptótics recoberts de membrana plasmática.
Finalment venen els macrófags que els degraden. No hi ha ni inflamació ni dolor.

Trobem 2 vies de apoptósis:

-Extrínseca: Mecanismes moleculars externs són els que dónen l'ordre de morir.
-Intrínseca: resposta inflingida desde el interior. La mitocondria es receptora. Pot induir a la mort célular.

En la vía intrínseca trobem la familia de les BCl-2.(Balanç Anti-apoptotic-Pro-apoptotic) Canals iónics

de la membrana de la mitocondria modulen de manera indirecta.

* NOTA: Les caspases són les peces centrals acabrán induint la apoptósis. (=Domini CARD, proteases)

PRO-APOPTOSIS

BAX= Membre de la familia. Indueix l'apoptosis. Presenta senyals interns. Dañs en DNA. P53 estimula a
BAX. Aquets estimula al citocrom C i a caspases i ja está!!

P53= "Guardiana del genoma" .És un estímul intrínsec de la célula. Quan aumenta la concentració de P53
s'atura la replicació. El DNA es repara; si no pot ésser reparat s'indueix a l'apoptosis.
Quan hυ irradia el DNA, aquets es trenca. Es fosforila mitjançant p53. Normalment P53 está associada a
MDM2. Es separa al fosforilar-se i es torna activa. (=Factor de Transcripció). Actúa en tota una bateria de
gens (Cyclines, reparació de DNA, i apoptósis) (Bax, fas, NF-KB, potencia l'activitat de les caspases).
Activa tot un conjunt de respostes apoptótiques. Reprimeix PCL2 (=Gens anti-apoptótics). P53 es
degrada per ubiquitinització.

NECROSIS

Es quan hi ha una lesió. Lo primer que es trenca és la membrana plasmática. Es perd el control de tot.Hi
ha una inflamació de la célula, cambia el gradient de ions, etc..els enzims es van malmeten. NO hi ha
cambis en le nucli. Comporta la lisis de la celula i l'alliberament de tot el contingut cap a l'extreior. Afecta
a un grup de célules.

SENESCÉNCIA CÉLULAR

Telómers (Telomerasa) Es divideix sense límits. Compensa l'escurçament. Conté sequéncies TTAGGG
repetides.