aaUNIVERSIDAD SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE INGENIERIA ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA ESCUELA DE QUMICA BIOQUIMICA LABORATORIO DE BIOQUMICA

REPORTE NO.2: PROPIEDADES DE LOS AMINOCIDOS

ITZAM ADRIN MORALES 2006 19875

GUATEMALA 21 DE AGOSTO DE 2011

RESUMEN Los aminocidos son las estructuras generales de las protenas en la qumica de la vida lo cual constituyen una parte muy importante en el estudio de la bioqumica como parte fundamental para la comprensin en la forma como ciertos componentes fundamentales actan. Debido a que son estructuras qumicas definidas con caractersticas en comn como ser: la presencia del grupo funcional amino y el cido carboxlico. Pero aun as cada aminocido se caracteriza por la el grupo funcional que est unido a la cadena ramificada del enlace del carbono alfa, este grupo funcional da la caracterstica especificas del aminocido. Debido a que estas caractersticas las da un grupo funcional con propiedades qumicas conocidas, la identificacin se da a partir de reacciones qumicas en las cuales dan cambios de coloracin por la accin que estas tienen en la polarizacin de la luz. As de esta manera se da la identificacin cualitativa de diversos aminocidos con propiedades especiales. En el laboratorio se realizo diversas pruebas existentes para la identificacin de los aminocidos de acuerdo a su grupo funcional. Las pruebas que se realizarn fueron: Prueba de Elrick Diazzo, azufre reducido, prueba xantoproteica, reaccin de Molich, prueba de nitropruisato de sodio, prueba de nihidrina, prueba de Sakaguchi, y la reaccin de Hopkins. Cada a una de las pruebas fue hecha con diversos aminocidos los cuales se observo los cambios esperados as como la negativa en algunas pruebas. El experimento se realizo en el laboratorio de qumica de la escuela de ingeniera qumica a temperatura ambiente y presin atmosfrica estndar.

RESULTADOS Tabla No. 1 Resultados de las diversas pruebas realizadas a los aminocidos. PRUEBA Elrick Diazzo Azufre reducido Xantoproteica Molich Nitroprusiato de Sodio Nihidrina AMINOACIDOS Tirosina Histidina + + Cistina Cisteina Fenilalanina Cistina Tirosina + + Arginina Tirosina Fenilalanina Cistina Cisteina + + Asparagina Alanina Hidroxiprolina No hubo cambios en la coloracin de de los aminocidos. Arginina Lisina Asparagina + Tirosina Fenilalanina Fenilalanina + Fuente: Hoja de datos originales.

Sakaguchi Hopkins

PRUEBAS DE IDENTIFICACIN Prueba No: 1 Nombre de la Prueba: Elrick Diazzo Criterio de la prueba: La presencia de grupos imidazol o fenoles en la muestra dan resultado positivo al reaccionar con diazida del cido sulfanlico y forman productos de sustitucin que se tornan de color rojo al alcalinizar el medio. Reaccin: 1.1 Fenil alanina
ci c

NH2 H C CH2 NH2

-

Observacin: Al ser agregado el Hidrxido de amonio concentrado se observo un cambio de coloracin de incoloro a amarillo Conclusin: La prueba es positiva debido a que la reaccin ocurri mostrando el anillo fenolico del aminocido seleccionado.

i z s lf ic

N N
+

COO

+
-

C CH2

COO

SO 3

N N

il l

SO 3

Compuesto color marillo

1.2 Tirosina
cido diazobencenosulfnico

NH2 H C CH2
-

Observaciones: Al agregar el hidrxido de amonio concentrado hubo cambio de color de marrn claro a marrn oscuro. Conclusin: El resultado es positivo debido a que la reaccin mostro la presencia de un anillo bencnico en la estructura del aminocido seleccionado. 1.3 Histidina
ci o iazobencenosulf nico

N N
+

SO3

Histi ina

N N
+

COO

NH2 + H C CH2 COO

SO 3

O N

N
OH
Tirosina
-

SO 3

Compuesto color amarillo

NH2 NH2 + H C CH2

NH
+

H COO
-

C CH2

COO

N
C

N
NH
+

N N

CH

SO3

Compuesto color mbar oscuro

Observaciones: Al agregar el hidrxido de amonio la coloracin cambio de incoloro a mbar oscuro. Conclusiones: La prueba resulto positiva detectando la presencia del grupo imidazol del aminocido seleccionado.

Prueba No: 2 Nombre de la prueba: Azufre reducido Criterio de la prueba: Sirve para identificar aminocidos que tienen en su composicin azufre terminal. Si se forma un precipitado de color negruzco no sindica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizndose el azufre del aminocido. Reaccin: 2.1 Cistina

Observaciones: No se dio ningn cambio en la coloracin. Conclusin: La prueba dio como resultado negativo, se puede concluir que la reaccin no sigui por los reactivos utilizados para esta prueba.

2.2 Cisteina
NH3 H C CH2 SH
+ -

COO + Na OH

No hubo reaccin

Observaciones: No se dio ningn cambio en la coloracin al realizar la reaccin. Conclusin: La prueba dio como resultado negativo, la reaccin no se dio por los reactivos utilizados para esta prueba.

Prueba No: 3 Nombre de la prueba: Xantoproteica Criterio de la prueba: Esta prueba est basada en la nitracin del anillo bencnico con cido ntrico concentrado HNO3 dando una coloracin amarillenta derivada de la nitracin del benceno. Bajo las condiciones nicamente la tirosina darn positivo, se hace ms difcil la nitracin de la fenilalanina.

Reaccin 3.1 Fenilalanina

NH2 H C CH2 COO
-

HNO3

No se da la reaccin

Observaciones: Al agregar el cido ntrico concentrado no se dio ninguna reaccin o cambio de coloracin que marcara la nitracin del anillo bencnico. Conclusin: La prueba es negativa. 3.2 Cistina
O HO O HO NH3
+

S NH3
+

+ HNO3

No ay reacci n Nota: Hubo coloraci n cambio e

Observaciones: Se tomo como positiva pero de acuerdo a los criterios de la prueba su reaccin no se pudo dar por que el aminocido no posee anillo bencnico. Debi formar otros productos que dieron el cambio de coloracin. Conclusin: La prueba es negativa.

3.3 Tirosina
NH2 H C CH2 COO
-

NH2 + HNO3 H C CH2 COO

-

OH

OH

NH2

Observaciones: Al agregar hidrxido de sodio la muestra cambio de marrn claro a amarillo claro lo que indico la nitracin del anillo bencnico en la estructura del aminocido seleccionado. Conclusiones: La prueba es positiva debido a que se corroboro la presencia del anillo bencnico.

Prueba No: 4 Nombre de la prueba: Molich Criterios de la prueba: Sirve para detectar la formacin de derivados aldehidicos que se condensan con alfa naftol dando un producto colorido violeta.

Reaccin 4.1 Arginina

NH2 H C CH2 CH2 CH2 HN C H2N
+

CH3 +

HO + H2SO4

No hay reaccin debido a que no existe carbohidrato presente.

NH2

Observaciones: Se observaron un cambio de coloracin de incoloro a amarillo plido, no se dio ningn anillo purpura. Conclusiones: La prueba es negativa 4.2 Tirosina
NH3 H C CH2
+ -

COO

HO + + H2SO4

No hay reaccin debido a que no existe carbohidrato presente.

OH

Observaciones: En la reaccin se formo un precipitado marrn espeso, no se presento el anillo purpuro. Conclusiones: La prueba es negativa.

4.3 Fenilalanina

NH2 H C CH2 COO

-

HO + + H2SO4

No se da la reaccin por no poseer carbohidratos.

Observaciones: Se observo un cambio de coloracin de incolora a beige turbio con la formacin de cierto precipitado. Conclusiones: La prueba se considera negativa.

Prueba No: 5 Nombre de la prueba: Nitroprusiato de sodio Criterio de la prueba: Los grupos sulfhidrilo libres de algunos aminocidos reaccionan con el nitroprusiato de sodio en solucin amoniacal y toman color rojo. Los grupos disulfuro de la cistina dan positiva la prueba.

Reaccin 5.1 Cistina

Nitroprusiato de sodio
O HO O HO
+ NH3 + NH3

O S O N S NH3
+ -

N C

N C
4-

NH3
HO + 2Na

Fe N C C N

C N

Cistina en solucin amoniacal

SH + O N C Fe N C C N
4-

N C C N + HO

O CH3 NH3
+

Compuesto color amarillo fuerte.

Observaciones: Se observo que al agregar la solucin amoniacal se torno de color amarillo fuerte plido.

Conclusiones: La prueba se toma como positiva debido que se mostro la presencia de azufre al reaccionar con el nitroprusiato de sodio a pesar del color amarillo.

5.2 Cisteina
Nitroprusiato de sodio
O O O N S NH3
+ +

N C

N C
4-

NH3
HO
+ NH3

SH

HO

+ 2Na

Fe N C C N

C N

Cisteina en solucin amoniacal

SH + O N C Fe N C C N
4-

N C C N + HO

O CH3 NH3
+

Compuesto color amarillo fuerte.

Observaciones: Al ser agregado la solucin de amoniaco se formo una coloracin amarilla fuerte. Conclusiones: La prueba se toma como positiva a pesar del color amarillo.

Prueba: 6 Nombre de la prueba: Nihidrina Criterio de la prueba: Esta prueba es usualmente realizada como una reaccin general dada por el carbono primario y la amina y donde el -carbono posee un hidrogeno. La prueba da positiva al formarse un complejo color morado. Reaccin: 6.1 Asparragina
O OH OH O + H NH2 C CH2 C O NH2 COO
-

No se dio la reaccin de acuerdo a las observaciones.

6.2 Alanina
O OH OH O + H NH2 C CH2 CH3 COO
-

No se dio la reaccin de acuerdo a las observaciones.

6.3 Hidroxiprolina
O OH OH O + +H 3N OH COO HC
-

No se dio la reaccin de acuerdo a las observaciones.

Observaciones: No se dio ningn cambio en la coloracin al agregar el reactivo de nihidrina. Conclusiones: La prueba se toma como negativa.

Prueba No: 7 Nombre de la prueba: Sakaguchi Criterio de la prueba: Indica la presencia del grupo funcional guanidinio, la cul esta en el aminocido arginina . El grupo guanidinio en solucin alcalina da una coloracin roja en presencia de naftol e hipoclorito de sodio.

Reaccin: 7.1 Arginina

E- Naftol
O OC +H3N C CH2 H NH NH C NH2 + + NaOCl
-

OH

O OC +H3N C CH2 H NH

NH C N

Compuesto color naranja

Observaciones: Al agregar el alfa naftol a la muestra de aminocido esta cambio de coloracin de incolora a anaranjado. Conclusin: La prueba se toma como negativa.

7.2 Lisina
+H3N H C COO
-

E- Naftol OH + NaOCl No hay reaccin

+ CH2 NH3
+

7.3 Asparragina
+H3N H C C O NH2 COO
-

E- Naftol OH + NaOCl No hay reaccin

Observaciones: Se observo un cambio de observacin de incoloro a amarillo palido. Conclusiones: Aunque se haya observado cambio en la coloracin al momento de la reaccin no fue un cambio considerable, y estos aminocidos no poseen el grupo guanidinio.

Prueba No: 8 Nombre de la prueba: Hopkins Criterio de la prueba: En presencia de cido los aldehdos condensan con el anillo de indol de triptfano. Dando una coloracin purpura intermedia. Reaccin 8.1 Tirosina
NH 2 H C CH 2 COO
-

O + HC COOH

H 2 SO 4 H 2O
No se da la reaccin por no poseer carbohidratos.

OH

8.2 Fenilalanina
NH2 H C CH2 COO
-

O + HC COOH

H2SO4

H2O

No se da la reaccin por no poseer carbohidratos.

Observaciones: No se dio ningn cambio en la coloracin al agregar el reactivo Conclusiones: La prueba se toma como negativa.

DISCUSIN DE RESULTADOS Al momento de realizar el experimento en la realizacin de la identificacin de los diversos aminocidos con las pruebas seleccionadas se dieron diversos cambios de coloracin al momento de realizar las reacciones. En estos casos se tomo como positiva al momento de observar esos diversos cambios de coloracin en las soluciones con aminocidos. De acuerdo a los criterios establecidos en las pruebas de identificacin para los aminocidos, y las reacciones que se daban para los diversos tipos de pruebas se hicieron las conclusiones en las pruebas en los resultados aun cuando estos hayan dado cambios de coloracin. Un ejemplo claro se observa al estudiar la prueba de Sacaguchi, la cual me permite determinar la presencia del grupo guanidinio en un aminocido debido que la reaccin se realiza cuando este grupo est presente con el alfa naftol e hipoclorito de sodio, tal como se muestra en la reaccin y en los resultados esta prueba solo es positiva en presencia del aminocido arginina, para los otros dos aminocidos utilizados por no poseer el grupo guanidinio la reaccin que se dio fue diferente a la que realmente sucede en la presencia del grupo en mencin. Por lo cual se dio un pequeo cambio en la coloracin de los aminocidos. Los resultados obtenidos para la prueba de Molich tal como se ve en las pruebas de identificacin concuerdan con la teora y criterio de la prueba debido a que esta es ms una prueba para protenas y observar la presencia de algn carbohidrato (azcar) en la estructura de la misma, debido a que los aminocidos no tienen en su estructura ramificada ningn grupo carbohidrato est presente, por lo cual los reactivos permanecern inertes al estar en mezcla acuosa. Para la prueba de Nihidrina la cual en todas la pruebas se dio un resultado negativo debido a que no se observo ningn cambio en la coloracin, se tiene que establecer lo ocurrido debido a que esta prueba es general para cualquier tipo de aminocido debido a que la reaccin se de acuerdo a los criterios establecidos en esta reaccin es usualmente realizada como una reaccin general dada por los aminas primarios que posee el -carbono Fuente bibliogrfica No. 1 pag 121. En esta reaccin se da espontneamente dando como resultado un complejo color purpura, la cual en los medios experimentales elaborados no se dio. Pudiendo aducir al reactivo utilizado o que no se hayan seguido correctamente los pasos de la metodologa establecida. De la misma manera se presenta en la prueba de azufre reducido en la cual de acuerdo a los criterios de la prueba se establece que debido a la presencia de azufre de los aminocidos cistina y cistena esta con el reactivo acetato de potasio se presenta un precipitado oscuro el cual en la prueba no se dio debido a que no se presento ningn cambio en la coloracin de la mezcla de los aminocidos mencionados. El motivo por el cual pudo haber fallado esta prueba

es que la reaccin lleva una serie de pasos antes de que la el acetato de plomo reaccione con el azufre, fue en alguno de los pasos en los cuales no se dieron las condiciones necesarias para que el azufre pudiera liberarse y as de esta manera que se diera positiva la reaccin. En la reaccin de Hopkins el criterio establece el uso de acido glioxilico el cual no se uso en los procedimientos hechos en el laboratorio para esta prueba adems, se tiene que esta prueba es exclusiva para el aminocido triptfano el cual no uso en la identificacin. De acuerdo a las dems pruebas no se tuvo las coloraciones que se mencionaban en los criterios, pero se toma como positiva la prueba debido a que los cambios se dieron en forma espontanea e incluso en algunas pruebas no todos los aminocidos permiten llegar al color deseado y por la naturaleza qumica del aminocido y el criterio establecido se toma como positiva.

CONCLUSIONES 1. Las pruebas sirvieron para determinar la composicin qumica de la ramificacin en los aminocidos utilizados, los cuales contienen, grupos guanidinio, anillos bencnicos, azufre y otras propiedades. 2. La mayora de pruebas resultaron positivas de acuerdo a los criterios establecidos para cada prueba. Dndose diversas reacciones las cuales fueron perceptibles a travs de cambios de coloracin en las soluciones de aminocidos. 3. La utilizacin de pruebas especificas para protenas fueron negativas para los aminocidos utilizados por la falta del compuesto qumico a identificar. 4. En algunas pruebas los cambios de coloracin se dieron indicando una reaccin la cual no corresponda a la reaccin adecuada por el reactivo utilizado.

PROCEDIMIENTO Elrich Diazo 1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes: Fenilalanina, tirosina, histidina. 2. Se agrego 1 ml de acido sulfanilico al 0.5 % 3. Agregado de 1 ml de nitrito de sodio 0.5 % 4. Se agregaron gotas de Hidroxido de amonio concentrado. Azufre reducido. 1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos de ensayo separados: Cistina y cisteina 2. Se agrego 4 ml de NaOH 6 M en cada aminocido. 3. Se agrego 0.5 ml de PbAc al 2 % al la solucin anterior. 4. Se calent a ebullicin. 5. Se observaron los cambios y fueron anotados. Xantoproteica 1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos de ensayo separados: Fenilalanina, cistina, tirosina 2. Se agregaron gotas de acido ntrico concentrado en cada uno de los aminocidos. 3. Se observaron los cambios y fueron anotados.

Molicsh 1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos de ensayo separados: Arginina, tirosina, fenilalanina. 2. Se agregaron 2 gotas de -naftol al 5 % a cada una de los aminocidos. 3. Se agrego acido sulfrico concentrado 4. Se observaron los cambios y fueron anotados. NItroprusiato de Sodio 1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos de ensayo separados: Cistina y cistena. 2. Se agregaron 1 ml de Nitroprusiato de sodio a cada uno de los aminocidos. 3. Se agregaron gotas de hidrxido de amonio. 4. Se observaron los cambios y fueron anotados.

Nihidrina 1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos de ensayo separados: Asparragina, lisina, asparagina. 2. Se agregaron 1 ml de Nihidrina a cada uno de los aminocidos. 3. Se coloco en bao de Mara a 60C por cinco minutos. 4. Se observaron los cambios y fueron anotados. Sacaguchi. 1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos de ensayo separados: Arginina, lisian, asparragina. 2. Se agregaron 1 ml de solucin de NaOH al 40% 3. Se agregaron 5 gotas de -naftol al 5%. 4. Se agregaron 5 gotas de hipoclorito de sodio. 5. Se observaron los cambios y fueron anotados. Hopkins 1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos de ensayo separados: Tirosina y fenilalanina. 2. Se agregaron 5 gotas de -naftol al 5%. 3. Se agregaron cuidadosamente 1 ml de acido sulfrico. 4. Se coloco en bao de mara a 60C 5. Se observaron los cambios y se anotaron.

OBSERVACIONES En la mayora de las reacciones realizadas hubieron cambios de coloracin por parte de las soluciones de aminocidos, en las que no se percibi cambios considerables se tomo como negativa la prueba. Al realizar la prueba de azufre reducido el calentamiento se realizo en un mechero de Bunsen, al calentarla se obtuvo evaporacin espontanea lo cual hacia que la mezcla se saliera del tubo de ensayo.

FUENTES BIBLIOGRAFICAS 1. Louise J. Daniel, Leslie Nea. Laboratory experiments in bioquemistry.1st Edition, Dual Printing, Buffalo, New York. Pag 121 123

2. Dr. Abraham Cantarow, Dr. Bernard Schepartz. Bioquimica. Cuarta Edicin, traducido por Dr. Homero Vela Trevio. Interamericana. Pag. 90 91