Ziehl Neelsen Equipo Equipo de coloracin de bacilos cido-alcohol resistente.

Fundamento La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir la decoloracin con cidos fuertes despus de ser teidos con solucin de fucsina caliente, permite reunirlas bajo la denominacin general de bacterias cido alcohol resistente. El gnero Mycobacterium, incluido en esta clasificacin, comprende especies patgenas para el hombre, animales y especies saprfitas. El grado de cido-alcohol resistencia es variable entre los distintos grupos y no puede usarse esta propiedad con fines taxonmicos. Con esta coloracin, los bacilos cido-alcohol resistentes aparecen rojos, mientras que otros grmenes y clulas toman distintos tonos de azul. Reactivos 1) CARBOLFUCSINA: Solucin de fucsina bsica (3 g de fucsina bsica en 100 ml de alcohol etlico 95%); 10 ml de solucin de fenol al 5%, 90 ml. 2) ALCOHOL-ACIDO: Solucin de alcohol etlico 95% conteniendo 3 ml de cido clorhdrico. 3) COLORANTE DE CONTRASTE: Solucin acuosa al 0.3% de azul de metileno. Tcnica El material a estudiar debe extenderse con ansa en portaobjetos delgados y nuevos, previamente desengrasados. La existencia de cualquier anfractuosidad o rayadura en el vidrio, podr ser causa de confusin en la observacin. Preparacin de extendidos Es conveniente efectuar siempre un examen directo y homogeneizado. Para la homogeneizacin se aade un volumen equivalente de NaOH 4% al material en estudio. Se coloca en estufa a 37C durante 15 a 30 minutos y se centrifuga a 3.000 rpm durante 20 minutos. Se vuelca el sobrenadante y se realiza el extendido del centrifugado con ansa. Una vez realizado el extendido se deja secar al aire o en estufa de cultivo. Procedimiento Fijar los preparados por calentamiento suave flamendolos sobre la llama. Coloque un pequeo trozo de papel de filtro un poco ms largo que el tamao del preparado sobre el portaobjeto. Cubra todo el portaobjeto con carbolfucsina y flamee por debajo del portaobjeto hasta desprendimiento de vapores blancos (cuidar que no entre en ebullicin por exceso de calor). Deje enfriar 5 minutos y repta el flameado con llama, hasta nuevo desprendimiento de vapores blancos. Volver a dejar 5 minutos. Cuando ya est fro, remover el papel de filtro y lavar con agua destilada. Decolorar con alcohol-cido en sucesivos lavados hasta que no se desprenda ms colorante (alrededor de 2 minutos; para preparados ms gruesos puede requerirse ms tiempo). Lavar con agua destilada y colorear con azul de metileno alrededor de 30 segundos. Lavar con agua destilada y secar al aire. Resultados Los bacilos cido-alcohol resistentes aparecen rojos, mientras que otros grmenes o clulas toman distintas tonalidades de azul. Observaciones Algunas drogas utilizadas en el tratamiento de la tuberculosis, hacen perder la cido-resistencia de los bacilos, observndose esta caracterstica de las cepas sensibles a la isoniazida y a la alfa etiltioisonicotinamida (ethionamida).