Tesis Doctoral Modelado Matematico de La Celula Cardiaca

UNIVERSIDAD SIMN BOLVAR
Decanato de Estudios de Postgrado

Doctorado En Ingeniera

MODELADO MATEMTICO DE LA

CLULA CARDIACA

Tesis doctoral presentada a la Universidad Simn Bolvar por:

Rossany Odalys Roche Valencia

Como requisito parcial para optar al grado de Doctor en Ingeniera

Realizado con la tutora de la Profesora Rosalba Lamanna de Rocco

Noviembre, 2005.

Versin preliminar
MODELADO MATEMTICO DE LA CLULA CARDIACA

Resumen
En este trabajo se desarrolla un modelo global de la clula cardaca que integra tanto la
actividad elctrica como la actividad cintico-qumica de los diferentes elementos del citosol, el
retculo sarcoplsmico y la membrana celular (canales L, canales de Rianodina, bomba
SERCA, bomba ATPasa, intercambiador Na
+
-Ca
2+
, miofibrillas).
El modelo, basado en la interpretacin de la clula (miocito) como un sistema de micro-
reactores qumicos interconectados, arroja resultados que concuerdan con los
comportamientos reales de excitacin-relajacin esperados: las dinmicas de concentracin de
calcio y de voltaje son cclicas, con forma de campana asimtrica para el calcio y de onda con
meseta para el voltaje. Las validaciones del modelo con datos reales muestran adems que
puede ser fcilmente adaptado a miocitos de diferentes especies animales.
La estructura fenomenolgica del modelo hace posible, luego de un estudio de sensibilidad, la
identificacin de cules de los elementos celulares estn relacionados con diferentes tipos de
comportamientos dinmicos, y por lo tanto hace posible el uso del modelo como herramienta
en el diseo de protocolos experimentales, para el estudio de efectos de drogas y en el diseo
de tratamientos para cardiopatas.
Para facilitar precisamente el uso del modelo en investigaciones mdicas o para fines
acadmicos, se desarrolla tambin un simulador basado en la herramienta Guide de Matlab.
Este programa, que contiene adems el modelo de Tang y Othmer (1994) y el modelo de Fox y
colaboradores (2001), para fines comparativos, es muy flexible y sencillo de utilizar y dirige al
usuario en el proceso interactivo de ajuste del modelo a diferentes situaciones experimentales.

Palabras claves: modelado cardiaco, clula cardiaca, contraccin-relajacin, dinmica de
calcio, clula virtual, simulador celular.

MATHEMATICAL MODELING OF THE CARDIAC CELL

Summary
A global model of the cardiac cell is formulated, integrating the electrical, kinetic and chemical
dynamical aspects of the different components in the cytosol, the sarcoplasmic reticulum, and
the cellular membrane (L-channels, Ryanodine channels, SERCA-pump, ATP-pump, Na
+
-
Ca
2+
-exchanger, myofibrilles).
The model, based on the idealization of the cell as a two-interconnected-stirred-tank-reactor
system, produces the expected time responses of the excitation-contraction (E-C) coupling,
namely the oscillatory-bell-shaped curve in the calcium dynamics and the characteristic plateau
phase in the membrane potential. Validations of the model with different real data sets show
that it can be well adapted to represent cells of different species.
Following a sensibility analysis of the model, the phenomenological structure of its equations
allows the identification of the cellular sub-systems that are related to specific or altered
dynamics, and hence the applications of the model in experiment design, drug-effect analysis
and cardiac-pathology treatment.
A simulation program using Matlab is also presented. It is intended to be the base of a
computer aided system, to be used by biologists and doctors, as a research or academic tool. It
contains the models by Tang and Othmer (1994) and Fox et al. (2001) as well, for comparison
purposes. Its user-friendly interface allows the modification of the model parameters in
correspondence with different cellular elements, and hence the testing of the sensibility of the
E-C process to drugs and inhibitors.

Keywords: Cardiac modeling, Cardiac cell, E-C coupling, Calcium dynamics, Virtual cell,
Cellular simulation.

i
Tabla de Contenidos

Lista de Tablas iv
Lista de Figuras v
INTRODUCCIN GENERAL 1
Captulo 1 LA CLULA CARDIACA 8
1.1 INTRODUCCIN. 8
1.2 ANATOMA DE LA CLULA CARDIACA. 8
1.2.1 El Sarcolema. 9
1.2.2 El Retculo Sarcoplsmico. 10
1.2.3 Las Miofibrillas. 11
1.2.4 Elementos celulares 13
1.3 FISIOLOGA DE LA CLULA CARDIACA 20
1.4 CONCLUSIONES 24
Captulo 2 ANTECEDENTES DEL MODELADO 26
2.1 INTRODUCCIN 26
2.2 MODELOS MATEMTICOS DE LOS DIVERSOS COMPONENTES
CELULARES DEL MIOCITO
28
2.2.1 Modelado de los fenmenos fsicos qumicos 28
2.2.2 Modelado de fenmenos elctricos 46
2.3 MODELOS MATEMTICOS DE LA CLULA CARDIACA 59
2.4 CONCLUSIONES 67
Captulo 3 DESARROLLO DE UN MODELO GLOBAL 69
3.1 INTRODUCCIN 69
3.2 EL SISTEMA MIOCITO 70
3.3 FORMULACIN DEL MODELO 74
3.3.1 Ecuaciones principales de balances 74
3.3.2 Ecuaciones auxiliares descriptivas 77
3.3.3 Parmetros del modelo 95
3.4 CONCLUSIONES 101
Captulo 4 SIMULACIN Y VALIDACIN DEL MODELO 103
4.1 INTRODUCCIN 103
4.2 RESOLUCIN DEL MODELO 105

ii
4.3 VALIDACIN DEL MODELO CELULAR GENERALIZADO 109
4.3.1 Variables utilizadas 110
4.3.2 Procedimiento de validacin general 112
4.3.3 Resultados de simulacin del modelo generalizado 115
4.3.4 Comparacin del modelo con otros modelos. 116
4.4 VALIDACIN POR ESPECIES. 119
4.4.1 Obtencin de los datos reales. 119
4.4.2 Validaciones. 122
4.4.3 Anlisis de resultados 129
4.5 ESTUDIO DE SENSIBILIDAD DEL MODELO 132
4.5.1 Perturbaciones en el subsistema cintico-qumico 135
4.5.2 Perturbaciones en el subsistema elctrico 153
Captulo 5 APLICACIONES 169
5.1 INTRODUCCIN 169
5.2 EL SIMULADOR 170
5.2.1 Diseo del simulador 171
5.2.2 Descripcin del simulador 174
5.3 EFECTOS DE DROGAS. 183
5.3.1 Efectos de la inyeccin de Cafena 10 mM 185
5.3.2 Efectos de la inyeccin de Forskolin 1 M 189
5.3.3 Efectos de la inyeccin de Rojo de Rutenio 1 M 192
5.3.4 Efectos de la inyeccin de Tapsigargin 1 M 195
5.4 EXTENSIONES DEL SIMULADOR 200
5.4.1 Ayuda para el ajuste de parmetros: Identificacin 200
5.4.2 Ayuda para la sntesis de resultados 203
5.5 CONCLUSIONES. 211
Captulo 6 CONCLUSIONES Y PERSPECTIVAS 214
6.2 PERSPECTIVAS 218
6.3 PUBLICACIONES CONCERNIENTES A ESTE TRABAJO. 220
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 221

iii
APNDICE A: Matlab functions 229
APNDICE B: Tcnica de patch-clamp 235
APNDICE C: Protocolo Experimental usado para medir concentracin de
calcio en el miocito de pollo.
237
APNDICE D: Datos experimentales usados para validar el modelo 238
APNDICE E: El programa cdigo de MyocyteSimulator 240
APNDICE F: Datos experimentales usados para validar el efecto de drogas 241

iv

ndice de Tablas
Tabla 3.1 Condiciones de borde de las variables del modelo 94
Tabla 3.2 Parmetros asociados a la geometra del miocito 96
Tabla 3.3 Parmetros asociados al transporte de calcio en el citosol 97
Tabla 3.4 Parmetros asociados al transporte de calcio en el retculo sarcoplsmico 97
Tabla 3.5 Parmetros asociados a las corrientes inicas 98
Tabla 3.6 Parmetros asociados a las concentraciones invariables del modelo 99
Tabla 3.7 Parmetros asociados a las constantes fsicas del modelo 100
Tabla 4.1 Condiciones iniciales para el sistema de ecuaciones diferenciales 108
Tabla 4.2 Parmetros modificados en el sistema de ecuaciones diferenciales 113
Tabla 4.3 Valores comparativos entre el modelo de Tang, el modelo de Fox y el
modelo propuesto.
118
Tabla 4.4 Validacin del modelo para diferentes especies de miocito 128
Tabla 4.5 Valores de las constantes cinticas de reaccin para el mecanismo de
reaccin de la bomba SERCA planteado por Mahaney et al., 2000.
147
Tabla 5.1 Validacin del modelo para diferentes tipos de drogas: Cafena, Forskolin,
Rojo de Rutenio, Tapsigargin.
199

v
Lista de Figuras

Figura 1.1 La Clula Cardiaca 9
Figura 1.2 Diagrama esquemtico del miocito 11
Figura 1.3 Esquema del sarcmero 12
Figura 1.4 Detalle en las miofibrillas 12
Figura 1.5 Canales L 14
Figura 1.6 Canales de Na
+
15
Figura 1.7 Poro del canal de Na
+
15
Figura 1.8 Canales de potasio 16
Figura 1.9 Canales de Rianodina 16
Figura 1.10 Esquema del intercambiador Na
+
-Ca
2+
18
Figura 1.11 Bomba Na
+
-K
+
y su ciclo de activacin 19
Figura 1.12 Enzima de la bomba SERCA 19
Figura 1.13 Ciclo de activacin de la bomba SERCA 20
Figura 1.14 Potencial de membrana 22
Figura 1.15 Dinmica de Calcio 22
Figura 2.1 Activacin de protenas 29
Figura 2.2 Estados de transicin tpicos para un canal de membrana 32
Figura 2.3 Identificacin de los parmetros K
m
y V
max
35
Figura 2.4 Dinmica del potencial de membrana y corrientes generadas por la actividad
de los canales de potasio
51
Figura 2.5 Esquema de miocito para el modelo de Tang y Othmer (1994) y Hamam y
colaboradores (2000).
60
Figura 2.6 Resultados de las simulaciones del modelo de Hamah: concentracin de calcio
respecto al tiempo
64
Figura 2.7 Esquema de la clula cardiaca utilizado en el modelo de Fox 65
Figura 2.8 Resultados de potencial de membrana para el modelo de Fox 65
Figura 2.9 Resultados de la concentracin molar del in calcio para el modelo de Fox 66
Figura 3.1 Miocito interpretado como sistema de reactores qumicos 72
Figura 3.2 Membrana celular con dipolo 76
Figura 3.3 Asociacin entre los elementos celulares del miocito y los parmetros
matemticos del modelo
101
Figura 4.1 Programa realizado en Simulink 107
Figura 4.2 Resultados del modelo generalizado para los ciclos de V. 115
Figura 4.3 Resultados del modelo generalizado para los ciclos de Ca
i
2+
. 115
Figura 4.4 Comparacin entre el modelo de Tang y el modelo propuesto para la dinmica
de Ca
i
2+
(miocito generalizado).
116

vi
Figura 4.5 Comparacin entre el modelo de Fox y el modelo propuesto para la dinmica
de Ca
i
2+
.
116
de V.
117
de I
Ca
.
117
Figura 4.8 Montaje experimental para el mtodo fluorescente. 122
Figura 4.9 Validacin de la dinmica de Ca
i
2+
para miocito canino. 123
Figura 4.10 Validacin de la dinmica de V para miocito canino. 123
Figura 4.11 Validacin de la dinmica de I
Ca
para miocito canino. 124
Figura 4.12 Validacin de la dinmica de V para miocito de conejo. 125
Figura 4.13 Validacin de la dinmica de I
Ca
para miocito de conejo. 125
i
2+
para miocito de pollo. 126
Figura 4.15 Detalle de la validacin de la dinmica de Ca
i
2+
para el miocito de pollo. 126
Figura 4.16 Dinmica de V simulada para el miocito de pollo. 127
i
2+
para miocito humano. 128
Figura 4.18 Simulacin de la dinmica de Ca
SR
2+
para las diferentes especies de miocito. 130
Figura 4.19 Simulacin de la dinmica de x
2
para las diferentes especies de miocito. 131
Figura 4.20 Simulacin de la dinmica de P
openL
para el miocito de perro y de conejo. 132
Figura 4.21 Efectos de las perturbaciones en el parmetro
1
l
sobre la dinmica de
2
x
.
136
1
l
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
136
1
l
sobre la dinmica de
V

136
1 m
l
sobre la dinmica de
2
x
.
138
1 m
l
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
138
1 m
l
sobre la dinmica de
V
.

138
d
F
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
140
d
F
sobre la dinmica de
V
.
140
1 d
K
sobre la dinmica de
CaM

141
1 d
K
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca

141
1 d
K
sobre la dinmica de
V

142
1
p
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca

143
1
p
sobre la dinmica de
+ 2
SR
Ca

143
1
p
sobre la dinmica de
V

144

vii
Figura 4.35 Efectos de las perturbaciones extremas en el parmetro
1
p
sobre la dinmica
de
+ 2
SR
Ca
.
145
1
p
sobre la dinmica
de
+ 2
i
Ca
.
145
1
p
sobre la dinmica
de
V
.
145
Figura 4.38 Simulacin de la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
150
V
.
150
+ 2
SR
Ca
.
150
1
q
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
152
1
q
sobre la dinmica de
V
.
152
K
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
153
K
sobre la dinmica de
V
.
153
Na G
sobre la dinmica de
V
.
154
Na G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
154
Nab G
sobre la dinmica de
V
.
155
Nab G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
155
1 K G
sobre la dinmica de
V
.
156
1 K G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
156
to G
sobre la dinmica de
V
.
157
to G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
157
Kp G
sobre la dinmica de
V
.
158
Kp G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
158
Kr G
sobre la dinmica de
V
.
158
Kr G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
158
Ks G
sobre la dinmica de
V
.
159

viii
Ca P
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
160
Ca P
sobre la dinmica de
V
.
160
CaK P
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
161
CaK P
sobre la dinmica de
V

161
Cab G
sobre la dinmica de
V
.
162
Cab G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
162
max pCa
I
sobre la dinmica de
V
.
163
max pCa
I
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
163
NaCa
k
sobre la dinmica de
V
.
164
NaCa
k
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
164
max NaK I
sobre la dinmica de
V
.
165
max NaK I
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca
.
165
Figura 4.70 Ciclo de voltaje y su interrelacin con las descripciones matemticas del
modelo.
168
Figura 4.71 Ciclo de concentracin del in calcio y su interrelacin con las descripciones
matemticas del modelo
168
Figura 5.1 Interfaz de MATLAB 173
Figura 5.2 Pantalla principal del simulador. 174
Figura 5.3 Pantalla principal del simulador: comandos para cargar los resultados
simulados y experimentales y para realizar grficos.
176
Figura 5.4 Pantalla secundaria para el modelo de Tang y Othmer (1994). 177
Figura 5.5 Pantalla secundaria para el modelo de Fox y colaboradores (2001). 178
Figura 5.6 Pantalla secundaria para el modelo propuesto (Roche y colaboradores, 2004). 179
Figura 5.7 Ejecucin de los comandos Perturbation y Run. 181
Figura 5.8 Ejecucin de los comandos Run y Save. 182
Figura 5.9 Pantalla adicional de slo grfico (opcin Only Figure). 183

ix
Figura 5.10 Validacin de la dinmica de
+ 2
i
Ca
con inyeccin de Cafena 10mM.
187
Figura 5.11 Detalle de la validacin de la dinmica de
+ 2
i
Ca
con inyeccin de Cafena
10mM.
187
SERCA
FQ
y de
Ca ENa
FQ

con inyeccin de
Cafena 10mM.
187
2
x
187
V
188
+ 2
i
Ca
con inyeccin de Forskolin 1M.
190
+ 2
i
Ca
con inyeccin de Forskolin
1M
190
V
con inyeccin de Forskolin 1M.
191
+ 2
i
Ca
con inyeccin de Rojo de Rutenio 1M.
193
+ 2
i
Ca
con inyeccin de Rojo de
Rutenio 1M.
193
2
x
193
+ 2
SR
Ca con inyeccin de Rojo de Rutenio 1M
193
Ca
I
194
V
194
+ 2
i
Ca
con inyeccin de Tapsigargin 1M.
197
+ 2
i
Ca
con inyeccin de Tapsigargin
1M.
197
2
x
con inyeccin de Tapsigargin 1M.
197
+ 2
SR
Ca
con la inyeccin de Tapsigargin 1M.
197
SERCA
FQ
198
V
198
Figura 5.30 Pertenencia a un sub-conjunto (a) clsico, (b) borroso. 204
Figura 5.31 Varias funciones de pertenencia. 205
Figura 5.32 Estructura general de un SIB 206
Figura 5.33. Mecanismos de inferencia difusa. 208
Figura 5.34 Funciones de pertenencia para la especificacin de una entrada en un sistema
difuso.
208
Figura 5.35 Propuesta para el SIB-A. 209
Figura 5.36 Propuesta para el SIB-B. 210
Figura 6.1 Esquema para el diseo de autmatas celulares. 219

Introduccin General 1
INTRODUCCIN GENERAL

La cuestin ms importante para la ciencia no es descubrir nuevos hechos sino descubrir nuevas maneras de pensar en ellos .
-Sir William Bragg-

Este trabajo est enmarcado en un proyecto franco-venezolano de cooperacin cientfica,
financiado por ECOS-Nord (Ministre des Affaires trangres, Francia) y FONACIT
(Ministerio de Ciencia y Tecnologa, Venezuela), titulado: Modelado de fenmenos
cardiacos: de la clula al rgano.

En el proyecto participan el grupo venezolano de modelado y simulacin del Departamento de
Procesos y Sistemas de la Universidad Simn Bolvar, en Caracas, y tres grupos franceses: el
Laboratorio de Sistemas Informticos (A2SI) del Instituto ESIEE (cole Suprieure
dIngnieurs lectroniques et lectrotechniques) de Pars; la Unidad 99 del Instituto INSERM
(Institut National de la Sant et de la Recherche Mdicale), tambin de Paris; y el Laboratorio
LAIL de la Ecole Centrale de Lille, en Lille-Francia.

La principal meta del proyecto es reunir dos aspectos convergentes del modelado de funciones
cardiacas: el nivel celular y el nivel orgnico. La presente tesis, realizada en la Universidad
Simn Bolvar y en el A2SI del ESIEE (Paris), est dedicada al modelado de la clula cardiaca.

Las clulas cardiacas, denominadas tambin miocitos, conforman el tejido del msculo
cardiaco y su comportamiento dinmico est a la base del fenmeno contraccin-relajacin. La
cabal comprensin de su funcionamiento es muy importante porque las enfermedades del
corazn, que presentan una alta incidencia y son una de las principales causas de muerte en
muchos pases, estn en su mayora relacionadas con la inactivacin o un inadecuado
funcionamiento de los miocitos.

El objetivo de modelar el comportamiento celular se justifica porque el modelado cuantitativo en
biologa experimental permite reemplazar una parte notable de los experimentos in vivo e in vitro
por experimentos "in computero". experimentos in vivo e in vitro por experimentos "in computero".
Esto tambin permite definir bien los procedimientos de experimentacin en s mismos, gracias a
las capacidades de prediccin de los modelos cuantitativos: las simulaciones informticas y
numricas de estos modelos son comparadas con los resultados de la experimentacin biolgica
sobre el tejido vivo. Las tcnicas de identificacin finalmente pueden lograr una validacin del
modelo cuantitativo y su mejor ajuste a los comportamientos reales observados. El desarrollo de
drogas de accin especfica por ejemplo, para tratar las enfermedades cardiacas, requiere entender
de manera ms detallada cmo sucede el proceso de excitacin-contraccin y relajacin y cules
son los elementos celulares involucrados. En este sentido, el modelado matemtico representa una
excelente herramienta pues permite formalizar cuantitativamente el conocimiento
fenomenolgico que se posee del comportamiento del miocito, mediante la aplicacin de leyes
fundamentales de la fsica y de la bioqumica, y combinarlo con el conocimiento experto (basado
en observaciones y datos experimentales).

Es bien conocido que el in calcio es el principal regulador de la actividad de las clulas cardiacas.
El transporte de este in hacia el interior y/o exterior del miocito da lugar a fenmenos de
naturaleza qumica (variacin de la concentracin del in calcio y otros iones) y elctrica (cadas de
voltaje) que modulan el proceso de excitacin-contraccin y relajacin (Bryan et al., 1994, Guyton
et al., 1994).

En la literatura especializada se encuentran trabajos dedicados al modelado de estos fenmenos
en dos modalidades:

Modelado de los elementos celulares: Este tipo de representacin es fenomenolgica y su
principal inters es establecer los mecanismos mediante los cuales los elementos celulares
influyen sobre la actividad cardiaca. Estos modelos slo describen interacciones muy
especficas y aisladas para estudiar la naturaleza de un elemento celular en particular ms
no permiten obtener informacin global sobre el comportamiento del miocito. Adems,
como son modelos netamente fenomenolgicos algunas propuestas pueden llegar a tener
expresiones matemticas muy complejas y por lo tanto costosas desde el punto de vista
computacional. Ejemplos de estas contribuciones estn dadas en los trabajos de: Smith y
colaboradores (2000), Fabiato (1985), Rothberg y Magleby (1999), Fujioka y colaboradores
(2000), Mahanay y colaboradores (2000), Therien y Blostein, 1999, Kurata y colaboradores
(1999).

Modelado de la clula cardiaca como un todo: Existen numerosas contribuciones sobre
modelos que intentan representar el miocito integralmente. Algunas formulan la dinmica
de transferencia de masa entre los diferentes elementos celulares que se interpretan como
compartimientos (Tang y Othmer, 1994, Hamah et al, 2000, Roche et al, 2003, Rocaries
et al, 2004), describiendo solo los fenmenos cintico-qumicos involucrados. Estos
modelos logran una buena prediccin del comportamiento de la dinmica de calcio pero
no pueden predecir el comportamiento elctrico de la clula y es ste precisamente el que
se detecta ms rpidamente a nivel clnico en un paciente. Por otra parte, existen modelos
dedicados solo a la descripcin de los fenmenos elctricos, que interpretan la clula
como una pila o batera, y que obtienen una correcta prediccin de la dinmica de voltaje
ms no de la concentracin de calcio. Actualmente existen muchos trabajos realizados
bajo esta perspectiva, sin embargo, la mayora de ellos estn basados en las propuestas
iniciales planteadas en el modelo de Luo y Rudy, 1994 y en el modelo de Noble, 1994.

Este trabajo de tesis se enfoca fundamentalmente a la obtencin de un modelo dinmico global de
la clula cardiaca, que contenga una descripcin tanto de los fenmenos qumicos y de
transferencia de masa, como de los elctricos, y de las interrelaciones entre ellos. Para lograrlo, se
propone interpretar la clula como un sistema de micro-reactores qumicos interconectados.
Naturalmente se incluyen las descripciones disponibles de subsistemas celulares bien conocidos y
se trabaja en el mejoramiento de otras. Se desea obtener un modelo que posea una estructura
bsica fundamentada en la fenomenologa del proceso y que permita entonces aislar efectos en
elementos especficos del sistema. Sin embargo, los elementos muy complejos y/o
imperfectamente comprendidos se representan con estructuras ms sencillas de parmetros
ajustables. Esto apunta a un doble propsito: evitar una excesiva complejidad del modelo y
permitir su adaptacin a diferentes situaciones.

En resumen se orienta el desarrollo del modelo a formular de manera que se logre:

Que las ecuaciones matemticas del modelo representen tanto la dinmica qumica como
la dinmica elctrica. Esto permite estudiar las importantes interdependencias que existen
entre ellas y representar efectivamente a la clula en su totalidad.
Que se pueda utilizar el conocimiento fenomenolgico existente de cada elemento celular
en este modelo global. En este sentido, la estructura del nuevo modelo debe ser capaz de
asociar parmetros matemticos a elementos celulares especficos permitiendo as la
identificacin de cada una de las partes que componen el miocito.
Que se garantice el compromiso entre complejidad y computabilidad, pues si bien es
cierto que la fenomenologa puede conllevar a expresiones matemticas complicadas,
tambin es cierto que a partir de stas deben obtenerse soluciones numricas a la vez
rpidas y precisas.
Que el modelo pueda ajustarse a distintas condiciones (por ejemplo: estudio de diferentes
especies animales) y/o someterse a perturbaciones (por ejemplo: inyeccin de drogas).
Esto tiene como ventaja ampliar el alcance de las aplicaciones del modelo.

Por otra parte, la necesidad de integrar el conocimiento e informacin generado por los diversos
modelos matemticos formulados y el avance en materia de informtica en las ltimas dcadas
han permitido el desarrollo de una gran cantidad de simuladores. Los simuladores celulares,
utilizan algn lenguaje de programacin (FORTRAN, C+, DELPHIS, MATLAB) para la
resolucin numrica automtica de los modelos, reproduciendo el comportamiento de una clula
real, razn por la cual, muchos investigadores denominan a los simuladores: clulas virtuales
(Zhang et al, 2003). Los simuladores permiten modificar los valores de los parmetros del
modelo, lo que equivale al estudio de la clula bajo diferentes condiciones. De esta manera se
ahorra tiempo y dinero en el diseo de protocolos experimentales y en la bsqueda de
tratamientos para las enfermedades cardiacas. As mismo, los simuladores se usan como
herramienta de enseanza didctica en el medio acadmico.

La evolucin de las clulas virtuales sigue la misma tendencia que la de los modelos
matemticos globales y hoy da la mayora de estos simuladores slo estn enfocados en describir
de manera parcial el comportamiento de las clulas cardiacas. Especficamente, todos los
simuladores desarrollados hasta el momento y que se describen a continuacin, utilizan modelos
del miocito que representan muy bien la dinmica elctrica pero que fallan en la prediccin de la
dinmica qumica:

OxSoft HEART: se comenz a desarrollar desde el ao 1984 y est basado en los
diferentes modelos propuestos por Denis Noble (Noble et al., 1994) y/o Raimond
Winslow (Winslow et al., 1999). Utiliza el lenguaje de programacin Borland Pascal y es
bastante rpido: requiere 3 segundos de ejecucin de tiempo real para simular 1 segundo
del comportamiento celular (Khol y Noble, 2003). La ltima versin del ao 1999, se
denomina OxSoft HEART 4.X (Noble, 1999).

CardioPrism: se basa en los modelos propuestos por Luo y Rudy (1994), est dirigido a
la industria farmacutica para el diseo de tratamientos de las enfermedades cardiacas y es
netamente comercial (Zenglan, 2001).

iCell: es un simulador programado en el lenguaje Java, el cual es bastante flexible,
permitiendo que iCell pueda ejecutarse en lnea desde Internet, sin importar el sistema
operativo disponible en el computador. No obstante, para ejecutar iCell sin conexin a
Internet es necesario pedir un permiso especial a sus creadores (Demir, 1998). Tambin se
basa en un modelo elctrico desarrollado a partir del modelo propuesto por Luo y Rudy
(1994).

En los ltimos aos, la disponibilidad de lenguajes de programacin que emulan pantallas con
grficos integrados tipo ventanas (Windows) han permitido el desarrollo de simuladores mucho
ms potentes desde el punto de vista grfico. Tal es el caso de LabHeart (Puglisi y Bers, 2001)
que utiliza el lenguaje de programacin LabView para implementar modelos celulares y
presentarlos en una interfaz bastante amigable para los usuarios. Sin embargo, LabHeart es
bastante lento, pues para obtener 1 s de simulacin de una clula de miocito de cerdo, con un
modelo relativamente sencillo como el de Luo y Rudy (1994), requiere ejecutar 10 s de tiempo real
en un procesador del tipo Intel Pentium IV 1.8 Ghz. Esto es debido a las limitaciones incapacidad
del lenguaje de programacin LabView para resolver con rapidez las complejas ecuaciones
matemticas propias de los modelos celulares (Khol y Noble, 2003).

En este trabajo se pretende tambin desarrollar un simulador de la clula cardiaca bajo un sistema
operativo tipo ventanas que permita al usuario la resolucin dirigida del modelo propuesto. Los
objetivos en este aspecto se pueden resumir en lo siguiente:

Que el modelo propuesto pueda ser utilizado por mdicos y bilogos para fines
acadmicos o investigativos. En este sentido, el simulador del modelo debe ser intuitivo y
amigable sin que esto sacrifique la rapidez y precisin de la resolucin numrica, y con una
buena ayuda grfica.
Que sea posible un proceso de ajuste interactivo del modelo para emular situaciones
experimentales reales, indicando al usuario cules parmetros asociados a elementos
celulares especficos deben ser modificados.
Que el modelo pueda ser comparado con otros modelos disponibles.

El presente documento est organizado en seis captulos de la siguiente manera:

En el captulo 1 se describe el sistema miocito. Se presenta un breve resumen sobre la
anatoma y el comportamiento de la clula cardiaca: se detallan los componentes de la
clula que permiten el movimiento de contraccin y relajacin y se explica la fisiologa
bsica del proceso que da lugar a este movimiento.

En el captulo 2 se realiza una revisin histrica de los modelos matemticos existentes
para representar en todo o en parte a la clula cardiaca. Se retoman las leyes
fenomenolgicas utilizadas en cada caso y se analizan la aplicabilidad y las limitaciones de
cada modelo. Se resumen las diferentes contribuciones de modelado de los diversos
fenmenos fsicos, qumicos y elctricos aislados del miocito y se presenta una breve
revisin de los modelos celulares conocidos hasta el presente.

En el captulo 3 se desarrolla el nuevo modelo matemtico de la clula cardiaca. Para ello,
se concibe la clula como un sistema de micro-reactores interconectados que tienen
caractersticas y fronteras claramente definidas. En funcin de esta perspectiva se
formulan las ecuaciones del modelo, estipulando las consideraciones fsicas,
simplificaciones, parmetros y condiciones de borde necesarias.

En el captulo 4 se obtiene la resolucin numrica del modelo planteado en el captulo 3,
precisando sus variables de entrada y de salida y formulando sus condiciones iniciales. Se
realizan las validaciones del modelo en diferentes situaciones que permiten comparar sus
resultados con los de otros modelos propuestos en la literatura, y tambin adaptarlo a
clulas de diferentes especies. En particular se valida el modelo para miocitos de pollo, de
perro, y de conejo y para el miocito humano. En este captulo adems se presenta un
detallado estudio de sensibilidad del modelo, que permite analizar cules variaciones
paramtricas inducen cambios y de qu tipo en los perfiles de las respuestas temporales.

En el captulo 5 se desarrolla el simulador que contiene el modelo propuesto. Se explican
las funciones y comandos diseados para utilizarlo y se muestra una de sus aplicaciones
para validar los efectos que inducen la inyeccin de ciertas drogas (Cafena, Forskolin,
Rojo de Rutenio y Tapsigargin) en la dinmica de calcio y de voltaje. As mismo se
plantean ideas para extender las capacidades del simulador en el futuro.

Finalmente se concluye acerca de los aportes de este trabajo y se discuten las perspectivas
de avance en esta rea de investigacin.

La Clula Cardiaca

8
C a p t u l o 1

LA CLULA CARDIACA

Nada en la vida es para ser temido solo para ser entendido.
-Marie Curie-

1.1 INTRODUCCIN.

La clula cardiaca tambin llamada miocito o cardiomiocito forma en gran parte el tejido
cardiaco y constituye un sistema biolgico altamente especializado. En el miocito ocurren una
serie de fenmenos electroqumicos muy complejos que involucran principalmente a las
especies inicas Ca
2+
, K
+
y Na
+
y que dan lugar a un especial ciclo de contraccin y relajacin
que cumple la clula y que es el responsable del movimiento rtmico del corazn. En
consecuencia la comprensin de la dinmica inica y en especial del in calcio es indispensable
en las investigaciones sobre cualquier aspecto relativo al corazn o sus patologas.

En este captulo se presenta un breve resumen sobre la anatoma y el comportamiento de la
clula cardiaca. En la seccin 1.2 se describen los componentes de la clula y aquellos elementos
presentes en ella, que permiten el movimiento de contraccin y relajacin. La fisiologa bsica
del proceso que da lugar a este movimiento se explica en la seccin 1.3.

1.2 ANATOMA DE LA CLULA CARDIACA.

A pesar de las diferentes funciones que realizan las clulas del cuerpo humano, todas ellas presentan
una estructura comn y general (Guyton, 1994). En tal sentido, en la clula cardiaca se distinguen: (i)
la membrana celular o sarcolema que rodea a la clula y la separa del medio exterior; (ii) el citoplasma o
citosol que es una matriz lquida donde estn suspendidos todos los elementos celulares; (iii) el ncleo que
La clula cardiaca 9
sirve para la reproduccin celular. Sin embargo, en el miocito existen adems otros importantes
elementos: (iv) el retculo sarcoplsmico que es una estructura que se encuentra dentro del citosol y
acta como un regulador al acumular o liberar los iones de calcio; (v) las miofibrillas que son haces
moleculares (o sarcmeros) que estn suspendidos en el citosol y son las unidades contrctiles de la
clula.

En la figura 1.1 se muestra un dibujo aproximado de una clula cardiaca y seguidamente se
presentan las descripciones de sus diferentes componentes.

Figura 1.1 La clula cardiaca
1
.
1.2.1 El Sarcolema.

El sarcolema es una estructura delgada y elstica formada casi por completo por protenas y lpidos
cuyo papel fundamental es regular el intercambio de iones entre los medios intra y extra celular
(Bray et al., 1994). Para ello, la membrana contiene protenas integrales que protruyen a su travs y
que proporcionan canales estructurales o poros por medio de los cuales se pueden difundir las

1
Figura tomada de la base de datos de EKU Biology Courses disponible en
http://www.biology.eku.edu/RITCHISO/301notes3.htm.
La clula cardiaca 10
sustancias hidrosolubles, en especial los iones, desde el interior hacia el exterior de la clula y
viceversa. Los poros o canales del sarcolema son altamente selectivos porque su activacin depende
del tipo de afinidad qumica y/o elctrica que presenta cada in con los elementos que constituyen
el canal.

Otras protenas integrales del sarcolema actan como protenas transportadoras para llevar
sustancias en sentido opuesto a su sentido natural de difusin, esto es, desde el medio de menor
concentracin hasta el medio de mayor concentracin. Este transporte requiere el consumo de
energa la cual proviene del ciclo de transformacin del ATP
2
.

Los ms importantes canales encontrados en el sarcolema son: los canales de calcio o canales L, los
canales de potasio y los canales rpidos de sodio. As mismo, las principales protenas
transportadoras son llamadas el intercambiador Na
+
-Ca
2+
, la bomba Na
+
-K
+
y la bomba
ATPasa del sarcolema.

La figura 1.2 muestra un diagrama esquemtico de la clula cardiaca donde estn sealados los
diferentes elementos que la componen y tambin se muestran las concentraciones inicas tpicas
que existen en el medio extracelular y aquellas que hay en el citosol en estado de reposo.

1.2.2 El retculo sarcoplsmico.

El retculo sarcoplsmico (SR) es una estructura en forma de red localizada en el citosol y abrazada al
sarcolema mediante interconexiones (invaginaciones del sarcolema) en forma de tubos
denominados tubos T (Bray et al., 1994). Contiene altas concentraciones de calcio inico que es
liberado hacia el citosol mediante canales llamados canales de Rianodina (Fabiato, 1985). El

2
Como es bien sabido el ATP o Adenosin Trifosfato es una enzima sintetizada abundantemente en todas las clulas,
que en medio acuoso sufre lo que se denomina hidrlisis o desfosforilacin del ATP. Esto es una reaccin qumica que
libera una gran cantidad de energa que es aprovechada por otras reacciones a diferentes niveles en las clulas (Kargacin y
Kargacin, 1997).

calcio liberado es luego recapturado por una protena transportadora embebida en el retculo
sarcoplsmico y denominada bomba SERCA. La funcin principal del retculo sarcoplsmico es
controlar la liberacin y recaptura de calcio en el citosol. (Ver figuras 1.1 y 1.2).

Figura 1.2 Diagrama esquemtico del miocito.

1.2.3 Las miofibrillas.

Las Miofibrillas o unidades contrctiles de la clula cardiaca son pequeas fibras que contienen
repetidos grupos moleculares llamados sarcmeros, los cuales representan la unidad bsica o
elemental de contraccin del miocito. El sarcmero est compuesto principalmente por dos
filamentos proteicos: miosina y actina y se muestran esquemticamente en la figura 1.3. La miosina
es el filamento grueso del sarcmero, contiene dos cabezas o sitios activos para el ATP y posee un
peso molecular de ~470 kDa. Existen aproximadamente 300 molculas de miosina por cada
filamento de actina. La actina es el filamento delgado del sarcmero que contiene adems la
tropomiosina y la troponina. Este conjunto es denominado el complejo proteico regulatorio (ver
figura 1.4).

Citosol

Intercambiador
Na
+
-Ca
2+

3 Na
+

Ca
2+

Canales de
Na
+

Bomba ATPasa
del Sarcolemma
2 Na
+

3 K
+
Bomba Na
+
-K
+

Na
+

Ca
2+

Canal L
Miofibrillas

Canales de K
+

Ca
2+

Sarcolema
Bomba SERCA
Canales
Rianodina
K
+
140 mM
Na
+
5-15 mM
Ca
2+
0,1 M
Cl
-
5-15 mM
Concentraciones en reposo

Retculo
Sarcoplsmico
K
+
5 mM
Na
+
145 mM
Ca
2+
1-2 mM
Cl
-
110 mM
Concentraciones en
el medio extracelular

K
+

La actina es una protena globular colocada sobre un arreglo de unidades repetidas que forma una
hlice y que est intercalada con la tropomiosina en la relacin de 6-7 molculas de actina por una
de tropomiosina (ver figura 1.4). La tropomiosina contiene a su vez intervalos regulares del
complejo de troponina el cual est hecho de tres subunidades: troponina T (TN-T), troponina-C
(TN-C), que sirve de sitio activo para el calcio y troponina-I (TN-I) la cual inhibe el sitio de
activacin entre la miosina y la actina (Bray et al., 1994).

Las importantes fluctuaciones que ocurren en la concentracin de calcio inico presente en el
citosol dan lugar a las interacciones fsicas y qumicas que ocurren entre la actina, la miosina, el ATP
y el in calcio, que hacen que el sarcmero cambie de longitud causando la contraccin de las
miofibrillas. Este proceso se explica en la seccin 1.3.

Figura 1.3 Esquema del Sarcmero
3
.

3
Figura tomada de la base de datos de Scientia Review disponible en:
http://www.scientia.org/cadonline/Biology/specialcells/sarcomere.ASP.
Miosina
Actina
Tropomiosina
Troponina
Calcio
ATP
Figura 1.4 Detalle en las miofibrillas
4
.
1.2.4 Elementos celulares.

Todas las protenas (canales y protenas transportadoras) contenidas en el sarcolema y en el retculo
sarcoplsmico juegan un rol importante en la ocurrencia y regulacin de los procesos fisiolgicos del
miocito, por lo tanto, en los prximos prrafos se describe en una forma detallada, la funcin y
composicin de estos elementos.

a) Canales:

Canales L:

Los canales L o canales de calcio son protenas muy especializadas que seleccionan los iones
de calcio en el exterior, donde se encuentran en menor proporcin respecto a los otros
iones de Na
+
y K
+
, para hacerlos pasar hacia el interior de la clula. Cada canal L est
compuesto por cuatro grupos carboxilatos que contienen a su vez subunidades llamadas 1,
2, y (ver figura 1.5) formadas por 300-400 aminocidos repetidos en secuencias de
cuatro5. La subunidad 1, es una subunidad larga de peso molecular 175-230 kDa capaz de
responder a cambios de voltaje
6
. El resto del canal es altamente sensible a enlazarse con
iones calcio. Para que el canal L se active o se abra y deje pasar los iones calcio, es
necesario que la subunidad 1 detecte un voltaje positivo en la membrana. La desactivacin
o cierre del canal ocurre cuando existe un voltaje negativo en la membrana y un aumento
en la concentracin de calcio inico en el citosol (Chunlei, 2001).

4
Figura tomada de la base de datos de Harris and Sabbadini Courses disponible en:
http://www.sci.sdsu.edu/movies/actin_myosin_gif.html.
5
Una revisin ms detallada de estos canales puede encontrarse en la base de datos de Med web Voltage-operated
calcium channels (VOCC) disponible en: http:// medweb.bham.ac.uk/ research/ calcium/ Homeostasis/ VOCC.html
# anchor414561.
6
El voltaje es un importante mecanismo regulador en la funcin de la clula cardiaca y en las funciones que llevan a cabo
los diferentes elementos celulares que la componen. Este fenmeno se debe a la diferencia de concentraciones inicas
que existe entre el medio extra e intracelular y la explicacin de su comportamiento y papel regulador en el miocito es
dado con mayor detalle en la seccin 1.3.

Figura 1.5 Canales L
7
.

Canales rpidos de sodio:

Los canales de sodio son protenas capaces de generar rpidamente un cambio de voltaje en
el sarcolema, de all que se denominen canales rpidos de sodio. Cada canal posee una
subunidad principal que es una cadena polipptida de ms de 1800 aminocidos
8
. La cadena
contiene a su vez segmentos con lados no polares que interactan con los lpidos de la
membrana celular formando grupos denominados alfa hlices de transmembrana. Existen
aproximadamente 24 grupos alfa hlices por cadena polipptida. En la figura 1.6 se muestra
4 grupos de alfa hlices que forman filas a lo largo del sarcolema. Cada grupo posee una
secuencia similar de aminocidos constituyendo bloques con una simetra cclica que permite
formar poros (figura 1.7). Los poros o canales son altamente selectivos pues iones
parecidos al Na
+
como el in K
+
no pueden atravesarlos. La actividad de estos canales est
modulada por el voltaje en el sarcolema (Oin et al., 2000).

7
Figura tomada de Striessnig, 1999.
8
Una revisin ms detallada puede encontrarse en la base de datos de Transport Classification disponible en:
http://tcdb.ucsd.edu/index.php.

LL
Citosol
Ca
2+

inactivacin
Voltaje

Figura 1.6 Canales de Na
+ 9
.

Figura 1.7 Poro del canal de Na
+ 10
.

Canales de potasio:

Los canales de potasio son protenas que se activan por el calcio intracelular y el voltaje
positivo en la membrana (Magleby y Pallotta, 1983, Methfessel y Boheim, 1982, Wong et al.,
1982). Una vez abiertos, existe un flujo pasivo de potasio hacia el medio extracelular lo que
hace que el voltaje en la membrana celular se haga ms negativo. De esta forma los canales
de potasio contribuyen a regular el voltaje en la clula lo que es muy importante para su
funcionamiento. Algunas de las regiones que conforman el poro del canal de potasio han
sido identificadas, encontrndose subunidades llamadas que forman estructuras muy
parecidas a tetrmeros de manera similar a los canales L (Shen et al., 1994). Adems dentro
de dichos tetrmeros se encuentra tambin un censor o elemento sensible al voltaje
denominado S4 y sitios de alta afinidad con el calcio intracelular (Atkinson et al., 1991;
Butler et al., 1993). En la figura 1.8 se muestra un esquema de estos canales de
transmembrana.

9
Figura tomada de la base de datos de Transport Classification disponible en: http://tcdb.ucsd.edu/index.php.
10
Na
+


Figura 1.8 Canales de potasio
11
.

Canales de Rianodina o Canales R:

Denominados as debido a que dichos canales se bloquean con un alcaloide denominado
Rianodina, son protenas embebidas en la membrana del retculo sarcoplsmico que
presentan una conformacin tetradrica como se muestra en la figura 1.9. Su conformacin
tiene dos caras, una hacia el citosol y otra hacia el retculo sarcoplsmico. Los canales de
Rianodina son altamente sensibles a los cambios de concentraciones de in calcio en el
citosol, donde tienen sus puntos activos y se abren o cierran de acuerdo a los cambios en
dicha concentracin (Fabiato, 1985; Tang y Othmer, 1994). La apertura de estos canales
permite el paso difusivo de calcio desde el retculo sarcoplsmico hacia el citosol.

Figura 1.9 Canales de Rianodina
12
.

11
12
Figura tomada de la base de datos de Diwan, Rensselaer Biochemistry of Metabolism Course disponible en:
http://www.rpi.edu/dept/bcbp/molbiochem/MBWeb/mb1/part2/casignal.htm.
citosol
extracelular

N
C
H5
1

2

3

4

5

6
+
+

K
+

b) Protenas Transportadoras:

Intercambiador Na
+
-Ca
2+
:

El intercambiador Na
+
-Ca
2+
es una protena construida por 970 aminocidos que tiene un
peso molecular de 108 kDa. Esta protena contiene dos grupos de transmembrana que son
segmentos separados por un largo lazo citoplasmtico de aproximadamente 500
aminocidos. Los dos grupos de transmembrana contienen sendos sitios reguladores los
cuales tienen la propiedad de servir de puentes entre la clula y el medio extracelular para
transportar los iones Na
+
y Ca
2+
en contra de su sentido natural de difusin. Uno de los
sitios es afn con el in calcio (Levitsky et al., 1994) y el otro sitio es modulado por el voltaje
del sarcolema. La principal funcin del intercambiador es extraer calcio del citosol en una
relacin estequiomtrica fija: por cada in calcio extrado se inyectan tres iones sodio desde
el exterior hacia el citosol. La actividad del intercambiador es inversamente proporcional a la
concentracin de calcio en el citosol. Se considera que el intercambiador es el principal
mecanismo de salida de calcio desde el citosol hacia el medio exterior. La figura 1.10
muestra un esquema del intercambiador Na
+
-Ca
2+
.

Citosol
-2 sitio
alternativo

Sar colema
-1
-2
-1

Ca
2+
sitio

Figura 1.10 Esquema del intercambiador Na
+
-Ca
2+
.

Bomba Na
+
-K
+
:

Es una protena conformada por dos unidades esenciales y . La unidad es cataltica y
afn con el Na
+
y el K
+
y se encuentra modulada por la hidrlisis del ATP. La unidad es
requerida para la insercin y estabilidad de la bomba Na
+
-K
+
en el sarcolema y tambin para
el transporte del Na
+
y del K
+
(Therien y Blostein, 1999). La bomba Na
+
-K
+
usa la energa
derivada de la hidrlisis de una molcula de ATP para extraer tres iones de Na
+
del citosol e
importar dos iones de K
+
en contra del sentido natural de difusin de ambos iones. La
actividad de la bomba Na
+
-K
+
es modulada por la concentracin del Na
+
y del K
+
y por el
voltaje. De hecho el aumento de voltaje en el sarcolema estimula la actividad de la bomba
Na
+
-K
+
. La figura 1.11 muestra el cambio conformacional que ocurre para que la bomba
Na
+
-K
+
funcione.

Bomba ATPasa del Sarcolema y bomba SERCA:

Ambas protenas pertenecen a la misma familia de las bombas tipo ATPasa (MacLennan y
Kranias, 2003) por lo cual su estructura y mecanismo de activacin son similares. Son
protenas enzimticas de transmembrana que poseen un peso molecular de 110 kDa
(Mahaney et al., 2000). Contienen un sitio de accin especfico para el ATP y dos sitios
especficos para el in calcio y usan la energa que proporciona la hidrlisis del ATP para
mover el in calcio en contra del sentido natural de difusin. La bomba ATPasa del
sarcolema mueve el calcio hacia el medio extracelular y la bomba SERCA captura el calcio
del citosol para llenar el retculo sarcoplsmico. La figura 1.12 muestra la enzima de la
bomba SERCA y la figura 1.13 muestra el cambio conformacional que ocurre en la enzima
de dichas bombas para que el transporte de los dos iones de calcio tenga lugar.

Figura 1.11 Bomba Na
+
-K
+
y su ciclo de activacin
13
.

Figura 1.12 Enzima de la bomba SERCA
14
.

13
Figura tomada de la base de datos de Mark Dalton disponible en:
http://www.cbc.umn.edu/~mwd/cell_www/chapter2/Na-Kpump.html.
14

Figura 1.13 Ciclo de activacin de la bomba SERCA
15
.

1.3 FISIOLOGA DE LA CLULA CARDACA.

Inicialmente la clula cardiaca se encuentra en condicin de reposo (relajada) con un voltaje o
potencial de reposo y una concentracin mnima de calcio en el citosol (0,1 M). El potencial de
reposo existe debido a la diferencia de concentraciones inicas entre un lado y otro de la membrana
celular (ver figura 1.2). El sarcolema es selectivamente permeable al in K
+
pero no al in Na
+
, esto
hace que el in K
+
tienda a difundirse hacia afuera dejando una carga negativa en el citosol. Los
valores tpicos para este potencial de reposo varan entre -90 a -60 mV (Chunlei, 2001).

A partir de esta condicin de reposo la clula est preparada para que ocurran una serie de
fenmenos de transferencia de masa, transformaciones qumicas y flujos inicos dentro de ella, que
a su vez dan lugar al proceso de excitacin-contraccin y relajacin. Aunque estos fenmenos son
simultneos y continuos dentro del miocito, el proceso de excitacin-contraccin y relajacin puede
ser descrito secuencialmente mediante una serie de eventos concatenados como se explica a
continuacin.

- Primer evento:

El primer evento (I) o excitacin consiste en la entrada del in calcio desde el medio extracelular
hacia el citosol y ocurre en buena medida por un gradiente de concentracin. Este evento se

15

desencadena a partir de una seal elctrica externa
16
que estimula el voltaje o potencial del sarcolema
(Bray et al., 1994) y hace que el interior de la clula sea menos negativo en voltaje, el cual pasa de -
80mV a 0 mV (figura 1.14). Como consecuencia directa de esta accin, lo canales que son
dependientes del voltaje se activan.

En trminos de voltaje este perodo es conocido como despolarizacin de la membrana. El
sarcolema repentinamente se vuelve permeable a los iones de Na
+
porque los canales rpidos de
Na
+
se abren permitiendo el flujo de estos iones al interior del miocito. A su vez el potencial de
membrana aumenta ms y rpidamente y comienza a ser ms positivo, subiendo hasta los 35 mV
(Fox et al., 2001).

Simultneamente los canales L se activan (Zahradnikova et al., 1999), permitiendo la difusin de
iones de Ca
2+
desde el exterior de la clula hacia el citosol. La concentracin de calcio extracelular es
del orden de 2000 M, comparativamente muy superior a la del citosol en su estado de reposo (0,1
M). Este gradiente qumico es el que impulsa la entrada de calcio al citosol aumentando su
concentracin desde 0,1 M hasta 0,14 M (Lecarpentier, 1996 - Ver figura 1.15). Estos canales
permanecen activos un cierto perodo en el que en consecuencia el potencial de accin se estabiliza
y presenta una forma de meseta o plateau tpico de los miocitos ventriculares (figura 1.14).

- Segundo evento:

El aumento de la concentracin del in calcio en el citosol, es capaz a su vez de estimular los canales
de Rianodina existentes en la membrana del retculo sarcoplsmico el cual es muy rico en este in
17
.
Los canales de Rianodina se abren mediante una reaccin qumica entre el calcio presente en el
citosol y la protena que conforma el canal dando lugar al segundo evento (II) que es un flujo de
calcio desde el retculo sarcoplsmico hacia el citosol. Con este flujo adicional de calcio se aumenta

16
La naturaleza de esta seal elctrica es poco conocida debido a que involucra otros sistemas fsicos como el sistema
nervioso y el sistema endocrino (Guyton, 1994; Bray et al., 1994), lo cual hace que su descripcin sea muy compleja. Por
esta razn muchos autores (Jafri et al., 1998; Fox et al., 2001) se han limitado a describirla como un pulso elctrico que
toca el sarcolema sin tomar en cuenta las causas que la determinan. Esta aproximacin es suficiente en trminos de la
comprensin y modelado de la clula cardiaca y su funcin.
17
Contiene una concentracin de iones calcio de ~ 500- 320 M en estado de reposo (Negretti et al., 1995; Fox et al.,
2001).
an ms la concentracin del in calcio en el citosol hasta valores de 1 M, con una duracin
aproximada de 200 ms (Lecarpentier et al., 1996). (Ver figura 1.15).

Figura 1.14 Potencial de membrana.

Figura 1.15 Dinmica de Calcio.

- 90 mV
- 50 mV
0 mV
200 - 400 ms
II y III
IV
Potencial de reposo

I Despolarizacin

II y III
Fase Meseta

IV Re- polarizacin

I
0,1 M
1 M
0 200 800
tiempo ms
Calcio
III
II
I

IV
- Tercer evento:

El tercer evento (III) es la contraccin de las miofibrillas. El calcio liberado desde el retculo
sarcoplsmico irriga las miofibrillas producindose una reaccin entre las protenas que las
conforman y el in calcio (Smith et al., 2000). La reaccin en un detalle ms especfico ocurre de la
siguiente manera: el in calcio libre o excedente es atractivo para los sitios activos de troponina C
(TN-C). Cuando la TN-C se enlaza al in calcio se induce un cambio conformacional en el sitio
regulador de la troponina-I (TN-I) el cual muestra su sitio activo para que la actina la miosina y el
ATP reaccionen. Cuando la hidrlisis del ATP ocurre el complejo actina-miosina formado se
desplaza produciendo la contraccin del sarcmero o movimiento o deslizamiento de las
miofibrillas. Estos ciclos de contraccin ocurren mientras la concentracin de calcio en el citosol se
mantiene elevada. Entre tanto, la dinmica de voltaje contina en su fase meseta gracias a la lenta
inhibicin de los canales L (figura 1.14).

- Cuarto evento:

El cuarto evento (IV) consiste en la salida del in calcio desde el citosol hacia el retculo
sarcoplsmico y hacia el espacio extracelular, con la consecuente relajacin de las miofibrillas. Con la
salida del in calcio los valores de reposo para el voltaje y concentracin de calcio se reestablecen
mediante los siguientes mecanismos:

a) Recuperacin del valor de reposo para el voltaje: los canales rpidos de sodio y los canales L se cierran y
los canales de potasio

junto con la bomba Na
+
-K
+
reestablecen rpidamente el potencial de
membrana, retornando la clula a un voltaje negativo. Este proceso es conocido como re-
polarizacin de la membrana (ver figura 1.14) y puede tener una duracin entre 200 a 400 ms (Fox
et al., 2001).

b) Recuperacin del valor de reposo para la concentracin de calcio: la bomba SERCA, presente en el retculo
sarcoplsmico, aumenta su actividad (MacLennan y Kranias, 2003) debido al alto valor de
concentracin de calcio alcanzado en el citosol (1 M) y recaptura el in calcio hacia el retculo
sarcoplsmico en contra del gradiente qumico utilizando para ello la energa que proporciona la
hidrlisis del ATP. Paralelamente el in calcio es tambin extrado del citosol hacia el medio
extracelular mediante la actividad del intercambiador Na
+
-Ca
2+
y de la bomba ATPasa del
sarcolema. En consecuencia la concentracin de calcio en el citosol se reduce (0,1 M) y el in
calcio es removido de la troponina TN-C con lo cual se reactiva el sitio inhibitorio de la troponina
TN-I lo que provoca la restauracin de la longitud del sarcmero y la relajacin de las miofibrillas.
Este proceso es ms lento (figura 1.15) respecto al proceso de recuperacin de voltaje de reposo
(figura 1.14) ya que el transporte del in calcio se realiza en contra del gradiente qumico y requiere
de diferentes cambios conformacionales en las protenas transportadoras y del consumo de energa.

1.4 CONCLUSIONES.

Un estudio riguroso y detallado sobre la fisiologa y anatoma del miocito puede ser encontrado en
libros especializados de fisiologa celular (Bray et al., 1994; Guyton et al., 1994). En este captulo se
han explicado brevemente los elementos celulares que componen el miocito y los fenmenos
qumicos y elctricos que tienen lugar entre ellos y que son esenciales para la contraccin y relajacin
de la clula cardiaca. Otros fenmenos que suceden en el miocito como en todas las clulas vivas
(conversin de energa, smosis, trfico vesicular, etc) no se han tomado en cuenta porque o bien
son poco conocidos o bien su influencia directa en el proceso de excitacin-contraccin y relajacin
puede ser considerada poco significativa.

Las descripciones dadas en este captulo corresponden a los conocimientos mnimos e
indispensables que se requieren para entender las contribuciones de los modelos matemticos
existentes que explican la fenomenologa de la clula cardiaca y en especial cmo las dinmicas
inica y elctrica afectan el proceso de excitacin-contraccin y relajacin. Una revisin histrica
sobre estos modelos se realiza en el prximo captulo.

Para finalizar, se ha revelado la clara interdependencia que existe entre el potencial de membrana y la
dinmica de calcio y su rol en la activacin de las miofibrillas (Berridge et al., 2003), lo cual puede ser
resumido de la siguiente manera: (i) Un potencial de accin (pulso externo de voltaje) desencadena
un importante flujo difusivo del in calcio desde el exterior de la clula y despus tambin desde el
retculo sarcoplsmico hacia el citosol debido a la activacin de los canales L y de Rianodina
respectivamente. (ii) En respuesta al consecuente aumento de la concentracin del in calcio en el
citosol, se estimula la actividad de las miofibrillas y stas se contraen. (iv) Seguidamente se retorna al
estado de reposo (relajacin de miofibrillas) mediante una gran cantidad de reacciones en cadena,
donde intervienen protenas altamente especializadas como la bomba SERCA y el intercambiador
Na
+
-Ca
2+
que extraen el in calcio en exceso en el citosol transportndolo hacia el interior del
retculo sarcoplsmico y hacia el medio extracelular.

Antecedentes del Modelado

26
C a p t u l o 2

ANTECEDENTES DEL MODELADO

Las ideas fundamentales de la ciencia son esencialmente sencillas, y por regla general pueden ser expresadas en un lenguaje comprensible para
todos.
-Albert Einstein-

2.1 INTRODUCCIN

Un modelo es la representacin matemtica aproximada de un sistema, que se utiliza para
reproducir y predecir su comportamiento bajo diversas condiciones. Para realizar la representacin,
los modelos formalizan en un lenguaje matemtico el conocimiento que se tiene del sistema, en
general, utilizando las leyes que rigen los diferentes fenmenos que ocurren en l.

En el campo de la biologa y la medicina, los modelos matemticos pueden ayudar a mejorar la
comprensin de diferentes mecanismos celulares u orgnicos, de las interacciones entre distintos
subsistemas, de la evolucin de enfermedades, etc... e investigar situaciones que no pueden ser
fcilmente estudiadas a nivel experimental. La resolucin de los modelos permite predecir el
comportamiento de los sistemas y luego reduce el esfuerzo invertido en realizaciones fsicas de
experimentos. Esto disminuye drsticamente el tiempo necesario para ejecutar y mejorar las
investigaciones con la consecuente disminucin de los costos en recursos humanos y materiales.
Por ejemplo la industria farmacutica se ha basado tradicionalmente en el mtodo de ensayo y error
para las pruebas de los frmacos y muchos de esos errores se han pagado de manera muy costosa
(Kohl et al., 2000). Los modelos matemticos pueden reducir estos riesgos simulando los efectos no
slo inmediatos sino secundarios de sustancias especficas y ayudando a explorar y estandarizar
nuevos protocolos experimentales.


27
El modelado matemtico de un sistema puede enfrentarse de diferentes maneras, dependiendo
del nivel de conocimiento que se posea del mismo. La manera ms usual de realizar un modelo
es describir matemticamente todos los fenmenos que ocurren, para lo cual stos deben ser
bien conocidos y comprendidos. Este tipo de modelo se denomina fenomenolgico y permite
identificar y relacionar matemticamente, mediante parmetros numricos, los procesos descritos
por el modelo con la estructura fsica del sistema. Los parmetros del modelo poseen entonces
un significado fsico, por ejemplo: coeficientes de difusin, energas de activacin, coeficientes
cinticos, etc. Sin embargo, establecer un modelo fenomenolgico puede llegar a ser muy
complejo. Adems de la dificultad de establecer las ecuaciones del modelo, la medicin correcta
de los parmetros numricos asociados a un modelo particular puede conllevar a una vasta
cantidad de costosos procedimientos y puede no ser siempre posible.

Otra importante forma de enfrentar el modelado que salva este tipo de dificultades, es la que
constituyen las tcnicas de identificacin. La identificacin es un procedimiento que permite
construir un modelo matemtico de un sistema dinmico a partir de mediciones de sus
respuestas ante entradas conocidas (Ljung, 1987). La construccin del modelo a partir de los
datos de entrada y de salida del sistema involucra tres aspectos bsicos: los datos, un conjunto de
familias de modelos matemticos y la regla que permite verificar la validez del modelo al utilizar
los datos (Soderstrom y Stoica, 1990). La eleccin de la familia (o estructura) del modelo es una
etapa esencial y difcil en el proceso de identificacin. Cuando se posee conocimiento a priori del
sistema ste se puede usar para configurar o poner restricciones sobre la estructura del modelo.
Si no es posible asumir una estructura se debe recurrir a modelos generales como por ejemplo:
modelos lineales entrada-salida, modelos no lineales basados en redes neuronales, etc. Los
parmetros en este caso se ajustan con mtodos de optimizacin convencionales (bsqueda de
mnimo cuadrtico, descenso por gradiente, mtodo de Newton, entre otros) y no reflejan
ninguna consideracin fsica. Los modelos resultantes slo reproducen el comportamiento
entrada-salida del sistema y se llaman por tanto de tipo caja negra, en contraposicin a los
modelos fenomenolgicos o de tipo caja blanca.

A nivel de los sistemas biolgicos, especficamente del sistema clula cardiaca, usualmente es de
ms inters estudiar con detalle su fenomenologa. Actualmente existen conocimientos

28
adecuados sobre algunos fenmenos celulares de los que se dispone modelos matemticos
relativamente bien comprendidos y aceptados (Fox et al., 2001, Luo y Rudy, 1994), mientras que
otros fenmenos aun no pueden ser completamente explicados debido a la enorme complejidad
de los mismos. En estas situaciones lo ms eficaz es enfrentar el modelado global de la clula
combinando los conocimientos comprobados sobre el miocito y estimando los parmetros
desconocidos del modelo mediante procesos de identificacin que utilicen en cierto grado el
conocimiento que se tiene del sistema. Se obtiene as un modelo de tipo caja gris que posee
una estructura bsica fundamentada en la fenomenologa del proceso y que permite asociar
diferentes efectos a elementos especficos del sistema pero a la vez se mantiene relativamente
sencillo y usa parmetros identificados que representan caractersticas de elementos no
modelados o muy simplificados.

El objetivo de este captulo es realizar una revisin histrica de los modelos matemticos
existentes para representar en todo o en parte a la clula cardiaca. Se retoman las leyes
fenomenolgicas utilizadas en cada caso y se analizan la aplicabilidad y las limitaciones de cada
modelo. En la seccin 2.2 se resumen las diferentes contribuciones de modelado de los diversos
fenmenos fsicos, qumicos y elctricos aislados del miocito y en la seccin 2.3 se presenta una
breve revisin de los modelos celulares conocidos hasta el presente.

2.2 MODELOS MATEMTICOS DE LOS DIVERSOS COMPONENTES
CELULARES DEL MIOCITO.

En el sistema miocito ocurren fenmenos complejos de diversa naturaleza, pero principalmente
fenmenos de transformacin qumica combinados con transferencia de masa y fenmenos
elctricos. En esta seccin se resumen las diversas contribuciones existentes en la literatura sobre
estos aspectos, que luego pueden utilizarse en el desarrollo de un modelo global de la clula
cardiaca.

El proceso de excitacin-contraccin y relajacin de la clula cardiaca involucra principalmente
cambios de concentracin del in calcio en el citosol (transporte del in calcio) y cambios de

29
voltaje en el sarcolema (flujos de iones). Por lo tanto el estudio de estas variables dinmicas ayuda
a comprender el comportamiento del miocito y de los elementos que lo componen.

2.2.1 Modelado de los fenmenos fsico- qumicos.

La dinmica de la variable concentracin del in calcio involucra entre otras cosas la actividad de
las diferentes protenas que componen el miocito (canales, protenas transportadoras y
miofibrillas), por lo que el modelado de dicha dinmica implica la descripcin matemtica del
comportamiento de estos elementos celulares.

Los canales del sarcolema cambian su configuracin para permitir el paso del calcio hacia el
citosol desde el medio extracelular y desde el retculo sarcoplsmico y viceversa. Esto cambios
conformacionales son en realidad transformaciones qumicas que suceden dentro de las protenas
porque conllevan a la reordenacin o redistribucin de los tomos para formar otras molculas.

Las reacciones qumicas se estudian considerando los diferentes mecanismos de transformacin
de un elemento P en otros elementos, y estudiando los cambios fsicos y energticos y la
velocidad de transformacin de las sustancias.

Un ejemplo sencillo de reaccin qumica aplicado a las transformaciones de las protenas que
constituyen canales es el siguiente:

Figura 2.1 Activacin de protenas.

30
El elemento P es la protena en su estado inactivo. Cuando se presenta un estimulo (elctrico y/
o qumico) la protena se activa (el canal se abre), es decir; se transforma en un elemento
1
P
como lo muestra la figura 2.1. Para medir la tasa de transformacin entre P y
1
P se recurre a un
mecanismo de reaccin que en el caso ms sencillo podra ser por ejemplo:
1
1
1
1
P P
P P
r
r

(2.1)
Los parmetros
1
r y
1
r miden la velocidad de reaccin o tasa de cambio entre un elemento y
otro. Estos parmetros pueden depender de la temperatura, concentracin de las sustancias y/ o
voltaje, por lo tanto se tiene en general:
) , , (
i i i
k C V f r = (2.2)
donde:
i
r : velocidad de reaccin.
V : voltaje
i
C : concentracin para el in i.
i
k : parmetros cinticos.

El sencillo mecanismo de transicin recin propuesto puede ser ampliado a un mecanismo ms
completo cuando la protena ( P ) pasa por diferentes estados de transicin en reaccin conjunta
con una molcula tpica como el ATP, de la siguiente forma:
2 3
1
1
2 2
1
P P
ADP P P ATP P
r
r r
i
r

+ + +

(2.3)

31
donde:
3 2 1
, , , P P P P : estados conformacionales de la protena.
i
P : fsforo liberado debido a la hidrlisis de ATP.
ADP: Adenosin Difosfato.
2 2 1 1
, , ,

r r r r : velocidades de reaccin.

Este mecanismo podra representar una buena parte de las transformaciones que ocurren en las
protenas de los canales, los intercambiadores, las bombas y las miofibrillas del miocito.

Por otra parte, en general, el modelado fenomenolgico (caja blanca) de estos elementos es
complejo y engorroso y supone conocer con exactitud todos los mecanismos de reaccin, es
decir, todas las transformaciones o estados de transicin de cada protena bajo estudio. Para ello
sera necesario aislar las protenas y medir todas las velocidades de reaccin, las cuales suelen ser
muy rpidas y algunas casi instantneas, requirindose para ello, tcnicas experimentales que
inclusive hoy da an deben ser perfeccionadas.

Hodgkin-Huxley (1952) plantean un modelo emprico (caja gris) que representa a grandes
rasgos las transformaciones discutidas arriba. El modelo de Hodgkin -Huxley es especfico para
canales que son dependientes del voltaje. En tal sentido, la actividad del canal es representada por
un estado abierto (
1
P ) y otro cerrado ( P ) como en la figura 2.1. El estado cerrado (o inhibido)
( P ) es en realidad:
1
1 P , ya que no existen estados intermedios y la transicin entre ambos
estados se encuentra modulada por velocidades de reaccin nicamente dependientes del voltaje
( ) , (
i i
k V f r = ) las cuales son ajustadas empricamente de acuerdo con la data experimental
disponible. La contribucin del modelo Hodgkin-Huxley permite representar varios canales
presentes en el sarcolema (Beeler y Reuter, 1977).

Con el paso de los aos y los avances en las tcnicas experimentales se logran precisar
numerosos estados de canal e identificar modulaciones no slo derivadas del voltaje sino de
concentraciones inicas, como es el caso de los canales L (Brehm y Eckert, 1978).

32

Otros autores (Luo y Rudy, 1994; Fox et al., 2001) adaptan la teora de Hodgkin-Huxley
agregando estados adicionales de transicin y construyendo nuevas relaciones empricas de
velocidad de reaccin dependientes no slo del voltaje sino de las concentraciones inicas.

El avance computacional hace posible actualmente otros modelados matemticos para transicin
de canales. Los modelos Markov (caja gris), son modelos estocsticos y probabilsticos sobre
los diferentes estados del canal, los cuales suelen ser numerosos (entre 30 y 40 estados diferentes
de transicin). Mediante esta tcnica es posible medir la probabilidad de apertura del canal
o
P
(entre 0 y 1) en funcin de la concentracin inica, del voltaje y de otros parmetros de ajuste. La
ventaja de esta tcnica, es que puede obtenerse una fiel representacin de los estados del canal
donde inclusive se pueden modelar modificaciones genticas del mismo (Winslow, 2002). Sin
embargo, muchas de estas expresiones requieren gran cantidad de parmetros los cuales se
obtienen despus de numerosos experimentos y conllevan a expresiones matemticas complejas.

Un ejemplo concreto del modelado probabilstico puede ser visto en la figura 2.2, donde estn
representados numerosos estados de canal.

Figura 2.2. Estados de transicin tpicos para un canal de membrana.


33
La tasa de transicin entre un estado y otro, dada por la teora de Eyring (Urry, 1982), depende
del cambio de entropa, entalpa y carga o valencia del sistema microscpico del canal, como se
muestra a continuacin:
|
|
\
|
+
+

=
RT
FV z
R
S
RT
H
i
i
r
i
r
i
r
e
h
kT
r (2.4)
donde:
k : constante de boltzmann.
T : temperatura absoluta.
h : constante de Plank.
F : constante de Faraday.
R : constante universal de gases.
i
r : tasa de transformacin del elemento i
i
r
z : valencia para el elemento i.
i
r
H : cambio de entalpa para el elemento i.
i
r
S : cambio de entropa para el elemento i.

La probabilidad de apertura o activacin del canal est descrita por un sistema de ecuaciones
diferenciales dado por la siguiente ecuacin matricial:
) (
) (
t WP
t
t P
=
(2.5)
donde:
) (t P : vector de probabilidades para medir si el estado del canal est abierto.
W : la matriz con los estados de transicin.
t : tiempo.

La ecuacin 2.5 debe satisfacer dos principios fundamentales: (i) la suma de los diferentes estados
de transicin debe oscilar entre 0 y 1, (ii) el principio de reversibilidad microscpica derivado del
balance de energa debe cumplirse; es decir, el cambio entlpico y entrpico entre el ciclo de

34
transicin de estados cerrado- abierto - inactivo y el ciclo inactivo- abierto - cerrado deben ser
iguales para que el canal pueda cumplir con su ciclo de actividad. Es evidente que con tales
requerimientos se debe disponer de una rica data experimental y realizar un vasto clculo
computacional para resolver el sistema y calcular ) (t P .

Por otra parte, el modelado matemtico de las reacciones qumicas que ocurren a nivel de las
protenas transportadoras (bombas) y las miofibrillas encuentra an muchos ms inconvenientes.
En cuanto a las protenas transportadoras, dichas protenas no slo interactan con iones sino
con otras molculas mediante mecanismos de reaccin qumica que no estn todava claros.
Adicionalmente las velocidades de reaccin se encuentran generalmente moduladas por el
voltaje, y por las concentraciones de iones y de protenas, y es muy complicada la medicin de
tales variables. Debido a que existen muchas incgnitas sobre los mecanismos de reaccin de las
protenas, los modelos propuestos son del tipo caja gris, aproximando el comportamiento a las
respuestas conocidas del sistema. Uno de los modelos ms utilizados de este tipo, ha sido el
modelo propuesto por Michaelis-Menten (1913). En este modelo se utiliza el comportamiento
observado de muchas protenas enzimticas las cuales se saturan a una velocidad mxima de
reaccin, esto es, alcanzan un nivel de actividad mxima para luego volver a su estado de reposo.

La expresin de velocidad de reaccin
i
r ms conocida de acuerdo a este modelo est dada por:
( )
i m
i
i
C K
C V
r
+
=
max
(2.6)
donde:
max
V : valor mximo de velocidad de reaccin de la protena,
m
K : concentracin del in
i
C a la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la
max
V .

Para determinar grfica y experimentalmente los valores de
m
K y
max
V se utiliza la
representacin de Lineweaver-Burk (Piszkiewicz, 1977) o doble recproca donde se dibuja el
inverso de la velocidad de reaccin (1/
i
r ) frente al inverso de la concentracin
i
C (figura2.3).

35
Esto genera una lnea recta en la cual: (i) la pendiente es
m
K /
max
V , (ii) la abscisa en el origen
(1/
i
r = 0) es -1/
m
K y la ordenada en el origen (1/
i
C = 0) es 1/
max
V .

Figura 2.3 Identificacin de los parmetros
m
K y
max
V .

Los diferentes enfoques de modelado explicados hasta aqu para representar la actividad qumica
de las protenas han servido de base a resultados especficos para cada elemento celular. En los
siguientes prrafos se realiza una revisin ms especfica orientada al modelado de cada elemento
presente en el miocito.

a) Modelado de canales:

Canales L:

La apertura de estos canales es estimulada por un cambio en el potencial de membrana
(Kamp et al., 2000) pero se ha demostrado que el aumento de la concentracin del in Ca
2+

limita su actividad (Brehm y Eckert, 1978), y luego las velocidades de reaccin no son
nicamente funcin del voltaje. Basados en estas observaciones Imredy y Yue (1994)
1/
i
r
1/
i
C

36
proponen un mecanismo de transicin denominado tipo switch compuesto por 12 estados
para los canales L como se muestra a continuacin:

O
b
Ca
O
g f
a
g f
C
Ca
C
b
C
a
Ca
C
C
b
a
Ca
C
C
b
a
Ca
C
C
Ca
C

4
/
4
' '
4 4
4
3
/
' 4 '
3
3
3
3 2 ' 3 ' 2
2
2
/
2
2
2 3 ' 2 ' 3
1
/
1
4 ' ' 4
0 0

(2.7)
donde:
O: estado abierto.
4 ,..., 0 , = i
i
C : estados dependientes del voltaje.
4 ,..., 0 , = i
Ca
C
i
: estados inhibidos por el calcio.
Ca
O : estado abierto y modulado por el calcio
' , ' , , , , : constantes cinticas de reaccin (Jafri et al., 1998).

37
g f b a , , , : factores de ajuste (Jafri et al., 1998).

En este mecanismo la apertura de canales depende del voltaje y la inhibicin o cierre de los
mismos de la concentracin del in calcio. Esta propuesta reproduce el retardo en la
desactivacin de los canales L, que es determinante en la fase meseta del potencial de
membrana. Posteriormente, Jafri y colaboradores (1998) identifican experimentalmente las
constantes de reaccin asociadas a este mecanismo en miocitos caninos. Sin embargo, los
resultados del ajuste no son buenos, porque no se produce la suficiente activacin de canales
L necesaria para estimular el proceso de excitacin-contraccin. Adems el uso de este
mecanismo presupone la resolucin de un gran sistema de ecuaciones diferenciales derivado
del balance de masa que se genera para cada estado de transicin propuesto (12 en total).

Fox y colaboradores (2001), proponen en cambio un mecanismo ms sencillo con 3
posibilidades para el canal; a saber:
a) Canal activo: en cualquier instante hay una fraccin d del total de canales activos,
abiertos.
b) Canal susceptible de inhibicin por el voltaje: hay una fraccin f de estos canales
abiertos.
c) Canal susceptible de inhibicin por el voltaje y la concentracin del in calcio: hay una
fraccin
Ca
f de estos canales abiertos.

Este esquema de modelado es entonces del tipo Hodgkin Huxley y para los canales L es en
resumen:

Fox y colaboradores realizan el ajuste de este mecanismo a datos experimentales de miocitos
caninos (Fox et al., 2001). Los resultados no requieren un excesivo gasto computacional y
son satisfactorios en cuanto al perodo de retardo en el cierre de los canales L
correspondiente a la duracin de la forma de meseta en el grfico de comportamiento del
potencial de membrana.


38
abierta
fraccin
cerrada
fraccin
Ca y V por inhibicin de canal
Ca
f
Ca
f
Ca
f
Ca
f
abierta
fraccin
cerrada
fraccin
V por inhibicin de canal f
f
f
f
abierta
fraccin
cerrada
fraccin
activo anal d
d
d
d
+

2
1
1
c 1

(2.8)
donde:
f f d d
, , , : constantes de reaccin dependientes del voltaje.
Ca Ca
f f
, : constantes de reaccin dependientes del voltaje y de la concentracin del in
calcio.

Canales rpidos de sodio:

La actividad de los canales rpidos de sodio depende del voltaje y stos presentan una
apertura muy rpida y breve, por lo que sus mecanismos de reaccin pueden ser deducidos
estadsticamente mediante los modelos tipo Markov (Oin et al., 2000). Sin embargo, bajo este
planteamiento, es necesario realizar el ajuste de todos los parmetros requeridos para los
numerosos estados de transicin que puedan proponerse. Como alternativa, se formulan
mecanismos de transicin ms sencillos (Kurata et al., 1999), pero debido a la rpida
actividad de los canales las constantes de reaccin son medidas a voltaje constante con lo
cual la dinmica del potencial de membrana no puede representarse.


39
En resumen, el modelado fenomenolgico de los canales rpidos de sodio se encuentra
limitado pues no es posible medir con precisin las rpidas velocidades de reaccin
involucradas en las cinticas propuestas. Por esta razn, muchos autores como Fox y
colaboradores (2001) y Luo y Rudy (1994) optan por una solucin similar a la explicada para
los canales L, esto es, reemplazan los numerosos estados del canal por una formulacin ms
sencilla con 3 estados independientes:
a) Canal activo: en cualquier instante hay una fraccin m abierta del total de canales
activos.
b) Canal susceptible de inhibicin rpida por el voltaje: hay una fraccin h de estos canales
abiertos.
c) Canal susceptible de inhibicin lenta por el voltaje: hay una fraccin j de estos canales
abiertos.

Para ajustar los pocos parmetros de reaccin se usa la teora de Hodgkin Huxley, cuya
aplicacin permite obtener correctamente la caracterstica de los canales rpidos de sodio. El
mecanismo planteado bajo esta perspectiva es como sigue:
abierta
fraccin
cerrada
fraccin
lenta n inhibici de canal j
j
j
abierta
fraccin
cerrada
fraccin
pida r n inhibici de canal h
h
h
abierta
fraccin
cerrada
fraccin
activo canal m
m
m
j
h
m
1
1
1

( 2.9)
donde:

40
j h m j h m
, , , , , : constantes de reaccin dependientes del voltaje.

Canales de potasio:

La actividad de los canales de potasio es bastante rpida y est modulada por el calcio y el
voltaje (Magleby y Pallota, 1983 y Xia et al., 2002). La mayora de los modelos propuestos
para simular su actividad son de tipo Markov. Changeux y Eldestien (1998) trabajan con 10
estados de transicin, Cox y colaboradores (1997) con 35 estados y Rothberg y Magleby
(1999) con 50 estados. El problema de estos planteamientos, es de nuevo la gran cantidad de
parmetros necesarios para el ajuste, lo que implica una rica base de datos experimentales los
cuales no estn siempre disponibles debido a la alta velocidad de reaccin que poseen dichos
canales. Otros trabajos de Cox (1997A), simplifican los estados del canal de potasio y
adaptan en una expresin matemtica bastante sencilla los parmetros del modelo. En esta
adaptacin se utilizan datos experimentales provenientes de un gen que conforma la protena
del canal de potasio para clulas de rata. Los resultados son fieles a las observaciones
experimentales, pero no son extensibles al canal completo.

Debido a que los canales de potasio presentan una actividad bastante rpida, la misma puede
ser satisfactoriamente representada mediante expresiones empricas dependientes nicamente
del voltaje (teora de Hodgkin -Huxley). En efecto, Fox y colaboradores (2001) y Luo y Rudy
(1994) realizan ajustes paramtricos que representan a grandes rasgos la regulacin que
ejercen los canales de potasio sobre el aspecto elctrico del miocito (dinmica de voltaje),
aunque no sobre el aspecto qumico (dinmica de calcio). La desventaja de esta tcnica,
adems de no representar la modulacin debida al in Ca
2+
, estriba en que se deben modelar
distintos comportamientos para distintas porciones de canales, pues la actividad de cada
porcin contribuye en diferente manera sobre el potencial de membrana. Por ejemplo,
existen porciones de canales que ayudan a lograr la repolarizacin de la membrana (evento
IV) y otras porciones que regulan el valor del potencial de meseta (evento II y III). Entonces
para representar dichas contribuciones se construyen varias funciones a trozos que barren
todo el rango de potencial de membrana. Las ecuaciones derivadas a partir de este enfoque
slo permiten modelar el aspecto elctrico de los canales de potasio por lo que una

41
explicacin ms detallada de la descripcin matemtica de estos canales ser dada ms
adelante, en la seccin correspondiente a modelado de los fenmenos elctricos.

Canales de Rianodina:

Los canales de Rianodina han sido objeto de numerosos estudios debido a su papel regulador
en el retculo sarcoplsmico y a su fcil identificacin por la inhibicin que sufren cuando son
sometidos al alcaloide Rianodina. Fabiato (1985) muestra que bajo condiciones de reposo la
apertura de estos canales es estimulada por un pulso de calcio en el citoplasma.
Posteriormente (Fabiato, 1992) obtiene un modelo de adaptacin de los canales bajo pulsos
constantes de calcio citoslico que consiste en un esquema de transicin con cuatro estados
posibles del canal: activable-abierto-cerrado-refractario
1
. En dicho esquema se asume que el
canal de Rianodina posee dos sitios reguladores y afines con el in calcio y que este in se
une a estos sitios de manera independiente. Este modelo es perfeccionado por Tang y
Othmer (1994), quienes adaptan las constantes cinticas de reaccin para reproducir a
grandes rasgos la dinmica de calcio en el miocito. Los trabajos de Zarahdnikova y
Zahradnik (1996), Keiser y Levine (1996), Schiefer y colaboradores (1995) y Stern y
colaboradores (1999) proponen luego diferentes esquemas de transicin para los canales de
Rianodina. Finalmente Zarahdnikova y colaboradores (1999) prueban diferentes mecanismos
de reaccin para estos canales, desde esquemas con 4 estados conformacionales de enzima
hasta esquemas con 9 estados conformacionales, concluyendo que el modelo ms
satisfactorio corresponde a 4 estados de reaccin. De esta manera, la proposicin realizada
por Tang y Othmer sigue siendo valida porque adems de reproducir el comportamiento de
los canales de Rianodina resulta ser un modelo de fcil resolucin. El mecanismo de reaccin
correspondiente a este modelo se muestra a continuacin:

1
El estado refractario es equivalente a la recuperacin del canal de Rianodina con lo cual el canal puede volver a su
estado activable para cumplir con su actividad cclica.

42

+

RC
l
l
R
l l l l
C RC
l
l
RC
2
2
1 1 1 1
2
2

(2.10)
donde:
R : canal de Rianodina activable.

+
RC : canal abierto de Rianodina

+
C RC : canal cerrado de Rianodina.

RC
-
: canal refractario de Rianodina.

2
,
2
,
1
,
1
l l l l : constantes cinticas de reaccin (Tang y Othmer,1994)

b) Modelado de protenas transportadoras:

Intercambiador Na
+
-Ca
2+
:

Se acepta comnmente que el intercambiador Na
+
-Ca
2+
es el mecanismo por el cual se extrae
del citosol la mayor parte del calcio. Est modulado por la concentracin de Na
+
y Ca
2+
y por
el voltaje, con una relacin de transporte de 3 iones Na
+
que ingresan hacia el citosol por
cada in Ca
2+
que sale hacia el medio extracelular (Langer y Peskoff, 1993). Muchos
mecanismos de reaccin se han propuesto para este proceso (Khananshvili et al., 1995;
Blaustein y Lederer, 1999; Fujioka et al., 2000), pero ninguno de ellos se ha comprobado
experimentalmente, porque aun no existe un mtodo preciso para medir la concentracin de
sodio dentro de la clula. Los trabajos de Fujioka y colaboradores (2000) muestran avances
en la especificacin de cada paso conformacional propuesto (en total se proponen 8 pasos)
pero slo se han medido cinticas de reaccin a voltajes constantes, lo cual no se
corresponde a la realidad, pues el potencial de membrana posee una dinmica propia y

43
caracterstica. En Michailova y colaboradores (2002) se presenta una aproximacin de las
cinticas de reaccin por medio de coeficientes de saturacin como el usado por Michaelis-
Menten (1913). Este modelado, aunque bastante sencillo, consigue una expresin para el
transporte de calcio en funcin de la concentracin de Ca
2+
y el voltaje como se muestra a
continuacin:
| |
| | ( )
s
M
V mV V si
s
M
V mV V si
Ca K
Ca V V
r
n
cyt
n
m
n
cyt
exch
3 . 85 0
853 70
) (
max
max
2
2
max
= =
= =
+
=
+
+
(2.11)

donde:
exch
r : velocidad de reaccin del intercambiador.
) (
max
V V : mxima velocidad de intercambio en funcin del voltaje.
| |
cyt
Ca
+ 2
: concentracin de calcio intracelular.
m
K : concentracin de calcio a la mitad de la velocidad mxima de intercambio ) (
max
V V .
n : coeficiente de saturacin para la enzima, en este caso el valor de n es igual a 1.

Bomba SERCA y bomba ATPasa del Sarcolema:

De esta familia, la bomba SERCA ha sido la ms estudiada. Muchos autores coinciden en
que la misma posee dos conformaciones principales: una activada por la concentracin de
calcio en el citosol y otra activada por la concentracin de calcio en el retculo sarcoplsmico
(Meissner, 1973). Se han propuesto varios mecanismos de transicin entre estas dos
conformaciones (Meisner, 1973; Jencks, 1989; Shigekawa et al., 1979). Sin embargo, en
ninguno de estos mecanismos se han medido todas las constantes de reaccin cintica para
los pasos de transformacin (trasnlocacin) de la enzima. Recientes trabajos de Mahanay y
colaboradores (2000) plantean el siguiente esquema cintico (8 pasos de transicin) para la
bomba SERCA:


44
i i SR t cy t cy
t cy cyt cyt
P E EP Ca ADP P E Ca ATPE ATP Ca E
Ca E Ca Ca E Ca E Ca E E
+ + + +
+ +
+ + +
+ + +
2 8 7
2
6
2 '
1 5
2 '
1
2 '
1 4
2 '
1 3 1 2
2
1 1 2
2
2 2
2

(2.12)
donde:

+ 2
cyt
Ca : concentracin de calcio en el citosol.
i cyt cyt
EP P E Ca ATPE Ca E Ca E Ca E E E , , , , , , ,
2 '
1
2 '
1
'
1 1 1 2

+ +
: estados intermedios del mecanismo
de transformacin de la enzima.
ADP: adenosin difosfato.
i
P : fsforo liberado del ATP.
+ 2
SR
Ca : concentracin de calcio en el retculo sarcoplsmico.

La desventaja de este modelo es la cantidad de pasos de transicin que deben ser resueltos
matemticamente (8 pasos), aunque ha sido validado calculndose las constantes cinticas de
reaccin para miocitos ventriculares caninos (Mahaney et al., 2000).

Otros autores como Tang y Othmer (1994) y Hamam y colaboradores (2000) reemplazan los
mecanismos de transicin por una reaccin cintica de saturacin tipo Michaelis-Menten
como se muestra a continuacin:
( )
2
1
2
max
2
2
] [Ca K
] [Ca
V r
cyt
cyt
SERCA
+
+
+
= (2.13)
donde :
SERCA
r : velocidad de reaccin de la bomba SERCA.
max
V : velocidad mxima de reaccin.
1
K : concentracin de calcio a la mitad de la velocidad mxima de transporte de calcio
max
V .

Esta aproximacin permite simplificar los clculos con buenos resultados. Respecto a la
bomba ATPasa del Sarcolema, muchos autores coinciden en que el mecanismo de activacin

45
es bastante similar a la bomba SERCA (MacLennan y Kranias, 2003) pero su velocidad de
reaccin es en un 90% ms baja (Negretti et al., 1995).

Bomba Na
+
- K
+
:

La bomba Na
+
-K
+
transporta 3 iones Na
+
hacia el exterior de la clula por cada 2 iones K
+

que ingresan (Holmgren et al., 2000). Muchos autores coinciden en que esta protena posee
dos estados principales de conformacin (Therien y Blostein, 1999), uno de alta afinidad con
el sodio y otro de alta afinidad con el potasio. Sin embargo, el mecanismo de transicin entre
un estado y otro no est claro. Algunos autores proponen pasos de transicin directos entre
un estado y otro (Therien y Blostein, 1999), otros autores proponen 6 pasos intermedios
conformacionales (Peluffo et al., 2000). Como quiera que sea, ninguno logra obtener
cinticas de reaccin reales, pues todos los ajustes de parmetros se realizan a voltaje
constante y est demostrado que esta bomba es modulada por cambios en el potencial de
membrana (Balashw et al., 2000). Finalmente, Holmgrem y colaboradores (2000), plantean 4
estados de transicin para la bomba y ajustan una cintica dependiente del voltaje con datos
experimentales de axones de calamar gigante, con buenos resultados. Sin embargo, esta
cintica no puede aplicarse al modelado de un miocito humano pues ambas especies poseen
dinmicas de potencial de membrana muy diferentes.

c) Modelado de miofibrillas:

Muchos modelos se han propuesto para simular la interaccin entre los filamentos de actina
y miosina (Lymm y Taylor, 1971; Rayment y Holden, 1994; De la Cruz et al., 1999; Smith et
al., 2000). Los mecanismos varan entre 4 y 12 estados de transicin, pero en ninguno de
ellos se han hallado las velocidades de reaccin correspondientes a cada cambio
conformacional planteado. Esto es debido a que el mecanismo de reaccin de las miofibrillas
involucra a muchas especies qumicas (miosina, actina, troponina, calcio, ATP) pero falta por
descubrir la verdadera relacin estequeomtrica entre ellas. Adems, a nivel experimental las
diversas sustancias no pueden ser aisladas ni existen tcnicas experimentales para medir sus
concentraciones. Por lo tanto, muchos autores (Jafri et al., 1998; Peskoff y Langer, 1998;
Chunlei, 2001; Fox et al., 2001) han aproximado el comportamiento de las miofibrillas como

46
un equilibrio qumico con el calcio como un buffer. Esto es, una reaccin que se favorece de
un lado a otro dependiendo de la variacin de concentracin de los componentes segn un
mecanismo del tipo siguiente:
CaM
d
k
d
k
M Ca

+
+
2
1
2

(2.14)
donde:
2
,
1
d
k
d
k : constantes cinticas.
CaM : complejo calcio-miofibrilla.
M : miofibrilla.

Bajo este modelado (tpicamente caja gris) es ms fcil identificar los parmetros cinticos
de la reaccin pues el equilibrio qumico entre la miofibrilla y el calcio y ms especficamente
entre la protena troponina y el calcio, la cual es la principal especie reguladora de este in, se
ha medido experimentalmente (Peskoff y Langer, 1998).

2.2.2 Modelado de fenmenos elctricos.

La apertura de canales en el sarcolema que permite el paso natural de iones entre los medios intra
y extra celular, provoca un flujo de iones o corrientes inicas ( I ) que generan a su vez una cada
de potencial (voltaje) en la membrana. Evidentemente, en el modelado del miocito debe
representarse la relacin entre el potencial de membrana, las corrientes inicas y las
concentraciones qumicas de los diferentes iones.

Desde el punto de vista elctrico, el sarcolema puede ser visto como un conductor de electricidad
con una conductancia especfica ( g ) que varia con el voltaje o cada de potencial ( E ). Esto es,
un circuito elctrico con resistencia, capacitancia y carga (como en una batera). La aplicacin de
la ley de Ohm a este sistema conduce a la siguiente ecuacin:

47
gE I =
(2. 15)

donde:
I : corriente elctrica generada en el sarcolema.
g : conductancia especfica.
E : cada de voltaje.

Por otro lado, los iones tienden a moverse de la regin de ms alta concentracin a la regin de
ms baja concentracin para alcanzar el equilibrio. Este movimiento desde el punto de vista
elctrico constituye tambin un flujo de energa. Tomando en cuenta este hecho, Nerst y Planck
(1906) postularon el siguiente balance energtico para encontrar el potencial en equilibrio que se
alcanza en la membrana celular:
|
|
\
|
=
in
out
i
Ci
Ci
F z
RT
eq E ln ) ( (2.16)

donde:
) (eq E : potencial de membrana en equilibrio.
out
Ci : concentracin extracelular del in i.
in
Ci : concentracin intracelular del in i.
i
z : valencia del in i

La corriente inica de la ecuacin 2.15, es una corriente microscpica, referida a un solo canal de
la membrana. Entonces es necesario medir la conductancia total de la membrana ( G ) la cual es
producto de la conductancia especfica G por el nmero de canales N abiertos a travs de
los cuales fluyen los iones que producen la corriente en cuestin. Consecuentemente, la corriente
macroscpica es proporcional a la conductancia G y al voltaje efectivo, como se muestra a
continuacin:
( )
) (eq i i
E V G I = (2.17)
N G G = (2.18)

48

donde:
i
I : corriente macroscpica del in i.
) (eq i
E : potencial de equilibrio para el in i.
G : conductancia macroscpica del canal que genera la corriente
i
I .
G : conductancia especfica de los canales que generan la corriente
i
I .
N : nmero de canales abiertos.

El clculo del nmero de canales N activos para los flujos inicos en cada caso se resuelve con
diferentes modelos como se resume en los apartados siguientes. Las ecuaciones 2.16 y 2.17
relacionan el gradiente de concentracin, el potencial de membrana y las corrientes inicas y
constituyen un modelo vlido para cualquier corriente inica generada en el sarcolema. Sin
embargo, aislar un canal y caracterizar su conductancia especfica, no es un proceso trivial por lo
que muchas corrientes inicas existentes en el sarcolema se ignoran en los primeros modelos
celulares. A partir de los aos 90, ciertas innovaciones experimentales permiten obtener
descripciones muy especficas de las corrientes inicas, las cuales se aprovechan en el modelado
del potencial de membrana de la clula cardiaca como se explica en los siguientes prrafos.

En los ltimos aos se han publicado muchos trabajos experimentales y de modelado (Luo y
Rudy, 1994; Jafri et al., 1998; Winslow et al., 1999; Fox et al., 2001), referentes a las corrientes
inicas del sarcolema del miocito. La mayora de ellos coinciden en que existen cuatro tipos de
corrientes generales: las corrientes de sodio, las corrientes de potasio, las corrientes de calcio y las
corrientes de las bombas inicas. Las principales contribuciones en el modelado de estas
corrientes se resumen a continuacin.


49
a) Corrientes de sodio:

La actividad de los canales rpidos de sodio genera dos tipos de corrientes de sodio (Beeler y
Reuter, 1977; Luo y Rudy, 1994; Jafri et al., 1998, Noble et al., 1998; Fox et al., 2001): la
corriente que contribuye con el aumento rpido del voltaje en el primer evento (I) del
proceso de excitacin- contraccin y relajacin (
Na
I ), y la corriente de sodio que contribuye
con la fase de prolongacin o meseta del potencial (
Nab
I , Zenglan, 2001).

Para caracterizar las corrientes
Na
I e
Nab
I , es necesario, calcular los valores de las
conductancias macroscpicas
Na
G y
Nab
G de los canales rpidos de sodio en funcin de las
conductancias especficas.

De acuerdo con la teora de Hodgkin y Huxley (1952), Luo y Rudy (1994) plantean 3 estados
independientes para describir la actividad de los canales de sodio como se explica en la
seccin 2.2.1: la fraccin m de canales abiertos de entre la totalidad de canales activos, la
fraccin h de canales abiertos de entre la totalidad de canales susceptibles de inhibicin
rpida, y la fraccin j de canales abiertos de entre la totalidad de canales susceptibles de
inhibicin lenta (ver mecanismo de la ecuacin 2.9). Estas fracciones ( m, h y j ) dependen
del voltaje y estn normalizadas entre valores de 0 a 1. En algunos trabajos se adoptan estas
diferentes fracciones del canal moduladas por discontinuidades que a su vez dependen del
valor de voltaje (Jafri et al., 1998). Sin embargo, en el trabajo reciente de Fox y colaboradores
(2001) se determina que dichas discontinuidades no son necesarias, y se formula la expresin
de
Na
G como sigue:
j h m G G Na
Na
=
3
(2.20)

donde:
Na
G : conductancia macroscpica de las fracciones de canales rpidos de sodio que
contribuyen con la despolarizacin del potencial de membrana.

50
Na G : conductancia especfica de las fracciones de canales rpidos de sodio que contribuyen
con la despolarizacin del potencial de membrana..
m: fraccin de canales rpidos de sodio activos.
h : fraccin de canales rpidos de sodio que se inhiben rpidamente.
j : fraccin de canales rpidos de sodio que se inhiben lentamente.

Finalmente la corriente
Na
I es:
( )
Na
Na
Na
E V j h m G I =
3
(2.21)
|
|
\
|
=
+
+
i
Na
Na
Na
F
T R
E
0
ln (2.22)

donde:
+
0
Na : concentracin extra-celular de sodio.
+
i
Na : concentracin intra-celular de sodio.

La corriente
Nab
I se calcula como (Fox et al., 2001):
( )
Na
Nab
Nab
E V G I = (2.23)

donde:
Nab G : conductancia especfica de la fraccin de canales rpidos de sodio que contribuyen
con el potencial de meseta en el ciclo de excitacin-contraccin y relajacin.
Evidentemente se considera que todos los canales rpidos de sodio contribuyen con el
potencial de meseta ( 1 =
Na
f ).

b) Corrientes de potasio:

La actividad de las distintas fracciones de canales de potasio identificadas hasta el presente
generan diferentes tipos de corrientes de potasio en el sarcolema, que se pueden asociar a las

51
diversas fases en la dinmica del potencial de membrana (Fox et al., 2001) como se muestra
en la figura 2.4.

Figura 2.4 Dinmica de potencial de membrana y corrientes generadas por la actividad de
los canales de potasio.

En primer lugar, existe una fraccin de canales de potasio, dada por
1
K , que contribuye a
mantener el valor de potencial de reposo en la dinmica de voltaje y su actividad es descrita
mediante un mecanismo elemental de transicin del tipo que se muestra en la figura 2.1. La
expresin matemtica para
1
K se formula empricamente usando la teora de Hodgkin-
Huxley (Beeler y Reuter; 1979). Posteriormente es validada por Luo y Rudy (1994) y
finalmente adaptada al miocito ventricular canino en el modelo de Fox (Fox et al., 2001), de
acuerdo con la data experimental de Freeman y colaboradores (1997). Dicha fraccin es slo
dependiente de los valores de voltaje a lo largo de todo el ciclo de excitacin-contraccin y
relajacin (no es propiamente dinmica) y permite calcular la conductancia macroscpica
1 K
G de la siguiente manera:

=
1
1
1
K G G K
K
(2.24)

- 90 mV
- 50 mV
0 mV
200 -

1 K
I
(reposo)
400 ms
to
I
(repolarizacin temprana)
Kr
I
e
Ks
I
(repolarizacin)
Kp
I
(meseta)

52
donde:
1 K
G : conductancia macroscpica de la fraccin de canales de potasio que contribuye a
mantener el valor de potencial de reposo en la dinmica de voltaje.
1 K
G : conductancia especfica de la fraccin de canales de potasio que contribuyen a
mantener el valor del potencial de reposo en la dinmica de voltaje.
1
K : fraccin de canales de potasio que contribuyen a mantener el valor del potencial de
reposo en la dinmica de voltaje.

Finalmente, la corriente elctrica generada por la actividad de la fraccin
1
K es
1 K
I (Fox et
al., 2001) se expresa como:
( )
K
K
K
E V K G I =

1
1
1
(2.25)
|
|
\
|
=
+
+
i
K
K
K
F
T R
E
0
ln (2.26)
donde:
+
0
K : concentracin extra-celular de potasio.
+
i
K : concentracin intra-celular de potasio.

Por otra parte, Noble y colaboradores (1998) identifican una porcin de canales de potasio
responsables de la repolarizacin temprana del potencial de membrana (figura 2.4). La
actividad de esta porcin de canales est representada por dos posibles configuraciones: uno
de activacin rpida
to
X
K y uno de inhibicin lenta
to
Y
K , y el comportamiento de estas
fracciones es deducido a partir de la teora de Hodgkin-Huxley (son slo dependientes del
voltaje). Winslow y colaboradores (1999) mejoran la formulacin inicial realizada por Noble
(Noble et al., 1998) para estas fracciones, y Fox (Fox et al., 2001) adapta dicha formulacin a
miocitos ventriculares caninos para encontrar finalmente el valor de
to
G como sigue:
to to
Y X
to
to
K K G G = (2.27)

donde:

53
to
G : conductancia macroscpica de las fracciones de canales de potasio que
contribuyen en la repolarizacin temprana del sarcolema.
to G : conductancia especfica de las fracciones de canales de potasio que contribuyen
en la repolarizacin temprana del sarcolema.
to
X
K : fraccin de canales de potasio que se activan rpidamente y que contribuyen en
la repolarizacin temprana del sarcolema.
to
Y
K : fraccin de canales de potasio que se inhiben lentamente y que contribuyen en la
repolarizacin temprana del sarcolema.

La expresin de la corriente
to
I generada por la actividad de las fracciones identificadas
es entonces (Fox et al., 2001):
( )
K Y X
to
to
E V K K G I
to to
= (2.28)

Por su lado, Luo y Rudy (1994) descubren una porcin de canales de potasio que
mediante su apertura permanente (
Kp
K -derivada de la teora de Hodgkin-Huxley)
ayudan a mantener el potencial de meseta en el ciclo de excitacin-contraccin y
relajacin. La actividad de esta porcin de canales genera una corriente elctrica
denominada
Kp
I y su formulacin es usada en los modelos de Winslow (Winslow et
al., 1999), Noble (Noble et al., 1998) y Fox (Fox et al., 2001). La siguiente ecuacin
muestra la expresin correspondiente para
Kp
I :
( )
K Kp
Kp
Kp
E V K G I = (2.29)

donde:
Kp G : conductancia especfica de la fraccin de canales de potasio que contribuyen en
la fase de meseta del potencial de membrana.
Kp
K : fraccin de canales de potasio abiertos permanentemente que contribuyen en la
fase de meseta del potencial de membrana.


54
Por ltimo, existe una porcin de canales de potasio que mediante su actividad contribuyen a
repolarizar el potencial de membrana. En la actividad de esta porcin de canales se
identifican tres fracciones independientes (Beeler y Reuter, 1979; Shibasaki, 1987; Luo y
Rudy, 1994), todas variantes con el voltaje: una fraccin
R
K que es de apertura instantnea
(y por tanto no presenta comportamiento dinmico), una fraccin
Kr
X
K que es de apertura
rpida y una fraccin
Ks
X
K que es de inhibicin o cierre lento. Las fracciones
R
K y
Kr
X
K

tienen una conductancia especfica (
Kr
G ) y generan la corriente elctrica
Kr
I y la fraccin
Ks
X
K tiene otra conductancia propia (
Ks
G ) y genera la corriente
Ks
I .

Las corrientes
Kr
I e
Ks
I han sido caracterizadas por Gintant y colaboradores (2000) y
adaptadas al miocito ventricular canino por Fox y colaboradores (2001) y ambas juegan un
rol determinante en la repolarizacin del potencial de membrana y en la duracin de la
dinmica del potencial (Zenglan, 2001). Las siguientes ecuaciones muestran las
expresiones empleadas por Fox y colaboradores (2001) en la formulacin de estas
corrientes:
( )
K X R
Kr
Kr
E V
K
K K G I
Kr
=
+
4
0
(2.30)
( )
Ks X
Ks
Ks
E V K G I
Ks
=
2
(2.31)
|
|
\
|
+
+
=
+ +
+ +
i i
Ks
Na K
Na K
F
T R
E
01833 . 0
01833 . 0
ln
0 0
(2.32)

donde:
Kr
G : conductancia especfica de la fraccin de canales de potasio que se abren rpidamente y
que contribuyen en la repolarizacin del potencial de membrana.
R
K : fraccin de canales de potasio que se abren instantneamente y que contribuyen en la
repolarizacin del potencial de membrana.
Kr
X
K : fraccin de canales de potasio que se abren rpidamente y que contribuyen en la

55
Ks
G : conductancia especfica de la fraccin de canales de potasio que se cierran lentamente y
que contribuyen en la repolarizacin del potencial de membrana.
Ks
X
K : fraccin de canales de potasio que se cierran lentamente y que contribuyen en la

c) Corrientes de calcio:

La apertura y cierre de los canales L generan diferentes tipos de corrientes elctricas en el
sarcolema debidas a los flujos inicos que los atraviesan. Como en el resto de los canales, lo
importante es modelar la actividad de los canales L para describir las corrientes elctricas que
se producen en consecuencia. En este sentido, como se explica en la seccin 2.2.1, varios
autores (Luo y Rudy, 1994; Jafri et al., 1998; Fox et al., 2001) coinciden en que los canales L
pueden representarse mediante tres fracciones independientes:
Ca
f d f , , (ver ecuacin. 2.8)
cuyos parmetros pueden ajustarse utilizando la teora de Hodgkin-Huxley.

Para caracterizar la corriente elctrica
Ca
I que se genera debido a la actividad de estos
canales, Fox y colaboradores (2001) recurren a una expresin emprica que relaciona la
denominada permeabilidad especfica de los canales L ( Ca P ) con las diferentes fracciones
Ca
f d f , , tal como se muestra a continuacin:

Ca
Ca
Ca
f d f I I = (2.33)
1
341 . 0 4
2
2
0
2
2 2

+
T R
F V
T R
F V
i
sc
Ca
Ca
e
Ca e Ca
T R
F V
C
P
I (2.34)

donde:
f : fraccin de canales L abiertos de entre los que se inhiben debido al voltaje.
d : fraccin de canales L abiertos de entre los activados por el voltaje.
Ca
f : fraccin de canales L abiertos de entre los que se inhiben por el voltaje y la
concentracin del in calcio.

56
Ca P : permeabilidad especfica del in calcio para canales L.
sc
C : capacitancia especfica de la membrana.
+ 2
i
Ca : concentracin intra-celular de calcio.
+ 2
0
Ca : concentracin extra-celular de calcio.
Ca I : mxima corriente de calcio generada por los canales L.

Como en el caso de los canales rpidos de sodio tambin existe una fraccin de canales L
(
L
f ) que permanecen siempre abiertos (en este caso
L
f = 1) durante el ciclo de excitacin-
contraccin y relajacin y cuya actividad produce una corriente elctrica
Cab
I (Fox et al.,
2001) que contribuye a mantener la fase de meseta. Luego, la conductividad macroscpica
(
Cab
G ) de esta fraccin de canales es:
Cab
Cab
G G = (2.35)

donde:
Cab
G : conductancia macroscpica de la fraccin de canales L que contribuyen con el
potencial de meseta en el ciclo de excitacin-contraccin y relajacin.
Cab G : conductancia especfica de la fraccin de canales L que contribuyen con el potencial
de meseta en el ciclo de excitacin-contraccin y relajacin.

y la expresin de
Cab
I es finalmente:
) (
Ca
Cab
Cab
E V G I = (2.36)
|
|
\
|
=
+
+
2
2
0
ln
2
i
Ca
Ca
Ca
F
T R
E (2.37)

Adems, los canales L pueden ser eventualmente atravesados por los iones de potasio, ya que
estos canales presentan una permeabilidad especfica respecto a este in (denominada CaK P ),

57
lo cual genera otro tipo de corriente denominada
CaK
I . Esta corriente, validada por Fox y
colaboradores (2001), se representa matemticamente de manera similar a
Ca
I , como sigue:
1
1000
1
2
2
0
2
2 2
+

=

+
T R
F V
T R
F V
i
Cahalf
Ca
Ca
sc
CaK
CaK
e
K e K
T R
F V
I
I
f d f
C
P
I (2.38)

donde:
CaK P : permeabilidad especfica del in potasio en los canales L.
Cahalf
I
2
: valor de la corriente mxima de calcio Ca I en la cual la permeabilidad del canal L
respecto del in potasio CaK P se reduce a la mitad de su valor.

d) Corrientes de las bombas inicas:

Se consideran el intercambiador Na
+
-Ca
2+
, la bomba Na
+
-K
+
y la bomba del Sarcolema que,
como estn localizadas en la membrana celular, modifican por su actividad al potencial de
membrana. Estos elementos son de naturaleza electrognicos (Zenglan, 2001) y las corrientes
que generan por su actividad estn normalmente includas en los modelos. Luo y Rudy
(1994) formulan empricamente las corrientes generadas por el intercambiador Na
+
-Ca
2+
y
por la bomba Na
+
-K
+
. Posteriormente el modelo de Jafri (Jafri et al., 1996) aade la corriente
generada por la bomba del sarcolema. El modelo de Winslow (Winslow et al., 1999) tambin
incluye las tres corrientes e igualmente el modelo de Fox (Fox et al., 2001) que adems est
validado para miocitos ventriculares caninos.

Las corrientes de las bombas inicas se formulan en general empricamente midiendo las
corrientes mximas cuando la velocidad de transporte de estas protenas es mxima (modelo
de Michaelis Menten adaptado a corrientes), y los valores de concentracin de los iones
cuando dichas protenas se saturan. Para la corriente generada por la actividad de la bomba
del Sarcolema (
pCa
I , Fox et al., 2001) se obtiene la siguiente expresin:

2
Este valor se mide siguiendo una metodologa similar a la adoptada en los modelos de Michaelis-Menten mediante
la representacin grafica de Lineweaver-Burk (ver seccin 2.2.1).

58
+
+
+
=
2
2
max
i mpCa
i
pCa
pCa
Ca K
Ca
I I (2.39)

donde:
max pCa
I : mxima corriente generada por la bomba del Sarcolema cuando la velocidad de
transporte del in calcio es mxima.
mpCa
K : concentracin del in calcio a la mitad de la velocidad mxima de transporte de la
bomba del sarcolema.

Respecto a la corriente elctrica generada por la actividad del intercambiador Na
+
-Ca
2+

(
NaCa
I ), Fox y colaboradores (2001) la modelan empricamente como una diferencia de
potencial entre ambos iones que simula el intercambio, tal como se muestra a continuacin:
( )
( ) ( )
T R
F V
sat
mCa
i
T R
F V
i
T R
F V
mNa
NaCa
NaCa
e k
Ca K
Ca Na e Ca Na e
Na K
k
I
+
+ +

+ +

+
+
+
(
+
=
) 1 ( 2
0
2
3
0
) 1 (
2
0
3
3
0
3
1
1

(2.40)

donde:
NaCa
k : factor de escala para la corriente
NaCa
I .
mNa
K : concentracin del in sodio a la mitad de la velocidad mxima de transporte del
intercambiador Na
+
-Ca
2+
.
mCa
K : concentracin del in calcio a la mitad de la velocidad mxima de transporte del
intercambiador Na
+
-Ca
2+
.
: relacin estequeomtrica 3:1.
sat
k : factor de ajuste que describe la saturacin de la corriente
NaCa
I .

Finalmente para la corriente generada por la actividad de la bomba Na
+
-K
+
(
NaK
I ) se asume
el modelo de Michaelis-Menten en trminos elctricos (Fox et al., 2001) y se obtiene:

59
mKo
i
mNai
NaK
NaK
NaK
K K
K
Na
K
f I I
+
|
|
\
|
+
=
+
+
+
0
0
5 . 1
max
1
1
(2.41)
T R
F V
T R
F V NaK
e e
f

+ +
=
0365 . 0 1245 . 0 1
1
1 . 0
(2.42)
( ) 1
7
1
3 . 67 /
0
=
+
Na
e (2.43)

donde:
max NaK
I : mxima corriente generada por la bomba Na
+
-K
+
cuando la velocidad de transporte
es mxima.
mNai
K : concentracin del in sodio a la mitad de la velocidad mxima de transporte de la
bomba Na
+
-K
+
.
mKo
K : concentracin del in potasio a la mitad de la velocidad mxima de transporte de
la bomba Na
+
-K
+
.

2.3 MODELOS MATEMTICOS DE LA CLULA CARDACA.

Histricamente los primeros intentos de modelado global de la clula cardiaca estn dedicados a
la descripcin del potencial de membrana, debido a la existencia de la tcnica denominada patch-
clamp que, mediante una simple incisin en el sarcolema con un electrodo, permite medir la
diferencia de voltaje generada debido al gradiente qumico entre el medio intracelular y
extracelular del miocito (Sakmann y Neher, 1995). En principio, los alcances de estos modelos
son modestos, pues dicha tcnica tiene muchas limitaciones, como por ejemplo, las frecuentes
roturas de la membrana celular por la puncin del electrodo, con la consecuente alteracin del
equilibrio inico de la clula; tambin el exceso de ruido en las seales elctricas, etc.

En 1977, Beeler y Reuter modelan el primer potencial de membrana en una clula ventricular
utilizando para ello slo las descripciones de las corrientes inicas asociadas a la actividad de los
canales rpidos de sodio, de canales L y de los canales de potasio.

60

En 1985, Di Francesco y Noble incorporan al modelo de Beeler y Reuter no slo corrientes
inicas de los canales sino la actividad elctrica de las bombas inicas (intercambiador Na
+
-Ca
2+
y
bomba Na
+
-K
+
) incrementando la complejidad del modelo y aumentando el rango de
predicciones del mismo. En este modelo se trata sin xito de reproducir la dinmica de la
concentracin del in calcio, pues su desarrollo se basa en el enfoque del sarcolema como una
batera, con lo cual nicamente se toman en cuenta las corrientes inicas de calcio mas no el
transporte qumico de dicho in a nivel del citosol y del retculo sarcoplsmico.

Hilgemann y Noble en 1987, intentan realizar un modelado de la dinmica del calcio dentro del
miocito, aprovechando los descubrimientos de Fabiato respecto a los canales de Rianodina
(1985). Sin embargo, usando solamente descripciones de la actividad de los canales de Rianodina,
no se logra reproducir la dinmica de calcio.

En la dcada de los 90, el desarrollo de las sustancias fluorescentes sensibles al calcio (Bray et al.,
1994) hace posible medir la concentracin del in calcio en el citosol. Con esto Tang y Othmer
(1994) modelan y validan la dinmica de la concentracin del in calcio planteando balances de
masa por compartimientos sobre el esquema mostrado en la figura 2.5. En este modelo se toma
en cuenta la actividad de los canales de Rianodina, la actividad de la bomba SERCA y la actividad
de la bomba del Sarcolema.

Figura 2.5 Esquema de miocito para el modelo de Tang y Othmer (1994) y Hamam y
colaboradores (2000).
Bomba SERCA

Citosol

SR
Canales de Rianodina
Bomba
Sarcolema
Sarcolema
Pulso de Calcio
Bomba
SERCA

61

La contribucin ms importante del trabajo de Tang y Othmer (1994) es la representacin de la
actividad de los canales de Rianodina, que esta basada en el modelo bioqumico de transicin
cclica para estos canales propuesto por Fabiato (1992). Con esta representacin se estima la
fraccin de canales abiertos, mediante balances de masa para cada estado de transformacin, y se
determina que los dos sitios sensibles al in calcio y reguladores del receptor del canal actan de
manera independiente. Los resultados de este estudio predicen la adaptacin de canales ante un
estimulo constante de in calcio de acuerdo con los resultados de Fabiato (1985). De manera que
el estudio del mecanismo de transicin para canales de Rianodina (ecuacin 2.10) realizado por
Tang y Othmer contina vigente tal como se expresa en la seccin 2.2.1.

Para modelar el funcionamiento de la bomba SERCA y de la bomba del Sarcolema se utiliza la
cintica del tipo Michaelis-Menten y, si bien es cierto que existe un fenmeno inicial de
excitacin elctrica (seal de voltaje) que desencadena la dinmica de la concentracin del in
calcio, la misma se sustituye por una seal tipo pulso de in calcio que simula la entrada de calcio
por la va de la apertura de los canales L (dependientes del voltaje) y que se aade al balance de
masa en el citosol para esta especie qumica. Aunque es un modelo bastante sencillo, se obtiene
el tiempo esperado del ciclo para la dinmica de calcio. Sin embargo, este modelo falla en la
forma de la curva del gradiente de calcio la cual es muy simtrica comparada con la curva real de
la dinmica de este in (ver figura 1.15). Adems la actividad elctrica de la clula no est
representada en el modelo.

En 1997, Tang amplia su modelo anterior (1994) para considerar la actividad elctrica e incluir
otros elementos celulares: el intercambiador Na
+
-Ca
2+
y la bomba Na
+
-K
+
; pero los resultados de
este modelo no producen ciclos sostenidos y estables para la dinmica de voltaje y de calcio.

Por otro lado, entre 1991 y 1994, Luo y Rudy realizan numerosos descubrimientos en cuanto a
las actividades elctricas de los canales (Luo y Rudy, 1994) debido al importante mejoramiento en
la tcnica de patch-clamp y a la posibilidad de aislamiento de las clulas y canales, con lo que
logran una completa descripcin del potencial de membrana. Tambin Noble y colaboradores
(1994) desarrollan un buen modelo (aunque menos conocido que el modelo de Luo y Rudy) que

62
reproduce la dinmica de voltaje. Ambos modelos estn implantados en Oxsoft HEART
3

(Zenglan, 2001) y ofrecen completas descripciones de los aspectos electrofisiolgicos del
sarcolema, validados con datos experimentales precisos obtenidos con la tcnica de patch-clamp.

Estos trabajos contribuyen enormemente en la descripcin detallada del potencial de membrana,
permitiendo reproducir situaciones patolgicas como la isquemia y el infarto, lo que ayuda a
identificar las anormalidades en las corrientes elctricas presentes en el sarcolema que provocan
tales situaciones (Beaumont et al., 1995; Bardou et al., 1996; Kogan et al., 1997). La principal falla
de estos modelos contina siendo una inadecuada simulacin de la dinmica del calcio.

La realizacin de experimentos con sustancias fluorescentes sobre el miocito permite descubrir
que la propagacin del in calcio en el citosol ocurre de manera dimensional y no uniforme. Por
esta razn, Dupont y colaboradores (1996), Smith y colaboradores (1998) y ms recientemente
Michailova y colaboradores (2002) proponen la representacin del desplazamiento del in calcio
mediante el uso de ecuaciones dinmicas de difusin en dos dimensiones: largo y radio del
miocito cardiaco. En estos modelos slo se describen las propiedades difusivas de los elementos
celulares y aunque algunos usan ecuaciones dependientes del voltaje la dinmica elctrica no est
includa.

A partir de los modelos ideados por Luo y Rudy (1994) y de mejoras realizadas en el modelo de
Noble (1994) se desarrollan posteriormente numerosos modelos que describen el potencial de
membrana y el efecto de drogas sobre este potencial. Entre estos modelos se encuentran: el
modelo de Jafri (1998), el modelo de Noble (1998), el modelo de Winslow (1999), el modelo de
Hunlei (2000) y el modelo de Fox (2001). Actualmente, los modelos de Winslow, Noble, Fox
(derivados de las formulaciones de Luo y Rudy y Noble) se encuentran implementados en la

3
Oxsoft HEART es un paquete computacional que simula diferentes modelos matemticos de clulas cardiacas
ventriculares: modelos estocsticos, determinsticos y para diferentes especies animales: humano, perro, conejo. Ha
sido desarrollado en el Centro para el Modelado y la Bioinformtica del Sistema Cardiovascular adscrito a la
Universidad Johns Hopkins y dirigido por el profesor Raimond L. Winslow. Una informacin ms detallada de este
programa puede encontrarse en: http://www.ccbm.jhu.edu/.

63
herramienta comercial de ayuda computarizada CardioPrism
TM 4
para la industria farmacutica
(Zenglan, 2001).

Posteriormente Hamam y colaboradores (2000) usan el mismo esquema de miocito planteado
por Tang y Othmer (1994) (figura 2.5) e identifican mediante mtodos de optimizacin no-lineal
y utilizando datos experimentales de miocito de pollo, los parmetros de la bomba SERCA y de
los canales de Rianodina, logrando mejorar la asimetra de la curva de calcio (figura 2.6). Con los
resultados obtenidos de la identificacin y luego de la validacin del modelo estudian el efecto de
pequeas variaciones de la concentracin de in calcio en el citosol.

Adems, Hamam y colaboradores (2000) encuentran diferencias entre sus resultados
experimentales y los resultados experimentales de Tang y Othmer (1994), debido a que trabajan
con miocitos de diferentes especies animales. As mismo, en el proceso de identificacin se
consiguen diferencias entre los parmetros obtenidos para varios grupos de clulas, lo cual puede
deberse a las diferentes edades de las clulas utilizadas a nivel experimental y/o a clulas con
diferentes dimensiones. En el modelo de Hamam y colaboradores (2000), la actividad elctrica
del sarcolema no se toma en cuenta y al igual que en el modelo de Tang y Othmer (1994) el pulso
elctrico de excitacin externa se sustituye por un pulso de calcio, lo cual no es suficiente para
explicar el proceso de excitacin-contraccin y relajacin. La ventaja de la formulacin de
Hamam y colaboradores (2000) constituye la clara correspondencia entre los parmetros del
modelo y los elementos celulares descritos: canales de Rianodina, bomba SERCA y bomba del
Sarcolema.

Por otro lado, la identificacin paramtrica lograda en el modelo de Hamam (Hamam et al.,
2000) es aprovechada posteriormente por Rocaries y colaboradores (2004) para demostrar que la
inyeccin de cido araquidinico en el miocito altera la conductancia de los canales de Rianodina
y la actividad de la bomba SERCA. Sin embargo, y debido a que este modelo representa slo el
transporte qumico del in calcio, su aplicacin no puede extenderse para conocer las

4
Este paquete es usado primordialmente para predecir efectos txicos y curativos de drogas sobre elementos
especficos que componen las diferentes clulas cardiacas (clulas ventriculares, clulas tipo marcapasos, etc) a
travs de la reproduccin de las corrientes inicas individuales para cada elemento a estudiar. Ha sido desarrollado
por The BioAnalytics Group LLC, es netamente comercial y una informacin ms detallada de este programa puede
encontrarse en: http://www.bioanalyticsgroup.com/default.htm.

64
alteraciones que sufre la dinmica de voltaje bajo esta droga. Este aspecto es sumamente
importante pues dichas alteraciones (de voltaje) son las que pueden detectarse ms rpidamente a
nivel clnico en un paciente.

61 62 63 64 65 66 67 68
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5

Figura 2.6 Resultados de las simulaciones del modelo de Hamam: concentracin de calcio
respecto al tiempo.

De los modelos basados en la descripcin de corrientes elctricas, el modelo de Fox y
colaboradores (2001) merece especial atencin pues constituye uno de los modelos ms slidos
en cuanto a potencial de membrana se refiere. Desarrollado a partir de las formulaciones de Luo
y Rudy, este modelo mejora y valida la descripcin de las corrientes elctricas para el miocito
ventricular canino, mediante la aplicacin de ecuaciones matemticas relativamente sencillas que
garantizan la obtencin de soluciones numricas rpidas y estables, muy al contrario del modelo
desarrollado por Jafri y colaboradores (1998). Fox y colaboradores proponen un esquema de
miocito (figura 2.7) que toma en cuenta las actividades elctricas de los canales: sodio, potasio y
calcio, las actividades elctricas de las bombas inicas, y las reacciones de equilibrio entre los
canales de Rianodina y el in calcio, entre las miofibrillas y el in calcio y entre el in calcio y la
bomba SERCA. Los resultados de este modelo generan un potencial de membrana bastante
cercano al comportamiento real del miocito (figura 2.8) pero la dinmica del in calcio es mucho
ms rpida que la real (figura 2.9) y con una protuberancia en la forma de la curva que no es
C (M)
t (s)

65
natural en la clula. Estas fallas son consecuencia de la limitada e inadecuada descripcin qumica
planteada para el transporte del in calcio en este modelo.

Figura 2.7 Esquema de la clula cardiaca utilizado en el modelo de Fox.

22 22.5 23 23.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)

Figura 2.8 Resultados de potencial de membrana para el modelo de Fox.

Todos los modelos elctricos que se mencionan reproducen aproximadamente valores de
potenciales de membrana tpicos pero son insuficientes para reproducir la dinmica del in
calcio, la cual resulta ser ms rpida (300-400 ms) que la observada experimentalmente (800-1000
Pulso elctrico
Citosol

Sub-espacio
entre los
Canales de
Rianodina y
L
INaCa
Equilibrio qumico
con miofibrillas
IKp IKr
SR
ICab ICa ICaK
IpCa
IK1 IKs INaK INab INa
IKp
Flujo canales
Rianodina
Flujo bomba
SERCA
Sarcolema

66
ms). La razn de esta falla est asociada a los siguientes aspectos: (i) no existe informacin
completa acerca de las reacciones qumicas asociadas al calcio (ii) el balance del in calcio est
representado en estos modelos generalmente mediante la siguiente ecuacin:
FV z
t I
dt
t dCi
i
i
) ( ) (
= (2.44)

donde:
i
z : valencia del in i
i
I : corriente macroscpica del in i.
F : constante de Faraday.
V : voltaje.
i
C : concentracin molar del in i.

El balance dado en la ecuacin 2.44, slo describe el comportamiento del calcio a nivel de
sarcolema (visto como una batera) sin considerar ningn tipo de reaccin qumica que module
su actividad dentro del citosol.

22 22.5 23 23.5
0
1
2
3
4
5
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)

Figura 2.9 Resultados de la concentracin molar del in calcio para el modelo de Fox.

67
Por otra parte, muchos autores consideran que en el caso de tomarse en cuenta las reacciones
qumicas complejas con el calcio, el gasto computacional de los modelos que describen el
potencial elctrico puede incrementarse significativamente (Noble y Rudy, 2001).

Sin embargo, obtener una apropiada descripcin de la dinmica de calcio contribuye a la mejor
comprensin de la regulacin u homestasis del miocito y permite aadir descripciones qumicas
de elementos celulares como la bomba SERCA, cuyo estudio es de sumo inters pues es una
comprobada reguladora en el proceso de excitacin-contraccin y relajacin (MacLennan y
Kranias, 2003).

Como se puede observar el modelado del miocito se ha realizado en dos vertientes: un modelado
cintico qumico y un modelado mayormente elctrico. En los modelos qumicos publicados no
existen las descripciones de todos los elementos celulares ni la modulacin elctrica necesaria
para que el ciclo de calcio est confiablemente representado. Adems no se pueden probar
efectos de drogas en el ciclo de voltaje (cuyas medidas son ms tiles desde el punto de vista
clnico) ya que los fenmenos elctricos no estn representados.

Por su parte, el modelado del potencial de membrana usa aproximaciones para la dinmica de
calcio que no generan buenos resultados en cuanto a la concentracin de calcio y adems slo
representan en general la actividad alrededor del sarcolema, desestimando elementos
intracelulares importantes como la bomba SERCA y las miofibrillas.

Entonces, futuros modelos del proceso de excitacin-contraccin y relajacin deben ser ms
completos e incluir buenas descripciones tanto de los fenmenos qumicos como de los
elctricos y de cmo sus interacciones definen el comportamiento del sistema.

2.4 CONCLUSIONES.

En este captulo se han mostrado cronolgicamente los avances encontrados en la literatura
sobre el modelado de los elementos que componen el miocito, para usarlos despus en el
modelado global de la clula cardiaca. Tambin se ha explicado cmo las leyes qumicas y fsicas

68
han sido aplicadas a la fenomenologa del calcio y del voltaje. A partir de los descubrimientos
experimentales realizados y los modelos desarrollados se ha comprobado que la concentracin
del in calcio y el potencial de membrana son las principales variables moduladoras del proceso
de excitacin-contraccin y relajacin.

Los modelos matemticos existentes de la clula como un todo, son relativamente incompletos y
estn dedicados nicamente al aspecto elctrico o bien a la cintica qumica por separado. Ellos
no consideran simultneamente ambas fenomenologas y por lo tanto no pueden ser usados para
estudiar las importantes interdependencias que existen entre ellas. El prximo captulo est
dedicado al planteamiento de un modelo fenomenolgico basado en la concepcin de la clula
como un proceso integrado constitudo por micro-reactores qumicos continuos interconectados,
lo que permite incluir las ecuaciones matemticas necesarias para representar tanto los aspectos
elctricos como los cintico-qumicos de la clula. Adems, el nuevo modelo conserva una
estructura capaz de asociar los parmetros matemticos a elementos celulares especficos
permitiendo as la identificacin de cada una de las partes que componen el miocito, amen de
representar cabalmente la interdependencia de las variables dinmicas: voltaje y concentracin del
in calcio.

Desarrollo de un Modelo Global de la Clula Cardiaca

69
C a p t u l o 3

DESARROLLO DE UN MODELO GLOBAL DE LA CLULA
CARDIACA

Hay slo una naturaleza- la divisin entre ciencia e ingeniera es una imposicin humana-, no es natural. De verdad, la divisin es un fracaso
humano; esto refleja nuestra limitada capacidad para comprender el todo..
-Sir William Cecil Dampier Whetham-.

3.1 INTRODUCCIN.

El modelado de fenmenos elctricos y cintico-qumicos aislados no permite reproducir
completamente las dinmicas de las diferentes variables que caracterizan el comportamiento de la
clula cardiaca. En este captulo se propone una nueva interpretacin del sistema celular como un
proceso complejo de transformacin a estudiar desde el punto de vista de ingeniera de procesos,
esto es, estableciendo volmenes de control y expresando los cambios que ocurren en las fronteras
entre dichos volmenes y el exterior.

En este sentido, la clula cardiaca se puede percibir como un sistema de micro-reactores qumicos
interconectados, constituido por un reactor principal que es el citosol y otro reactor o tanque que es
el retculo sarcoplsmico. Entre ellos ocurren fenmenos de reaccin qumica y de transferencia de
masa y de energa. Se trata de reactores continuos e isotrmicos y con la caracterstica particular de
que la pared del reactor principal sufre cadas de potencial asociadas a los fenmenos de transporte
hacia y desde el medio exterior.

As las leyes matemticas aplicables a los reactores qumicos pueden utilizarse para describir la
dinmica de las variables que determinan el proceso de excitacin- contraccin y relajacin. Como

70
se trata de un modelado fenomenolgico es posible asociar partes del modelo con diferentes
elementos celulares, lo que facilita la comprensin del comportamiento especfico de cada elemento
y sus relaciones con los dems. Sin embargo, puesto que muchos fenmenos que ocurren en el
miocito son an en parte ignorados, como se menciona en el captulo 2, el modelo de reactores
qumicos a desarrollar es del tipo caja gris. Esto es, que combina descripciones fenomenolgicas
detalladas con descripciones aproximadas, que finalmente sern objeto de ajustes matemticos
basados en conocimientos previos y datos experimentales.

Por otra parte, el planteamiento del nuevo modelo debe asegurar el compromiso entre
complejidad y computabilidad, pues si bien es cierto que la fenomenologa puede conllevar a
expresiones matemticas complicadas, tambin es cierto que a partir de stas deben obtenerse
soluciones numricas de forma rpida y que sean a la vez estables.

Con el fin de desarrollar el nuevo modelo matemtico de la clula cardiaca en la seccin 3.2 se
definen las caractersticas y fronteras del sistema de micro-reactores bajo estudio. Seguidamente en
la seccin 3.3 se formulan las ecuaciones del modelo, precisando las consideraciones fsicas,
simplificaciones, parmetros y condiciones de borde necesarias.

3.2.1 EL SISTEMA MIOCITO.

El sistema a modelar es un miocito ventricular adulto generalizado para mamfero. La estructura de
esta clula presenta una organizacin compleja y especializada segn lo explicado en el captulo 1
(ver figura 1.1) donde sin embargo se pueden precisar los siguientes aspectos anatmicos
1
:

El miocito y el retculo sarcoplsmico son considerados como cilindros sin tomar en cuenta
las invaginaciones y especial distribucin que presenta el retculo en el sarcolema. De hecho,
las medidas realizadas sobre las dimensiones fsicas del miocito hacen esta simplificacin,
pues de otra manera es muy difcil calcular el volumen del miocito y de sus elementos.
Consecuentemente se considera que el in calcio se desplaza a lo largo de toda la clula sin

1
Estas consideraciones se han utilizado tambin en la formulacin de otros modelos matemticos del miocito
(Tang y Othmer, 1994; Luo y Rudy, 1994 y Hamam et al., 2000).

71
tomar en cuenta los especiales sub-espacios celulares
2
de comunicacin existentes entre los
canales L y los canales de Rianodina.

Todos los elementos celulares que se encuentran en el citosol estn contenidos en una
matriz acuosa ya que el miocito contiene en un 70% agua (Guyton, 1994). Por lo tanto
todos los fenmenos fsico-qumicos y elctricos que ocurren en el miocito suceden en fase
lquida.

En consecuencia, la clula cardiaca se puede interpretar como un tanque cilndrico (citosol) donde
ocurren reacciones qumicas, que interacta con otro reservorio o tanque (retculo sarcoplsmico
SR), y con el medio exterior. El primer tanque es en realidad un reactor qumico del tipo tanque
agitado continuo o CSTR (Continuos-Stirred-Tank-Reactor) y se designa como reactor principal
(ver figura 3.1). Los diversos fenmenos de transporte de masa y energa que ocurren entre el
tanque RS y el reactor principal o citosol y entre ste y el medio extracelular se llevan a cabo
mediante vlvulas (canales) y bombas (bomba SERCA, bomba del sarcolema, intercambiador Na
+
-
Ca
2+
). Adems el reactor principal posee una pared cargada elctricamente que se estimula a travs
de una seal externa de voltaje (pulso elctrico), y que modula las diversas reacciones qumicas que
ocurren tanto en el interior del citosol (miofibrillas) como en la misma pared (bombas y canales).

La descripcin matemtica del nuevo modelo presupone adems:

Volumen constante: ambos tanques funcionan sin variacin del volumen total retenido en cada
uno (Bray et al., 1994). El volumen del citosol es mayor que el volumen del retculo
sarcoplsmico, y ambos han sido determinados de manera confiable
3
(Jafri et al., 1998;
Puglisi y Bers, 2000).

2
Esta consideracin espacial se realiza en otros trabajos (Luo y Rudy, 1994; Jafri et al., 1998; Fox et al., 2001).
3
Existen numerosas tcnicas para determinar a grosso modo (sin considerar disposiciones geomtricas
complicadas) volmenes celulares, tales como: centrifugacin, espectrofotometra (un haz de luz pasa a travs de
la muestra estudiada permitiendo saber mediante el espectro de luz la naturaleza y cantidad de la materia que la
compone). Recientemente se han desarrollado mtodos ms sofisticados de medicin de la configuracin y
tamao de la clula del corazn consistente en un conjunto de cmaras y microscopios mviles que realizan un
barrido de la dimensin del miocito. Esta tcnica puede ser vista con detalle en
http://www.bioeng.auckland.ac.nz/resources/sm_rig.php.

72

Figura 3.1 Miocito interpretado como sistema de reactores qumicos.

Concentraciones homogneas: tanto el citosol como el retculo sarcoplsmico se consideran
sistemas de parmetros concentrados ya que son de dimensiones muy pequeas (del orden
de L). En particular las concentraciones de las especies qumicas se consideran
homogneas espacialmente
4
, de all que se describe tanto al citosol como al retculo
sarcoplsmico como sistemas homogneos (perfectamente mezclados).

Temperatura constante: diversas observaciones (Guyton, 1994) demuestran que las clulas
cardiacas funcionan a temperatura constante. La energa necesaria para que los procesos
celulares ocurran se mantiene gracias a la gran cantidad y a la instantnea reposicin del
ATP (Kargacin y Kargacin, 1997; Bray et al., 1994). Las variaciones energticas dentro del

4
Como se menciona en el captulo 2, algunos autores (Smith et al., 1998; Michailova et al., 2002) modelan
variaciones espaciales en las concentraciones inicas presentes en el miocito sin realizar un estudio completo de
los elementos celulares. En este trabajo, se prefiere integrar los elementos celulares al proceso de excitacin-
contraccin y relajacin con el objeto de obtener una identificacin matemtica de los mismos por lo que se
desestiman las variaciones espaciales de las concentraciones a fin de simplificar las ecuaciones del modelo.
Bomba
SERCA
Bomba
Sarcolema
Bomba Na
+
-K
+

Pulso
Canales
de Rianodina
Canales L
Sarcolema
Tanque SR
Reactor Principal
Vlvula
Bomba
Citosol
Miofibrillas
Retculo
Sarcoplsmico
Intercambiador
Na
+
-Ca
2+

Agitador
Intercambiador
Flujo de Ca
2+


73
sistema miocito son entonces despreciables y se considera que los micro-reactores definidos
son isotrmicos y que son despreciables las transferencias de calor entre ellos y al ambiente.
reas iguales: la conformacin especial del retculo sarcoplsmico permite un contacto total
entre ste y el citosol con el fin de irrigar completamente de iones calcio a las miofibrillas.
Estos se asegura en el modelo asignando igual superficie exterior (o reas de transferencia) a
los dos reactores del sistema.

Finalmente y antes de comenzar con la formulacin de las ecuaciones del modelo, es necesario
precisar lo siguiente:

Las concentraciones inicas del sodio, calcio y potasio en el medio o espacio extracelular
son consideradas constantes, debido a que en circunstancias normales este espacio siempre
es suplido abundantemente con estos iones por mecanismos propios de regulacin externos
a la actividad del miocito (Bray, 1994).

Las principales variables moduladoras del proceso de excitacin-contraccin y relajacin son
la concentracin del in calcio y el voltaje en la pared del reactor principal.

Las variaciones dinmicas en las concentraciones de los iones sodio y potasio no se toman
en cuenta porque hasta ahora no se han desarrollado mtodos experimentales que permitan
obtener sus valores, imposibilitando la apropiada comparacin entre los resultados del
modelo para dichas concentraciones y el comportamiento real. Adems, algunos de los
elementos celulares que involucran a la dinmica de los iones sodio (canales de sodio,
bomba Na
+
-K
+
) y potasio (canales de potasio, bomba Na
+
-K
+
) no se han modelado de
manera exitosa, como se ha explicado en el captulo 2. Finalmente, y ms importante, se
conoce que la dinmica de estos iones es mucho ms rpida que la del in calcio (Noble y
Rudy, 2001) por lo que las variaciones en sus concentraciones suceden instantneamente
en comparacin con la dinmica del calcio, siendo su representacin matemtica innecesaria
en un modelo dinmico.

La variacin de potencial ocurre significativamente slo en la pared del reactor principal
(sarcolema), pues el mismo est sometido a fuertes gradientes qumicos. Se desprecian

74
posibles variaciones de potencial en la pared del tanque SR pues los principales mecanismos
de transferencia en el retculo sarcoplsmico (canales de Rianodina y bomba SERCA) son
independientes del voltaje.

El sistema de micro-reactores est sometido a una seal externa
5
que estimula la actividad
elctrica en la pared del reactor principal y que se representa matemticamente como un
pulso de voltaje, el cual ser explicado ms adelante.

3.3 FORMULACIN DEL MODELO.

La descripcin fenomenolgica del sistema recin descrito se basa en balances de masa y carga
elctrica en los volmenes de control que definen las fronteras de los dos sub-sistemas
interconectados.

3.3.1 Ecuaciones principales de balances.

Especficamente se realizan los siguientes balances principales:

Balance de masa en el in calcio en el reactor citosol.
Balance de carga elctrica en la pared del reactor citosol.
Balance de masa en el in calcio en el tanque SR.

Se trata de balances por especie qumica, ya que los balances de masa globales no aportan ninguna
informacin puesto que los volmenes totales retenidos en los sub-sistemas permanecen constantes,
como se menciona en la seccin anterior.

A continuacin se formula la ecuacin general de cada balance y posteriormente se desarrollan las
ecuaciones necesarias para la descripcin de los diferentes trminos de estas ecuaciones.

5
La seal elctrica que provoca la despolarizacin del sarcolema (pared del reactor principal) es provocada por
una serie de eventos hormonales y sinpticos sobre lo cuales quedan aun muchas incgnitas por descifrar (Bray et
al., 1994).

75
a) Balance de masa del in calcio en el reactor citosol:

La acumulacin del in calcio en el reactor citosol en cualquier instante de tiempo t, es naturalmente
la diferencia entre la sumatoria de los flujos de calcio que entran y los que salen del reactor, ms la
diferencia entre los iones de calcio liberados y los consumidos por reaccin qumica. De manera
que, la ecuacin del balance en base molar queda como sigue:
i i
2
i cyt i i
2
i cyt
Sarcolema SERCA Ca ENa RC LC
2
i
cyt
) k , Ca , V ( rG V ) k , Ca , V ( rR V
FQ FQ FQ FD FD
dt
dCa
V
+ +
+
+
+ =
(3.1)
donde:
+ 2
i
Ca : concentracin molar del in calcio en el citosol (M).
cyt
V : volumen del citosol (m
3
).
LC
FD : flujo difusivo a travs de los canales L (M m
3
s
-1
).
RC
FD : flujo difusivo a travs de los canales de Rianodina (M m
3
s
-1
).
Ca ENa
FQ

: flujo de calcio debido a la actividad del Intercambiador Na
+
-Ca
2+
(M m
3
s
-1
).
SERCA
FQ : flujo de calcio debido a la actividad de la bomba SERCA (M m
3
s
-1
).
Sarcolema
FQ : flujo del calcio debido a la actividad de la bomba ATPasa del sarcolema (M m
3
s
-1
).
i i i
k Ca V rG ) , , (
2+
: sumatoria de todas las velocidades de reaccin qumica que producen calcio en
el citosol (M s
-1
).
i i i
k Ca V rR ) , , (
2+
: sumatoria de todas las velocidades de reaccin qumica que consumen calcio
en el citosol (M s
-1
).
t : tiempo (s).
i
k :constante cintica de reaccin.
V : voltaje (mV).

b) Balance de masa del in calcio en el tanque SR:

De la misma manera el balance molar del in calcio en el tanque SR se puede expresar como:

76
RC SERCA
2
SR
SR
FD FQ
dt
dCa
V =
+
(3.2)

donde:
+ 2
SR
Ca : concentracin molar del in calcio en el retculo sarcoplsmico.
SR
V : volumen del retculo sarcoplsmico.

c) Balance de corrientes inicas en la pared del reactor citosol:

El balance general de corriente elctrica en la pared del reactor citosol se deriva de considerar la
membrana celular (pared del reactor) como un capacitor, esto es un acumulador de energa, pues las
cargas elctricas provenientes de las diferentes concentraciones inicas entre un lado y otro de la
pared crean un dipolo como lo muestra la figura 3.2.

Figura 3.2 Membrana celular con dipolo.

As, a este capacitor se le puede medir la dinmica de voltaje creada cuando los flujos de iones lo
atraviesan. En el caso de la membrana del sarcolema los flujos inicos que la atraviesan
corresponden a las corrientes creadas por el movimiento del in sodio (
sodio
I ), del in potasio
(
potasio
I ) y del in calcio (
calcio
I ), ms las contribuciones elctricas de las bombas inicas
(
cas bombasioni
I ). Adems, a estas corrientes debe sumrsele el estmulo o pulso inicial (
stim
I ) que
desencadena el proceso de excitacin-contraccin y relajacin. De tal manera, la expresin para el
balance de corrientes en la pared del reactor se expresa segn la siguiente ecuacin:
- -
- -
- -
- -
+
+
+
+

+
+
+
+


77
( )
+ + + + =
stim cas bombasioni calcio potasio sodio
I I I I I
C dt
dV 1
(3.3)

donde:
C : capacitancia de la pared.

La propiedad capacitancia de la membrana celular se considera constante pues las dimensiones de la
clula (rea y volumen) no varan.

3.3.2 Ecuaciones auxiliares descriptivas.

Ahora es necesario desarrollar los diferentes trminos matemticos que constituyen las ecuaciones
3.1, 3.2 y 3.3, a saber, los flujos difusivos producidos por la apertura de canales; los flujos generados
por la actividad de las protenas transportadoras, llamados flujos qumicos para distinguirlos de los
flujos difusivos; las reacciones qumicas que ocurren en el interior del reactor citosol y las corrientes
inicas existentes en el sarcolema.

a) Flujos difusivos:

Los flujos difusivos corresponden a los movimientos de masa a travs del sarcolema y de la
membrana del retculo sarcoplsmico, inducidos por diferencias de concentraciones a ambos lados
de tales membranas y ocurren a travs de los canales L y los canales de Rianodina respectivamente.
Pueden ser descritos utilizando la ley de Fick, segn la cual la movilidad de una substancia A a
travs de una membrana, se expresa como se indica a continuacin (Treybal, 1996):
z
C
D J
A
AC A
= (3.4)
donde:
A
J : flujo difusivo de la substancia A.

78
A
C : concentracin de la substancia A en la solucin.
z : dimensin del ancho de la membrana.
AC
D : coeficiente de difusin.

El coeficiente de difusin
AC
D es una funcin emprica generalmente dependiente de la
temperatura, presin y concentracin de la substancia a difundir, aunque para sistemas en fase
lquida se puede considerar que slo la concentracin es la principal variable moduladora (Treybal,
1996), y por lo tanto se toma el coeficiente de difusin
AC
D constante.

Como en el sistema miocito no se presentan variaciones espaciales importantes en la concentracin
de las sustancias, el gradiente de la ecuacin 3.4 puede ser expresado como una variacin lineal de
las concentraciones a travs del espesor de la membrana y luego el flujo difusivo se obtiene como:
l
C C
D J
A Ai
AC A
0
= (3.5)
donde:
0
,
A Ai
C C : concentracin del componente A al uno y otro lado de la membrana.
l : espesor de la membrana.

La ecuacin 3.5 se cumple cuando la membrana es completamente permeable a la sustancia A que la
atraviesa. No obstante, las membranas del citosol (sarcolema) y del retculo sarcoplsmico no son
siempre permeables al in calcio. Su permeabilidad depende de la actividad de los poros (o canales)
que las atraviesan, especficamente de los canales L y los canales de Rianodina, que se abren o
cierran de acuerdo a ciertas seales qumicas y/o elctricas.

La apertura de los canales es anloga a la apertura de una gran vlvula. La vlvula no se encuentra
totalmente abierta y se abre gradualmente dependiendo de la activacin de las protenas que
conforman los canales, y que corresponde al avance de las reacciones qumicas que transforman la
configuracin de estas protenas para permitir la apertura del canal. La descripcin de la conversin
en estas reacciones qumicas conduce al clculo de la fraccin de canales abiertos. De modo que si

79
esta fraccin es 0 se tiene la vlvula completamente cerrada (la membrana no es permeable) y si es 1
la vlvula est completamente abierta (la membrana es permeable). De esta manera, el flujo difusivo
queda expresado en funcin de una fraccin de canales abiertos ( P ) como sigue:
l
C C
P D J
A Ai
AC A
0
= (3.6)

La fraccin de canales abiertos se puede interpretar tambin como la probabilidad de apertura del
canal, y proviene de balances de masa para los diferentes estados de transicin en las reacciones de
activacin, como se explica a continuacin, tanto para los canales de Rianodina como para los
canales L.


Para hallar la fraccin de canales de Rianodina abiertos se recurre al mecanismo de reaccin
planteado por Tang y Othmer (1994) (ecuacin 2.10) que describe el comportamiento de estos
canales en cuatro diferentes estados de transicin, a saber: R ,
+
RC (que corresponde al canal
abierto),
+
C RC ,
RC , cuyas variables de concentracin normalizadas

1
x ,
2
x ,
3
x y
4
x se
calculan como:
1
x
R
R
T
= (3.7)
2
x
R
RC
T
=
+
(3.8)
3
x
R
C RC
T
=
+
(3.9)
3 2 1 4
1 x x x x = (3.10)

donde :
T
R : concentracin total de canales de Rianodina.
1
x : fraccin de canales en el estado R .

80
2
x : fraccin de canales en el estado
+
RC (fraccin de canales de Rianodina abiertos).
3
+
C RC .
4
RC .

El flujo difusivo debido a la actividad de los canales de Rianodina, en funcin de la diferencia de
concentracin del in calcio entre el retculo sarcoplsmico
+ 2
SR
Ca y el citosol
+ 2
i
Ca y la fraccin de
canales abiertos representada por la variable
2
x , se puede calcular entonces como:
transf
i SR
Ca
RC
A
l
Ca Ca
x D FD
=
+ +
+
2 2
2
2
(3.11)

donde:
+ 2
Ca
D : coeficiente de difusin para el calcio en el citosol.
transf
A : rea de transferencia de la membrana del sarcolema y de la membrana del retculo
sarcoplsmico.
2
x : fraccin de canales de Rianodina abiertos.

Para obtener la fraccin
2
x se deben plantear los balances de masa para cada estado de transicin
normalizado, de acuerdo con el mecanismo propuesto en la ecuacin 2.10, tal y como se muestra a
continuacin:
| |
1
4 4 1 1
1

+ + =
T RC RC RC RC
R rG rR rG rR
dt
dx
(3.12)
| |
1
2 2 1 1
2

+ =
T RC RC RC RC
R rR rG rG rR
dt
dx
(3.13)
| |
1
3 3 2 2
3

+ =
T RC RC RC RC
R rG rR rG rR
dt
dx
(3.14)

donde :
1 RC
rR ,
2 RC
rR ,
3 RC
rR ,
4 RC
rR : velocidades de reaccin de consumo de in calcio en el citosol debido
a la actividad de los canales de Rianodina.

81
1 RC
rG ,
2 RC
rG ,
3 RC
rG ,
4 RC
rG : velocidades de reaccin de liberacin de in calcio en el citosol
debido a la actividad de los canales de Rianodina.

Las velocidades de reaccin asociadas a los diferentes estados de transicin, estn definidas como:
T i RC
R Ca x l rR =
+ 2
1 1 1
(3.15)
T i RC
R Ca x l rR =
+ 2
2 2 2
(3.16)
( )
T i RC
R Ca x x x l rR =
+ 2
3 2 1 1 3
1 (3.17)
T i RC
R Ca x l rR =
+ 2
1 2 4
(3.18)
T RC
R x l rG =
2 1 1
(3.19)
T RC
R x l rG =
3 2 2
(3.20)
T RC
R x l rG =
3 1 3
(3.21)
( )
T RC
R x x x l rG =
3 2 1 2 4
1 (3.22)

Sustituyendo las ecuaciones 3.15 a 3.22 en las ecuaciones 3.12 a 3.14 y reordenando se obtiene:
( ) ( )
+

+ + =
2
1 2 1 3 2 1 2 2 1
1
1
i
Ca x l l x x x l x l
dt
dx
(3.23)
( )
+

+ + =
2
2 2 1 1 3 2 2 1
2
i
Ca x l x l x l x l
dt
dx
(3.24)
( ) ( ) ( )
+

+ + + =
2
3 2 1 1 2 2 3 1 2
3
1
i
Ca x x x l x l x l l
dt
dx
(3.25)

Canales L:

Para modelar la cintica de transformacin de los canales L se usa el formalismo de Hodgkin-
Huxley y se aprovecha la formulacin realizada por Fox y colaboradores (2001) bajo este principio
(ver captulo 2).

Dicho modelo asume que existen tres estados para el canal (ver mecanismo mostrado en la ecuacin
2.8), de entre los cuales la fraccin d corresponde a la fraccin de canales abiertos de entre la
totalidad de canales en el estado activo.

82

De este modo, el flujo difusivo debido a la actividad de los canales L est dado por:
transf
i extr
Ca
LC
A
l
Ca Ca
d D FD
=
+ +
+
2 2
2
(3.26)

donde:
+ 2
extr
Ca : concentracin molar del in calcio en el medio extracelular.
d : fraccin de canales L abiertos de entre la totalidad de canales L en el estado activo.

La tasa de transformacin que describe el comportamiento de la fraccin d de canales abiertos, es
una funcin simplificada y empricamente ajustada de acuerdo a valores experimentales de voltaje
(Destexhe y Huguenard, 2000) y su expresin matemtica es como sigue:
( ) d d
d
d d
= 1
dt
d
(3.27)

bien, definiendo los parmetros

d d
d
d

+
=
(adimensional) (3.28)
d d
d

+
=
1
(s
-1
) (3.29)

se tiene finalmente:
d
d d d

=

dt
d
(3.30)

Los valores para las constantes cinticas de reaccin (

d ,
d
), de acuerdo con los resultados de Fox
(Fox et al., 2001), son:

83
|
\
|
+
=
24 . 6
10
exp 1
1
V
d (3.31)
( )
( )
( )
( ) 40 05 . 0
40 05 . 0
07 . 0
01 . 0
exp 1
exp 07 . 0
exp 1
exp 25 . 0
1
+
+

+
+
+

=
V
V
V
V
d
(3.32)

b) Flujos qumicos:

Estos flujos son producidos por las actividades de las protenas llamadas bomba SERCA, bomba
ATPasa del sarcolema e intercambiador Na
+
-Ca
2+
, y en cada caso son funcin de la velocidad de
transporte de la protena. Esta velocidad de transporte (velocidad de reaccin) viene definida
entonces por el mecanismo de la reaccin qumica que ocurre cuando la protena se transforma para
transportar el in calcio. Estos procesos se diferencian del transporte a travs de los canales L y los
canales de Rianodina en que ocurren en contra del gradiente de concentraciones.

Bomba SERCA:

En el caso de esta bomba, se podra aplicar el mecanismo de reaccin planteado por Mahaney y
colaboradores (2000). Este mecanismo involucra 8 estados de transicin y transporta el in calcio en
los pasos de transformacin 2, 4 y 6 (ver captulo 2, ecuacin 2.12). A pesar de que se han medido
todas las constantes cinticas involucradas, usar este modelo dara lugar adems a la inclusin de 8
balances de masa, resultando en 8 ecuaciones diferenciales adicionales que pueden ser costosas
desde el punto de vista numrico. Por esta razn, se utiliza finalmente la simplificacin introducida
por Tang y Othmer (1994) y Hamam y colaboradores (2000), que propone un mecanismo de
reaccin del tipo Michaelis-Menten para simular el transporte del in calcio debido a la bomba
SERCA, y que conduce a calcular la velocidad de reaccin o flujo qumico de la bomba como se
muestra a continuacin:
( )
( )
cyt
i
i
SERCA
V
Ca p
Ca p
FQ
+
=
+
+
2
2 2
2
2
2
1
(3.33)

donde:

84
p
1
: velocidad mxima de transporte de la bomba SERCA.
p
2
: concentracin de saturacin de la protena.
cyt
V : volumen del citosol.

Bomba ATPasa del sarcolema:

El flujo de calcio producido por la bomba ATPasa del sarcolema, es muy parecido al producido por
la bomba SERCA pues, como lo expresan MacLennan y Kranias (2003), ambas bombas pertenecen
a la misma familia de protenas y su comportamiento es muy similar. De hecho, segn reportes de
Negretti y colaboradores (1995) la bomba del sarcolema se diferencia de la bomba SERCA slo en
que su velocidad de transporte es 90% ms lenta. De acuerdo con estos resultados es posible utilizar
el modelo propuesto por Tang y Othmer (1994) ajustando las constantes de mxima velocidad y
concentracin de saturacin a los resultados de Negretti como sigue:
( )
( )
cyt
i
i
Sarcolemma
V
Ca q
Ca q
FQ
+
=
+
+
2
2 2
2
2
2
1
(3.34)
donde:
q
1
: 0.1 veces p
1
.
q
2
: 0.1 veces p
2
.

Intercambiador Na
+
-Ca
2+
:

Los mecanismos de reaccin planteados para el flujo de calcio debido al transporte inducido por el
intercambiador Na
+
-Ca
2+
, no se han descrito completamente, siendo la propuesta de Michailova y
colaboradores (2002) la ms aceptable. Sin embargo, el modelo propuesto por estos autores utiliza la
variable
max
V como una funcin discontinua del voltaje (ecuacin 2.11) lo cual puede resultar muy
brusco y por lo tanto inconveniente en la integracin numrica de la dinmica de la concentracin
del in calcio. Por esta razn, en este modelo se propone utilizar una funcin gradual del tipo
sigmoidal para esta variable, definida entre los valores lmites propuestos en la ecuacin 2.11, como
se muestra a continuacin:

85
|
\
|
+
=
max V
V
max
exp 1
1
K V (3.35)

donde:
K: mxima velocidad del intercambiador Na
+
-Ca
2+
.
max
V : mximo valor del voltaje.

Sustituyendo la ecuacin 3.35 en la ecuacin 2.11 se obtiene la ecuacin que describe el flujo de
calcio debido a la actividad del intercambiador Na
+
-Ca
2+
como sigue:
( )
( ) ( )
cyt
n
i
n
m
n
i
V
V
Ca ENa
V
Ca K
Ca
K FQ
+
+
=
+
+
|
\
|
2
2
max
exp 1
1
(3.36)

c) Reacciones Qumicas:

Las reacciones qumicas que producen o consumen in calcio en el interior del citosol corresponden
solamente a la actividad de las miofibrillas y a la actividad de los canales de Rianodina. En efecto, las
miofibrillas se unen al in calcio o se liberan del mismo para producir el movimiento caracterstico
del miocito: contraccin-relajacin, y los canales de Rianodina consumen o liberan calcio en los
pasos de transicin planteados en el mecanismo propuesto para la apertura de estos canales
(ecuacin 2.10). Las reacciones qumicas asociadas a la actividad de los canales L no consumen o
producen in calcio ya que solo dependen del voltaje y por lo tanto no se consideran aqu.
Para la descripcin de la actividad de las miofibrillas se utiliza el mecanismo de reaccin tipo buffer
(ecuacin 2.14) asumido por Jafri y colaboradores (1998), Peskoff y Langer (1998), Chunlei (2001), y
Fox y colaboradores (2001). De manera que las velocidades de reaccin de consumo (
Miof
rR ) y de
liberacin (
Miof
rG ) del in calcio por su reaccin con las miofibrillas, vienen dadas por:
M Ca k rR
i d Miof
=
+ 2
1
(3.37)
CaM k rG
d Miof
=
2
(3.38)


86
Las variaciones dinmicas de las concentraciones de miofibrillas M y de la especie de transicin
CaM , tambin deben ser descritas en el modelo. Los balances de masa correspondientes son:
CaM k Ca M k
M
d i d
+ =
+
2
2
1
dt
d
(3.39)
CaM k Ca M k
M
d i d
=
+
2
2
1
dt
dCa
(3.40)

El trmino de consumo del in calcio en la ecuacin 3.1, dado por:
4 3 2 1
2
) , , (
RC RC RC RC Miof i i i
rR rR rR rR rR k Ca V rR + + + + =
+
(3.41)

se puede calcular sustituyendo la ecuacin 3.37 y las ecuaciones 3.15 a 3.18 en la ecuacin 3.41, lo
que da finalmente:
( )
T i T i
T i T i i d i i i
R Ca x l R Ca x x x l
R Ca x l R Ca x l M Ca k k Ca V rR
+
+ + + =
+ +
+ + + +
2
1 2
2
3 2 1 1
2
2 2
2
1 1
2
1
2
1
) , , (

(3.42)

Para el trmino de liberacin del in calcio en la ecuacin 3.1 se tiene:
4 3 2 1
2
) , , (
RC RC RC RC Miof i i i
rG rG rG rG rG k Ca V rG + + + + =
+
(3.43)

donde finalmente, al sustituir las ecuaciones 3.19 a 3.22 y la ecuacin 3.38 se obtiene:
( )
T
T T T d i i i
R x x x l
R x l R x l R x l CaM k k Ca V rG

+ + + + =

+
3 2 1 2
3 1 3 2 2 1 2
2
1
) , , (

(3.44)


87
d) Corrientes inicas existentes en el sarcolema:

Las corrientes inicas existentes en la pared del reactor citosol (sarcolema), a saber las corrientes de
los iones sodio, potasio, calcio y las corrientes de las bombas inicas, se describen a continuacin
tomando como base el trabajo de Fox (Fox et al., 2001).

Corrientes de sodio:

La actividad de los canales rpidos de sodio genera dos tipos de corrientes de sodio:
Na
I (ecuacin
2.21) que contribuye con la rpida despolarizacin de la pared del reactor principal e
Nab
I (ecuacin
2.23) que contribuye a mantener el potencial de meseta. Retomando del captulo 2 las expresiones
matemticas para estas corrientes se tiene:
( )
Na
Na
Na
E V j h m G I =
3
(3.45)
( )
Na
Nab
Nab
E V G I = (3.46)

Obviamente se deben incluir en el modelo las descripciones del comportamiento dinmico de los
distintos estados del canal, definidos en la ecuacin 2.9, a saber m, h y j . Para ello, se
realizan los balances de masa mostrados a continuacin:
( ) m m
dt
dm
m m
= 1 (3.47)
( ) h h
dt
dh
h h
= 1 (3.48)
( ) j j
dt
dj
j j
= 1 (3.49)

Los trminos
j j h h m m
, , , , , son las constantes cinticas para cada estado del canal rpido
de sodio y sus valores, obtenidos de los ajustes experimentales, se muestran a continuacin:
( ) 13 . 47 1 . 0
exp 1
13 . 47
32 . 0
+
+
=
V
m
V
(3.50)
11
exp 08 . 0
V
m

= (3.51)

88
( )
8 . 6
80
exp 135 . 0

+
=
V
h
(3.52)
( ) 11 1 . 0
exp 1
5 . 7
+
+
=
V
h
(3.53)
( )
( ) 79 15 . 0
23
100
exp 1
exp 175 . 0
+
+
+

=
V
V
j
(3.54)
( ) 32 1 . 0
exp 1
3 . 0
+
+
=
V
j
(3.55)

Corrientes de potasio:

Existen diferentes porciones de los canales de potasio cuyas actividades generan diferentes
corrientes elctricas de potasio en la pared del reactor, tal como se explica en la seccin 2.2.2.

Se toma entonces la descripcin de estas corrientes (Fox et al., 2001) como sigue:
( )
K
K
K
E V K G I =

1
1
1
(3.56)
( )
K Y X
to
to
E V K K G I
to to
= (3.57)
( )
K Kp
Kp
Kp
E V K G I = (3.58)
( )
K X R
Kr
Kr
E V
K
K K G I
Kr
=
+
4
0
(3.59)
( )
Ks X
Ks
Ks
E V K G I
Ks
=
2
(3.60)

Para completar el modelo se deben incluir como es costumbre las descripciones del
comportamiento de las diferentes especies qumicas (estados del canal) de transicin que aparecen, a
saber:

1
K ,
to
X
K ,
to
Y
K ,
Kp
K ,
R
K ,
Kr
X
K y
Ks
X
K .
Los comportamientos de las especies qumicas
1
K ,
Kp
K y
R
K , solo dependen del voltaje y se
pueden calcular segn las siguientes ecuaciones estticas:
( )
K
E V
T R
F
K

+
=
62 . 1
1
exp 2
1
(3.61)

89
( )
98 . 5
488 . 7
exp 1
1
V
Kp
K

+
= (3.62)
( ) 28 1 . 0
exp 5 . 2 1
1
+
+
=
V
R
K (3.63)

En cambio, las especies qumicas
to
X
K ,
to
Y
K ,
Kr
X
K y
Ks
X
K son de comportamiento dinmico y sus
concentraciones normalizadas pueden describirse mediante balances de masa, como se muestra a
continuacin:
( )
to to
to
X to X X to X
X
K K
dt
dK
= 1 (3.64)
( )
to to
to
Y to Y Y to Y
Y
K K
dt
dK
= 1 (3.65)
( )
Kr Kr Kr Kr
Kr
X X X X
X
K K
dt
dK
= 1 (3.66)
( )
Ks Ks Ks Ks
Ks
X X X X
X
K K
dt
dK
= 1 (3.67)

Donde
Yto Yto Xto Xto
, , , ,
Kr
X
,
Kr
X
,
Ks
X
y
Ks
X
son constantes de reaccin cintica, y sus
valores son (Fox et al., 2001):
V
to X

=
03577 . 0
exp 04516 . 0 (3.68)
V
to X

=
06237 . 0
exp 0989 . 0 (3.69)
( )
( )
5
5 . 33
5
5 . 33
exp 051335 . 0 1
exp 005415 . 0
+
+
=
V
V
to Y
(3.70)
( )
( )
5
5 . 33
5
5 . 33
exp 051335 . 0 1
exp 005415 . 0
+
+
+
=
V
V
to Y
(3.71)
V
X X
X
Kr Kr
Kr

+
=
+
1819 . 0 182 . 2
exp 1
1

(3.72)

90
V V
X X
Kr Kr
+
+
+ =
+
0128 . 0 677 . 7 1691 . 0 495 . 5
exp exp
1
43
1

(3.73)
( )
6 . 13
16
exp 1
1

+
=
+
V
X X
X
Ks Ks
Ks

(3.74)
( )
( )
( )
( )
1 exp
10 000131 . 0
exp 1
10 0000719 . 0
1 1
10 0687 . 0 10 148 . 0

=
+
V V
X X
V V
Ks Ks

(3.75)

Corrientes de calcio:

La actividad de los canales L generan tres tipos de corriente:
Ca
I ,
CaK
I e
Cab
I , cuya descripcin
matemtica es como sigue:
Ca
Ca
Ca
f d f I I = (3.76)
1
1000
1
2
2
0
2
2 2
+

=

+
T R
F V
T R
F V
i
Cahalf
Ca
Ca
sc
CaK
CaK
e
K e K
T R
F V
I
I
f d f
C
P
I (3.77)
) (
Ca
Cab
Cab
E V G I = (3.78)

Para calcular el comportamiento de las diferentes especies qumicas que aparecen: d , f y
Ca
f , se realizan los balances de masa correspondientes. El balance de masa para la especie d
se ha discutido anteriormente (ecuacin 3.29) y las constantes cinticas asociadas a dicho balance
estn dadas en las ecuaciones 3.31 y 3.32.

Para las especies f y
Ca
f los balances de masa son:
( ) f f
f
f f
= 1
dt
d
(3.79)
( )
Ca fCa Ca fCa
Ca
f f
f
= 1
dt
d
(3.80)

91
donde
f
,
f
,
fCa
y
fCa
son constantes de reaccin cintica, (Fox et al., 2001):
( )
5
5 . 12
exp 1
1
+
+
=
+
V
f f
f

(3.81)
( )
5 . 9
20
exp 1
200
30
1
+
+
+ =
+
V
f f

(3.82)
3
2
1
1
|
|
\
|
+
=
+ +
Ca
f m
i
fCa fCa
fCa
K
Ca

(3.83)
30
1
=
+
fCa fCa

(3.84)

donde:
Ca
f m
K : concentracin del in calcio en la cual la especie
Ca
f se satura.

Corrientes de las bombas inicas:

Corresponden a las contribuciones elctricas que generan las actividades de la bomba ATPasa del
sarcolema (
pCa
I ), del intercambiador Na
+
-
Ca
2+
(
NaCa
I ) y de la bomba Na
+
-K
+
(
NaK
I ), tomadas de las formulaciones realizadas por Fox y
colaboradores (2001) (ya explicadas en la seccin 2.2.2 del captulo 2) y expresadas
matemticamente segn las siguientes ecuaciones:
+
+
+
=
2
2
max
i mpCa
i
pCa
pCa
Ca K
Ca
I I (3.85)
( )
( ) ( )
T R
F V
sat
mCa
i
T R
F V
i
T R
F V
mNa
NaCa
NaCa
e k
Ca K
Ca Na e Ca Na e
Na K
k
I
+
+ +

+ +

+
+
+
(
+
=
) 1 ( 2
0
2
3
0
) 1 (
2
0
3
3
0
3
1
1

(3.86)

92
mKo
i
mNai
NaK
NaK
NaK
K K
K
Na
K
f I I
+
|
|
\
|
+
=
+
+
+
0
0
5 . 1
max
1
1
(3.87)

3.3.3 Resumen de las ecuaciones del modelo.

Las expresiones finales para el balance de masa en el reactor principal y el tanque SR y el balance de
corrientes en la pared del reactor principal se obtienen de la siguiente manera:

(i) Se sustituyen y se reordenan las ecuaciones 3.25, 3.32, 3.33, 3.34, 3.36, 3.42 y 3.44 en la
ecuacin 3.1 y se obtiene el balance del in calcio en reactor principal como se muestra a
continuacin:
( )
( ) ( )
( )
( )
( )
( )
( )
( )
T i T i
T i T i i d T
T T T d
i
i
i
i
n
i
n
m
n
i
V
V
cyt
transf
i SR
Ca
cyt
transf
i extr
Ca
R Ca x l R Ca x x x l
R Ca x l R Ca x l M Ca k R x l
R x x x l R x l R x l CaM k
Ca q
Ca q
Ca p
Ca p
Ca K
Ca
K
V
A
l
Ca Ca
x D
V
A
l
Ca Ca
d D

+ + + +
+
+
=
+ +
+ + +

+
+
+
+
+
+
|
\
|
+ + + + +
+ +
2
1 2
2
3 2 1 1
2
2 2
2
1 1
2
1 3 2
3 2 1 2 3 1 2 1 2
2
2 2
2
2
2
1
2
2 2
2
2
2
1
2
2
max
2 2
2
2 2 2
i
1
1
exp 1
1
dt
dCa
2 2

(3.88)

(ii) Se sustituyen y se reordenan las ecuaciones 3.25 y 3.33 en la ecuacin 3.2 y se obtiene el
balance del in calcio en el tanque SR tal como sigue:
( )
( ) SR
cyt
i
i
cyt
transf
i SR
Ca
V
V
Ca p
Ca p
V
A
l
Ca Ca
x D
|
|
\
|
+
=
+
+ + + +
+
2
2 2
2
2
2
1
2 2
2
2
SR
2
dt
dCa
(3.89)

93

(iii) Se sustituyen las ecuaciones 3.45, 3.46, 3. 56, 3.57, 3.58, 3.59, 3.60, 3.76, 3.77, 3.78, 3.85, 3.86 y
3.87 en la ecuacin 3.3 y se obtiene la ecuacin final de balance de corrientes en la pared del
reactor principal en la siguiente expresin:
( ) ( ) ( )
( ) ( ) ( )
( )
( )
( ) ( )
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
\
|
+
+
+
(
+
+
+
|
|
\
|
+

+
+
+ +
+

+ +
+ + +
+ + +
=

+
+ +

+ +

+
+
+
+
+
+
+
stim
T R
F V
sat
mCa
i
T R
F V
i
T R
F V
mNa
NaCa
mKo
i
mNai
NaK
NaK
i mpCa
i
pCa
Ca
Cab
T R
F V
T R
F V
i
Cahalf
Ca
Ca
sc
CaK
Ca
Ca
K Kp
Kp
K to to
to
K
K
Ks Ks
Ks
K Kr
Kr
Na
Nab
Na
Na
I
k
Ca K
Ca Na Ca Na
Na K
k
K K
K
Na
K
f I
Ca K
Ca
I E V G
K K
T R
F V
I
I
f d f
C
P
f d f I E V K G
E V Y X G E V K G E V X G
E V
K
X R G E V G E V j h m G
dt
dV
) 1 (
2
0
2
3
0
) 1 (
2
0
3
3
0
3
0
0
5 . 1
2
2
2
2
0
2
2
2
1
1
2
0 3
exp 1
1
exp exp
1
1
) (
1 exp
exp
1000
1
4

(3.90)

Como se puede observar, el desarrollo de las ecuaciones del modelo conlleva a establecer tres
ecuaciones diferenciales principales asociadas a las siguientes variables: la concentracin del in
calcio en el reactor principal,
+ 2
i
Ca (ecuacin 3.88), la concentracin del in calcio en el tanque SR,
+ 2
SR
Ca (ecuacin 3.89) y el voltaje, V (ecuacin 3.90) en la pared del reactor principal. Sin embargo

94
para resolver este sistema es necesario solucionar adems la dinmica de las otras variables descritas
a saber: d ,
1
x ,
2
x ,
3
x , M , CaM , m, h , j ,
to
X
K ,
to
Y
K ,
Kr
X
K ,
Ks
X
K , f ,
Ca
f .

Esto representa un total 18 ecuaciones diferenciales que constituyen el modelo planteado y que
permiten describir 18 variables de estado. En la tabla 3.1 se indican las ecuaciones asociadas a cada
variable y sus condiciones de borde.

Tabla 3.1 Condiciones de borde de las variables del modelo.
Variable Ecuacin Rango
d 3.27 [0 1]
1
x
3.21 [0 1]
2
x
3.22 [0 1]
3
x
3.23 [0 1]
M (M)
3.39 [0 70]
CaM (M)
3.40 [0 70]
m 3.47 [0 1]
h 3.48 [0 1]
j 3.49 [0 1]
to
X
K
3.64 [0 1]
to
Y
K
3.65 [0 1]

95
Kr
X
K
3.66 [0 1]
Ks
X
K
3.67 [0 1]
f 3.79 [0 1]
Ca
f
3.80 [0 1]
+ 2
i
Ca (M)
3.88 [0 10]
+ 2
SR
Ca (M)
3.89 [0 500]
V (mV) 3.90 [-94.5 50]

3.3.4 Parmetros del modelo.

El modelo desarrollado en este captulo contiene una gran cantidad de coeficientes los cuales han
sido medidos por diferentes autores utilizando distintos mtodos experimentales y distintas especies
animales. Estos parmetros han sido clasificados de acuerdo al siguiente criterio:

(i) Parmetros asociados a la geometra de la clula (Tabla 3.2).

(ii) Parmetros asociados al transporte de calcio en el citosol (Tabla 3.3).

(iii) Parmetros asociados al transporte de calcio en el retculo sarcoplsmico (Tabla 3.4).

(iv) Parmetros asociados a las corrientes inicas (Tabla 3.5).

(v) Parmetros asociados a las concentraciones invariables del sistema (Tabla 3.6).

(vi) Parmetros asociados a las constantes fsicas del sistema (Tabla 3.7).


96
Los valores mostrados en las tablas son producto de una exhaustiva revisin bibliogrfica y sirven
de punto de partida para obtener respuestas iniciales de la dinmica del modelo.

Por otro lado, es necesario definir la entrada del sistema
stim
I , que es el estmulo inicial de naturaleza
elctrica, que desencadena todo el proceso de excitacin-contraccin y relajacin.

De acuerdo con varios trabajos (Luo y Rudy, 1994; Jafri et al., 1998; Fox et al., 2001), tpicamente se
usa como entrada una funcin del tipo pulso, definida de la siguiente manera:
( ) ( ) | | a t u a t u k I
stim
+ = (3.91)

donde:
) (t u : es la entrada.
k : es la amplitud de la entrada.
a : es el perodo o duracin de la entrada.

Tomando como base el trabajo de Fox y colaboradores (2001), se asignan los siguientes valores a
los parmetros que conforman
stim
I :
k : -80 mVms
-1

a : 1 ms.

Tabla 3.2. Parmetros asociados a la geometra del miocito.

Parmetro Valor Fuente bibliogrfica Especie animal
trasnf
A
1,58e
-12
m
2
Michailova et al.,
2002.
Miocito de cerdo.
cyt
V
1,6e
-14
m
3
Michailova et al.,
2002.
Miocito de cerdo.
SR
V
1,127e
-15
m
3
Michailova et al.,
2002.
Miocito de cerdo.

97
l 0,003e
-6
m Michailova et al.,
2002.
Miocito de cerdo.

Tabla 3.3. Parmetros asociados al transporte del calcio en el citosol.

1
q
19 Ms
-1
Tang y Othmer, 1994. Miocito de mamferos en
general.
2
q
0,06 M Tang y Othmer, 1994. Miocito de mamferos en
general.
K
150,3 Ms
-1
Michailova et al.,
2002.
Miocito de cerdo.
m
K
1 M Backx et al., 1989. Oocitos
6
de rana.
n 1 Backx et al., 1989. Oocitos de rana.
1 d
k
39 M
-1
s
-1
Sipido y Weir, 1991. Miocito de cerdo.
2 d
k
20 s
-1
Sipido y Weir, 1991. Miocito de cerdo.

Tabla 3.4. Parmetros asociados al transporte del calcio en el retculo sarcoplsmico.

1
l
15 M
-1
s
-1
general.
2
l
0,8 M
-1
s
-1
general.
1
l

7,6 s
-1
general.

6
Clulas que se transforman en ovocitos o huevos maduros despus de la fertilizacin (Guyton, 1994).


98
2
l

0,84 s
-1
general.
1
p
1038 Ms
-1
general.
2
p
0,12 M Tang y Othmer, 1994. Miocito de mamferos en
general.

Tabla 3.5. Parmetros asociados a las corrientes inicas.

Na G
12,8 mS F
-1
Fox et al., 2001. Miocito canino.
1 K G
2,8 mS F
-1
Kr
G
0,0136 mS F
-1
Ks
G
0,0245 mS F
-1
Kp
G
0,002216 mS F
-1
to
G
0,23815 mS F
-1
Nab
G
0,0031 mS F
-1
Cab
G
0,0003842 mS F
-1
Ca P
0,0000226 cm ms
-1
CaK P
5,79e
-7
cm ms
-1
max NaK
I
0,693 A F
-1
Cahalf
I
-0,265 A F
-1
max pCa
I
0.05 A F
-1

0,35 Fox et al., 2001. Miocito canino.

99
sat
k
0,2 Fox et al., 2001. Miocito canino.
NaCa
k
1500 A F
-1
mNa
K
87,5 mM Fox et al., 2001. Miocito canino.
mCa
K
1380 M Fox et al., 2001. Miocito canino.
mNai
K
10 mM Fox et al., 2001. Miocito canino.
mKo
K
mpCa
K
0,05 M Fox et al., 2001. Miocito canino.
Ca
f m
K
0,18 M Fox et al., 2001. Miocito canino.

Tabla 3.6 Parmetros asociados a las concentraciones invariables del modelo.

Parmetro Valor Fuente bibliogrfica Especie Animal
+
0
Na
+
0
K
+ 2
0
Ca
2000 M Fox et al., 2001. Miocito canino.
+
i
Na
+
i
K

100
T
R
35 M Estimada
7
Miocito de mamferos en
general.

Tabla 3.7. Parmetros asociados a las constantes fsicas del modelo.

Parametro Valor Fuente bibliogrfica Especie animal
sc
C
1 F Fox et al., 2001. Miocito canino.
+ 2
Ca
D
0,78e
-9
m
2
s
-1
Fujioka et al., 2000. Miocito de cerdo.
F
96,5 coulomb
mmol
-1

Constante universal.
R
8,314 J mol
-1
K
-1
Constante universal.
T
310 K Fox et al., 2001. Miocito canino.

Finalmente, es interesante notar que las ecuaciones planteadas en este captulo permiten identificar
los elementos celulares del miocito mediante su asociacin con los parmetros y variables
matemticas del modelo. As, la actividad de los canales de Rianodina est asociada a las constantes
cinticas
1
l ,
1
l ,
2
l y
2
l , la actividad de la bomba SERCA a los parmetros
1
p y
2
p , la actividad de
la bomba ATPasa del sarcolema a los parmetros
1
q y
2
q , la actividad del intercambiador Na
+
-Ca
2+

a los parmetros K ,
m
K , y n , la actividad de las miofibrillas a los parmetros
1 d
k y
2 d
k y la
actividad de los canales L a las cinticas
d y
d
. La figura 3.3 muestra el diagrama por
compartimientos de la clula donde se asocian los parmetros del modelo con los diferentes
elementos celulares. Esta herramienta asociativa es til para evaluar las contribuciones especficas de
cada elemento celular en el funcionamiento normal y patolgico del proceso de excitacin-
contraccin y relajacin del miocito.

7
El parmetro
T
R se estima asumiendo que la concentracin total de los canales de Rianodina deben al menos
ser la mitad del valor de concentracin de miofibrillas para poder activarlas liberando el calcio del retculo
sarcoplsmico. El valor de concentracin de las miofibrillas es reportado por Sipido y Weir (1991).

101

Figura 3.3. Asociacin entre los elementos celulares del miocito y los parmetros matemticos del
modelo.

3.4 CONCLUSIONES.

En este captulo se ha desarrollado un modelo matemtico del miocito basado en su interpretacin
como un sistema de reactores qumicos, que integra en un conjunto dinmico y coherente, la
actividad qumica de los diferentes elementos celulares: (canales L, canales de Rianodina, bomba
SERCA, bomba ATPasa del sarcolema, intercambiador Na
+
-Ca
2+
, miofibrillas) y la actividad
elctrica del sarcolema.

Para representar la fenomenologa de los diversos elementos se ha utilizado la exhaustiva revisin
bibliogrfica presentada en el captulo anterior. Se han combinado entonces descripciones muy
precisas, como la de los canales de Rianodina, cuyo mecanismo ha sido bien estudiado por Tang y
Othmer (1994), con descripciones muy aproximadas, como de la actividad del intercambiador Na
+
-
Ca
2+
(Michailova et al., 2002). El resultado es un modelo hbrido o de caja gris, que si bien
contiene muchos parmetros que debern ser optimizados, permite asociar los distintos elementos
celulares del miocito con los distintos coeficientes del modelo (ver figura 3.3). Este aspecto,
representa una importante contribucin en el modelado de la clula cardiaca, pues puede

Intercambiador
Na
+
-Ca
2+

Bomba ATPasa del Sarcolema
SR

Canales L
V
Miofibrillas
Bomba SERCA
K, K
m
, n,
Ca
2+
i
,V
d
,
d
,
Ca
2+
i
, V
l
1
, l
2,
l
-1
, l-
2
,Ca
2+
i

k
d1
, k
d2
,
Ca
2+
i

p
1
, p
2
, Ca
2+
i

q
1
, q
2
, Ca
2+
i

Canales de
Rianodina

102
aprovecharse para conocer especficamente cmo las actividades de los elementos celulares influyen
y modulan el proceso de excitacin- contraccin y relajacin y las dinmicas ligadas a este proceso:
concentracin del in calcio y voltaje.

El modelo consta de 18 variables descritas mediante un sistema de 18 ecuaciones diferenciales, que
tiene como variable de entrada el pulso elctrico de estmulo inicial
stim
I y como variables de salida
principales las concentraciones
+ 2
i
Ca (ecuacin 3.88) y
+ 2
SR
Ca (ecuacin 3.89) y el voltaje V (ecuacin
3.90). Los valores numricos de la gran cantidad de parmetros del modelo estn reseados en las
tablas 3.2 a 3.7 y son producto de una ardua revisin bibliogrfica. Sin embargo, estos parmetros
no provienen de la misma especie ni son medidos con los mismos protocolos experimentales, por lo
cual se toman slo como valores de partida inicial para las simulaciones. Posteriormente, los
parmetros deben ser ajustados apropiadamente mediante procesos de validacin del modelo que se
abordarn en el siguiente captulo.

Simulacin y Validacin del modelo

103
C a p t u l o 4

SIMULACIN Y VALIDACIN DEL MODELO

Son vanas y estn plagadas de errores las ciencias que no nacen de la experiencia madre de toda certidumbre.
-Leonardo Da Vinci-

4.1 INTRODUCCIN.

La simulacin consiste en encontrar las soluciones analticas o numricas de un modelo
matemtico, y permite verificar el comportamiento del modelo en cuestin. La simulacin es la
base de la etapa de validacin en la cual se evalan sistemticamente las bondades del modelo
ante diferentes entradas en funcin de su error respecto al comportamiento real del sistema ante
las mismas entradas. Para ello se utilizan conjuntos de datos de prueba o de validacin y se
calculan los errores de prediccin, o un error generalizado promedio, o bien se visualiza la
habilidad del modelo para predecir. Esta ltima prueba permite una mejor comprensin de la
calidad de la prediccin del modelo, pues compara grficamente las simulaciones con la respuesta
real del sistema (Ljung, 1987).

Cuando se trata de un modelo fenomenolgico, o de tipo caja blanca, el mismo se encuentra
perfectamente determinado, es decir, se conocen con certeza los parmetros y condiciones de
borde e iniciales inherentes al modelo, por lo ste se puede resolver por va analtica o numrica.
La etapa de validacin servir en este caso para calcular la precisin del modelo en diferentes
situaciones.

En los modelos tipo caja gris el procedimiento de simulacin y validacin no es tan directo
puesto que existen partes del modelo y/o conjuntos de parmetros sobre los cuales se posee
poca informacin. En este caso, es necesario realizar en primer lugar un ajuste de parmetros

104
basndose en el conocimiento a priori que se posee del sistema para conducir a soluciones
aceptables y similares a comportamientos reales. Sin embargo, tambin pueden existir condiciones
de operacin bajo las cuales la estructura del modelo falla y sus resultados no pueden ajustarse a
todos los datos. En estas situaciones el proceso de validacin debe continuar utilizando los
resultados de las simulaciones para obtener informacin sobre cul es la parte del modelo o el
conjunto de parmetros que afecta el comportamiento del sistema en cada situacin.
El procedimiento de validacin para el modelo propuesto, se realiza de la siguiente manera:

Validacin inicial: est basada en el conocimiento fenomenolgico general del
comportamiento del miocito y en un ajuste grueso de algunos parmetros con el fin de
obtener resultados de simulacin coherentes, es decir, valores o rangos de valores
comnmente aceptados en fisiologa celular.
Validacin discriminada por especies: se evala el desempeo del modelo propuesto y se
adapta, con un ajuste ms fino de parmetros, para predecir el comportamiento del miocito
de: perro, conejo y pollo y tambin del miocito humano. El ajuste de parmetros se realiza
de manera heurstica (ensayo y error) pero se usa el conocimiento a priori disponible sobre
la fenomenologa del sistema celular. Los datos experimentales se obtienen, algunos de la
literatura especializada, y otros, de campaas de medicin realizadas en el marco de este
mismo proyecto
1
.

Como consecuencia del proceso de validacin se obtiene en general un modelo validado para el
miocito de las especies en cuestin cuando los resultados de las simulaciones corresponden a los
resultados experimentales, por ejemplo con errores porcentuales menores que 10%. Es importante
aclarar que en el campo del modelado cardaco se pueden tolerar errores porcentuales de prediccin
de est magnitud o an mayores (15%), pues lo significativo es que el modelo propuesto siga las
tendencias esperadas bajo condiciones normales (reproducir el proceso de excitacin-contraccin y
relajacin) y que adems pueda simular comportamientos patolgicos anormales que se observan
en el miocito cuando alguna droga se inyecta (Rocaries et al., 2004, Khol y Noble, 2003). An ms

1
Grupo INSERM (Institut National de la Sant et de la Recherche Mdicale) Pars- Francia.


105
interesante es que el modelo permita asociar este comportamiento anormal a la fenomenologa
cardaca identificando especficamente los elementos celulares que se alteran, lo que contribuye a un
mejor entendimiento de los mecanismos de accin de las drogas. Esta herramienta es muy til en el
rea farmacutica y su aplicacin se detalla en el captulo 5.

Los casos en que la validacin no se logra de manera satisfactoria son indicio de que la estructura
del modelo no es correcta y que deber ser mejorada en algunos de sus elementos. La informacin
sobre cul elemento del modelo (parmetro o grupos de parmetros) producen errores en las
simulaciones y qu tipo de errores, es un conocimiento muy importante que se puede extraer con un
estudio de sensibilidad como se expone en la seccin 4.5.

En este captulo se explica en primer lugar, en la seccin 4.2, cmo se obtiene la resolucin del
modelo planteado en el captulo 4, precisando sus variables de entrada y de salida y formulando sus
condiciones de borde e iniciales. En la seccin 4.3 se presentan validaciones del modelo en
diferentes situaciones que permiten finalmente comparar sus resultados con los de otros modelos
propuestos en la literatura. En la seccin 4.4 se realiza un proceso de validacin diferenciado por
especies. En particular se valida el modelo para miocito de pollo, de perro y de conejo, adems que
para el miocito humano. Finalmente en la seccin 4.5 se lleva a cabo el estudio de sensibilidad del
modelo.

4.2 RESOLUCIN DEL MODELO.
El modelo esta constitudo por un sistema de 18 ecuaciones diferenciales ordinarias no lineales de
primer orden descritas en funcin de las 18 variables de estado mostradas en el captulo 3.
La variable de entrada al sistema esta representada por
stim
I y es el estimulo inicial de excitacin
elctrica que desencadena la apertura de los canales L.
Las variables ms interesantes de salida y sobre las cuales se poseen datos para la validacin son:

+ 2
i
Ca : concentracin del in calcio en el citosol,

106
V : voltaje o potencial de membrana, y

Ca
I : corriente inica de calcio generada por la actividad de los canales L.
Sin embargo otras variables como por ejemplo:

+ 2
SR
Ca : concentracin del in calcio en el retculo sarcoplsmico,

2
x : fraccin de canales abiertos de Rianodina, y
d : fraccin de canales abiertos L.
se pueden tabular a fin de realizar un anlisis completo sobre el desempeo del modelo.
Generalmente es muy poco viable resolver analticamente un sistema de ecuaciones diferenciales
como el constitudo por el modelo planteado, por lo que su resolucin numrica es lo ms
conveniente. Para ello se utiliza el lenguaje de programacin Matlab (versin 6.5) el cual conjuga
un ambiente amigable, numerosos recursos matemticos y una poderosa plataforma grfica que
facilitan la bsqueda de las soluciones. A su vez Matlab contiene una herramienta especfica para
la simulacin de modelos denominada Simulink. Esta herramienta provee una gran cantidad de
mtodos numricos de integracin que pueden ser seleccionados de acuerdo a las caractersticas del
sistema a resolver.

Para el sistema en cuestin se emplean mtodos numricos con paso variable de integracin que
optimizan el algoritmo de solucin y disminuyen el tiempo de ejecucin. De los diferentes mtodos
numricos con paso variables provistos en el men de Simulink se selecciona un mtodo
numrico del tipo corrector-predictor diseado por Klopfenstein (1971) porque es robusto y estable
y es adecuado en los casos donde el sistema de ecuaciones diferenciales est completamente
definido (18 ecuaciones diferenciales-18 variables). Este mtodo permite modificar el error de
tolerancia relativo y absoluto y es clasificado como un mtodo rpido y de exactitud mediana (1e
-3

error de tolerancia relativo) segn Shampine y Reichelt (1997).
Aunque las ecuaciones diferenciales del modelo pueden programarse directamente en Simulink de
Matlab se prefiere la alternativa construir dos funciones en Matlab mediante el comando

107
Matlabfunction
2
para representar la dinmica elctrica (ecuacin 3.90) y la dinmica qumica
(ecuaciones 3.88 y 3.89). Estas funciones se denominan electricalphenomena y
chemicalphenomena respectivamente (ver apndice A) y son utilizadas por Simulink de manera
automtica como se muestra en el diagrama funcional de la figura 4.1.
time
To Workspace1
Pulse
Generator
10
Nai
149.4
Ki
V
Cai
Caisr
Pulse
Ki
Nai
V
Caif ox
Caisrf ox
d
Electrical Phenomena
Cl ock
V
Cai
Caisr
Ki
Nai
d
Cai
Caisr
Chemical Phenomena

Figura 4.1 Programa realizado en Simulink.

2
El lenguaje de programacin Matlab es una herramienta genrica para resolver una vasta cantidad de
problemas matemticos por lo que su ejecucin en el computador es muy pesada. Con estas funciones se optimiza
el uso de la memoria RAM (memoria de acceso aleatorio) permitiendo resolver el sistema de ecuaciones
diferenciales ms rpidamente.


108
Por otra parte, para resolver el sistema de ecuaciones diferenciales es necesario definir:
1. Condiciones iniciales para cada variable: estos valores provienen de un estudio del sistema
en estado estacionario, y ya han sido reportados por varios autores, como se muestra en la
tabla 4.1.
2. Variable de entrada: los parmetros k (amplitud) y a (perodo) que definen la variable
stim
I (ecuacin 3.91) se toman de los valores reportados en el trabajo de Fox y
colaboradores (2001), tal y como se seala en la seccin 3.3.4.
Definidos los datos necesarios para la simulacin y usando para empezar los parmetros reportados
tambin en el captulo 3, se pueden calcular las soluciones numricas del modelo. Estas son
generadas en el espacio de trabajo de Matlab denominado workspace, desde donde pueden ser
exportadas a otros ambientes de trabajo como EXCEL y LOTUS.

Tabla 4.1 Condiciones iniciales para el sistema de ecuaciones diferenciales.

Variable Valor Fuente bibliogrfica
t (s) 0
V (mV) -94,7 Fox et al., 2001.
+ 2
i
Ca (M)
0,14 Hamam et al., 2000.
+ 2
SR
Ca (M)
500 MacLennan y Kranias, 2003
M (M) 70 Sipido y Weir, 1991.
CaM (M) 0 Estimado
3

1
x
0,691 Hamam et al., 2000.
2
x
0,192 Hamam et al., 2000.

3
Inicialmente se considera que el sitio activo de las miofibrillas para el in calcio esta inactivo o inhibido y por
lo tanto no hay formacin de la sustancia CaM.

109
3
x
0,0254 Hamam et al., 2000.
f 0,983 Fox et al., 2001.
d 0,0001 Fox et al., 2001.
Ca
f
0,942 Fox et al., 2001.
m 2,4676e
-4
Fox et al., 2001.
h 0,99869 Fox et al., 2001.
j 0,99887 Fox et al., 2001.
Kr
X
K
0,229 Fox et al., 2001.
Ks
X
K
0,0001 Fox et al., 2001.
Xto
K
3,742e
-5
Fox et al., 2001.
Yto
K
1 Fox et al., 2001.

4.3 VALIDACION DEL MODELO CELULAR GENERALIZADO.

El proceso de validacin mide qu tan bueno es el nuevo modelo formulado y en qu situaciones.
Para determinar esta cuestin es necesario responder a las siguientes preguntas (Ljung, 1999):

1) El modelo se acerca a los datos reales del sistema?

2) Es el modelo suficientemente bueno para el propsito que fue diseado?

La primera pregunta conduce a la comparacin o validacin de los resultados de simulacin del
modelo respecto al comportamiento real del sistema. Estas comparaciones pueden ser grficas y/o
basadas en el error entre los datos simulados y los datos reales. Los criterios para realizar dichas
comparaciones sern explicados en la seccin 4.3.1.

110

Para responder la segunda pregunta se debe verificar si el modelo es capaz de predecir el
comportamiento dinmico de: la concentracin del in calcio en el citosol y del voltaje para
diferentes especies y en distintas situaciones. Pero adems, la estructura del modelo debe permitir la
identificacin y asociacin de los parmetros matemticos con la estructura fsica (elementos
celulares) del miocito. Este ltimo aspecto est relacionado con el estudio de sensibilidad del
modelo como se discute ms adelante.

4.3.1 Variables utilizadas.

Las principales variables de salida del modelo son: la concentracin del in calcio en el citosol
+ 2
i
Ca
y el voltaje V del sarcolema. Al realizar la validacin de estas variables los principales aspectos a
verificar obedecen a los intereses de los bilogos y mdicos
4
, quienes consideran como puntos de
especial atencin los siguientes:

i) Forma de las curvas: para V , su dinmica debe representar la curva tpica de potencial en
forma de meseta que se observa en los miocitos (figura 1.14); para la dinmica de
+ 2
i
Ca la
forma de su curva debe aproximarse a una campana asimtrica (figura 1.15).

ii) Duracin de ambas dinmicas: el proceso de excitacin-contraccin y relajacin es un ciclo
de una duracin determinada, para la variable V este ciclo oscila entre 200-400 ms (Guyton,
1994), para la variable
+ 2
i
Ca la duracin del ciclo oscila entre 800-1000 ms (Lecarpentier,
1996).

iii) Gradiente mximo de calcio: es la diferencia entre la concentracin ms alta y ms baja del
in calcio en el citosol. Este valor puede oscilar entre 0,8 a 1,1 M (Lecarpentier, 1996).

Con el fin de sistematizar las comparaciones grficas es necesario medir las siguientes variables:

4
Estos intereses estn subordinados a la informacin que se puede extraer experimentalmente del
comportamiento de la clula cardiaca.

111
voltaje
t : duracin del ciclo de V (en s).
calcio
t : duracin del ciclo de
+ 2
i
Ca (en s).
calcio
: gradiente mximo de
+ 2
i
Ca (en M).
exctcalcio
t : duracin del evento de excitacin para el ciclo de
+ 2
i
Ca (en s).
o relaxcalci
t : duracin del evento de relajacin para el ciclo de
+ 2
i
Ca (en s).

Adicionalmente, se puede contar con medidas experimentales de la corriente de calcio generada por
la actividad de los canales L,
Ca
I , por lo que esta variable tambin puede ser validada usando la
diferencia entre la corriente
Ca
I mxima y la mnima:
Ca
I
: gradiente mximo de la corriente
Ca
I (en A).

En adelante se designarn con
voltaje
t
,
calcio
t
,
calcio
,
exctcalcio
t
,
o relaxcalci
t
,
Ca
I
las variables estimadas

por el modelo, en lugar de los smbolos normales que se usarn para indicar los valores reales
(experimentales).

Adems cuando se dispone de un conjunto de resultados experimentales rico en informacin, se
consideran como los valores reales de las diferentes variables (
exctcalcio
t ,
Ca
I
, etc.) sus valores
medios, dados por:
=
=
=
N i
i
x
N
x
0
1
(4.1)
donde:
N : nmero de datos promediados.

Para simplificar la notacin no se indicar ninguna diferencia entre la variable promediada
(
exctcalcio
t ,
Ca
I
, etc).y su valor real (
exctcalcio
t ,
Ca
I
, etc).

La estimacin del error en una simulacin puede realizarse por diferentes mtodos (Ljung, 1999).
En este caso se usa el error porcentual, en cual se define como:

112
100
=
y
y y
(4.2)
donde:
%
: error porcentual.
y : valor real de la variable de salida.
y : valor estimado por el modelo para la variable de salida.

4.3.2 Procedimiento de validacin general.

Consiste en el ajuste grueso de algunos parmetros utilizando conocimiento fenomenolgico
general para obtener resultados coherentes y acordes con los valores tpicos reportados en la
literatura para el comportamiento dinmico de
+ 2
i
Ca y de V .

Los parmetros del modelo dados en la seccin 3.3.4 han sido tomados de la literatura y usados en
otros modelos, pero no existe uniformidad entre ellos ya que provienen de diferentes especies
animales, por lo que es necesario ajustarlos preliminarmente. En esta seccin se realiza este ajuste de
manera heurstica basndose en un proceso de prueba y error, pero con un importante aporte de
conocimiento fenomenolgico que permite identificar los parmetros que deben ser ajustados y de
qu manera. Ntese adems que en algunos casos el ajuste paramtrico tambin compensa alguna
deficiencia estructural (fenomenolgica) del modelo caja gris.

La informacin obtenida de una serie de simulaciones realizadas usando los parmetros inicialmente
propuestos, conjuntamente con un estudio cuidadoso de los modelos y los resultados de Tang y
Othmer (1994), de Hamam y colaboradores (2000) y de Fox y colaboradores (2001), ponen en
evidencia la necesidad de modificar los valores de los parmetros que acompaan a las expresiones
matemticas de: corriente inica de la bomba Na
+
-K
+
, flujo qumico de la bomba SERCA, flujo
qumico de la bomba ATPasa del sarcolema, flujo qumico del intercambiador Na
+
-Ca
2+
y flujo
difusivo del in calcio en el citosol. Mientras que por otra parte, se encuentra que los valores de los
parmetros asociados a la descripcin cintica de los canales de Rianodina y los parmetros
asociados a la actividad del resto de las corrientes elctricas son bastante apropiados. En lo prrafos

113
siguientes se explican los diferentes ajustes paramtricos realizados, que se muestran resumidos, en
la tabla 4.2.
Tabla 4.2 Parmetros modificados en el sistema de ecuaciones diferenciales.

Parmetro Valor
max NaK I
0,3465 A F
-1

1
p
10,38 Ms
-1

1
q
0,19 Ms
-1

K 120,24 Ms
-1

+ 2
Ca
D
0,678e
-11
m
2
s
-1

- En la corriente inica de la bomba Na
+
-K
+
o
NaK
I : la contribucin de la actividad elctrica de la
bomba Na
+
-K
+
es la corriente
NaK
I (ecuacin 3.87) y sta a su vez es funcin del parmetro
max NaK I , (mxima corriente generada por la bomba Na
+
-K
+
cuando su velocidad de transporte
es mxima). Como la actividad qumica de la bomba no est representada en el modelo, este
parmetro debe ajustarse, para lograr ciclos estables y sostenidos de voltaje. Las pruebas
muestran en efecto que
NaK
I es determinante en la reproduccin de la dinmica de V . El ajuste
se logra finalmente con max NaK I =0,3465 A F
-1
.

- En el flujo qumico de la bomba SERCA y de la bomba del sarcolema: las expresiones matemticas del
flujo qumico que genera la actividad de estas bombas pueden ser tratadas bajo
consideraciones similares debido a lo parecido de la naturaleza de ambos elementos celulares.
Los parmetros que modulan el flujo qumico de la bomba SERCA son
1
p (velocidad
mxima de transporte de la bomba SERCA) y
2
p (concentracin de saturacin de la
protena). Para el parmetro
1
p otros trabajos sugieren valores menores que el usado por
Tang y Othmer (1994) y Hamam y colaboradores (2000), reportado en la tabla 3.4. En este

114
sentido Tang (1997) propone un valor de
1
p igual a 54 Ms
-1
y los trabajos de Ginsburg y
colaboradores (1998) coinciden con esta propuesta. Para encontrar resultados coherentes en
las simulaciones efectivamente el valor de
1
p debe ser menor, y es finalmente ajustado
empricamente al valor de 10,38 Ms
-1
. Para el parmetro
2
p ningn ajuste es necesario pues
modificaciones en su valor no afectan significativamente al sistema. Debido a que el
parmetro
1
q (velocidad mxima de transporte de la bomba del Sarcolema) es 0,1 veces
1
p
(captulo 4) su valor tambin se ve modificado y queda como 0,19 Ms
-1
.

- En el flujo qumico del intercambiador Na
+
-Ca
2+
: este elemento es considerado como el mecanismo
mediante el cual se extrae la mayor cantidad de calcio desde el citosol hacia el medio
extracelular, por lo que su velocidad mxima de transporte (parmetro K ) es un factor
determinante en la duracin del evento de relajacin. El valor de K mostrado en la tabla 3.3,
es reportado en el trabajo de Michailova y colaboradores (2002), y corresponde al miocito de
cerdo, el cual posee un proceso de excitacin-contraccin y relajacin ms veloz respecto a
otras especies animales. Es necesario reducir el valor del parmetro K a fin de obtener una
relajacin de la clula ms lenta que coincida con los resultados experimentales de
+ 2
i
Ca para
el miocito humano reportados por Berridge y colaboradores (2003). El proceso de ajuste
produce finalmente: K = 120,24 Ms
-1
.
- En el flujo difusivo del in calcio: el parmetro
+ 2
Ca
D , representa la movilidad del in calcio en la
clula. Normalmente para difusin en lquidos los valores de esta constante oscilan entre
magnitudes de 1e
-9
a 0,3e
-9
m
2
s
-1
(Treybal, 1996). No obstante, esto aplica para soluciones
lquidas de slo dos componentes, que no es el caso en la clula, la cual posee muchas
sustancias en suspensin (protenas y otros iones) que pueden disminuir la velocidad de
difusin del in calcio dentro de la matriz lquida que la compone. Entonces para este modelo
debe considerarse un valor de
+ 2
Ca
D menor al reportado en la tabla 3.7 (tomado del trabajo de
Fujioka et al., 2000). A partir de esta informacin se realizan ajustes empricos para este
parmetro obtenindose los resultados deseados para la dinmica de
+ 2
i
Ca y de V cuando el
valor de
+ 2
Ca
D es igual a 0,678e
-11
m
2
s
-1
.


115
4.3.3 Resultados de simulacin del modelo generalizado.

Los resultados tpicos obtenidos usando los valores paramtricos modificados (tabla 4.2) se
muestran en las figuras 4.2 y 4.3 para las dinmicas de V y
+ 2
i
Ca respectivamente. La duracin de
los ciclos de V :
voltaje
t
=0,35 s (figura 4.2) logra acercarse a lo reportado en la literatura:

voltaje
t =0,4 s
(Bray et al., 1994), y se logra reproducir la forma tpica de potencial de membrana (potencial en
forma de meseta). Para cada ciclo simulado de la dinmica de
+ 2
i
Ca (figura 4.3) se obtiene una curva
asimtrica en forma de campana que coincide con las observaciones reportadas por Fabiato (1985).
El gradiente de
+ 2
i
Ca es
calcio
=0,79 M (
calcio
= 0,9 M es reportado por Berridge et al., 2003)
y la duracin del ciclo de
+ 2
i
Ca es
calcio
t
= 1 s (igual que el valor

calcio
t =1 s reportado tambin por
Berridge et al., 2003). En la tabla 4.3 se resumen estos resultados y se muestran los errores
porcentuales respecto a los valores experimentales encontrados en la literatura.

Estas validaciones iniciales indican que los resultados de simulacin del modelo propuesto son
coherentes con el comportamiento esperado de acuerdo a varias fuentes bibliogrficas (Berridge et
al., 2003 y Lecarpentier, 1996). El modelo diseado entonces puede ser usado para representar un
miocito generalizado de mamfero. La validacin del modelo para su ajuste a ciertas especies en
particular se realiza en la seccin 4.4.

33 33.5 34 34.5 35 35.5 36 36.5
-100
-80
-60
-40
-20
0
20
40
60
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Figura 4.2 Resultados del modelo generalizado para los
ciclos de V .
33 33.5 34 34.5 35 35.5 36 36.5
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)

Figura 4.3 Resultados del modelo generalizado para los ciclos de
+ 2
i
Ca .


116
4.3.4 Comparacin del modelo con otros modelos.

Los resultados del modelo de Tang y Othmer (1994) y del modelo de Fox y colaboradores (2001) se
obtienen de simulaciones realizadas en Simulink de Matlab con procedimientos de integracin
numrica similares a los usados para la resolucin del modelo desarrollado en este trabajo (ver
figuras 4.4, 4.5, 4.6 y 4.7).
26.5 27 27.5 28 28.5 29 29.5 30 30.5 31
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
Modelo de Tang
Figura 4.4 Comparacin entre el modelo de Tang y el
modelo propuesto para la dinmica de
+ 2
i
Ca (miocito
generalizado).
35 35.5 36 36.5 37
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
1.1
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
Modelo de Fox
Figura 4.5 Comparacin entre el modelo de Fox y el modelo
propuesto para la dinmica de
+ 2
i
Ca .

En cuanto a la dinmica de
+ 2
i
Ca , la figura 4.4 muestra un valor de
calcio
muy alto para el modelo

de Tang (3,3 M) respecto a los resultados del modelo propuesto para el miocito generalizado (0,79
M) y a resultados experimentales (0,9 M, Berridge et al., 2003). As mismo, la forma de la curva
es una campana muy simtrica, pues la concentracin del in calcio aumenta tan rpidamente
exctcalcio
t
(1 s) como disminuye
o relaxcalci
t
(1 s). Estos resultados son inexactos de acuerdo con los

resultados experimentales que se muestran en la tabla 4.3, donde la duracin de
o relaxcalci
t es siempre
mayor (0,6 s 0,7 s) que la duracin de
exctcalcio
t (0,2 s 0,4 s). Entonces, el modelo de Tang falla en
la prediccin del evento de relajacin. Esto puede ser debido a que en este modelo se descarta
representar la actividad del intercambiador Na
+
-Ca
2+
y la dinmica elctrica. Para el modelo
propuesto, los resultados reproducen comportamientos ms cercanos a un ciclo real de la dinmica
de
+ 2
i
Ca : curva en forma de campana asimtrica con una duracin de
o relaxcalci
t
(0, 8 s) mayor a la
duracin de
exctcalcio
t
(0,2 s).

117
La figura 4.5 muestra que los resultados del modelo de Fox para la dinmica de
+ 2
i
Ca s tienen la
forma de campana asimtrica, pero con una protuberancia que no se observa usualmente a nivel
experimental. Esta forma ocurre porque la reproduccin de la dinmica de
+ 2
i
Ca en este modelo
solo depende del V . Adems, la duracin del ciclo es muy corta (0,45 s). El modelo propuesto que
contiene una descripcin qumica ms detallada del transporte de
+ 2
i
Ca reproduce una mejor curva
asimtrica en forma de campana con una duracin de
calcio
t
(1 s) que es aceptable de acuerdo a los

resultados experimentales (Berridge et al., 2003; Lecarpentier, 1996).

Por otra parte las predicciones para las dinmicas de V y de
Ca
I realizadas con el modelo de Fox y
con el modelo propuesto son bastante similares (figuras 4.6 y 4.7). Por ejemplo, la duracin de
voltaje
t
para el modelo de Fox es 0,3 s mientras que para el modelo propuesto la duracin de
voltaje
t

es 0,35 s. Efectivamente, el componente elctrico del modelo propuesto se desarrolla a partir del
modelo de Fox.
35.8 36 36.2 36.4 36.6 36.8
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
Modelo de Fox
Figura 4.6 Comparacin entre el modelo de Fox y el
modelo propuesto para la dinmica de V .
35.9 36 36.1 36.2 36.3 36.4 36.5
-1.6
-1.4
-1.2
-1
-0.8
-0.6
-0.4
-0.2
0
tiempo(s)
I
C
a

(
1
e
-
6
A
)
Modelo propuesto
Modelo de Fox
Figura 4.7 Comparacin entre el modelo de Fox y el modelo
propuesto para la dinmica de
Ca
I .


118
Tabla 4.3 Valores comparativos entre el modelo de Tang, el modelo de Fox y el modelo propuesto.

Modelo de
Tang

Modelo de Fox

Modelo Propuesto
Valor
%

Valor
%

Valor
%

Datos
experimentales
(reales)
calcio
t

2 s 100 0,45 s 55 1 s 0 1 s (Lecarpentier,
1996; (Berridge et
al., 2003))
exctcalcio
t

1 s 233 0,1 s 67 0,2 s 33 0,3 s (Berridge et
al., 2003)
o relaxcalci
t

1 s 43 0,35 s 50 0,8 s 14,29 0,7 s (Berridge et
al., 2003)
voltaje
t

- 0,3 s 25 0,35 s 12,5 0,4 s (Bray et al.,
1994)
calcio

3,3
M
267 1,1 M 22 0,79 M 12,22 0,9 M (Berridge et
al., 2003)
Ca
I

- -1,5 A 6,25 -1,5 A 6,25 -1,6 A (Fox et al.,
2001)

Tomando en cuenta los resultados de las simulaciones presentadas y considerando los valores
experimentales reales reportados para la dinmica elctrica (ver tabla 4.3), se comprueba que el
modelo de Fox ofrece una buena prediccin para el comportamiento elctrico del miocito pero no
as para la dinmica de
+ 2
i
Ca .

Los resultados del modelo de Tang solo logran reproducir los ciclos de la dinmica de
+ 2
i
Ca pero
con valores de magnitud y duracin muy alejados de los valores reales (ver tabla 4.3).

Las predicciones obtenidas usando el modelo propuesto son las que ms se acercan a los datos
experimentales encontrados en la literatura. Aunque los errores porcentuales son a veces
importantes (de hasta 33%), stos son siempre menores que los de los otros modelos (tabla 4.3), y

119
adems y lo que es ms importante, las formas y tendencias de las curvas de prediccin del
+ 2
i
Ca y
del V son las correctas.

4.4 VALIDACIN POR ESPECIES

Se realiza ahora la comparacin de los resultados del modelo para la dinmica de
+ 2
i
Ca , V y de
corriente
Ca
I respecto a resultados experimentales ms ricos y detallados disponibles,
correspondientes a diferentes especies animales. La validacin del modelo celular para cada caso
conlleva a un ajuste ms fino de parmetros que adapta el modelo con ms precisin a los diferentes
tipos de miocitos.

4.4.1 Obtencin de los datos reales.
Los datos experimentales usados en este proceso de validacin provienen de:
a) Fuentes bibliogrficas: se dispone de los datos experimentales para las variables V y corriente
Ca
I para miocitos caninos, medidos en el trabajo de Winslow y Greenstein (2002); y
tambin para miocitos de conejo, medidos en el trabajo de Li y colaboradores (2002). Para la
variable
+ 2
i
Ca se usan datos experimentales reportados en los trabajos de Piacentino y
colaboradores (2003) para miocitos de humanos y de Winslow y colaboradores (1999) para
miocitos caninos.
La tcnica de laboratorio frecuentemente usada para obtener los datos experimentales de las
variables de naturaleza elctrica ( voltaje V y corriente
Ca
I ) se denomina patch-clamp y
su explicacin puede encontrarse fcilmente en la literatura. En el apndice B se detalla
cmo se lleva a cabo el montaje experimental en la clula con esta tcnica.
b) Trabajo experimental de laboratorio: se dispone de datos reales del comportamiento de la variable
+ 2
i
Ca en miocito de pollo, obtenidos en diferentes campaas de medicin experimental

120
realizadas en la unidad de investigacin nmero 99 el instituto INSERM
5
de Francia. Un
resumen del protocolo usado en el procedimiento experimental se explica a continuacin.

El mtodo de medicin de la concentracin del in calcio
+ 2
i
Ca se denomina fluorescencia
cuantitativa y se basa en la inyeccin en la clula de sustancias fotosensibles al calcio. El
mtodo consiste fundamentalmente en la deteccin de las diferentes intensidades de luz que
producen estas sustancias ante variaciones en la concentracin del in
+ 2
i
Ca . Los
indicadores fluorescentes ms usados son las sustancias qumicas Qui-2, Fura-2 y Fura 2-
AM que estn compuestos por combinaciones de anillos de benceno aromticos y esteres
(Bray et al., 1994; Rudolf et al., 2003).

El miocito se prepara previamente con lavados de soluciones salinas y sueros, para
garantizar su supervivencia (mediciones in vivo), de acuerdo a recomendaciones pre-
establecidas. En el apndice C se muestra detalladamente los materiales y mtodo de cultivo
utilizado as como las concentraciones especficas de las soluciones.

Luego, la sustancia fotosensible se inyecta al miocito y sta se une al in calcio pues es
altamente afn con l. Cuando la concentracin del in vara, la intensidad de emisin de luz
de la sustancia cambia, por lo que se deben medir estos espectros de luz mediante
microscopios de fluorescencia (ver figura 4.8). Cada valor de intensidad de luz se puede
relacionar proporcionalmente con la variable
+ 2
i
Ca como se expresa a continuacin:
( )
( ) R R
R R
b K Ca
d i
=
+
max
min 2
(4.3)
donde:
d
K = constante de afinidad entre la sustancia fotosensible y el in calcio.
b = es la razn entre el in calcio libre y el in calcio unido a la sustancia fotosensible.
min
R =valor de intensidad de luz cuando la sustancia no esta unida al in calcio.

5
Institut National de la Sant et de la Recherche Mdicale, Pars- Francia.
.

121
max
R =valor de intensidad de luz cuando la sustancia fluorescente esta saturada del in
calcio.
R =intensidad de luz en el instante t .

Figura 4.8 Montaje experimental para el mtodo fluorescente.

Para medir la intensidad de luz R , se dispone de una fuente de luz (lmpara de xenn de
100 W), que permite captar en el microscopio (mediante unos filtros especializados) un
rango considerable de longitudes de onda: 350 nm a 510 nm. A continuacin, la cmara
toma las imgenes fluorescentes y un programa (en el computador) realiza un promedio de
estas imgenes. La imagen e intensidad de luz promedio se registra cada 0,3 s, y estos datos
se utilizan para calcular la concentracin de
+ 2
i
Ca . El conjunto: lmpara, filtros,
microscopio, cmara, computador y programa utilizado en este trabajo experimental fue
desarrollado por la compaa IMSTAR (Pars, Francia).

Filtros
Objetivo de la
cmara
Captura de imgenes
fluorescentes
Computador
y programa
Clula
Inyeccin Fura
Microscopio
Lmpara
100 W

122
El aspecto delicado en la mtodo de fluorescencia cuantitativa es que la sustancia
fotosensible al unirse al in calcio debe ser inerte y no intervenir en la dinmica de la clula
(Garca, 2004).

Los datos experimentales obtenidos en las diferentes campaas de medicin son reportados en el
apndice D junto con aquellos extrados de las diferentes fuentes bibliogrficas.

4.4.2 Validaciones.

La validacin se realiza separadamente para los diferentes conjuntos de datos experimentales con el
fin de observar el desempeo del modelo en la prediccin del comportamiento del miocito de las
diferentes especies.

El procedimiento es similar al llevado a cabo para la validacin del modelo generalizado. Se busca
reproducir las observaciones experimentales ajustando empricamente los parmetros para
completar el modelo caja gris siempre utilizando el conocimiento fenomenolgico disponible y
asegurando la coherencia y el correcto sentido fsico de las variables definidas en el modelo.

A continuacin se presentan las grficas de las simulaciones, las modificaciones paramtricas y la
discusin de resultados para cada una de las especies. Luego, en la tabla 4.4, se resumen los
resultados obtenidos mostrando los errores estimados
%
para las variables de las que se dispone de
datos reales.

Validacin para el comportamiento del miocito de perro.
Se usan para validacin los trabajos de Winslow y colaboradores (1999) y Winslow y Greestein
(2002) que reportan datos experimentales para la variable
+ 2
i
Ca y para las variables V e
Ca
I
respectivamente, en miocitos caninos. De acuerdo con los resultados experimentales la duracin del
ciclo de calcio (
calcio
t =0,66 s) en el miocito canino es bastante menor a la estimada por el modelo
generalizado (
calcio
t
=1 s), por lo que es necesario modificar los siguientes parmetros:


123
i. El perodo de pulso de voltaje a debe ser ms rpido ( a =0,6 s).
ii. La velocidad mxima de transporte K del intercambiador Na
+
-Ca
2+
debe aumentar (se
fija K =1,6 Ms
-1
) para garantizar la menor duracin de
o relaxcalci
t (0, 41 s) observada en
los datos experimentales.

La figura 4.9 muestra la comparacin entre los datos experimentales y los simulados para la
dinmica de
+ 2
i
Ca , donde las curvas son en forma de campanas asimtricas y bastante similares. Los
tiempos y magnitudes estimadas son bastantes cercanos a los reales (ver tabla 4.4), lo cual indica que
los parmetros del modelo se han identificado satisfactoriamente.

50.4 50.5 50.6 50.7 50.8 50.9 51
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
Datos experimentales
+ 2
i
Ca para
miocito canino.
36 36.05 36.1 36.15 36.2 36.25 36.3 36.35 36.4 36.45
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto

Figura 4.10 Validacin de la dinmica de V para miocito
canino.
36 36.05 36.1 36.15 36.2 36.25 36.3 36.35
-3.5
-3
-2.5
-2
-1.5
-1
-0.5
0
tiempo (s)
I
C
a

(
1
e
-
6
A
)
Modelo propuesto

Ca
I para miocito canino.


124
En la figura 4.10 se realiza la validacin para la dinmica de V , donde se reproduce el potencial de
meseta caracterstico de los miocitos ventriculares caninos (Fox et al., 2001), aunque persiste un
error (
%
=16,67) en la duracin del ciclo.

La curva de la corriente
Ca
I estimada por el modelo sigue la misma tendencia que los datos
experimentales (figura 4.11), pero hay un error importante en
Ca
I
(ver tabla 4.4). Sin embargo, esto
no debe preocupar en exceso porque las mediciones experimentales para la corriente
Ca
I utilizan
mtodos invasivos que pueden arrojar valores numricos que presentan una gran varianza en
relacin a los protocolos experimentales usados. Las validaciones para la dinmica de
Ca
I entonces
se han de basar principalmente en la forma de la curva o su tendencia.

Validacin para el comportamiento del miocito del conejo.
Li y colaboradores (2002), proveen datos experimentales solo para las variables V e
Ca
I . De estos
datos experimentales se nota que la duracin de
voltaje
t (0,42 s) es cercana a los resultados obtenidos
para el modelo generalizado (
voltaje
t
=0,35 s), por lo que se considera que los ajustes de los

parmetros realizados en la seccin 4.3.2 no requieren modificaciones para la validacin de esta
especie.

En la figura 4.12 se muestra la dinmica de V obtenindose
%
=12,38 y la forma tpica de
potencial de meseta. La figura 4.13 muestra la validacin para la dinmica de
Ca
I , donde se observa
que la curva de resultados simulados tiene la forma esperada.

125
36 36.05 36.1 36.15 36.2 36.25 36.3 36.35 36.4 36.45 36.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
Figura 4.12 Validacin de la dinmica de V para el
miocito de conejo.
35.2 35.4 35.6 35.8 36 36.2 36.4 36.6 36.8
-1.5
-1
-0.5
0
tiempo (s)
I
C
a

(
1
e
-
6
A
)
Modelo propuesto

Ca
I para el miocito de
conejo.

Validacin para el comportamiento del miocito de pollo.
Los datos experimentales para la dinmica de
+ 2
i
Ca en el miocito de pollo muestran que la misma
presenta una duracin
calcio
t ms lenta (1,85 s) que la obtenida experimentalmente para mamferos
(1 s, Berridge et al., 2003). Por tal motivo, para validar apropiadamente el modelo, se hacen los
siguientes ajustes:
i. El perodo de pulso de voltaje a se incrementa ( a =1,8 s).
ii. El coeficiente de difusin
+ 2
Ca
D se modifica ligeramente (
+ 2
Ca
D =0,658e
-11
m
2
/s).

Con estas modificaciones paramtricas se obtienen simulaciones de los ciclos de
+ 2
i
Ca cercanas a los
datos experimentales, tal y como lo muestran las figuras 4.14 y 4.15. Ambas figuras reflejan la forma
tpica de campana asimtrica y valores bastante precisos para
calcio
=0,95 M (
calcio
=1 M) y
para
calcio
t
= 1,84 s (
calcio
t = 1,85). En la tabla 4.4 se reportan adems los valores
exctcalcio
t
y
o relaxcalci
t

(
%
= 11,43 para
exctcalcio
t
y
%
= 1,29 para
o relaxcalci
t
). La validacin del modelo se logra entonces

con bastante xito en este caso.

126
29 30 31 32 33 34
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
+ 2
i
Ca para
miocito de pollo.
28.6 28.8 29 29.2 29.4 29.6 29.8 30 30.2 30.4 30.6
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
+ 2
i
Ca
para el miocito de pollo.
27 28 29 30 31 32 33 34
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto

Figura 4.16 Dinmica de V simulada para el miocito de pollo.

El potencial de membrana V para esta especie no puede ser validado pues no se cuenta con datos
experimentales. Sin embargo, el potencial de membrana simulado se muestra en la figura 4.16, e
indica que la duracin de
voltaje
t
es consecuentemente superior (0,4 s) a la duracin de un ciclo de

voltaje tpico para mamferos (0,3 s- Fox et al., 2001). Adems,
voltaje
t
es menor que
calcio
t (1,85 s) lo
cual es coherente con el comportamiento general de la clula cardiaca, donde la dinmica de
+ 2
i
Ca ,
por involucrar transformaciones qumicas, toma mucho ms tiempo que la dinmica de V
(Berridge et al., 2003).

127
Validacin para el comportamiento del miocito humano.
Los resultados experimentales reportados para el miocito humano se refieren solo a la dinmica de
+ 2
i
Ca y por lo tanto son escasos pues es difcil conseguir suficientes muestras para realizar las
mediciones. Aqu se usan los resultados publicados por Piacentino III y colaboradores (2003), que
reportan el valor promedio del
calcio
(0,8 M); y por Zhang y colaboradores (2003), que reportan
el valor de
calcio
t (0,8 s). En funcin de estos resultados experimentales, se advierte que el modelo
generalizado es suficientemente cercano al comportamiento del miocito humano y no es necesario
realizar ningn ajuste de los parmetros del modelo.

En la figura 4.17 se muestra la validacin para la dinmica de
+ 2
i
Ca , donde puede observarse que el
valor de
calcio
(0,8 M) y su valor estimado
calcio
(0,79 M) son bastante similares (

%
=1,25).
As mismo sucede para el valor de
calcio
t (0,8 s) comparado con el valor de
calcio
t
)
(1 s).

29.8 30 30.2 30.4 30.6 30.8 31
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
Gradiente de calcio
Duracin del ciclo de calcio

+ 2
i
Ca para miocito humano.


128

Tabla 4.4 Validacin del modelo para diferentes especies de miocito: perro, conejo, pollo, humano.
Miocito
canino
Miocito de
conejo
Miocito de
pollo
Miocito
humano
Valor de
salida
%

(%)
Valor de
salida
%

(%)
Valor de
salida
%

(%)
Valor de
salida
%

(%)
calcio
t (s)
0,66 - 1,85 0,8
calcio
t
(s)
0,6
9,1
1

1,84
0,54
1
25
exctcalcio
t (s)
0,15 - 0,35 -
exctcalcio
t
(s)
0,2
33,33
0,2

0,31
11,43
0,2
-
o relaxcalci
t (s)
0,41 - 1,55 -
o relaxcalci
t
(s)
0,4
2,44
0,8

1,53
1,29
0,8
-
voltaje
t (s)
0,36 0,42 - -
voltaje
t
(s)
0,3
16,67
0,35
16,67
0,4

0,35
-
calcio
M
0,6 - 1 0,8
calcio
M
0,55
8,33
0,79

0,95
5
0,79
1,25
Ca
I
A
-3,5 -0,75 - -
Ca
I
A
-1,5
57,14
-1,5
100
-1,7

--1,5

4.4.3 Anlisis de resultados:
Como consecuencia del proceso de validacin se obtiene en general un modelo validado para el
miocito de las especies en cuestin. Se puede decir que si los resultados de las simulaciones (tabla
4.4) presentan valores de errores porcentuales menores al 15% respecto a los resultados
experimentales, la validacin se logra de manera satisfactoria. Los casos con errores porcentuales
mayores son indicio de que hay fallas en la estructura del modelo, que debern ser mejoradas en
alguno de sus elementos. La informacin sobre cul elemento del modelo (parmetro o grupos de

129
parmetros) produce errores en las simulaciones y de qu tipo, es, como ya se dijo, un conocimiento
muy importante, y se puede extraer con el estudio de sensibilidad que se realiza en la seccin 4.5.
Por otra parte, es necesario verificar que los ajustes en los valores de los parmetros, generan
tambin para otras variables involucradas en el modelo, resultados fsicamente consistentes y
estables, aunque no se pueden validar por falta de datos reales. En este sentido, tres variables
adicionales se consideran crticas en el proceso de excitacin-contraccin y relajacin y su
comportamiento dinmico se analiza en los siguientes prrafos.
1. La variable
+ 2
SR
Ca o concentracin del in calcio en el retculo sarcoplsmico: sta se encuentra definida
entre valores de 60 M -500 M (tabla 3.1) y controla la liberacin del in calcio en el
evento II y la recaptura del mismo en el evento IV. En la figura 4.18 se muestran las
simulaciones arrojadas por el modelo para
+ 2
SR
Ca en las diferentes especies de miocitos
estudiadas, donde se puede verificar que las oscilaciones son estables y sostenidas y que las
condiciones de borde son respetadas independientemente de las modificaciones
paramtricas realizadas para la validacin de cada especie.
9 9.5 10 10.5 11 11.5 12 12.5
110
115
120
125
130
135
140
145
150
155
160
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n

d
e

c
a
l
c
i
o

e
n

e
l

r
e
t
c
u
l
o

s
a
r
c
o
p
l
s
m
i
c
o

(
1
e
-
6
M
)
Miocito de perro
Miocito de conejo
Miocito de pollo
Miocito humano

+ 2
SR
Ca para las diferentes especies de miocito.
2. La variable
2
x o fraccin de canales abiertos de Rianodina: que es estudiada frecuentemente en
otros trabajos (Tang y Othmer, 1994; Hamam et al., 2000; Rocaries et al., 2004) y que

130
determina el comportamiento de los otros estados de este canal, los cuales deben cumplir
como se sabe: 1
4 3 2 1
= + + + x x x x . La figura 4.19 muestra las simulaciones para esta
variable, donde se observan oscilaciones estables y valores comprendidos dentro de las
condiciones de borde establecidas (0 a 1). Adems estas simulaciones consiguen valores
cercanos a los estimados por el modelo de Tang y Othmer (1994) quienes originalmente
proponen el mecanismo de reaccin para canales de Rianodina usado en este trabajo.
9 10 11 12 13 14
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0.4
0.45
0.5
tiempo (s)
P
r
o
b
a
b
i
l
i
d
a
d

d
e

a
p
e
r
t
u
r
a

d
e

l
o
s

c
a
n
a
l
e
s

d
e

R
i
a
n
o
d
i
n
a
Miocito de perro
Miocito de conejo
Miocito de pollo
Miocito humano

2
x para las diferentes especies de miocito.
3. La variable
openL
P o fraccin de canales L abiertos: P
openL
que representa la extensin de la
aplicacin de la teora de Hodgkin-Huxley en el modelado de canales dependientes del
voltaje (Fox et al., 2001; Luo y Rudy, 1994), y que debe estar definida entre 0 y 1. Las
simulaciones para esta variable se muestran en la figura 4.20. Para todas las especies
estudiadas, la dinmica de
openL
P representa satisfactoriamente la repentina apertura de los
canales L frente al cambio de voltaje y la lenta inactivacin o cierre de los mismos que
contribuye con la forma de meseta del potencial de membrana. Adems, las simulaciones
muestran que los valores de
openL
P estn comprendidos entre las condiciones de borde
admitidas y los ciclos de su dinmica (abierto-cerrado) son tambin sostenidos y estables.

131
Estos resultados permiten comprobar que la teora de Hodgkin-Huxley modela
satisfactoriamente el comportamiento de los canales L.
.
openL
P para el miocito de perro y de conejo.
A partir de los resultados mostrados se puede notar que el modelo propuesto se adapta fcilmente
(luego de apropiados ajustes paramtricos) a diferentes especies de miocitos conservando la
consistencia fsica de todas las variables involucradas y produciendo a la vez dinmicas estables y
sostenidas para cada una de ellas.
4.5 ESTUDIO DE SENSIBILIDAD DEL MODELO.
El ajuste de los parmetros del modelo ha permitido identificar y validar el mismo para las diferentes
especies de miocitos (seccin 4.4.2). Sin embargo, es importante conocer cmo o en qu grado
cambios o modificaciones ms extremas de los parmetros afectan a las principales variables del
sistema, como son la concentracin del in calcio y el voltaje del sarcolema. Este estudio se
denomina pruebas de sensibilidad y se realiza en general durante la validacin de un modelo
matemtico para establecer qu tan significativa es la variacin de los resultados de simulacin al
variar cada parmetro y luego determinar cmo afecta cada parmetro a la exactitud del modelo. En
este caso, el estudio de sensibilidad al mismo tiempo permite identificar los elementos celulares

132
sensibles a reproducir resultados inexactos pero tpificables, como lo son situaciones anormales del
miocito que conducen a funcionamientos patolgicos en el corazn.
Obviamente, para lograr esta identificacin se debe utilizar el conocimiento a priori que se posee
sobre el comportamiento real del corazn en las situaciones patolgicas que se conocen. En los
siguientes prrafos se hace un breve resumen de los casos tpicos.

Por ejemplo, de acuerdo con Willems y colaboradores (1990), cuando la fase de repolarizacin del
potencial de membrana (evento IV figura 1.14) se retarda y se acelera, es decir, sucede despus o
antes de lo previsto, las variables
voltaje
t y
calcio
t aumentan y disminuyen de manera aleatoria, siendo
este efecto signo evidente de lo que se llama condicin isqumica en el corazn. La isquemia del
corazn, es un desequilibrio negativo entre la demanda y el suministro de energa por parte del
corazn, donde se reduce el riego sanguneo normal en alguna regin del msculo cardaco. Esta
enfermedad es progresiva y clnicamente puede expresarse en forma de: arritmias, insuficiencia
cardiaca, infarto de miocardio y muerte sbita, entre otras (Saenz de la Calzada, 1985).

Las arritmias cardiacas son la alteracin del ritmo de contraccin-relajacin. Este ritmo tiene una
frecuencia cuyos valores normales entre 50 y 100 latidos por minuto (lpm). La arritmia se conoce
como Bradicardia, cuando la frecuencia cardiaca es ms baja de lo normal y como Taquicardia,
cuando es ms alta. A nivel celular (miocito), esta enfermedad se manifiesta en duraciones de
voltaje
t
ms largas o ms cortas, segn sea bradicardia o taquicardia respectivamente.

La insuficiencia cardiaca, se manifiesta porque las clulas que forman el tejido del corazn no son
capaces de contraerse o relajarse suficientemente para expulsar la sangre requerida para los procesos
metablicos del cuerpo. Esta alteracin se debe a una baja sensibilidad del in calcio por los
filamentos de actina lo que conlleva a un retraso en la activacin de las miofibrillas y la consecuente
disminucin de la fuerza contrctil (Zarco, 1996). En el modelo propuesto, esta situacin se
reproduce cuando est limitada la formacin de la especie qumica intermedia CaM en la cintica de
las miofibrillas.


133
Los infartos se presentan cuando el suministro de oxgeno y nutrientes a un rgano o tejido se
suspende en forma total durante el suficiente tiempo como para producir la muerte de las clulas
que lo componen. Si esto ocurre en una parte del tejido cardaco las clulas sanas que quedan
presentan una duracin de
voltaje
t variable (desordenada), entre corta y larga, lo que ocasiona adems
alteraciones en la forma caracterstica del potencial de membrana, el cual deja de ser un potencial en
forma de meseta para tener forma de espiga
6
, o en otros casos forma achatada. Todo esto sucede
porque estas clulas sobrevivientes necesitan acompasarse con el resto del msculo cardaco.

En los apartados siguientes se busca reproducir con el modelo algunas de estas situaciones
combinando el conocimiento a priori con los resultados de las simulaciones. Para ello, se alteran
sistemticamente los parmetros de los diferentes elementos celulares para identificar qu partes del
modelo producen determinados efectos. Tratando de identificar comportamientos similares a los
asociados a ciertas enfermedades las pruebas de sensibilidad pueden proporcionar informacin
valiosa que contribuya a desarrollar drogas de accin especfica (Rocaries et al., 2004; Roche et al.,
2004).
En el modelo, las pruebas de sensibilidad se realizan sobre dos grandes subsistemas:
i. Subsistema cintico-qumico, que corresponde al transporte del in calcio en el citosol y en
el retculo sarcoplsmico.
ii. Subsistema elctrico, que corresponde a los cambios de potencial en el sarcolema.
El procedimiento para estas pruebas es el siguiente:
1. Se simula el modelo con los parmetros de la validacin inicial (miocito generalizado de
mamfero) hasta obtener el estado estacionario (~ 40 s de simulacin).
2. Se perturba el modelo. Esto es; se impone un cambio aumentando o disminuyendo un
determinado parmetro. Cuando el valor del parmetro se aumenta se habla de
estimulacin, cuando el parmetro se disminuye se habla de inhibicin. De tal manera,

6
La forma de espiga se caracteriza por una rpida despolarizacin y repolarizacin, lo que grficamente se ve
como un pulso de voltaje.

134
el parmetro en cuestin se multiplica por un factor que puede ser de inhibicin
I
F o de
estimulacin
E
F . Se han usado valores de
I
F y
E
F en los siguientes rangos: 1 0 <
I
F y
4 1 <
E
F .
Se define adems el porcentaje de inhibicin I % o de estimulacin E % del parmetro
como:
100 ) 1 ( % =
I
F I (4.4)
100 ) 1 ( % =
E
F E (4.5)
de modo que,por ejemplo, cuando 0 =
I
F se dice que el parmetro esta 100% inhibido, o
por ejemplo, cuando 5 , 1 =
E
F , se dice que el parmetro esta 50% estimulado.

3. Se obtiene en cada caso (estmulo o inhibicin) el valor en estado estacionario del modelo
perturbado y se observan los efectos de la perturbacin del parmetro sobre los
resultados de las simulaciones.
4.5.1 Perturbaciones en el subsistema cintico-qumico:
A este subsistema pertenecen los parmetros asociados al modelado de los canales de Rianodina,
canales L, miofibrillas, bomba SERCA, actividad qumica de la bomba ATPasa del sarcolema y
actividad qumica del intercambiador Na
+
-Ca
2+
, por lo tanto las pruebas de sensibilidad se presentan
asociadas a cada elemento celular mencionado.
Estudios previos de simulacin indican que los parmetros que ms influyen en la actividad de los
canales de Rianodina son las constantes cinticas
1
l y
1 m
l , pues stas modulan directamente la
formacin de la especie intermedia
+
RC , representada en el modelo por la variable
2
x (fraccin de
canales abiertos de Rianodina), que a su vez es en gran parte responsable del evento II. Las pruebas
que se realizan entonces las siguientes:
- En la constante cintica
1
l : sta se inhibe en un 100% y en un 50% y se estimula en un
100%. Los resultados sobre el comportamiento de las variables
2
x ,
+ 2
i
Ca y V se muestran
en la figuras 4.21, 4.22 y 4.23 respectivamente.

135
- En la constante cintica
1 m
l : en este parmetro la inhibicin se realiza en un 100% y un
50% y el estimulo en un 50%. Los resultados de estas perturbaciones sobre la dinmica de
2
x se muestran en la figura 4.24, sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca en la figura 4.25 y sobre la
dinmica de V en la figura 4.26.
40.5 41 41.5 42 42.5 43
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
tiempo (s)
P
r
o
b
a
b
i
l
i
d
a
d

d
e

a
p
e
r
t
u
r
a

d
e

c
a
n
a
l
e
s

d
e

R
i
a
n
o
d
i
n
a
Modelo propuesto
l1 inhibicion completa
l1 inhibicion 50%
l1 estimulo 100%

Figura 4.21 Efectos de las perturbaciones en el
parmetro
1
l sobre la dinmica de
2
x .
40 40.5 41 41.5 42 42.5 43 43.5 44
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
l1 inhibicion 50%
l1 estimulo 100%

1
l
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

41 41.5 42 42.5 43
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
l1 inhibicion 50%
l1 estimulo 100%
acelera
retarda
muerte
del ciclo

1
l sobre la dinmica de V .

136
Como puede observarse la inhibicin total de
1
l (100%) impide la apertura de los canales Rianodina,
con lo que la variable
2
x tiende a cero (figura 4.21). Como consecuencia de ello, el in calcio que
entra a la clula en los eventos I y II es slo producto de la actividad de los canales L (los cuales
estn sometidos a un mayor gradiente qumico) y por lo tanto la variable
+ 2
i
Ca se incrementa
descontroladamente (ver figura 4.22), es decir, se anula el efecto autorregulador del retculo
sarcoplsmico. Al incrementarse el flujo de calcio, la corriente inica
Ca
I contribuye en mayor
proporcin en la despolarizacin V , haciendo que los valores de V sean ms positivos (figura
4.23). No obstante, este umbral de V es tan positivo que los mecanismos de repolarizacin
(actividades elctricas de la bomba Na
+
-K
+
y del intercambiador Na
+
-Ca
2+
) no logran recuperar el
ciclo de V , causando la muerte de la clula.

La inhibicin de
1
l en un 50% no logra interrumpir el ciclo de calcio pero tambin produce
aumentos aunque no uniformes en esta variable. Esto genera una mayor corriente inica
Ca
I que
hace ms difcil la recuperacin del potencial de membrana. En consecuencia, la duracin del ciclo
de V (
voltaje
t
-figura 4.23) se alarga (retarda) originando bradicardia en la clula. En cambio, la

estimulacin de
1
l favorece aunque de manera no uniforme, la apertura de los canales de Rianodina
(aumento de la variable
2
x , ver figura 4.21). Por lo tanto, estos canales controlan en mayor grado el
aumento del in calcio en la clula (evento II), pero debido a que estn sometidos a un menor
gradiente qumico que los canales L, la concentracin
+ 2
i
Ca en efecto disminuye como se ve en la
figura 4.22. Esto a la vez reduce la corriente inica
Ca
I , lo que provoca valores ms pequeos de
despolarizacin de V , que son ms fciles de recuperar o repolarizar. Entonces se acorta (acelera) la
duracin de
voltaje
t
(figura 4.23), producindose taquicardia en la clula.

Por otra parte, la inhibicin completa de la constante
1 m
l favorece la formacin de la especie
intermedia
+
RC (ver ecuacin 2.10) de modo que la fraccin de canales abiertos
2
x es mucho
mayor y por ms tiempo (ver figura 4.24). En consecuencia, la funcin reguladora que cumple el
compartimiento retculo sarcoplsmico se altera produciendo un flujo del in calcio hacia el citosol
mayor de lo que el intercambiador Na
+
-Ca
2+
y las bombas SERCA y del sarcolema pueden extraer.

137
40 40.5 41 41.5 42 42.5 43 43.5 44
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
tiempo (s)
P
r
o
b
a
b
i
l
i
d
a
d

d
e

a
p
e
r
t
u
r
a

d
e

l
o
s

c
a
n
a
l
e
s

d
e

R
i
a
n
o
d
i
n
a
Modelo propuesto
lm1 inhibicion completa
lm1 inhibicion 50%
lm1 estimulo 50%

parmetro
1 m
l sobre la dinmica de
2
x .
40 40.5 41 41.5 42 42.5 43 43.5 44
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
lm1 complete inhibition
lm1 inhibicion 50%
lm1 estimulo 50%

1 m
l
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

41 41.5 42 42.5 43 43.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
lm1 inhibicion completa
lm1 inhibicion 50%
lm1 estimulo 50%
acelera retarda
muerte del ciclo

1 m
l sobre la dinmica de V .
Este factor junto con la actividad de los canales L hace que la concentracin del in calcio en el
citosol aumente desmesuradamente (figura 4.25). Esta perturbacin tambin altera la dinmica de V
(figura 4.26) evitando la repolarizacin del potencial de membrana y produciendo la muerte del
miocito. Una inhibicin menos severa (50%) del parmetro
1 m
l , muestra resultados coherentes de
acuerdo con la ecuacin 2.10: aumento de la fraccin
2
x (figura 4.24), disminucin de
calcio
(figura

138
4.25), y repolarizacin temprana de V , es decir, menor
voltaje
t
(figura 4.26) pues hay menor cantidad

de flujo inico de calcio y en consecuencia menor corriente inica
Ca
I .

El estmulo del parmetro
1 m
l

en un valor de 50% disminuye
2
x (figura 4.24), ya que se desfavorece
la formacin de la especie intermedia
+
RC . Consecuentemente el flujo del in calcio aumenta
(figura 4.25) por la actividad de los canales L como ya se discuti. Adems el potencial de
membrana se repolariza ms lentamente (
voltaje
t
mayor, ver figura 4.26), debido a la mayor

contribucin de la corriente inica
Ca
I . En resumen, las perturbaciones en el parmetro
1 m
l generan
desrdenes en la duracin de los ciclos de V (adelantos o atrasos) que pueden asociarse a las
arritmias cardiacas. Los resultados derivados al realizar las diversas perturbaciones para los
parmetros
1
l y
1 m
l confirman la importancia de los canales de Rianodina como elementos
reguladores en la dinmica qumica y elctrica de la clula.

Canales L:
Para estudiar la sensibilidad del modelo a la dinmica de los canales L, se impone un parmetro
artificial
d
F , que se agrega como multiplicador a la ecuacin 3.30 (fraccin de canales abiertos L).
De tal manera que
d
F es igual a 1 y su nico objetivo es inhibir o estimular la apertura de los
canales L tal como se muestra en la siguiente ecuacin:

(

=

) (
) (
V
d V d
F
dt
dd
d
d
(4.6)
Se estudian los resultados del modelo con el parmetro
d
F inhibido en un 90% y estimulado en un
10%. En las figuras 4.27 y 4.28 se muestran los efectos de estas perturbaciones sobre las dinmicas
de
+ 2
i
Ca y de V .

139
72 72.5 73 73.5 74 74.5 75 75.5 76
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
Fd estimulo 10%
Fd inhibicion 90%

parmetro
d
F sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .
68 68.5 69 69.5 70 70.5 71 71.5 72 72.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
60
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
Fd estimulo 10%
Fd inhibicion 90%
Forma
atpica
retardo

d
F
sobre la dinmica de V .

La inhibicin de
d
F en un 90% reduce el flujo inicial del in calcio (evento I) de manera tal que el
mismo no es suficiente para estimular la apertura de los canales de Rianodina (evento II).
Consecuentemente los valores de
calcio
disminuyen (figura 4.27). Al mismo tiempo, esta inhibicin
causa que el ciclo de V no se repolarice, produciendo dinmicas altamente inestables (figura 4.28),
con formas atpicas (diferentes al potencial en forma de meseta) y con duraciones de
voltaje
t
muy
largas. Estas caractersticas pueden ser evidencia de que la clula est enferma y se encuentra en la
fase de infarto. Cuando
d
F se estimula ligeramente (10%), el in calcio entra en exceso y las
bombas (SERCA y ATPasa del sarcolema) y el intercambiador Na
+
-Ca
2+
no son capaces de
extraerlo. Entonces se producen pequeos aumentos en los valores de
+ 2
i
Ca (figura 4.27), pero no
de manera uniforme sino alternada, lo que da lugar a inestabilizar ligeramente los ciclos de
+ 2
i
Ca .
En cuanto a la variable V , este estmulo resulta leve y no produce modificaciones (figura 4.28). Sin
embargo, el modelo es sensible a modificaciones de cierta magnitud en el parmetro asociado a los
canales L, y por lo tanto, estos canales tambin juegan un papel importante en la dinmica del
miocito.


140
Miofibrillas:
Los parmetros
1 d
K y
2 d
K son constantes de velocidad de reaccin y

miden respectivamente la
cantidad de miofibrillas unidas al in calcio o libres de l (evento III). Solo se consideran variaciones
en
1 d
K pues el parmetro
2 d
K es de accin inversa a
1 d
K , y los resultados de sus cambios sern
entonces opuestos a los que se observan con las perturbaciones de
1 d
K .

En las figuras 4.29, 4.30 y 4.31 se muestran los resultados obtenidos para las concentraciones de
CaM y de
+ 2
i
Ca y para el voltaje V cuando
1 d
K se inhibe en un 100% y en un 50% y se estimula
en un 50%.
40 40.5 41 41.5 42 42.5 43
0
10
20
30
40
50
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

l
a

e
s
p
e
c
i
e

i
n
t
e
r
m
e
d
i
a

C
a
M

(
1
e
-
6
M
) Modelo propuesto
Kd1 inhibicion completa
Kd1 inhibicion 50%
Kd1 estimulo 50%
afinidad cero

parmetro
1 d
K sobre la dinmica de CaM .
40 40.5 41 41.5 42 42.5
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
Kd1 inhibicion total
Kd1 inhibicion 50%
Kd1 estimulo 50%

1 d
K
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .
40 40.5 41 41.5 42 42.5
-100
-50
0
50
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
Kd1 inhibicion completa
Kd1 inhibicion 50%
Kd1 estimulo 50%
acelera
retardo
muerte
del ciclo

1 d
K sobre la dinmica de V .

141

Se observa en las grficas que con la inhibicin completa de
1 d
K la afinidad entre el in calcio y las
miofibrillas baja drsticamente desfavoreciendo la formacin de la especie intermedia CaM (figura
4.29). La reaccin cintica tipo buffer entre las miofibrillas y el in calcio no ocurre, producindose
un exceso de calcio que aumenta descontroladamente el valor de
calcio
(figura 4.30). Esto provoca

que el V no pueda repolarizarse (figura 4.31), y la clula deja de funcionar pues el efecto contrctil
est ausente. Si las inhibiciones son menos severas (50%), la clula cardiaca produce
comportamientos oscilatorios para la dinmica de
+ 2
i
Ca (figura 4.30) y de V (figura 4.31) pero con
formacin de la especie CaM muy disminuida (figura 4.29) lo que debilita la contraccin de la
clula y se puede identificar con insuficiencia cardaca. El estimulo de
1 d
K (50%) hace que las
miofibrillas tengan ms afinidad con el in calcio (figura 4.29), no obstante, el papel regulador o
buffer de este elemento contrctil se pierde pues la dinmica de
+ 2
i
Ca (figura 4.30) se altera
presentando ciclos con valores alternados (bajos y altos) para el
calcio
. A la vez, esto genera

aceleraciones y retardos en
voltaje
t
(figura 4.31), tpicos de un miocito con arritmia. Todos estos

resultados muestran la importancia fundamental que obviamente tienen las miofibrillas en el
proceso de excitacin-contraccin y relajacin. El modelo es muy sensible a los parmetros que
modelan estos elementos.
Bomba SERCA:
De la expresin matemtica utilizada para describir la bomba SERCA el parmetro ms importante
es
1
p que expresa la velocidad mxima de transporte del in calcio de la bomba.
En las figuras 4.32, 4.33 y 4.34 se muestran los resultados obtenidos para la concentraciones de
+ 2
i
Ca y de
+ 2
SR
Ca y para el voltaje V cuando
1
p se inhibe en un 50% y se estimula en un 50%.
Los efectos de las perturbaciones sobre las dinmicas de
+ 2
i
Ca y de
+ 2
SR
Ca son coherentes con la
funcin que desempea la bomba SERCA en la dinmica qumica de la clula. Si se estimula
1
p , la
contribucin de la bomba SERCA en el evento de relajacin es mayor, de manera que la duracin
de
o relaxcalci
t
es un poco ms rpida y el valor de

calcio
disminuye (figura 4.32). Al mismo tiempo, se


142
favorece la recaptura del in calcio por el retculo sarcoplsmico aumentando la concentracin
+ 2
SR
Ca (figura 4.33). Los efectos contrarios se observan cuando
1
p se inhibe: la duracin de
o relaxcalci
t

es ligeramente ms lenta, el valor de
calcio
aumenta y la concentracin
+ 2
SR
Ca disminuye.
49 49.5 50 50.5 51 51.5 52
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
p1 inhibicion 50%
p1 estimulo 50%

parmetro
1
p sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .
53 54 55 56 57 58 59 60 61 62
60
80
100
120
140
160
180
200
220
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n

d
e

c
a
l
c
i
o

e
n

e
l

r
e
t
c
u
l
o

s
a
r
c
o
p
l
s
m
i
c
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
p1 inhibicion 50%
p1 estimulo 50%

1
+ 2
SR
Ca .
49 49.5 50 50.5 51
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
p1 inhibicion 50%
p1 estimulo 50%

1
p sobre la dinmica de V .

En cuanto a la dinmica de V (figura 4.34) se observa que para cualquier perturbacin: inhibicin o
estimulacin, el potencial de membrana no cambia debido a que la bomba SERCA es un elemento
que slo presenta actividad qumica.


143
Debido a la importancia que tiene la bomba SERCA como mecanismo regulador (Rocaries et al.,
2004), se prueba su modelo en condiciones ms extremas: el parmetro
1
p se inhibe casi en su
totalidad (99%) y se estimula en un 400%. Ante estas perturbaciones el modelo falla, pues cuando
la bomba SERCA prcticamente desaparece (inhibicin 99%) no existe recaptura del in calcio por
parte del retculo sarcoplsmico por lo que ste se vaca, es decir, no almacena iones calcio (figura
4.35). En consecuencia, el evento II no puede llevarse a cabo y el valor de
calcio
debera
tericamente disminuir hasta que la clula no funcione. Sin embargo, la disminucin de
calcio
que
ocurre es ligera (figura 4.36) y el miocito continua trabajando reproduciendo dinmicas estables de
+ 2
i
Ca (figura 4.36) y de V (figura 4.37). Para un estimulo fuerte de
1
p (400%), debe esperarse que
el retculo sarcoplsmico recapture velozmente iones calcio, en efecto, la
+ 2
SR
Ca (figura 4.35) alcanza
valores por encima de los rangos establecidos (mayor a 500 M), permitiendo un mayor flujo de
iones calcio desde los canales de Rianodina hacia el citosol y aumentando el valor de
calcio
(figura
4.36). Bajo estas condiciones la clula no puede relajarse (duracin de
o relaxcalci
t
) tan rpidamente a
pesar del enorme aumento impuesto al parmetro
1
p .

40 45 50 55 60 65 70
0
100
200
300
400
500
600
700
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

e
n

e
l

r
e
t
i
c
u
l
o

s
a
r
c
o
p
l
a
s
m
i
c
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
p1 estimulo 400%
p1 inhibicion 99%
llenado excesivo
vaciado completo
Figura 4.35 Efectos de las perturbaciones extremas en el
parmetro
1
+ 2
SR
Ca .
41 41.5 42 42.5 43 43.5 44
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
p1 estimulo 400%
p1 inhibicion 99%
Figura 4.36 Efectos de las perturbaciones extremas en el
parmetro
1
+ 2
i
Ca .

144
42 42.2 42.4 42.6 42.8 43 43.2
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
p1 estimulo 400%
p1 inhibicion 99%

1
p sobre la dinmica de V .

Estos resultados muestran que lamentablemente para situaciones extremas el modelo de la bomba
SERCA utilizado no logra representar la modulacin que existe entre la concentracin
+ 2
SR
Ca y el
mecanismo de transporte de calcio entre el citosol y el retculo. MacLennan y Kranias (2003),
sealan la posible existencia de una protena enzimtica denominada phospholamban que
informara qumicamente a la bomba SERCA sobre la condicin de
+ 2
SR
Ca . Trabajos futuros
podrn incluir esta interaccin, aadiendo la reaccin qumica
7
que sucede entre ambas protenas
(phospholamban - SERCA) a un mecanismo cintico ms detallado de transformacin de la
bomba SERCA como el que plantean Mahaney y colaboradores (2001).

Adicionalmente se prueba este mecanismo cintico de reaccin (Mahaney et al., 2001) en el modelo
propuesto y se evala en las condiciones extremas mencionadas. Para ello, en primer lugar se realiza
el balance de masa para cada estado de transicin
(
i cyt cyt
EP P E Ca ATPE Ca E Ca E Ca E E E , , , , , , ,
2 '
1
2 '
1
'
1 1 1 2

+ +
):

Ca E k Ca E k E k E k
i 1 2
2
1 2 1 1 2 1
1
dt
dE
+ =

+
(4.7)

7
Los trabajos de MacLennan y Kranias (2003) mencionan que aunque la protena phospholamban es
responsable de regular la
+ 2
SR
Ca , sus mecanismos de reaccin an son desconocidos.

145
Ca E k Ca E k Ca E k Ca E k
Ca
i
'
1 3
'
1 3 1 2
2
1 2
1
dt
dE
+ =

+
(4.8)
+
+ + =
2 '
1 4
2 '
1 4
'
1 3
'
1 3
'
1
dt
dE
cyt i
Ca E k Ca Ca E k Ca E k Ca E k
Ca
(4.9)
+
+ +
+
+
+ =
2 '
1 5
2 '
1 5
2 '
1 4
2 '
1 4
2 '
1
dt
d
cyt cyt cyt i
cyt
Ca ATPE k ATP Ca E k Ca E k Ca Ca E k
Ca E
(4.10)
+ +
+
+
=
2 '
1 6
2 '
1 5
2 '
1 5
2 '
1
dt
d
cyt cyt cyt
cyt
Ca ATPE k Ca ATPE k ATP Ca E k
Ca ATPE
(4.11)
i cyt
EP k P E k Ca ATPE k + =

+
7 7
2 '
1 6
dt
P - dE
(4.12)
i i
EP k E k EP k P E k + =
8 2 8 7 7
i
dt
dEP
(4.13)
1 1 2 1 2 8 8
2
dt
dE
E k E k E k EP k
i
+ =

(4.14)
donde:
8 8 7 7 6 6 5 5 4 4 3 3 2 2 1 1
, , , , , , , , , , , , , , ,

k k k k k k k k k k k k k k k k : constantes cinticas de reaccin.
Tabla 4.5 Valores de las constantes cinticas de reaccin para el mecanismo de reaccin de la bomba
SERCA planteado por Mahaney et al., 2000.
Parmetro Valor
1
k
0.35 s
-1

1
k
0.35 s
-1

2
k
200 M
-1
s
-1

2
k
120 s
-1

3
k
0.4 s
-1

3
k
0.4 s
-1

4
k
80 M
-1
s
-1


146
4
k
3.2 s
-1

5
k
4 M
-1
s
-1

5
k
0
6
k
35 s
-1

6
k
0
7
k
0.3 s
-1

7
k
0.7 s
-1

8
k
0.5 s
-1

8
k
0

Ntese que el mecanismo de reaccin planteado por Mahaney y colaboradores (2000) sugiere que el
transporte de in calcio se realiza durante etapas especficas de transformacin de la enzima de la
bomba SERCA (ecuacin 2.12). Estas etapas corresponden a: la etapa nmero 2, la nmero 4 y la
nmero 6. En las etapas 2 y 4 sucede la extraccin del in calcio existente en el citosol por parte de
la actividad de la bomba SERCA, lo cual genera un flujo qumico denominado
SERCAcyt
FQ . En la
etapa 6 se libera este in en el retculo sarcoplsmico dando lugar al flujo qumico denominado
SERCASR
FQ . Las expresiones matemticas que describen estos flujos son:
i i cyt SERCA
'
1 4
2 '
1 4
2
1 2 1 2
2
FQ + =

+ +
(4.15)
+
=
2 '
1 6
2
FQ
i SR SERCA
Ca ATPE k (4.16)
Para determinar el flujo qumico que corresponde a la actividad de la bomba del Sarcolema se utiliza
el mismo criterio empleado en el captulo 3:
SERCA Sarcolemma
FQ FQ = 1 , 0 . Debido a que la bomba
del Sarcolema transporta in calcio a nivel del citosol el
Sarcolemma
FQ se expresa como:
) ( 1 , 0 FQ 1 , 0 FQ
'
1 4
2 '
1 4
2
1 2 1 2 Sarcolemma
2
i i cyt SERCA
+ = =

+ +

(4.17)
Las expresiones matemticas que describen los flujos qumicos correspondientes a la actividad de la
bomba SERCA y a la bomba del Sarcolema son finalmente sustituidos en las expresiones

147
fundamentales de balances de masa globales para el in calcio que componen el modelo propuesto
(ecuaciones 3.1 y 3.2).
Estas ecuaciones quedan finalmente como:
( )
( ) ( )
( )
( )
T i T i T i T i
i d T T T d
i i
i i
n
i
n
m
n
i
V
V
cyt
transf
i SR
Ca
cyt
transf
i extr
Ca
R Ca x l R Ca x x x l R Ca x l R Ca x l
M Ca k R x x x l R x l R x l CaM k
Ca K
Ca
K
V
A
l
Ca Ca
x D
V
A
l
Ca Ca
d D

+ + +
+ +
+
+
=
+ + + +
+

+ +
+ +
+
+
|
\
|
+ + + + +
+ +
2
1 2
2
3 2 1 1
2
2 2
2
1 1
2
1 3 2 1 2 3 1 2 1 2
'
1 4
2 '
1 4
2
1 2 1 2
'
1 4
2 '
1 4
2
1 2 1 2
2
2
max
2 2
2
2 2 2
i
1
1
) ( 1 , 0
) (
exp 1
1
dt
dCa
2
2
2 2

(4.18)

SR
cyt
i
cyt
transf
i SR
Ca
V
V
Ca ATPE k
V
A
l
Ca Ca
x D
|
|
\
|
+
=
+
+ + +
+
2 '
1 6
2 2
2
2
SR
2
2
dt
dCa
(4.19)

Las simulaciones se realizan completando el cuadro de condiciones iniciales dado en la tabla 4.1
del siguiente modo:

- Concentracin de la enzima bomba SERCA en el estado
1
E es igual a dos veces la
concentracin total de los canales de Rianodina
T
R :
M R E
T
70 2
1
= = (4.20)
Esto se hace porque de acuerdo con MacLennan y Kranias, 2003 y Negretti et al.,1995, la
bomba SERCA es el principal mecanismo regulador del in calcio en el retculo
sarcoplsmico. Es decir, la recaptura de este in desde el citosol por parte de esta bomba
es ms favorecida que la liberacin del in calcio desde el retculo sarcoplsmico por los
canales de Rianodina.

148

- El resto de los estados de transicin de la bomba SERCA
( EP P E Ca ATPE Ca E Ca E Ca E E
cyt cyt
, , , , , ,
2 '
1
2 '
1
'
1 1 2

+ +
) se suponen con concentracin inicial
cero debido a que la bomba SERCA no ha realizado ninguna actividad.

- La concentracin de ATP es supone constante al igual que en el trabajo de Mahaney y
colaboradores (2000). El valor para esta concentracin es 1000 M de acuerdo con los
resultados reportados por Kargacin y Kargacin (1997).

En la figura 4.38 se muestra la dinmica de
+ 2
i
Ca simulada utilizando el mecanismo cintico
alternativo para la bomba SERCA en diferentes condiciones (inhibido, estimulado) y en la figura
4.39 se muestra la dinmica de V . En la figuras 4.40 se muestra la dinmica de
+ 2
SR
Ca al inhibir y
estimular el
SERCA
FQ .

En la figura 4.38 se observa que el mecanismo cintico alternativo para la bomba SERCA genera
comportamientos correctos para la dinmica de
+ 2
i
Ca , pero con ligeras inestabilidades. Esto se
debe a que las condiciones iniciales de las variables adicionales empleadas:
EP P E Ca ATPE Ca E Ca E Ca E E E
cyt cyt
, , , , , , ,
2 '
1
2 '
1
'
1 1 2 1

+ +
, deben ajustarse de manera ms rigurosa.
Estas inestabilidades no perturban la dinmica de V (figura 4.39), pues la bomba SERCA solo
influye en los fenmenos qumicos que tienen lugar en el miocito.
63 63.5 64 64.5 65 65.5
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo con FQSERCA alternativo
FQSERCA estimulado en 100%
FQSERCA completamente inhibido
+ 2
i
Ca .
60 60.5 61 61.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
FQSERCA inhibido completamente

Figura 4.39 Simulacin de la dinmica de V .

149
54 56 58 60 62 64 66 68 70 72
0
20
40
60
80
100
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

e
n

e
l

r
e
t
i
c
u
l
o

s
a
r
c
o
p
l
a
s
m
i
c
o

(
1
e
-
6
M
)
FQSERCA inhibido completamente

+ 2
SR
Ca .

Al inhibir totalmente el
SERCA
FQ alternativo, el modelo presenta la misma falla detectada en el
principio de este apartado pues a pesar de que el retculo sarcoplsmico se vaca (figura 4.40) los
ciclos de in calcio en el citosol continan reproducindose dando resultados similares a los
simulados en condiciones normales (figura 4.38).

El estmulo de
SERCA
FQ en un 100%, reproduce rangos aceptables para la concentracin del in
calcio en el retculo sarcoplsmico (figura 4.40) lo que indica que para esta prueba el modelo
muestra mejor desempeo con el mecanismo cintico alternativo. Los efectos de esta
perturbacin en la dinmica de
+ 2
i
Ca son coherentes: a mayor velocidad de la bomba SERCA, el
evento de relajacin es ms rpido y el valor de
+
2
i
Ca menor (figura 4.38).

Es importante resaltar que la solucin numrica de este modelo se obtiene en un tiempo real
mucho ms grande (10 segundos de tiempo real para obtener 1 s de tiempo simulado), debido a
que a las 18 ecuaciones diferenciales planteadas en el captulo 3 se deben aadir 8 ecuaciones
diferenciales correspondientes a la descripcin detallada de la bomba SERCA.

De estos resultados se concluye que, en el caso de no requerir evaluar condiciones extremas como
las estudiadas en esta seccin, el modelo inicialmente planteado con la cintica tipo Michaelis-

150
Menten para la bomba SERCA garantiza el compromiso entre la capacidad predictiva del modelo
y el tiempo de ejecucin necesario para obtener las simulaciones.

Tambin se demuestra que no es suficiente plantear un mecanismo detallado de la transformacin
de la enzima bomba SERCA sino que es necesario representar matemticamente la modulacin
que existe entre esta protena y la concentracin del in calcio en el retculo sarcoplsmico
(MacLennan y Kranias, 2003). De esta manera se garantiza que el modelo propuesto sea
coherente al evaluarlo en la condicin extrema: ausencia absoluta de la bomba SERCA.

Actividad qumica de la bomba del sarcolema:
Por estar ubicada en el sarcolema esta bomba tiene efectos de carcter qumico (transporte de in
calcio) y de carcter elctrico (corriente inica generada por dicho transporte). Su actividad qumica
est regulada por el parmetro cintico
1
q (mxima velocidad de transporte).
42 42.5 43 43.5 44 44.5 45
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
q1 estimulo 100%
q1 inhibicion 50%
q1 inhibicion total

1
q
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .
41.7 41.8 41.9 42 42.1 42.2 42.3 42.4 42.5
-100
-50
0
50
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
q1 estimulo 100%
q1 inhibicion total

1
q

Cambios de aumento y disminucin de
1
q no afectan ni la dinmica de
+ 2
i
Ca (figura 4.41) ni la
dinmica de V (figura 4.42). Esto coincide con los resultados del trabajo de Gaughan y
colaboradores (1999) quienes indican que la bomba del sarcolema contribuye en un grado muy
pequeo al proceso de excitacin-contraccin y relajacin. Consecuentemente, estas pruebas de

151
sensibilidad confirman que la inclusin de la descripcin matemtica de la actividad qumica de la
bomba del sarcolema es irrelevante en el modelo propuesto.
Actividad qumica del intercambiador Na
+
-Ca
2+
:
El parmetro ms importante asociado a la actividad qumica de este elemento se denomina K y es
la velocidad de transporte mxima del intercambiador.
En la figura 4.43 se muestran los resultados de la inhibicin (100% y 50%) estmulo (100%) de K
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca , y en la figura 4.47 sobre la dinmica de V .
51 51.5 52 52.5 53 53.5 54 54.5 55
0
0.5
1
1.5
2
2.5
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
K estimulo 100%
K inhibicion 50%
K inhibicion total
Extraccin incompleta de calcio
Valor de reposo anormal

parmetro K sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .
40 40.2 40.4 40.6 40.8 41 41.2 41.4 41.6 41.8
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
K estimulo 100%
K inhibicion 50%
K inhibicion total
Espiga
acelera

Figura 4.44 Efectos de las perturbaciones en el parmetro K

El estmulo del parmetro K (100%), hace que los valores de
calcio
y
calcio
t
disminuyan
ligeramente (figura 4.43), pues se extrae mayor cantidad de in calcio al medio extracelular. Sin
embargo, este efecto no es suficiente para alterar la dinmica de V (figura 4.44). Cuando K se
inhibe medianamente (50%), el evento de relajacin no puede completarse por cada ciclo de
+ 2
i
Ca
lo que produce dinmicas inestables de
+ 2
i
Ca y de V (figuras 4.43 y 4.44). La inhibicin completa de
K elimina la presencia de la actividad qumica del intercambiador Na
+
-Ca
2+
en el miocito, por lo
tanto los nicos elementos que pueden extraer in calcio del citosol son la bomba SERCA y la
bomba ATPasa del sarcolema. La actividad de estos elementos no es suficiente y el in calcio queda
acumulado en el citosol, alterando el valor de
+ 2
i
Ca en estado de reposo desde 0,1 M hasta 1,5M,

152
lo cual tambin inestabiliza los ciclos de la variable V (figura 4.44). Las inhibiciones del parmetro
K por otro lado, reproducen las caractersticas de una clula sobreviviente en tejidos infartados:
curvas del potencial de membrana con formas atpicas (espiga) y aceleracin de
voltaje
t
. En resumen,
la dinmica del miocito resulta muy sensible a la actividad qumica del intercambiador Na
+
-Ca
2+
.
Inhibiciones inducidas en este elemento pueden ayudar a comprender los mecanismos de actuacin
de los infartos.
4.5.2 Perturbaciones en el subsistema elctrico:
Este bloque corresponde a la actividad de las corrientes elctricas de sodio, de potasio, de calcio y de
las bombas inicas, y se estudian en los siguientes prrafos.
Corrientes de sodio:
Las corrientes generadas por la actividad de los iones sodio son dos:
Na
I e
Nab
I , y estn descritas en
las ecuaciones 3.45 y 3.46 respectivamente. Las pruebas de sensibilidad se realizan modificando los
valores de los principales parmetros asociados a estas corrientes: Na G y Nab G . En las figuras 4.45
a 4.46 se muestran los resultados de las simulaciones para V y
+ 2
i
Ca al modificar Na G y Nab G .
40 40.2 40.4 40.6 40.8 41 41.2 41.4
-80
-60
-40
-20
0
20
40
60
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
GNa estimulo 100%
GNa inhibicion 90%
retardo

Na G sobre la dinmica de V .
47 47.5 48 48.5 49 49.5 50
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
1.1
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
GNa estimulo 100%
GNa inhibicion 90%

Figura 4.46 Efectos de las perturbaciones en el parmetro Na G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .


153
El coeficiente Na G mide la capacidad de conduccin (conductancia) de la porcin de los canales de
sodio responsables de la generacin de la corriente
Na
I . Si ste se inhibe (90%), los iones de sodio
transportados hacia el interior del miocito entran en menor proporcin, lo que reduce los valores de
V en la fase de despolarizacin de 50 mV en condiciones normales a 0 mV en condiciones de Na G
inhibido (ver figura 4.45). Cuando la conduccin es menor los canales de sodio se inactivan ms
lentamente lo que retarda la repolarizacin del V (aumento de
voltaje
t
) y consecuentemente
disminuye el ritmo cardaco. A la vez los canales L permanecen ms tiempo abiertos aumentando la
entrada de in calcio al interior del miocito y luego aumentando
calcio
(ve figura 4.46). Frente al

estimulo de Na G (100%), el modelo es menos sensible y los ciclos de V (figura 4.45) y de
+ 2
i
Ca
(figura 4.46) no muestran mayores alteraciones.
48 48.5 49 49.5 50 50.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
GNab estimulo 10%
GNab inhibicion 90%
retardo
acelera

parmetro Nab G sobre la dinmica de V .
48 48.5 49 49.5 50 50.5 51 51.5
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
GNab estimulo 10%
GNab inhibicion 90%

Figura 4.48 Efectos de las perturbaciones en el parmetro Nab G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

El parmetro Nab G en cambio modula la conductancia de la porcin de canales de sodio
responsable de la corriente
Nab
I . A su vez, esta corriente regula la fase de meseta en el potencial de
membrana. Cuando Nab G se inhibe (90%) la fase de meseta se reduce y en consecuencia disminuye
la duracin de
voltaje
t
, lo que acelera el ritmo cardaco (figura 4.47). Con este efecto, los canales L
duran menos tiempo abiertos y su contribucin en la dinmica de
+ 2
i
Ca es menor, disminuyendo el
valor de
calcio
(figura 4.48). Pequeas estimulaciones en Nab G (10%) aumentan los valores de V

en la fase de meseta (figura 4.47), lo cual estimula aun ms la apertura de canales L produciendo

154
valores de
calcio
muy grandes (figura 4.48). Esta concentracin tan alta de in calcio no puede
extraerse completamente del miocito ya que los mecanismos de relajacin son insuficientes. Como
la clula no se relaja completamente, las duraciones de
voltaje
t
y de
calcio
t
fluctan entre rpidas y

lentas, producindose arritmias cardiacas. Estos resultados muestran que el modelo es altamente
sensible a las modificaciones en el parmetro Nab G y consecuentemente la corriente
Nab
I tambin
desempea un papel regulador fundamental en la dinmica del miocito.
Corrientes de potasio.
Las corrientes generadas por la actividad de los iones potasio son a saber:
1 K
I ,
to
I ,
Kp
I ,
Kr
I e
Ks
I
(descritas en las ecuaciones 3.56 a 3.60), y sus principales parmetros asociados son: 1 K G , to G ,
Kp G , Kr G y Ks G , respectivamente. A continuacin se muestran las figuras (4.49 a 4.60) con los
resultados de las simulaciones obtenidas al estimular o inhibir dichos parmetros, conjuntamente
con el anlisis de resultados para cada caso.
44 44.5 45 45.5 46 46.5 47 47.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Normal model
GK1 estimulo 50%
GK1 inhibicion 10%
acelera
retardo

parmetro 1 K G sobre la dinmica de V .
46 46.5 47 47.5 48 48.5 49
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
GK1 estimulo 50%
GK1 inhibicion 10%

Figura 4.50 Efectos de las perturbaciones en el parmetro 1 K G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

El parmetro 1 K G permite la conduccin de iones potasio a travs de la fraccin de canales
1
K ,
los cuales generan la corriente
1 K
I . Esta corriente tiene como funcin principal mantener el valor
del potencial de reposo (figura 2.4). Cuando 1 K G se inhibe aunque sea ligeramente (10%), la
corriente
1 K
I es menor y el valor del potencial de reposo se recupera ms lentamente

155
inestabilizando los ciclos de la dinmica de V que presenta duraciones de
voltaje
t
variables (entre
aceleradas y retardadas - figura 4.49). Estos efectos se repiten para la dinmica de
+ 2
i
Ca (figura
4.50), provocando en la clula las condiciones patolgicas propias del infarto. El estimulo de 1 K G
provoca una corriente
1 K
I ms grande, con lo cual el potencial de reposo se recupera ms
rpidamente. Consecuentemente, la duracin de
voltaje
t
es menor (figura 4.49), es decir el ritmo

cardaco se acelera, generando taquicardia. Los ciclos de la dinmica de
+ 2
i
Ca son estables pero con
menor valor de
calcio
(figura 4.50), pues disminuye en consecuencia el perodo de apertura de los

canales L.
45 45.2 45.4 45.6 45.8 46 46.2 46.4 46.6
-100
-50
0
50
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
Gto estimulo 50%
Gto inhibicion 50%
retardo
acelera
Recuperacin
lenta de V

parmetro to G sobre la dinmica de V .
49 49.2 49.4 49.6 49.8 50 50.2 50.4 50.6 50.8 51
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
Gto estimulo 50%
Gto inhibicion 50%

Figura 4.52 Efectos de las perturbaciones en el parmetro to G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

El coeficiente to G modula la conduccin de iones potasio a travs de las fracciones de canales
Xto
K
y
Yto
K , cuyas actividades generan la corriente
to
I , responsable a su vez de la recuperacin temprana
del potencial de reposo (figura 2.4). Cuando to G se estimula, la corriente
to
I es ms grande con lo
que se logra repolarizar la membrana muy rpidamente (figura 4.51), mas no as recuperar los
valores de reposo para la dinmica de
+ 2
i
Ca (figura 4.52), pues el evento de relajacin no se
completa. Esto produce aceleraciones y retardos en las duraciones de
voltaje
t
y de
calcio
t
, generando
arritmias en la clula. La inhibicin de to G por otra parte hace que el potencial de meseta de la
membrana posea valores ms positivos, pues el V se recupera ms lentamente (figura 4.51), ya que

156
la corriente
to
I es menor. Luego, los canales L se inhiben en menor proporcin causando el
aumento del valor de
calcio
(figura 4.52). No obstante, esta inhibicin de to G (50%) no acelera ni

retarda el ritmo cardaco celular.
62 62.5 63 63.5 64 64.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Normal model
GKp estimulo 50%
GKp inhibicion 50%
retardo
acelera

parmetro Kp G sobre la dinmica de V .
64 64.5 65 65.5 66 66.5 67
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
GKp estimulo 50%
GKp inhibicion 50%

Figura 4.54 Efectos de las perturbaciones en el parmetro Kp G
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

El parmetro Kp G representa el grado de conductancia de la fraccin de canales de potasio
Kp
K
que ayudan a mantener la fase de meseta del potencial de membrana, mediante la generacin de la
corriente
Kp
I . Cuando este parmetro se inhibe, la corriente
Kp
I disminuye y la fase de meseta se
retarda (figura 4.53) ya que se extrae menos in potasio de la clula. Entonces, los canales L se
cierran ms lentamente y el valor de
calcio
aumenta (figura 4.54). Luego este efecto genera arritmias

en la clula pues las duraciones de
voltaje
t
y de
calcio
t
se aceleran y/o retardan, desestabilizando las

dinmicas de
+ 2
i
Ca y de V . En cambio, el modelo no es sensible al estimulo de Kp G , pues esta
perturbacin no altera el comportamiento del miocito.
El parmetro Kr G mide la conductancia de las fracciones de canales de potasio
R
K y
XKr
K que
generan la corriente
Kr
I , responsable de la rpida repolarizacin del potencial de membrana.
Cuando Kr G se inhibe, el valor de la corriente
Kr
I es ms pequeo por lo que la repolarizacin del
potencial de membrana es ms lenta. Esto retarda la duracin de
voltaje
t
(figura 4.55) y hace que los


157
canales L se cierren ms lentamente, provocando un valor mayor de
calcio
(figura 4.56). El exceso

de in calcio no puede extraerse completamente producindose duraciones variables (aceleradas y
retardadas) para
voltaje
t
y
calcio
t
que inestabilizan la dinmica del miocito. Estos resultados

coinciden con trabajos similares realizados por Priebe y Beuckelmann (1998), quienes concluyen que
perturbaciones en la corriente
Kr
I reproducen el comportamiento de un miocito isqumico.
Cuando se estimula Kr G , la repolarizacin del potencial de membrana ocurre ms rpidamente
(figura 4.55), acelerando el ritmo cardaco en la clula (taquicardia).
45.8 46 46.2 46.4 46.6 46.8 47 47.2 47.4
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
GKr estimulo 150%
GKr inhibicion 99%
acelera
retarda

parmetro Kr G sobre la dinmica de V .
54 54.5 55 55.5 56 56.5 57
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
GKr estimulo 150%
GKr inhibicion 99%

Kr G sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .
40 40.2 40.4 40.6 40.8 41 41.2
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
GKs estimulo 150%
GKs inhibicion 99%
acelera
retarda

Figura 4.57 Efectos de las perturbaciones en el parmetro Ks G sobre la dinmica de V .

158
El coeficiente Ks G representa la conductancia de la fraccin de canales de potasio
XKr
K que
generan la corriente
Ks
I , responsable tambin de la repolarizacin del potencial de membrana. La
inhibicin o estimulo de este parmetro no produce modificaciones en la dinmica de
+ 2
i
Ca . En la
dinmica de V (figura 4.57) los efectos son muy pequeos: el estimulo en un 150% acelera
ligeramente la duracin de
voltaje
t
y la inhibicin (99%) la retarda.

Corrientes de calcio:
Las corrientes generadas por la actividad de los iones calcio son tres:
Ca
I ,
CaK
I e
Cab
I y estn
descritas en las ecuaciones 3.76, 3.77 y 3.78 respectivamente. Las pruebas de sensibilidad se realizan
modificando los valores de los principales parmetros asociados a estas corrientes, que son: Ca P ,
CaK P y Cab G . Sus resultados se recogen en las figuras 4.58 a 4.63.
60 60.5 61 61.5 62 62.5 63
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
tiempo(s)
C
o
n
c
e
n
t
r
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c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
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l
c
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(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
PCa estimulo 100%
PCa inhibicion 50%

parmetro Ca P sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .
55 55.5 56 56.5 57
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
PCa estimulo 100%
PCa inhibicion 50%
retarda
acelera
Ca P sobre la dinmica de V .

En primer trmino las perturbaciones en el parmetro Ca P modifican la permeabilidad de los
canales L a los iones calcio, es decir, la capacidad de estos iones para atravesar los canales L y
generar la corriente
Ca
I . Cuando el valor de Ca P se inhibe (50%), los iones calcio pasan en menor
cantidad a travs de los canales L y generan un valor de corriente
Ca
I menor. Entonces, la
concentracin de calcio inicial en el citosol no es suficiente para estimular la apertura de los canales
de Rianodina y por lo tanto el valor de
calcio
disminuye drsticamente (figura 4.58). Esto genera un


159
desequilibrio arritmia en la clula: duraciones de
voltaje
t
(figura 4.59) y de
calcio
t
variables
(aceleradas y retardadas). Por otra parte, el estimulo de Ca P (100%) no causa comportamientos
anormales en la clula.
62 62.5 63 63.5 64 64.5 65 65.5
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
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c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
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l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
PCaK estimulo 50%
PCaK inhibicion 90%

parmetro CaK P sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .
59 59.5 60 60.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo(s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
PCaK estimulo 50%
PCaK inhibicion 90%
retardo

CaK P sobre la dinmica de V .

El parmetro CaK P , modula la permeabilidad de los iones potasio para atravesar los canales L, cuyo
flujo genera la corriente
CaK
I . Cuando este parmetro se inhibe (90%), disminuye el paso de iones
de K
+
y se estimula el transporte de calcio, lo que conduce a un aumento del valor de
calcio

(figura 4.60). Esto tambin provoca un ligero aumento en la duracin de
voltaje
t
(figura 4.61), es
decir, se retarda el ritmo cardaco (bradicardia). El estimulo de CaK P produce el efecto contrario
(disminucin) para el valor de
calcio
(figura 4.60) pues en este caso el transporte del in potasio a

travs de los canales L es el ms favorecido. No obstante, las modificaciones en las dinmicas de
+ 2
i
Ca y de V son muy leves, y sus ciclos permanecen estables, siendo el modelo prcticamente
insensible a esta perturbacin.

160
60 60.5 61 61.5 62 62.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
GCab estimulo 50%
GCab inhibicion 90%
retardo
acelera

parmetro Cab G sobre la dinmica de V .
60 60.5 61 61.5 62 62.5 63
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
GCab estimulo 50%
GCab inhibicion 90%

Cab G sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

El coeficiente Cab G representa la conductancia de la porcin de los canales L capaces de generar,
mediante el transporte del in calcio, la corriente
Cab
I , la cual es responsable de mantener la fase de
meseta en el potencial de membrana. Cuando Cab G se estimula (50%) la duracin de la fase de
meseta es mayor (figura 4.62) lo que mantiene los canales L abiertos durante mayor tiempo. Esto
produce un aumento en el valor de
calcio
(figura 4.63) tan grande (1,4 M) que los mecanismos de

extraccin de calcio no pueden completar la relajacin. Entonces, se producen ciclos inestables para
la dinmica de
+ 2
i
Ca y de V con duraciones de
voltaje
t
y de
calcio
t
aceleradas y retardadas (clula

con arritmia). Cuando Cab G se inhibe (50%) el potencial de membrana se repolariza ms
rpidamente y la fase de meseta se acelera (menor duracin de
voltaje
t
, figura 4.62), provocando un

comportamiento como la taquicardia en el miocito. Esto disminuye la actividad de los canales L y en
consecuencia tambin disminuye el valor de
calcio
(figura 4.63).
Corrientes de las bombas inicas:
Las corrientes generadas por la actividad de las bombas inicas son tres:
pCa
I ,
NaCa
I e
NaK
I
(ecuaciones 3.85, 3.86 y 3.87). Las pruebas de sensibilidad se realizan modificando los valores de los
principales parmetros asociados a estas corrientes que son:
max pCa
I ,
NaCa
k y max NaK I . Los
resultados se muestran en las figuras 4.64 a 4.69.

161
68 68.2 68.4 68.6 68.8 69 69.2 69.4
-100
-50
0
50
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
IpCamax estimulo 100%
IpCamax inhibicion 99%
acelera

parmetro
max pCa
I sobre la dinmica de V .
65 65.5 66 66.5 67
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
IpCamax estimulo 100%
IpCamax inhibicion 99%

max pCa
I sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

El parmetro
max pCa
I representa la mxima corriente generada por la bomba del sarcolema cuando
la velocidad de transporte de dicha bomba es mxima, y es directamente proporcional a la corriente
pCa
I . Cuando
max pCa
I se perturba (se inhibe o se estimula) se acelera ligeramente la duracin de
voltaje
t
(figura 4.64) lo que a la vez disminuye el valor de

calcio
(figura 4.65). No obstante, estas

perturbaciones no generan inestabilidades en la dinmica celular, como lo confirman tambin los
resultados de los trabajos realizados por Gaughan y colaboradores (1999). Las pruebas realizadas
sugieren que el modelo propuesto no es sensible ni a la actividad qumica (ver seccin 4.5.1) ni a la
actividad elctrica asociada a la bomba del sarcolema y por lo tanto la descripcin matemtica de
este elemento celular no es necesaria.
El coeficiente
NaCa
k es un factor de ajuste para la corriente
NaCa
I y es directamente proporcional a
dicha corriente. Cuando
NaCa
k se inhibe en un 99%, a pesar de que se elimina la actividad elctrica
del intercambiador Na
+
-Ca
2+
, no se altera la dinmica de V (figura 4.66), pues las otras bombas:
SERCA y Na
+
-K
+
son capaces de reestablecer el potencial de membrana. A la vez, el in calcio no
puede extraerse completamente del citosol lo que provoca un ligero aumento en el valor de
calcio

(figura 4.67) que sin embargo, no desestabiliza la dinmica de
+ 2
i
Ca . El estimulo de
NaCa
k (100%)
significa que la extraccin de in calcio es mayor por lo que la repolarizacin es ms temprana (ms
rpida). Esta rapidez no permite recuperar los valores de reposo de la variable
+ 2
i
Ca , lo que genera

162
inestabilidades en las dinmicas de
+ 2
i
Ca y de V . Estas inestabilidades son tpicas de una clula con
arritmia pues las duraciones de
voltaje
t
y de
calcio
t
no son uniformes (aceleradas y/o retardadas).

Estos resultados y los resultados de la seccin 4.5.1. (actividad qumica del intercambiador Na
+
-
Ca
2+
) indican que el intercambiador Na
+
-Ca
2+
juega un papel regulador importante en el proceso de
excitacin-contraccin y relajacin y que sus alteraciones ya sea a nivel cintico-qumico o elctrico
pueden provocar enfermedades como la arritmia cardiaca o el infarto.
68 68.5 69 69.5 70 70.5
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
kNaCa estimulo 100%
kNaCa inhibicion 99%
acelera
retardo

NaCa
k
69 69.5 70 70.5 71 71.5
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
kNaCa estimulo 100%
kNaCa inhibicion 99%

NaCa
k
sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

El parmetro max NaK I representa la mxima corriente generada por la bomba Na
+
-K
+
cuando la
velocidad de transporte de dicha bomba es mxima. Pequeas inhibiciones (30%) en el parmetro
max NaK I producen duraciones de
voltaje
t
(figura 4.68) y de
calcio
t
(figura 4.69) variables (aceleradas

y/o retardadas), provocando arritmia cardiaca en la clula. El estimulo (50%) de max NaK I acelera la
repolarizaciones del potencial de membrana (figura 4.68) lo cual induce taquicardia en el ritmo
cardaco. Estas pruebas de sensibilidad muestran que la bomba Na
+
-K
+
desempea un papel
fundamental en la dinmica del miocito por lo que futuros trabajos deben contribuir a entender de
una manera ms completa la actividad de dicho elemento; esto es, incluir tambin los mecanismos
cintico-qumicos que describan el papel modulador de esta bomba.


163
43 43.5 44 44.5 45 45.5
-100
-50
0
50
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Modelo propuesto
INaKmax estimulo 50%
INaKmax inhibicion 30%
retardo
acelera

max NaK I sobre la dinmica de V .
50 50.5 51 51.5 52 52.5 53 53.5 54
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Modelo propuesto
INaKmax estimulo 50%
INaKmax inhibicion 30%

max NaK I sobre la dinmica de
+ 2
i
Ca .

4.6 CONCLUSIONES.
Los resultados de la validacin muestran en general un modelo que emula correctamente los
comportamientos reales conocidos de la clula cardaca. No solo los valores numricos de las
diferentes variables medidas son bastante cercanos a los valores reales (Tabla 4.3) sino que se
obtienen las dinmicas esperadas en cuanto a su forma y a las variaciones impuestas por diferentes
condiciones. Adems los resultados del modelo propuesto son mejores que los de otros modelos
celulares conocidos (Tabla 4.3).

Concebir la clula como un sistema integrado de reactores qumicos permite relacionar los aspectos
elctricos y qumicos del miocito simultneamente aportando una visin global de todo el proceso
de excitacin-contraccin y relajacin. Esto da lugar a resultados coherentes donde se puede
observar por ejemplo, que la dinmica de voltaje es ms rpida que la dinmica de la concentracin
del in calcio, que an si ambas dinmicas son obviamente cclicas sus formas son diferentes
(campana asimtrica para el calcio y meseta para el voltaje), que la actividad de los canales de
Rianodina (de actividad qumica) y la actividad de los canales L (dependientes del voltaje) estn
interrelacionadas, ect


164
El proceso de validacin tambin muestra que el modelo propuesto puede ser fcilmente adaptado a
diferentes especies animales de miocito: aves o mamferos. Un resultado colateral interesante de
estos procedimientos de validacin-adaptacin por ajuste emprico de parmetros, es un tipo de
conocimiento experto que podra permitir, en futuros trabajos, la sistematizacin del ajuste
utilizando tcnicas de lgica difusa. O tambin, la codificacin del problema para realizar la
optimizacin de ciertos parmetros con algoritmos evolutivos. Reflexiones ms ilustrativas sobre
estos aspectos se presentan en el captulo 5.
Finalmente, el estudio de sensibilidad del modelo logra exitosamente varios objetivos:
1. Corroborar el funcionamiento coherente de cada elemento del modelo de acuerdo a
conocimiento fenomenolgico: se tiene que, las actividades de los canales de Rianodina, canales
L, corriente
Ca
I y corriente
Na
I estn directamente relacionadas con la etapa de excitacin del
miocito y que las actividades de la bomba SERCA, el intercambiador Na
+
-Ca
2+
y las corrientes
Cab
I ,
Nab
I e
Kp
I influyen significativamente en la etapa de relajacin.
2. Identificar elementos que no influyen (sensibilidad nula del modelo) y que por lo tanto se
pueden eliminar o simplificar: por ejemplo, perturbaciones en los parmetros
1
q y
max pCa
I ,
asociados respectivamente a la actividad qumica y elctrica de la bomba del sarcolema, no
influyen significativamente en los resultados del modelo.
3. Identificar los elementos claves a los cuales el modelo es muy sensible para mejorar su ajuste: en
este sentido, es necesario, complementar la descripcin matemtica de la bomba Na
+
-K
+
a fin
de incluir su actividad cintico-qumica, pues segn el estudio de sensibilidad, este elemento
celular representa una fuerte influencia sobre el proceso de excitacin-contraccin y relajacin.
4. Identificar comportamientos errneos: las pruebas de sensibilidad sugieren que la descripcin
matemtica utilizada para la bomba SERCA falla cuando se evala su comportamiento en
condiciones extremas como lo es la ausencia de la misma, ya que se producen anormales
vaciados o llenados del retculo sarcoplsmico. Por lo tanto, futuros modelos globales de la
clula cardiaca deben incluir mecanismos de reaccin que de alguna manera representen la
modulacin especial que existe entre la concentracin del in calcio en el retculo sarcoplsmico
y la actividad de dicho elemento.

165
5. Reproducir situaciones anormales (patologas cardiacas) e identificar los elementos celulares que
pueden reproducir dichas condiciones: tal es el caso del parmetro
1 d
K (inhibicin completa), el
cual esta asociado al comportamiento cintico de las miofibrillas y cuya alteracin reproduce los
efectos tpicos de una clula con insuficiencia cardiaca: prdida de su fuerza contrctil o lo que
es lo mismo disminucin de la afinidad entre la miofibrilla y el in calcio. En el caso de los
canales L, tanto a nivel cintico qumico como elctrico, las alteraciones en los parmetros
asociados a ambas actividades (
d
F y
Ca
P ) pueden producir arritmias cardiacas o infarto.
Muchas condiciones de perturbacin paramtrica tienen los mismos efectos, sin embargo, los
resultados de las pruebas de sensibilidad han permitido construir dos diagramas (figuras 4.70 y 4.71)
que muestran la preponderancia que cada elemento celular descrito en el modelo tiene sobre partes
especficas de las dinmicas de voltaje y de concentracin de calcio. El conocimiento expresado en
ambos grficos es una herramienta valiosa que puede ser utilizada de mltiples formas. Por ejemplo,
en el diagnstico ms preciso de las enfermedades cardacas, observando el comportamiento atpico
de la dinmica del potencial de membrana y de la concentracin del in calcio e identificando cual
elemento celular es el ms afectado. En el desarrollo de terapias curativas, para descifrar sus
mecanismos de accin, esto es, identificar cules elementos celulares son directamente afectados por
la inyeccin de una droga en especfico. Este procedimiento es un aporte valioso del modelo
propuesto, que se desarrollar en el prximo captulo a fin de descifrar cmo actan diferentes
drogas: Cafena, Thapsigargin, Rutenio y Forskorlin sobre el comportamiento del miocito y sobre
los elementos celulares que lo componen.


166

Figura 4.70 Ciclo de voltaje y su interrelacin con las descripciones matemticas del modelo.

Figura 4.71 Ciclo de concentracin del in calcio y su interrelacin con las descripciones
matemticas del modelo.

- 90 mV
- 50 mV
0 mV
200 - 400 ms
I
Na
,I
Ca
, Canales de
Rianodina, Canales L
Despolarizacin sbita

-
I
Kr
,I
Ks
,I
NaCa
,I
NaK
,I
to,
bomba
SERCA, intercambiador Na
+
-
Ca
2+

Repolarizacin temprana
I
Kp
,I
Cab
,I
Nab,
Miofibrillas

Fase de meseta
I
K1

Fase final de repolarizacin
0.14 M
1 M
0 200 800
tiempo ms
Calcio
I
Ca
,Canales L,I
Na

Canales de
Rianodina
Miofibrillas,I
Cab
,I
Nab
,I
Kp
,I
NaCa
,I
NaK
,I
pCa

Bomba SERCA , intercambiador
Na
+
-Ca
2+
,I
Kr
,I
Ks
,I
to
,
I
Kp
,I
pCa
,
Aplicaciones 167
C a p t u l o 5

APLICACIONES

Si piensas que existe una mejor manera de hacer las cosasencuntrala.
-Tomas Edison-

5.1 INTRODUCCIN.

Con la finalidad de facilitar la disponibilidad del modelo para aplicaciones por parte de la
comunidad cientfica y estudiantil en general, se desarrolla el simulador denominado
MyocyteSimulator. En la primera parte de este captulo se presenta el diseo de este simulador
que contiene las rutinas de resolucin del modelo propuesto y de ingreso de datos y presentacin
de resultados. Su amigable ambiente informtico tipo ventanas, permite la modificacin de
parmetros y la comparacin y manipulacin grfica de las simulaciones de una manera sencilla
que no requiere del usuario conocimiento de los comandos y rutinas del lenguaje de
programacin Matlab ni del ambiente de la herramienta Simulink en que se desarrollan
originalmente los programas. Adems MyocyteSimulador tambin resuelve los modelos
planteados por Tang y Othmer (1994) y Fox y colaboradores (2001), lo que permite realizar
comparaciones sobre el desempeo de cada modelo.

En la segunda parte del captulo se aprovecha la implantacin del simulador para realizar una de
las aplicaciones ms interesantes del modelo, como es validar el efecto de la inyeccin de ciertas
drogas en la dinmica de la clula. Especficamente se usan las substancias denominadas: Cafena,
Forskolin, Rojo de Rutenio y Tapsigargin, que se han escogido porque se dispone de amplia
informacin en la literatura sobre sus efectos (Duke y Steel, 1998; Zhang y Wong, 1998). El
procedimiento de validacin empleado es similar al realizado en el captulo 4: utilizando
conocimiento fenomenolgico preexistente, se ajusta de manera heurstica un conjunto de
Aplicaciones 168
parmetros hasta reproducir con el modelo los efectos inducidos por la inyeccin de la droga en los
miocitos reales sometidos al experimento. Los parmetros mayormente afectados (ajustados) estn
asociados a elementos celulares especficos, lo que permite identificar en qu medida y mediante
cules mecanismos la droga modifica el comportamiento del miocito. Este conocimiento es un
aporte valioso en la bsqueda de tratamientos de las enfermedades cardiacas, pues contribuye en el
ahorro de tiempo y en el diseo de protocolos experimentales ms especficos (Khol et al., 2003;
Rocaries et al., 2004, Roche et al., 2004).

El captulo est organizado de la siguiente forma: en la seccin 5.2 se explican la implantacin del
simulador MyocyteSimulator y las funciones diseadas en l. El uso de este simulador para validar
los efectos inducidos en la dinmica celular debido a la inyeccin en el citosol de las diferentes
drogas, se presenta en la seccin 5.3.

A esto se ha agregado, en la seccin 5.4, una discusin sobre posibles extensiones del simulador en
dos direcciones especficas:
Facilitar al usuario el ajuste paramtrico necesario en las validaciones del modelo,
desarrollando un algoritmo evolutivo que use el error de prediccin como medida de la
calidad del ajuste.
Sistematizar el conocimiento experto generado a lo largo del desarrollo de este trabajo, por
ejemplo el conocimiento sobre los efectos de las drogas, e integrarlo en sistemas de
inferencia borrosa, capaces de combinar de manera inteligente diversos efectos, y adems
susceptibles de re-adaptarse a partir de nuevos conocimientos.

5.2 EL SIMULADOR.

El objetivo de esta seccin es desarrollar un simulador que facilite la utilizacin del modelo
formulado en el captulo 3, y se justifica por muchas razones, entre las cuales cabe destacar las
siguientes:

El modelo formulado describe tanto el comportamiento elctrico (en trminos de voltaje)
como el comportamiento qumico (en trminos de concentracin de in calcio) del miocito.
Aplicaciones 169
Modelos como ste no estn disponibles en los simuladores existentes (Kohl y Noble, 2003)
que casi siempre estn basados en modelos elctricos de la clula. Noble (2000), plantea que
la complejidad de las reacciones qumicas involucradas en el comportamiento del miocito
complican an ms la resolucin numrica de los modelos. No obstante, al realizar el
proceso de validacin y las pruebas de sensibilidad (captulo 4), se comprueba que para el
modelo propuesto solo es necesario ejecutar 4 s de tiempo real para obtener 1 s de tiempo
simulado en la clula virtual (utilizando un procesador tipo Intel Pentium III 993MHz).
Este resultado es bastante satisfactorio si se compara con el desempeo de otros
simuladores (OXSoft Heart: Khol y Noble, 2003, LabHeart: Puglisi y Bers, 2001).

Las validaciones realizadas muestran que el modelo formulado puede representar diversos
comportamientos mediante ajustes paramtricos. Es deseable que la realizacin de estos
ajustes pueda hacerse de una manera interactiva sencilla, sin que sea necesario que
reprogramar y/o re-editar los archivos correspondientes a la implantacin de las ecuaciones
del modelo en el lenguaje de programacin Matlab. Esto se logra, diseando un sistema
informtico amigable, donde sea posible cargar las modificaciones de los parmetros a
ajustar y sugeridos por el mismo sistema y que los cambios se realicen de manera
transparente para el usuario.

Realizar un simulador del modelo propuesto facilita la disponibilidad del mismo en la
comunidad cientfica y acadmica y es un importante apoyo a la investigacin o al
entrenamiento. En efecto, un simulador genera bases de datos con las evoluciones
temporales de las variables de inters, que, permiten su almacenamiento, manipulacin y
visualizacin grfica y finalmente su comparacin con otros modelos.

A continuacin en los prximos prrafos se muestra primeramente la implantacin del simulador y
luego se explican las diferentes funciones diseadas para su ejecucin.

5.2.1 Diseo del simulador.

Para desarrollar el simulador se utiliza la herramienta Guide de Matlab v 6.5, que permite la
programacin de interfases tipo ventanas con mens y comandos especiales. El simulador se
Aplicaciones 170
denomina MyocyteSimulator, y se puede usar de manera intuitiva, mediante la pulsacin de los
botones (derecho e izquierdo) del ratn sobre los iconos diseados. La utilizacin de
MiocyteSimulator en cualquier computadora requiere previamente de la instalacin del programa
Matlab v 6.5 o en su defecto versiones ms recientes. El cdigo del simulador est contenido en
una serie de archivos que conforman una carpeta denominada MyocyteSimulator que debe ser
copiada localmente en el computador. Este cdigo est disponible en el apndice E.

Para ejecutar MyocyteSimulator es necesario realizar los siguientes pasos:
1. Abrir Matlab: presionando el botn izquierdo del ratn sobre el icono de ejecucin del
programa.
2. Ubicar el directorio correspondiente: presionando sobre el icono buscador de directorio
en la interfase de Matlab (figura 5.1), el usuario podr localizar la carpeta del cdigo
MyocyteSimulator y asignar su ubicacin como el directorio actual (Current Directory).
3. Ejecutar el simulador: escribir en la ventana de comando de Matlab la palabra
MyocyteSimulator (figura 5.1). Inmediatamente aparecer la ventana que contiene la
interfase diseada (figura 5.2).

Este simulador es una versin piloto que permite obtener simulaciones de tres modelos
matemticos: el modelo de Tang y Ohtmer (1994), el modelo de Fox y colaboradores (2001) y el
modelo propuesto (Roche et al., 2004). A continuacin se describen las caractersticas diseadas
para MyocyteSimulator.

5.2.2 Descripcin del simulador.

La pantalla principal de MyocyteSimulator est diseada de la siguiente manera:

1. Men principal: contiene dos sub-mens.
a. View: que muestra las ecuaciones matemticas asociadas a los modelos
implementados en el simulador
b. Help: que contiene indicaciones de ayuda para ejecutar el simulador.

Aplicaciones 171
2. Botones activos para los modelos: para cada uno de los tres modelos implantados se ha
diseado un botn activo.

a. Botn Chemical Model: que corresponde al modelo de Tang y Othmer, 1994.
b. Botn Electrical Model: que corresponde al modelo de Fox y colaboradores,
2001.
c. Botn Electro Chemical Model: que corresponde al modelo propuesto (Roche et
al., 2004).

Figura 5.1 Interfase de Matlab
Buscador de
directorio
Ubicacin de
la carpeta
Directorio
actualizado
Ventana de comando
de Matlab
Escribir
MyocyteSimulator
Aplicaciones 172

Figura 5.2 Pantalla principal del simulador.

Al activar cada botn se abre una pantalla secundaria asociada a cada modelo desde la cual
se pueden obtener las simulaciones. Estas pantallas son:
Pantalla secundaria Tangmodel: diseada para ajustar los parmetros del
modelo de Tang y Othmer (1994) y obtener sus simulaciones.
Pantalla secundaria Foxmodel: diseada para ajustar los parmetros del
modelo de Fox y colaboradores (2001) y obtener sus simulaciones.
Pantalla secundaria Rochemodel: diseada para ajustar los parmetros del
modelo propuesto (Roche et al., 2004) y obtener sus simulaciones.
Las caractersticas de diseo de estas pantallas sern explicadas ms adelante.

3. Botones de seleccin para los modelos: cada modelo tiene asociado un botn selector.
Cuando se selecciona un modelo se cargan en la lista de Simulation Results los resultados
Men principal
View y Help
Botones activos
para el modelo
Botones de
seleccin
Listas de resultados
simulados y valores
reales
rea de Grfico
Aplicaciones 173
ya simulados (figura 5.3). Si inicialmente no se ha realizado ninguna simulacin un mensaje
de alerta indicar que no existen variables simuladas para cargar.

4. Listas: existen dos listas que permiten seleccionar las variables a graficar.
a. Lista Simulation Results: es una lista que muestra las variables resultantes de la
simulacin del modelo seleccionado.
b. Lista Experimental Results: permite cargar los datos reales que se desean
comparar con las simulaciones. Para realizar esta operacin se dispone de los
siguientes mens contextuales (figura 5.3):
Open: ubica y abre el archivo que contiene la variable deseada, ya sea en formato
Matlab (archivo.mat) o en formato Lotus (archivo.wk1).
Delete: borra la variable previamente seleccionada.

Las listas estn clasificadas de acuerdo a las coordenadas de los grficos a construir: abscisas
axes x y ordenadas axes y. Obviamente la variable tiempo (simulada o experimental)
aparece en la coordenada x y la variable concentracin del in calcio (simulada o
experimental) aparece en la coordenada y. El usuario selecciona simplemente con el cursor
cada variable y o x de simulacin o experimental a graficar.

5. Grfico: activando el botn Draw se obtiene el grfico de las variables seleccionadas en
las listas que permite la comparacin del comportamiento real con el simulado, tal como se
muestra en la figura 5.3. Cada regin de este grfico puede ser detallada (Zoom),
arrastrando el ratn con el botn izquierdo y presionado sobre el rea de inters. Cada
conjunto de pares de variables (x,y) debe tener el mismo tamao o igual nmero de datos
para poder ejecutar el comando Draw.

Aplicaciones 174

Figura 5.3 Pantalla principal del simulador: comandos para cargar los resultados simulados y
experimentales y para realizar grficos.

A continuacin se explican las funciones diseadas en las pantallas secundarias (ver figuras 5.4 a
5.6):

1. Modificacin de Parmetros: a cada modelo est asociado un conjunto de parmetros que
pueden ser modificados por el usuario.

En el modelo de Tang y Othmer (figura 5.4) los conjuntos listas de parmetros
corresponden a:
i. Subsistema de los canales de Rianodina: que es la lista denominada R-
Channels
ii. Subsistema de la bomba SERCA: lista SERCA pump.
iii. Subsistema de la bomba del Sarcolema: lista Sarcolemma pump.
iv. Subsistema de parmetros fsicos: lista Physical parameters .

Modelo
seleccionado
Resultados simulados generados al
seleccionar el modelo
Cargar Resultados
experimentales con el
men contextual
Open.
Comparacin grfica entre
data real y data simulada
Comando para
Graficar
Aplicaciones 175

Figura 5.4 Pantalla secundaria para el modelo de Tang y Othmer (1994).

En el modelo de Fox y colaboradores (figura 5.5) se tiene:
i. Subsistema de los canales L: lista ICa-LChannels.
ii. Subsistema de los canales de potasio: lista IK currents.
iii. Subsistema de los canales rpidos de sodio: lista INa currents.
iv. Subsistema de las bombas inicas: lista Ionic pump currents.

Seleccionar el parmetro a
modificar
Cambiar el valor del
parmetro a modificar
Listas de parmetros
Valor por
defecto
Aplicaciones 176

Figura 5.5 Pantalla secundaria para el modelo de Fox y colaboradores (2001).

En el modelo propuesto (figura 5.6) los conjuntos listas de parmetros
corresponden a:
i. Subsistema de los canales L: lista ICa currents.
ii. Subsistema de los canales de potasio: que es la lista denominada IK
currents.
iii. Subsistema de los canales rpidos de sodio: lista INa currents.
iv. Subsistema de las bombas inicas: lista Ionic puma currents.
v. Subsistema de los canales de Rianodina: lista R-Channels
vi. Subsistema de la bomba SERCA: lista SERCA pump.
vii. Subsistema de la bomba del Sarcolema: la lista Sarcolemma pump.
viii. Subsistema del intercambiador Na
+
-Ca
2+
: lista Na-Ca exchanger.
ix. Subsistema de las miofibrillas: lista Myofibrils.

Men File para abrir o guardar
listas de parmetros modificados
Conjuntos de
parmetros
para el modelo
de Fox.
Botn para restituir los
valores originales de los
parmetros del modelo
Aplicaciones 177
Tambin se aaden dos cajas editoras denominadas DifCa y Period (sec) (figura
5.6) que sirven para modificar el valor de la constante de difusividad del in calcio y
el valor del perodo del pulso inicial de voltaje (por defecto este valor es 1 s),
respectivamente.

Figura 5.6 Pantalla secundaria para el modelo propuesto (Roche y colaboradores, 2004).

La modificacin del conjunto de parmetros se realiza de la siguiente manera:

Conjunto de parmetros contenidos en una lista: en este caso, se selecciona el
parmetro de la lista que se desea modificar (la celda del parmetro pasar de color
blanco a azul) y luego se desplaza el cursor a la celda ubicada debajo de la lista de
parmetros y se edita el valor de la misma (que por defecto es 0) por el valor
deseado para el parmetro a modificar. Pulsando la tecla enter el nuevo valor
asignado se ver reflejado en la lista (figura 5.4).
Caja editora de
modificacin de
parmetro
Caja editora de
tiempo de
simulacin
Aplicaciones 178

Parmetro contenido en una caja editora: en este caso, se coloca el cursor en la caja
editora y se escribe el valor deseado (figura 5.6).

Para facilitar las pruebas que requieren ajuste y/o modificacin de parmetros, el usuario
puede usar adems el men File ubicado en la parte superior de cada pantalla secundaria
(figura 5.5). Este men despliega las opciones:
- Open: que permite abrir un archivo con extensin .mat que contiene un conjunto
de parmetros pre-establecidos por el usuario.
- Save: que graba el conjunto de parmetros modificados en el formato .mat.
- Exit: que cierra la pantalla secundaria del modelo que se est usando.

Por otra parte el botn Reset permite re-establecer los parmetros originales
correspondientes al modelo seleccionado.

2. Tiempo de Simulacin: la caja editora denominada time (sec) permite que el usuario
escoja el tiempo de simulacin, el cual debe ser un nmero real positivo siempre mayor a 0
s. Esto se hace escribiendo el valor deseado sobre la caja editora (figura 5.6).

3. Perturbacin: al escoger la opcin Perturbation es posible realizar perturbaciones o
modificaciones en el modelo. Este comando funciona de la siguiente manera (figura 5.7):

Inicialmente el botn activo denominado Set 1 (figura 5.7) permite almacenar el conjunto
de parmetros iniciales del modelo previamente establecido por el usuario (de acuerdo con
el procedimiento explicado para modificacin de parmetros). Inmediatamente el botn
activo cambiar a Set 2 y el usuario puede cargar un conjunto nuevo de parmetros
perturbados y/o modificados. De esta forma la primera mitad del tiempo de simulacin
se realiza con los parmetros iniciales (Set 1) y la segunda mitad del tiempo de simulacin
con los parmetros modificados (Set 2).

Aplicaciones 179

Figura 5.7 Ejecucin de los comandos Perturbation y Run.

4. Resultados de Simulacin: estos resultados se obtienen al presionar el botn Run.
Mientras el simulador est procesando datos, el botn Run cambiar de color gris a color
rojo y sealar la palabra Processing (figura 5.7). Cuando las simulaciones concluyen, el
botn Run volver a su estado original y en la caja de listas denominada Simulation
Results se asignarn las variables del modelo al eje coordenado x (axes x) o al eje
coordenado y (axe y) segn corresponda. Por ejemplo para el modelo propuesto, las
variables reportadas son: tiempo (timeRochemodel) y voltaje (VRochemodel) en el eje
x, y concentracin del in calcio en el citosol (CaiRochemodel), concentracin del in
calcio en el retculo sarcoplsmico (CaisrRochemodel), probabilidad de apertura de
canales de Rianodina (PopenRchannelsRochemodel), probabilidad de apertura de
canales L (PopenLchannelsRochemodel) y voltaje (VRochemodel) en el eje y. Con un
clic derecho del ratn sobre cualquier variable generada en la caja de listas Simulation
Results, se despliega el men contextual Save (figura 5.8) que permite grabar en formato
Perturbacin
Tiempo
simulado/2
Set 1 y Set 2
Corrida de la
simulacin
Aplicaciones 180
.mat o .wk1 (compatible con Excel y LOTUS) los resultados de simulacin de la variable
seleccionada.

5. Grfico: seleccionando con el clic izquierdo del ratn la variable en el eje x y las variables en
el eje y de la caja de listas SimulationResults y presionando a continuacin el botn Plot
se genera el grfico en la pantalla secundaria (figura 5.8). Si se selecciona el recuadro
denominado Only Figure y se vuelve a presionar el botn Plot el grfico aparecer en
una nueva pantalla (figura 5.9) que permite usar las propiedades de edicin de grficos de
Matlab. Por ejemplo, insertar ttulos en los ejes coordenados, copiar los grficos como
imgenes en otros programas (Word, Paint). En cualquiera de las dos opciones se puede
detallar la figura seleccionando un rea de la misma con el botn izquierdo del ratn. Para
volver al tamao original del grfico se debe realizar un doble clic izquierdo.

Figura 5.8 Ejecucin de los comandos Run y Save.

Seleccin
de las
variables
a graficar
Grabar
resultados de
simulacin
Botn para
graficar
Aplicaciones 181

Figura 5.9 Pantalla adicional de slo grfico (opcin Only Figure).

5.3 EFECTOS DE DROGAS.

Las nuevas estrategias para el diseo de tratamientos de las enfermedades cardiacas involucran el
uso de modelos matemticos para cuantificar cmo y en qu medida las drogas actan sobre el
miocito. Los modelos matemticos aportan informacin valiosa sobre los mecanismos mediante los
cuales se obtiene un comportamiento anormal del proceso de excitacin-contraccin y relajacin
(estudio de sensibilidad-seccin 4.5). Todo esto justifica cada vez ms el uso de los simuladores o
clulas virtuales en el rea farmacutica (Khol et al., 2003).

Entre la gran variedad de drogas empleadas para tratar cardiopatas, en esta seccin se estudian por
separado los efectos sobre el comportamiento del miocito de cuatro drogas especficas: Cafena,
Forskolin, Rojo de Rutenio y Tapsigargin. Estas substancias son frecuentemente usadas en la
farmacologa cardiaca, y lo que es ms importante, se dispone de amplia informacin en la literatura
sobre sus efectos medidos experimentalmente sobre clulas cardiacas de animales de laboratorio.
Esto permite dirigir convenientemente el proceso de validacin, corroborar los resultados ya
Propiedades del editor de
grficos de Matlab
Aplicaciones 182
establecidos por otros autores, y finalmente probar la validez del modelo propuesto y ensayar sus
alcances.

Para el estudio de los efectos de las drogas mencionadas se realiza el siguiente procedimiento:

Obtencin de datos reales: se dispone de datos experimentales reales
1
de la concentracin
del in calcio en el citosol medidos para miocito de pollo con o sin la inyeccin de la droga
correspondiente. Para medir esta variable se utiliza el protocolo experimental ya explicado
en la seccin 4.4.1. El proceso de inyeccin de la droga y toma de datos se lleva a cabo de la
siguiente manera:
1. Se mide la concentracin del in calcio en el citosol para el miocito de pollo en
condiciones normales (ausencia de droga) durante un perodo de 40 min. Los datos
obtenidos durante esta primera parte se denominan datos de control.
2. En el minuto nmero 41 se inyecta con una micro-pipeta en el citosol la droga bajo
estudio en la concentracin deseada (10 mM para la Cafena, y 1 M para el Forskolin, el
Rojo de Rutenio y el Tapsigargin). La inyeccin ocurre durante un perodo de tiempo
muy corto (100 ms).
3. Se contina midiendo la concentracin del in calcio en el citosol durante el perodo de
tiempo necesario para detectar los cambios que ocurren en esta variable debido a la
inyeccin de la droga. Los datos obtenidos durante esta etapa se denominan datos bajo
efecto de droga.

En el apndice F se muestran las tablas de datos experimentales de la concentracin de in
calcio en el citosol correspondientes a la inyeccin de cada substancia estudiada.

Validaciones: se logran realizando ajustes en los parmetros del modelo hasta reproducir los
efectos de una droga en particular (Cafena, Forskolin, Rojo de Rutenio, Tapsigargin) sobre
la dinmica del in calcio. Aunque el ajuste se realiza por prueba y error, se basa en
conocimiento fenomenolgico proveniente de:
1. Fuentes bibliogrficas: se seleccionan los trabajos experimentales ms importantes
realizados por otros autores sobre los efectos de las drogas estudiadas.

1
Campaas de medidas realizadas en el instituto INSERM de Pars-Francia.
Aplicaciones 183
2. Estudio de sensibilidad: la informacin obtenida en el estudio de sensibilidad realizado
en la seccin 4.5 se utiliza para seleccionar especficamente los parmetros que deben ser
ajustados a fin de reproducir el comportamiento anormal de la clula bajo el efecto de la
droga.

El ajuste o modificacin de parmetros se realiza con ayuda del simulador
MyocyteSimulator ejecutando los comandos: Perturbation, Set1 y Set2; tal como se
indica en la seccin 5.2.2. Para obtener los resultados simulados se evala el modelo ajustado
a miocito de pollo en condiciones normales (seccin 4.4.2) durante 40 minutos y en el
minuto nmero 41 se modifican los parmetros necesarios para reproducir el efecto de la
droga en estudio. Las simulaciones continan hasta el minuto 80, tiempo suficiente para
observar las alteraciones en el comportamiento del miocito. Este procedimiento emula el
protocolo experimental utilizado en la obtencin de los datos reales.

Los criterios de validacin se basan en la comparacin de los resultados simulados con los
resultados experimentales en cuanto a las variables:
-
calcio
t : duracin del ciclo de
+ 2
i
Ca (en s) y
-
calcio
: gradiente de
+ 2
i
Ca (en M)
Se consideran validaciones satisfactorias cuando las comparaciones arrojan desviaciones
porcentuales (
%
) menores al 15%. Las comparaciones grficas pueden realizarse en la
pantalla principal de MiocyteSimulator siguiendo las indicaciones mostradas en la seccin
5.2.2.

5.3.1 Efectos de la inyeccin de Cafena 10 mM

Es bien conocido que la Cafena tiene alta afinidad con los canales de Rianodina presentes en el
retculo sarcoplsmico induciendo la activacin de estos canales, lo que incrementa la frecuencia y
duracin de su apertura (Duke y Steele, 1998). Smith y Steel (1998) tambin reportan que la
inyeccin de cafena en el miocito de rata provoca la disminucin de la concentracin de in calcio
en el retculo sarcoplsmico en un nivel suficiente como para estimular la actividad de la bomba
SERCA, mediante mecanismos qumicos desconocidos. Bassani y colaboradores (1992), al inyectar
Aplicaciones 184
Cafena en una concentracin de 10mM en miocitos de conejo, observan adems que el transporte
del in calcio debido a la actividad de bomba SERCA es 3-4 veces ms rpido que el transporte
debido al intercambiador Na
+
-Ca
2+
.
Por otra parte, la revisin de los datos experimentales disponibles, obtenidos en campaas de
medidas realizadas en INSERM (ver apndice F), muestra que la inyeccin de Cafena en una
concentracin de 10 mM en miocitos de pollo produce como efecto una ligera disminucin en el
valor de
calcio
= 0,9 M (
calcio
=1 M para el miocito en condiciones normales Tabla 4.4).

Conjugando la informacin obtenida de la revisin bibliogrfica y de los datos experimentales reales,
con el conocimiento fenomenolgico derivado del estudio de sensibilidad del modelo, se proponen
los siguientes ajustes de parmetros:
i. La constante de reaccin cintica
1
l se aumenta de 15 M
-1
s
-1
(valor en comportamiento
normal) a 22,5 M
-1
s
-1
para incrementar la probabilidad de apertura de los canales de
Rianodina (Duke y Steele, 1998). Del estudio de sensibilidad (seccin 4.5.1) se deriva que
este cambio produce en efecto la disminucin del valor de
calcio
(observada en los datos
reales).
ii. La velocidad mxima de transporte de la bomba SERCA,
1
p , debe estimularse y la
velocidad mxima de transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+
, K , debe inhibirse de
acuerdo con los resultados de Bassani y colaboradores (1992). El proceso de ajuste
produce finalmente
1
p =19,72 Ms
-1
y K =13,36 Ms
-1
.

En las figuras 5.10 y 5.11 se muestran las comparaciones grficas entre los datos experimentales y las
simulaciones del modelo ajustado para la variable
+ 2
i
Ca . En las figuras 5.12 a 5.14 se observan los
efectos de la inyeccin de Cafena sobre otras variables estimadas por el modelo: flujo qumico de la
bomba SERCA (
SERCA
Q F
) y flujo qumico del intercambiador Na

+
-Ca
2+
(
Ca ENa
Q F

), probabilidad
de apertura de los canales de Rianodina (
2
x ),y voltaje (V
), respectivamente.

El ajuste paramtrico realizado en el modelo logra reproducir los efectos de la inyeccin de Cafena
en la dinmica de calcio, tal y como lo muestran las figuras 5.10 y 5.11. Las curvas de validacin
Aplicaciones 185
siguen la tendencia esperada (disminucin del valor de
calcio
), con valores de error porcentual para
las variables
calcio
t ,
calcio
menores al 12% (ver tabla 5.1).

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
-0.2
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Simulacion del modelo propuesto
Datos experimentales sin inyeccion de droga
Inyeccion de Cafeina 10 mM

+ 2
i
Ca con
inyeccin de Cafena 10mM.
57 58 59 60 61 62 63 64
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
1.1
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o
(
1
e
-
6
M
)
Simulacin del modelo propuesto
Inyeccin de Cafeina 10mM. Efectos despues de 40 min.

Figura 5.11 Detalle de la validacin de la dinmica
de
+ 2
i
Ca con inyeccin de Cafena 10mM.
30 35 40 45 50 55
20
40
60
80
100
120
tiempo (s)
F
l
u
j
o

m
o
l
a
r

(
1
e
-
6
m
o
l
/
s
)
Flujo molar del intercambiador Na+-Ca2+
Flujo molar de la bomba SERCA
Inyeccin de Cafena 10mM

SERCA
FQ
y de
Ca ENa
FQ

30 35 40 45 50 55
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
tiempo (s)
P
r
o
b
a
b
i
l
i
d
a
d

d
e

c
a
n
a
l
e
s

d
e

R
i
a
n
o
d
i
n
a

a
b
i
e
r
t
o
s

2
x con
inyeccin de Cafena 10mM.
Aplicaciones 186
30 35 40 45 50 55
-100
-50
0
50
100
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)

Figura 5.14 Simulacin de la dinmica de V con inyeccin de Cafena 10mM.

Adems el modelo reproduce los resultados observados por Basani y colaboradores (1992), donde
la inyeccin de cafena induce mayor velocidad de transporte del in calcio en la bomba SERCA que
en el intercambiador Na
+
-Ca
2+
(figura 5.12). Tambin se observa (figura 5.13) el aumento desde el
rango 0,1 a 0,5 hasta el rango de 0,2 a 0,55 en la probabilidad de apertura de los canales de
Rianodina estimada por el modelo (variable
2
x ), reportado por Duke y Steele (1998).

Aunque no se tienen datos reales para la dinmica de V , en la figura 5.14 se muestran para futuras
referencias los resultados de la simulacin de esta variable ante la inyeccin de la Cafena. Estas
simulaciones coinciden con el estudio de sensibilidad realizado para la corriente de potasio
1 K
I
(especficamente estmulo del parmetro 1 K G -seccin 4.5.2) por lo que probablemente la inyeccin
de cafena tambin puede afectar el comportamiento de los canales de potasio.

El trabajo pionero de Rocaries
2
y colaboradores (2004) usa un modelo celular basado en los trabajos
de Tang y Othmer (1994) para probar en simulacin los efectos de ciertas drogas. All se reporta la
necesidad de modificaciones estructurales en las ecuaciones del modelo correspondientes a los
canales de Rianodina para poder reproducir los efectos de la Cafena. Esto se debe, a que en este
modelo, las descripciones de la dinmica qumica y elctrica no estn completas (captulo 2).

2
Tambin realizado en el marco de este proyecto.
Aplicaciones 187
El modelo propuesto aqu reproduce con facilidad el efecto de la inyeccin de Cafena sobre la
dinmica de
+ 2
i
Ca con solo realizar el ajuste de un conjunto de parmetros. Adems, ms
importante que el ajuste propiamente dicho, es la identificacin de parmetros que se han de
modificar, ya que sta permite discernir claramente cules son los elementos celulares afectados por
la droga. Este aspecto, es de gran utilidad en la investigacin farmacutica pues ayuda a comprobar
hiptesis sobre los efectos de ciertas substancias en los diversos componentes del miocito. En este
caso se comprueba que los canales de Rianodina, la bomba SERCA y el intercambiador Na
+
-Ca
2+

son los elementos celulares ms afectados por la inyeccin de Cafena.

5.3.2 Efectos de la inyeccin de Forskolin 1 M

El Forskolin es conocido por inducir en el corazn el incremento de la concentracin de la protena
denominada monofosfato de adenosina (cAMP), que es un componente regulador del ciclo de ATP.
Se ha comprobado experimentalmente que este incremento eleva la fuerza de contraccin, que se
traduce, en trminos de las variables del modelo, en un aumento del valor de
+
2
i
Ca , por lo que se
sugiere esta droga para el tratamiento de la insuficiencia cardiaca (Zhang y Wong, 1998).

Otros resultados experimentales (Tominaga et al.,1995) reflejan que la inyeccin de Forskolin 1M
en clulas de cerdo reduce significativamente la duracin del ciclo de potencial de membrana
voltaje
t :
desde 250 ms (ciclo sin droga) a 201 ms (ciclo con droga).

Las observaciones experimentales disponibles sobre el comportamiento de las clulas de pollo ante
Forskolin 1M (apndice F) muestran, despus de 30 horas de la inyeccin, fuertes inestabilidades
en la dinmica de
+ 2
i
Ca , donde los ciclos no se relajan completamente.

Retomando del estudio de sensibilidad del modelo los casos que producen inestabilidades en los
ciclos de
+ 2
i
Ca y disminuciones de
voltaje
t , se logran identificar los siguientes parmetros a ajustar en
el modelo:
Aplicaciones 188
i. La velocidad mxima de transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+
: K . La inhibicin de este
parmetro (seccin 4.5.1) produce inestabilidades tanto en la dinmica de
+ 2
i
Ca como de
V . El mejor ajuste se obtiene con K =36,072 Ms
-1
.
ii. La mxima corriente generada por la bomba Na
+
-K
+
:
max NaK
I . Las aceleraciones en la
duracin de
voltaje
t producto de la inyeccin de Forskolin se reproducen en el modelo
cuando
max NaK
I =0,4851A F
-1
.

En las figuras 5.15 y 5.16 se muestran grficas de la concentracin de
+ 2
i
Ca correspondientes a los
datos experimentales y a las simulaciones. Ntese que en la figura 5.15 en el minuto 40 ocurre la
inyeccin de la droga y en las simulaciones se pasa del modelo de base al modelo reajustado para
esta situacin. Sin embargo, los datos reales graficados despus del minuto 40 corresponden a los
observados 30 horas despus. En la figura 5.17 se observan los efectos de la inyeccin de Forskolin
en la simulacin de la variable voltaje (V
).
0 10 20 30 40 50 60 70 80
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Inyeccion de Forskolin (1e-6M) despues de 30 h.

+ 2
i
Ca con
inyeccin de Forskolin 1M.
40 42 44 46 48 50 52
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Inyeccin de Forskolin (1e-6M). Efectos despues de 30 h.

de
+ 2
i
Ca con inyeccin de Forskolin 1M.
Aplicaciones 189
30 35 40 45 50 55 60 65
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
acelera, duraciones
irregulares
Inyeccin de Forskolin 1 e-6M

Figura 5.17 Simulacin de la dinmica de V con inyeccin de Forskolin 1M.

A pesar de los fuertes cambios observados experimentalmente producidos por la inyeccin de en la
dinmica de
+ 2
i
Ca de Forskolin, se logra identificar dos simples ajustes paramtricos que permiten al
modelo emular el comportamiento real con bastante precisin en cuanto a la forma y a la duracin
de los ciclos de calcio (ver tabla 5.1). Modelos previos sometidos a esta prueba fallan de nuevo
porque no toman en cuenta la dinmica elctrica (Rocaries et al., 2004).

Los resultados de simulacin para la dinmica del potencial de membrana, muestran que
efectivamente la inyeccin de Forskolin 1M, tambin acelera la duracin de
voltaje
t para el miocito
de pollo: de 350 ms para el ciclo sin droga (tabla 4.3) a 190 ms para el ciclo con droga.
En resumen, se encuentra que el Forskolin afecta el funcionamiento del intercambiador Na
+
-Ca
2+
y
de la bomba Na
+
-K
+
del sarcolema. Adems se hace evidente lo esencial de representar
matemticamente el potencial de membrana en el modelo y su interrelacin con la dinmica del in
calcio, pues drogas como el Forskolin influyen sobre ambas variables.

Finalmente, el ajuste del modelo a la perturbacin con Forskolin deber incluir al tiempo muerto
(retardo) de 30 horas que tardan en aparecer las alteraciones de los ciclos de calcio despus de la
inyeccin. Evidentemente hay una fenomenologa que no est representada en el modelo, que
Aplicaciones 190
corresponde probablemente al elemento celular denominado mitocondria (Zhang y Wong, 1998).,
que podra incluirse en el futuro.

5.3.3 Efectos de la inyeccin de Rojo de Rutenio 1 M

El Rojo de Rutenio es un inhibidor de los canales de Rianodina. Lukyanenko y colaboradores
(2000), inyectan esta droga en concentraciones de 0,1 M, de 1 M. y de 5 M en miocitos de rata, y
observan que la probabilidad de apertura de los canales de Rianodina se reduce de 20% a 50% y la
concentracin de calcio en el retculo sarcoplsmico aumenta de 151 M a 312 M. Tambin se
conoce que esta substancia disminuye la corriente de calcio generada por la actividad de los canales
L (Sanchez et al., 2001).

Los datos experimentales para la dinmica de calcio en los miocitos de pollo (apndice F) muestran
que la inyeccin de Rojo de Rutenio 1 M, produce una reduccin significativa del valor de
calcio

(~70%) despus de 140 minutos de su aplicacin y un valor de la concentracin del in calcio en
estado de reposo muy por encima (0,75 M) de su valor equivalente (0,1 M) cuando no existe
inyeccin de droga.

Los parmetros del modelo que deben ser ajustados son:

i. La constante de reaccin cintica
1
l : se inhibe este parmetro, para reducir la
probabilidad de apertura de los canales de Rianodina. El proceso de ajuste concluye con
1
l = 10,5 M
-1
s
-1
.
ii. La mxima velocidad de transporte de la bomba SERCA,
1
p : para incrementar la
concentracin de in calcio en el retculo sarcoplsmico, este parmetro debe estimularse.
El proceso de validacin se realiza con
1
p =30,38 M
-1
s
-1
.
iii. La permeabilidad de los canales L a los iones calcio, Ca P : la inhibicin de este parmetro
disminuye la corriente
Ca
I . El proceso de ajuste es satisfactorio para Ca P =0,00000226
cm ms
-1
.
Aplicaciones 191
iv. La mxima velocidad de transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+
,

K : de acuerdo con el
estudio de sensibilidad (seccin 4.5.1) los cambios en el valor de la concentracin del in
calcio en estado de reposo se logran cuando el parmetro K se inhibe. El proceso de
ajuste se obtiene con K = 4,81 M
-1
s
-1
.

+ 2
i
Ca . En las figuras 5.20, 5.21, 5.22 y 5.23 se
observan los efectos de la inyeccin de Rojo de Rutenio sobre otras variables estimadas por el
modelo:
2
x ,
+ 2
SR
Ca ,
Ca
I y V , respectivamente.

0 20 40 60 80 100 120
-0.2
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Inyeccion de Rojo de Rutenio (1e-6M) despues de 140 min

+ 2
i
Ca con
inyeccin de Rojo de Rutenio 1M.
79 80 81 82 83 84 85 86
0.7
0.75
0.8
0.85
0.9
0.95
1
1.05
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Inyeccin de Rojo de Rutenio (1e-6M). Efectos despues de 140 min.

+ 2
i
Ca

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0.4
0.45
0.5
0.55
tiempo (s)
P
r
o
b
a
b
i
l
i
d
a
d

d
e

a
p
e
r
t
u
r
a

d
e

l
o
s

c
a
n
a
l
e
s

d
e

R
i
a
n
o
d
i
n
a
Inyeccin de Rojo de Rutenio
1e-6M

2
x con
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
100
150
200
250
300
350
400
450
500
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n

d
e

i
n

c
a
l
c
i
o

e
n

e
l

r
e
t
c
u
l
o

s
a
r
c
o
p
l
s
m
i
c
o

(
1
e
-
6
M
)
Inyeccin de Rojo de Rutenio 1e-6M

+ 2
SR
Ca con
Aplicaciones 192

30 35 40 45 50 55 60 65
-1.8
-1.6
-1.4
-1.2
-1
-0.8
-0.6
-0.4
-0.2
tiempo (s)
C
o
r
r
i
e
n
t
e

d
e

c
a
l
c
i
o

I
C
a

(
1
e
-
6

A
/
F
)

Disminucin de la corriente ICa

Inyeccin de Rojo de Rutenio 1e-6 M

Ca
I con
30 35 40 45 50 55
-100
-50
0
50
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
Inyeccin de rojo de Rutenio 1e-6M
acelera

Figura 5.23 Simulacin de la dinmica de V con

El proceso de validacin del modelo para la dinmica de
+ 2
i
Ca es satisfactorio (figuras 5.18 y 5.19),
obtenindose los efectos de reduccin drstica del valor de
calcio
y cambio en el valor de la
concentracin de
+ 2
i
Ca en estado de reposo (0,73 M) inducidos por la inyeccin de la droga. Los
valores del error porcentual para las variables
calcio
t y
calcio
son menores a 10% (Tabla 5.1).
Tambin Rocaries y colaboradores (2004), obtienen resultados satisfactorios en la validacin de los
efectos producidos por el Rojo de Rutenio en la dinmica de
+ 2
i
Ca , pero solo luego de la
modificacin de la ecuacin matemtica que representa la probabilidad de apertura de los canales de
Rianodina.

Las figuras 5.20 y 5.21 muestran resultados acordes a los reportados por Lukyanenko y
colaboradores (2000): disminucin de la variable
2
x y aumento de la variable
+ 2
SR
Ca ,
respectivamente.

La disminucin de la corriente
Ca
I reportada por Snchez y colaboradores (2001) se reproduce en
la figura 5.22. Esta disminucin contribuye a acelerar el ritmo de los ciclos de voltaje (figura 5.23).
Evidentemente existe menor cantidad de iones calcio que transportar, con lo que la repolarizacin
del potencial de membrana es ms rpida.
Aplicaciones 193

Ntese entonces que la inyeccin de Rojo de Rutenio no slo influye sobre la actividad de los
canales de Rianodina y de la bomba SERCA, sino que induce fuertes cambios en la dinmica
elctrica del miocito, produciendo una aceleracin del ciclo de voltaje (taquicardias). Sera muy
deseable comprobar experimentalmente esta ltima hiptesis en futuros trabajos.

Finalmente, las simulaciones no reproducen el retardo de 140 minutos que se observa
experimentalmente en la aparicin de los efectos de esta droga sobre la dinmica qumica del
miocito. Esto se debe a que el Rojo de Rutenio tambin afecta la actividad de las mitocondrias
(Snchez et al., 2001) y como se ha dicho, el modelo no representa este elemento celular.

5.3.4 Efectos de la inyeccin de Tapsigargin 1 M

El Tapsigargin es un inhibidor selectivo de la bomba SERCA (Kirby et al., 1992). La inyeccin de
Tapsigargin 0,4 M en miocitos de conejo induce la disminucin de la velocidad de la bomba
SERCA en un 39% lo que causa la disminucin de la concentracin de calcio en el retculo
sarcoplsmico en un 20% (Ginsburg et al., 1998).

Por otra parte, Wu y colaboradores (2001) encuentran que la inyeccin de Tapsigargin tambin
inhibe los canales de Rianodina.

En otros trabajos, (Vigne et al., 1992) se reporta que el uso de esta droga en miocitos de rata
perturba la concentracin de in calcio en el citosol, de manera que despus de cierto tiempo, en
los ciclos de
+ 2
i
Ca se alternan valores muy altos y muy bajos de la variable
calcio
. Estos efectos de
la inyeccin de Tapsigargin tambin se observan con un retardo de hasta 700 minutos en los
resultados experimentales obtenidos en este trabajo para miocito de pollo (ver apndice F). Para
explicar este retardo los trabajos de Gaughan y colaboradores (1999) concluyen que cuando la
actividad de la bomba SERCA se inhibe drsticamente, el intercambiador Na
+
-Ca
2+
reemplaza a este
elemento celular. Estos autores sugieren que para llevar a cabo esta funcin adicional, el
intercambiador Na
+
-Ca
2+
trabaja bajo otros esquemas de reaccin qumica. No obstante, esto no es
suficiente y se producen finalmente inestabilidades en la dinmica de
+ 2
i
Ca .
Aplicaciones 194

Al analizar toda la informacin anterior y a la luz de los estudios de sensibilidad del modelo, se
desprende la necesidad de modificar los siguientes parmetros para simular todos los efectos del
Tapsigargin:
i. La constante de reaccin cintica,
1
l , que debe inhibirse (con base en los resultados de
Wu et al., 2001). El proceso de ajuste se logra con
1
l = 7,05 M
-1
s
-1
.
ii. La velocidad mxima de transporte de la bomba SERCA,
1
p , tambin se inhibe para
reproducir la disminucin de la concentracin del in calcio en el retculo sarcoplsmico
(observada por Ginsburg et al., 1998). El proceso de ajuste se logra con
1
p = 3,1140 M
-
1
s
-1
.
iii. La velocidad mxima de transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+
, K . La inhibicin de este
parmetro (estudio de sensibilidad, seccin 4.5.2) contribuye a reproducir las
inestabilidades del ciclo de
+ 2
i
Ca observadas en los datos experimentales. El proceso de
ajuste produce finalmente K = 30,06 Ms
-1
.
iv. El factor de ajuste,
NaCa
k , asociado a la corriente inica
NaCa
I (corriente generada por la
actividad elctrica del intercambiador Na
+
-Ca
2+
). Del estudio de sensibilidad (seccin
4.5.2) se tiene que el estmulo de este parmetro tambin reproduce las inestabilidades del
ciclo de
+ 2
i
Ca provocadas por la inyeccin de Tapsigargin. El proceso de validacin se
logra cuando
NaCa
k se estimula en un 100%.
v. La conductancia Cab G de la fraccin de los canales L que generan la corriente
Cab
I . El
estmulo de este parmetro reproduce los efectos inducidos por la inyeccin de
Tapsigargin en la dinmica de
+ 2
i
Ca . El proceso de ajuste es satisfactorio para el estmulo
de Cab G en un 30%.

+ 2
i
Ca . En las figuras 5.26, 5.27, 5.28 y 5.29 se
observan los efectos de la inyeccin de Tapsigargin 1M sobre otras variables estimadas por el
modelo:
2
x ,
+ 2
SR
Ca ,
SERCA
FQ y V , respectivamente.

Aplicaciones 195

10 20 30 40 50 60 70 80
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Inyeccion de Tapsigargin (1e-6M) despues de 700 min

+ 2
i
Ca con
inyeccin de Tapsigargin 1M.
64 66 68 70 72 74 76 78 80
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

d
e
l

i
o
n

c
a
l
c
i
o

(
1
e
-
6
M
)
Inyeccion de Tapsigargin (1e-6M) despues de 700 min

de
+ 2
i
Ca con inyeccin de Tapsigargin 1M.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0.4
0.45
0.5
0.55
tiempo (s)
P
r
o
b
a
b
i
l
i
d
a
d

d
e

a
p
e
r
t
u
r
a

d
e

l
o
s

c
a
n
a
l
e
s

d
e

R
i
a
n
o
d
i
n
a
Inyeccin de Tapsigargin 1e-6M

2
x con
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
tiempo (s)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n

d
e

c
a
l
c
i
o

e
n

e
l

r
e
t
c
u
l
o

s
a
r
c
o
p
l
s
m
i
c
o

(
1
e
-
6
M
)

+ 2
SR
Ca con
la inyeccin de Tapsigargin 1M.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
0
2
4
6
8
10
12
tiempo (s)
F
l
u
j
o

m
o
l
a
r

(
1
e
-
6

m
o
l
/
s
)
Disminucin de la velocidad de
la bomba SERCA

SERCA
FQ
20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
-80
-60
-40
-20
0
20
40
tiempo (s)
V
o
l
t
a
j
e

(
m
V
)
acelera
Inyeccin de Thapsigargin 1e-6M

Figura 5.29 Simulacin de la dinmica de V con la

Aplicaciones 196
El ajuste paramtrico realizado en el modelo logra reproducir los efectos de la inyeccin de
Tapsigargin en la dinmica de
+ 2
i
Ca : valores altos y bajos para el
calcio
alternativamente (figuras
5.24 y 5.25). Los valores de error porcentual para las variables
calcio
t ,
calcio
son menores al 15%
(Tabla 5.1).

En el trabajo previo de Rocaries y colaboradores (2004) se trabaja en la modificacin de la expresin
matemtica que describe la actividad de la bomba SERCA para lograr reproducir los efectos de la
inyeccin de Tapsigargin en la dinmica de
+ 2
i
Ca .

Por otro lado, el modelo propuesto tambin reproduce los efectos de la inyeccin de Tapsigargin
sobre las variables:

2
x : la disminucin de esta variable se observa en la figura 5.26.

+ 2
SR
Ca : esta variable se reduce en un 50% (figura 5.27)

SERCA
FQ : el transporte de los iones calcio debido a la actividad de la bomba SERCA
disminuye (figura 5.28).

Adems, las simulaciones muestran que la inyeccin de Tapsigargin tambin afecta la actividad
elctrica del miocito, acelerando los ciclos de V (figura 5.29). En futuros trabajos ser necesario
comprobar estos resultados con datos experimentales reales.

Por ltimo, las simulaciones reflejan los efectos de esta droga instantneamente, fallando por lo
tanto en el retardo de aproximadamente 700 minutos observado experimentalmente. Esto puede
indicar la necesidad de incluir en el modelo el mecanismo cintico alternativo sugerido para describir
la actividad de reemplazo realizada por el intercambiador Na
+
-Ca
2+
(Gaughan et al., 1999) y/o
tambin de aadir el modelado de la actividad de las mitocondrias (Snchez et al., 2001).

Tabla 5.1 Validacin del modelo para diferentes tipos de drogas: Cafena, Forskolin,
Rojo de Rutenio, Tapsigargin.
Aplicaciones 197
Cafena
10 mM
Forskolin
1 M
Rojo de Rutenio
1 M
Tapsigargin
1 M

Valor
%

Valor
%

Valor
%

Valor
%

calcio
t
2 s 3,8 s 1,8 s 2,1 s
calcio
t

1,9 s

5 %
4 s

5,26 %
1,9 s

5,56 %
1,8 s

14,29 %
voltaje
t

- - - -
voltaje
t

0,5 s

-
0,2 s

-
0,15 s

-
0,2 s

-
calcio

0,85 M 0,97 M 0,25 M 0,75 M
calcio

0,95 M

11,76 %
1,22 M

20,49 %
0,275 M

10 %
0,8 M

6,67 %

5.4 EXTENSIONES DEL SIMULADOR.

Se discuten a continuacin dos ideas para extender el simulador desarrollado en este captulo, y
mejorar sus posibilidades de ayuda en la investigacin del comportamiento celular. Se trata en
primer lugar de una alternativa para realizar en lnea el ajuste de los parmetros del modelo para
adaptarlo a datos reales de situaciones especficas. El usuario en este caso no realiza el proceso de
ajuste por prueba y error sino que, para un cierto conjunto de datos reales (experimentales), indica
al sistema solamente los rangos de prueba para los coeficientes a ajustar.

En segundo lugar se exponen ideas para disear sistemas de inferencia que integren y permitan
inclusive re-adaptar los conocimientos expertos adquiridos sobre el comportamiento celular en
distintas situaciones. Se busca en este caso que el mismo sistema pueda predecir cules parmetros
Aplicaciones 198
del modelo deben ser modificados y en qu rangos cuando, el usuario proporciona simplemente
observaciones cualitativas del comportamiento de clulas reales.

5.4.1 Ayuda para el ajuste de parmetros: Identificacin.

Cuando se quiere ajustar un modelo matemtico a datos reales existen numerosos y bien probados
algoritmos de optimizacin, basados en la minimizacin de algn criterio del error de ajuste, que
se designan generalmente como algoritmos de identificacin (Ljung, 1999). Sin embargo los
mejores y ms conocidos mtodos de identificacin estn circunscritos al ajuste de coeficientes
sobre una estructura matemtica lineal que da lugar a la obtencin de los tpicos modelos auto-
regresivos entrada-salida (Eykhoff, 1974; Goodwin y Payne, 1977). El ajuste de parmetros
tambin se puede realizar cuando se requieren modelos no lineales en situaciones ms complejas,
adoptando estructuras tpicas como redes neuronales por ejemplo (Levin, 1992; Narendra y
Parthasarathy, 1990), en donde tambin se dispone de bien conocidos algoritmos de aprendizaje
para la obtencin de los coeficientes ptimos del modelo.

Es evidente que los mtodos clsicos de identificacin no son fcilmente aplicables a modelos
basados en conocimientos, y menos an a la compleja estructura fenomenolgica del modelo de la
clula cardiaca. Sin embargo, como se sabe, este modelo contiene elementos cuyo
comportamiento no se conoce con exactitud y que estn asociados a parmetros muy bien
localizados que han de ser identificados para ajustar el modelo, porque representan
caractersticas de fenmenos no modelados o muy simplificados.

En estos casos resulta mucho ms conveniente el uso de mtodos estocsticos, como por ejemplo
los Algoritmos Genticos, para la optimizacin de los parmetros del modelo.

Los algoritmos genticos son mtodos estocsticos de optimizacin, basados en el mecanismo de
seleccin natural. El algoritmo gentico se inicia generando una poblacin de posibles soluciones
al azar, las cuales se representan codificadas en lo que constituye un cromosoma. Luego se
utilizan operadores genticos para crear una nueva generacin a partir de la poblacin existente.
Los individuos son seleccionados para generar la nueva poblacin de acuerdo a una medida de su
Aplicaciones 199
calidad o desempeo (fitness). Al favorecer la reproduccin de los individuos con mejor
desempeo, la bsqueda se dirige en la direccin ms prometedora. sta concluye cuando se
alcanza un nmero mximo de generaciones o cuando pasa cierto nmero de generaciones sin
que la poblacin mejore (Goldberg, 1989; Michalewicz, 1996; Houck et al., 1995).

Una propuesta inicial para la aplicacin de un algoritmo gentico a la identificacin paramtrica
del modelo consiste en lo siguiente:
1. Se representa cada solucin potencial del problema de optimizacin en un vector
(cromosoma) que contiene las variables (genes) codificadas como nmeros reales
normalizados, asociadas a los diferentes parmetros a ajustar en el modelo. Por
ejemplo:
[
max NaK
I ,
1
p , K ,
+ ++ + 2
Ca
D , a ,
1
q ]
Los rangos de valores posibles de cada parmetro se tratan como restricciones.

2. Se genera aleatoriamente una poblacin inicial con cierto nmero de individuos
(cromosomas particulares, con valores factibles de los parmetros).

3. Se determina el ndice de calidad de cada individuo (cada solucin) de la poblacin,
denominado funcin de desempeo (fitness), basado en el error de ajuste. Para ello:
Se resuelve el modelo para cada conjunto de parmetros (para cada
individuo).
Los resultados de la simulacin del modelo se comparan con los datos
reales calculando el error cuadrtico medio de la prediccin :
( )
(
(
=

=
=
p
N i
i
i i
p
y y
N
0
2
1
(5.1)
donde:
i
y y
i
y : valor real y estimado de la i-sima muestra de la variable de salida.
p
N : nmero de pares de datos ) , (
i i
y y contenidos en la simulacin.
El individuo que produce el menor error presenta mejor funcin de
adaptacin o desempeo
d
f . Entonces se define
d
f :
Aplicaciones 200
1
=
d
f , (5.2)
y se asigna un valor lmite por ejemplo, 1000000 =
d
f si 0 =
Si algn parmetro en alguna de las soluciones no cumple con las
restricciones se dice que el individuo no es factible, y su funcin de
desempeo es penalizada asignndole un valor mnimo y/o alguna funcin
del error cometido sobre las restricciones (Deb, 1998).

4. Se seleccionan los mejores individuos, aquellos que presenten mayor
d
f , para
producir una nueva poblacin (reproduccin).

5. Con los individuos seleccionados se genera una nueva poblacin usando operadores
de cruce (se combinan de alguna manera los genes padres) y de mutacin (se
cambian aleatoriamente los valores de algn gen).

6. Se repiten los pasos 3, 4 y 5. Normalmente el proceso concluye despus de un cierto
nmero de generaciones y se toma como ptimo el elemento con mejor desempeo
en la ltima poblacin.

La implantacin exitosa del algoritmo planteado, requiere entonces de la definicin de:
Tamao de la poblacin (nmero de individuos).
Diseo de los operadores de seleccin, de cruce y mutacin (Goldberg,
1989; Michalewicz, 1996).
Tratamiento de las restricciones.
Nmero de generaciones.

Algunas pruebas preliminares realizadas con algoritmos genticos, que no se incluyen aqu por
razones de espacio, muestran la validez de esta opcin no solo por sus resultados sino por el bajo
costo de su implantacin en el simulador.

5.4.2 Ayuda para la sntesis de resultados.
Aplicaciones 201

A ms alto nivel, un elemento muy interesante a agregar al simulador celular consiste en un
sistema de inferencia para la sntesis del conocimiento experto que se obtiene con el uso del
modelo. Este tipo de sistema podra permitir, en ltima instancia, proponer al usuario los cambios
paramtricos necesarios para reproducir las observaciones experimentales, o simular directamente
los efectos de combinaciones de diferentes drogas, etc...

Una alternativa vlida para la integracin del conocimiento son los sistemas de inferencia borrosos
(fuzzy inference systems), que adems de ser capaces de combinar de manera inteligente datos
numricos y cualitativos, son susceptibles de re-adaptarse a partir de nuevos conocimientos.

Los Sistemas de Inferencia Borrosos (SIB) estn basados en los principios y leyes de la Lgica
Borrosa (Fuzzy Logic) introducida inicialmente por Zadeh (1965; 1973) y han sido ampliamente
usados con xito en distintas aplicaciones ya hace ms de dos dcadas (Dubois y Prade, 1980;
Maiers y Sherif, 1985; Sugeno y Yasukawa, 1993; Kosko, 1997 ; Kim et al., 1997).

A continuacin se introduce la definicin de conjunto borroso en oposicin al conjunto
clsico, lo que da pie a explicar algunos otros conceptos y finalmente los SIB.

Conjunto Borroso.

Sea U un conjunto clsico de objetos, conocido como universo de discurso ( conjunto de
referencia), cuyos elementos genricos se representan como x . La pertenencia a un sub-conjunto
A de U podra verse como una cierta funcin caracterstica
A
de U { } 1 , 0 tal que
A x 0 x
A x 1 x
A
A
=
=
) (
) (
(5.3)

Grficamente, esa funcin sera como se representa en la figura 5.30 (a).

Esto no es otra cosa que una formalizacin de la expresin: El objeto x pertenece ( no) al
Aplicaciones 202
subconjunto A. Refirindonos a la figura 4.30 (a), el valor
0
x x =
representa una frontera que
delimita los objetos que pertenecen plenamente (
0
x x > ) de los que no pertenecen absolutamente
(
0
x x < ) al subconjunto A. Al par { } 1 , 0 se le conoce como conjunto de evaluacin.

Figura 5.30 Pertenencia a un sub-conjunto (a) clsico, (b) borroso.

En la lgica borrosa este conjunto se transforma en el intervalo real | | 1 , 0 y a A se le denomina
conjunto borroso (estrictamente hablando, se trata de un subconjunto), ) x (
A
es el grado de
pertenencia de x a A. Mientras ms cercano a 1 sea el valor de ) x (
A
, mayor ser esa
pertenencia. As, A resulta ser un subconjunto de U con fronteras no abruptas. En la figura 5.30
(b) se muestra cmo, en lugar de un valor nico, hay una gama de valores de x a la que se
adjudican grados de pertenencia crecientes (o decrecientes), desde 0 hasta 1, en lo que podramos
denominar una zona borrosa. As que a las pertenencias nula y plena, se aaden muchos otros
(en general infinitos) grados. De modo que un subconjunto borroso puede verse como un
predicado cuyos valores ciertos (verdaderos) se adquieren del intervalo | | 1 , 0 .

Entonces, A est completamente caracterizado por el conjunto de pares ordenados
( ) { } U x , (x) x, A
A
= (5.4)

y una proposicin borrosa es una sentencia tal como ' A es x ' , donde A es un conjunto borroso con
una funcin de pertenencia ( ) x
A
. La funcin de pertenencia da el valor verdadero de la
proposicin borrosa para una x dada. Existen otras definiciones y representaciones alternativas
para los conjuntos borrosos.

Aplicaciones 203
La geometra de las funciones de pertenencia borrosas suele, por tanto, reflejar una transicin
entre la pertenencia nula y la plena y/o viceversa. En la figura 5.31 se muestran algunas de las ms
frecuentes de esas geometras.

Figura 5.31 Varias funciones de pertenencia.

Relaciones borrosas.

Basado en el concepto de conjunto borroso, el de relacin borrosa se introduce como generalizacin
del de relacin ordinaria de la Teora de Conjuntos clsica, con la particularidad de que la relacin
borrosa sirve para modelar situaciones en las que las interacciones entre los elementos son menos
fuertes.

Sean U
1
,...,U
n
, n universos. Una relacin borrosa n-aria (binaria, terciaria, ) R en U
1
U
n
, es un
conjunto borroso en ese mismo espacio-producto U
1
U
n
. Un ejemplo muy apropiado es la
relacin mucho mayor que, que podra vincular a dos nmeros reales, positivos y no nulos,
digamos x>>y. La esencia de semejante relacin es netamente cualitativa, por tanto borrosa.
Formalmente tendramos n=2,U
1
=U
2
=
+
-{0}. Entonces R estara representada por una funcin
de pertenencia
y x
y 19
y x
, 1 min ) y , x (
y x 0 ) y , x (
R
R

|
|
\
|
=
=
(5.5)
De modo que
R
(x,y)=1, o sea, la relacin es plena tan pronto como x20y.

Sistemas de Inferencia Borrosa.

Aplicaciones 204
Un Sistema de Inferencia Borrosa (SIB) es una herramienta algoritmica que realiza un mapeo
S:XR
n
YR
m
, basado en relaciones lingusticas. En un SIB, el conocimiento sobre las
relaciones entre el dominio de entrada X y el dominio de salida Y est codificado como un
conjunto de reglas SI-ENTONCES. Ntese que con el mapeo esttico que se logra, se podra
inclusive modelar el comportamiento de sistemas dinmicos, dependiendo del diseo de las
entradas y salidas del SIB (Laukonen y Passino, 1995; Kim et al., 1997). En general un SIB est
estructurado como se ve en la figura 5.32.

Mdulo de
DIFUMINADO
Mdulo de
CONCRECION
MAQUINA DE
INFERENCIA
BASE DE
CONOCIMIENTOS

BASE DE DATOS
Entradas
Salidas

Figura 5.32 Estructura general de un SIB

En este SIB genrico, las entradas numricas (concretas) pasan por un bloque de difuminado
(fuzzification) que las convierte en trminos borrosos. Lo contrario ocurre con los resultados de
la mquina de inferencia que son convertidos de trminos borrosos a valores numricos
(concretos) en el bloque de concrecin (defuzzification). Estos dos procesos se apoyan en unos
datos almacenados en una base, a partir de los cuales se desarrollan el difuminado y la concrecin.

Finalmente, la base de reglas contiene las relaciones borrosas que codifican el conocimiento sobre
el sistema, las cuales son utilizadas para inferir las salidas a partir de las entradas a travs de la
mquina de inferencia. Las partes antecedente y consecuente de estas reglas pueden contener
trminos lingsticos combinados mediante operadores lgicos: y, o, no, etc.

Ejemplos de reglas derivadas de este trabajo son:
La inhibicin entre un 20% a 100% del flujo qumico asociado a la actividad del
intercambiador Na
+
-Ca
2+
genera potenciales de accin en forma de espiga, caractersticos
de un miocito de mamfero sobreviviente en tejido infartado.
Aplicaciones 205
Cuando se inyecta Rojo de Rutenio en la clula, en una concentracin leve y durante un
tiempo de exposicin corto los parmetros matemticos ms afectados son:
1
l , el cual
se inhibe medianamente y
1
p el cual se estimula medianamente.

Las reglas se traducen matemticamente mediante los operadores lgicos: conjuncin ( B A : las
dos proposiciones se cumplen), disyuncin ( B A : alguna de las dos preposiciones se cumple),
implicacin ( B A : si A se cumple entonces B tambin), negacin ( A ~ : cambia el sentido de
la preposicin), etc

Con las reglas traducidas el sistema de inferencia realiza operaciones sobre los conjuntos difusos
de los antecedentes para combinarlos y hallar la correspondencia entre la entrada y la salida del
sistema. Estas operaciones dependen del operador lgico utilizado, por ejemplo para el operador
inclusin se utiliza el mnimo o el producto algebraico entre las funciones de pertenencia, para el
operador disyuncin se utiliza el mximo, etc. La figura 5.33 muestra un grfico ms ilustrativo
sobre el mecanismo de inferencia.

Figura 5.33. Mecanismos de inferencia difusa.

Con el fin de conformar el antecedente de las reglas, cada tipo de SIB define un conjunto de
trminos lingsticos A
i
en el dominio de cada variable de entrada. Este conjunto de trminos
Aplicaciones 206
A={A
1
, A
2
, ...,A
S
} se conoce como una particin borrosa sobre la variable X. El nmero de
trminos lingsticos en la particin A (granularidad) est fuertemente relacionado con la
precisin del SIB cuando este se utiliza como un modelo. La forma y particiones de las funciones
de pertenencia son muy importantes en un SIB y pueden ser re-adaptadas para mejorarlo.

En las funciones de pertenencia de la figura 6.34 por ejemplo, una concentracin 4 M
pertenece tanto al conjunto leve como al mediano.

Figura 5.34 Funciones de pertenencia para la especificacin de una entrada en un sistema difuso.

La otra parte de las reglas es el consecuente, el cual contiene una referencia directa a la variable de
salida Y. Tal referencia a la salida puede ser un conjunto borroso (como ocurre en los SIB
lingsticos y en los SIB relacionales) o numrico (como sucede en los SIB Takagi-Sugeno)
(Kosko,1997).

SIB propuestos

Se proponen a continuacin las estructuras bsicas para el diseo de dos SIB en el simulador
celular:
SIB-A para la integracin del conocimiento proveniente del estudio de sensibilidad del
modelo.
SIB-B para la prediccin de los efectos de las diversas drogas estudiadas.

Una primera propuesta para la configuracin entrada-salida de estos sistemas se presenta en las
figuras 5.35 y 5.36.
Aplicaciones 207

Figura 5.35 Propuesta para el SIB-A.

Figura 5.36 Propuesta para el SIB-B.

En el SIB-A se predice qu elementos celulares estn afectados y en qu medida si se observan
determinados cambios en los perfiles de calcio y de voltaje. Inicialmente, se diseara un conjunto
de reglas como base del sistema de inferencia, basado simplemente en las experiencias acumuladas
Aplicaciones 208
con las observaciones realizadas durantes las intensivas pruebas de sensibilidad del modelo. El
SIB-A consistira en una descripcin matemtica, aunque basada en lgica borrosa, de la
informacin plasmada en las figuras 4.70 y 4.71.

El SIB-B sirve para inferir el efecto de las diferentes drogas (conociendo la droga aplicada y su
concentracin) en cuanto a cules parmetros del modelo se modifican y en qu cantidad. Las
reglas en este caso se deducen del conocimiento sobre las alteraciones a introducir en el modelo
para emular los efectos de las drogas observados experimentalmentes (seccin 5.3). Ntese que
esta ltima informacin introducida directamente al mdulo de resolucin del modelo permite la
simulacin del comportamiento celular bajo los efectos combinados de las drogas (ver figura
5.36).

Estos SIB constituiran una ayuda interesante en la investigacin bsica en el estudio de la
dinmica de la clula cardiaca (SIB-A) y en el diseo de medicamentos (SIB-B). Adems los SIB
son susceptibles de ser reajustados, tanto en los conjuntos de pertenencia como en las
conclusiones de las reglas (Kosko, 1992; Bergman et al., 1994; Buckleyet al., 1996), para adaptarse
a nuevos datos, al disponer por ejemplo de nuevas informaciones sobre clulas de especies,
edades, condiciones o drogas diferentes. Lo importante no es solamente que el SIB predice el
conocimiento experto, sino que lo combina ponderando de manera inteligente las diferentes
contribuciones (los resultados de las diferentes reglas), dependiendo de los operadores borrosos
utilizados.

5.5 CONCLUSIONES.

El simulador MyocyteSimulator presentado en este captulo es una herramienta amigable e
interactiva que permite obtener las resoluciones de tres modelos celulares: modelo de Tang y
Othmer (1994), el modelo de Fox y colaboradores (2001) y el modelo propuesto (Roche et al.,
2004). La modificacin de parmetros necesaria para llevar a cabo cualquier proceso de ajuste de
validacin de los modelos y/o estudiar la sensibilidad paramtrica se puede realizar de una manera
directa en una sencilla pantalla del sistema sin necesidad de que el usuario conozca a profundidad el
lenguaje de programacin Matlab. As mismo, el simulador puede ser adaptado a emular el efecto
de drogas (seccin 5.3), lo que ayuda a identificar los elementos celulares afectados por cada
Aplicaciones 209
substancia y luego potenciar el diseo de nuevos protocolos experimentales. Finalmente, el
simulador puede ser utilizado para facilitar el aprendizaje de la fisiologa del miocito (fines
acadmicos).

Las mejoras inmediatas de MyocyteSimulator deben estar orientadas a convertir este simulador en
un programa auto-ejecutable, lo que evita la instalacin del programa Matlab. Tambin es
necesario que el simulador sea probado por diferentes usuarios: mdicos, biolgicos, estudiantes, a
fin de detectar qu otras funciones o comandos pueden ser requeridos.

El proceso de validacin o ajuste del modelo al efecto de diferentes drogas se lleva a cabo
satisfactoriamente con solo alterar los valores de algunos parmetros. Esto es indicio de que el
modelo desarrollado es bastante completo y puede considerarse muy satisfactorio. En especial si lo
comparamos con uno de los modelo ms recientes usados en este mismo contexto (Rocaries et al.,
2004) que falla en varias situaciones y debe ser reformulado en su estructura. Obviamente que el
xito en estas validaciones se debe a la inclusin en el modelo propuesto de las fenomenologas:
cintico-qumica y elctrica.

El proceso de validacin permite adems identificar los elementos celulares ms afectados por una
sustancia especfica. En este sentido las identificaciones ms importantes son:

La inyeccin de Cafena en una concentracin de 10 mM en el citosol estimula la actividad
de los canales de Rianodina (parmetro
1
l ), estimula la velocidad de transporte de la bomba
SERCA (parmetro
1
p ) e inhibe la velocidad de transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+

(parmetro K ).
La inyeccin de Forskolin en una concentracin de 1 M en el citosol inhibe la velocidad de
transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+
(parmetro K ) y de la bomba Na
+
-K
+
(parmetro
max NaK I ).
Aplicaciones 210
La inyeccin de Rojo de Rutenio en una concentracin de 1 M en el citosol inhibe la
actividad de los canales de Rianodina (parmetro
1
l ), estimula la velocidad de transporte de
la bomba SERCA (parmetro
1
p ), inhibe la velocidad de transporte del intercambiador
Na
+
-Ca
2+
(parmetro K ) e inhibe la corriente de calcio
Ca
I generada por la actividad de los
canales L (parmetro Ca P ) .
La inyeccin de Tapsigargin en una concentracin de 1 M en el citosol inhibe la actividad
de los canales de Rianodina (parmetro
1
l ), inhibe la velocidad de transporte de la bomba
SERCA (parmetro
1
p ), inhibe la velocidad de transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+

(parmetro K ), estimula la corriente inica
NaCa
I generada por la actividad elctrica del
intercambiador Na
+
-Ca
2+
(parmetro
NaCa
k ) y estimula la corriente inica
Cab
I generada por
la actividad de la fraccin de canales L que permanecen siempre abiertos (parmetro Cab G )

Finalmente, se deben explotar dos ideas interesantes para completar las aplicaciones del simulador.
La primera es incluir un algoritmo de identificacin paramtrica. El mtodo de optimizacin basado
en algoritmos genticos planteado en la seccin 5.4 puede usarse para extender el simulador con una
ayuda para reajustar el modelo a datos particulares. Estos algoritmos garantizan la bsqueda en un
amplio espacio de posibilidades de los valores ms adecuados de los parmetros (individuos con las
caractersticas ms aptas) que reproducen la mejor validacin del modelo en cada caso
(minimizacin del error).

La segunda idea es usar la lgica borrosa para desarrollar sistemas de inferencia que podran
utilizarse para sintetizar el conocimiento experto que se adquiere al manipular y ajustar el modelo.
Por ejemplo, para discernir cules elementos celulares se afectan y en qu medida dependiendo de
observaciones cualitativas del comportamiento celular, o tambin para definir los cambios
paramtricos necesarios para simular los efectos de combinaciones de las diferentes drogas. Adems
estos sistemas de inferencia difusa podran re-ajustarse a nuevos datos.

Conclusiones y Perspectivas

212
C a p t u l o 6

CONCLUSIONES Y PERSPECTIVAS

Nunca he credo que podemos transformar el mundo, pero creo que cada da es posible transformar las cosas.
-Franoise Giroud-

6.1 CONCLUSIONES

El principal objetivo de este trabajo ha sido el de formular un modelo global de la clula cardiaca
que toma en cuenta tanto su actividad elctrica como su actividad cintico-qumica. Se ha
buscado que la estructura del modelo permita la identificacin de los elementos celulares que
componen el miocito para posteriormente utilizarla como herramienta en el diseo de
protocolos experimentales, para el estudio de efectos de drogas y en el diseo de tratamientos
para cardiopatas.

Al realizar el modelo se interpreta el miocito como un sistema de reactores qumicos, que integra
en un conjunto dinmico y coherente, la actividad qumica de los diferentes elementos celulares:
(canales L, canales de Rianodina, bomba SERCA, bomba ATPasa del sarcolema, intercambiador
Na
+
-Ca
2+
, miofibrillas) y la actividad elctrica del sarcolema.

Por otro lado ha sido necesario escoger un nivel de complejidad intermediario, combinando
modelos fenomenolgicos de los elementos celulares bien conocidos, como es el caso de los
canales de Rianodina, cuyo mecanismo ha sido bien estudiado por Tang y Othmer (1994), con
descripciones muy aproximadas, como es el caso de la actividad del intercambiador Na
+
-Ca
2+

(Michailova et al, 2002). Esto permiti garantizar el compromiso entre computabilidad y
complejidad del modelo.


213
El resultado es un modelo hbrido o de tipo caja gris, que permite asociar los distintos elementos
celulares del miocito con los distintos coeficientes del modelo (ver Figura 3.4).

Este aspecto, representa una importante contribucin en el modelado de la clula cardiaca, pues
puede aprovecharse para conocer especficamente cmo las actividades de los elementos celulares
influyen y modulan el proceso de excitacin- contraccin y relajacin y las dinmicas ligadas a este
proceso: concentracin del in calcio y voltaje.

El modelo consta de 18 variables descritas mediante un sistema de 18 ecuaciones diferenciales no
lineales, que tiene como variable de entrada el pulso elctrico de estmulo inicial
stim
I y como
variables de salida principales: las concentraciones
+ 2
i
Ca (concentracin del in calcio en el citosol)
y
+ 2
SR
Ca (concentracin del in calcio en el retculo sarcoplsmico) y el voltaje V del sarcolema
(potencial de membrana).

Los resultados de la validacin han mostrado simulaciones coherentes de los comportamientos
reales conocidos de la clula cardiaca: la dinmica de voltaje es ms rpida que la dinmica de la
concentracin del in calcio, y que an si ambas dinmicas son obviamente cclicas sus formas son
diferentes (campana asimtrica para el calcio y oscilacin con meseta para el voltaje). Estos
resultados son mejores que los de otros modelos celulares conocidos: modelo de Fox (Fox et al.,
2001) y modelo de Tang (Tang y Othmer, 1994). Adems se ha demostrado que el modelo puede
ser fcilmente adaptado a miocitos de diferentes especies animales. Esto se logra modificando
ciertos parmetros y usando la informacin experimental preexistente sobre el comportamiento
celular.

Del estudio de sensibilidad del modelo se han obtenido conocimientos muy provechosos, a saber:
1. Que las actividades de los canales de Rianodina, canales L, corriente
Ca
I y corriente
Na
I estn
directamente relacionadas con la etapa de excitacin del miocito y que las actividades de la
bomba SERCA, el intercambiador Na
+
-Ca
2+
y las corrientes
Cab
I ,
Nab
I e
Kp
I influyen
significativamente en la etapa de relajacin.
2. Que existen elementos que influencia muy poco significativa y que por lo tanto se pueden
eliminar o simplificar en el modelo. Tal es el caso de la bomba del sarcolema, cuyas

214
perturbaciones en los parmetros
1
q y
max pCa
I , asociados respectivamente a su actividad
qumica y elctrica no alteran significativamente los resultados del modelo.
3. Que existen elementos claves a los cuales el modelo es muy sensible para mejorar su ajuste: en
este sentido, es necesario, complementar la descripcin matemtica de la bomba Na
+
-K
+
a fin
de incluir su actividad cintico-qumica, pues segn el estudio de sensibilidad, este elemento
celular representa una fuerte influencia sobre el proceso de excitacin-contraccin y relajacin.
4. Que en condiciones de perturbacin extrema el modelo empleado inicialmente para describir el
comportamiento de la bomba SERCA falla, ya que en ausencia de la misma, se producen
anormales vaciados del retculo sarcoplsmico. Por lo tanto, futuros modelos globales de la
clula cardiaca deben incluir mecanismos de reaccin que de alguna manera representen la
modulacin especial que existe entre la concentracin del in calcio en el retculo sarcoplsmico
y la actividad de dicho elemento.
5. Que se pueden reproducir con el modelo situaciones anormales (patologas cardiacas) e
identificar los elementos celulares relacionados con dichas condiciones. Un ejemplo es la
inhibicin completa del parmetro
1 d
K , el cual est asociado al comportamiento cintico de las
miofibrillas y cuya alteracin reproduce los efectos tpicos de una clula con insuficiencia:
prdida de su fuerza contrctil o lo que es lo mismo disminucin de la afinidad entre la
miofibrilla y el in calcio. Otro ejemplo, en el caso de los canales L, son las alteraciones en los
parmetros asociados a su actividad tanto a nivel cintico qumico como elctrico (
d
F y
Ca
P )
que producen alteraciones inestables de la duracin de los ciclos de voltaje (arritmias).

Todos estos conocimientos asociados a las diferentes etapas del proceso de contraccin-relajacin
se han sintetizado en dos diagramas (Figuras 4.67 y 4.68) que son tiles para mostrar la
preponderancia que cada elemento celular descrito en el modelo tiene sobre perodos especficos de
las dinmicas de voltaje y de concentracin de calcio.

Para facilitar la disponibilidad del modelo en la comunidad cientfica y acadmica, se ha desarrollado
tambin un simulador denominado MyocyteSimulator (basado en la herramienta Guide de
Matlab), que permite la resolucin de tres modelos celulares: modelo de Tang y Othmer (1994);
modelo de Fox y colaboradores (2001) y el modelo propuesto (Roche et al., 2004). Este simulador
es bastante flexible y sencillo de utilizar y dirige al usuario en el proceso interactivo de ajuste de

215
parmetros necesario para llevar a cabo la validacin de los modelos. Para utilizar las funciones
diseadas en el programa no es necesario que el usuario conozca a profundidad el lenguaje Matlab
y adems los resultados de las simulaciones pueden ser graficados, almacenados y tambin
exportados a otros programas ms comunes como EXCEL para su manipulacin o visualizacin.

Se debe recalcar que el simulador obtiene las resoluciones numricas del modelo propuesto en
tiempos de ejecucin aceptables: en promedio para simular 1 s se necesitan 4 s de procesamiento en
tiempo real. De esta manera, las limitaciones en el uso de esta herramienta estn ms bien referidas a
la adquisicin de su licencia y a los requisitos que debe cumplir el computador al instalar dicho
programa: espacio en disco duro, velocidad del procesador y rapidez de la memoria de acceso
aleatorio. Estas limitaciones pueden solventarse, en futuros trabajos, al convertir el simulador en un
programa auto-ejecutable.

Utilizando el simulador y los diagramas construidos a partir del estudio de sensibilidad se han
llevado a cabo los ajustes del modelo propuesto necesarios para representar el efecto de la inyeccin
en el miocito de diferentes drogas a saber: Cafena, Forskorlin, Rojo de Rutenio y Tapsigargin. Con
solo alterar los valores de algunos parmetros se logran resultados de validacin bastante
satisfactorios (Tabla 6.1) en especial si stos se comparan con uno de los modelos ms recientes
usados en este mismo contexto (Rocaries et al., 2004) que falla en varias situaciones. En este
sentido, el xito de prediccin del modelo propuesto se debe naturalmente a que representa
coherentemente la interdependencia entre la dinmica qumica y elctrica de la clula.

El estudio bajo drogas ha permitido comprobar hiptesis en cuanto a cules son los elementos
celulares ms afectados por una sustancia en particular y coinciden fundamentalmente con lo
reportado en otras fuentes bibliogrficas (Zhang y Wong, 1998; Ginsburg et al., 1998; Duke y Steel,
1998). Las comprobaciones ms importantes son:
La inyeccin de Cafena en una concentracin de 10 mM en el citosol estimula la actividad
de los canales de Rianodina, estimula la velocidad de transporte de la bomba SERCA e
inhibe la velocidad de transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+
.
La inyeccin de Forskolin en una concentracin de 1 M en el citosol inhibe la velocidad de
transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+
y de la bomba Na
+
-K
+
.

216
La inyeccin de Rojo de Rutenio en una concentracin de 1 M en el citosol inhibe la
actividad de los canales de Rianodina, estimula la velocidad de transporte de la bomba
SERCA, inhibe la velocidad de transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+
e inhibe la corriente
de calcio
Ca
I generada por la actividad de los canales L.
La inyeccin de Tapsigargin en una concentracin de 1 M en el citosol inhibe la actividad
de los canales de Rianodina, inhibe la velocidad de transporte de la bomba SERCA, inhibe
la velocidad de transporte del intercambiador Na
+
-Ca
2+
, estimula la corriente inica
NaCa
I
generada por la actividad elctrica del intercambiador Na
+
-Ca
2+
y estimula la corriente inica
Cab
I generada por la actividad de la fraccin de canales L que permanecen siempre abiertos.

Finalmente se han propuesto dos ideas para la extensin del simulador. Se trata por una parte, de
implantar algoritmos de ajuste paramtrico especializado, basados en algn mtodo de optimizacin
estocstico como por ejemplo los algoritmos genticos con el objeto de dirigir la identificacin de
parmetros de manera que el usuario solo defina los rangos de prueba.

Por otra parte, dado el conocimiento experto valioso que se ha generado en este trabajo, y para
aprovecharlo en la interpretacin del comportamiento normal y/o patolgico de la clula cardiaca,
sera muy til incluir posteriormente en el simulador sistemas de inferencia borrosa que permitan
sintetizar el conocimiento generado en el estudio de sensibilidad para reproducir comportamientos
anormales en la clula o que permitan definir los cambios paramtricos necesarios para simular los
efectos de combinaciones de diferentes drogas, por ejemplo.

6.2 PERSPECTIVAS.

El modelo del comportamiento individual de una clula cardiaca desarrollado en este trabajo es un
resultado parcial del proyecto de cooperacin franco-venezolano titulado Modelado matemtico de
los fenmenos cardiacos: de la clula al rgano. Como resultado del proyecto tambin se dispone
de un modelo hemodinmico del ventrculo izquierdo, desarrollado por Diaz-Zuccarini y
colaboradores (2003). La transicin, desde el modelado de la clula aislada al modelado global de un
conjunto de clulas agregadas, permitir la conexin de ambos modelos. Esto es esencial para
entender cmo la concentracin del in calcio y las variaciones del potencial de la membrana celular

217
influyen sobre la contractibilidad del msculo cardiaco. Ms aun, cmo por ejemplo un conjunto de
clulas con disfunciones (enfermas) puede afectar el comportamiento del rgano cardiaco completo.
Los mecanismos de la sealacin celular al nivel de un conjunto de clulas estructuradas (como por
ejemplo una fibra o una pared muscular), la dinmica de una poblacin celular, y la relacin entre
estos diferentes niveles y el funcionamiento parcial o total del rgano, son problemas que estn aun
por resolverse.
Una posibilidad a explorar para explicar la influencia de las variables celulares en el comportamiento
muscular la constituyen los denominados autmatas celulares (Rajarshi et al., 1995; Reynaga y
Amthauer, 2001; Reynaga y Yupanqui, 2003).
Un autmata celular (AC) es un arreglo uni o multi-dimensional de nodos funcionales cuyo estado
solo depende del estado de los nodos que se encuentran en un cierto radio de proximidad. Un AC
lleva a cabo una tarea de sincronizacin cuando, a partir de una configuracin aleatoria inicial de los
estados de los nodos (clulas) que lo forman, converge autnomamente, por medio de una funcin
global de transicin aplicada por igual a todas las clulas, a una configuracin homognea global,
en un nmero finito de pasos. Esta tarea no es trivial ya que, como se sabe, los nodos del AC solo
usan interacciones locales (tienen entradas solo provenientes de las clulas vecinas).
Los AC vectoriales (uni-dimensionales) han sido bien estudiados (Rajarshi et al., 1995; Sipper,
1997). Solo recientemente se han producido avances interesantes, como los reportados por Reynaga
y Yupanqui (2003), para el caso bidimensional, que sera el apropiado para tratar por ejemplo una
fibra muscular. Estos autores establecen condiciones muy restrictivas para demostrar la
convergencia de la sincronizacin, es decir para obtener AC perfectos en el caso bi-dimensional.
Sin embargo, proponen el uso de AC no-perfectos que muestran en general muy buen
comportamiento, basados en funciones de transicin constitudas por una base de reglas, diseadas
para cada aplicacin en particular, y que a su vez son optimizadas por medio de algoritmos
genticos.
Esta herramienta permite construir un arreglo o matriz de clulas, donde cada una tiene un estado
inicial de excitacin, por ejemplo grado de contractibilidad medida por la reaccin qumica que
ocurre entre las miofibrillas y el in calcio. Luego las clulas interactan entre s mediante una serie

218
de reglas que deben ser ajustadas. Esta interaccin define los prximos estados del arreglo
(Wolfram, 1984). El resultado final es un conjunto de clulas coordinadas coherentemente para
producir el desplazamiento de todo el msculo. Este desplazamiento corresponde a la conversin
de la energa qumica en energa mecnica en el modelo del ventrculo izquierdo. De acuerdo con
este modelo, a partir de esta variable se obtiene la evolucin de la presin sistlica y diastlica en el
msculo.
Cuando se trata de tejidos daados, el arreglo celular puede contener clulas enfermas cuyo
comportamiento anormal influye sobre todas las dems ocasionando por ejemplo que los
desplazamientos cclicos cambien en cuanto a sus duraciones o grados de contractibilidad. Las
consecuencias de esta alteracin debern reflejarse en valores inusuales de presin y volumen a nivel
del rgano.
En la figura 7.1 se presenta un esquema explicativo sobre esta propuesta inicial esperando que en un
futuro pueda enriquecerse y ejecutarse dentro del marco de otro proyecto de investigacin.
Escala de grises:
clulas enfermas
Arreglo con estados
iniciales: reaccin
Miofibrillas-Calcio
Reglas
Interacciones
Arreglo de clulas
coordinadas
Desplazamiento
Anormal
Modelo del ventrculo
izquierdo
Presin y
Volumen del
msculo
Modelo
Celular

Figura 7.1 De la clula al rgano.

219

6.3 PUBLICACIONES CONCERNIENTES A ESTE TRABAJO.

Los resultados de este trabajo se han difundido mediante las siguientes publicaciones:

Roche R, Lamanna R, Delgado M, Hamam Y, Rocaries F. Calcium Homeostasis and membrane
potential in cardiac myocyte: an electrochemical model. 5
th
EUROSIM Congress on Modelling and
Simulation. Noisy-le-Grand, France September 2004.

Roche R, Lamanna R, Delgado M, Hamam Y, Rocaries F. Electrochemical model applications: test
of drugs effects on calcium dynamics in chicken myocyte. 5
th
EUROSIM Congress on Modelling
and Simulation. Noisy-le-Grand, France September 2004.

Rocaries F, Hamam Y, Roche R, Delgado M, Lamanna R, Pecker F, Pavoine C, Lorino H.
Calcium Dynamics in Cardiac Myocytes: a model for drugs effect description. Simulation
Modelling Practice and Theory (SIMPRA). 2004 pp. 93-104.

Roche R., Lamanna R, Delgado M, Rocaries F, Hamam Y. A simulator for the electro-chemical
dynamics of the human cardiomyocyte. 25
th
Annual International Conference of Engineering in
Medicine and Biology Society. Cancun 2003 pp. 2750-2753.

Roche R, Lamanna R, Delgado M, Hamam Y, Rocaries F. On the mathematical modeling of the
Ca
2+
ion dynamics in cardiac cells. 3
rd
Conference on Modeling and Simulation in Biology,
Medicine and Biomedical Engineering. Balamand 2003 pp. 173-176.

Roche R, Lamanna R, Delgado M, Hamam Y, Rocaries F. A new electro-chemical model of the
excitation-contraction process in the cardiac myocyte. 29
th
Northeast Annual IEEE
Bioengineering Conference. New Jersey 2003.

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Apndice A

229
APNDICE A: Matlab Functions

A.1 Funcin programada para la dinmica qumica.

function outdx=calcium(input);
x1=input(1); %Voltage
x2=input(2); %Calcium concentration
x3=input(3); %Sarcoplasmic reticulum Calcium concentration
x26=input(4); % x1 Ryanodine state
x29=input(7); % Myofibrils concentration
x30=input(8); % CaM concentration
Ki=input(9); % Potassium concentration
Nai=input(10); %Sodium concentration
d=input(11); % Open probability of Lchannels
t=input(12); % time (s)

%%%Parameters sensitivity

if t>=40;

Kl1=1;
Klm1=1;
Kl2=1;
Klm2=1;
kmy=1;
kdmy=1;
Knaca=1*0.8;
Km=1;
Kp1=1*0.01;
Kp2=1;
Kq1=1*0.01;
Kq2=1;
KFL=1;
KFR=1;
DifCar=0.78e-11/1.2;

%PHYSICAL PARAMETERS
arear=1*1.58e-12;%m2
l=1*0.003e-6;%m
Vmyo=1*1.6e-14;%m^3
Vsr=1*1.28e-15;%m^3

else

Kl1=1;
Klm1=1;
Kl2=1;
Klm2=1;
kmy=1;
kdmy=1;
Knaca=1*0.8;
Km=1;
Kp1=0.01;
Kp2=1;
Kq1=0.01;
Kq2=1;
KFL=1;
KFR=1;
DifCar=0.78e-11/1.2

%PHYSICAL PARAMETERS
arear=1.58e-12;
l=0.003e-6;
Vmyo=1.6e-14;
Vsr=1.28e-15;

end

Apndice A

230
%CONCENTRATION VALUES
x50=2000; %extra-cellular CALCIUM concentration

RT=35; % RIANODYNE concentration

%L-type channels Flux definition

FdifLr(1)=KFL*d*DifCar/l*(x50-x2)*arear/Vmyo;

%Ryanodine Channels

l1=Kl1*15;
lm1=Klm1*7.6;
l2=Kl2*0.8;
lm2=Klm2*0.84;

rm1=lm1*x27*RT;

r1=l1*x26*x2*RT;

r2=l2*x27*x2*RT;

rm2=lm2*x28*RT;

r3=l1*(1-(x26+x27+x28))*x2*RT;

rm3=lm1*x28*RT;

r4=l2*x26*x2*RT;

rm4=lm2*(1-(x26+x27+x28))*RT;

dx26(1)=(lm1*x27+lm2*(1-(x26+x27+x28))-(l1+l2)*x26*x2);

dx27(1)=(-lm1*x27+lm2*x28+(l1*x26-l2*x27)*x2);

dx28(1)=(-(lm2+lm1)*x28+(l2*x27+l1*(1-(x26+x27+x28))*x2));

PopenR=x27;

FdifRr(1)=KFR*PopenR*DifCar/l*(x3-x2)*arear/(Vmyo);

%Myofibrils
%kinetic parameters

k=kmy*39;
km=kdmy*20;

r5(1)=k*x29*x2;
rm5(1)=km*x30;

dx29(1)=(rm5-r5);
dx30(1)=(r5-rm5);

%%Exchanger Na-Ca

Kexch=Knaca*150.3;

Vmaxexc=Kexch*(1-tan(x1/94.7));%

Vsig(1)=Vmaxexc;

FCaexcha(1)=Vmaxexc*x2/(Km+x2);

%%SERCA pump
%%%Kinetic parameters
p1=Kp1*1038;
Apndice A

231
p2=Kp2*0.12;%0.12;
r11(1)=p1*x2*x2/(x2*x2+p2*p2);

%Sarcolemmma pump

q1=Kq1*19;
q2=Kq2*0.06;%0.12;
r20(1)=q1*x2*x2/(x2*x2+q2*q2);

%Final balances:

dx2(1)=(FdifLr+rm1-r1-r2+rm2-r3+rm3-r4+rm4+FdifRr-r5+rm5-FCaexcha-r11-r20);

dx3(1)=tmax*(r11-FdifRr)*Vmyo/Vsr;

outdx=[dx2;dx3;dx26;dx27;dx28;dx29;dx30;FCaexcha;r11;Vsig;r5;rm5;FdifLr;FdifRr;r20];

A.2 Funcin programada para la dinmica elctrica.

function output=voltage(input);

V=input(1);
Cai=input(2);
Caisr=input(3);
f=input(4);
d=input(5);
m=input(6);
h=input(7);
j=input(8);
fCa=input(9);
xKr=input(10);
xKs=input(11);
Xto=input(12);
Yto=input(13);
Istim=input(14);
Ki=input(15);
Nai=input(16);
t=input(17);

%Parameters

GpromNa=12.8;
GpromK1=2.8;
GpromKr=0.0136 ;
GpromKs=0.0245;
GpromKp=0.002216;
Gpromto=0.23815;
GpromNab=0.0031;
GpromCab=0.0003842;
PpromCa=0.0000226;
PpromCaK=5.79e-7;
IpromNaK=0.693;
IpromCahalf=-0.265;
IprompCa=0.05;
Kmfca=0.18;
KmK1=13;
KmNa=87.5;
KmCa=1380;
KmNai=10;
KmKo=1.5;
KmpCa=0.5;

Apndice A

232
kNaCa=1500;
ksat=2;
neta=0.35;

Vup=0.1;
Kmup=0.32;
Ppromrel=6;
Ppromleak=0.000001;
CMDNtot=10;
CSQNtot=10000;
KmCMDN=2;
KmCSQN=600;
Csc=1;
R=8.314;
T=310;
F=96.5;
Ko=4;
Nao=138;
Cao=2000;
Fnormal=96.500;
tmax=1000; % Time conversion ms to s

if t>=40;
p1=1;
p2=1;
p3=1;
p4=1;
p5=1;
p6=1;
p7=1;
p8=1;
p9=1;
p10=1;
p11=1;
p12=1 p13=1;
else
p1=1;
p2=1;
p3=1;
p4=1;
p5=1;
p6=1;
p7=1;
p8=1;
p9=1;
p10=1;
p11=1;
p12=1;
p13=1;
end

%INa
alfam=0.32*((V+47.13)/(1-exp(-0.1*(V+47.13))));
betam=0.08*exp(-V/11);
alfah=0.135*exp((V+80)/-6.8);
betah=7.5/(1+exp(-0.1*(V+11)));
alfaj=0.175*exp((V+100)/-23)/(1+exp(0.15*(V+79)));
betaj=0.3/(1+exp(-0.1*(V+32)));

ENa=R*T/F*log(Nao/Nai);

dm(1)=(alfam-(alfam+betam)*m)*tmax;

dh(1)=(alfah-(alfah+betah)*h)*tmax;

dj(1)=(alfaj-(alfaj+betaj)*j)*tmax;

INa(1)=p1*GpromNa*m^3*h*j*(V-ENa);

%IK1

EK=R*T/F*log(Ko/Ki);

Apndice A

233
K1inf=1/(2+exp(1.62*F/(R*T)*(V-EK)));

IK1=p2*GpromK1*K1inf*(Ko/(Ko+KmK1))*(V-EK);

%IKr
XKrinf=1/(1+exp(-2.182-0.1819*V));

tKr=43+1/(exp(-5.495+0.1691*V)+exp(-7.677-0.0128*V));

XKrinf=1/(1+exp(-2.182-0.1819*V));

RfV=1/(1+2.5*exp(0.1*(V+28)));

dKr(1)=tmax*(XKrinf-xKr)/tKr;

IKr(1)=p3*GpromKr*RfV*xKr*(Ko/4)^0.5*(V-EK);

%IKs

XKsinf=1/(1+exp((V-16)/-13.6));

tKs=1/(0.0000719*(V-10)/(1-exp(-0.148*(V-10)))+0.000131*(V-10)/(exp(0.0687*(V-10))-1));

EKs=R*T/F*log((Ko+0.01833*Nao)/(Ki+0.01833*Nai));

dKs(1)=tmax*(XKsinf-xKs)/tKs;

IKs(1)=p4*GpromKs*xKs^2*(V-EKs);

%Ito

alfaXto=0.04516*exp(0.03577*V);

betaXto=0.0989*exp(-0.06237*V);

alfaYto=0.005415*exp((V+33.5)/-5)/(1+0.051335*exp((V+33.5)/-5));

betaYto=0.005415*exp((V+33.5)/5)/(1+0.051335*exp((V+33.5)/5));

dXto(1)=(alfaXto-(alfaXto+betaXto)*Xto)*tmax;

dYto(1)=(alfaYto-(alfaYto+betaYto)*Yto)*tmax;

Ito=p5*Gpromto*Xto*Yto*(V-EK);

%IKp

KKp=1/(1+exp((7.488-V)/5.98));

IKp=p6*GpromKp*KKp*(V-EK);

%INaK

sigma=1/7*(exp(Nao/67.3)-1);

fNaK=1/(1+0.1245*exp(-0.1*V*F/(R*T))+0.0365*sigma*exp(-V*F/(R*T)));

INaK=p7*0.5*IpromNaK*fNaK*1/(1+(KmNai/Nai)^1.5)*Ko/(Ko+KmKo);

%INab

INab=p8*GpromNab*(V-ENa);

%INaCa

INaCa(1)=p9*kNaCa/(KmNa^3+Nao^3)*1/(KmCa+Cao)*1/(1+ksat*exp(V*F*(neta-1)/(R*T)))*(exp(V*F*neta/(R*T))*Nai^3*Cao-exp(V*F*(neta-
1)/(R*T))*Nao^3*Cai);
Apndice A

234

%IpCa

IpCa=p10*IprompCa*Cai/(KmpCa+Cai);

%ICab

ECa=R*T/(2*F)*log(Cao/Cai);

ICab(1)=p11*GpromCab*(V-ECa);

%ICa

finf=1/(1+exp((V+12.5)/5));

tf=30+200/(1+exp((V+20)/9.5));

dinf=1/(1+exp((V+10)/-6.24));

td=1/(0.25*exp(-0.01*V)/(1+exp(-0.07*V))+0.07*exp(-0.05*(V+40))/(1+exp(0.05*(V+40))));

fCainf=1/(1+(Cai/Kmfca)^3);

tfca=30;

df(1)=tmax*(finf-f)/tf;

dd(1)=tmax*(dinf-d)/td;

dfCa(1)=tmax*(fCainf-fCa)/tfca;

IpromCa=PpromCa/Csc*4*V*F*Fnormal/(R*T)*(Cai*exp(2*V*F/(R*T))-0.341*Cao)/(exp(2*V*F/(R*T))-1);

ICa(1)=p12*IpromCa*f*d*fCa;

%ICaK

ICaK(1)=p13*PpromCaK/Csc*f*d*fCa/(1+IpromCa/IpromCahalf)*1000*V*F*Fnormal/(R*T)*(Ki*exp(V*F/(R*T))-Ko)/(exp(V*F/(R*T))-1);

%Voltage
dV(1)=-(INa+IK1+IKr+IKs+Ito+IKp+INaK+INaCa+INab+ICab+IpCa+ICa+ICaK)*tmax-Istim;

output=[dV;df;dd;dm;dh;dj;dfCa;dKr;dKs;dXto;dYto;INaCa;ICab;IKs;IKr;ICa;ICaK;INa];

Apndice A

235

Apndice B

235
APNDICE B

Tcnica de patch-clamp

La tcnica experimental denominada patch clamp o pinzamiento zonal es introducida en 1976
por Erwin Neher y Bert Sakmann (Sakmann y Neher, 1995; Fertig et al, 2002) y permite el registro
de las corrientes inicas a travs de zonas minsculas de membranas celulares. Consiste,
esencialmente, en presionar la punta de una micro pipeta de vidrio contra la superficie de la
membrana con ayuda de un microscopio y un micromanipulador, formndose un cierre hermtico.
La tcnica admite diversas variantes. Si despus de sellar la punta de la pipeta contra la membrana se
aplica una pequea succin, el fragmento de membrana pinzado se rompe, con lo que se consigue el
registro de la clula completa ("whole-cell recording", en ingls), que permite cuantificar la corriente
que atraviesa toda la superficie de una clula individual. Separando la pipeta de la clula a partir de
esta configuracin, los bordes de la membrana unidos a la punta de la pipeta se sellan, permitiendo
as el registro exterior-fuera ("outside-out patch recording", en ingls), en el que se pueden
determinar las corrientes inicas que atraviesan los canales presentes en el fragmento de membrana
atrapado. Cuando el dimetro de la micro pipeta empleada es extremadamente pequeo, la corriente
detectada corresponde a apenas uno o dos canales inicos. Por ltimo, separando la pipeta de la
clula antes de aplicar la pequea succin, se puede obtener el registro interior-fuera ("inside-out
patch recording", en ingls), ya que el parche de membrana queda invertido.
El montaje experimental ms comnmente usado para este mtodo (figura B.1) requiere de una
micro pipeta, un medio para la clula, un amplificador y un computador. Las mediciones se realizan
de la siguiente manera: mediante el amplificador se aplica un estimulo de voltaje que despolarice la
membrana celular. La micro pipeta recoge la respuesta o corriente generada porque ella misma
funge de micro electrodo. Esta seal es almacenada y mostrada en el computador. La parte ms
difcil de esta tcnica es hacer el pequeo parche con la micro pipeta, pues es un proceso muy
delicado que an no esta automatizado (Garca, 2004).

Apndice B

236

Figura B.1 Montaje experimental para la tcnica de patch clamp.

Clula

Computador
V pulso
Micropipeta

Amplificador
Apndice C

237
APNDICE C

Protocolo Experimental usado para medir concentracin de calcio en el
miocito de pollo.

C.1 Materiales

Fura-2/AM obtenido de Molecular Probes (Montluon, Francia).
Suero fetal, buffer salino de fosfato (PBS) y medio 2040 obtenidos de Gibco-BRL
(Cergy-Pontoise, Francia).
Medio M199 de Eurobio (Les Ulis, Francia).
Otros productos qumicos fueron obtenidos de Sigma (Saint-Quentin-Fallavier,
Francia).

C.2 Cultivo de los miocitos de pollo.

Los cultivos de clulas de corazn son obtenidos de corazones de pollo adulto provenientes
de la granja Hass (Kaltenhouse, Francia). El corazn es disociado y el resultado de la
suspensin (5-7 x 10
5
clulas/ml) es gasificado a una temperatura de 4 C con aire que tiene
una concentracin de CO
2
al 5%. Luego, las clulas se conservan en un medio que contiene la
siguiente composicin: NaHCO
3
al 0.01% (peso/vol.), L-glutamina al 0.1% y Penicilina.

C.3 Captura de imgenes de calcio.

Las clulas son colocadas en un portaobjetos y lavadas con una solucin salina de pH 10
compuesta por: glucosa 10mM, NaCl 130mM y KCl 5 mM. A continuacin se inyecta el Fura-
2, y se mide la concentracin de in calcio usando el montaje experimental explicado en el
captulo 4.

Apndice D

238
APNDICE D

Datos experimentales usados para validar el modelo.

D.1 Datos experimentales para miocito de perro (Winslow y colaboradores, 1999).

tiempo (s)
Concentracin de calcio
(M)
0 0,14
0,03571 0,27
0,07142 1,02
0,10713 1,14
0,14284 0,89
0,17855 0,64
0,21426 0,52
0,25 0,4
0,28571 0,33
0,32142 0,27
0,35713 0,21
0,39284 0,15
0,42855 0,147
0,46426 0,145
0,5 0,143
0,58333 0,141
0,66666 0,1405
0,75 0,14025
0,83332 0,1401
0,91665 0,14
1 0,14

D.2 Datos experimentales para miocito de conejo (Li y colaboradores, 2002).

tiempo (s)
Voltaje
(mV)
Corriente de calcio I
Ca
(M/F)
0 -96 0
0,017 20 -0,2
0,035 36 -0,4
0,052 20 -0,6
0,064 10 -0,7
0,075 0 -0,65
0,185 -10 -0,6
0,3 -20 -0,4
0,338 -30 -0,2
0,375 -40 -0,1
0,39375 -60 -0,05
0,4125 -96 -0,025
Apndice D

239

D.3 Datos experimentales para miocito de pollo (INSERM).

tiempo (s)
Concentracin de calcio
(M)
0 0,2262
0,36 0,2262
0,76 0,3929
1,12 1,1059
1,48 0,4901
1,88 0,2076
2,24 0,1716
2,64 0,0578
3 1,0611
3,36 0,689
3,759 0,2649
4,119 0,1207
4,519 0,073
4,879 0,936
5,279 0,721
5,639 0,348
5,999 0,073
6,399 0,073
6,799 0,5704
7,159 0,8596
7,519 0,5704

Apndice E

240
APNDICE E

El programa cdigo de MyocyteSimulator

Debido a que no es prctico imprimir el programa cdigo de todos los archivos necesarios para
ejecutar MyocyteSimulator, en este apndice se muestra un flujograma sobre los tipos de
archivos y su relacin con las funciones del simulador. El programa cdigo puede ser pedido a la
direccin electrnica: rroche@usb.ve y en un futuro estar disponible en Internet.

Roche.fig Despliega la
pantalla del modelo
propuesto
Tang.fig Despliega
la pantalla del
modelo de Tang y
Othmer, 1994
Fox.fig Despliega la
ventana del modelo de
Fox y colaboradores,
2001
Ejecucin
Roche.m
Ejecucin
Tang.m
Ejecucin
Fox.m
Pantalla principal
MyocyteSimulator.fig
Modelo seleccionado
Llama a Roche
model.m para
resolver el
sistema
ecuaciones
diferenciales
ordinarias
Llama a
Tangmodel.m
para resolver el
sistema
ecuaciones
diferenciales
ordinarias
LLama
Foxmodel.m para
resolver el
sistema
ecuaciones
diferenciales
ordinarias

Simulacin es
generada y
mostrada en las
pantallas:principal y
secundaria
Modificacin de parmetros
Apndice F

241
APNDICE F

Datos experimentales usados para validar el efecto de drogas.

F.1 Concentracin de calcio ante la inyeccin de Cafena.

tiempo (s) Concentracin de calcio (M)
40,44 0,7131
40,8 0,3861
41,16 0,4736
41,56 1,1765
41,96 0,923
42,36 0,4736
42,72 0,1864
43,12 0,2561
43,48 1,1216
43,88 0,923
44,24 0,6754
44,6 0,2807
45 0,1429
45,4 0,9698
45,76 0,923
46,12 0,6037
46,52 0,3586
46,92 0,209
47,28 0,7131
47,64 1,069
48,04 0,6754
48,4 0,5046
48,76 0,1864
49,16 0,3059
49,52 1,1765
49,92 0,7131
50,28 0,4436
50,64 0,2561
51,04 0,1864
51,4 1,2337
51,8 0,7926
52,16 0,5366
52,56 0,3319
52,92 0,2807
53,28 0,6037
53,64 1,1216
54 0,6754
54,36 0,5046
54,72 0,1429
Apndice F

242
55,12 0,2561
55,52 1,1216
55,88 0,8345
56,24 0,4436
56,64 0,3319
57 0,1219
57,4 0,9698
57,76 0,8779
58,12 0,4736
58,52 0,2561
58,88 0,1429
59,28 0,6754
59,64 0,923
60,04 0,5046

F.2 Concentracin de calcio ante la inyeccin de Forskolin.

40 0,22927
40,3 0,22927
40,7 0,1234
41,1 0,1907
41,4 0,13913
41,8 0,08
42,2 0,1907
42,6 0,13913
43 1,2889
43,4 0,4968
43,7 0,31892
44,1 0,20952
44,5 0,15556
44,8 0,1907
45,2 0,17273
45,6 0,1234
46 0,09388
46,4 0,06667
46,8 1,0191
47,1 1,1
47,5 0,34444
47,9 0,27179
48,2 0,22927
48,6 0,1907
49 0,1234
49,3 0,15556
49,7 0,13913
50,1 0,10833
50,4 0,17273
Apndice F

243
50,8 1,1
51,2 0,8783
51,6 0,34444
52 0,17273
52,3 0,31892
52,7 0,10833
53,1 0,22927
53,5 0,22927
53,8 0,10833
54,2 0,10833
54,6 0,20952
55 1,1
55,4 0,4
55,8 0,15556
56,2 0,1907
56,6 1,2889
56,9 1,0191
57,3 0,4968
57,7 0,15556
58,1 0,1234
58,4 0,08
58,8 0,1234
59,2 0,17273
59,6 0,1234
60 0,1907
60,3 0,1234

F.3 Concentracin de calcio ante la inyeccin de Rojo de Rutenio.

40,278 0,78261
40,678 0,73469
41,038 1
41,438 0,9
41,798 0,83721
42,158 0,70588
42,558 0,72
42,918 0,94737
43,317 1,0286
43,677 0,85714
44,077 0,85714
44,437 0,8
44,797 0,87805
45,197 1
45,597 0,85714
45,957 0,75
46,317 0,78261
46,717 0,75
47,077 0,97297
Apndice F

244
47,437 0,85714
47,837 0,81818
48,237 0,81818
48,597 0,76596
48,957 0,97297
49,357 0,97297
49,717 0,85714
50,117 0,8
50,477 0,76596
50,877 0,94737
51,237 0,97297
51,597 0,87805
51,997 0,83721
52,357 0,75
52,757 0,81818
53,117 1
53,477 0,9
53,877 0,8
54,237 0,76596
54,637 0,75
54,997 0,94737
55,397 0,9
55,797 0,9
56,157 0,75
56,517 0,75
56,877 0,94737
57,277 0,97297
57,637 0,85714
58,037 0,8
58,397 0,73469
58,756 0,8
59,156 0,97297
59,556 0,87805
59,916 0,83721
60,276 0,70588
60,676 0,75

F.4 Concentracin de calcio ante la inyeccin de Tapsigargin.

41,14 1,7846
41,5 1,6338
41,82 1,5263
42,14 1,6812
42,5 2,4167
42,82 2
43,14 1,6571
43,46 1,5467
43,82 1,5467
Apndice F

245
44,18 2,4681
44,54 2,32
44,86 1,8125
45,22 1,5676
45,58 1,4872
45,94 1,45
46,26 2,5778
46,62 2,2745
46,94 1,6812
47,3 1,5467
47,66 1,4684
48,02 1,5467
48,34 2,32
48,66 1,9661
48,98 1,6338
49,3 1,45
49,66 1,4872
50,02 2,2745
50,38 2,1887
50,7 1,8413
51,06 1,5676
51,38 1,5065
51,7 1,5065
52,02 2,32
52,38 2,1887
52,74 1,7576
53,1 1,589
53,42 1,4872
53,78 1,4146
54,1 2,4167
54,42 2,0714
54,74 1,6338
55,06 1,5263
55,42 1,4146
55,78 2,2745
56,14 2,2745
56,46 1,7576
56,82 1,5467
57,18 1,5467
57,54 1,5467
57,86 2,4167
58,22 2,1481
58,54 1,7846
58,86 1,5263
59,18 1,6111
59,54 1,6812

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UNIVERSIDAD SIMN BOLVAR

Decanato de Estudios de Postgrado

RC , cuyas variables de concentracin normalizadas

las variables estimadas

=0,35 s (figura 4.2) logra acercarse a lo reportado en la literatura:

= 1 s (igual que el valor

muy alto para el modelo

(1 s). Estos resultados son inexactos de acuerdo con los

(1 s) que es aceptable de acuerdo a los

=1 s), por lo que es necesario modificar los siguientes parmetros:

=0,35 s), por lo que se considera que los ajustes de los

). La validacin del modelo se logra entonces

es consecuentemente superior (0,4 s) a la duracin de un ciclo de

(0,79 M) son bastante similares (

-figura 4.23) se alarga (retarda) originando bradicardia en la clula. En cambio, la

(figura 4.23), producindose taquicardia en la clula.

(figura 4.26) pues hay menor cantidad

mayor, ver figura 4.26), debido a la mayor

(figura 4.30). Esto provoca

. A la vez, esto genera

(figura 4.31), tpicos de un miocito con arritmia. Todos estos

es un poco ms rpida y el valor de

disminuye (figura 4.32). Al mismo tiempo, se

(ve figura 4.46). Frente al

(figura 4.48). Pequeas estimulaciones en Nab G (10%) aumentan los valores de V

fluctan entre rpidas y

es menor (figura 4.49), es decir el ritmo

(figura 4.50), pues disminuye en consecuencia el perodo de apertura de los

(figura 4.52). No obstante, esta inhibicin de to G (50%) no acelera ni

aumenta (figura 4.54). Luego este efecto genera arritmias

se aceleran y/o retardan, desestabilizando las

(figura 4.55) y hace que los

(figura 4.56). El exceso

que inestabilizan la dinmica del miocito. Estos resultados

y la inhibicin (99%) la retarda.

disminuye drsticamente (figura 4.58). Esto genera un

(figura 4.60) pues en este caso el transporte del in potasio a

(figura 4.63) tan grande (1,4 M) que los mecanismos de

aceleradas y retardadas (clula

, figura 4.62), provocando un

(figura 4.64) lo que a la vez disminuye el valor de

(figura 4.65). No obstante, estas

no son uniformes (aceleradas y/o retardadas).

(figura 4.69) variables (aceleradas

) y flujo qumico del intercambiador Na

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