COLESTEROL 250

BIOQUMICA CLNICA
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES FINALIDADE Sistema para determinao enzimtica do colesterol total Tampo/enzima: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel na forma liofilizada at a data de vencimento no soro, plasma e outros lquidos biolgicos. indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de Somente para uso diagnstico in vitro. armazenamento. Surfactante: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel PRINCPIO O colesterol no soro quantificado atravs das seguintes at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. reaes enzimticas:

1. steres de colesterol col. esterase 2. Colesterol + O2 Livre col. oxidase

colesterol livre +cidos graxos colesterona + H2O2 Peroxidase

Soluo padro 200mg/dL: armazenar temperatura de 2-8 oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento.

CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se O produto formado pela oxidao da 4-Aminoantipirina (4- contato com pele e mucosas. Em caso de contaminao Antipirilquinonimina) de colorao avermelhada e sua acidental, lavar a rea afetada em gua corrente. O intensidade, diretamente proporcional concentrao de descarte do material utilizado dever ser feito obedecendocolesterol no soro. A cor vermelha, formada pela reao, se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo medida em espectrofotmetro ou fotocolormetro, com laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou absoro mxima em 510nm. federais. Observar ainda a simbologia PARTICULARIDADES DO SISTEMA constante nos rtulos do produto: Os mtodos de eleio para dosagem do colesterol so os Irritante enzimticos nos quais as interferncias so praticamente nulas. AMOSTRA O reagente Doles para dosagem enzimtica do colesterol Soro ou plasma (heparina) isentos de hemlise. Aps jejum apresenta-se em p e sua reconstituio feita pela adio de 12 a 16 horas, o sangue colhido com o mnimo de do contedo de um frasco a 65mL de gua. Ausncia de fenol estase possvel. O soro ou plasma devem ser separados, (custico) no reagente estende a sua estabilidade. no mximo, duas horas aps a coleta. Quando refrigerada (2-8oC), a amostra se conserva por 7 dias. Se mantida a 10 o C negativos, conserva-se por 3 meses. O uso de REAGENTES E APRESENTAO anticoagulantes como: citrato, EDTA e oxalato, provoca Reagentes Tampo/enzima: cada frasco contm 1,12g de tampo resultados ligeiramente diminudos. Todas as amostras biolgicas devem ser enzima em p. consideradas como potencialmente infectantes. Surfactante: soluo de Triton X-100. Soluo padro 200mg/dL: soluo aquosa estabilizada PROCEDIMENTO TCNICO de colesterol. Preparo do reagente para uso: Em um frasco limpo, cor mbar, adicionar 65mL de gua Apresentao destilada e todo p de um frasco tampo/enzimas. Agitar levemente por inverso at dissolver o p e em seguida Tampo / enzimas 4 x 1,12g acrescentar 5 gotas do surfactante. O reagente de uso, aps o preparo, permanece estvel por cerca de 45 dias Surfactante 1 x 3 mL sob refrigerao.

3. 2H2O2 + 4 Aminoantipirina + p-Hidroxibenzoato 4-Antipirilquinonimina + 4 H2O

Reagente de uso: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel por 45 dias aps a reconstituio, obedecidas as condies de uso.

Identificar 3 tubos de ensaio com B (branco), T (teste) e P (padro). NMERO DE TESTES Manual - 130 testes (20 L amostra/2mL Reagente de Cor) 260 testes (10 L amostra/1mL Reagente de Cor) Proceder como segue: Automtico 700 testes B T P EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Espectrofotmetro ou fotocolormetro capaz de medir a absorvncia em 510nm ou filtro verde. Tubos de ensaio. Pipetas graduadas. Pipetas semi-automticas 20 L. Ponteiras descartveis. gua deionizada ou destilada. Banho-maria (370C). Cronmetro. Frasco mbar com capacidade volumtrica para 65 mL. Proveta com capacidade de 65 mL. Reagente de cor Soluo padro Amostra 2,0mL 2,0mL 2,0mL 20 L

Soluo padro 200mg/dL

1 x

3 mL

20 L

Misturar por agitao e incubar por 10 minutos, em banhomaria, a 37oC. Retirar do banho-maria e ler as absorvncias em espectrofotmetro ou fotocolormetro, entre 490 a 510nm, zerando o aparelho com o branco. A cor desenvolvida permanece estvel por 60 minutos.

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) / 0800 644 6433 (Demais localidades) / FAX: (62) 3269 0001

1/3

CURVA DE CALIBRAO
1 .00 0

Para a determinao do fator, recomenda-se dosar em triplicata o padro, ler as absorvncias e tirar a mdia aritmtica das mesmas.
padro 1 2 3 4 5 6 7 absorvncia 0.000 0.180 0.360 0.452 0.722 0.895 0.930 conc. (mg/dL) 0 100 200 250 400 500 600

0 .80 0

absorvncia

0 .60 0

Exemplo: Leitura: Padro: 0,360; 0,359; 0,36l 0,360 + 0,359 + 0,36l 3 = 555,55

0 .40 0

0 .20 0

Mdia aritmtica = 200 0,360

= 0,360

0 .00 0 0 1 00

concentrao (mg/dL)

2 00

3 00

4 00

5 00

6 00

Fator (F) =

A curva de calibrao a representao grfica da relao

Obs.: No utilizar esta curva para determinar o resultado de seu ensaio. entre os valores das absorvncias com os valores das concentraes de um conjunto de solues padro. So necessrios trs passos para confeccion-la: (1) preparo das solues padro; (2) medio dos valores de absorvncia das solues padro, de acordo com o especificado no procedimento tcnico da presente instruo de uso, e (3) montagem de um grfico em papel especial, linear, onde so relacionados os valores de absorvncia com os de concentrao, conforme demonstrado na figura acima. As dosagens para montagem da curva foram feitas em um espectrofotmetro Ultrospec III, Pharmacia Biotec, comprimento de onda de 510nm e cubetas com passagem de luz de 10mm. A curva de calibrao demonstra a linearidade da reao at uma determinada concentrao, na qual pode ser determinado um fator de calibrao (F), de acordo com a Lei de Beer. A reao linear entre 0 e 500mg/dL (ver curva acima). Obtendo-se valores mais elevados, dilui-se a amostra com soluo fisiolgica e procede-se nova dosagem. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. O kit de Colesterol 250 Doles possui padro no intervalo de linearidade da metodologia adotada. O laboratrio deve realizar o ensaio com o padro que acompanha o kit e calcular seu fator de calibrao (F), de acordo com o exemplo estabelecido nos clculos abaixo. O fator dever ser refeito periodicamente e a cada lote do produto. Os padres utilizados na montagem da curva de calibrao foram rastreados contra Cholesterol Calibrator, cat. No C 7921 de Sigma Chemical Company e certificado por CDC e NCEP.

Leitura do teste: 0,280 Colesterol (mg/dL) = 0,280 x 555,55 = 155,55

EXPRESSO DOS RESULTADOS EM UNIDADE S.I. Colesterol mmol/L = colesterol mg/dL x 0,02586

que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Qualquer alterao poder levar a resultados errneos. Algumas drogas como: os adrenocorticotrpicos (ACTH), esterides anabolizantes, bloqueadores beta adrenrgicos, corticosterides, epinefrina, contraceptivos orais, fenitona, sulfonamidas, diurticos tiazdicos, podem elevar os nveis de colesterol . Algumas drogas como: alopurinol, andrgenos, captropril, clorofibrato, colchicina, eritromicina, isoniazida, lovastatina, inibidores da MAO, neomicina, niaciacina e nitratos, podem reduzir os nveis de colesterol. CONTROLE DE QUALIDADE DO SISTEMA 1.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2.A gua utilizada na limpeza do material, no preparo dos reagentes e na dosagem, deve ser de boa qualidade. 3.Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes. 4.As pipetagens devem ser precisas. 5.O nvel da gua do banho-maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio e a temperatura (37oC), rigorosamente observada. 6.O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomenda-se utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles). VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Em termos estatsticos, na populao brasileira adulta, em ambos os sexos, os nveis de colesterol situam-se na faixa de 150 - 240mg/dL. O colesterol e suas fraes so componentes lipdicos de maior importncia na evoluo do quadro de aterognese. Estudos mostram relao entre o aumento da incidncia de doena coronria isqumica (DCI) e o aumento da taxa de colesterol sangneo, determinando ento os grupos de risco. Como referncia, d-se valor no ao dado estatstico, mas sim aos nveis de colesterol srico que definam prognsticos: Desejvel Limtrofe Alto risco (DCI)

Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio

LIMITAES DO SISTEMA

CLCULOS

Colesterol (mg/dL) = Exemplo: Leitura: Padro:0,360 Teste: 0,280

absorvncia teste absorvncia padro

x 200

0,280 Colesterol (mg/dL) = 0,360 Como a reao corada segue estritamente a lei de Beer, basta que se determine um fator (F) para clculo dos resultados. 200 Fator (F) = absorvncia padro x 200 = 155,5mg/dL

Colesterol (mg/dL) = absorvncia teste x F

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Colesterol mg/dL < 200 200 - 239 > 240

SIGNIFICADO CLNICO Aterosclerose um fenmeno degenerativo que compromete as artrias de grande e mdio calibre de nosso organismo. Inicia-se precocemente, tendo papel importante na sua evoluo, determinados fatores raciais e principalmente, alimentares. Sua expresso anatmica a diminuio da luz vascular, com srias conseqncias quando as leses se localizam nas artrias cerebrais ou coronarianas. Grande quantidade de lipdeos, com predominncia de colesterol, esto presentes nas leses. Estudos de Framinghan mostram uma correlao direta entre os nveis sangneos de colesterol e as leses aterosclerticas. O colesterol tem papel importante na patognese da doena coronariana isqumica (DCI). O National Cholesterol Education Program(NCEP) advoga os seguintes valores referenciais para o colesterol sangneo em adultos com mais de 20 anos: Desejvel Limtrofe Alto risco/DCI Colesterol (mg/dL) < 200 200-239 > 240 Aumentos secundrios do colesterol so encontrados em: hipotiroidismo, diabete no controlada, sndrome nefrtica (glomerulonefrite crnica membranosa) e cirrose biliar. Por vezes, ocorrem aumentos discretos na gravidez. Hipocolesterolemia pode ser detectada nos estados de desnutrio, hipertiroidismo, anemia perniciosa e doenas hepticas que evoluam com quadro de insuficincia funcional do rgo. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram realizados 42 testes em amostras cujos teores de colesterol situavam-se no intervalo de 115 a 418mg/dL. Esses ensaios foram realizados em paralelo com uma metodologia de referncia. A comparao do kit de Colesterol 250 Doles (Y) com a metodologia mencionada (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= 7,36 + 0,979X, sendo o coeficiente de correlao 0,98. Testes mostram uma recuperao de 99 2,5%. O erro da mdia foi de 1,08%. Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas, com 3 amostras, obtendo-se os seguintes resultados: Amostra 1 Concentrao (mg/dL) 110,39 1,52 Amostra 2 210,35 2,02 0,96 Amostra 3 381,32 4,37 1,15

Diluio da matriz: estudos sucessivos de diluio da matriz mostraram que no h interferncia na sensibilidade diagnstica da presente metodologia enzimtica.

Substncias interferentes: substncias redutoras, como cido Ascrbico e Bilirrubina, podem interferir na determinao do colesterol, pois os mesmos consomem o perxido de hidrognio, produzindo resultados falsos. A Bilirrubina interfere quando presente em concentraes superiores a 5mg/dL, podendo haver um decrscimo de 5% do valor do colesterol. Amostras turvas, que contenham triglicrides elevados, podem interferir com a presente metodologia. A presena de cido rico em concentraes anormalmente elevadas, no interferem na determinao do colesterol total pelo mtodo enzimtico. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Trinder. P.: Ann: Clin.biochem., 6,24; l969. D.Braham e P. Trinder: Analyst 97; 1972. Allain,C.C.; Poon, L.S.: Clin. chem. 20:470; 1974. Pesce, A.J.; Kaplan, L.A.: Methods clinical chemistry, 1156-1178, 1987. Pagana K.D.: Mosbys diagnostic and laboratory test reference, 190-192, 1992. Cockayne, S; Anderson S.C.: Clinical chemistry: concepts and applications, 173 - 174, 1993. Tibrcio, H.M.: Controle interno da qualidade analtica, 1aed. maro/1995. Henry, J.B.: Clinical diagnosis and management by laboratory methods, 19a ed, 214-215, 1996. Doles: dados de arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Todos os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento dos mesmos, se obedecidas as condies abaixo: 1.O usurio do sistema seguir, rigorosamente, o procedimento tcnico. 2.As condies de armazenamento devero estar de acordo com o estabelecido nas instrues de uso. 3. Os materiais necessrios e no fornecidos devero estar em boas condies tcnicas. Todos os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reagentes e Equipamentos para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 1273, Lt.07, Chcara Retiro CEP: 74001-970 Goinia - GO - Brasil Caixa Postal 1051 e-mail: doles@doles.com.br www.doles.com.br M.S.: no 10231810004 Reviso: 16 (10/2007)

Desvio padro

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, obtendo-se os seguintes resultados: Amostra 1 Concentrao (mg/dL) 112,24 1,81 Amostra 2 223,56 2,48 1,11 Amostra 3 360,36 4,06 1,13

Coeficiente de variao (%) 1,38

Desvio padro

Especificidade: a presente metodologia mais especfica que os mtodos qumicos, estando sujeita a raras substncias interferentes, pois a colesterol oxidase pode reagir com outros esteris. Os mtodos enzimticos so mtodos de referncia e de primeira escolha para determinao do colesterol total, com boa preciso e coeficientes de variao entre 1% e 2%. Sensibilidade: a absorvncia encontrada, de 0,002, corresponde a 1,0mg/dL de concentrao de colesterol, quando medida em espectrofotmetro, em 510nm. A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio.

Coeficiente de variao (%) 1,61

Sistema da Qualidade certificado desde 1999

3/3