I/ Dfinition et Origine des Biotechnologies II/ Les g / grands outils de la biotechnologie moderne g II.

1 Apport du Gnie Gntique - Amlioration des connaissances - Acclration de lamlioration des organismes - largissement des performances des organismes II.2 Techniques du Gnie Gntique - Isolement de gnes dintrt l d d - Transformations gntiques II.3 L l II 3 Le clonage - Plantes - Animaux

I/ Dfinition et Origine des Biotechnologies g g

DEFINITIONS

Karl Ereky (1913) : ensemble des procds qui utilisent des organismes vivants pour la production de produits finis p p p OCDE (2000) : lapplication de la science et de la technologie aux organismes
vivants et dautres matriaux vivants ou non vivants, pour la production de savoir, d autres biens et services .

Technologies Microbiologie Biochimie Gntique Informatique

Vivant

Industrie Sant Agriculture Agroalimentaire Environnement Chimie

ORIGINE

9000 A JC (nolithique) Av (nolithiq e) Formes primitives d'obtention de boissons alcoolises, de pain, de fromage et de yoghourt Matires premires Produits finis Microorganismes

Biotechnologie instinctive vs. Biotechnologie moderne

Mi- 19me : Avnement de la MICROBIOLOGIE - Mise en place dinstituts dtudes de la fermentation (Pasteur, Koch) Invention de la vaccination

Guerre 14 -18 = avance des procds de fermentation

butanol, thanol actone

caoutchouc synthtique peinture automobile, solvants

Guerre 39 45 = production en masse dantibiotiques

Mi- 19me : Avnement de la GENETIQUE

Cest une double-hlice

1950s 1865
Lhrdit t t k dans d Lh dit est stocke d des gnes qui dterminent les caractres

Le Dogme Central: Un lien existe entre gnes et protines

Mi- 20me : Avnement du GENIE GENETIQUE

1960 1970 : Dcouverte de lARN messager Dcodage du langage gntique

1970 1980 : Dcouverte de endonuclases de restriction Transformation gntique de bactries

GENIE GENETIQUE

1980 1990 : Dcouverte de lamplification en chane par polymrase Transformation gntique des premiers vgtaux

1990 2000 : D hiff Dchiffrage d gnomes d t lh de dont lhumain i Transformation gntique des premiers animaux

PLACE DE LA BIOTECHNOLOGIE MODERNE

1,7% de lconomie globale de lUE ~ agriculture et industrie chimique g q Environnement (protection)

ressources (eau) et de lnergie / amlioration des procds (chimie douce par les biocarburants, biolubrifiants, biodtergents partir de produits agricoles (gaz effet dpollution
de serre, valorisation des sous produits) enzymes dans les lessives fabrication des textiles du papier) lessives, textiles,

Sant
recherche et dveloppement de mdicaments, vaccins recombinants, production Ac monoclonaux (cancer), diagnostics prcoces (cancer)

Agroalimentaire

additifs (armes), diagnotics (tracabilit), enzymes dans les procds de ( ), g ( ), y p transformation (boulangerie, brasserie, laitages) , OGM

Industries (chimie, matriaux)

enzymes

II/ Les grands outils de la biotechnologie moderne II.1 Apport du gnie gntique II.2 Techniques de gnie Gntique

II.1 Apport du gnie Gntique Gnie gntique : ensemble des techniques permettant des interventions sur le gnome dun organisme.

Les outils du gnie gntique permettent une acclration de la connaissance du gnome et g de lexpression des gnes.

Un exemple : de 1990 2006 les scientifiques sattlent au squenage complet du gnome humain ( g (HGP) et dautres espces. )

Cartographie du gnome

Annotation du gnome : rechercher les squences codantes parmi lensemble du gnome Identification des rgions promotrices (TATA box) signaux de traduction (KOZAC) signaux de polyadnylation sites d i it dpissage

II.1 Apport du gnie Gntique Les outils du gnie gntique permettent une acclration de lamlioration des espces.
AMELIORATION CLASSIQUE TRANSFORMATION GENETIQUE

5 ans

6 mois

II.1 Apport du gnie Gntique Les outils du gnie gntique permettent labolition des barrires gntiques.
CROISEMENT CLASSIQUE TRANSFORMATION GENETIQUE

1973 : Le premier OGM, une bactrie exprimant un g p gne damphibien

II/ Les grands outils de la biotechnologie moderne II.1 Apport du gnie gntique II.2 Techniques du Gnie Gntique

II.2 Techniques du Gnie Gntique

possibilits de transferts de gnes et donc de caractres en contournant les voies naturelles de reproduction

1re tape : Extraction du gne dintrt partir du gnome de lorganisme donneur 2me tape : Transfert du gne dintrt dans le gnome de lorganisme receveur

II.2 Techniques du Gnie Gntique Extraction dun gne dintrt partir dune banque d un d intrt d une

Coupure de lADN par une ENDONUCLEASE de RESTRICTION l ADN

Premiers instruments pour manipuler le patrimoine gntique ( (1970) ) Moyen de dfense bactrien pour lutter contre les virus Spcifiques de squences palindromiques

II.2 Techniques du Gnie Gntique Extraction dun gne dintrt partir dune banque d un d intrt d une

Insertion des fragments dADN dans des PLASMIDES

petite molcule dADN circulaire d ADN unit auto-rplicative taux de rplication lev prsente en g p grand nombre dans la bactrie

II.2 Techniques du Gnie Gntique Extraction dun gne dintrt partir dune banque d un d intrt d une
Insertion des fragments dADN dans des PLASMIDES

AATTC G G CTTAA

G CTTAA AATTC G

II.2 Techniques du Gnie Gntique Extraction dun gne dintrt partir dune banque d un d intrt d une

Introduction des plasmides dans des bactries et CRIBLAGE

II.2 Techniques du Gnie Gntique

CRIBLAGE

Reprage de la colonie contenant le gne dintrt par hybridation dune sonde marque

II.2 Techniques du Gnie Gntique

1re tape : Extraction du gne dintrt partir du gnome de lorganisme donneur 2me tape : Transfert du gne dintrt dans le gnome de lorganisme receveur

II.2 Techniques du Gnie Gntique Insertion du gne dintrt dans un nouvel organisme LA TRANSGENESE
Micro-organismes Micro organismes gntiquement modifis ex : Production de linsuline dans une bactrie 3. Introduction du plasmide recombinant dans la bactrie

1. Extraction du gne d intrt dintrt partir dune d une banque dADN

2. Insertion du gne dintrt dans un plasmide

4. La bactrie utilise ce gne recombinant pour produire la protine dintrt di t t

II.2 Techniques du Gnie Gntique

1. Extraction du gne dintrt partir dune banque dADN d ADN

Plantes gntiquement modifies

2. Insertion du gne dintrt dans un plasmide dagrobactrium

3. La bactrie recombinante est mise au contact des cellules de plante

II.2 Techniques du Gnie Gntique

Plantes (suite)

4. Il y a transfert du gne entre le plasmide et le g p gnome de la plante

5. Les cellules gntiquement modifies sont cultives in vitro pour tre amplifies

6. 6 Une l t U plante entire peut-tre ti t t rgnre partir dune cellule gntiquement modifie

Rgnration de plantes in vitro

II.2 Techniques du Gnie Gntique Animaux gntiquement modifies

1. Extraction du gne dintrt di t t partir d ti dune banque dADN

2. Le gne dintrt est inject dans un ovule fcond prlev sur une mre porteuse t

Micro-injection j

II.2 Techniques du Gnie Gntique Animaux (suite)

3. Lembryon transgnique est r-implant dans la mre porteuse pour poursuivre son d l i dveloppement t

4. La descendance issue de lembryon gntiquement modifi exprime la protine dintrt

II.3 Le clonage g

Clonage danimaux
Transfert nuclaire 1. Prlvement dun noyau de cellule somatique (ex : glande mammaire) partir de lanimal a a e) pa a a cloner Retrait du noyau dun ovule non fcond dune mre porteuse

2.

3.

Introduction du noyau prlev sur lanimal cloner dans loocyte de la mre porteuse Application dun choc lectrique pour mimer le processus de fcondation Implantation de lembryon rsultant dans la mre porteuse

4.

5.

Clonage de vgtaux
Embryogense somatique

La totipotence des cellules vgtales permet la formation dembryon partir de lignes somatique. q

III/ Applications biotechnologiques modernes III.1 Biotechnologie et environnement 1a. Biorestauration 1b. Phytorestauration III.2 Biotechnologie et mdecine 2a. Protines thrapeutiques recombinantes 2b. Thrapie gnique -Traitement des maladies monogniques -Traitement des cancers III.3 Biotechnologie et agriculture 3a. Protection des cultures 3b. 3b Valorisations alimentaires 3b. Valorisations non alimentaires

III/ Applications biotechnologiques modernes III.1 Biotechnologie et environnement 1a. Biorestauration 1b. Phytorestauration III.2 Biotechnologie et mdecine 2a. Protines thrapeutiques recombinantes 2b. Thrapie gnique -Traitement des maladies monogniques -Traitement des cancers III.3 Biotechnologie et agriculture 3a. Protection des cultures 3b. 3b Valorisations alimentaires 3b. Valorisations non alimentaires

III.1 Biotechnologie et environnement 1a. Biorestauration La Biorestauration : dcontamination biologique des eaux et des sols par des microorganismes

Biorestauration : un terme nouveau (1987) pour une pratique ancienne Bi t ti t ti i 6000 ans avant JC : COMPOSTAGE des dchets vgtaux Fin 19me sicle : invention des STATIONS dEPURATION Aujourdhui : Polluants organiques issus de lindustrie Mtaux lourds - Radiolments Dgradation aise
Hydrocarbures Drivs de raffinage Hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) S l Solvants i d t i l ( t t industriels (actone) )

Dgradation partielle
Solvants chlors (ex : TCE) Polychloro-biphnyls (PCB) Dioxines

Efforts de recherche pour: Mtaux lourds (Hg, Pb, Cd, Zn, Tc) Non mtaux (Se, Ar) Radionuclides (U, 226Ra, 137Cs, 210Pb)

III.1 Biotechnologie et environnement 1a. Biorestauration

BIODEGRADATION

Destines des polluants p

BIOTRANSFORMATION

METAUX/RADIOELEMENTS COMPOSES ORGANIQUES BIODEGRADATION : dgradation du polluant (organique) en compos organique

p p g q (minralisation complte). p ) moins complexe ou en compos inorganique (

Le polluant agit comme source de carbone et dnergie Le polluant nest pas li au mtabolisme nergtique = Comtabolisme

Gouttelettes dhydrocarbures absorbs par une bactrie. Ces gouttelettes seront converties par la bactrie en acides gras qui serviront de source dnergie

III.1 Biotechnologie et environnement 1a. Biorestauration Destines des polluants

BIOTRANSFORMATION

Rductions e- de composs organiques p g q (lactate, actate)

METAUX/RADIOELEMENTS

U 6+, Cr 6+, Tc 7+
( y (oxyds, solubles, mobiles) ) Bactrie rductrice Geobacter prcipitant du Techtenium T ht i

U 4+, Cr 3+, Tc 4+
( (rduits, insolubles, immobiles) , , )

III.1 Biotechnologie et environnement 1a. Biorestauration Destines des polluants

METAUX ET RADIOELEMENTS

BIOTRANSFORMATION : modification de la structure atomique ou molculaire dun polluant (mtaux lourds, radiolments) le rendant indisponible. Gnralement par changement du degr doxydation du polluant BIOACCUMULATION : squestration d mtal li t i t ti du t l lintrieur d l b t i de la bactrie BIOSORPTION : association des mtaux sous forme soluble la surface de la bactrie (par interaction avec des molcules charges scrtes)

III.1 Biotechnologie et environnement 1a. Biorestauration Les technologies de la biorestauration = Traitement hors site

Biorestauration ex situ

Biorestauration en surface. Utilisation de bactries mthanotropes

Avantages : Bonne matrise des techniques et bon contrle des traitements g q ex : utilisation dans le traitement des eaux uses municipales Inconvnients : non applicable Polluants disperss p Polluants faiblement concentrs Sites inaccessibles

Biorestauration in situ

III.1 Biotechnologie et environnement 1a. Biorestauration Les technologies de la biorestauration Biorestauration in situ
In situ biorestauration deaux souterraines =biobarrire souterraine Biostimulation de bactries rductrices de mtaux : les mtaux lourds et radiolments sont immobiliss au niveau des zones dactivit.

Avantages : Plus conomique et moins p q perturbatrice pour lenvironnement (pas dexcavation ou de pompage) Applicable : 1. Polluants disperss 2. Polluants faiblement concentrs 3. Sites inaccessibles

Biorestauration in situ et ex situ : pratiques de la biostimulation (irrigation, aration apport de nutriments) et de la bi td ti t ) t d l bioaugmentation ( t ti (apports dorganismes t t d i trangers lcosystme mais adapts la dpollution du site).