INSPECCION Y MUESTREO

Arajo Montenegro D (1), Polanco Petit L (1). (1) Universidad de Santander, Cra 6 N 14 27 tel: 5742577 Valledupar dianalisneth-25@hotmail.com; leidypolanco03@hotmail.com ABSTRAC Es de gran importancia la inspeccin y muestreo en el laboratorio de alimentos, debido a que por medio de los mtodos de anlisis microbiolgico, se puede determinar si el alimento procesado est contaminado o s la contaminacin fue producida por el mal manejo higinico del producto; tambin por medio de estos mtodos se puede determinar si el producto es apto o no para el consumo humano. En la presente prctica, se realizaron las diferentes tcnicas de siembra, utilizadas en la inspeccin y muestreo que se lleva a cabo en el laboratorio de alimentos, estas son: tcnica de superficie, de aislamiento, por profundidad, por puncin y SWAB, en sta tambin se describen los procedimientos a seguir para realizar correctamente las tcnicas y obtener ptimos resultados. Despus de haberse llevado a cabo los respectivos procedimientos, fueron aislados satisfactoriamente los microorganismos objeto de estudio de la prctica, observando el crecimiento en cada uno de los agares utilizados, los cuales muestran las caractersticas correspondientes a Stahylococcus aureus, Escherichi coli, Proteus spp, y Salmonella spp, microorganismos que se pretendan investigar al inicio de la prctica. Con la realizacin de este laboratorio, se pretende aislar microorganismos como los anteriormente mencionados, que se pueden encontrar en los alimentos, por medio de las diferentes tcnicas de siembra que se utilizan en alimentos. PALABRAS CLAVES: inspeccin y muestreo, tcnicas de siembra, aislamiento.

INTRODUCCION Es de gran importancia la inspeccin y muestreo en el laboratorio de alimentos, debido a que por medio de los mtodos de anlisis microbiolgico, se puede determinar si el alimento procesado est contaminado o s la contaminacin fue producida por el mal manejo higinico del producto. Tambin por medio de estos mtodos se puede determinar si el producto est apto o no para el consumo humano. El principal objetivo de la prctica es aislar microorganismos que se pueden encontrar en los alimentos, por medio de las diferentes tcnicas de siembra que se utilizan en el laboratorio de alimentos.

MATERIALES Y MTODOS En el presente laboratorio, se realizaron diferentes tcnicas de siembra, utilizadas en la inspeccin y muestreo que se lleva a cabo en el laboratorio de alimentos. A continuacin se describe cada tcnica. Tcnica de superficie Se enciende el mechero y detrs de ste, Con una pipeta graduada estril, se toma 0.1 ml de la muestra (Staphylococcus aureus coagulasa positiva). Se agregan cuatro gotas en cada esquina, en dos cajas de Petri que contiene agar Baird Parker. Luego, con un asa de hockey se homogeniza la muestra en el agar, realizando movimientos circulares hasta que se absorba por completo la muestra en el agar. Despus se incuban a 361C por 24 horas.

Tcnica de aislamiento Se enciende el mechero y detrs de ste, Con un asa de aro, se toma la muestra (tubo que contiene Escherichia coli). Se agrega la muestra realizando un inculo (en cada una de las cajas) dos cajas de Petri que contienen agar EMB, realizando estras en ste en tres ngulos diferentes, tratando de que crezcan colonias aisladas. Se incuba a 445C por 24 horas. Tcnica de puncin Se enciende el mechero y detrs de ste, Con un asa recta, se toma una cantidad de muestra (tubo que contiene Salmonella spp.) Luego sta se introduce de forma recta en el agar TSI, una sola vez; haciendo estras en el bisel del agar. Se incuba a 361C. Se esteriliza el asa. Luego se toma nuevamente la misma cantidad de muestra. Se realiza una puncin en el agar LIA, se retira el asa y se vuelve a introducir, realizando as doble puncin. Al retirar el asa se realizan estras en el bisel del medio. Despus se incuba a 361C por 24 horas. Tcnica por profundidad Se enciende el mechero y detrs de ste, En una caja de Petri estril, se agregan 0.1 ml de la muestra (tubo que contiene Proteus spp). Luego, se llena la caja hasta la mitad con agar Mueller Hilton. Se realizan movimientos laterales y circulares a para que se homogenice la mezcla. Se incuba a 361C por 24 horas.

Tcnica de SWAB Se humedecen dos hisopos en agua destilada estril. Luego se escoge un sitio del laboratorio para realizar la siembra. En este caso se escogi el bao serolgico (50X2 cm). Se realiza una siembra masiva con los hisopos en el medio PC (Plate Count). Se incuba a 361C por 24 horas.

RESULTADOS Y DISCUSIONES Tcnica de aislamiento Se observaron colonias Verdosas con brillo metlico y centro negro azulado, caractersticas del microorganismo

aislado: Escherichia coli. Esto se debe a que ste posee la enzima beta galactosidasa, que utiliza la lactosa como sustrato principal, produciendo acidos mixtos. La eosina y el azul de metileno inhiben el crecimiento de Gram positivos. Tcnica de superficie Se observaron colonias convexas, de color negro, pequeas, del que son

caractersticas aureus resultado,

Staphylococcus positiva. a que Este este

coagulasa se debe

microorganismo reduce el telurito a

teluro y origina colonias de color grisceo-negro, y da reaccin sobre la yema de huevo produciendo alrededor de la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara ms externa. Tcnica de puncin Agar LIA: K/K H2S positivo: descarboxila el aminocido Lisina. Este resultado se da gracias a que, el microorganismo posee la enzima descarboxilasa, por lo cual descarboxila el aminocido lisina a cadaverina (amina primaria, liberando CO2) y debido a la alcalinidad, el pH se modifica y se observa un color morada o violeta-prpura.

Agar TSI: K/A con H2S positivo: No fermenta la Lactosa. El microorganismo no es capaz de fermentar la lactosa pero si es productor de H2S. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico.

Tcnica por profundidad No se observ crecimiento en el agar Mueller Hilton.

Tcnica SWAB Se observaron colonias amarillas,

puntiformes, cremosas, lo que sugiere que el sitio de donde se tom la muestra se encuentra contaminado.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES Las tcnicas de siembra utilizadas en la prctica, permitieron el aislamiento de microorganismos que se pueden encontrar en algunos alimentos y que pueden ser generados por contaminacin ya sea en el momento del procesamiento del producto o antes de dicho proceso.

En el agar Mueller Hilton no se observ crecimiento, esto pudo haberse dado por errores tcnicos durante el procedimiento de la tcnica como el adicionamiento del medio de cultivo a la caja de Petri cuando ste no tena la temperatura adecuada para ser adicionado al microorganismo, lo que trae consigo la muerte de ste.

BIBLIOGRAFIA Agar Baird Parker, recuperado 14 de agosto de 2011,

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/bairdparker.htm.

ENTEROBACTERIAS,

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MEDIO DE CULTIVO Bacteriologa General _ Catlogo 1015, 25 de septiembre de 2009, http://www.dibico.com/fichast/1015.pdf.

PRACTICAS

DE

MICROBIOLOGIA, Dr. Francisco

http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf,

Rodrguez Valera (Catedrtico de Universidad, rea de Microbiologa). WINN, KONEMAN Diagnstico Microbiolgico Texto y Atlas en Color, 6 edicin, Madrid .Espaa, Editorial Medica Panamricana