Biosurfactantes Producidos por Microorganismos Aislados de Sitios Contaminados

Prez Vargas Josefina1 y Calva Calva Graciano2

Tecnolgico de Estudios Superiores de Ecatepec, Posgrado en Ingeniera Bioqumica, Av. Tecnolgico s/n esq. Hank Gonzlez, Ecatepec, Estado de Mxico, Mxico CP 55210. E mail: djperezvargas@yahoo.com.mx
2 1

Centro de Investigacin y de Estudios Avanzados del IPN, Av. IPN 2508, Col. Sn. Pedro Zacatenco, Mxico, D. F. CP 07360 gcalva@cinvestav.mx

RESUMEN Los microorganismos producen una gran variedad de compuestos anfipticos, bipolares, con actividad superficial molecular extraordinaria: los biosurfactantes. Son producidos extracelularmente o son partes de la membrana celular de las bacterias, hongos y levaduras. Sus caractersticas anfipticas le proporcionan capacidad emulsificante que le permiten modificar la tensin superficial e interfacial ayudando a solubilizar molculas, individuales o en grupos, en solventes y superficies donde normalmente son insolubles, el incremento en la solubilizacin de compuestos txicos ha dado a los biosurfactantes una gran gama de aplicaciones y valor en la industria farmacutica, alimentaria y ambiental. En el presente trabajo se hace una revisin de las caractersticas, propiedades y efectos en diferentes condiciones ambientales. Se ha encontrado que estos compuestos son producidos por una gran variedad de microorganismos y an siendo de la misma familia pueden diferir en el comportamiento. Los biosurfactantes ayudan a degradacin de compuestos xenobiticos aunque el incremento en la biodisponibilidad, es un efecto positivo, este puede resultar negativo cuando el compuesto es txico para la salud humana, animal o vegetal.

INTRODUCCIN Los biosurfactantes son agentes anfipticos, que contienen restos hidrofbicos o no polares e hidroflicos o polares, con potente actividad superficial (Georgiou et al 1992). Son producidos por organismos vivos incluyendo animales, plantas y microorganismos, pero en su mayora son de origen microbiano (Banat 1995). Es importante conocer la relacin entre la disponibilidad de los residuos contaminantes y su susceptibilidad a un proceso de remediacin. En estudios a nivel laboratorio los sistemas modelo tomando muestras de sitios contaminados y cultivos microbianos individuales han mostrado resultados prometedores (Barathi y Vasudevan 2001, Bhandari et al 2000, Volkering et al 1995, 1998). Sin embargo, lo ms importante es el comportamiento de los contaminantes con microorganismos in situ en donde las condiciones no son ptimas (Hong 2002). Entre los contaminantes importantes se encuentran compuestos orgnicos como hidrocarburos del petrleo, pesticidas, solventes clorados e inorgnicos como metales y oxianiones. Es evidente que bajo condiciones favorables, los contaminantes y microorganismos o plantas interaccionan de manera natural que permiten la biodegradacin y restauracin del sitio contaminado. La biorremediacin utiliza el potencial fisiolgico de microorganismos y plantas, para eliminar o reducir la concentracin de los contaminantes ambientales hasta los niveles que son aceptados por las agencias reguladoras. El grado de la asociacin de contaminantes orgnicos e inorgnicos es regido por las complejas interacciones fisicoqumicas en la interfase. Esta asociacin involucra la absorcin hacia los constituyentes del suelo, secuestramiento con la matrix del suelo y la particin entre las fases lquidas acuosas y no acuosas que pudieran controlar el destino final de los contaminantes. Los compuestos orgnicos que se encuentran en la fase lquida no acuosa representan las sustancias que son relativamente insolubles hacen que permanezca la fuente contaminante por un periodo largo de tiempo. Los contaminantes presentan una fuente continua de entrada hacia la fase acuosa para ser degradada o para diluir la concentracin del mismo. Esto puede llevar a la biodisponibilidad del contaminante biodegradndose por accin de los microorganismos y reducir as la contaminacin (Ogram et al 1985; Miller y Alexander 1991). El rol que los microorganismos juegan en estos procesos es esencial en la remediacin al menos para contaminantes orgnicos y para la actividad de los microorganismos presentes de manera natural en estos sitios en donde se mejoran las condiciones de su crecimiento mediante las tcnicas de biorremediacin en donde se puede incluir la aereacin del material contaminado y la adicin de nutrientes (Christofi et al 1998; Ivshina et al 1998). Suplementando la fuente de microorganismos capaces de degradar contaminantes especficos (bioaumentacin), mejorando la desorcin de contaminantes particulares usando tensoactivos que aumenten la biodisponibilidad de los hidrocarburos hacindolos biodegradables (Deschenes et al 1995, Thibault et al 1996, Christofi et al 1998, Ivshina et al 1998, Oberbremer et al 1990, Zang y Miller 1992, Volkering et al 1995, Rahman et al 2002a, b). Los biosurfactantes se han aplicado en el lavado de suelo para una recuperacin del crudo y para limpiar el petrleo de las tuberas y en los tanques de almacenamiento (Osipow 1962). En el proceso de desorcin se ha utilizado tensoactivos sintticos y naturales (biolgicos). Sin embargo, no siempre se incrementa la biodisponibilidad de sustancias orgnicas no polares a travs del uso de tensoactivos y esto afecta la degradacin o la remocin. Los tensoactivos sintticos no son mejores para la disminucin de la degradacin posiblemente debido a la toxicidad del tensoactivo (Bruheim et al 1999, Rouse et al 1994). Este efecto tambin puede deberse a que siendo mas biodisponible tanto el contaminate como el agente tensoactivo son txicos para los microorganismos a la concentracin en la que se encuentra en el sitio contaminado.

QUE ES UN BIOSURFACTANTE? Se dice que un soluto es un agente tensoactivo o surfactante cuando da lugar a un descenso significativo de la tensin superficial. El descenso de la tensin facilita la eliminacin de las partculas contaminantes de las superficies slidas. Son molculas que contienen un segmento liposoluble (soluble en aceite) y otro hidrosoluble (soluble en agua o disolventes polares). La solubilidad parcial tanto en agua como en aceite permite al surfactante ocupar la interfase, reducen la tensin superficial y las tensiones interfaciales entre molculas individuales en la superficie y la interfase, respectivamente. Tienen propiedades emulsificantes. Tomando en cuentas estos criterios un biosurfactante sera una molcula biolgica (orgnica) con propiedades surfactantes o tensoactivas producidas sobre superficies vivas, principalmente superficies de clulas microbianas, o excretados al medio extracelular (Kosaric et al 1987, Muller et al 1993, Bognolo 1999). En la figura 1 se puede observar una representacin de un surfactante o agente tensoactivo se representa el carcter anfiflico; una parte hidrfila y otra hidrfoba.

a
Parte polar (cabeza) Parte apolar (cola)

Figura 1 Representacin de la estructura de una molcula de surfactante y fenmenos de formacin de emulsiones. a)surfactante, b)microemulsin aceite/agua orientacin de las molculas en donde la parte polar se encuentra expuesta hacia el seno del lquido. c) microemulsin agua/aceite la orientacin de las partes no polares se encuentran expuestas en el lquido.

Dependiendo de la orientacin del tensoactivo en la micela se obtienen dos tipos de microemulsiones: Microemulsiones de aceite en agua (o/w), o directas, cuando el surfactante esta en contacto con un medio acuoso la parte polar del tensoactivo se orienta hacia el exterior de la micela, mientras que la parte no polar se orienta hacia el interior.

Microemulsiones de agua en aceite (w/o), o inversas, en las que el medio continuo es no polar, la parte no polar del tensoactivo se orienta hacia el exterior y la parte polar va hacia el interior de la micela. Las propiedades que los biosurfactantes importantes que hacen que se ponga gran nfasis en los surfactantes son dos fenmenos: la capacidad de adsorberse a las interfases y su tendencia a asociarse para formar estructuras organizadas de los cuales se dar una breve revisin. Adsorcin: La caracterstica de la estructura polar-apolar, de la molcula de biosurfactante la hace orientarse de manera que el grupo polar est en el agua, mientras que el grupo apolar se ubica "fuera" del agua, en el aire o en el aceite, se puede decir que la energa libre de una molcula de surfactante a la interfase es inferior a la de una molcula solubilizada en el seno de una fase acuosa. La transferencia desde el seno de una fase acuosa a la interfase, llamada adsorcin es por lo tanto espontnea. La adsorcin del biosurfactante en una superficie gas-lquido o en una interfase lquidolquido, produce en general una reduccin de la tensin superficial o interfacial, de donde el nombre "tensoactivo". La tensin es responsable de la curvatura de las interfases, de la formacin de gotas, de un gran nmero de inestabilidades capilares y de numerosos fenmenos de estabilizacin de interfases. Las fuerzas capilares involucradas pueden ser considerables y se pueden encontrar aplicaciones en la fabricacin de adhesivos, la recuperacin mejorada de petrleo, la colocacin de una monocapa protectora, la contraccin de capas de petrleo flotando, etc. El descenso de la tensin favorece la deformacin y la ruptura de una interfase, la formacin de sistemas dispersos como las emulsiones o las espumas, la movilizacin del petrleo residual, la limpieza industrial, etc (Kosaric et al 1987, Muller et al 1993, Bognolo 1999, Schippers et al 2000). Asociacin Cuando a una solucin se le aade surfactante, este comienza por adsorberse a las interfases disponibles, luego su concentracin en forma monomolecular aumenta hasta que se forman las primeras micelas. La micela es un polmero de asociacin en el cual el surfactante alcanza una posicin favorable. En solucin acuosa la fuerza motriz principal que favorece la formacin de micelas es el efecto hidrfobo, es decir, la sustraccin de la parte apolar del surfactante del contacto con las molculas del agua y la formacin un contacto ms favorable con las partes apolares de otras molculas de surfactante. La formacin de micelas se produce como un compromiso entre dos tipos de efectos: el hidrfobo, que aumenta con el tamao de la cadena hidrocarbonada del surfactante, el de repulsin entre los grupos hidroflicos. Los efectos que favorecen la micelizacin producen un descenso de la Concentracin Micelar Crtica (CMC) y viceversa. Se ha hablado slo de micelas en medio acuoso, pero se puede considerar que los mismos fenmenos se producen en medios apolares. Las micelas son responsables en las soluciones de surfactantes: de la solubilizacin. A partir de la CMC, la solubilizacin aumenta considerablemente, ya que el hidrocarburo penetra dentro del corazn de las micelas (Kosaric et al 1987, Muller et al 1993, Bognolo 1999, Schippers et al 2000).

CLASIFICACION DE LOS BIOSURFACTANTES A continuacin se muestra en la tabla 1 la clasificacin de los biosurfactantes y algunas de sus propiedades.

Tabla1. Tipos y propiedades importantes de biosurfactantes producidos por microorganismos Biosurfactante Glicolipidos Ramnolidos Trehalolipidos Organismo Tensin superficial (mN/m) 29 25-30 32-36 30 38 33 CMC (mg / L) 50200 0.1-10 4 20 0.3 82 Tensin interfacial (mN/m) 0.25 1 14-17 3.5 15 1.8 0.9

P.aeroginosas P.seudomonas S.P. R. eritropolis N.eritropolis Micobacterias S.P. T.Bombicola T.aticola T.petrophilium U.zeae,U.maydis Rhodococcus ruber: B.licheniformis S.macescens P.fluorecens B.subtilis B.subdilis B.brevis B.polimyxa

Soforolipidos

Celulobiolipidos Complejo de glicolpidos Lipopeptidos y lipoprotenas Peptido-lpido Serrawetina Viscosina Surfactina Subtilisina Gramicidinas Polimixinas cidos grasos, lpidos neutros y fosfolipidos cidos grasos Lpidos neutros Fosfolipidos Surfactantes polimricos Emulsan Biodispersan Mananos-lpidos-protenas Liposano Carbohidrato-protena-lpido Protena PA Partculas biosurfactantes Vesculas y fimbrias Clulas enteras Surfactantes sinttico Dodecil sulfato de sodio Bromuro de cetiltrimetil amonio Tween 20 Alquilbencen sulfonatos lineares

26.8 27 28-33 26.5 27-32

54 12-20 150 23-160

0.9 0.1-0.3 1.0 1

C.lepus N. erythropolis T. Thiooxidans A.calcoaceticus A.calcoaceticus C. tropicalis C.lipolytica P.fluorescens D.polymorphis P.aeroginosa A.calcoaceticus Variety of bacteria

30 32

150

2 3

27

10

37.0 30.0 30.0 47.0

2120 1300 600 590

0.02 5.0 4.8 <1.0

Adaptada de Desai y Banat (1997), Georgiou et al (1992), excepto por complejo de glicolpidos; Zang y Miller (1992) y Finnerty (1994).

Rhodococcus ruber:

Los surfactantes microbianos son molculas complejas que cubren una amplia gama de estructuras qumicas incluyendo pptidos, cidos grasos, fosfolpidos, glicolpidos, antibiticos, lipopptidos. Los microorganismos tambin producen en algunos casos, biosurfactantes que son combinaciones de muchas estructuras qumicas como los surfactantes microbianos polimricos. Muchos surfactantes microbianos han sido purificados y sus estructuras qumicas conocidas. Mientras que los de alto peso molecular son generalmente heteropolisacridos polianinicos que contienen tanto polisacridos como protenas, los de bajo peso molecular suelen ser glicolpidos, la ms conocida es en base a la naturaleza qumica de la molcula que los constituye (Kosaric et al 1987). En la tabla 1 se muestra la clasificacin de los biosurfactantes y los ms representativos junto con los microorganismos que los producen, se muestran algunos ejemplos de surfactantes sintticos. Algo notable es que para igualar los efectos de tensin interfacial y superficial se requiere una concentracin del surfactante muy alta comparado con cualquiera de los biosurfactantes presentados en la tabla. Estas concentraciones elevadas de los agentes surfactantes los hacen txicos a cualquier sitio que se adicionen debido a que al solubilizar el contaminante si lo hacen mas disponible pero el problema es que la concentracin del surfactante es muy alta y causa toxicidad a los microorganismos que se encuentran en el sitio contaminado (Georgiou et al 1992, Zang y Miller 1992, Finnerty 1994). Debido a las caractersticas anfiflicas de los surfactantes las molculas tienden a concentrarse en las interfaces y a disminuir la tensin interfacial como se muestra en la figura 2a y 2b. Otra caracterstica importante de los surfactantes es que arriba de cierta concentracin (concentracin micelar crtica, CMC) forma agregados estables de entre 10 y 200 molculas a las cuales se les da el nombre de micelas, que pueden aumentar la solubilidad de los HAPs (Schippers et al 2000).

El efecto de la biodisponibilidad del compuesto orgnico por el surfactante puede explicarse por tres mecanismos: 1.- La dispersin de los compuestos orgnicos en fases de lquidos no acuosos las un incremento en la rea de contacto provocando una reduccin de la tensin interfacial entre la fase acuosa y la no acuosa. 2.- El incremento de la solubilidad aparente del contaminante, provoca la presencia de micelas que contienen altas concentraciones de hidrocarburos aromticos (Edwards 1991). 3.- El transporte facilitado del contaminante desde la fase slida en la cual puede causar una disminucin de la tensin superficial de los poros de las partculas de suelo y agua, la interaccin del surfactante con las interfaces slidas y la interaccin de contaminante con el surfactante. El primer mecanismo involucra no solo cuando los compuestos orgnicos estn presentes. Debido a que ambos mecanismos puede causar un incremento en la velocidad de transferencia de masa hacia la fase acuosa, la contribucin relativa de estos dos mecanismos mejora la biodisponibilidad del sustrato son a menudo desconocidas o confundidas. Schippers et al (2000) sugiere estos mecanismos para la biodegradacin de HAPs por surfactantes los cuales estn representados en la figura 2A al C. En la primera figura la bacteria es capaz de tomar el contaminante desde el corazn de la micela (Miller y Bartha 1989). En el segundo mecanismo los surfactantes incrementa la transferencia de masa de los contaminantes a la fase acuosa para un posterior uso por los microorganismos. En el tercer mecanismo la adicin de los surfactantes cambia la hidrofobicidad celular facilitando el contacto directo centre la clula y el hidrocarburo. Un cuarto mecanismo pudiera ser en el cual el surfactante ayuda al microorganismos a adsorber desde las partculas de suelo ocupadas por el contaminante, asi disminuye la longitud del paso en la

difusin entre la adsorcin del sitio y el sito de la entrada hacia el microorganismo (Poeton et al 1999, Underwood et al 1992).

Figura 2. Mecanismos que se presentan en el aumento de la biodisponibilidad de los hidrocarburos aromticos policclicos (HAP). a) Entrada directa del hidrocarburo en la micela, b) entrada de HAP desde la fase acuosa despus de ser liberado de la micela, c) Entrada directa facilitada del HAP a travs del contacto clula-surfactante-HAP y d) Entrada hipottica de un biosurfactante no micelar que favorece la solubilizacin del HAP. A C adaptado de Schippers et al (2000), Randhir y Rockne (2003).

En la biorremediacin en vertidos de petrleo, estudios recientes han mostrado que se puede utilizar el poder solubilizante de las micelas para extraer ciertas sustancias contaminantes an cuando su concentracin sea extremadamente baja. Las funciones que haran estos biosurfactantes al aumentar la biodisponibilidad seran: dispersar el petrleo aumentando la superficie de contacto, aumenta la biodisponibilidad de compuestos hidrofbicos, principalmente los de bajo peso molecular, poseen la caracterstica de seleccin hacia los microorganismos (Mulligan et al 2001, Rosenberg y Ron 1999, Kosaric

1992). Pueden ayudar a los microorganismos productores a desprenderse de las gotas de petrleo una vez se ha agotado la fuente de hidrocarburo que utilizaba. Es necesario recordar que los microorganismos suelen utilizar un solo tipo de hidrocarburo entre la mezcla compuestos. Por ello se desprenden de las interacciones hidrofbicas que mantienen la membrana y la gota de petrleo cuando el compuesto se ha agotado, para ir en busca de nuevas gotas con la fuente de carbono que el microorganismo utiliza, adems de marcar con una microcpsula a la gota de hidrocarburo que ha sido usada, favoreciendo as a toda la poblacin. La eleccin del surfactante se hace principalmente en base al costo del producto (Mulligan et al 2001). En general los surfactantes son utilizados para ahorrar energa en consecuencia el costo de la energa gastada en el proceso de produccin es importante (por ejemplo el costo de la energa requerida para bombear, la bomba y la tcnica de tratamiento) El tipo de carga, el comportamiento fisicoqumica, la solubilidad y adosorcion son algunos de los criterios importantes de seleccin de los surfactantes. ltimamente se ha abierto el mercado hacia el uso de los surfactantes en la biorremediacin de sitios contaminados (Oberbremer et al., 1990). Debido a las caractersticas de los surfactantes se han usado adicionados a solventes orgnicos, agentes quelantes, cidos y bases para mejorar la remocin de metales (Kosaric el al., 1987).

USOS DE LOS BIOSURFACTANTES Los contaminantes hidrofbicos presentes en los hidrocarburos del petrleo, suelos y aguas del medio ambiente requieren su solubilizacin antes de ser degradados por la clula microbiana. La mineralizacin est gobernada por la desorcin de los hidrocarburos del suelo. Los surfactantes pueden aumentar el rea de los materiales hidrofbicos, como pesticidas en suelos y agua del medio, aumentndose as su solubilidad en agua. Por tanto, la presencia de biosurfactantes puede aumentar la degradacin microbiana de los contaminantes. Se le ha dado una atencin considerable a la produccin de molculas tensoactivas de origen biolgico por sus aplicaciones en el procesado de alimentos, aromatizacin de bebidas alcohlicas, reciclaje de papel, fabricacin de pulpa de papel, en farmacologa, y la industria del petrleo. En relacin a esa ltima aplicacin, los accidentes que llevan a vertidos de petrleo han llegado a ser numerosos y han causado catstrofes tanto sociales como ecolgicas recordemos el Exxon Valdz en 1986 el Ixtoc 1986, la guerra del Golfo (Prince 1993). La habilidad de los biosurfactantes para emulsionar hidrocarburos mezclados con agua ha sido ampliamente difundida. Se ha demostrado que las propiedades emulsificantes favorecen la degradacin de los hidrocarburos en el medio ambiente, esto los hace muy tiles para el control de la contaminacin por vertidos de aceites y petrleo. Las posibles aplicaciones de los biosurfactantes han sido estudiadas ampliamente en compuestos poliaromticos los cuales son muy txicos debido a su casi nula solubilidad en agua. Los hidrocarburos aromticos policclicos (HAPs), representan problemas de contaminacin debido a su baja solubilidad, la aplicacin de surfactantes sintticos y microbianos ayudan mejorar la biodegradacin de estos compuestos debido al aumento de la solubilidad (Ganeshalingham et al 1994, Maslin y Maier 2000). Se ha estudiado el efecto de los ramnolpidos en la biodegradacin de contaminantes orgnicos, obtenindose resultados ambiguos. Hay un especial enfoque en la baja solubilidad de los hidrocarburos. Maier y Soberon-Chavez (2000) muestran que la adicin de los ramnolpidos mejora la biodegradacin de hecadecano, octadecano, n-parafinas y fenantreno en sistemas lquidos, y de hexadecano, tetradecano, pristano, creosota y mezclas de hidrocarburos en suelos. Esto es explicado por dos mecanismos: uno se relaciona con la solubilidad de sustrato y as puede ser utilizados por las clulas microbianas y la interaccin con la superficie de la

clula donde se incrementa la hidrofobicidad de la superficie permitiendo que los sustratos hidrofbicos se asocien ms fcilmente (Shreve et al., 1995; Zhang and Miller, 1992). Zhang y Miller (1992) demostraron que una concentracin de 300 mg/L de ramnolpidos incrementa la mineralizacin de octadecano hasta en un 20% en comparacin con el 5% cuando no se utilizan ramnolpidos. Beal and Betts (2000) mostraron que la hidrofobicidad de la superficie celular incrementa con la utilizacin de cultivos que producen surfactantes que por aquellas que no los producen cuando son crecidas en hexadecano. Los ramnolpidos tambin aumentan la solubilidad de hexadecano de 1.8 a 22.8 mg/L, sin embargo tambin se ha encontrado que puede haber inhibicin esto debido a que puede haber toxicidad del hidrocarburo hacia el microorganismo. En estudios realizados por Churchill et al. (1995) muestran que los ramnolpidos utilizados con un fertilizante (Inipol EAp-22) mejora de biodegradacin de compuestos alifticos y aromticos en reactores de fase acuosa y de suelos. Se ha estudiado el efecto del biosurfactante producido por Pseudomona aeruginosa en la degradacin de hexadecano (Noordman et al. 2002), y se ha encontrado que el biosurfactante puede aumentar la biodegradacin durante los procesos de velocidad limitante, por ejemplo cuando el tamao de poro es pequeo (6 nm), el hexadecano es atrapado en los poros, la adicin del ramnolpido estimula la liberacin del sustrato atrapado en los poros por lo tanto se mejora la biodegradacin, las condiciones del mezclado deben ser bajas en el reactor de columna. Los pesticidas son otro grupo de contaminantes que tambin se han estudiado debido a su toxicidad y dificultad para ser biodegradados, Mata-Sandoval et al (2000) estudiaron la solubizacin de pesticidas comparando los ramnolpidos y el Triton X-100, encontraron que el Tritn solubilizaba mas del doble de concentracin de los pesticidas que los ramnolpidos. Sin embargo se encontr que los ramnolpidos forman una asociacin micelar ms fuerte con los pesticidas que hacen lenta su liberacin en la clula lo que puede ser de mucha utilidad en la entrada de estos compuestos debido a su toxicidad, sin embargo esto requiere un estudio mas detallado (Maslin y Maier, 2000).

PRODUCCION DE LOS SURFACTANTES MICROBIANOS El inters por los surfactantes microbianos ha aumentado en los ltimos aos debido a sus diversas caractersticas como una efectiva selectividad, no txicos para la naturaleza, estabilidad a elevadas temperaturas, a pH y concentracin de sales. Adicionalmente los biosurfactantes en comparacin a muchos surfactantes sintticos tienen la ventaja de poder producirse por fermentacin. Hay clulas microbianas intactas con una superficie celular altamente hidrofbica que ellas mismas actan como biosurfactantes. En algunos casos, los propios surfactantes juegan un papel natural en el crecimiento de las clulas microbianas sobre sustratos insolubles en agua. Los surfactantes extracelulares estn implicados en la adhesin celular, emulsin, dispersin, floculacin, agregacin celular y fenmenos de desorcin. Aunque el tipo y cantidad de surfactante microbiana producido depende principalmente del organismo productor, factores como el carbono y el nitrgeno, elementos traza, temperatura y aireacin, afectan a su produccin por el organismo (Desai y Banat 1997). Se ha encontrado que los biosurfactantes tienen efectos antibiticos y de inhibicin del crecimiento del virus de inmunodeficiencia humana en leucocitos. El surfactante producido por Rhodococcus erythropolis ha sido reportado como inhibidor del virus simple del herpes y el virus de la influenza con una dosis letal de 10 a 30 g/ml (Desai y Banat 1997). La produccin de un biosurfactante se ve influenciada decisivamente por la composicin y concentracin de los componentes del medio (Maslin y Maier 2000). La sntesis de las partes hidrofbica e hidroflica, involucran la sntesis de dos precursores y la utilizacin de un grupo especfico de enzimas. De acuerdo a Dessai y Banat (1997) y Kuiper et al (2004), existen diferentes posibilidades para la biosntesis de biosurfactantes.

1. Sntesis de las partes hidrofbica e hidroflica por dos rutas independientes seguidas de su enlace para la formacin de una molcula completa de biosurfactante. 2. Sntesis de la parte hidroflica y la sntesis del sustrato dependiente de la parte hidrofbica y su posterior unin. 3. Sntesis de la parte hidrofbica, y la sntesis sustrato-dependiente de la parte hidroflica seguida de su unin. Esencialmente existen tres fenmenos que regulan la sobreproduccin de biosurfactantes, la induccin, la represin y el efecto de la fuente de nitrgeno y cationes multivalentes (Almazn, et al, 2000). 1. Induccin. En general los microorganismos producen biosurfactantes cuando crecen a expensas de sustratos inmiscibles en agua. 2. Represin. La represin catablica de la sntesis de biosurfactantes por glucosa o metabolitos primarios, es uno de los mecanismos regulatorios importantes encontrados en los microorganismos. La funcin de la biosurfactante esta relacionada a la cadena de hidrocarburo, y por lo tanto stos son sintetizados predominantemente por microorganismos degradadores de hidrocarburos. 3. Efecto de la fuente de nitrgeno y cationes multivalentes. La fuente de nitrgeno en el medio juega un papel muy importante en el metabolismo celular, incluyendo la produccin de biosurfactantes. La limitacin de cationes multivalentes tambin causa una sobreproduccin de biosurfactante (Kosaric, 1993). Bacillus pumilus (28-11) produce biosurfactantes con una gran capacidad de emulsionar y eliminar hidrocarburos. Esto hace que se considere a Bacillus como un microorganismo prometedor en el campo de la biorremediacin (Calvo et al 2004). Candida ishiwade (Tailandia) es una levadura termotolerante que produce monoacilgliceroles y glicolpidos (Thanomsub et al 2004). Pseudomonas sp. Pueden reducir la tensin superficial, estabilizar emulsiones, y promover la formacin de espumas y generalmente son no txicos, no peligrosos y biodegradables. Debido a su diversidad, inocuidad para el medio ambiente, posibilidad de produccin a gran escala, selectividad, efectividad bajo condiciones extremas en pequeas cantidades, produccin sobre recursos renovables, y sus aplicaciones potenciales para la proteccin del medio ambiente, los biosurfactantes han ganado importancia frente a los surfactantes qumicos. Hay que aadir el valor del carbohidrato presente, la ramnosa de los ramnolpidos biosurfactantes, es usada para el transporte de farmacos insolubles en humanos y acta como precursor de componentes de saborizantes de alta calidad. Los biosurfactantes potencian la emulsin de hidrocarburos y por eso tienen el poder de solubilizar hidrocarburos y aumentar su disponibilidad para la degradacin microbiolgica (Kuiper et al 2004, Rahman et al 2002a, b). Pseudomonas aeruginosa LBI produce ramnolpidos, sintetiza diferentes homlogos que poseen caractersticas similares con respecto a sus propiedades superficiales. Se han podido analizar 28 homlogos de este grupo de ramnolpidos. Pseudomona aeruginosa produce ramnolpidos cuando crece utilizando carbohidratos como fuente de carbono. Los biosurfactantes producidos por Pseudomona poseen propiedades de reduccin de la tensin superficial e interfacial, en lquidos, slidos y gases as como actividad antimicrobiana. La actividad bactericida hacia bacterias Gram positivas. Pseudomona putida PCL1445 produce biosurfactantes a nivel industrial, se han caracterizado dos lipopptidos con actividad biosurfactante: putisolvin I y putisolvin II; los cuales inhiben la formacin de biopelculas o provoca la destruccin de las mismas teniendo efecto bactericida por inhibir la adhesin de los microorganismos patgenos a la membrana celular. Este tipo de microorganismo ha sido aislados de la raz de una planta, crecida en una zona contaminada con PAHs (hidrocarburos aromticos poli cclicos), el biosurfactante es producido al final de la fase de crecimiento (Kuiper et al 2004).

10

CONCLUSIONES Los biosurfactantes tienen potencial aplicacin en los procesos de biorremediacin de sitios contaminados debido a que favorecen la solubilidad de compuestos hidrofbicos permitiendo as su utilizacin como fuentes de carbono. Los biosurfactantes son compuestos que pueden ser utilizados en procesos de extraccin y limpieza de sitios en donde hay hidrocarburos sin provocar mayor contaminacin debido a que son biodegradables. Es importante conocer los procesos que dominan en los sitios contaminados ex situ para aplicar el biosurfactante adecuado que permita mejorar el proceso de biorremediacin. Los biosurfactantes pueden ser utilizados en concentraciones pequeas comparados con los sintticos y causan menos efectos txicos tanto al ambiente como a los microorganismos degradadores. Hay varios microorganismos que son productores de biosurfactantes utilizando diferentes fuentes de carbono no convencionales.

BIBLIOGRAFIA Almazn V., Gonzlez J.M., Prez J.J., Dieguez F., Villaverde M.J., Prez G., Joseph N., and Gan R. (2000). Purificacin e identificacin de la naturaleza qumica de un tensoactivo producido por Pseudomonas aeruginosa cepa IDO-330. Revista Biologa 14 (2): 172-177. Banat I. M. (1995). Characterization of biosurfactantes and their use in pollution removal. State of the art (Review). Acta Biotechnol. 15 (3):251-267. Barathi, S., Vasudevan, N., 2001. Utilisation of petroleum hydrocarbons by Pseudomonas fluorescens isolated from a petroleum-contaminated soil. Environ. Int. 26 (56), 413416. Beal R., and Betts W.B. (2000). Role of rhamnolipid biosurfactants in the uptake and mineralization of hexadecane in Pseudomonas aeruginosa. J. Appl. Microbiol. 89, 158168. Bhandari, A., Novak, J.T., Dove, D.C. (2000). Effect of soil washing on petroleum-hydrocarbon distribution on sand surfaces. J.H.S.R. 2(7), 113. Bognolo, G. (1999). Biosurfactants as emulsifying agents for hydrocarbons. Colloids Surf. A: Physico. Chem. Eng. Aspects 152 (12), 4152. Bruheim, P., Bredholt, H. and Eimhjellen, K. (1999) Effects of surfactant mixtures, including corexit 9527, on bacterial oxidation of acetate and alkanes in crude oil. Appl. Environ. Microbiol. 65, 1658 1661. Calvo C., Toledo F. L., Gonzalez-Lopez J. (2004). Surfactant activity of a naphthalene degrading Bacillus pumilus strain isolated from oil sludge. J.Biotechnol.109 (3): 255-262. Christofi N., and Ivshina I.B. (2002). Microbial surfactants and their use in field studies of soil remediation. J. Appl. Microbiol., 93, 915929. Christofi N., Ivshina I.B., Kuyukina M.S., and Philp J.C. (1998). Biological treatment of crude oil contaminated soil in Russia. In Contaminated Land and Groundwater: Future Directions ed. Lerner, D.N. and Walton, N.R.G. pp. 4551. Engineering Geology Special Publication, 14. London: Geological Society. Desai J., Banat I. (1997). Microbial production of surfactants and their commercial potential. Microbiol Mol Rev 61:4764.

11

Deschenes, L., Lafrance, P. and Villeneuve, J.P. (1995) The effect of anionic surfactant on the mobilisation and biodegradation of PAHs in creosote-contaminated soil. Hydrol. Sci. 40, 471484. Georgiu G., Sung-Chyr L., and Mukul M. S. (1992). SurfaceActive Compounds from Microorganisms Biotechnology 10: 60-65. Hong K.-J., Tokunaga S., Kajiuchi T. (2002). Evaluation of remediation process with plant-derived biosurfactant for recovery of heavy metals from contaminated soils. Chemosphere 49 (4), 379438. Ivshina I.B., Kuyukina M.S., Philp J.C., and Christofi N. (1998) Oil desorption from mineral and organic materials using biosurfactant complexes produced by Rhodococcus species. World J. Microbiol. Biotech. 14, 711717. Kosaric N., Cairns W.L., Gray N.C.C. (1987). Biosurfactants and Biotechnology. Marcel Dekker, New York/ Basel. Kosaric, N. (1992). Biosurfactants in industry. Pure & Appl. Chem. 64(111): 1731-1737. Kuiper I., Lagendijk E. L., Pickford R., Derrick J. P, Lamers G. E. M., Thomas-Oates J. E., Lugtenberg B. J. J., and Bloemberg G. V. (2004). Characterization of two Pseudomonas putida lipopeptide biosurfactants, putisolvin I and II, which inhibit biofilm formation and break down existing biofilms. Molec. Microbiol. 51 (1): 97-113. Maier, R.M., Soberon-Chavez, G. (2000). Pseudomonas aeruginosa rhamnolipids: biosynthesis and potential applications. Appl. Microbiol. Biotechnol. 54, 625633. Miller M.E., and Alexander M. (1991). Kinetics of bacterial degradation of benzylamine in a montmorillonite suspension. Environ. Sci. Technol. 25, 240245. Muller H., Blaszczyk R.R., Wagner F., Kosaric N. (1993). Biosurfactants for environmental control. In: Kosaric, N. (Ed.), Surfactant Science Series, 48: Biosurfactants. Marcel Dekker, New York, pp. 447469. Noordman W. H., Wachter J. J. J., de Boer G.J., Janssen D. B. (2002). The enhancement by biosurfactants of hexadecane degradation by Pseudomonas aeruginosa varies with substrate availability. J. Biotech. 94, 195212. Oberbremer A., Muller-Hurtig R., and Wagner F. (1990) Effect of the addition of microbial surfactants on hydrocarbon degradation in a soil population in a stirred reactor. Appl. Microbiol. Biotechnol. 32, 485489. Ogram A.V., Jessup R.E., Ou L.T., and Rao P.S.T. (1985) Effects of sorption on biological degradation of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid in soils. Appl. Environ. Microbiol. 49, 582587. Osipow L.I. (1962). Surface Chemistry, Theory and Industrial Applications. New York: Rheinhold. Parkinson M. (1985). Bio-surfactants. Biotech. Adv. 3 (1): 65-83. Rahman K.S.M., Rahman T. J., McClean S., Marchant R., and Banat I. M. (2002). Rhamnolipid biosurfactant production by strains of Pseudomonas aeruginosa using low-cost raw materials. Biotechnol. Prog., 18 (6), 1277 -1281. Rahman K.S.M., Banat I.M., Thahira J., Thayumanavan T. and Lakshmanaperumalsamy P. (2002) Bioremediation of gasoline contaminated soil by a bacterial consortium amended with poultry litter, coir pith and rhamnolipid biosurfactant. Biores. Technol. 81, 2532.

12

Randhir S., and Rockne K. J. (2003). Comparison of synthetic surfactants and biosurfactants in enhancing biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons. Environ. Toxicol. Chem. 22 (10): 22802292. Ron E. Z., and Rosenberg E. (2002). Biosurfactants and oil bioremediation. Cur. Op. Biotechnol. 13:249-252. Rosenberg E., and Ron E. Z. (1999). High- and low-molecular-mass microbial surfactants. Appl Microbiol Biotechnol 52: 154-162. Rouse J.D., Sabatini D.A., Suflita, J.M. and Harwell, J.H. (1994). Influence of surfactants on microbial degradation of organic compounds. Critical Reviews in Environ. Sci. Technol. 24, 325 370. Schippers C., Gessner K., Mueller T., and Scheper T. (2000). Microbial degradation of phenanthrene by addition of a sophorolipid mixture. J Biotechnol 83:189198. Shreve G.S., Inguva S., and Gunnan, S. (1995). Rhamnolipid biosurfactante enhancement of hexadecane biodegradation and Pseudomonas aeruginosa. Molec. Mar. Biol. Biotech. 4, 331337. Thanomsub B., Watcharachaipong T., Chotelersak K., Arunrattiyakorn P., Nitoda T., and Kanzaki H. (2004). Monoacylglycerols: glycolipid biosurfactants produced by a thermotolerant yeast, Candida ishiwadae. J. Appl. Microbiol. 96(3): 588-592. Thibault S.L., Anderson M., and Frankenberger W.T. (1996). Influence of surfactants on pyrene desorption and degradation in soils. Appl. Environ. Microbiol. 62, 283287. Volkering F., Breure A.M., and Rulkens W.H. (1998). Microbiological aspects of surfactant use for biological soil remediation. Biodegradation 8:401417. Volkering F., Breure A.M., van Andel J.G. and Rulkens W.H. (1995) Influence of nonionic surfactants on bioavailability and biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons. Appl. Environ. Microbiol. 61, 16991705. Zhang Y., and Miller R. M. (1992). Enhanced octadecane dispersion and biodegradation by a Pseudomonas rhamnolipid surfactant (biosurfactant). Appl Environ Microbiol. 58(10): 3276-3282. Mata-Sandoval, J.C., Karns, J., Torrents, A. (2001). Influence of rhamnolipids and Triton X-100 on the biodegradation of three pesticides in aqueous and soil slurries. J. Agric. Food Chem. 49, 32963303. Maslin, P., Maier, R.M. (2000). Rhamnolipid-enhanced mineralization of phenanthrene in organicmetal co-contaminated soils. Bioremediation J. 4, 295308. Ganeshalingham S, Legge R, Anderson W. (1994). Surfactant enhanced leaching of polyaromatic hydrocarbons from soil. Trans. Ins. Chem. Eng. 72:247251. Miller R. (1995). Surfactant enhanced bioavailability of slightly soluble organic compounds. In Skipper H, Turco R, eds, BioremediationScience and Application. Soil Science Society of America, Madison, WI, pp 3354. Miller R, Bartha R. (1989). Evidence from liposome encapsulation for transport-limited microbial metabolism of solid alkanes. Appl Environ Microbiol 55:269274. Poeton T, Stensel H, Strand S. (1999). Biodegradation of polyaromatic hydrocarbons by marine bacteria: Effects of solid phase

13

on degradation kinetics. Water Res 33:868880. Underwood J, Debelak K,Wilson D, Means J. (1993). Soil cleanup by in-situ surfactant flushing. Sep Sci Technol 28:15271537. Finnerty W. (1994). Biosurfactants in environmental biotechnology. Curr Opin Biotechnol 5:291 295. Mulligan C, Yong R, Gibbs B. (2001). Surfactant-enhanced remediation of contaminated soil: A review. Engineering Geology 60:371380.

14