Preparacin del agar nutritivo para las bacterias. El frasco de agar dice 23 g/l.

Y nosotros queremos preparar aproximadamente 200 ml, ya que cada caja se le va a vaciar aproximadamente 15 a 20 ml. Se va a pesar 4.6 gr de agar nutritivo en la balanza granataria. Se agregan inicialmente 50 ml de agua al matraz de 500 ml y se le agrega el agar, luego se le vaca el agua que es otros 50 ml sobre el papel ya que se puede quedar pegado el agar en el papel, despus se agregan los 100 ml de agua restantes. Entonces con un mechero se pone a calentar el agar que hay en el matraz, dndole vueltas sobre la llama del mechero, hasta que quede transparente a eso se le llama clarificar el agar. Se deja enfriar y se pone en una olla de presin, para que se esterilice el agar y poder vaciarlo en las cajas, una vez que haya llegado a 121 C y 15 lbf / in2 se comienza a contar 15 minutos y dejar enfriar. Luego se agarra el matraz y no este muy caliente, pero tampoco fri ya que puede gelificarse, se prende el mechero y hay un rea aproximadamente de 30 cm alrededor del mechero estril, se ponen las cajas boca abajo y se agarra una , se destapa el matraz se flamea la boca del mismo y se vaca en la caja aproximadamente 15 ml, se cierra la caja y se asienta hasta que gelifique. Una vez que se hayan vaciado todas las cajas el agar, se espera a que gelifique, se ponen boca abajo y se envuelven con papel dextrasa o vitafilm y se guardan en el cuarto fro. Preparacin de la solucin salina al 0.85% para los tubos de ensayo. El peso del sodio es de 23 gr y el peso molecular del cloro es de 35.5 gr., Entonces el peso total de la muestra para preparar 1 litro de solucin es de 58. 5 gr., pero se necesita que la solucin este a 0.85% y se le va agregar a cada tubo 9 ml , como son 10 tubos son 90 ml, pero se necesita que este al 0.85%, entonces se hacen los siguientes clculos: Se pesan 0.04475 gr de NaCl y se diluye en 90 ml de agua, luego se vaca en cada tubo 9 ml de la solucin salina y se pone en la olla de presin para que se esterilice la solucin. PRACTICA # 2 AISLAMIENTO DE BACTERIAS. OBJETIVO: Que el alumno aprenda la tcnica para separar a las bacterias de los dems microorganismos que se encuentran en la muestra que haya trado. MATERIAL: 10 tubos de ensayo con la solucin salina previamente esterilizada. 11 pipetas estriles de 1 ml. 1 varilla de vidrio. 6 cajas de Petri con agar nutritivo. MTODO: Lo primero que se tiene que hacer es limpiar muy bien el rea de trabajo, se le pasa un trapo seco y limpio para poder quitar todo el polvo de las mesas, luego se roca con alcohol al 70% y se para el trapo, se lavan bien las manos antes y despus de trabajar con las bacterias ya que pueden ser patgenas. Lo que se debe hacer para poder aislar las bacterias es; (si es un liquido se agarra 1 ml de la muestra directamente y si es un slido, se pesa 1 gr y se diluye en agua), con una pipeta estril se toma 1 ml de la solucin y se vaca en el primer tubo con solucin salina previamente flameada la boca del tubo y en rea estril, entonces ya se tienen 10 ml, luego con otra pipeta estril, se toma 1 ml del tubo donde se agreg la muestra ( pura) y se pone en el otro tubo, luego se agarra otra pipeta estril, se destapa el tubo se flamea la boca del tubo anterior, se agarra 1 ml de la muestra, se tapa, tomas el siguiente tubo le quitas el tapn lo flameas y le agregas la muestra, lo vuelves a flamear y lo tapas de nuevo, y as sucesivamente hasta terminar lo 10 tubos. Una vez que se haya puesto la muestra en los 10 tubos, el se agarran 3 tubos el ms diluido, el menos diluido y uno de en medio de los dos. Entonces lo que se va hacer es poner las bacterias en las cajas de petri con agar para que crezcan, esto se hace por separado. Esto se hace por duplicado. Primero se agarra el mas diluido, se toma 0.1 ml de la muestra el tubo y se pone en la caja de petri, la varilla de vidrio se remoja en alcohol y se pasa en la flama, luego se deja que se enfri por 10 segundos y se esparce la muestra por toda la caja, luego se agarra el tubo de en medio y se toma 0.1 ml de la muestra, se pone en la caja de petri y se hace el mismo procedimiento con la varilla de vidrio y despus se esparce por toda la caja. Por ultimo se toma el tubo que tiene mas muestra de los tres, se agarra 0.1 ml de la muestra y se pone en la caja de petri, se agarra la varilla de vidrio y se esparce por toda la caja. Una vez terminado el trabajo, se flamea muy bien la varilla de vidrio, se envuelven las cajas ya sea con papel dextrasa o vitafilm y se guarda en la gaveta para esperar que crezcan las bacterias.

Se supone que en la primera caja que es la menos diluida debe haber ms colonias de bacterias que en las otras dos cajas. Por ejemplo: 30 colonias, 10 diluciones y se agarro el tubo mas diluido 1010. 30 x 10 x 1010 = esto nos da el no. De clulas viables por mililitro de solucin. PRACTICA # 3 PURIFICACIN DE LA CEPA BACTERIANA OBJETIVOS: Escoger una cepa bacteriana y purificarla hasta que no tenga una contaminacin alguna u otra bacteria en la caja. MATERIALES: 6 cajas de petri con la muestra antes sembrada. Asa de siembra. 2 cajas de petri nuevas con agar. METODOLOGA: El asa de platino se expone a la flama del mechero hasta quedar al rojo vivo. Se coloca el asa de 10-15cm de la flama del mechero, es decir dentro del rea estril esperando aproximadamente de 10 a 20 segundos para que se enfri Se toma una caja con la cepa madre, toco la colonia la cual ya se debi haber marcado. Alzar a la altura de la llama del mechero una caja Petri de agar nutritivo, utilizando la mano contraria con la que se tiene levantada el asa de platino y elegir un punto en el cultivo, el cual le pondremos punto 1 y comenzamos a hacer una serie de estras. Se flamea el asa en la llama del mechero hasta el rojo vivo. Se le da un pequeo giro a la caja de Petri de tal forma que la punta de la ltima estra de la serie anterior, quede a modo para hacerse la siguiente serie de estras (punto 2). Tocando el punto 1 solo dos veces al comenzar a estriar. Se aplica el inciso 5 y se da de nuevo el pequeo giro, para comenzar a estriar en la ltima estra del punto 2, igual solo se toca solo9 dos veces al comenzar a estras, el punto3. Se repite el inciso 5 y 6 solo que ahora es del punto 3 al punto 4 el cual tan solo es un pequeo zigzag, que se realiza teniendo cuidado de no tocar las estras anteriores para no cargar de nuevo carga microbiana, pues el objetivo es lograr colonias separadas.