BIO 141c

Unidad 4:
Organelos Celulares

Mitocondrias y Cloroplastos
 Los Subcompartimientos de la
Mitocondria y del Cloroplasto

Mitocondria Cloroplasto

Membrana Matriz
Externa Membrana
Externa Espacio
Membrana Tilacoide
Membrana Espacio
Interna Intermembrana Interna Membrana
Espacio Tilacoide
Intermembrana
Matriz
(Estroma)

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 La Mitocondria

Morfología, Estructura y Replicación de

Mitocondrias

Compartimentos mitocondriales e Importe

proteínas a la mitocondria

Papel de la mitocondria en el metabolismo

•Glicólisis
•Respiración celular
•Hipótesis quimiosmótica

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Organización de una Mitocondria

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Plasticidad
Mitocondrial

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 Diagrama de una
División Mitocondrial

ADN
Mitocondrial

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Microscopía Electrónica de
una Mitocondria en División

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 Microscopía
Electrónica de
ADN Mitocondrial
Durante el Proceso
de Replicación

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 Localización de Mitocondrias Cercana
a Sitios de Alta Demanda de ATP

Son muy abundantes en los músculos - especialmente de el músculo cardíaco,

donde el 40% del volumen citoplasmático es ocupado por mitocondrias
Los espermios tienen las mitocondrias ubicadas alrededor de la porción proximal
del flagelo - donde hay una alta demanda energética

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 Fraccionamiento de
los Compartimientos
Mitocondriales

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 Compartimientos Mitocondriales

Membrana externa: 50% de lípidos contiene, Porinas, canales de 2-3 nm que

permiten el libre paso de moléculas pequeñas (menores a 5000 Da) y iones

Espacio intermembranas: Es químicamente equivalente al citosol dada la gran

permeabilidadde la membrana externa

Membrana interna: 75% = proteína es altamente impermeable. ATP sintasa, proteínas

de transporte para movilizar piruvato, ATP, ADP y Pi a través de la membrana.
Proteínas forman la cadena transportadora de electrones

Matriz: Contiene ribosomas y varias moléculas de ADN circular. Enzimas del TCA
Membrana
Interna
Membrana
Externa
Preparación de
Partículas
Submitocondriales a
partir de Mitocondrias
Mitocondrias Rotas
por Ultrasonido Puras

Vesículas Inside-out
Formadas de Fragmentos de
Membrana Interna

Particulas
Submitocondriales Puras

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 Partículas
Submitocondriales

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Mapa de Tráfico Proteico

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 Señal de
Destino
Mitocondrial

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Traslocación de Proteínas en la
Membrana Mitocondrial

Potencial Hidrólisis
Membrana ATP

5°c 25°c
+ Proteasa
+ Proteasa + Proteasa + Detergente

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Importación de Proteínas Mitocondriales

Membrana Externa

Membrana Interna
Péptido
Señal

Sitios
Receptor de
Contacto

Péptido
Señal
Removida

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 Importación de Proteínas a Distintos
Subcompartimientos

Proteína Membrana Proteína Membrana Proteína Espacio

Interna Interna Intermembrana

Péptido
Péptido Segundo Señal
Señal Péptido
Señal MATRIZ MATRIZ MATRIZ

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La producción de energía en
la célula
Las células obtienen energía libre de la
oxidación química

• Las células usan la energía

para sintetizar ATP
• Las células gastan el ATP
en procesos energéti-
camente desfavorables.
La estructura del ATP
El Rol del ATP
 La producción de energía en la célula
Glicólisis, Ciclo de Krebs y cadena transportadora (respiración celular)
 La producción de energía en la célula

Glicólisis: La Glucosa (desde los alimentos) es metabolizada en el

citosol a piruvato.
ETAPAS QUE OCURREN EN LA MITOCONDRIA:
Ciclo del TCA: El Piruvato y los ácidos grasos entran a la matriz
mitocondrial y alimentan el ciclo del ácido cítrico. Los productos
del ciclo del ácido cítrico (NADH y FADH2) son donantes de
electrones.
Transferencia de electrones: Los electrones pasan a través de
una serie de complejos en la membrana interna de la mitocondria
generando una gradiente de protones. El oxígeno, aceptor final de
los electrones, reacciona con H+ produciendo H2O al final de la
cadena transportadora de electrones.
Síntesis de ATP: La gradiente de protones es la fuerza motriz
usada para sintetizar ATP.
 GLICÓLISIS
Citoplasma

Fase
Preparatoria

Fase de
Beneficios
(x 2)
 Glyceraldehyde-3-phosphate
Dehydrogenase
H O + H+ O OPO32−
1C NAD+ NADH 1C PRODUCCION
+ Pi PODER
H C OH H C OH
2 2 REDUCTOR
2− 2−
3 CH2 OPO3 3 CH2 OPO3

glyceraldehyde- 1,3-bisphospho-
3-phosphate glycerate

Phosphoglycerate Kinase
O OPO 32− ADP ATP O O−
1C 1
C FOSFORILACIÓN
H 2C OH H 2C OH A NIVEL DE
Mg 2+ SUSTRATO
2− 2−
3 CH 2 OPO 3 3 CH 2 OPO 3

1,3-bisphospho- 3-phosphoglycerate
glycerate
 Esquema resumen de la glicólisis

Se producen 4 moléculas ATP y 2 NADH + 2 H+ y y se gastan dos ATP

El ATP se produce por fosforilación a nivel de sustrato

Glucosa + 2ADP + 2Pi + 2NAD+ 2piruvato + 2ATP + 2NADH + 2H+

Condiciones Aeróbicas
O O
ll ll
CH3–C –COO- + NAD+ + CoA CH3–C–CoA + CO2 + NADH + H+
piruvato acetil CoA

Condiciones Anaeróbicas (Sin O2)

O OH
|| |
CH3–C–COO- + NADH + H+ CH3–CH-COO- + NAD+
piruvato lactato

Otra vía convierte el piruvato en etanol y CO2

Ej. Fermentación en levaduras en la producción de cerveza y pan
La mitocondria en la generación de energía
El Piruvato es transportado a la mitocondria y
oxidado a Acetil CoA..

También los ácidos grasos entran al ciclo

Ciclo del TCA
 Ciclo del TCA

• También llamado ciclo de Krebs

o ciclo de los ácidos
tricarboxílicos
• Ocho enzimas catalizan las
reacciones
• Cada vuelta rinde: 1 ATP, 2 CO2,
3 NADH, y 1 FADH2
• Dos vueltas por cada molécula
de glucosa
• Ocurre en la matriz mitocondrial
• Resulta en la oxidación completa
de glucosa a CO2
 Intermediarios que transportan los electrones
a la cadena respiratoria
Durante la oxidación de la glucosa los electrones
son captados por NAD o FAD para producir
NADH y FADH2 respectivamente

FAD (flavina adenin dinucleotido)

FAD + -CH2-CH2- FADH2 + -CH=CH-

NAD+ (nicotinamida adenin dinucleotido)

NAD+ + -CH-OH NADH + H+ + -C=O

Generación de energía en la mitocondria
Mecanismo General
de Fosforilación
Oxidativa
Etapa 1:
Los electrones almacenados en las
moléculas de NADH y FADH2 se
transfieren a través de los carriers
de electrones. La energía de la
transferencia de electrones se usa
para bombear H+ a través de la
membrana - generando una gradiente
electroquímica
Etapa 2:
Los H+ fluyen en favor de su
gradiente electroquímica a través
del complejo ATP sintasa. La
energía almacenada se usa para
generar ATP
 CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES
Membrana interna o Cresta mitocondrial

Bombeo de protones = translocación de protones

desde la matriz hacia afuera
 Etapa 1 - Cadena transportadora de electrones
Consiste de ~ 40 proteínas agrupadas en 3 grandes complejos enzimáticos
respiratorios
1. Complejo NADH deshidrogenasa
2. Complejo citocromo b-c1
3. Complejo citocromo oxidasa

Carriers móviles transfieren los electrones desde el complejo 1 al 2 y luego

al 3.Cada complejo tiene mayor afinidad por los electrones que el previo
La energía de la transferencia de electrones se usa para bombear H+ al
espacio intermembrana

• Los electrones de las moléculas NADH y FADH2 son pasados finalmente al

O2
– Regenerándose NAD+ y FAD
– Forma H2O
• El flujo de electrones se acopla al bombeo de protones (H+) a través de la
membrana interna de la mitocondria (10 H+ por cada molécula de NADH)
• Creándose una gradiente de protones a través de la membrana
 El Bombeo de protones
Crea una gradiente

Química
Eléctrica
pH

Este potencial electroquímico

se usa para la síntesis de ATP
Efecto del Flujo de Electrones de la Cadena
Respiratoria sobre el Transporte de H+

Los Protones son Bombeados a través de esta Membrana como MEMBRANA

consecuencia del Flujo de Electrones de la Cadena Respiratoria EXTERNA

MEMBRANA
INTERNA

MATRIZ

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• Mitocondria – formación de ATP
• Gradiente de pH – aprox. 1 unidad de diferencia de pH
• La gradiente de pH y el potencial eléctrico son la fuerza
motriz que mueve a los protones hacia la matrix –
gradiente electroquímica
Etapa 2 - la gradiente de protones se
usa para la síntesis de ATP
Etapa 1 produjo una gradiente electroquímica. Favorece
energéticamente el flujo de H+ a través de la membrana interna
hacia la matriz, pero la membrana interna es impermeable a los
protones

La ATP sintasa crea un canal hidrofílico para que los protones

fluyan a través de él

La energía del transporte de H+ cosechada por la ATP sintasa

permite la síntesis de ATP a partir de ADP y Pi
Esquema de la Estructura de la ATP Sintasa

F1: Porción
catalítica
Orientada hacia la
matriz

F0: Canal de protones

Embebida en la
membrana interna
 ATP sintasa (F1F0-ATPasa)

Muy homóloga entre la bacteria y el hombre

Es una proteína multimérica
La gran porción enzimática (F1) proyecta
hacia la matriz
La porción F1 está unida a través de un eje
al canal de protones (F0)

A medida que los protones se mueven a

través de F0, el eje rota induciendo que la F1
sintetice ATP
Visualizando los movimientos rotatorios de
la ATPsintasa

Actin filament

α3β3γ
complex

His-tag

Coverslip coated with Ni-NTA

Acoplamiento Quimio-Osmótico
(hipótesis de inicios de los 60´)

Hipótesis Quimio-osmótica de Mitchell

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 Observaciones que se explican por la
hipótesis quimio-osmótica

1. La fosforilación oxidativa requiere que la membrana

interna de la mitocondria esté intacta

2. La membrana interna de la mitocondria debe ser impermeable a

iones H+ OH- K+ Cl-.

3. El transporte de electrones dirige la salida de protones

fuera de la mitocondria.

4. La permibilización de la membrana permite el transporte de

electrones pero inhibe la síntesis de ATP
 Desacopladores
- Desacoplan la oxidación de la glucosa del proceso de
fosforilación del ADP

Dinitrofenol es soluble en lípidos y se combina con

protones - destruyendo la gradiente de protones
requerida para la producción de ATP

Existen desacopladores naturales por ejemplo, la

termogenina en la mitocondria de la grasa parda -
usada para generar calor
 Rendimiento energético

• Cada molécula de NADH puede producir ~3 ATP

y cada molécula de FADH2 puede producir ~2
ATP cuando el O2 está presente como el aceptor
final de electrones
• La oxidación completa de una molécula de
glucosa por glicólisis, el complejo de la piruvato
deshidrogenasa, el ciclo del ácido cítrico y la
cadena transportadora de electrones originan la
síntesis de ~38 ATP, por una combinación de
fosforilación a nivel de sustrato y oxidativa.
RESUMEN
Respiración
celular
 La Gradiente Electroquímica de H+ está
Acoplada a Procesos de Transporte a través de
la Membrana Mitocondrial Interna

GRADIENTE
VOLTAGE PERMITE
INTERCAMBIO ADP--ATP

PIRUVATO -

GRADIENTE pH PIRUVATO - GRADIENTE pH

permite ingreso permite ingreso
piruvato fosfato

PIRUVATO -
El Cloroplasto

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Microscopía Electrónica de los Cloroplastos
Tilacoides
Espacio Grana
de Aire
Núcleo
Pared
VACUOLA Celular

Cloroplasto
Citosol Envoltura
Cloroplasto

Envoltura Cloroplasto
Tilacoide
Lípido

Grana
Pared Celular

BIO 141c
 El Cloroplasto

Estroma
HOJA
Grana

Membrana
Tilacoide

Membrana Espacio
Membrana Tilacoide
Externa Interna
Espacio Intermembrana

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Comparación entre Mitocondria y Cloroplasto

Membrana Interna
Crestas
Membrana Externa

Espacio Intermembrana
Matriz Estroma
Espacio Tilacoide

ADN

Ribosomas

Membrana Tilacoide

MITOCONDRIA CLOROPLASTO

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 Comparación del
Flujo de Protones
y Orientación ATP Sintasa
en Mitocondria
y Cloroplasto

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 Chemiosmosis
SUN
H+ H+ (Proton Pumping)

Thylakoid E
PS II T PS I
C
H+ H+ high H+
H+ H+ H+ H+ concentration

Thylakoid
H+ ATP Synthase Space

low H+
ADP + P H+ ATP concentration
Visión de la Síntesis de Proteínas
en Mitocondria y Cloroplasto

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 Puedes
estudiar
en......

• Mol Biol of the Cell. Alberts et al.

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