MICROBIOLOGIA GENERAL Y ORAL

MEDIOS DE CULTIVO Para realizar el estudio de los microorganismos se dispone de tcnicas adecuadas que permiten obtener colonias en forma aislada y as poderlas someter a las distintas fases de estudio que aseguren su reconocimiento. Estos proceso incluyen: Observacin_microscpica_de la morfologa de los

microorganismos, coloraciones, utilizacin de los medios de cultivo, siembras, aislamientos, estudio de los cultivos, ejecucin de reacciones serolgicas e inoculaciones experimentales en animales de laboratorio.

I.- MEDIOS DE CULTIVO Un medio de cultivo, es cualquier sustancia liquida o slida, empleada para cultivar microorganismos; constituyendo ambientes artificiales asimilados en lo posible a las condiciones naturales en donde viven y se reproducen los microorganismos.

FUNDAMENTO Los medios de cultivo son utilizados para evidenciar a los microorganismos; pero a su vez estos tienen requerimientos nutritivos variados los que son tomados en cuenta al preparar un medio de cultivo, cuya composicin varia de acuerdo a las exigencias del germen; en consecuencia, estos deben tener: 1) sustancias nutritivas apropiadas (protenas, carbohidratos, minerales, etc:). 2) Humedad, temperatura y pH ptimos. 3) Estar protegidos de la contaminacin. 4) Estar previamente esterilizados.

Los medios pueden tener como finalidad: 1) Aislamiento y separacin de las distintas especies presentes en una muestra contaminada o en productos patolgico. 2) Identificacin de los microorganismos aislados. 3) Estudios complementarios, como los de sensibilidad de las bacterias o antimicrobianos, etc.

MICROBIOLOGIA GENERAL Y ORAL 4) Conservacin o mantenimiento de cepas. 5) Clasificacin de microorganismos. 6) Obtencin de toxinas. 7) Recoleccin de cosecha para la preparacin de vacunas y otros fines.

OBJETIVOS Proporcionar informacin general acerca de las caractersticas de los medios de cultivo. Conocer el empleo de los diferentes medios que guardan relacin con las caractersticas de las muestras y de los grmenes que se desea cultivar.

CLASES DE MEDIOS DE CULTIVO

1.- SEGN SU ORIGEN a) Medios Naturales.-Son aquellos medios que promueven el crecimiento de una gran variedad de microorganismos y que estn compuestos por materias primas complejas o principios inmediatos como peptonas, extracto de carne, etc. b) Medios Sintticos.- Estos medios son adecuados para el crecimiento de numerosas bacterias de inters del investigador y qumicamente

definidos, en donde se conoce la identidad y la cantidad de cada componente. c) Medios Semisintticos.- Son aquellos medios que se elaboran a partir de medios sintticos y se le agregan factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico complejo, como extracto de levadura, extracto de tejidos, etc.

2.- SEGN SU NATURALEZA FISICA a) Lquidos.- Son utilizados para el enriquecimiento y el aislamiento de grmenes, Ejemplo: caldo nutritivo, caldo thioglicolato. b) Slidos.A los medios lquidos se les solidifican agregando

concentraciones conocidas de agar (1.5%), Ejemplo agar nutritivo. c) Semislidos.- Estos se consideran agregando una menor cantidad de agar al medio base (0.2 a 0.3 %).

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3.- SEGN EL REQUERIMIENTO DE DIAGNOSTICO a) Medios Comunes. Se destinan al crecimiento de la mayora de los microorganismos. Ejemplo: agar nutritivo, caldo nutritivo, agua peptonada, etc. b) Medios Enriquecidos.- Para aquellos microorganismos que son exigentes en su crecimiento. Los medios comunes se enriquecen con sangre, liquido asctico, suero, huevo, etc. c) Medios Selectivos.- Son utilizados para el cultivo preferencial de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiane. Se basan en la

posibilidad de favorecer el crecimiento de ciertos microorganismos e inhibir el de otros, gracias a la adicin de algunas sustancias al medio de cultivo; tal como: las sales biliares, verde brillante, cloruro de sodio, etc. Ejemplos: agar chapman, agar TCBS, agar Mc Conkey, TSI, agar salado manitol, etc. d) Medios Diferenciales. Son aquellos que ponen de manifiesto la actividad bioqumica de un germen frente a un determinado sustrato, lo cual permite diferenciarlo de otros parecidos. La mayora de los medios diferenciales, son a la vez selectivos, por lo que se les conoce como medios selectivos diferenciales. Ejemplo: TSI, LIA, Citrato, etc.

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SIEMBRA Y AISLAMIENTO FUNDAMENTO La siembra, es el paso inicial en el estudio de las propiedades culturales de un germen. La tcnica de la siembra en si constituye en poner en contacto una porcin de la muestra en estudio (inocuo) con un medio de cultivo apropiado y llevarlo a incubacin a temperatura y tiempo ptimos para el desarrollo y

multiplicacin de los microorganismos presentes en ella.

La finalidad de este proceso es el aislamiento de colonias para obtener cultivos puros de los microorganismos que se encuentran presentes en una muestra problema.

OBJETIVO Proporcionar al estudiante informacin sobre las tcnicas de siembra en medio de cultivo para el aislamiento de los microorganismos.

MATERIALES Placas con agar nutritivo, agar sangre y agar Mac Conkey. Tubos con agar nutritivo Cultivos de grmenes Asa de kolle o bacteriologic Mecheros, etc.

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PROCEDIMIENTO MODALIDADE DE SIEMBRAA a) Siembra por inoculacin o agitacin.- Se efecta utilizando el asa bacteriologica PREVIAMENTE ESTERILIZADA y llevar el inoculo o muestra al tubo con medio liquido, agitar y retirar el asa.

b) Siembra porestria en tubos de agar inclinado.- Con el asa bacteriologica en anillo esteril coger una pequea porcion del producto patologico o de cultivo, introducir el asa hacia el fondo del tubo y con movimiento de vaiven en la superficie del agar inclinado realizar estrias transversales paralela muy proximas entre si.

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c) Siembra porestria o agotamiento en placas de agar.- Coger son el asa bacteriologica esteril el inoculo y depositarloen el I cuadrante. Luego

efectuarestrias muy proximas para realizar el agotamiento de la muestra. Flamear y enfriar el asa con ella llevar parte del inoculo al II cuadrante mediante estrias mas separadas. Continuar con el mismo procedimiento al III cuadrante y seguir la siembra con estrias bien separadas al IV cuadrante hasta finalizar en el centro de la placa.

d) Siembra por puntura profunda o picadura.- Con el asa bacteriologica en form de aguja, tome una pequea cantidad del cultivo y sembrar en el agar semisolido introduciendo laaguja en forma vertical.

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e) Siembra por incorporacin o vertido en placa.- Coger un mililitro de muestra o dilicion de ella en una placa petri esteril y luego agregar medio licuado manteniendo a 45 C, se realiza movimientos rotatorios para homogenizar y se deja solidificar.