BILIRRUBINA & CREATININA

20 de julio

2011

Universidad de San Carlos de Guatemala Centro Universitario de Oriente CUNORI Facultad de Ciencias Mdicas Ao 2011 Licda. Jennifer Andrino Bioqumica
DETERMINACIN DE BILIRRUBINA Y CREATININA
Ada Leonely Echeverra Castaeda Kathia Julissa Meja Gil Alicia del Roco Pacheco Salguero Flix Jubini Quiones Raymundo Josas Angelito Landero Prez Marcouny Ren Vaquiax Martnez 200940527 201043490 200942689 200944408 200946343 200940500

Chiquimula, 20 de Julio del 2011

DETERMINACION DE LA BILIRRUBINA EN SANGRE En el ser humano adulto se destruyen aproximadamente se 1 a 2 x 108 eritrocitos por hora. Se puede decir que en un da, una persona de 70 Kg recambia alrededor de 6 g de hemoglobina. Cuando se destruyen hemoglobina, se liberan la globulina y el grupo hemo. La globulina se degrada en los aminocidos que la componen; el grupo hemo esta formado por hierro y un anillo de porfirina. El hierro del grupo hemo ingresa a la reserva de hierro para su reutilizacin. El catabolismo del grupo hemo que proviene de la totalidad de heteroprotenas, se lleva a cabo por un complejo enzimtico llamado hem oxigenasa. El hierro es oxidado a una variante frrica y constituye la hemina. La hemina se reduce a hem con ayuda de NADPH y con otro NADPH se aade oxgeno, de sta manera se libera el ion frrico, produciendo monxido de carbono y biliverdina. La biliverdina sufre una reduccin agregando NADPH en un proceso llevado a cabo por la biliverdina reductasa, formando bilirrubina.

Se cree que 1 g de hemoglobina produce 35 mg de bilirrubina, en adultos humanos la formacin diaria es de 250 a 350 mg. La bilirrubina formada en los tejidos perifricos se transporta al hgado mediante la albmina plasmtica. La bilirrubina es insoluble, pero su solubilidad en la sangre se incrementa mediante un enlace no covalente con la albmina. En el hgado, la bilirrubina se remueve de la albmina y se captura en la superficie de los hepatocitos por un sistema de transporte facilitado.

Despus del ingreso de la bilirrubina a los hepatocitos, se une a ciertas protenas que ayuda a mantenerla soluble antes de la conjugacin. Los hepatocitos convierten la bilirrubina en una variante polar, la cual se excreta a la bilis mediante la adicin de molculas de cido glucornico, por medio de un proceso que se denomina conjugacin, catalizado por la enzima glucuronil transferasa localizada principalmente en el retculo endoplsmico y utiliza el cido UDP-glucurnico como donador de glucuronosilo y se conoce como bilirrubinaUGT. La mayor parte de la bilirrubina es excretada en la bilis de los mamferos en forma de diglucurnido de bilirrubina.

La secrecin de la bilirrubina conjugada en la bilis se da mediante un mecanismo de transporte activo por medio de la protena MRP-2, llamada tambin portador de aniones orgnicos multiespecficos, se localiza en la membrana plasmtica de la membrana biliar. La bilirrubina conjugada llega al leon y al intestino grueso. Existen enzimas bacterianas especficas como la B-glucuronidasa, que remueven los glucurnidos y el pigmento se reduce, mediante la flora fecal, a un compuesto llamado urubilingenos. La mayor parte de los urubilingenos incoloros, se oxida a urobilinas y se excreta en las heces. Medicin de la bilirrubina El mtodo ms habitual de determinacin de la bilirrubina (van den Bergh) se basa en el uso de compuestos diazo. Este mtodo sobreestima la proporcin de bilirrubina directa sea la bilirrubina conjugada. Mediante mtodos ms exactos se ha comprobado que en sujetos normales prcticamente el 100% de la bilirrubina circulante es no conjugada o indirecta. Los niveles normales de bilirrubina son menores de 1 mg/dL (18 micromol/L). La bilirrubina conjugada representa menos del 20% del total.

El valor de la bilirrubina indirecta se obtiene de la diferencia entre la bilirrubina total y la bilirrubina directa. Valores de Referencia Bilirrubina Total hasta 1 mg/dl Bilirrubina directa hasta 0.25 mg/dl Bilirrubina indirecta hasta 0.85 mg/dl Hiperbilirrunemia La hiperbilirrubinemia se define como una concentracin de bilirrubina que excede los 1.5 mg% en la cifra total. Manifestaciones clnicas de la hiperbilirrubinemia: La elevacin de la bilirrubina se manifiesta como ictericia. El umbral para la deteccin clnica de ictericia est entre 2 y 3 mg/dL. Cuando la hiperbilirrubinemia es directa (conjugada), se produce eliminacin de la bilirrubina por orina, lo que produce un color oscuro caracterstico, llamado coluria. Durante el perodo de recuperacin de un episodio de ictericia prolongada puede desaparecer la coluria pero mantenerse la ictericia. Si hay una obstruccin completa de la va biliar o una falla de la excrecin heptica muy marcada de la bilirrubina, sta no llega al intestino y no produce la pigmentacin color caf de las deposiciones normales. Interpretacin de la bilirrubina elevada: Una vez que se determina una elevacin de bilirrubina en los exmenes de sangre, el primer paso es verificar si se trata de una hiperbilirrubinemia de predominio conjugado (hiperbilirrubinemia directa) o no conjugado (hiperbilirrubinemia indirecta). Habitualmente se habla de hiperbilirrubinemia de predominio directo cuando la bilirrubina directa representa ms del 30% de la bilirrubina total. Hiperbilirrubinemia indirecta La causa de hiperbilirrubinemia indirecta es una produccin aumentada de bilirrubina, habitualmente por aumento del catabolismo de hemoglobina. La hemlisis produce elevaciones de bilirrubina mayores de 6 mg/dL. Otra causa muy frecuente de hiperbilirrubinemia indirecta es el sndrome de Gilbert, que se caracteriza por una disminucin de la capacidad heptica de conjugacin de la bilirrubina. Hiperbilirubinemia directa: La hiperbilirrubinemia directa se asocia a enfermedades hepticas debido a una insuficiente capacidad de excrecin. La elevacin de bilirrubina conjugada en sangre es uno de los hallazgos caractersticos de los cuadros colestsicos y se acompaa de elevacin de fosfatasas alcalinas y GGT.

La hiperbilirrunemia provoca ictericia, la bilirrubina al ser acumulada en la sangre, se difunde hacia los tejidos, los cuales adquieren un color amarillo provocando ictericia.

Las principalmente clases de ictericia: Ictericia preheptica: El incremento de la rotura de hemates produce una hiperbilirrubinemia no conjugada que ser superior a la capacidad del hgado. Hay un aumento de bilirrubina indirecta en sangre y la bilirrubina directa es prcticamente normal. En orina hay generalmente una elevacin de urobilingeno y no se detecta la bilirrubina, ya que la bilirrubina no conjugada, al ir fuertemente unida a la albmina, no filtra por el rin a la orina. Ictericia postheptica: Por una obstruccin extraheptica. La obstruccin hace que la bilirrubina conjugada vuelva a la sangre y no pase al intestino. La hiperbilirrubinemia es fundamentalmente directa, con lo que hay un aumento tambin de bilirrubina en orina. Al eliminarse poca bilirrubina hacia el intestino se forma muy poco urobilingeno, con lo que las heces son plidas. Una vez retirada la obstruccin, las heces recuperan el color y la orina es positiva para urobilingeno. Ictericia heptica: Es un estado intermedio entre las dos anteriores. Puede ser debido a toxinas o infecciones como, por ejemplo, la hepatitis vrica o bloque de la excrecin de la bilis. Pero el defecto se encuentra en le hgado en s y puede ser heredado o adquirido. Hay un aumento de bilirrubina directa e indirecta en sangre. En orina hay una elevacin de bilirrubina y el urobilingeno esta poco aumentado o incluso puede estar disminuido.

Materiales y Mtodos Sangre Aguja Algodn Alcohol Liga Tubos de ensayo sin coagulante Centrfuga Pipetas automticas de 5 a 50, 10 a 100 y 100 - 1000. Tips Espectrofotmetro Agua destilada Viales

Medicin de la Bilirrubina (reaccin de diazotitizacion) Bilirrubina total (MUESTRA BLANCO) Se obtiene la muestra de sangre Se separa el suero del resto de la muestra mediante centrifugacin Tomar 2 viales, Para la muestra Blanco y para la muestra Agregar reactivo 1 (1000ml) a un vial Dejar incubar por 5 minutos Agregar 100ml de suero Dejar por 5 minutos

Bilirrubina total (MUESTRA) Agregar 1000ml de reactivo 1 y una(1) gota de reactivo 2 Dejar reposar 5 minutos Agregar 100ml de muestra de suero Dejar reposar 5 minutos

Bilirrubina Directa Muestra Blanco( es igual a la de la bilirrubina total) Muestra (es casi igual a la de la bilirrubina total, cambia solo en el tiempo de 5 minutos a 2 minutos en el paso 1).

Reactivos Reactivo de la bilirrubina total (Tapa Blanca) Acido sulfonilico 14ml/L Acido clorhdrico 300mmol/L Sulfato de sodio 420mmol/L Cafena (acelerador) 200mmol/L Reactivo de bilirrubina directa (tapa Azul) Acido Sulfonilico 14ml/L Acido Clorhdrico 300mmol/L

DETERMINACIN DE CREATININA La creatinina es un compuesto de desecho derivado de la creatina. La creatinina proviene de la creatina, una molcula muy importante para la produccin de energa muscular. Aproximadamente el 2% de la creatina del cuerpo se convierte en creatinina cada da. La creatinina se transporta desde los msculos por medio

de la sangre hacia el rin. Los riones filtran la mayora de la creatinina y la eliminan en la orina. La creatina La creatina es un compuesto natural que ayuda al musculo a su actividad, le lleva energa desde las clulas, le ayuda a mantener su ph y aporta energa mediante la utilizacin de glucosa. Se encuentra en cada celula humana y se sintetiza a partir de los aminocidos glicina, arginina y metionina de forma natural en el hgado, el pncreas y los riones; de all es transportada en el torrente sanguneo a todas las clulas del cuerpo. Ya que con la ayuda de la ceatina es posible el rendimiento fsico y mental, las clulas musculares, cerebrales y nerviosas contienen mucha creatina. La creatina se obtiene a travs de la dieta (productos de animales: pescado, lcteos y carne) y el resto lo sinteriza el propio cuerpo. Todos contamos con depsitos de creatina; una persona con 70 kilogramos de peso tendra unos 120 gramos de creatina en su cuerpo concentrados en la musculatura en un 95%. Estos depsitos aumentan a corto plazo si tomamos suplementos orales. Multitud de estudios han querido demostrar si mejora realmente el rendimiento, 7 de cada 10 afirman su rendimiento, pero en los otros 3 no se observaron resultados ni en la masa muscular ni en el rendimiento, no es eficaz en todos los individuos y solo funciona en los deportes que combinan fuerza y resistencia (levantamiento de pesas, ciclismo etc.; en series cortas), provocan aumento de peso debido al aumento de masa muscular por lo tanto no funciona en deportes como atletismo y natacin. Alrededor del 6070 % de toda la creatina muscular se encuentra almacenada en forma de la molcula fosfocreatina, rica en energa. Los 30 - 40 % restantes se encuentran libres. Aparte del adenosn trifosfato (ATP), la creatina es la fuente energtica ms importante del cuerpo. Como sustancia suministradora de energa, todas las clulas del cuerpo slo pueden emplear adenosn trifosfato (ATP). Dado que los depsitos de ATP en el cuerpo estn limitados, el metabolismo debe formar ATP en forma continua. El ATP se elabora a partir de grasas y carbohidratos, los suministradores de energa a largo plazo. Cuando la clula consume energa, el ATP rico en energa es convertido en adenosn difosfato (ADP) pobre en energa. Como un acumulador, la creatina (en forma de fosfocreatina) recarga el ADP bajo en energa al ATP alto en energa hasta que el ATP vuelve a estar disponible a partir de la conversin de grasas y carbohidratos. Los msculos contienen de 3 a 4 veces ms fosfocreatina que ATP y por ello esta sustancia almacena energa a corto plazo, especialmente cuando el consumo de ATP es mayor que su sntesis a partir de los carbohidratos y las grasas. La

concentracin de fosfocreatina y la regeneracin del ATP son factores decisivos en ejercicios continuos que requieren un gran esfuerzo. El aumento en la concentracin de creatina y fosfocreatina acelera la regeneracin del ATP, lo que permite directamente liberar y poner a disposicin an ms energa. Sntesis de la creatinina La creatina es sintetizada en el hgado por metilacin del guanidoacetato usando SAM como donante metilo. El guanidoacetato se forma en el rin a partir de los aminocidos arginina y glicina. La creatina es utilizada como forma de almacenamiento del fosfato de alta energa. El fosfato del ATP es transferido a la creatina, generando fosfato de creatina, a travs de la accin de la creatin fosfocinasa. La reaccin es reversible cuando la demanda energtica es alta (e.g. durante el esfuerzo muscular) la creatinfosfato dona su fosfato al ADP para producir ATP.

La creatina y la creatinfosfato se encuentran en msculo, cerebro y sangre. La creatinina es formada en msculo a partir de la creatinfosfato por una deshidratacin no enzimtica y perdida del fosfato. La cantidad de creatinina producida se relaciona con la masa muscular y se mantiene constante da a da. La creatinina es excretada por los riones y el nivel de excrecin (porcentaje de clearance de creatinina) es una medida de la funcin renal.

Valor de referencia Suero: Mujer: 0,5-0,9 mg/dl

Hombre: 0,6-1,1 mg/dl Orina: 1,0-1,6 g/24 hs. Clearance : Mujer: 88- 128 ml/min

Hombre: 97-137 ml/min

Significado clnico La creatinina es producto de degradacin de la creatina. La creatinina es un compuesto sumamente difusible cuya eliminacin se efecta a travs del rin y, casi exclusivamente, por filtracin. Por este motivo, el clearence de creatinina endgena es uno de los mtodos ms utilizados como medida de filtracin glomerular. Sin embargo, los problemas prcticas inherentes a la determinacin del clearance,han favorecido la difusin de la determinacin de la creatinina srica como ndice de funcionalismo renal. Utilidad clnica Se ha observado que ambos parmetros (clearence y creatinina srica) resultan importantes tanto en el diagnstico como en el pronstico de nefropatas, obstrucciones urinarias (por afeccin de prstata, vejiga, urter) y anurias reflejas (secundarias a clculos uretrales, por ej.) que pueden producir elevaciones de creatinina, reversibles luego de reparada la afeccin. La creatinina no es un buen indicador para la deteccin de la enfermedad renal incipiente. Variable por enfermedad Aumentado: En suero, por insuficiencia renal aguda, insuficiencia renal crnica, acromegalia y gigantismo activos, hipertiroidismo. En orina, por diabetes mellitus, infecciones, gigantismo, ejercicio. Disminuido: En suero, por embarazo y en estados de caquexia por reduccin de la masa muscular. En orina, por insuficiencia renal, miopatas, leucemias, anemias.

Eliminacin de creatinina La eliminacin de creatinina es una medida de la velocidad con que los riones retiran la creatinina de la sangre. La eliminacin se mide en mililitros por minuto (mL/min). Los mdicos solan exigir que se recogiera orina durante 24 horas para medir la eliminacin de creatinina directamente, pero han descubierto una frmula en que se emplea el valor de la creatinina srica, la edad, el peso, la concentracin de urea en la sangre y la raza del paciente para hacer un clculo preciso de la eliminacin de creatinina. En el caso de los hombres, una tasa normal de eliminacin de creatinina es de 97 a 137 mL/min. En el caso de las mujeres, la tasa normal es de 88 a 128 mL/min. Si su valor es inferior a esa escala normal, los riones no estn trabajando a mxima capacidad.