Dosagem de Bilirrubina

Aluna: Yasmin Kao

A bilirrubina um produto resultante do metabolismo do heme responsvel pela cor amarelada da pele e mucosas quando em excesso no sangue; fato a qual denominamos de ictercia. O processo de sntese e metabolismo da bilirrubina, para fins didticos, pode ser dividido em quatro etapas; captao, transporte, conjugao e excreo. A primeira fase se refere captao de eritrcitos pelo bao, fgado e medula ssea os quais so os rgos responsveis pela degradao destas clulas quando atingem o ciclo de 120 dias de vida, entretanto umas partes considerveis da bilirrubina provem da degradao de hemcia no bao (cerca de 70%-80%). O processo se inicia com a clivagem oxidativa entre os anis A e B da porfirina do heme pela heme-oxigenase formando biliverdina a qual sofrer reduo da sua ponte metenil central ( entre os anis C e D) resultando na bilirrubina, esta caracterizada como bilirrubina no-conjugada ou indireta, pois no sofreu reao conformacional para ser excretada. A segunda e terceira etapas comeam quando a bilirrubina plasmtica associada com a albumina (protena plasmtica de maior quantidade no sangue) e transportada ao fgado desligando-se para formar um complexo com as protenas Y e Z e, posteriormente, com a ligandina a qual carrear para o retculo endoplasmtico liso; nele a bilirrubina indireta sofrer um processo de hidrofilizao j que inicialmente lipossolvel atravs de uma esterificao dos dois grupos laterais propianato com o cido glucurnico resultando nos compostos; monoglucordeo Bb e diglucorondeo Bb pela enzima uridina disfosfoglucuranil transferase (UDPGT), a partir de ento, a bilirrubina indireta passa-se a bilirrubina direta ou conjugada. A fase de excreo caracteriza-se quando a bilirrubina conjugada resguardada na vescula biliar e, atravs do estmulo da colecistoquinina, excretada para o duodeno atravessando o intestino delgado sem modificaes. Quando chega s pores do ceco e colo do intestino grosso sofre ao da b-glucuronidase (enzima bacteriana), hidrolisando-a e transformando-a em urobilinognio que pode ser ou no reabsorvido pelo sistema enteroheptico para formar bilirrubina novamente ou metabolizado e eliminado pelo rim em forma de urobilina, porm a maior parte eliminada nas fezes na forma de estercobilinognio ou estercobilinognio fecal sendo este o responsvel pela cor marrom-avermelhada delas. A bilirrubina tem relao intrnseca com a funo heptica, pois, alm de ser nos hepatcitos em que a bilirrubina indireta transformada em bilirrubina conjugada, funciona como indicadoras bioqumicas para varias patologias relacionadas com a dosagem da bilirrubina no sangue e tambm como indicador do funcionamento normal do fgado. A mais conhecida delas a ictercia em que uma das causas o aumento da bilirrubina no-conjugada

devido ao excesso de eritrcitos senescentes no sangue. Anemia hemoltica cuja causa mais conhecida a deficincia da enzima G6PD possui como uma dos sintomas a ictercia causado pelo acmulo de bilirrubina no sangue devido insuficincia heptica de metabolizar o excesso de eritrcitos destrudos. Outros problemas oriundo da hiperbilirrubinemia so a obstruo dos ductos biliares impedindo a secreo de sais biliares poro duodnica do intestino delgado e Kernicterus doena caracterizada pela impregnao do SNC por bilirrubina no conjugada. maneira geral, a bilirrubina serve para verificar o estado geral do fgado e observar sinais de doena heptica, tais como hepatite ou cirrose, ou os efeitos de medicamentos que podem prejudicar o rgo; Diagnosticar as condies que causam o aumento da destruio das hemcias, como anemia hemoltica ou doena hemoltica do recm-nascido; Verificar bloqueios dos ductos biliares - Isto pode ocorrer se clculos biliares, tumores do pncreas, ou outras condies que podem estar presentes- e diagnosticar e acompanhar tratamento de ictercias neonatais. O diagnstico laboratorial bioqumico do sangue atravs da dosagem de protenas sricas do plasma, alguns exemplos; (1) (2) (3) (4) TGO e TGP Fosfatase alcalina Tempo de Protrombina Albumina Srica

1.1. Tcnica de dosagem de bilirrubina Tcnica colorimtrica de determinao de bilirrubina atravs de soro ou plasma, apenas realizvel in vitro. Foi feita a dosagem para bilirrubina total e bilirrubina direta; o fator (F) de determinao da curva padro j tinha sido calculado, por isso no foi feito a curva de calibrao para este teste. 1.2. Metodologia Usaram-se tubos de deposito do plasma (amostra), ao todo foram 03 amostras, e dos reagentes para o branco, tais reagentes foram; nitrito de sdio, Reagente sulfanlico, gua destilada e Soluo aceleradora. Aps a identificao dos tubos em BT (Bilirrubina Total), BD (Bilirrubina Direta) e B (Branco), depositaram-se 2 gotas do Nitrito de sdio nos tubos BT e BD, 4 gotas do reagente sulfinlico no B e nos tubos restantes, de gua destilada foi pepitada 4 mL somente no B e no BD sendo a soluo aceleradora somente no BT e, por ltimo, a amostra. Agitou-se para misturar os substratos e deixou-se repousar por 3 minutos antes de fazer a leitura. Teve-se o cuidado de no encostar a gota na lateral do vidro do tubo e de ter ateno na ordem de depsito dos reagentes foi para evitar a formao do composto diazo-reagente o qual poderia provocar uma diminuio dos resultados, induzindo a resultados falsamente diminudos.

Foi utilizada a tcnica de dosagem Macro, pois a Micro vlida somente para dosagens em amostras com bilirrubinas elevadas. A leitura foi realizada no espectrofotmetro semi-automatizado a 530nm ou filtro verde para a quantificao do Branco e das amostras. No se observou nenhuma mudana de cor e aspecto do material antes ou aps a dosagem semi-quantitativa.

1.3.

Resultados

Seguindo o protocolo do laboratrio DOLES cujos parmetros foram BD at 0,4mg/dL e BT at 1,2 mg/dL. Para todas as amostras, os nveis de bilirrubinas no ultrapassaram a faixa considerada normal pelo procedimento do laboratrio DOLES. 1.4. Concluso

A tcnica de dosagem de bilirrubina um procedimento sensvel, h de ter treino e ateno do biomdico, pois qualquer confuso na ordem dos reagentes ou desleixo no momento de alguma etapa de colocao do reagente na amostra pode levar todo o trabalho a ser invalidado. um procedimento quantitativo j que, no final, usa-se o espectrofotmetro e o desenho de uma curva absorbnciaconcentrao e eficaz para diagnstico ou validao de prognstico cuja suspeita seja alguma disfuno heptica ou doena provinda desta.