Gua introduccin a la microbiologa Difusin de las Placas-Tcnica SEGURIDAD CONSIDERACIONES El alcohol es extremadamente inflamable.

Mantengael vaso de alcohol etlico lejos del mechero Bunsen. No pipetear con la boca. No coloqueuna varilla de vidrio en llamas de nuevo en el alcohol. Asegrese de saber la ubicacin de los incendios m. principios En los hbitats naturales, las bacterias suelen crecer juntos en las poblaciones con un nmero de especies. A fin de estudiar y caracterizar adecuadamente una especie bacteriana individual, se necesita un cultivo puro. La tcnica de difusin de la placa es una manera fcil y directa de lograr este resultado. En esta tcnica, un pequeo volumen de mezcla diluida de bacterias que contienen 100 a 200 clulas o menos es trasladado al centro de una placa de agar y se distribuye uniformemente sobre la superficie con una varilla estril, de vidrio en forma de L. La varilla de vidrio es normalmente esterilizadospor inmersin en alcohol y flameado para quemar el alcohol. Despus de la incubacin,algunas de las clulas dispersas se convierten en colonias aisladas. Una colonia es un gran nmero de clulas bacterianas en medio slido, el cual es visible a simple vistacomo una entidad discreta. En este procedimiento, se supone que una colonia se derivade una clula y por lo tanto representa un clon de un cultivo puro. Despus de la incubacin, la forma general de la colonia y la forma del borde o margense puede determinar mirando hacia abajo en la parte superior de la colonia. La naturaleza de la elevacin de la colonia es evidente cuando se ve desde el lado de la placa se mantiene a nivel de los ojos. Estas variaciones se ilustran en la figura 15.1.Despus de una colonia bien aislada ha sido identificado, puede ser recogido y estras en un medio fresco para obtener un cultivo puro. Figura 15.1 Caractersticas colonia de bacterias en medios de agar como se ve con el ojo desnudo. Las caractersticas de las colonias de bacterias se describen

procedimiento 1. Con un lpiz de cera, la etiqueta de la parte inferior de las placas de agar medio con el nombre de la sustancia que se inocula, su nombre (del grupo), y la fecha.

CONSEJOS Y PRECAUCIONES

(1) Cuando el fuego de alcohol sobre la varilla de vidrio, que toque a la llama slo el tiempo necesario para encender el alcohol, a continuacin, retirar del fuego mientras se quema el alcohol. (2) Espere de 5 a 10 segundos despus de fuego para permitir que elalcohol de quemar y para asegurarse de que el vidrio se enfre lo suficiente como para difundir la cultura sin que chisporrotea. Sostenga la barra brevemente en la superficie delagar hasta el final de enfriamiento. No devuelva la vara de fuego para el vaso. Si accidentalmente esto, retire la varilla del vaso y apagar las llamas con un libro reduciendo rpidamente el libro en el vaso de precipitados. No vierta el alcohol en llamas en el fregadero. No vierta agua en el alcohol en llamas. (3) Evitar la contaminacin de lacubierta de la placa de Petri y la cultura de no colocar la cubierta sobre la mesa, escritorio, o cualquier otro objeto, mientras que se propague. Sujete la tapa, parte inferiorhacia abajo, por encima de la superficie del agar tanto como sea posible. (4) Al girar elplato mientras cuidadosamente difusin de la cultura (pero no golpear los lados de la placa con la varilla de vidrio) dar lugar a una separacin an ms de las bacterias. (5)Una placa inoculada se incuba siempre en posicin invertida para evitar la condensacinde caer sobre la superficie de la placa e interferir con la formacin de colonias discretas.(6) Para evitar quemaduras, evitar la celebracin de la varilla de vidrio por lo que el alcohol corre hacia los dedos. (7) Mantenga todos los objetos inflamables, como papel,fuera del alcance de alcohol encendido. El aislamiento de bacterias Las colonias aisladas se pueden obtener mediante tcnicas diversas como la difusin de la placa, las tcnicas de la placa de rayas y la tcnica de verter la placa. aplicaciones Mdicas En el laboratorio clnico, el crecimiento de un cultivo puro es absolutamente necesarioantes de que las pruebas bioqumicas se pueden realizar para identificar un microorganismo sospechoso. Difusin de la placa tcnica

Principios de la tcnica de franja Plate Colonias aisladas, puro tambin puede ser obtenido por la tcnica racha de la placa. En esta tcnica, la mezcla bacteriana se transfiere al borde de una placa de agar con un asa de inoculacin y rayas a lo largo de la superficie en uno de varios patrones. En algn momento en las rayas, las clulas individuales se eliminarn del circuito mientras se desliza a lo largo de la superficie del agar y dar lugar a colonias separadas (figura 16.1).Una vez ms, se supone que una colonia proviene de una clula. El principio clave deeste mtodo es que por rayas, un gradiente de dilucin se establece sobre la superficie de la placa como las clulas se depositan en la superficie del agar. A causa de este gradiente, crecimiento confluente se produce en parte de la placa donde las clulas no estn lo suficientemente separados e individuales, colonias bien aisladas se desarrollan en otras regiones de la placa en el que pocos suficientes clulas se depositan en forma de colonias separadas que se pueden ver con a simple vista. Las clulas de la nueva colonia se puede recoger con una aguja de inoculacin y se transfiere a un agar inclinadoo en otro medio adecuado para el mantenimiento del cultivo puro.

Pour-plate technique