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Ctedra de Microbiologa Agrcola

UNIVERSIDAD NACIONAL DE ENTRE ROS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

Unidad Temtica 2

Metabolismo Microbiano
Benintende, Silvia y Sanchez, Cecilia

Introduccin Se denomina metabolismo a la suma de las transformaciones qumicas que ocurren en la clula. Puede dividirse en dos categoras: - Rutas generadoras de energa o degradativas (catabolismo) - Rutas consumidoras de energa o biosintticas (anabolismo) La funcin qumica esencial del metabolismo productor de energa es la de sintetizar molculas orgnicas que poseen un alto nivel de energa potencial en forma de enlaces ricos en energa, la que luego es acoplada por medio de reacciones a las vas anablicas. En el esquema presentado a continuacin se visualiza la asociacin entre estos procesos y el rol que desempea el ATP como agente acoplador entre la sntesis y el catabolismo.
Catabolismo
Fuente de energa

Biosntesis
Biopolmeros (p. ej.: protenas)

Fotosntesis

Intermediarios biosintticos (p. ej.: aminocidos)

Maquinaria fotosinttica

Depsitos intracelulares de precursores

Productos metablicos

Nutrientes extracelulares

Fig. 1. Papel del ATP acoplando el catabolismo y la fotosntesis a la biosntesis

La energa en los enlaces fosfato del ATP interviene en diversas etapas del proceso biosinttico. Participa de la entrada de nutrientes a la clula, se utiliza para convertir estos nutrientes en metabolitos intermedios de bajo peso molecular (aminocidos, nucletidos, c. grasos, etc.) y adems se utiliza en la polimerizacin de estos intermediarios en biopolmeros que constituyen los componentes principales del material celular (protenas, ac. nucleicos, lpidos, etc.). En el metabolismo, el ATP se genera por dos mecanismos bioqumicos diferentes: * Fosforilacin a nivel de sustrato
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* Transporte de electrones.

Tipos de Metabolismo productor de energa. Fermentacin Es un proceso productor de energa en el que los compuestos orgnicos actan como donadores y aceptores de electrones. Los procesos fermentativos siempre mantienen un estricto control en su balance de xido-reduccin. El nivel promedio de oxidacin de los productos finales es igual al del sustrato. La principal contribucin de la fermentacin es la produccin de ATP. La nica forma de producir ATP durante la fermentacin es por fosforilacin a nivel del sustrato. Los microorganismos que obtienen la energa por procesos fermentativos son anaerobios estrictos o facultativos. En general los organismos facultativos cambian su modo de metabolismo productor de energa cuando son expuestos al aire, aunque existe un grupo de microorganismos (bacterias del cido lctico) a las que el oxgeno no les modifica el metabolismo productor de energa prosiguiendo con la fermentacin an cuando crecen con aire. Las fermentaciones ms comunes de la glucosa son la fermentacin alcohlica y la homolctica. La fermentacin homolctica ocurre en algunos grupos de bacterias como las bacterias del cido lctico, mientras que la alcohlica es propia de algunos hongos, especialmente de las levaduras (Figura 2).

Fig. 2. Comparacin entre (a) la fermentacin del cido lctico y (b) la fermentacin alcohlica.
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En estas fermentaciones la conversin de la glucosa en cido pirvico implica una serie de pasos metablicos conocido como ruta de Embden- Meyerhof (gliclisis). Hay otras fermentaciones de carbohidratos que utilizan la va de Embden Meyerhof difiriendo en el metabolismo del cido pirvico. En la Tabla 1 se sintetizan dichas fermentaciones. Tabla 1. Distintos tipos de fermentaciones y los grupos bacterianos que las realizan. Clase de Fermentacin Homolctica cido mixta Productos cido lctico Grupos bacterianos Bacterias del cido lctico: Streptococcus sp., Pediococcus sp. Y Lactobacillus sp. Bcterias entricas: Escherichia coli, Salmonella sp.

Butanodilica

Propinica

cido lctico cido actico cido succnico CO2 - H2 Etanol cido lctico Enterobacter sp., Serratia sp. cido actico cido succnico CO2 - H2 Etanol 2 3 butanodiol cido propinico Propionibacterium sp. cido actico cido succnico CO2

Respiracin La respiracin puede definirse como el proceso metablico productor de energa en el que los donadores de electrones son compuestos orgnicos y el aceptor final de electrones es el oxgeno molecular. Una caracterstica distintiva de la mayora de los procesos respiratorios es la presencia en la clula de un equipo de enzimas transportadoras, que constituyen la cadena respiratoria de transporte de electrones. La energa que se libera durante la oxidacin completa de un compuesto orgnico (respiracin), es mucho mayor que la que procede su fermentacin. El rendimiento total de ATP por mol de sustrato respirado es de 38 ATP; mientras que en la fermentacin, es de 2 ATP. Muchos de los microorganismos que realizan respiracin son aerobios estrictos, mientras otros ante condiciones de anaerobiosis pueden obtener la energa que necesitan, por fermentacin o respiracin anaerbica. En este ltimo caso los microorganismos son anaerobios facultativos. En la Figura 3 se observa la va glicoltica y la forma en que se degradan otros azcares siguiendo esta va con ligeras modificaciones. Luego se presenta el ciclo de Krebs (Fig. 4) y la cadena transportadora de electrones (Fig. 5).
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Fig. 3.: La ruta de Embden Meyerhof (glucoltica) de conversin de glucosa en cido pirvico

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Fig. 5. Cadena de transporte de lectrones.

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En el ltimo esquema (Figura 6) se sintetizan estas rutas destacndose dnde se libera energa suficiente para la sntesis de ATP.

Fig. 6 Relacin entre gliclisis, ciclo de Krebs y cadena de transporte de electrones

Respiracin anaerbica Algunas bacterias son capaces de realizar su metabolismo respiratorio en condiciones completamente anaerbicas, utilizando nitrato, sulfato o carbonato como aceptor inorgnico terminal de electrones. Utilizacin de nitrato como aceptor final de electrones. Algunas bacterias tienen las enzimas necesarias para poder utilizar el nitrato (NO3-) como aceptor final de electrones en caso de anaerobiosis (falta de O2). Este proceso es siempre un modo alternativo de metabolismo respiratorio productor de energa para crecer en ausencia de O2. La oxidacin de sustratos orgnicos es completa, siendo el CO2 el nico producto final oxidado. Estas bacterias reducen el NO3- pudiendo llevarlo a N2. Este fenmeno se denomina desnitrificacin. La transferencia de los electrones a los NO3- y NO2- se hace a nivel del citocromo b, lo que implica una ganancia de ATP de un nmero menor por cada NADH2 que se oxida en la cadena electrnica. Por consiguiente el rendimiento energtico es intermedio entre la fermentacin y la respiracin (16 ATP por mol de glucosa). Utilizacin de sulfatos y carbonatos como aceptores de electrones La facultad de utilizar sulfatos o carbonatos como aceptores de electrones es una facultad restringida a pocos gneros de bacterias. Todas son anaerbicas estrictas y no es un modo alternativo de metabolismo.

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NUTRICIN Para el catabolismo y anabolismo, los microorganismos deben tomar del ambiente las sustancias para crecer y generar energa. A estas sustancias se las llama nutrientes. Algunos nutrientes son empleados como bloques en la construccin de los constituyentes celulares, mientras que otros sirven como fuente de energa. Los microorganismos toman esos nutrientes del lugar donde se desarrollan, p. ej.: el suelo, la leche, un animal, una planta, etc. Cuando queremos hacer crecer un microorganismo o grupo de microorganismos en laboratorio, hacemos un cultivo de estos microorganismos en condiciones artificiales. (Para su crecimiento se usan medios de cultivo: conjunto de sustancias nutritivas y condiciones determinadas que permiten el crecimiento y multiplicacin de un microorganismo o grupo de microorganismos.) Los medios de cultivo deben contener los nutrientes necesarios para el crecimiento del o los microorganismos para el cual fue creado. Los microorganismos son muy diversos en cuanto a sus requerimientos nutritivos. Para construir un medio de cultivo para un organismo o grupo dado, deben conocerse las necesidades nutritivas de los mismos. Las clulas microbianas tienen entre un 80 % a 90 % de su peso en agua, por lo que ste es un nutriente principal. El peso seco restante contiene una serie de elementos en diversas proporciones, de los cuales los principales son: H, O, C, N, P y S. Tabla 2. Tambin se requiere una cantidad mucho menor de K, Mg, Ca, Fe, Mn, Co, Cu, Mo y Zn. En la siguiente tabla vemos qu funcin cumple cada uno de los constituyentes celulares. Algunos de estos elementos (Mn, Co, Cu, Zn, Mo) se los requiere en pequesimas cantidades y se los denomina elementos traza o micronutrientes.
Tabla 2. Funciones fisiolgicas de los principales elementos

Elemento Hidrgeno Oxgeno Carbono Nitrgeno Azufre Fsforo Potasio Magnesio Manganeso Calcio Hierro Cobalto Cobre, Zinc, Molibdeno

Funciones Fisiolgicas Constituyente del agua celular, materiales orgnicos celulares Constituyente del agua celular, de materiales orgnicos celulares; como O2, aceptor de electrones en la respiracin de los aerobios Constituyente de materiales celulares orgnicos Constituyente de protenas, cidos nucleicos, coenzimas Constituyente de protenas (en los aminocidos cistena y metionina); de algunas coenzimas (por ejemplo; Co A cocarboxilasa) Constituyente de cidos nucleicos, fosfolpidos, coenzimas Uno de los principales cationes inorgnicos de las clulas, cofactor de algunas enzimas Importante catin celular; cofactor inorgnico en muchas reacciones enzimticas, incluyendo aquellas que requieren ATP; funciona uniendo enzimas a los substratos; constituyente de la clorofila Cofactor inorgnico de varias enzimas, a veces reemplaza al Mg Importante catin celular; cofactor de algunas enzimas (por ejemplo proteinasas) Constituyente de citocromos y otras hemo protenas; cofactor de un cierto nmero de enzimas Constituyente de la vitamina B12 y de sus coenzimas derivadas Constituyentes inorgnicos de enzimas especiales
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Los microorganismos difieren en la forma qumica en la que debe proporcionarse los siguientes elementos: C, N, S y O. Requerimientos de C Existen microorganismos que pueden utilizar el C en forma de CO2. Estos microorganismos son los microorganismos fotosintticos o los que utilizan energa a partir de la oxidacin de compuestos inorgnicos como p. ej., NH3. La energa necesaria para reducir el CO2 a C de compuestos celulares deriva de la energa lumnica o de la oxidacin. Los otros microorganismos obtienen el C de compuestos orgnicos y adems estos aportan la energa necesaria para el metabolismo celular. Los microorganismos difieren tanto en nmero como en la clase de compuestos orgnicos que pueden usar como fuente principal de energa. Por ej., ciertas bacterias del gnero Pseudomonas pueden usar cualquiera de 90 compuestos orgnicos como nica fuente de C y energa . En el otro extremo estn ciertas bacterias que descomponen celulosa que slo pueden emplear este compuesto como fuente de C y energa. Requerimientos de N y S Como vimos estos son constituyentes de compuestos orgnicos celulares. Muchos microorganismos pueden utilizarlos de los compuestos inorgnicos oxidados: NO3-; SO4=; y deben reducirlos antes de incorporarlos a los materiales celulares. Otros microorganismos no pueden producir estas reducciones y deben ser incorporados en forma reducida. Por ej., algunos microorganismos utilizan sales de amonio. En cuanto a los compuestos reducidos del S, pueden tomarlo como sulfuro (S=) o como un compuesto orgnico (cistena) que lo contiene como grupo sulfidrilo ( -SH). Frecuentemente se les puede suministrar a los microorganismos estos elementos en combinacin orgnica (aminocidos, peptonas), cumpliendo tambin con el aporte de C y energa. Varios grupos procariticos pueden utilizar N2. Este proceso se denomina fijacin de N2, y para ello los microorganismos poseen una enzima: la Nitrogenasa, que cataliza la reaccin de reduccin de N2 a NH3. Este NH3 es luego incorporado al material celular. Entre estos microorganismos encontramos organismos que viven libres en el suelo como Azotobacter sp, Derxia sp, Beijerickia sp, Clostridium pasteurianum, etc; y otros que se asocian a plantas, como la conocida asociacin entre Leguminosas y bacterias de los gneros Rhizobium sp y Bradyrhizobium sp. Factores de crecimiento A menudo algunos microorganismos requieren de algn compuesto orgnico que no pueden sintetizar a partir de fuentes de C ms sencillas. Estos compuestos deben ser entonces suministrados como nutrientes. Son llamados factores de crecimiento. Pueden ser: # Aminocidos: para constituir protenas # Purinas y Pirimidinas: Para constituir cidos nucleicos # Vitaminas: Para compuestos orgnicos que forman enzimas Estos son requeridos en muy pequeas cantidades y a menudo en los medios de cultivo se agregan al incorporar extracto de levadura.

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Funciones del O en la nutricin El O es un componente celular y es proporcionado por el H2O en gran cantidad. Sin embargo muchos microorganismos necesitan O2 para poder vivir. Estos microorganismos dependen de la respiracin aerbica para sus requerimientos energticos y ocupan el O2 como aceptor terminal de electrones. Estos organismos son los aerobios estrictos (Mycobacterium tuberculosis). Otros organismos son inhibidos en su desarrollo por accin del O2 y a estos se los llama anaerobios estrictos (Clostridium, Propionibacterium). Otros microorganismos son capaces de crecer tanto en presencia como en ausencia de O2. Estos son anaerobios facultativos, que a su vez pueden ser de dos tipos: -aquellos que tienen un tipo productor de energa exclusivamente fermentativo, pero no es afectado por la presencia de O2. (Alguna bibliografa la denomina anaerobios aerotolerantes, y son la bacterias del cido lctico). -otros pueden pasar de un metabolismo respiratorio (en presencia de O2) a uno de tipo fermentativo (cuando no tienen O2) o de respiracin anaerbica. Ejemplo de esto son las bacterias Coliformes: Escherichia coli, Aerobacter aergenes, Klebsiella sp, etc. Otros: Pseudomonas sp, Bacillus sp, Alcaligenes sp. Por otra parte estn los microorganismos microaeroflicos, que son aquellos que poseen enzimas que se inactivan en condiciones de alta disponibilidad de O2, y slo pueden actuar con bajas presiones de este elemento. Azospirillum sp es un ejemplo de microorganismo microaeroflico, ya que tiene la capacidad de fijar N2 (por poseer la enzima Nitrogenasa) slo cuando est en un ambiente con baja tensin de O2. Categoras nutricionales Una forma sencilla de clasificar los organismos se basa en la naturaleza de la fuente de energa y fuente principal de C. Con respecto a la fuente de energa: - fottrofos: capaces de usar la luz como fuente de energa. - quimitrofos: usan una fuente de energa qumica. Segn la fuente de C: - auttrofos: utilizan CO2. - hetertrofos: utilizan una fuente orgnica de C. Las categoras nutricionales segn estos criterios quedan organizadas as: * fotoauttrofos: incluye algunos microorganismos fotosintticos (vegetales superiores); dentro de los cuales tenemos algas, bacterias fotosintticas (Cianobacterias). * fotohetertrofos: incluye algunas de las bacterias rojas y verdes (son fotosintticas pero no productoras de O2 y al H lo obtienen de compuestos de SH2 o de H2). No ocupan CO2 sino compuestos orgnicos. * quimioauttrofos: oxidan compuestos inorgnicos ( NH3 , NO2 , H2, SH2 , etc.) Por ej., las bacterias nitrificantes que transforman el NH3 a NO2- y luego a NO3-. En esta reaccin se libera energa , que la bacteria utiliza para captar el CO2 como fuente carbonada. Dentro de bacterias nitrificantes tenemos: Nitrosomonas europea, Nitrobacter winogradsky. *quimiohetertrofos: en estos tanto la energa como el C pueden obtenerse del metabolismo de un mismo sustrato orgnico. Por ej., glucosa que aporta energa (ATP) y los esqueletos carbonados a partir de los intermediarios del ciclo de Krebs. Tabla 3.

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Tabla 3. Clasificacin de los microorganismos en base a sus categoras nutricionales.

REQUERIMIENTOS DE ENERGA FOTTROFOS Utilizan la energa luminosa REQUERIMIENTO DE CARBONO AUTTROFOS Utilizan C inorgnico FOTOAUTTROFOS cianobacterias QUIMITROFOS Utilizan energa qumica QUIMIOAUTTROFOS bacterias nitrificantes QUIMIOHETERTROFOS la mayora de las bacterias (simbiontes, parsitas, saprfitas)

HETERTROFOS Usan C orgnico FOTOHETERTROFOS Bacterias verdes y rojas

BIBLIOGRAFA SUGERIDA BROCK, T. & MADIGAN, M. Microbiologa. 6 Ed. Mxico. Prentice Hall Hispanoamaricana S.A. 1993. 956 pag. PAUSTIAN, T. http://www.bact.wisc.edu/microtextbook/Metabolism. 2000 STANIER, R.; ADELBERG, E. INGRAHAM, J. Microbiologa. (The microbial world. Fourth Edition). Barcelona. Editorial Revert. 1986.

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