Determinacin cuantitativa de colesterol total

INTRODUCCION
El colesterol es un esterol (lpido) que se encuentra en los tejidos corporales y en el plasma sanguneo de los vertebrados. Se presenta en altas concentraciones en el hgado, mdula espinal, pncreas y cerebro.

Estructura qumica
La frmula qumica del colesterol se representa de dos formas: C27H46O / C27H45OH. Es un lpido esteroide, molcula de ciclopentanoperhidrofenantreno (o esterano), constituida por cuatro carboxiclos condensados o fundidos, denominados A, B, C y D, que presentan varias sustituciones: 1. 2. 3. 4. Dos radicales metilo en las posiciones C-10 y C-13. Una cadena aliftica ramificada de 8 carbonos en la posicin C-17. Un grupo hidroxilo en la posicin C-3. Una insaturacin entre los carbonos C-5 y C-6.

En la molcula de colesterol se puede distinguir una cabeza polar constituida por el grupo hidroxilo y una cola o porcin apolar formada por el carbociclo de ncleos condensados y los sustituyentes alifticos. As, el colesterol es una molcula tan hidrfoba que la solubilidad de colesterol libre en agua es de 10-8 M y, al igual que los otros lpidos, es bastante soluble en disolventes apolares como el cloroformo (CHCl3).

Degradacin del colesterol

En el ser humano no puede metabolizar la estructura del colesterol hasta CO2 y H2O. El ncleo intacto de esterol se elimina del cuerpo convirtindose en cidos y sales biliares las cuales son secretadas en la bilis hacia el intestino para desecharse por heces fecales. Parte de colesterol intacto es secretado en la bilis hacia el intestino el cual es convertido por las bacterias en esteroides neutros como coprostanol y colestanol. En ciertas bacterias si se produce la degradacin total del colesterol y sus derivados, sin embargo la ruta metablica es an desconocida

Funciones del colesterol

El colesterol es imprescindible para la vida animal por sus numerosas funciones: 1. Estructural: el colesterol es un componente muy importante de las membranas plasmticas de los animales (en general, no existe en los vegetales). Aunque el colesterol se encuentra en pequea cantidad en las membranas celulares, en la membrana citoplasmtica lo hallamos en una proporcin molar 1:1 con relacin a los fosfolpidos, regulando sus propiedades fsico-qumicas, en particular la fluidez. Sin embargo, el colesterol se encuentra en muy baja proporcin o est prcticamente ausente en las membranas subcelulares. 2. Precursor de la vitamina D: esencial en el metabolismo del calcio. 3. Precursor de las hormonas sexuales: progesterona, estrgenos y testosterona. 4. Precursor de las hormonas corticoesteroidales: cortisol y aldosterona. 5. Precursor de las sales biliares: esenciales en la absorcin de algunos nutrientes lipdicos y va principal para la excrecin de colesterol corporal. 6. Precursor de las balsas de lpidos.

Hipercolesterolemia

La concentracin actualmente aceptada como normal de colesterol en el plasma sanguneo (colesterolemia) de individuos sanos es de 150 a 200 mg/dL. Sin embargo, debe tenerse presente que la concentracin total de colesterol plasmtico tiene un valor predictivo muy limitado respecto del riesgo cardiovascular global . Cuando esta concentracin aumenta se habla de hipercolesterolemia. Dado que el colesterol es insoluble en agua, el colesterol plasmtico slo existe en la forma de complejos macromoleculares llamados lipoprotenas, principalmente LDL y VLDL, que tienen la capacidad de fijar y transportar grandes cantidades de colesterol. La mayor parte de dicho colesterol se encuentra en forma de steres de colesterol, en los que algn cido graso, especialmente el cido linoleico (un cido graso de la serie omega-6), esterifica al grupo hidroxilo del colesterol. Actualmente se reconoce ampliamente el papel causal del colesterol presente en las lipoprotenas de baja densidad (LDL) en la patogenia de la arteriosclerosis. De esta manera, la existencia sostenida de niveles elevados de colesterol LDL (popularmente conocido como "colesterol malo") por encima de los valores recomendados, incrementa el riesgo de sufrir eventos cardiovasculares (principalmente infarto de miocardio agudo) hasta diez aos despus de su determinacin, tal como lo demostr el estudio de Framingham iniciado en 1948. De manera interesante, el colesterol presente en las lipoprotenas de alta densidad (HDL) ejercera un rol protector del sistema cardiovascular, que por ello se conoce como "colesterol bueno". As, el colesterol tiene un impacto dual y complejo sobre la fisiopatologa de la arteriosclerosis, por lo que la estimacin del riesgo cardiovascular basado slo en los niveles totales de colesterol plasmtico es claramente insuficiente. Sin embargo, y considerando lo anterior, se ha definido clnicamente que los niveles de colesterol plasmtico total (la suma del colesterol presente en todas las clases de lipoprotenas) recomendados por la Sociedad Norteamericana de Cardiologa (AHA) son:

Colesterolemia por debajo de 200 mg/dL (miligramos por decilitros): es la concentracin deseable para la poblacin general, pues por lo general correlaciona con un bajo riesgo de enfermedad cardiovascular. Colesterolemia entre 200 y 239 mg/dL: existe un riesgo intermedio en la poblacin general, pero es elevado en personas con otros factores de riesgo como la diabetes mellitus. Colesterolemia mayor de 240 mg/dL: puede determinar un alto riesgo cardiovascular y se recomienda iniciar un cambio en el estilo de vida, sobre todo en lo concerniente a la dieta y al ejercicio fsico.

Factores de riesgo En sentido estricto, el nivel deseable de colesterol LDL debe definirse clnicamente para cada sujeto en funcin de su riesgo cardiovascular individual, el cual est determinado por la presencia de diversos factores de riesgo, entre los que destacan:

Edad y sexo. Antecedentes familiares. Tabaquismo. Presencia de hipertensin arterial. Nivel de colesterol HDL.

En personas con riesgo cardiovascular alto, es decir, aquellas con una probabilidad de ms de un 20% de sufrir un evento cardiovascular mayor o letal en un periodo de 10 aos, tales como pacientes diabticos o que previamente hayan tenido uno de estos eventos, la recomendacin actual es mantener un nivel de colesterol LDL menor a 100 mg/dL. Incluso en los pacientes que se catalogan de muy alto riesgo se recomienda un colesterol LDL igual o menor a 70 mg/dL.

En Espaa la mxima concentracin recomendada de colesterol en sangre es ms elevada que la aceptada internacionalmente y basada en la evidencia cientfica, como lo indica la Sociedad Espaola de Arteriosclerosis, quiz debido a que el riesgo cardiovascular global en Espaa es ms bajo:[cita requerida]

Colesterol por debajo de 200 mg/dL: bajo riesgo. Colesterol entre 200 y 300 mg/dL: riesgo intermedio. Colesterol mayor de 300 mg/dL: alto riesgo.

FUNDAMENTO
El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado segn la reaccin siguiente: Esteres colesterol + H2O Colesterol + cidos grasos Colesterol + O2 4-Colestenona + H2O2 2H2O2 + Fenol + 4-Aminofensona Quinonimina + 4H2O La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de colesterol presente en la muestra ensayada.

Significado clnico
El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las clulas del organismo. El hgado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas. La determinacin del colesterol es una de las herramientas ms importantes para el diagnostico y la clasificacin de las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular. El diagnostico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio.

MATERIALES Y REACTIVOS
Reactivos
Reactivos PIPES ph 6-9 Fenol Colesterol esterasa (CHE) Colesterol oxidasa (CHOD) Peroxidasa (POD) 4- Aminofenazona (4-AF) Patrn primario acuoso de colesterol

Colesterol CAL

Materiales
Espectrofotmetro analizador para lecturas a 505 nm Cubetas de 1.0cm a paso de luz Equipamiento habitual de laboratorio

Muestras
Suero o plasma

PROCEDIMIENTO
1. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada. 2. Pipetear: Reactivo Blanco 1ml Patrn 1ml Control 1ml Muestra

Patrn/calibrador Control/estndar Muestra (suero)

----------

10 ul -------

---10 ul ----

1ml ------10 ul

3. Mezclar e incubar 10 min (15-25C) 4. Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra, frente al blanco del reactivo. El color es estable como mnimo 60 minutos.

Valores de referencia
Evaluacin del riesgo Menos de 200 mg/dl------- -Normal 200-239 mg/dl---------------Moderado 240 o ms--------------------Alto Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

Interferencias
No se han observado interferencias de hemoglobina hasta 5gr/dl y bilirrubina hasta 10 mg/dl. Se han descrito varias drogas y otras sustancias que interfieren en la determinacin del colesterol.

RESULTADOS Y CALCULOS
Resultados
Control------0.087 Patrn ------0.091 Muestra-----0.096

Clculos

Resultado final:

DISCUSIN
La determinacin del colesterol es una de las herramientas ms importantes para el diagnostico y la clasificacin de las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.

Determinacin cuantitativa colesterol HDL

INTRODUCCION
Las lipoprotenas de alta densidad (HDL, del ingls High density lipoprotein) son aquellas lipoprotenas que transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hgado. Debido a que las HDL pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de vuelta al hgado para su excrecin, se les conoce como el colesterol o lipoprotena buena. Cuando se miden los niveles de colesterol, el contenido en las partculas, no es una amenaza para la salud cardiovascular del cuerpo (en contraposicin con el LDL o colesterol malo). HDL son las lipoprotenas ms pequeas y mucho ms densas, estn compuestas de una alta proporcin de protenas. El hgado sintetiza estas lipoprotenas como protenas vacas y, tras recoger el colesterol, incrementan su tamao al circular a travs del torrente sanguneo. Los hombres suelen tener un nivel notablemente inferior de HDL que las mujeres (por lo que tienen un riesgo superior de enfermedades del corazn). Estudios epidemiolgicos muestran que altas concentraciones de HDL (superiores a 60 mg/dL) tienen una carcter protector contra las enfermedades cardiovasculares (como la cardiopata isqumica e infarto de miocardio). Bajas concentraciones de HDL (por debajo de 35 mg/dL) suponen un aumento del riesgo de estas enfermedades, especialmente para las mujeres

FUNDAMENTO
Las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL) presentes en la muestra, precipitan en presencia de fosfotungstato y iones magnesio. El sobrenadante contienen las lipoprotenas de elevada densidad (HDL), cuyo colesterol se cuantifica espectrofotomtricamente mediante las reacciones acopladas descritas a continuacin. Colesterol esterificado + H2O Colesterol + cidos grasos Colesterol + O2 + H2O Colestenona + H2O2 2H2O2 + 4-Aminoantipirina + DCFS Quinonaimina + 4H2O

Caractersticas diagnosticas
La HDL participa en la captacin del colesterol en los tejidos y en su transporte hacia el hgado donde se eliminan en forma de cidos biliares.. Existe un correlacin positiva entre las concentraciones bajas de HDL- colesterol en plasma y la incidencia de ateroesclerosis, base del infarto de miocardio y accidentes cerebrovasculares. Existen diversos estados patolgicos o influencias ambientales asociados con niveles reducidos de HDL: enfermedades hepatocelulares agudas o crnicas, hiperalimentacion intravenosa, malnutricin severa, diabetes, anemia crnica, alteraciones mieloproliferativas, enfermedad de tangier, analfalipoproteinemia, estrs agudo, algunos medicamentos y el tabaco.

El diagnostico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultando de un nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio.

MATERIALES Y REACTIVOS
Reactivos
Reactivo A. 2 X 50 ml Fosfotungstato 0.4 mmol/Lt, cloruro de magnesio 20 mmol/Lt Reactivo B. 2 x 50 ml. Fosfato 35 mmol/Lt, colesterol esterasa, colesterol oxidasa, peroxidasa, 4- aminoantipirina, colato sdico, diclorofenol sulfonato. Reactivo C. Patrn de colesterol HDL. 1 X 5 Ml. Colesterol 15 mg//dl. Patrn primario acuoso.

Material
Centrifuga de sobremesa Bao de agua a 37C Analizador, espectrofotmetro, analizador de muestras.

Muestras
Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar.

PROCEDIMIENTO
1. Preparar en un tubo de centrifuga Muestra 0.2 ml Reactivo (A) 0.5 ml 2. agitar bien y dejar durante 10 minutos a temperatura ambiente 3. centrifugar durante 10nminutos a un mnimo de 4000 rpm 4. recoger con cuidado el sobrenadante Colorimetra 5. Atemperar el reactivo B a temperatura ambiente. 6. pipetear en tubos de ensayo. Blanco Patrn Muestr a Agua destilada 50 ul ------Patrn de colesterol HDL ----50 ul ---(S) Sobrenadante muestra -------50 ul Reactivo B 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 7. Agitar bien e incubar los tubos durante 30 minutos a temperatura ambiente (16-25C) 8. Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra a 500 nm frenete al blanco. El color es estable durante al menos 30 minutos.

Valores de referencia
Las concentraciones de HNL varan considerablemente con la edad y el sexo. El siguiente valor discriminante ha sido recomendado para identificar los individuos con elevado riesgo de enfermedad coronaria. Hasta 35 mg/dl= 0.91 mmol/Lt-------------------------------Riesgo elevado

Menos de 60 mg/ dl = menos 1.56 mmol/Lt-----------------Riesgo bajo.

Interferencias
El colesterol HDL en suero o plasma es estable 7 das a 2-8 C. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o floruro no interfieren.

RESULTADOS Y CALCULOS
Resultados
Muestra------0.021 Patron-------0.011 Control------0.023

Clculos
La concentracin de colesterol HDL en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula general.

Resultado final:

DISCUSIN
Existen diversos estados patolgicos o influencias ambientales asociados con niveles reducidos de HDL: enfermedades hepatocelulares agudas o crnicas, hiperalimentacion intravenosa, malnutricin severa, diabetes, anemia crnica, alteraciones mieloproliferativas, enfermedad de tangier, analfalipoproteinemia, estrs agudo, algunos medicamentos y el tabaco.

Determinacin cuantitativa de triglicridos

INTRODUCCION
Los triglicridos, triacilglicridos o triacilgliceroles son acilgliceroles, un tipo de lpidos, formados por una molcula de glicerol, que tiene esterificados sus tres grupos hidroxlicos por tres cidos grasos, saturados o insaturados. Los triglicridos forman parte de las grasas, sobre todo de origen animal. Los aceites son triglicridos en estado lquido de origen vegetal o que provienen del pescado.

Transporte de los triglicridos

Las grasas se hidrolizan en el intestino delgado para poder formar cidos grasos y glicerina para atravesar la pared intestinal, aislados o en forma de jabones al combinarse con los jugos pancreticos e intestinales. Luego son reconstruidos de nuevo al otro lado de la pared intestinal; pero dado que los lpidos son insolubles en agua, deben combinarse con protenas, sintetizadas por el intestino, para ser transportadas y distribuidas a travs de la sangre a todo el organismo; el transporte de triglcridos est estrechamente integrado con el transporte de otros lpidos, como el colesterol, y est directamente relacionado con enfermedades como la arteriosclerosis. El cuerpo humano utiliza tres tipos de vehculos transportadores de lpidos: 1. Lipoprotenas, como los quilomicrones, que los transportan al hgado tras su absorcin por el intestino, desde donde se distribuyen al resto de clulas del cuerpo, sobre todo las adiposas y musculares en forma de lipoprotenas VLDL, IDL, LDL y HDL. Las clulas del tejido adiposo son las principales clulas de reserva de grasas. 2. Albmina srica. Transporta cidos grasos libres. 3. Cuerpos cetnicos. Pequeas molculas hidrosolubles (acetoacetato y -hidroxibutirato) producidas en el hgado por oxidacin de los cidos grasos. Dado que son solubles en agua (y por tanto en la sangre), pueden viajar en ella sin problemas.

Funcin biolgica de los triglicridos

Constituyen la principal reserva energtica del organismo animal (como grasas) y en los vegetales (aceites). El exceso de lpidos se almacena en grandes depsitos en los animales, en tejidos adiposos. Son buenos aislantes trmicos que se almacenan en los tejidos adiposos subcutneos de los animales de climas fros como, por ejemplo, las ballenas, el oso polar, etc. Son productores de calor metablico, durante su degradacin. Un gramo de grasa produce 9,4 kilocaloras. En las reacciones metablicas de oxidacin, los prtidos y glcidos producen 4.1 Kcal. Dan proteccin mecnica, como los constituyentes de los tejidos adiposos que estn situados en la planta del pie, en la palma de la mano y rodeando el rin (acolchndolo y evitando su desprendimiento).

Salud y triglicridos

El aumento de triglicridos en la sangre se llama hipertrigliceridemia y es un factor de riesgo cardiovascular

Hipertrigliceridemia

El trmino hipertrigliceridemia se usa para denominar el exceso de concentracin srica de triglicridos. De este modo una cantidad de triglicridos superior a 200 mg/dL en sangre es considerada hipertrigliceridemia. Esta afeccin no tiene por qu estar asociada a un aumento significativo en los niveles de colesterol. El origen puede ser gentico, afectando a varios miembros de una misma familia, secundario a una enfermedad o a unos hbitos alimentarios y de vida poco saludables. Un nivel alto de triglicridos puede provocar ateroesclerosis, lo cual incrementa el riesgo de problemas cardiovasculares. Para la determinacin del nivel de triglicridos es necesario realizar un anlisis sanguneo precedido de 12 horas de ayuno.

FUNDAMENTO
Los triglicridos incubados con lipoproteinlipasa (LPL) liberan glicerol y cidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa (GPO) y ATP en presencia de glicerol quinasa(GK) para producir glicerol 3- fosfato (G3P) y adenosina 5- fosfato (ADP). El G3P es entonces convertido a dihidroxiacetona fosfato (DAP) y perxido de hidrogeno, reacciona con 4aminofenaazona (4-AF) y p-clorofenol, reaccin catalizada por la peroxidasa (POD) dando una coloracin roja: Triglicridos + H2O Glicerol + cidos grasos libres Glicerol + ATP G3P + ADP G3P + O2 DAP + H2O2 H2O2 + 4-AF + P-clorofenol Quinona + H2O

Significado clnico
Los triglicridos son grasa que suministran energa a la clula. Al igual que el colesterol, son transportadas a las clulas del organismo por las lipoprotenas en la sangre. Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar los niveles de triglicridos. Su aumento es relativamente inespecfico. Diversas dolencias, como diabetes mellitus pueden estar asociadas con su elevacin.

MATERIALES Y REACTIVOS
Reactivos
Reactivos GOOD P-clorofenol Lipoprotein lipasa(LPL) Glicerol quinasa (GK) Glicerol 3- oxidasa (GPO) 4- Aminofenazona (4-AF) ATP Calibrador primario de triglicridos

Triglicridos CAL

Material
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 505 nm Cubetas de 1.0 cm a paso de luz Equipamiento habitual de laboratorio

Muestras
Suero o plasma Estabilidad de la muestra 5 das 2-8

PROCEDIMIENTO
1. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada 2. Pipetear Blanco Patrn Muestra R(Ml) 1,0 1,0 1,0 Patrn (Ul) ----10 ---Muestra (Ul) -------10 3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37C 4. Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra frente al blanco del reactivo. El color es estable como mnimo 30 minutos.

Valores de referencia
Hombres------------40-160 mg/dl Mujeres-------------30-135 mg/dl Estos valores son orientativos, es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia

Interferencias
No se han observado interferencias con bilirrubina Mayor a 170 umol/ dl, y hemoglobina Se han descrito varias drogas y otras sustancias que interfieren en la determinacin de triglicridos.

RESULTADOS Y CALCULOS
Resultados
Control-------0.075 Patrn--------0.090

Muestra------0.107 Clculos
La concentracin de colesterol HDL en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula general.

Resultado final:

DISCUSIN
Los niveles altos de triglicridos son inespecficos, pero la diabetes mellitus puede estar asociada con su elevacin.