Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
Seminario I:
ENZIMOLOGÍA
Profesor Coordinador: Nelson Carvajal
Ahora, en los organismos no se puede usar solamente la temperatura para lograr el “empuje” de la
energía de activación, porque además de esto ser un gasto energético enorme, un aumento excesivo
en la temperatura aumentaría de en gran medida el grado de desorden dentro del organismo, y así
1
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
arruinando el orden en el que se logra mantener a las moléculas gracias a la energía que se obtiene
del catabolismo. Sumándole a esto, que los sistemas biológicos, en general, son isotérmicos esto
quiere decir que todas sus partes se encuentran a la amisma temperatura. Por lo tanto un aumento
en la Tª, para lograr una velocidad de reacción más rápida significaría provocar daños en el
organismo.
Por lo anteriormente expuesto, se deduce que los sistemas biológicos utilizan otro sistema para
aumentar la velocidad de una reacción química vital. Esto es en base a catalizadores.
Un catalizador reduce la barrera de energía para una reacción con lo que aumenta la
fracción de moléculas que tienen la energía suficiente para alcanzar el estado de
transición y hacer que las reacciones vayan más rápido en ambas direcciones.
La mayor parte de los catalizadores biológicos son proteínas que se denominan enzimas. Los
sistemas biológicos utilizan enzimas para llevar reacciones por otro camino que tiene menor energía
d activación, sin afectar el equilibrio de la reacción.
Las enzimas, son en su mayoría proteínas, esto les confiere características especiales como
carga eléctrica, estructura terciaria y cuaternaria especifica, solubilidad especial,
su síntesis esta relacionada directamente con la información del ADN, veremos que
muchas de estas características se aplican de formas particulares a las enzimas.
Las enzimas son catalizadores biológicos por lo que su característica principal es que
catalizan reacciones dentro del organismo, la manera en que lo hacen es utilizando vías
alternativas de las reacciones para lograr disminuir la energía de activación
Las enzimas son altamente especificas, la especificidad es por sobre todo con el tipo de
reacción que catalizan y no tanto con el sustrato. Esta especificidad esta dada sobretodo por
características físicas estructurales mas que únicamente químicas, que se van a configurar en
el sitio activo de una enzima
Las enzimas son eficaces, ya que aun en pequeñas concentraciones pueden catalizar
concentraciones de hasta mil veces más sustrato, además de que transforman un gran
numero de moléculas de sustrato en poco tiempo.
Son reutilizables, característica fundamental, ya que si no tuvieran esa cualidad, sería
energéticamente poco funcional para la célula. Esta característica puede ser observada
fácilmente en mediciones de concentraciones enzimáticas antes y después de una reacción
catalizada biológicamente.
2
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
Son regulables. Es posible regular las velocidades de los procesos metabólicos mediante
cambios en la eficacia catalítica de las enzimas específicas.
No alteran el equilibrio de las reacciones, solo alteran la velocidad en que este equilibrio
se produce
Su funcionamiento óptimo esta determinado por un pH y temperaturas determinadas.
5.-En un modelo del sitio activo de una enzima, analice la unión del
sustrato y su posterior transformación en los productos de la reacción.
Haga el mismo análisis para una reacción con dos sustratos.
Las enzimas se unen temporalmente a uno o más reactantes de la reacción que catalizan.
En esta unión disminuyen la energía de activación necesaria para la reacción .
Para esta unión enzima-sustrato, los enlaces formados son no covalentes:
• Puentes Hidrogeno
• Interacciones Iónicas
• Interacciones Hidrofobicas
Ahora, para que una reacción química tenga lugar, las moléculas de los reactantes deben chocar
con una energía y una orientación adecuadas. La actuación del enzima permite que los reactantes
(sustratos) se unan a su sitio activo con una orientación óptima para que la reacción se produzca y
modifica las propiedades químicas del sustrato unido a su sitio activo, debilitando los enlaces
existentes y facilitando la formación de otros nuevos
Cuando existen dos sustratos va existir un sitio activo para cada uno en la enzima y reaccionaran
de manera independiente, o los dos sustratos ocuparán el mismo sitio activo y competirán por éste.
Durante una reacción química catalizada por enzimas, la interacción principal se produce
entre el sustrato y una porción altamente especifica de la enzima denominada “sitio activo”, esta
interacción se produce para alcanzar un estado denominado “complejo enzima sustrato o ES” , la
afinidad entre una enzima determinada y su sustrato esta dirigida por una complementariedad
mayoritariamente física, es decir, el sustrato tiene una distribución espacial que es afín con la forma
del sitio activo ( esta forma del sitio esta previamente determinada por el correcto plegamiento de la
3
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
proteína y por su estructura ya sea terciaria o cuaternaria ), la interacción se lleva a cabo mediante
una serie de enlaces débiles (no covalentes) que se producen en los aminoácidos que forman parte
de la estructura del sitio activo y las moléculas de sustrato que calzan de forma precisa en esos
aminoácidos, es por ello también que las enzimas son específicas para determinadas
configuraciones espaciales, los sitios activos tienen además determinadas cargas eléctricas por los
aminoácidos que los forman por lo que las interacciones iónicas también toman importancia.
Dado que la complementariedad está dada casi absolutamente por el sitio activo
nombraremos algunas características de él:
La función del sitio activo y, por lo tanto, la actividad catalítica de la enzima, depende de la
posición y tipo de grupos laterales de los aminoácidos que conforman el sitio. En él, los reactantes se
mantienen en una orientación tal que la reacción puede ocurrir por una vía alternativa, con una
menor energía de activación. La energía del estado de transición disminuye porque este interacciona
favorablemente con los residuos del sitio activo, mediante enlaces de hidrógeno, uniones
electroestáticas, interacciones hidrofóbicas. En consecuencia, la conformación global de la molécula
de proteína es crítica para su funcionamiento eficiente como enzima.
4
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
V = V0 máx [S]
Km + [S]
5
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
S + E ES E+P
V = Vmax
V0 = Vmáx
2
Lineweaver-Burk Eadie-Hosftee
6
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
7
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
Esta reacciones fueron estudiadas por los bioquímicas Michaelis y Menten y desarrollaron la
Ecuación Michaelis-Menten, esta ecuación es una descripción cuántica de la relación entre
la velocidad de reacción y la concentración de sustrato, y además dos constantes, la Vmax
y Km ([s] a la cual la V = Vmax /2)
La ecuación de Michaelis – Menten puede ser usada para demostrar que la concentración de
sustrato que produce exactamente una V = Vmax /2 es igual a Km.
Este hecho proporciona una herramienta poderosa para el análisis de enzimas normales y
alteradas.
8
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
Tipo de
Sitio de unión en la enzima (Estructural) Efecto cinético
inhibidor
9
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
Cooperatividad
Este tipo de regulación, descubierto recientemente, plantea que aquellas enzimas que
tienen más de una parte proteica pueden ir alternando secuencialmente su afinidad por
el sustrato, logrando una alta velocidad de transformación pero a concentraciones
mayores, esto porque al principio la afinidad se ve bastante disminuida. La unión de este efector
puede también disminuir la afinidad de las otras partes de la enzima por el sustrato, siendo un
efector negativo.
Un ejemplo conocido con este tipo de funcionamiento aunque no es una enzima es la
hemoglobina.
10
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
11
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
b) Si Km es mucho mayor que [S], tenemos que la velocidad es proporcional a la [S]. Es decir
que en valores de concentración bajo Km, la velocidad es mas proporcional: “si la [S]
aumenta al doble, la velocidad de reacción también se duplica” y esta es la única zona en la
cual ocurre esto. Por lo tanto, como ya dijimos en (a), Km es un punto de referencia para
concentraciones muy altas o muy bajas.
c) Cuando la [S] es igual a Km, la velocidad es igual a la mitad de la Vmáx, lo que nos dice que
la Km es la concentración de sustrato necesaria para tener una velocidad igual a la mitad de
la velocidad máxima. Si la Vmáx, significa que la enzima está saturada, la mitad de la Vmáx
significa que la mitad de sustrato está con la enzima y la otra mitad está libre.
17.- Una enzima que sigue la cinética de Michaelis- Menten tiene una Km
de 1µM para su sustrato. La velocidad inicial es 0.1 µM por min a una
concentración de sustrato a 100 µM. ¿Cuál es la velocidad inicial cuando
[S] es igual a:
12
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
K m + [S] 1
+ 100
1+2
18.- Para una reacción enzimática que sigue una cinética de Michaelis-
Menten, dibuje un grafico v0 versus [S].
a) en ausencia de un inhibidor
b) en presencia de un inhibidor
c) en presencia de un inhibidor no competitivo
Haga los mismo empleando una grafica de dobles recíprocos de
Linewever-Burk.
13
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
a) en ausencia de inhibidor
Michaelis-Menten Linewever-Burk
14
Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología
No todas las asparaginasas son eficaces. Sucede que las asparaginasas de diferentes fuentes:
animales, vegetales, bacterias; tienen distinto Km. Como la concentración de asparagina en la
sangre es muy baja, la asparaginasa solo será efectiva si su Km es lo suficientemente bajo como
para hidrolizar la asparagina rápidamente, dada su pequeña concentración en sangre. Es decir
debemos buscar la Asparaginasa con mayor eficiencia enzimática.
Entonces, según esto último y de acuerdo a la ecuación de Michaelis-Menten:
15