1

UNIVERSIDAD DE CONCEPCIN FACULTAD DE INGENIERIA AGRCOLA DEPARTAMENTO DE AGROINDUSTRIAS

Laboratorio N 4 Reconocimiento de Protenas Profesores: Cristina Loyola Pedro Aqueveque

Introduccin Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, entre otros. La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y cuaternaria.

Objetivo Reconocimiento alteracin de estructuras proteicas Materiales Gradilla con 12 tubos de ensayo. Pinza de madera para sujetar los tubos. Esptula metlica. Embudo. Papel de filtro. Mechero o bao Mara. Vaso de precipitados. Pipeta Pasteur o cuentagotas. Pipetas graduadas. Leche entera. Clara de huevo

2 Reactivos cido clorhdrico HCL puro. cido clorhdrico HCL solucin al 50 %. cido ntrico puro HNO3 Cloruro sdico Na CL solucin concentrada. Hidrxido sdico NaOH solucin al 20 %. Reactivo de Benedict o de Fehling.

Procedimiento Hacer series de 4 tubos de ensayo con 2 ml de una disolucin de albmina al 2 % y numerar los tubos. Realizar la misma operacin con leche y con una disolucin de clara de huevo (una clara en 500 ml de agua con sal). desnaturalizacin o coagulacin de protenas leche

Al tubo N 1 se le aade 2 ml de leche y 2 ml de HCl puro. Al tubo N 2 se le aade igual cantidad de leche y 2 ml de una disolucin concentrada de NaCl. Al 4% Al tubo N 3 aadir 2 ml de leche y 2 ml de NaOH al 20 %. Al tubo N 4 se le aade 2 ml de leche y despus se le calienta levemente. Anotar los resultados obtenidos y comparar los diferentes tubos.

Para ver la coagulacin de las protenas se puede utilizar clara de huevo, para conseguir ms volumen puede prepararse para toda la clase una dilucin de clara de huevo en agua, de forma que quede una mezcla an espesa.

Procedimiento 1. Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo. 2. Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del mechero.

Reacciones Xantoproteicas Esta prueba consiste en la nitracin de anillos de fenol presentes en ciertos aminocidos, con la consiguiente formacin de nitrocompuestos de color amarillo. Es debido a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Procedimiento 1. Poner en el tubo de ensayo de 2 mL. de solucin problema (clara de huevo ). 2. Aadir 1 mL. de HNO3 concentrado. 3. Calentar al bao mara a 100: C.. 4. Enfriar en agua fra 5. Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%.

Para el caso de la leche Recoger con una esptula el precipitado de la leche coagulada (casena), llevarlo a un trozo de papel de filtro y secarlo. Poner en un tubo de ensayo una pequea porcin del precipitado seco, aadir unas gotas de cido ntrico puro y calentar ligeramente. Anotar los resultados obtenidos.

Reaccin de Biuret El Biuret es una reaccin tpica de los enlaces peptdicos, en la cual los tomos de cobre del reactivo se unen a varios grupos NH, lo que produce una coloracin rosa-violcea. Esta reaccin no sirve para dipptidos ni para aminocidos., ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH )que se destruye al liberarse los aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de frmula:

que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta caracterstica. Procedimiento Colocar en tubos diferentes disoluciones protenicas, aadir igual cantidad de una disolucin de NaOH al 20 %, agitar y dejar caer 4 o 5 gotas de CuSO4 al 1 %. Interpretar los resultados. Ejemplo 1. Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 mL. de albmina de huevo. 2. Aadir 2mL. de solucin de hidrxido sdico al 20%. 3. A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%.

5 4. Debe aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.

Reacciones de Aminocidos Azufrados Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. Procedimiento 1. Poner en el tubo de ensayo de 2 mL. de albmina de huevo (clara de huevo). 2. Aadir 2 mL. de solucin de hidrxido sdico al 20%. 3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%. 4. Calentar el tubo hasta ebullicin. 5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.