Bibliografia, Avaliao,Tcnicas de Inoculao, Meios de cultura e Coloraes

BIBLIOGRAFIA JAWETZ, E.; MELNICK, JL.L.; ADELBERG, E.A. - Microbiologia Mdica. 21a. ed. Rio de Janeiro. Guanabara - Koogan, 2000. KONEMAN, E.W. et al. - Diagnstico Microbiolgico. Texto e atlas color. 6 ed. Medsi, 2008. MARTINS, JE.C et al - Atlas de micologia mdica. Manole, 2005. MINAMI, P.S. Micologia: Mtodos laboratoriais de diagnstico das micoses. Manole, 2003. MINS, C. Microbiologia Mdica. Manole, 1999. MOURA, R.A. - Tcnicas de Laboratrio. 3 ed. So Paulo. Atheneu, 2004. MURRAY, P.R. et al. - Microbiologia Mdica. 4 ed. Rio de Janeiro. Guanabara - Koogan, 2004. RAVEL, R. - Laboratrio Clnico: aplicaes dos dados laboratoriais. 6ed. Guanabara, 1997. SIDRIM, J.J.C. et al. Fundamentos clnicos e laboratoriais da micologia mdica. Guanabara, 1999. TRABULSI, L.R. et al. - Microbiologia. 4 ed. So Paulo. Atheneu, 2004. LACAZ, C. da S. et al. Fungos, actinomicetos, algas de interesse mdico. Sarvier, 1991. LARONE, D.H. Medically important fungi: A guide to identification. 3. Ed. ASM Press, Washington, 1994. de la MAZA, L.M.; PEZZLO, M.T.; Jo BARON, E. - Color atlas of diagnostic microbiology. Mosby, 1997. Revista de circulao Internacional AIDS; Brazilian Journal of Medical and Biological Research; Journal Clinical Microbiology; Journal of Infectious Diseases; Revista da Sociedade Brasileira de Microbiologia. ESTRATGIAS DE AVALIAO Primeiro bimestre: Avaliao dissertativa (peso 2) e prtica (peso 1): 90% Estudo dirigido: 10% Clculo: (PTx2 + PPx1/3) x 0,9 + ED Segundo bimestre: Avaliao dissertativa (peso 2) e prtica (peso 1): 70% Seminrio: 20% Estudo dirigido: 10% Clculo: (PTx2 + PPx1/3) x 0,7 + ED + SEM PT: prova terica PP: prova prtica ED: estudo dirigido SEM: seminrio

Aula 01 - REVISO

TCNICAS DE INOCULAO Materiais Ala de platina ou nquel cromo (cabo de koli) Swab ou zaragatoa Ala de Drigalski (basto de vidro em L) Vidraria Ala bacteriolgica descaratvel Ala em agulha Garfo micolgico Placa de petri descartvel ou vidro

Tcnicas de inoculao por esgotamento de inculo Objetivo: esgotar o inculo a fim de se obter colnias isoladas.

A: Semeadura inicial B: Semeadura posteriores, aps flambagem da ala.

Tcnicas de inoculao por esgotamento de inoculo

Procedimentos importantes para as Tcnicas de Inoculao Trabalhar dentro da zona de segurana do bico de Bunsen Flambar a ala antes e depois de cada inoculao Deixar esfriar o instrumento antes de obter o inculo Flambar rapidamente a boca dos tubos aps abr-los ou antes de fech-los Nunca colocar a tampa na bancada,deve ser retirada e mantida pelo dedo mnimo da mo durante a inoculao Sucesso da semeadura depende: Realizar um grande nmero de estrias No perfurar o meio No voltar a ala sobre a estria Pegar quantidade suficiente de material para semear

Tcnicas de inoculao por estrias Objetivo: obter colnias isoladas para posterior avaliao quatitativa da cultura Ala calibrada = 1microlitro UFC/mL = n de colnias x 1000 Ala calibrada = 10 microlitro UFC/mL = n de colnias x 100

Tcnicas de inoculao em tubos com caldo Objetivo: obter cultura pura do germe para posterior srie bioqumica e teste de susceptibilidade

Tcnicas de inoculao em tubos com meio slido Objetivo: inocular sries bioqumicas para identificao de bactrias

Posio bico de flauta Tcnicas de inoculao em tubos com meio semi-slido Objetivo: verificar motilidade bacteriana em meios especficos (MILI)

Tcnicas de Semeadura: fungos

2 Garfo Tubo + meio

Ala calibrada 0,001 mL

MEIOS DE CULTURA Definio: so solues de substncias nutritivas utilizadas para o cultivo e identificao de microrganismos Tipos de Meio de Cultura A) Qto s substncias nutritivas Meios Simples: Constitudos de substncias essenciais para o crescimento de microrganismos menos exigentes. Ex: gar bacteriolgico, caldo simples Meios Complexos: so meios de cultura simples adicionados de substncias complexas. Ex: gar sangue B) Qto consistncia Meios Lquidos: chamados de caldos e no apresentam a adio de gar-gar. Ex: caldo BHI Meios Slidos: meios lquidos adicionados de gar-gar na concentrao de 1,5 -2,0%. Meios semi-slidos: meios lquidos adicionados de gar-gar na concentrao de 0,5%.

C) Qto fora seletiva e diferencial Meios seletivos: contm substncias que inibem o crescimento de certos microrganismos e permite o crescimento de outros. Ex: MacConkey Meios diferenciais: so meios que apresentam substncias que permitem a diferenciao entre um grupo ou uma espcie. Ex: Cled MICROSCOPIA E COLORAES Exame Direto sem colorao Preparados imediatos utilizados como auxiliares no diagnstico clnico

MATERIAL - Salina (soro fisiolgico 0,85%)

INDICAO - Permite observar a morfologia e avaliar a existncia de motilidade: Pseudomonas - Pesquisa a fresco de Trichomonas em secrees

PROCEDIMENTO - Gotejar 1 gota no centro da lmina e nela suspender uma colnia ou alada do material, cobrir com lamnula e examinar ao microscpio em objetiva de 40X.

- KOH 20-40% (exame micolgico)

- Presena de hifas, artrocondeos, pseudo-hifas e leveduras

- Tinta da China (nanquim)

- Pesquisa de Criptocococos em LCR ou outros materiais, permitindo destacar a cpsula deste fungo contra um fundo negro

- Colocar uma pequena amostra do material a ser pesquisado no centro da lmina, suspender o material com 1 ou 2 gotas de KOH, cobrir com lmina e lamnula, aguardar 30 minutos, observar ao MO em objetiva de 10X e 40X. - Suspender o sedimento do LCR ou uma colnia do meio de cultura em uma gota de tinta da china e observar em objetiva de 10X e 40X

Preparo de Lminas

Lmina-Lamnula

Esfregao

Lquido

Lmina-Lamnula

Imprints (carimbar)

Slido

Cortes Histolgicos

COLORAES

Colorao de Gram GRAM + : lpidios parede GRAM : lipdios parede

Coloraes Erros Precipitao do corante: simula cocos G+ Uso de lminas que no tenham sido pr-limpas ou desengorduradas Espessura do esfregao: pode corar irregularmente Superaquecimento na fixao pelo calor : destruio da morfologia Descolorao insuficiente com lcool-acetona pode reter o cristal-violeta, o que dificulta a observao de bactrias G-. Por outro lado, esfregaos de culturas velhas ou expostas ao de antibiticos apresentam irregularidades na colorao. As G- coram fracamente pela safranina, podendo simular a ocorrncia de infeces mistas (G+/G-). Um resultado de Gram + com cultura negativo pode sugerir contaminao do corante ou falha no isolamento (atmosfera, meios de cultura) Controle de Qualidade Verificar diariamente a aparncia dos reagentes. Se houver precipitao, refiltre antes do uso. Trocar regularmente as solues de trabalho Na preparao de novos reagentes: corar juntamente com os esfregaos da rotina, esfragaos de cepas controle (ATCC 25922 E. coli) e (ATCC 12228 S. epidermidis) ou (ATCC 25922 S. aureus) Fazer manuteno preventiva e limpeza dos microscpios

Colorao de Ziehl-Neelsen (BAAR)

Lipoarabinomanana

cidos Miclicos

Arabinogalactana

Peptidioglicano

Parede Celular

Colorao para fungos Filamentosos e leveduras Lactofenol azul-algodo ou azul de metileno Objetivo: Examinar a micromorfologia das colnias fngicas MORFOLOGIA BACTERIANA a) Tamanho: 0,2-1,5 m b) Comprimento: 1-6 m c) Forma: 1 - esfricas: cocos 2 - cilndricas ou bacilos: bacilos 3 - espirais: espiroquetas, vibries d) Arranjo: disposio das cels. entre si 1 - cocos aos pares: diplococos 2 - cocos em cadeias: estreptococos 3 - cachos: estafilococos 4 - bacilos aos pares: diplobacilos 5 - bacilos em cadeias: estreptobacilos 6 - bacilos semelhantes aos cocos: cocobacilos

7 Outras formas: Chama de vela; ramificados Morfologia

Staphylococcus aureus

Streptococcus sp

Mycobacterium sp.

Bacillus subtilis

Escherichia coli

Outras formas

Clostridium perfringers Listeria monocytogenes Clostridium tetani

Actinomyces sp

Nocardia sp

Fungos filamentosos e leveduras

Candida albicans Filamentao de leveduras

Microsporum canis